CZ41997A3 - Specific vectors for introducing genes into target cells, medicaments containing such vectors and their use - Google Patents
Specific vectors for introducing genes into target cells, medicaments containing such vectors and their use Download PDFInfo
- Publication number
- CZ41997A3 CZ41997A3 CZ97419A CZ41997A CZ41997A3 CZ 41997 A3 CZ41997 A3 CZ 41997A3 CZ 97419 A CZ97419 A CZ 97419A CZ 41997 A CZ41997 A CZ 41997A CZ 41997 A3 CZ41997 A3 CZ 41997A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- page
- virus
- cells
- cell
- fragments
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 120
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 132
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 92
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000000799 fusogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 31
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 65
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 59
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 37
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 37
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 32
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 31
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 28
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 27
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 26
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 21
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 claims description 15
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 15
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 14
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 claims description 14
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 14
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 claims description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 13
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 13
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 13
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 13
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 claims description 12
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 claims description 12
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 11
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 10
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 10
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 claims description 10
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 10
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 10
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 8
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 8
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 7
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 7
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 7
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 7
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 6
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 5
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 5
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 5
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims description 5
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 claims description 5
- 108010028403 hemagglutinin esterase Proteins 0.000 claims description 5
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 5
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 4
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 4
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 4
- 102100035248 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims description 3
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 claims description 3
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 3
- 101001022185 Homo sapiens Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 claims description 3
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002397 Kinins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010093008 Kinins Proteins 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims description 3
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 claims description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000000424 bronchial epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 3
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 claims description 3
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 claims description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 claims description 2
- 241000189662 Calla Species 0.000 claims description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 claims description 2
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 108010084541 asialoorosomucoid Proteins 0.000 claims description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 claims description 2
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 claims description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 claims description 2
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 2
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims 2
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 claims 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 claims 1
- 101001039853 Sonchus yellow net virus Matrix protein Proteins 0.000 claims 1
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 claims 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract description 7
- 230000035515 penetration Effects 0.000 abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 24
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 23
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 15
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 14
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 101710169453 Hemagglutinin-esterase-fusion glycoprotein Proteins 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 8
- -1 cationic polysaccharides Chemical class 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 7
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 5
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 5
- 101000946719 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Carboxysome assembly protein CcmN Proteins 0.000 description 5
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 5
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 5
- 150000003838 adenosines Chemical class 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 5
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 241000713297 Influenza C virus Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 4
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150117028 GP gene Proteins 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 101900330356 Influenza A virus Matrix protein 2 Proteins 0.000 description 3
- 241001500343 Influenzavirus C Species 0.000 description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 3
- 101000946720 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Carboxysome assembly protein CcmO Proteins 0.000 description 3
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 3
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 3
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MLQBTMWHIOYKKC-KTKRTIGZSA-N (z)-octadec-9-enoyl chloride Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(Cl)=O MLQBTMWHIOYKKC-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JDTQQKNQNHZAQM-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-3-(nitromethyl)benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=C(O)C(C[N+]([O-])=O)=C1 JDTQQKNQNHZAQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 2
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 2
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 2
- 108010031792 IGF Type 2 Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 102000010781 Interleukin-6 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100020880 Kit ligand Human genes 0.000 description 2
- 101710177504 Kit ligand Proteins 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102000019218 Mannose-6-phosphate receptors Human genes 0.000 description 2
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 2
- 101710132653 Protein M2 Proteins 0.000 description 2
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 2
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101800000385 Transmembrane protein Proteins 0.000 description 2
- 108091034135 Vault RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 2
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 210000002390 cell membrane structure Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N cystamine Chemical compound CCSSCCN OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940099500 cystamine Drugs 0.000 description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-M ethanimidate Chemical compound CC([O-])=N DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 2
- TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N methamphetamine hydrochloride Chemical compound Cl.CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000007026 protein scission Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N (2s,4s,5r,6r)-5-acetamido-2-{[(2s,3r,4s,5s,6r)-2-{[(2r,3r,4r,5r)-5-acetamido-1,2-dihydroxy-6-oxo-4-{[(2s,3s,4r,5s,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy}hexan-3-yl]oxy}-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-4-hydroxy-6-[(1r,2r)-1,2,3-trihydrox Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YSULOORXQBDPCU-UHFFFAOYSA-N 2-(trimethylazaniumyl)ethanehydrazonate;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CC(=O)NN YSULOORXQBDPCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- GZAJOEGTZDUSKS-UHFFFAOYSA-N 5-aminofluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(N)=CC=C21 GZAJOEGTZDUSKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000713838 Avian myeloblastosis virus Species 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 1
- ZUBDGKVDJUIMQQ-VVTNISDDSA-N CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]2CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@H](Cc2ccccc2)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]2CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@H](Cc2ccccc2)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O ZUBDGKVDJUIMQQ-VVTNISDDSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M Cetrimide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002491 Diethylaminoethyl-dextran Polymers 0.000 description 1
- 241001492221 Echovirus E12 Species 0.000 description 1
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 description 1
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 description 1
- 102000030168 Endothelin A Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010090549 Endothelin A Receptor Proteins 0.000 description 1
- 101800004490 Endothelin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102400000686 Endothelin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010017707 Fibronectin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241000150562 Hantaan orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100457913 Homo sapiens CDC25C gene Proteins 0.000 description 1
- 101000925493 Homo sapiens Endothelin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701027 Human herpesvirus 6 Species 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000014429 Insulin-like growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000010790 Interleukin-3 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038452 Interleukin-3 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 102000016551 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 101000962498 Macropis fulvipes Macropin Proteins 0.000 description 1
- 108010090665 Mannosyl-Glycoprotein Endo-beta-N-Acetylglucosaminidase Proteins 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 208000033826 Promyelocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000719193 Seriola rivoliana Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000008049 TAE buffer Substances 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 101150109894 TGFA gene Proteins 0.000 description 1
- 101710136739 Teichoic acid poly(glycerol phosphate) polymerase Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102100030742 Transforming growth factor beta-1 proprotein Human genes 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 101000654530 Tupaia virus (isolate Tupaia/Thailand/-/1986) Small hydrophobic protein Proteins 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010059722 Viral Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241001115400 Zaire ebolavirus Species 0.000 description 1
- ISXSJGHXHUZXNF-LXZPIJOJSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate;hydrochloride Chemical compound Cl.C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 ISXSJGHXHUZXNF-LXZPIJOJSA-N 0.000 description 1
- OCNZHGHKKQOQCZ-CLFAGFIQSA-N [(z)-octadec-9-enoyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC OCNZHGHKKQOQCZ-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical group N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWLVFNYSXGMGBS-UHFFFAOYSA-N ammonium bromide Chemical compound [NH4+].[Br-] SWLVFNYSXGMGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000000959 ampholyte mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002942 anti-growth Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002715 bioenergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960004753 citiolone Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- PLMFYJJFUUUCRZ-UHFFFAOYSA-M decyltrimethylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)C PLMFYJJFUUUCRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 125000002446 fucosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O1)C)* 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- VPKDCDLSJZCGKE-UHFFFAOYSA-N methanediimine Chemical compound N=C=N VPKDCDLSJZCGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013021 overheating Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010055896 polyornithine Proteins 0.000 description 1
- 229920002714 polyornithine Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- AHTFMWCHTGEJHA-UHFFFAOYSA-N s-(2,5-dioxooxolan-3-yl) ethanethioate Chemical compound CC(=O)SC1CC(=O)OC1=O AHTFMWCHTGEJHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 125000005630 sialyl group Chemical group 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000005925 vesicular stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
(57) Anotace:
Popisují se specifické vektory pro zavedení alespoň jednoho genu do cílových buněk některého organismu, přičemž tyto vektory mají následující komponenty: a) nevirový nosič přenášeného genu b) ligand, který je schopen specifické vazby na požadované cílové buňky c) protein umožňující fúzi vektoru s buněčnou membránou a sloužící k proniknutí vektoru do cytoplasmy cílové buňky d) přenášený gen. Tyto vektory najdou uplatnění především v genové terapii.
4-/9- 9
obsahující takové vektory a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká specifických vektorů pro zavedení genů do cílových buněk, které jsou velmi výhodné pro genovou terapii. Genovou terapií vložený cizí gen má nahradit nebo vyřadit z činosti defektní gen v cílových buňkách, nebo přinutit cílové buňky k produkci proteinu, který má profylaktické nebo terapeutické účinky.
