CZ391297A3

CZ391297A3 - Způsob přípravy tenké porovité skelné matrice a prostředek tím získaný

Info

Publication number: CZ391297A3
Application number: CZ973912A
Authority: CZ
Inventors: Bruce Joseph Roser; Enda Martin Gribbon
Original assignee: Quadrant Holdings Cambridge Limited
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 1998-05-13
Also published as: CA2223438A1; CN1193908A; IL122482A0; PL323902A1; KR19990022710A; MX9709716A; EP0831790A2; AP852A; HUP9901716A2; WO1996040077A3; BR9609188A; PT831790E; IL122482A; ATE239451T1; ES2194992T3; SK167597A3; NO975773L; AU713599B2; JPH11506467A; NZ309841A

Description

Způsoby pro pevné zakotvení látek do suché matrice z pěnového skla a prostředky, které je obsahují

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká způsobů pro přípravu pěnového skla a prostředků, které se pomoci nich získají. Přesněji se týká způsobů pro pevné zakotvení látek, s výhodou biologických látek, do matrice ze suchého pěnového skla (FGM) a prostředků, které jej obsahují.

Dosavadní stav techniky

Tradičním a nejobvyklcjšini způsobem pro uchování biologických látek, které jsou nestabilní v roztoku a při teplotě okolí, jako jsou proteiny a DNA, bylo zmrazováni za sucha. Tento postup zahrnuje umístění látky do roztoku, zmrazení roztoku a vystaveni zmrzlé pevné látky vakuu za podmínek, při kterých zůstane pevná látka a voda a jiné těkavé složky se odstraní sublimaci. Vzniklý suchý prostředek obsahuje biologickou látku a všechny soli nebo jiné netěkavé látky, které byly přidané do roztoku před sušením. Výsledkem tohoto způsobu sušeni, běžně používaného bez účinných alternativ, je často významná ztráta aktivity. Pikal (1994) ACS Symposium 567:120-133. Dále mnoho nuzných parametrů při procesu sušení za mrazu zůstává špatně charakterizováno, což má někdy za výsledek ztrátu cele dávky při přípravě

Přesto, že je sušení za mrazu velmi obvyklé, mnoho látek sušených za mrazu je dosud nestabilních při teplotě okolí. Pikal (1994), Carpenter a kol., (1994) ACS Symposium 567. 134-147. Poškození způsobené tímto postupem může být do určité míry sníženo při použití kryoprotektantů. Carpenter a kol, (1994). Kryoprotektanty přesto mohou postupně reagovat se sušenou látkou. Toto vnáší do látky sušené za mrazu inherentní nestabilitu

Byly popsány další způsoby používané pro přípravu suchých, stabilních prostředků nestabilních biologických a chemických látek, jako je sušení při teplotě okolí, krystalizace nebo srážení. Techniky sušení při teplotě okolí vynechávají krok zmrazováni a s ním spojené poškození látek za mrazu Tyto techniky jsou rychlejší a energeticky vhodnější při odstranění vody Crowe a kol. (1990) Cryobiol 27:219-23 1 Pokud se nepoužije * ·

* · · · · · · 4* • · · · · ♦ · • « · · · ··♦·»· ··«·« ·««· ♦· ·· «··· vhodný stabilizátor, sušeni při teplotě okolí často způsobí denaturaci nebo dokonce deaktivaci látky. Pro některé látky může být použita krystalizace nebo sráženi, ale produkty těchto způsobů mají špatnou rozpustnost. Dále může nastat problém při odstranění zbytkové vlhkosti

Trehalosa, a-D-glukopyranosyl-a-D-glukopyranosid, je přírodní, inertní, neredukující a nejedovatý disacharid, u kterého bylo původně zjištěno, zeje spojený s prevencí poškozeni při sušení určitých rostlin a živočichů, kteří mohou uschnout bez poškození a znovu ožít při hydrataci. Ukázalo se, že trehalosa je vhodná při prevenci dcnaturace mnoha látek jako jsou proteiny, viry, a složky potravin v průběhu sušení a následného skladování. Bylo zjištěno, žc prostředky z látek sušených v trehalose vykazují zvýšenou životnost při skladování. Viz. U.S. Patent č. 4 891 319, 5 149 653; 5 026 566; Blakely a kol. (1990) Lancet 336:854; Roser(červenec 1991) Trends in Food Sci and Těch., str. 166-169, Colaco a kol. (1 992) Biotechnol. Internát., str 345-350, Roser (1991) BioPhann 4:47, Colaco a kol. (1992) BiolTech. 10:1007, Roser a Colaco (1993) New Scicntist 138: 25-28, a Crowc (1983) Cryobiol. 20: 346-356. Trehalosa také stabilizuje lyofilisované proteiny, jako je methanol dehydrogenáza (Argall a Smith (1993) Biochem. Mol. Biol Int. 30:491), a propůjčuje odolnost proti teplotě enzymům z droždí. Hottiger a kol. (1994) Eur J. Biochem. 219:187 Trehalosa také inhibuje Maillardovu reakci mezi karbonylovými skupinami redukujících cukiů a aminoskupinami proteinů. Loomis a kol., (1979) J. Exp. Zool. 208: 355-360; a Roser a Colago (1993) New Scientist 138: 24-28. Trehalosa a mnoho dalších stabilizujících polyolů také vykazuji výhodné vlastnosti v prostředcích pevných dávek.

Existuje vážná potřeba levně a stabilně zakotvit látky do skleněné matrice s minimální zbytkovou vlhkostí, která zůstane v látce. Takový postup poskytne produkty, které vykazuji zvýšenou stabilitu, delší životnost a snadnou hydrataci Snadná hydrataccjc zvláště výhodná pro farmaceutické prostředky, které se podávají parcnterálnč.

Všechny reference citované výše jsou zde uvedeny jako odkazy

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález zahrnuje způsoby pro přípravu suchých matric z pěnového skla (FGM). Předkládaný vynález také zahrnuje způsoby pro pevné zakolvení látek, zahrnující ·« ···· v · aktivní látky, pomocí FGM Předkládaný vynález také zahrnuje prostředky obsahující FGM, stejně jako prostředky obsahující látky stabilně zakotvené do FGM.

V souladu s pivním aspektem, předkládaný vynález poskytuje způsob pro přípravu FGM, zahrnující přípravu směsi obsahující nejméně jednu látku, která tvoří skleněnou matrici v nejméně jednom vhodném rozpouštědle, odpaření rozpouštědla ze směsi za získání sirupu, vystavení sirupu tlaku a teplotě dostatečné pro dosažení varu sirupu a popřípadě odstranění zbytkové vlhkosti.

V souladu s dalším aspektem předkládaného vynálezu , způsoby jsou vhodné pro stabilní zakotveni nejméně jedné látky do FGM Tyto způsoby zahrnují přípravu směsi obsahující nejméně jednu látku, která má být zakotvena, odpaření rozpouštědla za vzniku sirupu, vyslavení sirupu tlaku a teplotě potřebné pro dosažení varu sirupu a popřípadě odstranění zbytkové vlhkosti. Látky, které mají být zakotveny zahrnují aktivní materiály. Způsoby mohou být zlepšeny přidáním roztoku různých přísad, jako jsou těkavé soli, soli, které sc rozloží, organická rozpouštědla, povrchově aktivní látky a látky upravující viskozitu.

Další aspekt předkládaného vynálezu zahrnuje způsob pro přípravu stabilních, sušených, dobře rozpustných jednoduchých dávek látek, které jsou nestabilní v roztoku Tyto způsoby zahrnují přípravu směsi obsahující nejméně jeden materiál pro tvorbu skleněné matrice a látku v nejméně jednom rozpouštědle, odpařeni rozpouštědla za vzniku sirupu, vystavení sirupu tlaku a teplotě potřebné pro dosaženi varu sirupu a popřípadě odstranění zbytkové vlhkosti.

Předkládaný vynález zahrnuje prostředky získané pomoci způsobů, které jsou popsány v předkládaném vynálezu. Předkládaný vynález dále zahrnuje prostředky obsahující FGM a prostředky obsahující FGM a všechny látky, které jsou v něm stabilně zakotvené.

Další aspekt předkládaného vynálezu zahrnuje způsob pro rekonstrukci látek, které jsou zakotveny do I GM Způsoby zahrnují přidáni vhodného rozpouštědla k FGM v množství, které je dostatečné pro dosažení požadované koncentrace látek, které jsou zakotveny.

» * ·♦♦· v

, · · · · ··· • · v · · · · · ··

V a · · · ·· • *« « * » 9 it · *

Přehled obrázků na výkresech

Obrázek 1 je fotografie zobrazující FGM připravený ve dvou různě velkých farmaceutických viálkách

Obrázek 2 je fotografie zobrazující účinek nuzných tlaků na tvorbu FGM (Obr 2A) a porovnání se sušením za mrazu (Obr 2B) Vzorky v Obr 2B jsou vzorky stejných prostředků jako na Obr. 2A, kromě toho, že vzorky na Obr. 2A vznikly ve FGM pomocí způsobu popsaného v souladu s předkládaným vynálezem, zatímco vzorky na Obr. 2B byly sušeny za mrazu

Obrázek 3 je fotografie zobrazující účinek těkavých solí na tvorbu FGM.

Obrázek 4 jc fotografie zobrazující účinek různé viskozity na tvorbu FGM

Obrázek 5 je fotografie zobrazující FGM obsahující buňky lidských červených krvinek.

Obrázek 6 je fotografie zobrazující FGM z oktaacetátu trehalosy připravené z organického roztoku.

Obrázek 7 je fotografie zobrazující tvorbu FGM ve dvou předplněných stříkačkách.

