CZ34530U1 - Reakční směs pro kvantifikaci karanténního RNA viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicum) - Google Patents
Reakční směs pro kvantifikaci karanténního RNA viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicum) Download PDFInfo
- Publication number
- CZ34530U1 CZ34530U1 CZ2020-37711U CZ202037711U CZ34530U1 CZ 34530 U1 CZ34530 U1 CZ 34530U1 CZ 202037711 U CZ202037711 U CZ 202037711U CZ 34530 U1 CZ34530 U1 CZ 34530U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- reaction mixture
- quantification
- trsv
- sequence
- rna
- Prior art date
Links
- 238000011002 quantification Methods 0.000 title claims description 17
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 title claims description 14
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 title claims description 14
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 title claims description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 12
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 title claims description 9
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 title claims description 8
- 235000002560 Solanum lycopersicum Nutrition 0.000 title description 3
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 title 1
- 241000723677 Tobacco ringspot virus Species 0.000 claims description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 14
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 claims description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 235000002634 Solanum Nutrition 0.000 description 2
- 241000207763 Solanum Species 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 102000005853 Clathrin Human genes 0.000 description 1
- 108010019874 Clathrin Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 108020005089 Plant RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 229930193282 clathrin Natural products 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Reakční směs pro kvantifikaci karanténního RNA viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicuní)
Oblast techniky
Řešení se týká reakční směsi a postupu pro současnou detekci a kvantifikaci RNA karanténního viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicum) za použití referenčních genů rostliny jakožto normalizačních faktorů.
Dosavadní stav techniky
Virus kroužkovitosti tabáku (TRSV) je karanténní škodlivý organismus, jehož zavlékání a rozšiřování je na území EU zakázáno. Virus kroužkovitosti tabáku byl poprvé popsán v Americe ve 30. letech 20. století na rostlinách tabáku virginského (Nicotiana tabacum). TRSV má mnohé bylinné i dřevité hostitele včetně rajčete a může způsobovat závažné choroby s výraznými ekonomickými dopady.
Současné diagnostické metody rostlinných virů jsou založeny buď na detekci virových proteinů pomocí sérologických metod, nebo na molekulární detekci virové nukleové kyseliny. Sérologickými testy (ELISA test) je možno dosáhnout semi-kvantitativní analýzy, kdy je vzorek ředěn aritmetickou řadou (1:2, 1:4, 1:8, 1:16 atd). Tato metoda je nicméně schopna titr virů jen porovnat, a ne absolutně stanovit. Limity citlivosti jsou u této metody poměrně omezené.
Nukleové kyseliny patogenů se stanovují nej častěji pomocí RT-PCR, kdy u RNA virů dojde nejprve k přepisu do cDNA a taje poté amplifíkována za pomoci druhově specifických primerů. Pro přesnou kvantifikaci je nutno získaná data normalizovat za pomoci tzv. referenčních genů hostitele (tj. rajče v tomto případě).
Pro TRSV byly vyvinuty primery umožňující detekci pomocí RT-qPCR. Nebyla však vyvinuta metoda umožňující normalizaci kvantifikace pomocí referenčních genů rajčete.
Podstata technického řešení
V technickém řešení je uvedena reakční směs pro detekci a kvantifikaci dvou referenčních genů rajčete (elongační faktor la - EFÍ a subjednotka adaptoru klatrinového komplexu - CAC) a genomu viru kroužkovitosti tabáku (TRSV) s využitím RT-qPCR. Podstata technického řešení spočívá v tom, že se jedná o tři reakční směsi a ve stejném čase, ve stejných podmínkách proběhnou na jedné destičce současně tři amplifíkační reakce umožňující detekci a kvantifikaci TRSV najednou.
Reakční směs obsahuje 4 pl vzorku testované cDNA, SYBR Green based PCRmix, destilovanou vodu a specifické primery pro kvantifikaci mRNA EFl, CAC a detekci a kvantifikaci TRSV. Všechny primery jsou o konečné koncentraci 2 μΜ. Konkrétně se jedná o následující primery a sondy:
EF1-R EF2-F CAC-R CAC-F
TRSV-R
TRSV-F
ACCGGCATCACCATTCTTCA GATTGACAGACGTTCTGGTAAGGA ATTGGTGGAAAGTAACATCATCG CCTCCGTTGTGATGTAACTGG GCACCAGCGTAAGAACCCAA GGGGTGCTTACTGGCAAGG
- 1 CZ 34530 UI cDNA se připraví z izolované RNA rostlin za pomoci náhodných hexamerů a reverzní transkriptázy dle protokolu výrobce dané transkriptázy.