Dosavadní stav techniky
Ze stavu techniky jsou dobře známy vektory pro použití v eukaryotických organismech, které byly zkonstruovány na virovém základě. Viry se specificky váží na povrchové proteiny cílových buněk, poté jsou pohlceny endozómem. Po proniknutí membránou endozómu vstupují do cílové buňky. Díky tomu lze použít virů jakožto nosičů k přenesení cizí genetické informace do buňky. Tyto způsoby a jejich variace, jakož i v nich použité viry jsou již známy, viz Hodgson, Bio/Technology 3, strana 222, (1995); Jolly, Cancer Gene Therapy 1, strana 51, (1994).
Podstatou této technologie je nahrazení části virového genomu požadovanými cizími geny za vzniku virového vektoru. Takovéto virové vektory zpravidla nej sou schopny normálního rozmnožování. K rozmnožování těchto virových vektorů jsou zapotřebí všechny geny kódující proteiny virového obalu a geny regulující expresi virového genomu.
Použití virových vektorů, zvláště pak u člověka, může přinést některé problémy. Existuje například nebezpečí rekombinace s divokými viry stejného druhu za vzniku pathogenních virů. Dále mohou proteiny virového obalu vyvolat v hostiteli imunitní reakci. V případě, že se v buňce virové
-2vektory integrují stejným způsobem jako odpovídající viry divokého typu, vzniká nebezpečí mutací genů na hostitelském chromozómu (aktivace neexprimovaných genů, poškození aktivních genů).
Další nevýhodou virových vektorů je jejich omezená přenosová kapacita, která ja daná malými rozměry samotného viru.
S ohledem na tato omezení a nebezpečí spojená s požitím virových vektorů byly již dříve zkoumány způsoby pro zavedení genetické informace do buněk bez použití virů. Podstatou těchto způsobů je, že se negativně nabitý gen rozpustí v negativně nabité buněčné membráně tak, aby byl gen pohlcen buňkou a mohl poté proniknout endozomální respektive lysozomální membránou. Toto rozpuštění genu v buněčné membráně je vedle fyzikálních (uzavření genových partikul!, osmotická, tepelná nebo elektrická modifikace buněčné membrány) nebo chemických (organická rozpouštědla, detergenty, enzymy) způsobů modifikace buněčné membrány umožněno vyvinutím vhodných nosičů této genetické informace. Takovými vhodnými nosiči jsou například lipozómy, kationtové polypeptidy, dendrimerní polymery nabo kationtové amfifilní látky (viz Behr, Bioconjugate Chem. 5, strana 382 (1994), Afione a další, Clin. Pharmakokinet. 28, strana 181 (1995) a Felgner, Adv. Drug Delivery Rev. 5, strana 163 (1990)).
Velký význam pro přenos genů mají zejména syntetické amfifilní kationty jako například dioleoyloxypropyltri-methyl ammoniumbromid (DOTMA) ve směsi s dioleoylfosfatitdylethenol aminem (DOPE) nebo lipopolyaminem (viz viz Behr, Bioconjugate Chem. 5, strana 382 (1994)).
Přebytek kladného náboje způsobený těmito amfifilními látkami respektive směsmi umožní vznik komplexu jinak negativně nabité DNA s negativně nabitým buněčným povrchem.
-3Amfifilní charakter tohoto nosiče pak vede k fúzi s buněčnou membránou.
Nicméně cílená transfekce pomocí těchto činidel je méně účinná než při použití virových vektorů. Navíc, jsou-li komplexy DNA a nevirového nosiče s přebytkem kladného náboje po aplikaci in vivo neutralizovány přirozenými látkami se záporným nábojem (proteiny, heparin atd.) dojde k oslabení vazby těchto komplexů na povrch buňky.
Podstata vynálezu
Vynález je založen na skutečnosti, že buňky mohou přijímat genetickou informaci endocytózou. Po endocytóze zpravidla dochází k enzymatickému odbourání cizích genů v endozómech respektive v lysozómech. Translačně exprimovat se mohou pouze geny, které se vyhnou tomuto enzymatickému rozkladu a podaří se jim proniknout endozomální respektive lysozomální membránou do cytoplazmy a/nebo do buněčného jádra. Při použití specifických vektorů podle vynálezu dojde k lokálnímu zvýšení koncentrace těchto vektorů u cílové buňky, že se některým vektorům se specifickými ligandy podaří proniknout dovnitř cytoplazmy
Předmětem vynálezu jsou specifické vektory pro zavedení alespoň jednoho genu do cílových buněk některého organismu, které sestávají z následujících komponent:
a) nevirový nosič přenášeného genu
b) ligand, který je schopen specifické vazby na požadované cílové buňky
c) protein umožňující fúzi vektoru s buněčnou membránou a sloužící k proniknutí vektoru do cytoplazmy cílové buňky
d) přenášený gen
-4Ve vektorech podle vynálezu jsou jednotlivé komponenty specifického vektoru udržovány pohromadě kovalentní vazbou nebo působením slabých vazebných interakcí (adsorbcí).
Nevirové nosiče genů (a) použité ve vektoru podle vynálezu jsou výhodně proteiny, polypeptidy, polysacharidy, fosfolipidy, kationické lipidy, glykoproteiny, lipoproteiny nebo lipopolyaminy, které se mohou díky svým pozitivně nabitým skupinám stát kationty. Vazby mezi nevirovým nosičem a pozitivně nabitými postranními řetězci je dosaženo pomocí kovalentní vazby nebo adsorbcí. Díky dodatečné adsorbční nebo kovalentní vazbě lipofilních postranních skupin může nosič získat další amfifilní vlastnosti.
Ve velmi výhodném provedení vynálezu je jako nevirového nosiče (a) použito albuminu nebo xylanu.
Ligandy (b) podle vynálezu se mohou specificky vázat na membrány zvířecích nebo lidských buněk.
Ve výhodném provedení vynálezu se může ligand (b) specificky vázat na buňky endothelu a je vybrán ze skupiny tvořené monoklonálnimi protilátkami se specifitou k endotheliálním buňkám, nebo jejich fragmenty, glykoproteiny, glykolipidy nebo polysacharidy obsahujícími sacharidové řetězce zakončené manózou, cytokiny, růstovými faktory, adhezivními molekulami a ve velmi výhodném provedení vynálezu obalovými glykoproteiny virů, které mají afinitu k endotheliálním buňkám.
V jiném výhodném provedení vynálezu se může ligand (b) specificky vázat na buňky hladkého svalstva a je vybrán ze skupiny tvořené monoklonálnimi protilátkami se specifitou k aktinu nebo buněčným memránovým receptorům, nebo jejich fragmenty, růstovými faktory nebo ve velmi výhodném provedení vynálezu obalovými glykoproteiny virů, které mají afinitu k hladkým svalovým buňkám.
-5V jiném výhodném provedení vynálezu se může ligand (b) specificky vázat na makrofágy a/nebo na lymfocyty a je vybrán ze skupiny tvořené monoklonálními protilátkami se specifitou k membránovým antigenům na povrch makrofágů a/nebo lymfocytů, intaktními imunoglobuliny nebo Fc fragmenty polyklonálních nebo monoklonálních protilátek specifických k membránovým a/nebo lymfocytů, cytokiny, růstovými proteiny, lipidy nebo polysacharidy obsahujícími sacharidové řetězce zakončené manózou a nebo ve velmi výhodném provedení vynálezu obalovými glykoproteiny virů. Zvláště výhodný je pak protein HEF z influenza-C viru (chřipkový virus typu C) mutovaný na nukleotidové pozici 872 nebo štěpný produkt proteinu HEF influenza-C viru, který obsahuje katalytickou triádu serin-71, histidin-368 nebo 369 a kyselinu asparagovou 261.
antigenům makrofágů faktory, peptidy,
V jiném výhodném provedení vynálezu se může ligand (b) specificky vázat ke gliovým buňkám a je vybrán ze skupiny tvořené protilátkami se specifitou k membránovým strukturám gliových buněk nebo jejich fragmenty. Do této skupiny dále patří adhezivní molekuly, peptidy, proteiny, lipidy nebo polysacharidy obsahující sacharidové řetězce zakončené manózou, růstové faktory a ve zvláště výhodném provedení vynálezu obalové glykoproteiny virů s afinitou ke gliovým buňkám.
V dalším výhodném provedení vynálezu se může ligand (b) specificky vázat na krvetvorné buňky a je vybrán ze skupiny tvořené protilátkami se specifitou k některému receptoru pro faktor kmenových buněk, k receptoru pro IL-1 (zvláště pak k receptoru typu I nebo II), k receptoru pro IL-3 (zvláště pak k receptoru typu a nebo β), k receptoru pro IL-6 nebo GM-CSF. Do této skupiny dále patří intaktní imunoglobuliny nebo Fc fragmenty protilátek s výše uvedenou specifitou a dále pak růstové faktory jako SCF, IL-1, IL-3, IL-6 nebo GM-SCF, jakož i jejich fragmenty schopné vazby na příslušné receptory.