Nejvýhodnější způsob pr ovedení předkládaného vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že materiály tvořící skleněné matrice mohou být přetvořeny do pěnových skleněných matric (FGM), které jsou zvláště výhodné pro stabilní zakotveni látek, jako jsou aktivní látky, s výhodou zahrnující biologické látky. Slovo „látka“, používané v souladu s předkládaným vynálezem znamená jakoukoli látku, která se před použitím skladuje v suchém nekapalném stavu.

Pomocí způsobů podle předkládaného vynálezu vznikají látky, ktcrc mají nižší obsah zbytkové vlhkosti v porovnání s hustými nepenovými skly, které vznikají při sušeni produktu se zvýšenou stabilitou a vyšší přechodnou teplotou skla. Dále velký povrch, který poskytuje FGM, způsobuje významně zvýšenou rychlost rozpouštění při rekonstrukci. Toto je zvláště výhodné pro látky, které mají nízkou rozpustnost, jako jsou organické látky, jako cyklosporin A, esterifikované cukry, beta blokátory, 112 agonistc a antagonisté, steroidy, pohlavní hormony, fenobarbitaly, analgetika, antimikrobiálni látky.

• · antivirové látky, insekticidy, pesticidy apod., předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady.

Pomocí těchto způsobů se připravují látky, které mají všechny tyto výhody a žádné nevýhody spojené se sušením za mrazu. Mezi takové nevýhody patří dlouhý a energeticky náročný proces sušeni za použiti extrémně nízkých teplot a dlouhá doba při rozpouštěni, předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady. Produkty zahrnuté do předkládaného vynálezu se rychle rozpouštějí celé přejdou do roztoku, což je možné určit vizuálně. Způsoby jsou přímé, standardisované a reprodukovatelné.

Všechny materiály, ze kterých je možno připravit skleněnou matrici jsou vhodné v souladu s předkládaným vynálezem. Vhodnými materiály jsou všechny polyoly, včetně uhlohydrátových a neuhlohydrátových polyolů, předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady Zvláště výhodnými materiály jsou cukry, cukerné alkoholy a deriváty uhlohydrátů.

FGM jsou vhodné pro skladování jakýchkoli látek. FGM jsou zvláště výhodné pro špatně rozpustné látky jako jsou organické látky. Dále, FGM jsou zvláště výhodné pro barviva, příchutě, biomolekuly, molekulární shluky, buňky a jiné nestabilní látky V souladu s předkládaným vynálezem je nyní možné připravit jednu dávkovači jednotku bioaktivni látky, která je stabilní při skladování při teplotě okolí a při zvýšené teploto. Například, jedna dávkovači forma může být připravena ve stříkačce za vzniku předplněné stříkačky Tento způsob eliminuje krok, který může způsobit znečištění látky před injekčním podáváním a eliminuje chybu v dávce. Po rekonstrukci se získá jedna dávka bioaktivni látky Jedna dávka může být například jedna léčebná dávka biologické látky jako jc epinefrin, crythropoietin, cytokiny, růstové látky a jiná biofarmaceutika nebo jedna reakční směs, která se vyžaduje pro ovulační a těhotenské testy a jiné diagnostické pomůcky. Kvůli zvýšené stabilitě biologických látek se velmi zlepší skladováni.

Předkládaný vynález zahrnuje způsob přípravy FGM Způsob se skládá z kroku přípravy směsi nejméně jedné látky, která tvoři matrici v rozpouštědle, odpaření rozpouštědla za vzniku sirupu, vyslaveni sirupu tlaku a teplotě potřebné pro dosaženi varu sirupu a popřípadě odstraněni zbytkové vlhkosti.

„Pěnová skelná matrice“ (FGM), jak je používána v předkládaném vynálezu, je pěnová skelná matrice o velkém povrchu. FGM může mít různou tloušťku, včetně tenkých a ultratenkých matric Typicky má FGM mnohem nižší hustotu než pevná dávka amorfního skla, protože má zvýšený povrch a tenké sklo tvoří stěny bublin pěnové skelné matrice.

S výhodou je materiál, který tvoří skelnou matrici stabilizující polyol a výhodněji uhlohydrát nebo jeho derivát, včetně trehalosy, laktitolu a palatinitu Nejvýhodněji jc stabilizujícím polyolem trchalosa. Vhodnými stabilizujícími polyoly jsou ty, ve kterých mohou být sušeny a skladovány požadované látky bez ztráty aktivity denaturací, agregací nebo jiným způsobem.

Termín „uhlohydráty“ zahrnuje monosacharidy, disacharidy, trisacharidy, oligosacharidy a jejich odpovídající cukerné alkoholy, polyhydroxysloučeniny jako jsou deriváty uhlohydí átů a chemicky modifikované uhlohydráty, hydroxyethyl škrob kopolymery cukni. Pro použití v souladu s předkládaným vynálezem jsou vhodné jak přírodní, tak syntetické uhlohydráty. Mezi syntetické uhlohydráty patři ty, které mají glykosidickou vazbu nahrazenou thiolovou nebo uhlíkovou vazbou, ale předkládaný vynález sc ale neomezuje pouze na tyto příklady. Mohou být použity jak D, tak L formy uhlohydrátů. Uhlohydráty mohou být neredukujicí nebo redukující.

Prevence ztráty aktivity může být zvýšena přidáním různých přísad, jako jsou inhibitory Maillardovy reakce, které jsou popsány výše. Přidání těchto inhibitorů je zvláště výhodné ve spojeni s redukujícími uhlohydráty

Redukující uhlohydráty vhodné pro použiti v souladu s předkládaným vynálezem jsou odborníkům v této oblasti známé a zahrnují glukosu, maltosu, laktosu, fniktosu, gaiaktosu, mannosu, maltulosu a laktulosu, ale předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady. Mezi neredukujicí uhlohydráty patři neredukujicí glykosidy polyhydroxysloučenin vybrané ze skupiny obsahující cukerné alkoholy a jejich polyalkoholy s přímým řetězcem, ale předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady. Mezi jiné vhodné uhlohydráty patří rafinosa, stachyosa, melezitosa, dextran, sacharosa, cellibiosa, mannobiosa, a cukerné alkoholy Glykosidy cukerných alkoholů jsou s výhodou monoglykosidy, zvláště sloučeniny získané redukcí disacharidů jako je laktosa, maltosa, laktuiosa a maltulosa.

•0 ·0·0 / *·»··· ·· • 0« »· *··* ·* »·

Zvláště výhodnými uhlohydráty jsou trehalosa, maltitol (4-O-P-D-glukopyranosylD-glucitol), laktitol (4-O-p-D-galaktopyianosyl-D-giucitol), palatinit (směs GPS (aD-glukopyranosyl-1 ->6-sorbitol) a GPM (α-D-glukopyranosyl-l—>6~mannitol), a jednotlivé cukerné složky GPS a GPM.

Zároveň mohou být zpracovány různé směsi a nádoby různých tvarů a velikosti,

V nejlepším případě má použitá nádoba takovou velikost, aby se do ni vešla úvodní směs a příslušný objem FGM Toto se běžně urči pomocí hmoty materiálu, který tvoři skelnou pěnu, povrchu nádoby a podmínek tvorby FGM. Hmota materiálu, který tvoří skelnou matrici, musí být dostatečná pro viskózní sirup, který se napění, a převede prakticky jako minimální hmota na jednotku plochy povrchu nádoby Tento poměr se mění směs od směsi a použité nádoby, ale odborníci v této oblasti jej snadno urči pomocí postupu, který je uveden zde. Mohou být použily různé nádoby, včetně Wheatonových litých a řezaných viálek. Obrázek 1 ilustruje přípravu FGM ve viálkách nižných velikosti

Ačkoli zde mohou být použity jednoduché formy, může být přítomen více než jeden materiál pro tvorbu matrice, více nezjedná přísada, a více nezjedná látka. IJčinne množství těchto sloučenin odborníci v této oblasti snadno určí.

Rozpouštědlo, se kterým se misi materiál pro tvorbu matrice, může být vodné, organické nebo jejich směs. Další výhodu může přinést kombinace organického a vodného rozpouštědla, protože použití těkavého organického rozpouštědla zlepšuje tvorbu pěnového skla. Zlepšené tvorby pěnového skla může být také dosaženo při použiti těkavé nebo rozkládající se soli, což je diskutováno níže. Při tvorbě FGM ve kterc je zakotvena hydrofobní látka může být použito vhodné vodné rozpouštědlo pro rozpuštění materiálu, ze kterého se tvoří pěna a vhodné organické rozpouštědlo pro rozpuštění hydrofobních látek

Výběr rozpouštědla závisí na povaze materiálu, který byl vybrán pro tvorbu pěny, stejně jako na všech ostatních přísadách a/nebo látkách, které budou zakotveny Povaha a objem rozpouštědla musí být dostatečný pro rozpuštění látek materiálu, ze kterého se tvoří skelná matrice, stejně jako pro všechny další přísady a/nebo látky. Jestliže látkou je hydrofilní materiál, kapalina bude s výhodou vodná, aby nehrozila potenciální ztráta aktivity materiálu způsobená interakcemi rozpouštědla Mezi vodná rozpouštědla φφ φφφ* * φφφφ ···· ·· φ φ φφφφ»

Q » φφ·« ······* , φ · Φ Φ Φ Φ Φ ·

Φφφφ φφ φφ φφφφ ·· φφ s výhodou patři všechna odborníkům známá vodná rozpouštědla, včetně vody a biologických pufrovacich roztoků, ale předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady. S výhodou je vodné rozpouštědlo přítomno v množství 5 až 95 % obj.