Směsi pro RT-PCR podle technického řešení se připravují v mikrozkumavkách, kapilárách nebo na Real-time PCR desce, a každá obsahuje 4 pl cDNA testovaného vzorku, SYBR green PCR Master Mix, obsahující 0,25 μΐ DNA polymerázy o koncentraci 5 U/μΙ, 5 μΐ směsi oligonukleotidů o koncentraci 2,5mM, 5 μΐ pufru obsahujícího MgCh o konečné koncentraci 5,5mM; destilovanou vodu, kterou je každá reakční směs doplněna do konečného objemu 25 μΐ a 0,5 μΐ jednotlivých specifických primerů pro detekci a kvantifikaci mRNA referenčních genů rajčete o původní koncentraci 10μΜ (konkrétně primery EF1-R, EF1-F, CAC-R, CAC- F); a primery pro kvantifikaci TRS V (konkrétně primery TRSV-R a TRSV-F). Pro jeden vzorek jsou tedy přichystány tři reakce (EFl; CAC; TRSV) na jedné PCR desce nebo v jednotlivých mikrozkumavkách.
Při amplifikaci mRNA EF1 vznikne produkt dlouhý 67 bp. Při amplifikaci mRNA CAC vznikne produkt dlouhý 172 bp. Při amplifikaci TRSV vznikne produkt dlouhý 90 bp.
Vlastní qPCR probíhá v Real-time termocykleru nejprve 15 minut při 95 °C. Následuje 40 cyklů, každý obsahuje dva kroky: 15 sekund při 95 °C a 1 minuta při 60 °C.
Toto technické řešení umožňuje přesnou současně probíhající detekci a normalizaci kvantifikace TRSV. Touto metodou lze docílit vysokých úspor času. Takto průkazných výsledků nebylo dosud dosahováno.
Následující příklady provedení reakční směs podle technického řešení pouze dokládají, aniž by ji jakkoliv omezovaly.
Příklady uskutečnění technického řešení
Vyhodnocení reakcí různých odrůd rajčete (Solanum lycopersicuni) na infekci TRSV.
V hodnoceném pokusu byly v kontrolovaných podmínkách uměle inokulovány virem kroužkovitosti tabáku. V určitých časových intervalech jsou z každé rostliny odebrány vzorky listů. Ze vzorků je v laboratoři izolována celková RNA. Z celkové RNA je syntetizována cDNA pomocí reverzní transkriptázy a náhodných hexamerů.
Každý vzorek je napipetován v technickém triplikátu třikrát - tj. jeden technický triplikát pro kvantifikaci mRNA EF1, jeden technický triplikát pro kvantifikaci mRNA CAC a jeden technický triplikát pro detekci a kvantifikaci TRSV.
μΐ cDNA jsou napipetovány do sterilní Real-time PCR desky. Dále je přidán SYBR Green PCR Master Mix obsahující 0,25 μΐ DNA polymerázy o koncentraci 5 U/μΙ, 5 μΐ směsi oligonukleotidů o koncentraci 2,5mM, 5 μΐ pufru obsahujícího MgCF o konečné koncentraci 5,5mM; 0,5 μΐ jednotlivých primerů o koncentraci 10μΜ. Objem každé reakce je doplněn destilovanou vodou do 25 μΐ.
Vlastní RT-PCR probíhá v Real-time termocykleru Lightcycler480 (Roche). První část reakce probíhá 10 minut při 95 °C. Následuje 40 cyklů, každý obsahoval dva kroky: 15 sekund při 95 °C a 1 minuta při 60 °C.
Výsledné Cq hodnoty TRSV ve vzorcích jsou porovnány vůči zprůměrovaným hodnotám Cq hodnot mRNA referenčních genů rajčete. Titr jednotlivých virů je porovnán v jednotlivých skupinách.
- 2 CZ 34530 UI
Takto lze testovat materiál jak na šlechtitelských stanicích, tak rostliny z polních odběrů nebo laboratorních izolátů. Protože virovou infekci nelze nijak léčit, je jedinou ochranou proti virovým chorobám obilnin použití rezistentních odrůd nebo preventivní kroky zabraňující dalšímu šíření viróz včetně včasné detekce.
Průmyslová využitelnost
Reakční směsi pro současnou detekci a kvantifikaci TRSV v rajčeti (Solanum lycopersicum) je 10 možno dodávat laboratořím zabývajícím se ochranou proti rostlinným patogenům jako detekční a kvantifikační kit k okamžitému použití (ready - to use). Uživateli pak stačí pouze přidat svůj vzorek testované cDNA a provést reakci dle přesně stanovených podmínek.