-6V jiném výhodném provedení vynálezu se může ligand (b) specificky vázat na leukemické buňky a je vybrán ze skupiny tvořené protilátkami, fragmenty protilátek, imunoglobuliny nebo Fc-fragmenty, které vykazují specifickou vazbu k membránovým strukturám na povrchu leukemických buněk jako jsou například CD13, CD14, CD15, CD33, CAMAL, Sialosyl-Le, CD5, CDle, CD23, M38, IL-2 receptory, T-buněčné receptory, CALLA nebo CD19, jakož i růsotvé faktory či jejich fragmenty nebo retiniody.
V jiném výhodném provedení vynálezu se může ligand (b) specificky vázat na buňky infikované virem a je vybrán ze skupiny tvořené protilátkami, fragmenty protilátek, intaktními imunoglobuliny nebo Fc-fragmenty, které vykazují specifickou vazbu k virovým antigenům, které se po infekci tímto virem exprimují na povrchu infikované buňky.
Konečně, specifickým ligandem (b) podle vynálezu může být takový ligand, který se specificky váže na buňky bronchiálního epitelu, jaterní sinusoidální buňky, jaterní buňky. Tento ligand je výhodně vybrán ze skupiny tvořené transferinem, asialoglykoproteiny jako asialoorosomukoidem, neoglykoproteinem, galaktózou, inzulínem, nebo peptidy, proteiny, lipidy nebo polysacharidy nesoucími manéžové zbytky, dále pak intaktními imunoglobuliny nebo Fc-fragmenty, které se specificky vážou na cílové buňky a ve zvláště výhodném provedení vynálezu obalovými glykoproteiny virů s afinitou k cílovým buňkám.
Ve výhodném provedení vynálezu je protein umožňující fúzi vektoru s buněčnou membránou (c) vybrán ze skupiny tvořené hemaglutininem influenza-A nebo B viru, komponentou HA2 hemaglutininu influenza-A nebo B virů jakož i jejich peptidovými analogy, M2 proteinem influenza-A viru, proteinem HEF influenza-C viru, transmembránovými proteiny filovirů jako jsou virus Marburg nebo Ebola, transmembránovými glykoproteiny viru vztekliny, vesikulární stomatitidy, Semliki Forest viru,
-Ί viru klíščové encefalitidy, penetračním proteinem viru HIV, viru Sendai (zvláště pak jeho F1 komponentou) nebo viru respirační syncytialidy (zvláště pak jeho komponentou gp37), jakož i fragmenty těchto virových proteinu nebo transmembránových glykoproteinů, které obsahují odpovídající fúzogenní peptidy.
Ve výhodném provedení vynálezu je přenášený gen (d) ve formě plazmidu.
Vektory podle vynálezu mohou být použity jako léčiva nebo jako součásti léčiv, přičemž ve výhodném provedení vynálezu jsou tyto vektory použity k přípravě léčiva pro interavenózní, intraarteriální, intraportální, intrakraniální, intrapleurální, intraperitoneální nebo lokální zavedení požadovaného genu do určité cílové buňky.
Parenterálním, výhodně pak intravenózním nebo intraarterilním podáním vektorů podle vynálezu je dosaženo zvýšení koncentrace těchto vektorů na povrchu cílové buňky, čímž se může zvýšit i transfekční rychlost této buňky. Této výhody podle vynálezu je dosaženo synergickým působením jednotlivých, navzájem spojených komponent vektoru podle vynálezu.
Specifické ligandy podle vynálezu vykazují vysokou specifitu pro zvolené cílové buňky. Ve výhodném provedení vynálezu se jedná o obalové proteiny viru, který je specifický pro tento druh buněk. Konkrétní obalový virový protein se vybírá podle požadované cílové buňky. Tím, že se tyto specifické ligandy, zvláště pak virové obalové proteiny, navážou na nosič požadovaného genu, je dosaženo toho, že se požadovaný gen pomocí těchto specifických nosičů naváže na povrch cílové buňky a je na této buňce přítomen ve vysoké koncentraci .
Nevirové nosiče genetické informace jsou ve výhodném provedení vynálezu takové sloučeniny, o kterých je známo, že
-8mají v krevním oběhu dlouhý poločas rozpadu. Díky této dlouhé periodě, se zvyšuje expozice cílových buněk vysoce koncentrovaným vektorem podle vynálezu, čímž je dosaženo maximální možné vazby vektoru na povrch cílových buněk pomocí specifických ligandů. Ve zvláště výhodném provedení vynálezu nesou tyto nevirové nosiče kladný náboj, takže může dojit k tvorbě komplexů se záporně nabitou DNA.
Dále obsahují vektory podle vynálezu proteiny (fúzogenní) umožňující penetraci endozomální nebo lysozomální membrány a průnik vektoru do cytoplazmy hostitelské buňky. Fúzogenní proteiny podle vynálezu jsou takové proteiny, které umožní vstup vektoru do cytoplazmy cílové buňky. Takové fúzogenní proteiny jsou známy především u virů.
Přenášený gen může být ve formě nukleové kyseliny kódující požadovaný gen, který je doplněn odpovídajícími řídícími oblastmi jako jsou promotory a tak podobně. Ve výhodném provedení vynálezu je přenášený gen ve formě plazmidu.
Nevirové nosiče vhodné pro použití podle vynálezu jsou samy o sobě již známy. Nevirové nosiče jsou přehledně popsány, viz Cotten a další, Curr. Biol. 4, strana 705 (1993); Behr, Acc. Chem. Res. 26, strana 274 (1993); Felgner, Adv. Deliv. Rev. 5, strana 163 (1990); Behr, Bioconjugate Chem. 5, strana 382 (1994); Ledley, Hum. Gene Ther. 6, strana 1129 (1995). Ve výhodném provedení vynálezu jsou použity lipozómy, kationtové lipozómy. Tyto lipozómy lze připravit ze směsi kationtových lipidů jako jsou stearylaminy a neutrálních fosfolipidú, nebo ze směsi dioktadecyldimethyl- amonium bromidu (DDA) a neutrálních fosfolipidú. Dále je ve výhodném provedení vynálezu možno použít Ν [1(2,3,-dioleyloxy)propyl]-Ν,Ν,N-trimethylamonium bromid (DOTMA), 3S[N-(N',N'-dimethylamino-ethan)-carbamoyl] cholesterol (DC-Chol), 1,2,-Dimyristyloxy-propyl-3-dimethyl-hydroxyethyl-9amoniumbromid (DMRIE) , dimethyldioktadecyl- amoniurrtbromid (DDAB), 1,2,-Dioleoyloxy-3-(trimethylamonio)- propan (DOTAP).
Jako nevirové nosiče mohou být rovněž použity kationtové polypeptidy a proteiny například polylysin, protaminsulfát, histony, polyornithin, polyarginin nebo kationtové amfifilní lipopolyaminy jako například dioctadecylamidoglycylspermin (DOGS), dipalmitoylfosfati- dylethanolamidospermin (DPPES), N-t-Butyl-N'- tetradecyl- 3-tretradecyl- aminopropionamid (diC14-amidin), DoTB, ChoTB, DoSC, ChoSC, LPLL, DEBDA, DTAB, TTAB, CTAB nebo TMAG nebo samčí kationtové polysaccharidy jako například diethylaminoethyldextran jakož i kationtové organické polymery jako je například polybren.
V dalším výhodném provedení vynálezu mohou být pro zvýšení účinosti transfekce kationtové lipidy a lipopolyaminy (v komplexu s DNA) doplněny příměsí neutrálních fosfolipidu jako je dioleoylfosfatidylathanolamin (DOPE).
Ve zvláště výhodném provedení vynálezu jsou nevirové nosiče sloučeniny, jejichž základními stavebními složkami jsou kationtové, nebo kationty tvořící, polypeptidy, proteiny, glykoproteiny, lipoproteiny, nebo polysacharidy rozpustné ve vodě, které zavedením doplňkové lipofilní skupiny získají amfifilní charakter. Takovými vhodnými základními stavebními složkami jsou npředevším ve vodě rozustné nosiče jako jsou proteiny, glykoproteiny, lipoproteiny nebo polysacharidy. V obzvláště výhodném provedení vynálezu je takovým nosičem albumin nebo xylan.