Objem rozpouštědla se mění v závislosti na materiálu, ze kterého se tvoří skelná matrice a na látce, která má být zakotvena, stejně jako na přísadách. Minimální potřebný objem je množství nutné pro rozpuštěni různých složek. Může být ale také použita homogenně dispergovaná suspenze látek. Vhodné množství složek ve specifických provedeních odbornici snadno zjistí po prostudováni příkladů, které jsou uvedeny níže.

Do materiálu, ze kterého sc tvoří skelná matrice, mohou být přidány různé přísady. Přísady typicky zlepšuji tvorbu pěny a/nebo proces sušení nebo se účastní rozpouštěni látek Alternativně mohou přísady přispět ke stabilitě látky, která se zakotvuje do FGM Může být přítomna jedna nebo více přísad.

Například přidáni těkavých soli umožňuje vyšší původní objem za vzniku většího povrchu FGM, a tak lepší tvorbu pěny a rychlejší sušeni Těkavé soli jsou soli, které těkají za podmínek tvorby FGM. Příklady vhodných těkavých solí jsou acetát amonný, hydrogenuhličitan amonný a uhličitan amonný, ale předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady. Pro zlepšení tvorby pěny a rychlejší sušení jsou také vhodné soli, které se rozkládají za vzniku plynných produktů. Příklady těchto solí jsou hydrogenuhličitan sodný a meta hydrogensiřičitan sodný. S výhodou jsou tekavé soli přítomny v množství 0,01 až 5 M. Je vhodná koncentrace do 5 M. Vzniklá FGM má jednotnou konformaci pěny a je výrazně sušší ve srovnání s FGM, ve které nebyly použity tekavé soli. Účinek těkavých solí na tvorbu FGM je uveden na obrázku 3 (viz příklad 4A)

Pro zlepšení tvorby FGM mohou být v původní směsi použita těkavá organická rozpouštědla. Příklady vhodných organických rozpouštědel jsou alkoholy, ethery, oleje, kapalné uhlovodíky a jejich deriváty, ale předkládaný vynález se ale neomezuje pouze na tyto příklady Přestože těkavá organická rozpouštědla mohou být použita při rozpouštěni skelné matrice /nebo látky samotná, běžněji se používají ve směsi vodné/organické rozpouštědlo S výhodou je vodná složka obsažena ve směsi z 5 až 80 % hmotu směsí, a výhodněji 10 až 50 % hmotn. směsi.

** *·**

Jinou vhodnou přísadou jsou činidla stabilizující pěnu, která mohou být použita ve spojení buď s tekavou nebo rozkládající se soli a/nebo organickým rozpouštědlem. Mohou to být buď povrchově aktivní složky jako jsou amfipatické molekuly (t.j. fosfolipidy a povrchově aktivní látky) nebo činidla pro zvýšeni viskozity pěnícího sirupu, jako jsou zahušťující činidla jako je guarová guma a její deriváty Obrázek 4 popisuje vliv různé viskozity na tvorbu 1^;GM (příklad 4C).

Jinou přísadou je inhibitor Maillardovy reakce. S výhodou pokud látka a/nebo materiál pro tvorbu skelné matrice obsahuji karbonylovou nebo amino skupinu, imino nebo guanidino skupinu, prostředky dále obsahují nejméně jeden fyziologicky přijatelný inhibitor Maillardovy reakce v množství, které je účinné při prevenci kondenzace amino skupin a reaktivních karbonylových skupin v prostředku. Inhibitory Maillardovy reakce jsou odborníkům známé. Inhibitory jsou přítomny v množství, které je dostatečné pro prevenci nebo pro částečnou prevenci, kondenzace amino skupin a reaktivních karbonylových skupin. Amino skupiny jsou obvykle přítomny v látce a karbonylové skupiny jsou přítomny v materiálu, ze kterého se tvoři skelná matrice, nebo opačně. Amino a karbonylové skupiny mohou být také přítomny intramolekulárně v látce nebo v uhlohydrátu.

Jsou známy různé třídy sloučenin, které vykazuji účinky proti Maillardově reakci, a proto se použijí v prostředcích v souladu s předkládaným vynálezem Tyto sloučeniny jsou obvykle kompetitivni nebo nekompetitivní inhibitory Maillardovy reakce. Mezi kompetitivní inhibitory patří zbytky aminokyselin (jak D, tak L), kombinace zbytků aminokyselin a peptidů, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady. Zvláště výhodné jsou lysin, arginin, histidin a tryptofan. Lysin a arginin jsou nejúčinnější. Existuje mnoho známých nekompetitivnich inhibitorů. Patří mezi ně aminoguanidin a deriváty a amfotericin B, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady EP-A-0 433 679 také popisuje inhibitory Maillardovy reakce, které zahrnují deriváty

4-hydroxy-5,8-dioxochinolinu.

Látky, které se zakotvuji do FGM se přidají do směsi před krokem pěněni Může býl zakotveno velké množství látek. Například mohou být procesu popsanému v souladu s předkládaným vynálezem podrobeny bioakúvni látky jako jsou farmaceutická činidla a to* ··»· ·· ·» ·· · • ·· · v · ♦* • · · · · ♦·· »· to · · ·♦ · ·· ···· · ♦ · »* ·· *··· ·· ·· biologická činidla, stejně jako většina buněk jako jsou buňky červených krvinek a krevních destiček.

Všechny látky, které mohou být homogenně suspendovány v roztoku rozpouštědla a materiálu, který tvoří skelnou matrici, mohou být zpracovány za použití tohoto postupu. FGM má vc srovnání s pevnou dávkovači formou nebo dříve popsanými prostředky daleko větší povrch. Zvětšený povrch umožňuje snadnější rozpuštění a proto je předkládaný vynález aplikovatelný na velký počet látek. Jestli je pro látku vhodné zpracování v souladu s předkládaným vynálezem odborníci v této oblasti snadno určí a příklady uvedené níže jsou ilustrativní a neomezující. Pěněním homogenní suspenze ve FGM se předejde nerovnoměrnému rozložení látky, kterou by mohlo být obtížné rozpuslit. Výhodněji se látka rozpustí v rozpouštědle použitém v původní směsi.

Příklady vhodných látek, které mohou být zakotveny do FGM zahrnuji bioaktivní látky jako jsou farmaceuticky účinné látky, včetně protizánětlivých léků, analgetik, protiarthritických léků, amtispasmodik, antidepresiv, antipsychotik, tišících prostředků, leků proti úzkosti, narkotických antagonistů, léků proti Parkinsonově chorobě, cholinergních agonistů, chemoterapeutických léků, imunosupresivnich činidel, protivirových činidel, protiinikrobiálnich činidel, činidel potlačujících chuť k jídlu, anticholinergik, antiemetik, antihistaminik, Činidel proti migréně, koronární, cercbrální nebo periferní činidel rozšiřujících cévy, hormonálních činidel, antikoncepčních přípravků, Činidel proti trombóze, močopudných činidel, činidel proti vysokému tlaku, kardiovaskulárních léků, opiátů, apod

Mezi vhodné látky také patří léčebná a profylaktická činidla Patří mezi ně všechny terapeuticky účinné biologické modifikace, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady. Takové látky zahrnují subcelulární prostředky, buňky, bakterie, viry a molekuly, mezi které patří lipidy organické látky, proteiny a peptidy (syntetické a přírodní), peptidová mimetika, hormony (peptidy, steroidy a korlikosteroidy), D a L polymery aminokyselin, oligosacharidy, polysacharidy, nukleotidy, oligonukleotidy a nukleové kyseliny, včetně DNA a RNA, proteinové hybridy nukleových kyselin, malé molekuly a jejich fyziologicky aktivní analoga. Dále mohou být modifikátory odvozeny z přírodních zdrojů nebo připraveny rekombinací nebo syntetickou cestou, a zahrnují analoga, agonisty a homologa.

• · * ·

1!

Slovo „protein“, které se používá v předkládaném vynálezu znamená také peptidy a polypeptidy Mezi takové proteiny patří enzymy, biofarmaceutika, růstové hormony, růstové faktory, insulin, protilátky, jak monoklonálni, tak polyklonálni a jejich fragmenty, interferony, interleukiny a cytokiny, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady

Mezi organické látky patří farmaceuticky aktivní látky s aromatickou, karbonylovou, amino, imino a guanidino skupinami, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady

Mezi vhodné stei oidní hormony patří estrogen, progesteron, testosteron, a jejich fyziologicky aktivní analoga, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady. Mezi analoga stcroidnich hormonů patří estradiol, Sli l35 a tamoxifen, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady. Zvláště výhodné v souladu s předkládaným vynálezem jsou steroidní hormony jako jsou progesteron, testosteron, a jejich analoga.

Léčebná činidla založená na nukleových kyselinách, připravená pomocí způsobil popsaných v předkládaném vynálezu, jsou také součástí předkládaného vynálezu. Termín „nukleová kyselina“, který se používá v předkládaném vynálezu, zahrnuje všechny terapeuticky účinné nukleové kyseliny, které jsou odborníkům v této oblasti známé, a patři mezi ně DNA, RNA a jejich fyziologicky aktivní analoga, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady Nukleotidy mohou kódovat geny nebo mohou nést adresu známou v oblasti rckombinantů DNA, mezi které patři plasmidy, retroviry a viry spojené s adeno částí, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady.

Látky, které jsou profylakticky aktivní a jejich nosiče jsou další součásti předkládaného vynálezu Mezi výhodné prostředky patří imunogeny jako jsou vakcíny. Mezi vhodné vak cíny patří živé nebo oslabené viry, nukleotidové antigeny kódující adresy, živé nebo oslabené bakterie, antigeny, antigeny plus adjuvanty a hapteny spojené s nosiči, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady. Zvláště výhodné jsou vakciny účinné proti záškrtu, tetanu, černému kašli, botulinu, choleře, dengue, hepatitidě A, B, C a E, hcmofilní chřipka b, oparovému viru, Helikobakterium pylori, chřipce. Japonskému zánětu mozkových blan, meningokokovi A, B, a C, spalničkám, zánětu příušnic.