Claims (1)
- NÁROKY NA OCHRANU1. Reakční směs pro současnou detekci a kvantifikaci RNA TRSV - viru kroužkovitosti tabáku za pomoci dvou referenčních genů rajčete jakožto normalizačních faktorů pomocí polymerázové řetězové reakce v reálném čase vyznačující se tím, že je současně tvořena třemi reakčními směsmi, obsahující každá 4 μΐ vzorku testované cDNA; SYBR Green PCR Master Mix, který obsahuje 0,25 μΐ DNA polymerázy o koncentraci 5 U/μΙ, 5 μΐ směsi oligonukleotidů o koncentraci 2,5mM, 5 μΐ pufiru obsahujícího MgCF o konečné koncentraci 5,5mM; 1 pL specifických primerů o původní koncentraci ΙΟμΜ pro kvantifikaci mRNA rajčete EF1 elongační faktor la, CAC - subjednotka adaptoru klatrinového komplexu a detekci a kvantifikaci TRSV, konkrétně v jedné reakční směsi 0,5 μΐ primem EF1-R, tvořeného sekvencí 5’-ACCGGCATCACCATTCTTCA-3’,0,5 μΐ primem EF1-F tvořeného sekvencí 5’-GATTGACAGACGTTCTGGTAAGGA-3‘, ve dmhé reakční směsi 0,5 μΐ primem CAC-R tvořeného sekvencí5’-ATTGGTGGAAAGTAACATCATCG-3‘,0,5 μΐ primem CAC-F tvořeného sekvencí 5’-CCTCCGTTGTGATGTAACTGG-3’, ve třetí reakční směsi 0,5 μΐ primem TRSV-R tvořeného sekvencí 5’-GCACCAGCGTAAGAACCCAA-3’,0,5 μΐ primem TRSV-F tvořeného sekvencí 5’-GGGGTGCTTACTGGCAAGG-3’; a destilovanou vodu doplňující každou reakční směs do konečného objemu 25 μΐ.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2020-37711U CZ34530U1 (cs) | 2020-06-24 | 2020-06-24 | Reakční směs pro kvantifikaci karanténního RNA viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicum) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2020-37711U CZ34530U1 (cs) | 2020-06-24 | 2020-06-24 | Reakční směs pro kvantifikaci karanténního RNA viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicum) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ34530U1 true CZ34530U1 (cs) | 2020-11-16 |
Family
ID=73457982
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2020-37711U CZ34530U1 (cs) | 2020-06-24 | 2020-06-24 | Reakční směs pro kvantifikaci karanténního RNA viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicum) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ34530U1 (cs) |
-
2020
- 2020-06-24 CZ CZ2020-37711U patent/CZ34530U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Osman et al. | Comparison of low-density arrays, RT-PCR and real-time TaqMan® RT-PCR in detection of grapevine viruses | |
| RU2504585C1 (ru) | Набор олигодезоксирибонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда для идентификации рнк коронавируса человека, ассоциированного с тяжелым острым респираторным синдромом | |
| Hadidi et al. | Polymerase chain reaction | |
| Li et al. | An improved reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for the detection of two cherry flexiviruses in Prunus spp. | |
| Arruabarrena et al. | Application of a simple and affordable protocol for isolating plant total nucleic acids for RNA and DNA virus detection | |
| CZ34530U1 (cs) | Reakční směs pro kvantifikaci karanténního RNA viru kroužkovitosti tabáku v rajčatech (Solanum lycopersicum) | |
| KR101236197B1 (ko) | 웨스트나일바이러스와 일본뇌염바이러스의 감별 진단 | |
| KR20130075760A (ko) | 실시간 ｐｃｒ 분석법에 의한 인삼 품종 판별용 프라이머 및 프로브 세트 | |
| RU2795017C1 (ru) | Олигонуклеотиды для определения мутации S:Ins214EPE SARS-CoV-2 | |
| CN113528707A (zh) | 一种用于乙型流感病毒检测的探针、试剂盒及其使用方法 | |
| RU2791958C1 (ru) | Олигонуклеотиды для определения мутации S:N501Y SARS-CoV-2 | |
| EP3245297A1 (en) | Method and kit for identification of nematodes, forest plant pests, by real-time pcr | |
| CZ32308U1 (cs) | Reakční směs pro normalizaci kvantifikace RNA při analýze viromu v pšenici a ječmeni | |
| RU2795016C1 (ru) | Олигонуклеотиды для определения мутации S:delVYY143-145 SARS-CoV-2 | |
| RU2750564C1 (ru) | Набор синтетических олигонуклеотидов для выявления рнк коронавируса | |
| RU2794654C1 (ru) | Способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2700450C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) | |
| Lee et al. | Development of in-field-diagnosis of Aspergillus flavus by Loop-Mediated Isothermal Amplification in Honeybee | |
| RU2700448C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК возбудителя орнитоза (Chlamydophila psittaci) у птиц | |
| RU2700245C1 (ru) | Способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) | |
| CZ2017162A3 (cs) | Sady pro detekci virů LChV-1 a LChV-2 v biologickém materiálu | |
| Shadab et al. | Use of Molecular Markers for Diagnostic purposes | |
| CZ201369A3 (cs) | Reakční směs L3 pro molekulární detekci viru svinutky bramboru (PLRV) pomocí kvantitativní RT-PCR | |
| RU2696069C2 (ru) | Способ выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота | |
| RU2416648C1 (ru) | Олигонуклеотидные праймеры, способ и тест-система для выявления генома вирусной геморрагической болезни кроликов методом обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20201116 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20240624 |