Kationtové skupiny jsou takové strukturní jednotky s kladným nábojem, které se mohou vázat na základní sloučeninu. Výhodně se jedná o skupiny, které mají za fyziologických podmínek kladný náboj jako třeba amino-, guanidino-, nebo imidazolylové skupiny. Takovéto kationtové skupiny lze na základní sloučeninu navázat známými způsoby. Například aminioskupinu lze navázat pomocí diaminů jako je napřijklad
-10ethylen diamin nebo hexamethylendiamin. Volné aminoskupiny mohou být také methylovány pomocí methyloididu, nebo mohou podstoupit reakci s jednostranně chráněným glutaraldehydem (chráněno Girardovým T činidlem, Roser, Dizertační práce, Bazilej, 1990).
Vložení guanidinové nebo imidazolové skupiny lze dosáhnout reakcí odpovídající bazické aminokyseliny následujícím způsobem. Výhodné je navazování na albumin pomocí glutaraldehydu (viz Roser, Dizertační práce, Bazilej, 1990).
Množství přidávaných kationtových skupin závisí na velikosti záporného náboje v daném genu, respektive v sekvenci nukleotidů, s nimiž má tento nosič vytvořit komplex. Ve výhodném provedení vynálezu je celkový náboj nosiče neutrální nebo kladný.
Za lipofilní skupiny lze považovat libovolné funkční skupiny, které vedou ke zvýšení rozpustnosti v organických rozpouštědlech, jako je například oktanol.
Lipofilní skupiny jsou vhodné například nenasycené mastné kyseliny jako je kyselina olejová, která je použitelná ve formě esterů, chloridu kyseliny olejové a anhydridu.
Zavádění lipofilních skupin se provádí známými způsoby konjugace, jako například acylací, (tzn. substitucí chloridů, anhydridů a esterů kyselin primárními a sekundárními aminy, viz Seebach, Agnew. Chemie 81, strana 690, (1969) a Satchell,
Quart. Rev. 19, strana 160 (1963)).
Množství zavedených lipofilnch skupin závisí na lipofilním charakteru základní sloučeniny.
Jako ligandů se specifickou vazbou k požadovaným cílovým buňkám lze použít velké množství chemických struktur. Výběr konkrétního ligandů se řídí požadovanou cílovou buňkou, pro kterou má být specifický připravovaný vektor. Zpravidla se jedná o proteiny, polypeptidy nebo glykoproteiny, které mají
-11vysokou specifickou afinitu k součástem membrán na vybrané cílové buňce. Podle vynálezu mohou být, v závislosti na cílové buňce, použity následující ligandy:
1) Ligandy pro endotheliální buňky
a) nevirové ligandy
Jako ligandy slouží látky, které se přednostně vážou na vnější povrch endotheliálních buněk, ve výhodném provedení vynálezu pak proliferujících endotheliálních buněk. Takové látky mohou být monoklonálním protilátky se specifitou k k membránovým strukturám endotheliálních buně, nebo jejich fragmenty, viz například Burrows a další (Farmac. Ther. 64, strana 155 (1394)); Hughes a další (Cancer Res. 49, strana
6214 (1989)) a Maruyama a další, (PNAS-USA 87, strana 5744 (1990) . Do této skupiny patří zvláště pak protilátky proti receptorům vegf.
Je výhodné použít myší monoklonální protilátky v jejich humanizované podobě. Humanizaci protilátek je možné uskutečnit podle prací Winter a další (Nátuře 349, strana 293 (1991)) a Hoogenbooms a další (Rev. Tr. Transfus. Hemobiol. 36, 19 (1993). Fragmenty protilátek se připraví způsobem známým ze stavu techniky, viz například Winter a další, Nátuře 349, strana 293 (1991); Hoggenbooms a další,
Rev.
Hemobiol. 36, strana 19 (1993); Girol, Mol.
strana 1379 (1991 ) nebo Huston a další,
Immunol.10, strana 195 (1993).
Tr. Transfus. Immunol. 28, Intern. Rev.
Mezi ligandy podle vynálezu patří dále všechny účinné látky, které se mohou vázat na membránové struktury nebo membránové receptory endotheliálních buněk. Do této skupiny látek patří například kinin a jeho analogy nebo homology, které jsou schopny vazby na kininové receptory, dále látky, které obsahují manózu na konci sacharidového řetězce, dále pak růstové faktory nebo jejich fragmenty respektive části jejich sekvencí, které se exprimují na receptorech a jsou vázány
-12endotheliálními buňkami. Takovými sloučeninami jsou například PDGF, bFGF, VEGF, TGFp (Pusztain a další, J. Pathol. 16 9, strana 191, (1993)). Dále je do této skupiny možno přiřadit adhezivní molekuly, které se vážou na aktivované a/nebo proliferující endotheliální buňky. Takovéto adhezivní molekuly jako například SLex, LFA-1, MAC-1, LECAM-1 nebo VLA-4 jsou již známy ze stavu techniky (viz Augistin-Voss a další, J. Cell. Biol. 119, strana 483 (1992); Pauli a další, Cancer Metast.
Rev. 9, strana 175 (1990); Honn a další, Cancer Metast.
Rev.ll, strana 353 (1992)).
b) Ligandy virového původu
Ligandy virového původu podle vynálezu jsou především obalové glykoproteiny virů s afinitou k endotheliálním buňkám. K takovým virům náleží například:
Filoviry, například virus Marburg: jeho obalový glykoprotein GP (GlycoProtein) a druhý glykoprotein sGP (second GlycoProtein) jsou popsány, viz Kiley a další, J. General Virology 69, strana 1957 (1988); Will a další, J. Virol.
67, strana 1203 (1993) ; Schnittler a další, J. Clin.
Invest. 91, strana 1301 (1993); Feldmann a další, Virus
Res. 24,1 (1992) virus Ebola: rovněž jeho obalové proteiny GP a sGP jsou posány, viz Schnittler a další, J. Clin. Invest. 91, strana 1301 (1993); Volchov a další, Virol. 214, strana
421 (1995); Jahrling a další, Lancet 335, strana 502 (1990), Feldmann a další, Arch. Virol. 7, strana 81 (1993); Geisbert a další, J. Comp. Path.106, strana 137 (1992) cytomegalovirus: zvláště jeho gB-protein (Waldman a další, Transplant. Proč. 27, strana 1269 (1995); Sedmak a další, Transplant. 58,1379 (1994); Sedmak a další, Archives
| Virol. | 140, strana | 111 (199Ξ | i) ; Koskines, | Transplant. 56, | ||
| strana | 1103 | (1993) | ; Scholz | a další, Hum. Immunol. 35, | ||
| strana | 230 | (1992), | Alcami | a další, J. | Gen. Virol. 72, | |
| strana | 2765 | (1991 : | i; Po1and | a další, J. | Infect. | Dis.162, |
| strana | 1252 | (1990 | ) ; Ho a | další, J. | Infect. | Dis.150, |
| strana | 956 | (1984) ; | Spaete | a další, J. | Virol. | 64, 2922 |
| (1990) |
herpes simplex-virus typu I: viz Etingin a další, PNAS 90, strana 5153 (1993); Key a další, Lab. Invest. 68, strana
645 (1993); Kubota a další, J. Immunol.138, strana 1137 (1987) virus HIV-1: viz Scheylovitova a další, Arch. Virol.140, strana 951 (1995); Lafon a další, AIDS 8, strana 747 (1994); Re a další, Microbiologica 14, strana 149 (1991) virus spalniček: viz Mazure a další, J. Gen. Virol. 75, strana 2863 (1994) virus Hantaan: viz Pensiero a další, J. Virol. 66, strana 5929 (1992); Zhu, Chinese Med. J. 68, strana 524 (1988)
Alfaviry, jako je Semliki Forest-Virus: viz Jakob, J. Med. Microbiol. 39, strana 26 (1993) virus epidemické haemorrhagické horečky: viz Yi, Chinese J. Pathol. 21, strana 177 (1992)
Poliovirus: viz Condere a další, Virol.174, strana 95 (1990))
Enteroviry: jako například Echo 9, Echo 12, Cochsackie B3 viz Kirkpatrick a další, Am. J. Pathol.118, strana 15 (1985) .