*0 »·00 papiloma viru, pneumokokovi, dětské obrně, spalničkám, rotaviru, dýchacímu syncytiálnimu viru, shigella, tuberkulosc, žluté horečce, a jejich kombinacím Antigenni složky vakcín mohou být také připraveny pomoci technik molekulární biologie za vzniku rekombinovaných peptidu nebo spojených proteinů znečištěných jednou nebo více částmi proteinu odvozeného od pathogenu. Například spojením proteinu obsahujícího antigen a podjednotku B toxinu cholery bylo zjištěno, že produkt vyvolává imunitní odpověď na antigen. Sanchez a kol., (1989) Proč Nati. Acad. Sci. USA, 86: 481-485 Vakcinyjsou zvláště výhodné pro zakotvení do prostředků s jednou dávkou. Při podmínkách okolí jsou stabilní pouze neurčitou dobu a mohou být rozpuštěny ve sterilním ředidle těsně před očkováním.

Imunogenní prostředky s výhodou obsahuji množství adjuvantu, které je dostatečné pro zvýšeni imunitní odpovědi na imunogen. Mezi vhodné adjuvanty patří soli hliníku, směsi skvalenu ((SAF-1), muramyl peptid, deriváty saponinu, příprava buněčných sten mykobakterií, monofosforyl lipid A, deriváty kyseliny mykolové, kopolymerní bloky neionogenních povrchově aktivních látek, Quil A, podjednotka toxinu cholery B, polyfosfazen a jeho deriváty, a imunostimilační komplexy (1SCOM), viz. Takahashi a kol., (1991) Nátuře 344:873-875. Pro veterinární použití a pro přípravu protilátek pro zvířata mohou být použity mitogenni složky Freundova adjuvantu.

Imunologicky účinné množství u imunogennich prostředků musí být určeno empiricky. Mezi faktory, které je nutno posoudit patří imunogenicita, zda bude nebo nebude komplexovat nebo se kovalentne vázat k adjuvantu nebo nosiči proteinu nebo jinému nosiči, způsob podávání a počet imunizujících dávek, které budou podány. Tyto faktory jsou známé v oblasti vakcín a mezi imunology, kteří množství určí bez nevhodných pokusů.

Látky mohou být ve FGM přítomny v různých koncentracích. Minimální koncentrace látky je obvykle množství nutné k dosažení daného účelu, zatímco maximální koncentrace je maximální množství, které zůstane v roztoku nebo homogenní suspenzi v počáteční směsi. Například, minimální množství terapeutického činidla je s výhodou takové, kterc bude obsaženo v jedné terapeuticky účinné dávce.

·♦

Pokud se FGM tvoři před krystalizaci, mohou být také použity super nasycené roztoky. Pro bioaktivní látky je minimální koncentrace množství potřebné pro bioaklivitu po rekonstrukci a maximální koncentrace je bod, ve kterém již není zachována homogenní suspenze V případě jedné dávkovači jednotky je to množství potřebné pro jednu ·υ^Ί g terapeutickou aplikaci. Například, Neupogen' se podává v dávce 300 pg (I +0,6 x 10

U/ntg; 5 pg/kg/den). Tedy, pro přípravu jedné dávky se do viálky umístí 300 pg Výhodné množství substrátu se měni od látky k látce, ale odborník v léto oblasti jej snadno urči.

Při prvním kroku sušení se rozpouštědlo odpaří za vzniku sirupu. „Sirup“ se definuje jako roztok, který má viskozitu v rozmezí Ι0^ύ až !0⁷ paskalsekund. U sirupu není definovaná pevná koncentrace, ale je to výsledek odpaření volného rozpouštědla ze směsi. Sirup je viskózní směs, která obsahuje materiál, který tvoři skelnou matrici a/nebo přísady a/nebo látky ve významně vyšší koncentraci, než v počáteční směsi Odparovaci krok se provádí za podmínek, které dostačuji pro odstranění asi 20 až 90 % obj roz.pouštědla za vzniku sirupu. Viskozita sirupu je s výhodou taková, že , když sirup vaří, odpařováním z rostoucího povrchu se tvoří bubliny a dojde k zeskelnatění.

Výhodná konzistence sirupu je závislá na FGM, která je potřebná pro konkrétní aplikaci. Velikost bublin se kontroluje pomocí viskozity, míry varu a těkavých složek nebo použitých stabilizátorů pěny

Délka počátečního kroku sušení závisí na objemu rozpouštědla a koncentraci materiálu, ze kterého vzniká skelná matrice a na všech přísadách a látkách v počáteční směsi, stejně jako na venkovní teplotě a tlaku. Pro daný tlak rychlost odpařování rozpouštědla roste s vnější teplotou. Protože při odpařování dochází k chladícímu efektu na vzorku, vnější teplota by se měla zvyšovat, za zvýšeni rychlosti odpařováni bez působeni na teplotu vzorku Rychlost odpařováni ze vzorku je nepřímo úměrná viskozitě. Jak se rozpouštědlo odpařuje ze vzorku, rychlost odpařování klesá. Toto střídavě dovoluje zvýšeni teploty vzorku k bodu varu za sníženého tlaku

Počáteční sušicí krok se může provádět za tlaku, který je nižší než tlak okolí. Výhodné jsou tlaky 13,3 až 4 000 Pa. Ještě výhodnější jsou tlaky 0,6 až 2,6 kPa Ncjvýhodnějši je tlak I až 1,7 kPa a vnější teplota 40 °C Vodná nebo organická rozpouštědla nebo jejich «« ···· ·* ·* *· ·· • · · · · φ « « · · · · • · · ··« · »»*«·· ·♦ «»·« ·· ·· ···> ·· ·· směsi mohou být odpařena za těchto podmínek. Zředěné roztoky o koncentracích 10 až 50 % (hmotn./obj) mohou být také odpařeny za těchto podmínek.

Snížení vnějšího tlaku má nejméně dva významné účinky. Za prvé se sníží tlak par rozpouštědla v plynném stavu, a tak se urychlí odpařováni a sušeni. Pokud se vzorek neohřívá zvenku, zvýšená rychlost odpařování způsobí ochlazení vzorku Za vakua je rychlost odpařováni omezena vstupem této energie. Tedy, výsledkem zvýšení vnější teploty je překvapivě zvýšení rychlosti sušeni a nc zvýšení teploty vzorku. Druhým efektem snížení tlaku jc výrazné snížení bodu varu vzorku. Var může proto probíhat velmi mírným zvyšováním teploty, která nemá nepříznivý vliv na produkt.

Sirup, který se získá po prvním kroku sušení se vystaví sníženému tlaku, což. má za výsledek var sirupu. Termín „var“, který se používá v předkládaném vynálezu, znamená bod, vc kterém je tlak par směsi stejný nebo vyšší než vnější tlak, kterému je vzorek vystaven. Var se navenek projevuje bubláním, jak se rozpouštědlo a/nebo těkavé složky rychle odpařuji. Nejdůležitějším faktorem, který určuje teplotu varu vzorkuje vnější tlak Jestliže je třeba pro zachování celistvosti látky udržet bod varu nižší, vnější tlak musí být nižší než atmosférický (t.j. vakuum), a tak se sníží teplota potřebná pro var. Protože se takto dosáhne teploty varu při nižší teplotě, celistvost látky není porušena

Pokud sc použije nižší tlak, rychlé sušeni pokračuje dokud viskozita vzorku nezačne růst. V tomto bodě se sníží pohyblivost molekul vody pres viskózní sirup, sníží se míra ochlazování při odpařování a teplota vzorku roste dokud není dosaženo teploty varu za sníženého tlaku Za varu vzroste plocha rozhraní kapalina/plyn, což je způsobeno bublání sirupu Tento vzrůst povrchu odpařováni způsobí ostrý vzrůst rychlosti sušeni a kapalná pěna se suší na pevnou skelnou pěnu. Toto obvykle proběhne brzy po varu

Teploty pro krok varu mohou být vyšší nebo nižší než je teplota okolí. Vnější teplota pro krok varu může být například 5 až 90 °C. výhodněji je vnější teplota 15 až 60 °C Nejvýhodněji je vnější teplota 25 až 45 °C.

S výhodou je vnější tlak v průběhu kroku varu 2700 až 1,33 Pa. Výhodněji je vnější tlak

13,3 až 6,6 Pa. Obrázek 2 ukazuje účinek různého vakua na tvorbu FGM Pro úpravu vakua se používá vakuový sušič s kontrolou, s výhodou programovatelnou kontrolou tlaku vakua a vnější teploty. Pumpa musí být schopna vytvořit vakuum 1,3.3 Pa a ···· • « * * ····· · »<···♦♦···· ¹ -····· · * · «Μ· ·· ·· ···· ·» ·· evakuovat komoru produktu na 27 až 1,33 Pa za 15 až 20 min Přístroje, které byly použity vtéto studii byly FTS Systém lne. (Stone Ridge, New York) Model TDS 00078A s VP-62P vakuovou pumpou a FD-OOO57-A chladičem nebo Labconco, lne (Kansas City) Model č. 77560 s Lyph Lock 12 chladičem a F.dwareds E2M8 dvoustupňovou vakuovou pumpou.

Při kroku varu vznikají bubliny, které velmi zvětší plochu odpařováni sirupu. Toto umožni rychlé odpaření zbylého rozpouštědla a zeskelnatění FGM jako pevné pěny z bublin, které vznikly v kroku varu Ukončení kroku varu se urči pomoci vzrůstu teploty vzorku, která se s výhodou udržuje až do ukončeni sušení. To se mění vzorek od vzorku, ale odborníci v této oblasti tento bod snadno urči.