-142) Ligandy vhodné pro hladké svalové buňky a) Nevirové ligandy
Jako ligandů podle vynálezu může být použito například protilátek připravených proti membránovým strukturám hladkých svalových buněk, nebo jejich fragmentů. Do této skupiny patří:
protilátka 10F3(Printseva a další, Exp. Cell Res.169, strana 85(1987); American J. Path.134, strana 305(1989) protilátky proti aktinu protilátky proti angiotensinovým receptorům typull protilátky proti receptorům pro růstové faktory nebo protilátky namířené například proti
| proti | receptorům | pro | EGF |
| proti | receptorům | pro | PDGF |
| proti | receptorům | pro | FGF |
proti receptorům pro endothelin A
Dále mezi tyto ligandy podle vynálezu patří všechny účinné látky, které se mohou vázat na membránové struktury nebo membránové receptory na povrchu hladkých svalových buněk (přehled takových látek viz Pusztai a další, J. Pathol.169, strana 191 (1993), Harris, Current Opin. Biotechnol. 2, strana 260 (1991). Patří sem například růstové faktory nebo jejich fragmenty respektive jejich částečné sekvence, které se vážou na receptory exprimované hladkými svalovými buňkami jako jsou například tyto faktory:
- PDGF
- EGF
- TGFS
TGFa
-15- FGF
Endothelin A
b) Ligandy virového původu
Mezi ligandy virového původu podle vynálezu patří především obalové glykoproteiny virů s afinitou k hladkým svalovým buňkám. K takovým virům patří například Cytomegalovirus (viz Speir a další, Science 265, strana 391 (1994).
3) Výběr ligandů pro makrofágy a lymfocyty
a) Nevirové ligandy
Mezi ligandy podle vynálezu, které se specificky vážou na povrch makrofágů a lymfocytů patří protilátky, nebo jejich fragmenty, připravené proti membránovým strukturám imunitních buněk, viz například Powelson a další, Biotech. Adv.ll, strana 725 (1993).
Dále mezi takové ligandy patří monoklonální nebo polyklonální protilátky nebo protilátkové fragmenty, které se svými konstantními doménami vážou na Fc-g nebo Fc-e receptory imunitních buněk, viz Rojanasakul a další, Farm. Res.11, strana 1731 (1994) . Ve výhodném provedení vynálezu lze použít Fc-fragment lidských polyklonálních imunoglobulinů. Takové Fc-fragmenty lze připravit například způsobem podle prací Haupt a další, Kliň. Wschr. 47, strana 270 (1969); Kranz a další, Dev. Biol. Standard 44, strana 19 (1979); Fehr a další, Adv. Clin. Farmac. 6, strana 64 (1974); Menninger a další, Immunochem.13, strana 633 (1976).
Dále mezi tyto ligandy patří všechny látky, které se vážou na membránové struktury nebo membránové receptory na vnějším povrchu imunitních buněk. Mezi takové látky patří například cytokiny IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-G, IL-10, TNFa, GM-CSF, M-CSF dále růstové faktory jako EGF, TGF, FGF, IGF nebo PDGF, nebo jejich fragmenty respektive částečné sekvence,
-16které jsou schopny vazby na receptory exprimované na povrchu těchto buněk.
Mezi ligandy pro použití podle vynálezu patří například takové, které se vážou na receptor pro manóza 6-fosfát na povrchu makrofágú ve slezině, játrech, plicích a jiných tkáních. Tyto membránové struktury a ligandy jsou přehledne popsány v práci Perales a další, Eur. J. Biochem. 226, strana 255 (1994) .
b) Ligandy virového původu
Mezi ligandy virového původu podle vynálezu patří především obalové glykoproteiny virů s afinitou k lymfocytům a/nebo makrofágum. K takovým virům infikujícím makrofágy patří například:
HIV-1, zvláště pak kmeny s mutacemi ve V3-regionu proteinu gpl20, což vede ke zvýšené afinitě k makrofágum, viz například Kim a další, J. Virol. 69, strana 1755 (1995);
Valentin a další, J. Virol. 68, strana 6684 (1994);
Collin a další, J. Gen. Virol. 75, strana 1597 (1994);
Shoida a další, PNAS 89, strana 9434 (1992); Chesebro a další, J. Virol. 66, strana 6547, (1992), Shaw a další, J. Virol. 66, strana 2577 (1992); Liu a další, J. Virol. 64, strana 6148 (1990); Broder a další, PNAS 92, strana
9004 (1995); Cangue a další, Virol. 208, strana 779 (1995)
HIV-2 viz například: Valentin a další, J. Virol. 68, strana 6684 (1994)
Hantaviry, například Punmalavirus, viz Temony a další, Virol. 206, strana 8 (1995)
Cytomegalovirus viz například: Fajac a další, Am. J. Resp. Crit. Care Med.149, strana 495(1994); Kondo a další, PNAS
-1791, strana 11879 (1994) ; Ibanez a další, J.
Virol.65,6581(1991)
Virus respirační syncytialidy, viz například Becker a další, Am. J. Resp. Cell Mol. Biol.6, strana 369 (1992); Roberts, Infect. Immun.35, strana 1142(1982)
Herpes simplex-Virus, viz například Plaeger-Marshall a další, Pediatrie Res.26, strana 135(1989)
Filoviry, viz například Schnittler a další, J. Clin. Invest.91, strana 1301(1993); Zaki, Eur. Conf. Tropical Med. p2 (A22), Hamburg, Germany (1995).
zi viry infikující lymfocyty patří například:
Varicella-Zoster-Virus (VZV), který infikuje především T-buňky, viz například Moffat a další, J. Virol. 69, strana 5236 (1995)
Herpetický virus 6 (HHV-6), který infikuje především
T-buňky, viz například Takahashi a další, J. Virol. 63, strana 3161 (1989); Lusso a další, J. Exp. Med.181, strana 1303 (1995); Frenkel a další, Adv. Exp. Med. Biol.
278, strana 1 (1990)
Virus vztekliny, obalový glykoprotein tohoto viru se váže především na buňky TH2, viz například Martinez-Arends a další, Clin. Immunol. Immunopath. 77, strana 177 (1995)
HIV-1, glykoprotein gpl20 viru HIV-1 se váže především na molekuly CD4 na T-buňkách, viz například Heinkelein a další, J. Virol. 69, strana 6925 (1995)
HTLV-II, který infikuje především B-buňky, viz například Casoli a další, Virol. 206, strana 1126 (1995)
HTLV-I, který infikuje především T-buňky, viz například Persaud a další, J. Virol. 69, strana 6297 (1995); Boyer a další, Cell Immunol.129, strana 341 (1990)
-18Chřipokvé viry typu C, které se vážou pomocí hemaglutinin-esterázy-fúzogenního proteinu (HEF protein) na N-acetyl-9-S-acetylneuraminovou kyselinu (Neu 5,9 Ac) , která se vyskytuje přednostně na B-lymfocytech, méně nebo vůbec ne na T-lymfocytech, viz například Herrler a další, EMBO-J. 4, strana 1503 (1985) ; Kamerling a další, BBA
714, strana 351 (1982); Rogers a další, J. Biol. Chem.
261, strana 5947 (1986)
Chřipokvé viry typu C, které mají mutaci na nukleotidové pozici 872 (ta kóduje 284 aminokyselinu v sekvenci proteinu HEF) například záměnu threoninu za isoleucin. Povrchový protein s touto mutací má výrazně vyšší afinitu k receptorům pro N-acetyl-9-S-acetyl-neuraminovou kyselinu, viz například Szepanski a další, Virol.188, strana 85 (1992)
Štěpné produkty proteinu HEF chřipkového viru C, které obsahují strukturu schopnou vazby na receptor pro N-acetyl-9-S-acetylneuraminovou kyselinu. Takové struktury jsou definovány katalytickou triádou serin-71, histidin 368 nebo 369 a a kyselina asparagová 261, viz Pleschka a další, J. Gen. Virol. 76, strana 2529 (1995)
Virus Epstein-Barrově (EBV), který infikuje především B-buňky viz Miller-Yale, J. Biol. Med. 55, strana 305 (1982); Garzelli a další, Immunol. Lett. 39, strana 277 (1994); Counter a další, J. (1994); Wang a další, J. Virol
Herpes simplex virus typu 2 především T-buňky viz Kučera
Virol. 68, strana 3410 62, strana 4173 (1988) (HSV-2), který infikuje a další, Viral Immun. 2, strana 11 (1989)
Virus spalniček, viz Jacobson a další, J strana 351 (1982)
Gen. Virol. 63,
-194) Výběr ligandú podle vynálezu pro gliové buňky
a) Nevirové ligandy
Mezi vhodné ligandy podle vynálezu patří takové látky, které se vážou na vnější povrch gliových buněk. Jsou to například protilátky nebo protilátkové fragmenty připravené proti membránovým strukturám gliových buněk, viz Mirsky a další, Cell and Tissue Res. 240, strana 723 (1935); von Coakham a další, Prog. Exp. Tumor Res. 29, strana 57 (1985) a McKeever a další, Neurobiol. 6, strana 119 (1991). Dále k takovým látkám patří nervové adhezivní molekuly jako například N-CAM, zvláště pak jeho polypeptidový řetězec C, viz Nybroe a další, J. Cell Biol.101, strana 2310 (1985) .