Zbytková vlhkost se s výhodou odstraní prodloužením sušeni, tento krok obvykle probíhá při zvýšené teplotě a/nebo sníženém tlaku S výhodou má konečný produkt obsah zbytkové vlhkosti 0,1 až 5 % hmotn. S výhodou se zbytková vlhkost odstraňuje 1 až 15 hodi. Zbytková vlhkost se odstraní za kratší dobu při zvýšené teplotě.

Protože vznik FGM probíhá přes tvorbu bublin, může nahodilost uspořádáni a velikosti bublin způsobil vznik oblasti s různým obsahem zbytkové vlhkosti. Tedy, v průběhu druhého sušícího kroku se některé oblasti budou sušit rychleji než ostatní. Jak bylo uvedeno výše, přítomnost těkavých a rozkládajících se solí a/nebo těkavých organických rozpouštědel napomáhá ke vzniku FGM s malými bublinami stejné velikosti, což vede ke sníženi obsahu zbytkové vlhkosti a jejímu rovnoměrnějšímu rozděleni.

látky zakotvené ve skle trehalosy mohou být skladovány při teplotě okolí nejméně tři roky. Aktivní látky zakotvené do skel vytvořených z jiných polyolů také vykazují zvýšenou stabilitu při skladováni.

FGM je možno rekonstruovat okamžitě po přidáni vhodného rozpouštědla. Předkládaný vynález tedy zahrnuje způsoby rekonstrukce látek, které byly zakotveny do l^;GM

Povaha a množství rozpouštědla závisí na typu a množství látky, která má byt rekonstruována, stejně jako na účelu použiti rekonstruované látky Minimální množství rozpouštědla je množství nutné pro účinnou solubilizace skelné matrice a látky Jestliže je látka farmaceutický nebo bioaktivni prostředek, rekonstrukce se provádí pomocí biologicky vhodných pufru. Rekonstrukce muže být provedena při jakékoli teplotě, za * · ···*

• * *♦ toto » · · · · ·· _v « · · · ·· · • · · · * ·♦·· • · ♦ 9 ·· • «· ······ podmínky, žc nebude poškozena aktivita látky S výhodou se rekonstrukce provádí při teplotě okolí

Předkládaný vynález také zahrnuje jednotlivé dávkové jednotky aktivních látek, které jsou stabilní při skladování při teplotě okolí a dokonce při zvýšené teplotě (v některých případech do 100 °C), a které po rekonstrukci pomocí předem odměřeného alikvotniho dílu vhodného, s výhodou sterilního, rozpouštědla vytvoří terapeuticky účinnou dávku látky Toto je zvláště vhodné při použili u léků, včetně čistých a rekombinovaných proteinů a aktivních látek, jako jsou bioaktivní látky, které jsou normálně stabilní v roztoku při teplotě nižší než 4 až 8 °C Předmětem předkládaného vynálezu jsou také prostředky pro jednotlivou dávku (nebo několik dávek) stabilnějších produktů, jednotek a sad obsahující jednu nebo více jednotlivých dávek a aíikvotní díly (s výhodou předem naměřené) vhodného rozpouštědla. Aktivní látky, které jsou s výhodou vhodné pro skladováni a rekonstrukci za použití způsobů podle předkládaného vynálezu zahrnují Faktor Vlil, Neupogen®, Epogen®, TPA, cytokiny, růstové hormony, růstové faktory, vakciny, lipidy, enzymy, a další biofarmaceutické prostředky, stejně jako jiné aktivní látky, které se podávají parentcráině, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady

Předkládaný vynález dále zahrnuje prostředky obsahující skelnou matrici získanou pomocí způsobů popsaných v předkládaném vynálezu. Prostředky zahrnují FGM, FGM s různými látkami, které jsou v něm zakotveny a rekonstruované látky, získané z FGM, ale předkládaný vynález se neomezuje pouze na tyto příklady.

Následující příklady jsou určeny jako ilustrace, ale předkládaný vynález jimi není omezen

Příklady provedeni vynálezu

Příklad 1 lěinek vakua a vnější teplaly na první dobu sušení ml alikvotniho dílu 10% (hmotn./obj.) trehalosy v deionizované destilované vodě se umísti do 10 ml Wheatonovy farmaceutické viálky a suší ve FTS sušáku při rozném vakuu a nastavení teploty komory. Urči se teploty a časy potřebné pro odstranění asi 90 % hmotn vody (t.j. první sušení za vzniku sirupu). Výsledky uvádí Tabulka 1.

Tabulka 1	17	«· ···· · · • · · · · · * · * · * • » ♦ · · · · • » · · · ·**« · ·· ···♦
Operační tlak	Teplota varu vody	Operační teplota v	Čas potřebný pro
(mT)	při tomto tlaku (°C)	komoře (°C)	odstranění 90 % obsahu vody (hodiny)
30,000	29	45	>3,0
20,000	22,5	30	3,5
		35	2,5
		40	2,167
		40	2,167
		50	1,5
15,000	18	25	>4,0
		50	1,333
10,000	11,2	25	>3,0
		.30	2,0
		35	1,667
		40	1,5
5,000	1,5	40	1,667*
2,500	-5,0	40	1,0’

’ ojedinělý var

Příklad 2

Příprava PGM

2a Příprava z vodného roztoku materiálu, ze kterého se tvoři skelná matrice

Alikvotní díly 250, 410 a 500 μΙ 50% (hmotn./obj.) roztoku trehalosy ve 3 ml, 5 ml, a ml farmaceutických viálkách se suší v FTS sušáku 16 hod. Teplota komory se udržuje na 25 °C v průběhu spuštěni a poklesu vakua na 4 Pa za prvních 15 minut a tlak 4 Pa se udržuje po celou dobu průběhu sušení Tvorba FGM je ukázána na Obr 1Λ. Pěnový vzhled je způsoben okamžitým sušením bublin, které se tvoří během kroku varu.

2b Příprava z vodného roztoku materiálu, ze. kterého se tvoří skelná matrice obsahující aktivní látku v roztoku

Rckombinant povrchového antigenu Hepatitidy B v 20% (hmotn /obj.) roztoku trehalosy +0,5% (hmotn./obj.) Byco A v PBS se suší v 300 μΐ objemech v 3 ml farmaceutických viálkách Postup sušení pomocí FTS obsahuje tlak 4 Pa a teplotu komory udržovanou na

Φ· ·· ·· ·· _ _ . Μ · · · t · ,_Λ >····♦♦·· · »*·♦*···♦*· • φ···φ · · · ···· ·· ·· ···· ·· ·· °C v průběhu 18 hod sušícího cyklu. Střední obsah zbytkové vlhkosti FGM se pohybuje okolo 4 % hmotn Získané výsledky jsou uvedeny na Obr. 1B

2c Příprava z organického roztoku materiálu, ze. kterého se tvoří skelná matrice

500 μΙ alikvotní díl 50% (hmotn./obj.) okraacetálu trehalosy v dichlormethanu se suší v ml farmaceutických viálkách Teplota komory a tlak se udržuji na 30 °C a 4 Pa v průběhu 16 hod sušícího cyklu. Připravená FGM je ukázána na Obr. 6 Bylo pozorováno rychlé rozpuštění FGM při rekonstrukci.

2d Příprava ze směsí vodné organické rozpouštědlo obsahující materiál, ze kterého se tvoří skelná matrice a aktivní látku

750 μΙ alikvotní díly směsi 2.1 50% (hmotn./obj.) roztoku trehalosy v deionizované destilované vodě a 100 mg/ml organické aktivní látky, anestetického činidla, v ethanolu se suší v 10 ml farmaceutických viálkách ve FTS sušáku Teplota a tlak se udržuje na konstantních hodnotách 40 °C a 4 Pa v průběhu 18 hod. sušícího cyklu. Rekonstrukcí FGM v 20 % obj./obj ethanolu v deionizované destilované vodě se po rychlém rozpuštění získá homogenní roztok anestetika.

2e Příprava z vodného roztoku materiálu, ze kterého se tvoři skelná matrice a přísady, pomoci které se aktivní látka zakotvi do homogenní suspenze

Anorganická aktivní látka a adjuvant hydroxid hlinitý se suší při koncentraci suspenze buď 2,5 nebo 6 mg/ml, buď v PBS nebo v 0,9% (hmotn./obj.) solance jako rozpouštědle pro materiál, ze kterého se tvoří skelná matrice, za použití následujících prostředků, které obsahují přísady těkavých soli pro zlepšení tvorby FGM (viz. Přiklad 4);

i) 20% (hmotn./obj.) trehalosa ± hydrogenuhličitan amonný ii) 50% (hmotn /obj.) trehalosa ± hydrogenuhličitan amonný iii) 38,5% (hmotn./obj.) trehalosa 1 hydrogenuhličitan amonný iv) 25% (hmotn./obj.) trehalosa ± hydrogenuhličitan amonný

250 a 300 μ[ vzorky obsahující hydrogenuhličitan amonný o koncentracích v rozsahu

0,05 až 0,75 M se suší ve 3 ml farmaceutických viálkách za použití jednoho nebo dvou následujících FTS postupů *

J9 »»···» · · • ·9· o · ·· ···· · · ¹

)) tlak se sníží na 4 Pa a teplota komory se v 2 hod intervalech zvyšuje z 35 °C na 50 °C a nakonec na 60 °C. Celková doba cyklu je 18 hod. Vzniklá FGM má obsah zbytkové vlhkosti v rozmezí 1,5 až 2,9 % hmotn. Rekonstrukce FGM je okamžitá.

2) tlak se 30 min udržuje na 2 kPa, poté se sníží na 1,3 kPa na dobu 30 min Teplota se zvyšuje z 10 na 25 °C Tlak se sníží na 4 Pa a na této hodnotě se udržuje 18 hod

V průběhu této doby se teplota zvýší z 25 na 45 °C a o 2 hod později na 60 ^QC. Vzniklá FGM se podobá plaku vzniklému při sušení za mrazu a hydratace opět probíhá okamžitě.

Tyto výsledky také ilustrují účinek teploty a vakua (viz. Příklad 3) a přídavku těkavých solí (viz. Příklad 4) na vznik FGM, vzhled a obsah zbytkové vlhkosti.

Přiklad 3

Účinek vakua a vnější teploty na vznik FGM

3a Příprava z roztoku materiálu, ze kterého se tvoři matrice a přísady

Alikvotní díly 1 ml nebo 500 μΐ 25 % (hmotn./obj.) trchalosy obsahující buď 0,25 nebo 0,5 M hydrogenuhličitan amonný se suší v 10 farmaceutických viálkách ve FTS sušáku 1 inl vzorky se suší při konstantním vakuu 4 Pa po dobu 14 hod. a teplotě nejprve 25 °C, která se zvýší po prvních 2 hod. na 45 °C (t.j. vznik sirupu). 500 μΙ vzorky se suší při konstantní teplotě 25 °C a konstantním vakuu 1,3 Pa po dobu 14 hod. Vytvořená FGM (Obr. 2, str. 2A) zaujala větší objem, než stejné vzorky sušené za mrazu (Obr. 2, str. 2B).

3b Příprava z roztoku materiálu, ze kterého se tvoři skelná matrice obsahující aktivní látku

300 μΐ alikvotní díly roztoku 43,4 mg/ml trehalosy obsahující 66 mg/ml antimikrobiálního peptidu se suší v 10 ml polypropylenových zkumavkách (10 mm v průměru) vc FTS sušáku Vzorky se při 25 °C umístí do pouzdra, které je předehřáto na 35 °C Vakuum v komoře se prudce sníží na 2,7 Pa v piůběhu 10 min. Tlak se udržuje 30 min a poté se sníží na 4 Pa. Po 981 min. se teplota v komoře zvýši na 50 ^tJC. Tato teplota komory se udržuje 190 min. a poté se cyklus ukonči. Vzniklá FGM má otevřenou plakovou strukturu, která je podobná struktuře materiálů sušených za mrazu Obsah vlhkosti je 1,1 až 1,3 % hmotn Rozpouštěni probíhá okamžitě. Podobná FGM se získá při použiti sacharosy neboGPS místo trehalosy Při zvýšené teplotě při skladování FGM, která obsahuje trehaiosu jako materiál, ze kterého vzniká FGM, při 60 °C a při vlhkosti prostředí nebylo zjištěno žádné zmenšeni objemu po uplynutí 30 dni a struktura FGM zůstala neporušená. Rozpuštění vzorků bylo okamžité.

Příklad 4

Účinek přísad na vznik FGM

4a l Jčinek přídavku těkavých soli na vznik FGM

500 μΐ alikvotní díly 3 až 60 % (hmotn./obj.) trehalosy v deionizované destilované vodc obsahující acctát amonný nebo hydrogenuhličitan amonný v koncentracích 0 až 4 M se suší v FTS sušáku. Teplota komory se udržuje konstantní na hodnotě 20 C a vakuum na 4 Pa po dobu 18 hodinového cyklu Obsah zbytkové vlhkosti vzniklé FGM se pohybuje v rozmezí 2 až 5,5 % hmotn. a hydratace proběhla okamžité. Příklady vzniklé FGM jsou uvedeny na Obr. 3.

4h l Ičinek přídavku rozkládající se solí na vznik FGM

500 μΙ alikvotní díly 50 % (hmotn /obj) trehalosy J 1 M metahydrogensiřičitan sodný se suší v FTS sušáku 12 nebo 18 hod. Teplota komory a tlak se v průběhu sušícího cyklu udržuji na konstantních hodnotách 40 °C a 4 Pa. Při kratším sušícím čase 12 hod vykazoval roztok, ze kterého vzniká FGM obsahující rozkládající se soli, výrazně nižší obsah zbytkové vlhkosti. Bylo pozorováno rychlé rozpuštění všech připravených FGM při rekonstrukci.

c Účinek přísad upravujících viskozitu na vznik FGM

500 μΐ alikvotní díly 50 až 90 % (hmotn /obj.) roztoku trehalosy v deionizované destilované vodě nebo PBS obsahující 0,5 až 2 % (hmotn./obj.) guarové gumy (Jaguar HP60) se suší v 5 nebo 10 ml viálkách ve FTS sušáku po dobu 16 h. Původní teplota komory a vakuum bylo 30 °C a 4 kPa, byly po 2 hod. zvýšeny na 60 °C a 4 Pa a udržovány na těchto hodnotách dalších 14 hod. sušícího cyklu Representativní příklady vzniklé FGM jsou uvedeny na Obr. 4. Všechny FGM znovu vykazovaly rychlou rozpustnost při rekonstrukci buď ve vodě nebo v PBS.

• « »· ·· * · · · · · »··♦*··*··· ♦ ····· ·· · ···» ·« ·* ···♦ ·· ··

4d l /činek povrchově aktivních přísad na vznik P(jM

500 μ| alikvotni díly enzymového prostředku, každý o obsahu 5000 jednotek EcoRI, 50% (hmotn /obj.) trehalosa a 0,2% obj. Triton-X-100 jako povrchově aktivní látky, v 50 mM Tris HC1 (pH 7,2), 300 mM NaCI, 0,5 mM EDTA, 5,0 mM EGTA, 0,5 mg/ml BSA a 5 pg/ml poly-l iysinu se suší v 10 mi farmaceutických viáikách po dobu 18 hod. Před přidáním sterilního zásobního roztoku EcoRI se zásobní roztok filtračně sterilizuje přes 0,22 pm filtr Sušicí postup zahrnuje nejprve udržování teploty komory a vakua na hodnotách 10 °C a 1,3 kPa. Teplota komory se poté zvýší na 60 °C Po dalších 20 min se vakuum sníží na 4 Pa . Tyto hodnoty sc udržují 17 hod. sušícího cyklu. Obsah zbytkové vlhkosti vzniklé FGM sc pohybuje v rozmezí 1,5 až 3,5 % hmotn. a hydratace při rekonstrukci je okamžitá.

Příklad 5 ilustrativní příklady vzniku hXjM

5a Vznik b(jA4 z materiálu, ze kterého se tvoři skelná matrice a přísad, které zahrnují molekulárně aktivní látku v homogenním roztoku

Prostředky obsahující jako aktivní látku alkalickou fosfatázu (1 mg/ml) v roztoku se směsi materiálu, zc kterého vzniká skelná matrice, trchalosu (v rozmezí koncentrací 20 až 50 % (hmotn./obj.)) a HSA a přísady těkavých solí, hydrogenuhličitanu amonného (50 mM se připraví v PBS nebo HEPES pufru Do 3 ml farmaceutických viálek byly odebrány 250 μΐ alikvotni díly a sušeny v FTS sušáku. Teplota komory byla nejprve 30 °C a vakuum se měnilo ve 2 min. intervalech od 4 kPa na 3,3, 2,7, 2,0, 1,33 kPa, a konečně na 4 Pa, poté se zvýšila teplota komory na 40 °C a nakonec na 60 °C.Celkový čas cyklu byl 20 hod. Obsah zbytkové vlhkosti vzniklé FGM byl 1 % hmotn 5b Příprava 1(jM z materiálu, ze kterého vzniká skelná matrice, který obsahuje molekulárně aktivní látky v homogenní suspenzi

Komerčně dostupný vak cínový prostředek povrchového antigenu 1 lepatitidy B adsorbovaný na anorganický akjuvant hydroxid hlinitý se suší ve 300 μΙ 20 % (hmotn./obj) trehalosy v PBS v 3 ml farmaceutických viáikách Sušici postup ve • · • · · φ φ 4

« φφφ • · · · φ φ φ φ · * * •«φ φ · · *

FTS zahrnuje tlak 4 Pa s teplotou komory udržovanou na 40 °C po dobu sušícího cyklu, který trval 18 hod. Střední obsah zbytkové vlhkosti FGM byl 4 až 4,5 % hmotn.

5c Příprava FCjM z materiálu, ze kterého vzniká skelná matrice, který zahrnuje makromolekulám! aktivní látky

Prostředky sušené za vzniku FGM obsahovaly viry spalniček nebo obrny v požadovaných dávkách a skládaly se z:

i) 50% (hmotn /obj.) trchalosy i 2% (hmotn./obj.) HSA ± 50 mM hydrogenuhličitanu amonného ii) 50% (hmotn./obj.) laktitolu r 2% (hmotn./obj.) HSA ± 50 mM hydrogenuhličitanu amonného iii) 40% (hmotn./obj.) trehalosy t 10% (hmotn./obj.) sorbitolu >

2% (hmotn./obj.) HSA ± 50 mM hydrogenuhličitanu amonného

Vzorky se připraví buď za použiti PI3S nebo HEPES pufru a 250 μΐ alikvotního dílu, který se umístil do 3 ml farmaceutických viálek a sušil ve FTS sušáku za použití dvou postupů:

a) Pro vzorky obsahující těkavé soli, hydrogenuhličitan amonný, se vakuum měnilo po 2 min od 3,3, 2,7, 2,0, 1,33 kPa, a konečně do 4 Pa Teplota komory byla nejprve °C, poté se zvýšila na 40 °C Celkový Čas cyklu byl 20 hod. Obsah zbytkové vlhkosti byl 2 % (hmotn./obj) a vzorek se při rekonstrukci rychle rozpouštěl.

b) Pro vzorky neobsahující těkavé soli se vakuum rychle snížilo na 4 Pa a udržovalo na této hodnotě po 20 hod. sušícího cyklu Teplota komory byla nejdřív 30 °C, pote se zvýšila na 40 °C. Obsah zbytkové vlhkosti ve vzniklé FGM byl 4 % (hmotn /obj ) a vzorek se při rekonstrukci rychle rozpouštěl.