Dále mezi tyto látky patří všechny účinné látky, které se vážou na membránové struktury nebo membránové receptory gliových buněk. Takovými jsou například látky, které nesou na konci molekuly manózu a vážou se na receptor pro manóza6-fosfát, viz Perales a další, Eur. J. Biochem. 226, strana 225 (1994), inzulín a inzulínu podobný růstový faktor, viz
Merrill a další, J. Clin. Endocrin. Metab. 71, strana 199 (1990)), PDGF (Ek a další, Nátuře 295, 419 (1982), a příslušné fragmenty těchto růstových faktorů, které jsou schopny vazby na své receptory.
b) Ligandy podle vynálezu virového původu
Mezi ligandy podle vynálezu virového původu patří především obalové glykoproteiny virů s afinitou ke gliovým buňkám. K takovým virům infikujícím gliové buňky patří například:
- Virus HIV-1 subtyp JRF1, viz Sharpless a další, J. Virol.
66, strana 2588 (1992)
Herpes simplex-virus typu I, viz Xie a další, Eye Scišnce (Yen Ko Hsueh Pao) 10, strana 67 (1994) ; Genis a další,
J. Exp. Med.176, strana 1703 (1992)
-205) Výběr ligandů podle vynálezu pro krvetorné buňky
a) Nevirové ligandy
Mezi vhodné ligandy podle vynálezu patří například protilátky nebo protilátkové fragmenty připravené proti membránovým receptorům exprimovaným především na málo diferencovaných krevních buňkách.
Popsány jsou například protilátky proti následujícím receptorům:
receptor pro faktor kmenových buněk
| receptor | pro | IL-1, | typu | I |
| receptor | pro | IL-1, | typu | II |
| receptor | pro | IL-3, | typu | a |
| receptor | pro | IL-3 , | typu | b |
| receptor | pro | IL-6 | ||
| receptor | pro | GM-CSF |
Dále mezi tyto ligandy patří monoklonální nebo polyklonální protilátky, které se svoji konstantní oblastí vážou na Fc-g receptory na povrchu imunitních buněk, viz Rojanasakul a další, Pharm. Res. 11, strana 1731, (1994).
Dále mezi tyto ligandy patří látky, které se vážou na membránové struktury nebo membránové receptory na vnějším povrchu nediferencovaných krevních buněk nebo buněk v počátečních stádiích diferenciace. Mezi takové látky patří například růstové faktory jako je SCF, IL-1, IL-3, IL-6,
GM-CSF, nebo jejich fragmenty respektive jejich částečné sekvence, které jsou schopny vazby na receptory exprimované krvetvornými buňkami.
-216) Nevirové ligandy pro použití v leukemických buňkách a v buňkách tumorů
Mezi vhodné ligandy podle vynálezu, které se vážou na vnější povrch leukemických buněk patří protilátky nebo fragmenty protilátek připravené proti membránovým strukturám leukemických buněk. Takových protilátek je již připraveno velké množství pro diagnostické a terapeutické účely, přehledy viz Kristensen, Danish Medical Bulletin 41, strana 52 (1994);
Schranz, Therapia Hungarica 38, strana 3 (1990); Drexler a další, Leuk. Rex.10, strana 279 (1986); Naeim, Dis. Markers 7, strana 1 (1989); Stickney a další, Current Op. Oncol. 4, strana 847 (1992) ; Drexler a další, Blut 57, strana 327 (1988); Freedment a další, Cancer Invest. 9, strana 69 (1991).
Jako ligandy pro jednotlivé typy leukémie jsou vhodné následující protilátky nebo jejich fragmenty schopné vázat antigen:
Buňky Membránový antigen Monoklonální protilátka popsaná
AML CD13
CD14
CD15
CD33
CAMAL
Kaneko a další, Leuk. Lymf.14, strana 219 (1994)
Muroi a další, Blood 79, strana 713(1992)
Balí, Bone Marrow Transplnt.3, strana 387 (1988)
Guyotat a další, Bone Marrow Transplant.6, strana 385(1990)
Jurcic a další, Leukemia 9, strana 244(1995) Caron a další, Cancer 73, strana 1049 (1994)
Shellard a další, Exp. Hematol. 19, strana 136 (1992)
-22Buňky Membránový antigen Monoklonální protilátka popsaná
Sialosyl-Le
B-CLL CD5
CDlc
CD23
T-CLL CD33 receptory IL-2 receptory T-buněk
ALL CALLA
CD19
Non-Hodgkin
Lymfomy
Muroi a další, Blood 79, strana 713 (1992)
Kaminski a další, Cancer Treat. Res. 38, strana 253(1988)
Tassone a další, Immunology Lett.39, strana 137 (1994)
Orazi a další, Eur. J. Haematol. 47, strana 28, (1991)
Idiotypy a izotypy membránových imunoglobulínů, Schroeder a další, Immunol. Today 15, strana 289 (1994)
Imai a další, J. Immunol.151, strana 6470 (1993)
Waldmann a další, Blood 82, strana 1701, (1993)
Morishima a další, Bone Marrow Transplant.il, strana 255(1993)
Anderson a další, Blood 80, strana 84(1993
Lymfoma Okazaki a další, Blood 81, strana 84(1993)
Mezi nevirové ligandy pro tumorové buňky patří protilátky a jejich fragmenty připravené proti membránovým strukturám tumorových buněk, viz přehled Sedlaček a další, Contrib. to Oncol. 32, Karger Verlag, Můnchen (1988) a Contrib. to Oncol. 43, Karger Verlag, Můnchen (1992)
Další příklady představují protilátky proti:
-23antigenu Sialyl Lewis, viz Ohta 44, strana 35 (1995) a další,
Immunol. Lett.
peptidům, které se vyskytují na povrchu tumorů, a které jsou rozeznávány T-buňkami, viz Maeurer a další, Melanoma Res. 6, strana 11 (1996); Coulie, Stem Cells 13, strana
393 (1995); Stoh a další, J. Biochem, 119, strana 385 (1996), Slingluff a další, Curr. Opin. Imunol. 6, strana 733 (1994) proteinům exprimovaným onkogeny, viz Cheever a další, Immunol. Rev.145, strana 33 (1995); Talarico a další, PNAS 87, strana 4222 (1990) gangliosidům jako jsou GD3, GD2, GM2, 9-0-acetyl GD3, fukosyl GM1, viz Helling a další, Cancer Res. 55, strana 2783 (1995); Linvingston a další, Vaccin 11, strana 1199 (1993); Vaccin 12, strana 1275 další, Cancer Immunol. Immunother.
Gnewuch a další, Int, Jennemann a další, J.
(1994); Livingston a
29, strana 179 (1989); J. Cancer 8, strana 125 (1994);
Biochem.115, strana 1047 (1994);
Ravindranath a další, Cancer Res. 49, strana 3891 (1989) antigenům krevních skupin, viz Springer a další, Cancer 37, strana 169 (1976); Carbohydrate Res.179, strana 271 (1988); Molec. Immunol. 26, strana 1 (1989); Fung a další, Cancer Res. 50, strana 4308 (1990) antigenům polymorfního epitelového mucinu, viz PEM;
Burchell a další, Cancer Surreys 18, strana 135 (1993) antigenům Heat-Shock proteinů, viz Blackere a další, J.
Immunother.14, 352 (1993).
Myší monoklonální protilátky jsou výhodně použity v humanizované podobě. Způsoby humanizace protilátek, jakož i příprava fragmentů protilátek jsou známy ze stavu techniky.
-24Mezi vhodné ligandy podle vynálezu dále patří všechny účinné látky, které se vážou na membránové struktury nebo membránové receptory na leukemických nebo tumorových buňkách. Takovými látkami jsou například steroidní hormony nebo peptidové hormony, dále růstové faktory nebo jejich fragmenty respektive částečné sekvence, které jsou schopny vazby na receptory exprimované na leukemických nebo tumorových buňkách. Tyto růstové faktory jsou přehledně popsány v Cross a další, Cell 64, strana 271, (1991); Aulitzky a další, Drugs 48, strana 667, (1994); Moore, Clin. Cancer Res. 1, strana 3, (1995); van Kooten a další, Leuk. Lymph. 12, strana 27, (1993). Příklady vhodných růstových faktorů:
IFNa pro Non-Hodgkinovy lymfomy
IL-2 zvláště pro leukemie T-buněk
FGF monocytární, myeloidní, erythroidní a megakaryoblastické leukémie T-buněk
TGFP pro leukémie
Retinoidy, například kyselina retinová pro akutní promyelocytární leukemie.
7) Nevirové ligandy pro infikované buňky
Pro terapii infekčních onemocnění jsou vhodné jako ligandy protilátky nebo jejich fragmenty, připravené proti původcům této infekce. U virových infekcí jsou to například protilátky proti virovým antigenům exprimovaným na povrchu membrán infikovaných buněk.
Jsou známy protilátky proti antigenům exprimovaným v buňkách infikovaných následujícími viry:
- HBV
HCV
-25- HSV
- HPV
- HIV
- EBV
- HTLV
Dále mezi vhodné ligandy podle vynálezu patří monoklonální protilátky nebo polyklonální protilátky nebo jejich fragmenty, které se svými konstantími oblastmi mohou vázat na Fc-g nebo FC-e receptory na povrchu buněk imunitního systému.
Myší monoklonální protilátky jsou výhodné použity v humanizované formě. Způsob humanizace protilátek je znám ze stavu techniky.
Dále mezi vhodné ligandy podle vynálezu patří všechny látky, které se vážou na membránové struktury nebo receptory na povrchu virem infikovaných buněk. Takovými látkami jsou například růstové faktory jako jsou cytokiny, EGF, TGF, FGF, nebo PGDF, nebo jejich fragmenty respektive částečné sekvence, které jsou schopny vazby na receptory exprimované na povrchu infikovaných buněk.
8) Ligandy podle vynálezu pro další parenchymatické buňky a) Nevirové ligandy
Mezi vhodné ligandy podle vynálezu patří takové látky, které se specificky vážou na struktury buněčných membrán určitých tkání. Takovými látkami jsou například:
-26Membránová struktura Ligandy
Tkáň receptor pro asialoglykoprotein as ialoorosomukoid neoglykoprotein galaktóza jaterní buňky receptor pro transferin transferin játra nebo jiné tkáně receptor pro insulin insulin
Fc-γreceptory imunoglobulin G makrofágy ve slezině, játrech, plicích a jiných tkáních retikuloendotheliální systém, jiné tkáně
Tyto ligandy a membránové struktury jsou přehledně popsány v publikaci Perales a další, Eur. J. Biochem. 226, strana 255, (1994) .
b) Ligandy virového původu
Mezi ligandy virového původu podle vynálezu patří především obalové glykoproteiny virů s afinitou k vybraným buňkám, jako například k:
buňkám bronchálního epitelu
RSV (respirátory syncytial virus), viz Becker a další, Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 6, strana 369 (1992) jaterním buňkám virus hepatitidy C, viz Uchida a další, Pathol. Internát. 44, strana 832 (1994); Carloni a další, Arch. Virol. 8, strana 31 (1993); Prince a další, Curr. Stud. Hemat.
Blood Trans. 61,strana 195 (1994)
-27filoviry, jaterní buňky se vážou například na virus Marburg pomocí receptorů pro asialoglykoprotein, viz Becker a další, J. Gen. Virol. 76, strana 393 (1995) virus hepatitidy B jaterní buňky se vážou pomocí receptorů pro asialoglykoprotein na preS2 a preSl doméně viru HBV, viz Shimizu a další, J. Med. Virol. 20, strana 313 (1986); Treichel a další, J. Gen. Virol. 75, strana 3021 (1994); Gerlich a další, J. Hepat.17/3, strana 10 (1993); Gripon a další, Virol.192, strana 534 (1993); Pontisso a další, Hepatol.14, strana 405 (1991); Ochiya a další,
PNAS 86, strana 1875 (1989) virus hepatitidy D, viz Colombo a další, J. Hepatol.12, strana 64 (1991) jaterním sinusoídálním buňkám virus hepatitidy B, HBV se váže pomocí receptorů pro fibronektin, viz Budhowska a další, J. Virol. 69, strana 840 (1995)
9) Ligandy použitelné k prevenci infekčních onemocnění K prevenci infekčních onemocnění lze jako ligandů použít všech látek, které se vážou na struktury buněčných membrán makrofágů a/nebo lymfocytů. Takové ligandy jsou již známy ze stavu techniky.
Příprava ligandů virového původu
Ligandy virového původu podle vynálezu lze připravit buď rozpuštěním virových obalových proteinů z virového purifikátu pomocí některého detergentů (například pomocí β-D-oktylglukopyranosidu) a jejich následným centrifugačním oddělením, viz Mannino a další, Bio-Techniques 6, strana 682 (1988), nebo pomocí molekulárně biologických způsobů. Tyto způsoby jsou odborníkům dobře známy, viz například příprava
-28glykoproteinu viru HEF popisovaná v publikaci Pleschka a další, (J. Gen. Virol. 76, strana 2529 (1995) a Szepanski a další, Virology 188, strana 85 (1992).
Fúzogenní proteiny (c) podle vynálezu
Vynález používá proteiny, které mají fúzogenní účinky, t.j. jsou umožňují průnik buněčnou membránou. Proteiny podle vynálezu mohou fúzovat přímo s buněčnými membránami. Takové fúzogenní proteiny obsahuje celá řada virů, například paramyxoviry, retroviry a herpesviry, viz Gaudin a další, J. Gen. Virol. 76, strana 1541 (1995).
K fúzogenním proteinům podle vynálezu patří dále takové glykoproteiny, které umožňují fúzi s buněčnou membránou nebo endozómem teprve po svém pohlcení do endozómu a po okyselení prostředí v endozómu.
Takové proteiny, zodpovědné za zachycení viru na povrchu buňky, jakož i za následnou fúzi s buněčnou membránou, obsahuje celá řada virů, viz Gaudin a další, J. Gen. Virol. 76, strana 1541 (1995). Tyto proteiny tvoří například alfaviry, rhabdoviry a orthomyxoviry.
Virové fúzogenní proteiny
Virové fúzogenní proteiny podle vynálezu jsou přehledně popsány v publikacích Hughson, Current Biol. 5, strana 265 (1995); Hoekstra, J. Bioenergetics Biomembranes 22, strana 675 (1990); White, Ann. Rev. Fysiol. 52, strana 675 (1990)
Fúzogenními proteiny podle vynálezu jsou například:
hemagglutinin influenza A nebo B viru, zvláště pak jeho komponenta HA2, viz Stegmann a další, J. Biol. Chem. 266, strana 18404 (1991); Klenk a další, Virol. 68, strana 426 (1975); Lazarowitz a další, Virol. 68, strana 440 (1975);
-29Skehel a další, PNAS 79, strana 968 (1982); Bosch a další, Virol. 113, strana 725 (1981) protein-M2 viru chřipkového viru A, viz Sugrue a další, Virol.180, strana 617 (1991 ); Lamb a další, Cell 40, strana 627 (1985) ; Pinto a další, Cell 69, strana 517 (1992); Zebedee a další, J. Virol. 56, strana 502 (1985); Black a další, J. Gen. Virol. 74, strana 1673 (1993);
Wharton a další, J. Gen. Virol. 75, strana 945 (1994), tento procein může být použit samostatně nebo vkombinaci s hemagglutininem chřipkového viru viz Ohuchi a další, J. Virol. 63, strana 920 (194), nebo s mutovanou neuramidázou chřipkového viru A. Této zmutované neuramidáze chybí enzymatická aktivita, která je potřeba k hemaglutinaci, viz Hausmann a další, J. Gen. Virol. 76, strana 1719 (1995) peptidová analoga hemaglutininu viru chřipky, viz Wharton a další, J. Gen. Virol. 69, strana 1847 (1988) protein HEF chřipkového viru-C, fúzogenní aktivita proteinu HEF se aktivuje rozštěpením HEF0 na podjednotky HEF, a HEF2, viz Herrler a další, J. Gen. Virol. 69, strana 839 (1988) ; Kitan a další, Arch. Virol. 73, strana 357 (1982); Ohuchi a další, J. Virol. 42, strana 1076 (1982) strana 1203 strana 1957 transmembránový glykoprotein filovirů jako je například virus Marburg, viz Feldmann a další, Virol. 182, strana 353 (1991 ); Will a další, J. Virol. 67, (1993); Kiley a další, J. Gen. Virol. 69, (1988); Geyer a další, Glycobiol. 2, strana 299 (1992).
Dalším filovirem je virus Ebola, viz Elliott a další, Virol.147, strana 169 (1985); Cox a další, J. Infect.
Dis.147, strana 272 (1983); (Kiley a další, J. Gen.
Virol. 69, strana 1957 (1988); Feldmann a další, Arch.