5d Příprava F(jM z materiálu, ze kterého vzniká skelná matrice, který zahrnuje buněčné látky

Sušení buněk lidských červených krvinek

5% obj. koncentrace hematokritu erythrocylů byla připravena ve směsi s:

i) 50% (hmotn./obj) trehalosa 5: 50 mM hydrogenuhličitan amonný v * • * · · · ♦

z.) 4····· ♦ ·

B»·· «4 · · · ··· * · · ii) 25% (hmotn./obj ) trehalosa ± 10 (hmotn./obj.) hydroxyethylškrob (1IES) vPBS

200 pl alikvotní díly se sušily v 3 ml farmaceutických viálkách ve FTS sušáku. Při sušeni byla použita teplota komory 37 °C a vakuum se rychle snížilo na 4 Pa Cyklus trval 18 hod Vzniklá FGM mela obsah zbytkové vlhkosti 2,5 až. 3 % hmotn a hydratace při rekonstrukci proběhla rychle. Získané výsledky ukazuje Obr. 5.

Sušení lidských krevních destiček

Destičky o počáteční koncentraci 500 x 10⁹/l se sušily v prostředku obsahujícím 5% (hmotu./obj.) trehalose v HEPES pufrovancm solankou obsahující 5 mM chloridu draselného, 1 mM síranu hořečnatého, 0,05 O/ml hirudinu, 0,0125 U/ml apyrasy, 10 μΜ indometacinu a 250 mM hydrogenuhličitanu amonného. 200 μΙ alikvotní díly se sušily v 3 ml farmaceutických viálkách ve FTS sušáku Při sušení byla použita teplota komory 37 °C a vakuum se rychle snížilo na 4 Pa. Cyklus trval 18 hod. Vzniklá FGM mela střední obsah zbytkové vlhkosti 1 % hmotn. a hydratace při rekonstrukci proběhla rychle

Sušení buněk bakterií (Escherichia coli)

Suspenze buněk E coli se připraví v 45 % (hmotn /obj.) roztoku trehalosy obsahujícím

1,5 % (hmotn./obj.) Kolidonu 90. 300 μΙ alikvotní díly, obsahující 1 x 10⁹ buněk E coli se umístí do 3 ml farmaceutických viálek. Sušení se provádělo v FTS sušáku s teplotou komory a vakuem nejprve .30 °C a 666 Pa Po 30 min se teplota komory zvýšila na 40 °C a vakuum se snížilo na 4 Pa. Celková doba sušení byla 18 hod Vzniklá FGM mela obsah zbytkové vlhkosti 2 až 4,5 % hmotn. a hydratace při rekonstrukci proběhla rychle.

Příklad 6

Ilustrativní příklady přípravy F(jM v předplněných stříkačkách

Různé vhodné stříkačky o objemu 1, 2,5, 5, 10, 30 a 60 ml byly předplněny objemy 25 až 1000 μΙ 50 % (hmotn./obj.) trehalosy t 0,5 M hydrogenuhiičitanem amonným v sterilním PBS pufru. Sušení se provádělo v Labconco sušáku s teplotou komory nejdříve 10 °C. Tlak se během 3 min,snížil na 400 Pa. Po dalších 4 in sc tlak snížil na 16

Pa a teplota komory se zvýšila na 40 °C. Sušení pokračovalo dalších 19 hodin, a poté se • · • « vzorek hydratoval, a okamžitě rozpustil Příklady získaných výsledků jsou uvedeny na

Obr Ί

Třebaže byl předkládaný vynález v některých detailech ilustrován pomocí obrázků a příkladů, které byly uvedeny pro lepší pochopeni, odborníkům je zřejmé, že mohou být provedeny určité změny v postupech. Proto nemohou být popisy a příklady považovány za omezení oblasti předkládaného vynálezu, který je popsán pomocí připojených nároků

Průmyslová využitelnost

Předkládaný vynález zahrnuje způsoby pro přípravu suchých matric z pěnového skla (FGM) Také zahrnuje způsoby pro pevné zakotvení látek, mezi kterc patří aktivní látky, pomoci FGM. Předkládaný vynález také zahrnuje prostředky obsahující FGM, stejně jako prostředky obsahující látky stabilně zakotvené do FGM.

FGM jsou vhodné pro skladováni jakýchkoli látek. FGM jsou zvláště výhodné pro špatně rozpustné látky jako jsou organické látky. Dále, FGM jsou zvláště výhodné pro barviva, příchutě, biomolekuly, molekulární shluky, buňky a jiné nestabilní látky. V souladu s předkládaným vynálezem je nyní možné připravit jednu dávkovači jednotku bioaktivni látky, která je stabilní při skladování při teplotě okolí a při zvýšené teplotě. Například, jedna dávkovači forma může být připravena vc stříkačce za vzniku předplněné stříkačky.

• v · ♦

4 ' *.'· '

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob pro přípravu tenké, pěnové skelné matrice, v yznačujicí se i i m , že zahrnuje následující kroky:

a. přípravu počáteční směsi, která obsahuje nejméně jednu látku, ze které vzniká skelná matrice, a nejméně jedno rozpouštědlo pro látku, ze které vzniká skelná matrice,

b. odpaření volného rozpouštědla ze směsi za vzniku sirupu;

c. vystavení sirupu tlaku a teplotě, která je dostatečná pro dosaženi varu sirupu, a

d. výhodné odstranění zbytkové vlhkosti.

Způsob podle nároku 1, vyznačující které vzniká skelná matrice je stabilizující polyol.

m , že látka, zc
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující stabilizujícím poiyolem je uhlohydrát že
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující uhlohydrát je přírodní nebo syntetický.

žc
5. Způsob podle nároku 3, vyznačující uhlohydrát je chemicky nebo enzymaticky upravený tím,

Že

6. Způsob podle nároku 3, vyznačující tím, uhlohydrát je vybrán ze skupiny skládající se z glukosy, maltulosy, iso-maltulosy, laktulosy a sacharosy, maltosy, lakíosy, i som alt osy a jejich cukerných alkoholů, maltitolu, laktitolu, palatinitu, a směsi α-D-glukopyranosylmannitolu a aD-glukopyranosyl-sorbitolu a jejich jednotlivých cukerných alkoholů, neredukujícich glykosidů polyhydroxysloučenin vybraných ze skupiny obsahující cukerné alkoholy, jiné polyalkoholy s přímým řetězcem, rafinosu, stachyosu, melezitosu a dextran že

Mil

7 Způsob podle nároku J, v y z n a č u j i c í se t i m , že uhlohydrátem je trehalosa. 8. Způsob podle nároku I, v y z n a č u j í c í se t í m , že rozpouštědlo je vodné. 9. Způsob podle nároku 8, v y z n a č u j i c í se t i rn , že

rozpouštědlo je vybráno ze skupiny skládající se z biologicky přijatelných pufrů.

10. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že rozpouštědlo je organické.

11 Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že rozpouštědlo je vybráno ze skupiny skládajíc! se z alkoholů, etherů, olejů, kapalných uhlovodíků a jejich derivátů

12. Způsob podle nároku I, vyznačující se rozpouštědlo je směsí vodného a organického rozpouštědla.

tím, že

13 Způsob podle nároku 8, v y z n a č u j í c i se t i m , že rozpouštědlo je přítomno v množství 5 až 95 % objemových.

14. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že odpařování v kroku -b- probíhá při teplotě vyšší než je teplota okolí.

15. Způsob podle nároku 14, v y z n a č u j i c i se t i m , že teplota se pohybuje v rozmezí 0 až 90 °C. 16. Způsob podle nároku 14, v y z n a č u j i c í se t í m , že teplota se pohybuje v rozmezí 15 až 60 °C. 17. Způsob podle nároku 14, v y z n a Č u j i c í s c t i m , že teplota se pohybuje v rozmezí 25 až 45 °C

18. Způsob podle nároku 1, v y z n a č ti j í c i se t i m , že odpařování v kroku -b- probíhá za podmínek, které jsou dostatečné pro odstraněni 5 až

95 % obj rozpouštědla.

v

19. Způsob podle nároku 1, vyznačující s e tím, že odpařováni v kroku -b- probíhá za tlaku, který je nižší než tlak okolí 20. Způsob podle nároku 19, vyznačující pohybuje v rozmezí 13,2 až 4 000 Pa. s e tím, že tlak 21. Způsob podle nároku 19, vyznačující pohybuje v rozmezí 133 až 2 666 Pa. s e tím, že tlak 22. Způsob podle nároku 19, vyznačující pohybuje v rozmezí 1 až 1,6 kPa s e tím, žc tlak 23. Způsob podle nároku 19, vyznačující 1,3 kPa. s e tím, že tlak 24 Způsob podle nároku 1, vyznačující se podmínky v kroku -c- jsou dostatečné pro dosažení varu sirupu t í m , že 25 Způsob podle nároku 1, vyznačující v kroku -c- probíhá tak, že vzniká napěněné sklo. s e tím, že var 26 Způsob podle nároku 1, vyznačující v průběhu kroku -c- je 4 až 4 000 Pa. s c tím, že tlak 27 Způsob podle nároku 1, vyznačující v průběhu kroku -c-je 4 až 1 333 Pa s e tím, že tlak 28 Způsob podle nároku 1, vyznačující v průběhu kroku -c-je 4 až 67 Pa s e tím, že tlak 29. Způsob podle nároku 1, vyznačující v průběhu kroku -c-je 6,7 Pa. s e tím, že tlak 30. Způsob podle nároku 1, vyznačující s e tím, že var

v kroku -c- probíhá při vnější teplotě, která je vyšší než teplota okolí.

31 Způsob podle nároku I, vyznačující se tím, žc teplota v průběhu kroku -oje 0 až 80 °C φ · ···· a

a » ·· · *

32. Způsob podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se tím, že teplota v průběhu kroku -c-je 10 až 60 °C. 33 Způsob podle nároku 1, v y z n a č u j i c i se t i tn , že teplota v průběhu kroku -c- je 15 až 45 °C. 34. Způsob podle nároku 1, v y z n a č u j í c i se tím, že FGM

má obsah zbytkové vlhkosti OJ až 12 % hmotn .35. Způsob podle nároku 34, vyznačující se lim, že FGM má obsah zbytkové vlhkosti 1 až 5 % hmotn.

36 Způsob podle nároku I, vyznačující se tím, žc dále zahrnuje krok přidání nejméně jedné přísady v průběhu kroku -a- nebo -b-

37. Způsob podle nároku .36, v y z n a č u j í c í se ti in , žc přísadou je nejméně jedna těkavá sůl.

38. Způsob podle nároku 37, vyznačující se t í m , že těkavá sůl je vybraná ze skupiny skládající se z acetátu amonného, hydrogenuhličitanu amonného a uhličitanu amonného

39. Způsob podle nároku 37 vyznačující sůl je přítomna v množství 0,01 až 5 M.

40. Způsob podle nároku 36, vyznačující přísadou je nejméně jedna rozkládající se sůl že těkavá tím, že že

41 Způsob podle nároku 40, vyznačující rozkládající se sůl je vybraná ze skupiny skládající se z hydíOgenuhliČitanu sodného a metahydrogensiřičitanu sodného

42 Způsob podle nároku 36, vyznačující se t i m , že přísadou je nejméně jedno těkavé organické rozpouštědlo.

Μ · ·· ♦ •

43. Způsob podle nároku 42 vyznačující se t i m , že těkavé organické rozpouštědlo je vybráno ze skupiny skládající se z alkoholů, etherů, olejů, kapalných uhlovodíků a jejich derivátů

44. Způsob podle nároku 36, v y z n a Č u j i c i s c t i m , že přísadou je nejméně jedno činidlo, které stabilizuje pěnu.

45. Způsob podle nároku 44, v y z stabilizující pěnu upravuje viskozitu.

46. Způsob podle nároku 45, v y z upravující viskozitu je guarová guma nebo

47 Způsob podle nároku 44, v y z stabilizující pěnu amfipatická molekula.

48. Způsob podle nároku 47, v y z

načuj í c i se tím, že činidlo n a č u j i c. i se karboxymethylcelulosa. t 1 i m , žc činidlo načuj i c i se t : í in , že činidlo načuj i c i se tím, že

amfipatickou molekulou je povrchově aktivní činidlo vybrané ze skupiny, která obsahuje fosfolipidy a povrchově aktivní látky.

49. Způsob podle nároku 36, vyznačující přísadou je inhibitor Maillardovy reakce.

tím, že

50. Způsob podle nároku 1, vyznačující přidání další látky v průběhu kroku -a- nebo kroku -btím, že obsahuje

51. Způsob podle nároku 50, v y z n je bioaktivni látka m , že látkou

52. Způsob podle nároku 51, v y z n bioaktivni látkou je buňka nebo její produkt.

53 Způsob podle nároku 5], v y z n přítomna v terapeuticky účinném množství «« ·9· «9 ·· Μ 4«

99 9 9·»· «999

9« «9 · ·999

30 · ·*···«····· φ99··· 9·· ··· · 99 ·· 9999 «9 ««

54. Způsob podle nároku 51, v y z n a č u j i c i se t i in , že bioaktivní látka je vybrána ze skupiny skládající se z farmaceutických činidel a biologických modifikátorů.

55. Způsob podle nároku 54, vyznačující se t i m , že biologický modifikátor je vybrán ze skupiny skládající se ze subcelulárnich prostředků, buněk, bakterií, virů a molekul.

56 Způsob podle nároku 51, v y z n a č u j i c i se t í ni , že bioaktivní látka je vybrána ze skupiny skládající se z lipidů, organických látek, proteinů a peptidů (syntetických a přírodních), napodobených peptidů, polymerů D a L aminokyselin, oligosacharidů, polysacharidu, nukleotidů, oligonukleotidů a nukleových kyselin, včetně DNA a RNA, hybridů proteinů nukleových kyselin, a malých molekul a jejich fyziologicky aktivních analog.

57 Způsob podle nároku 56, vyznačující se t i m , že proteiny jsou vybrány ze skupiny obsahující enzymy, biofarmaccutická činidla, růstové hormony, růstové faktory, insulin, monoklonální protilátky, interferony, interleukiny a cytokiny.

58. Způsob podle nároku 51, v y z n a č u j i c i se tím, želátkaje vakcína.

59. Způsob podle nároku 51, vyznačující se tím, že vakcína je vybrána ze skupiny skládající se z živých a oslabených virů, nukleotidových antigenů kódujících adresy, živých a oslabených bakterií, antigenů, antigenů plis adjuvantů, a haptenů připojených na nosiče

60. Způsob podle nároku 51, v y z n a č u j i c i se t i m , že dále obsahuje krok, při kterém se rekonstruuje bioaktivní látka v rozpouštědle.

61 Způsob podle nároku 60, v y z n a č u j i c i se t i m , že rozpouštědlo se přidá v množství poskytujícím terapeuticky účinnou koncentraci aktivní látky

62. Způsob podle nároku 60, vyznačující se t i rn , že rozpouštědlem je biologicky přijatelný pufr

63. Způsob pro pevné zakotvení nejméně jedné látky v tenké pěnové skelné matrici (FGM), vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:

a. přípravy počáteční směsi obsahující nejméně jednu látku, ze které se tvoří skelná matrice, nejméně jednu látku, která má být zakotvena a nejméně jedno rozpouštědlo pro látku, ze které se tvoří skelná matrice a nejméně jedno rozpouštědlo látku, která má být zakotvena;

b. odpaření volného rozpouštědla ze směsi za vzniku snopu.

c. vystaveni sirupu tlaku a teplotě, které jsou dostatečné pro dosaženi varu sirupu, a d výhodné odstranění zbylé vlhkosti.

64. Způsob podle nároku 63, v y z n a č u j í c í se tím, že rozpouštědlo pro látku, ze které se tvoří skelná matrice a rozpouštědlo pro látku, která má být zakotvena je stejné rozpouštědlo.

65 Způsob podle nároku 63, v y z n a č u j í c í se t i m , že rozpouštědlo pro látku, ze které se tvoří skelná matrice a rozpouštědlo pro látku, která má být zakotvena jsou různá rozpouštědla.

66. Způsob pro přípravu stabilní, suché, snadno rozpustné jednotlivé dávky bioaktivní látky, vyznačující se tím, že obsahuje kroky:

a přípravy směsi obsahující nejméně jednu látku, ze které se tvoří skelná matrice, látku, která má být zakotvena a nejméně jedno rozpouštědlo,

b. odpařeni volného rozpouštědla ze směsi za vzniku sirupu, c vystavení sirupu tlaku a teplotě, které jsou dostatečné pro dosažení varu sirupu, a

d. výhodné odstranění zbylé vlhkosti « ·· ·· · * · · « · · · ·*νν

32 · ·»········ «···«« · · · »·«· ·· ·«···« ·· «·

67. Způsob podle nároku 66, v y z n a č u j i c i se 1 i m , žc rozpouštědlo pro látku, ze které se tvoři skelná matrice a rozpouštědlo pro látku, která má být zakotvena jsou stejná rozpouštědla.

68. Způsob podle nároku 66, vyznačující se t i m , že rozpouštědlo pro látku, ze které se tvoří skelná matrice a rozpouštědlo pro látku, která má být zakotvena jsou různá rozpouštědla

69 Způsob podle nároku 66, v y z n a č u j í c i se t i ni , že látka, která má být zakotvena, je přítomna v terapeuticky účinném množství.

70 Způsob podle nároku 66, vyznačující se tím, žc dále obsahuje rekonstrukci FGM ve vhodném rozpouštědle.

71 Způsob pro rekonstrukci látky zakotvené na tenké pěnové skelné matrici (FGM), vyznačující se tím, že se k FGM přidá vhodné rozpouštědlo v množství, které je dostatečné pro získáni požadované koncentrace látky.

72. Prostředek, vyznačující se t í ni , že obsahuje tenkou, pěnovou skelnou matrici.

73. Prostředek, v y z n a č u j i c i se tím, žc obsahuje nejméně jednu sloučeninu zakotvenou na tenké, pěnové skelné matrici (FGM).

74. Prostředek, vyznačující se tím, že se získá rekonstrukcí tenké, pěnové skelné matrici (FGM) podle nároku 63

75. Prostředek podle nároku 73, v y z n a č u j i c i se t i m , že látkou je bioaktivni látka.

76. Prostředek, vyznačující se t í m , žc sc získá rekonstrukcí tenké, pěnové skelné matrici (FGM) podle nároku 66

77 Prostředek, vyznačující se t i m , že se získá pomocí způsobu podle nároku 1.

·« ···· 00 00 00 ·· • 0 · 0 0 0 · · * · 0 • · 0 0 · «010 • 0*00 *0 00 0 0 0 ·*···· 0*0 «000 00 0« 0··· ·· 00

78. Prostředek, vyznač způsobu podle nároku 35.

jící se t í m , že se získá pomoci