-30Virol. 7, strana 81 (1993); Volchkov a další, Virol. 214, strana 421 (1995) transmembránový glykoprotein viru vztekliny, viz Whitt a další, Virol. 185, strana 681 (1991); Gaudin a další, J.
Virol. 65, strana 4853 (1991); 67, strana 1365 (1993);
Virology 187, strana 627 (1992) transmembránový glykoprotein (G) viru vesikulární stomatitidy, viz Balch a další, J. Biol. Chem. 261, strana 14681 (1986); Kreis a další, Cell 46, strana 929 (1986); Doms a další, J. Cell Biol. 105, strana 1957 (1987); Zhang a další, J. Virol. 68, strana 2186 (1994);
Ohnishi, Curr. Topics Membr. Transp. 32, strana 257 (1988); Li a další, J. Virol. 67, strana 4070 (1993);
Zagouras a další, J. Virol. 65, strana 1976 (1991 ),Herrmann a další, Biochem. 29, strana 4054 (1990) fúzogenní protein viru HIV, zvláště pak jeho komponenta gp41, viz Stareich a další, Cell 45, strana 637 (1986) ;
Kowalski a další, Science 237, strana 1351 (1987);
Gallaker a další, Cell 50, strana 327 (1987) fúzogenní protein viru Sendai, zvláště pak jeho komponenta Fl, viz Blumberg a další, J. Gen Virol. 66, strana 317 (1985); Sechoy a další, J. Biol. Chem. 262, strana 11519 (1987); Homma a Ohuchi, J. Virol.12, strana 1457 (1973); Scheid a Choppin, Virol. 57, strana 470 (1974) transmembránový glykoprotein Semliki-Forest viru, zvláště pak jeho komponenta El, viz Omar a další, Virol. 166, strana 17 (1988); Nieva a další, EMBO-J. 13, strana 2707 (1994); Falen a další, J. Cell biol. 112, strana 615 (1991 ); Lobigs a další, J. Virol. 64, strana 1233 a strana 5214 (1990); Kenney a další, Structure 2,strana
823 (1994); Garoff a další, Nátuře 288, strana 236
-31(1980); Levy-Mintz a další, J. Virol. 65, strana 4292 (1991) transmembránový glykoprotein viru klíščové encefalitidy, viz Guirakhoo a další, Virol. 169, strana 90 (1989); J.
Gen. Virol. 72, strana 1323 (1991); Heinz a další, Virol.
198, strana 109 (1994) fúzogenní protein viru lidské respirační syncytialitidy, (RSV) zvláště pak jeho komponenta gp37, viz Collins a další, PNAS 81, strana 7683 (1984); Elango a další, Nucl.
Acids Res. 13, strana 1559 (1985)
Příprava virových fúzogenních proteinů
Virové fúzogenní proteiny podle vynálezu lze připravit buď rozpuštěním virových obalových proteinů z virového purifikátu pomocí některého detergentů (například pomocí β-D-oktylglukopyranosidu) a jejich následným centrifugačním oddělením, viz Mannino a další, Bio-Techniques 6, strana 682 (1988), nebo pomocí molekulárně biologických způsobů. Příklady přípravy takovýchto fúzogenních proteinů jsou popsány v následujících publikacích:
hemaglutinin influenza viru (chřipky), viz Bullough a další, J. Mol. Biol. 236, strana 1262 (1994); Nátuře 371, strana 37 (1994) ; Daniels a další, Cell 40, strana 431 (1985); Godley a další, Cell 68, strana 635 (1992); White a další, Nátuře 300, strana 658 (1982); Wiley a další,
Ann. Rev. Biochem. 56, strana 365 (1987); Kawaoka a další, PNAS 85, strana 321 (1988); Kuroda a další, J.
Virol. 63, strana 1677 (1989), EMBO-J. 5, strana 1359 (1986); Naeve a další, Virol.129, strana 298 (1983);
Porter a další, Nátuře 282, strana 471 (1972); Hughson,
Curr. Biol. 5, strana 265 (1995) protein M2 influenza viru C, viz Black a další, J. Gen. Virol.74, strana 1673 (1993); Pinto a další, Cell 69,
| strana | 517 | (1992) ; | Zebedee | a další, J. Virol.56, | strana |
| 502 (1985) | |||||
| protein | HEF | viru chřipky C, | viz Pfeifer a další, | Virus. | |
| Res.1, | 281 | (1984) ; | Herrler | a další, Virol. 113, | strana |
439 (1981) transmembránové glykoproteiny filovirů, například viru Marburg, viz Will a další, J. Virol. 67, strana 1203 (1993); Feldmann a další, Virus Res. 24, strana 1 (1992). Dalším filovirem je virus Ebola, viz Volchkow a další, FEBS Lett. 305, strana 181 (1992); Virol. 214, strana 421(1995); Sanchez a další, Virus Res. 29, strana
215(1993); Virol. 157, strana 414(1987); Eliott a další, Virol. 163, strana 169 (1985) transmembránový glykoprotein viru vztekliny, viz Gaudin a další, J. Virol. 65, strana 4853(1991); Virol. 187, strana 627 (1992); Rose a další, J. Virol. 43, strana 361 (1982); Witte a další, Virol. 185, strana 681 (1991) transmembránový glykoprotein viru vesikulární stomatitidy, viz Li a další, J. Virol. 67, strana 4070 (1993); Riedel a další, EMBO-J. 3, strana 1477 (1984); Lyles a další,
Biochem. 29, strana 2442 (1990); Metsikko a další, EMBO-J. 5, strana 3429 (1986) transmembránový glykoprotein Semliki Forest viru, viz Garoff a další, Nátuře 288, strana 236(1980); Kielian a další, J. Virol. 64, strana 4614(1990); Kondor-Koch, J. Cell Biol. 97, strana 644 (1983) transmembránový glykoprotein viru klíšúové encefalitidy, viz Guirakkoo a další, J. Gen. Virol. 72, strana 1323 (1991); Heinz a další, Virol. 198, strana 109 (1994)
-33Dalšími molekulami s fúzogenními vlastnostmi jsou například peptidy obsahující translokační doménu (doménu II) exotoxinu A bakterií Pseodomonas, viz Weis a další, Cancer Res. 52, strana 6310 (1992); Fominaga a další, J.
Biol. Chem. 271, strana 10560 (1996) peptidy obsahující peptid s aminokyselinovou sekvencí
GLFEALLELLESLWELLLEA
Gottschalk a další, Gen Ther. 3, strana 448 (1996) peptidy obsahující peptid s aminokyselinovou sekvencí
AALAEA [LAEA] 4LAAAAGC (Acm)
Wang a další, Technol. Advances in Vector Syst. For Gen Ther., May 6-7, 1996, Coronado, Konference IBC) peptidy obsahující peptid s aminokyselinovou sekvencí FAGV-VLAGAALGVAAAAQI fúzogenní protein viru spalniček, viz Yeagle a další, Biochem. Biofys. Acta 1065, strana 49 (1991) peptidy obsahující peptid s aminokyselinovou sekvencí
GLFGAIAGFIEGGWWGMIDG proteiny HA2 viru chřipky typu A, viz Lůneburg a další, J. Biol. Chem. 270, strana 27606 (1995) peptidy obsahující peptid s aminokyselinovou sekvencí
GLFGAIAGFIENGWEGMIDGGLFGAIAGFIENGWEGMIDG
Burger a další, Biochem 30, strana 11173 (1991) nebo peptid GLFGAIAGFIE;
ALFGAIAGFIE;
LFLGAIAGFIE;
LLLGAIAGFIE;
LILGAIAGFIE;
GIFGAIAGFIE;
GLLGAIAGFIE;
GLFAAIAGFIE;
-34GLFEAIAGFIE;
GLFGAMAGFIE;
GLFGAIAGLIE nebo peptid GLFGAIAGFIV viz Steinhauer a další, J. Virol 69, strana 6643 (1995) nebo peptid
GLFEAIAEFIEGGWEGLIEG nebo peptid
GLLEALAELLEGGWEGLLEG viz Ishiguro a další, Biochem. 32, 9792 (1993).
Konjugace ligandů a fúzogenních proteinů s nosičem
Konjugace ligandů a fúzogenních proteinů s nosičem se provádí dobré známy.
nosič jsou následující: Hashimoto a další, Immunol.132, strana 129(1984) ~ Raso a další, Immunol. Rev.62, strana 93 (1982) nosič zpusooy, ktere jsou odborníkům
Příklady nekovalentní vazby na nosič-biotin - avidin-S-S-ligám nosič - bispecifická protilátka ligand
Příklady kovalentní vazby na vazba na volné aminoskupiny proteinu potřebné regencie:
N-succinimidyl-3-(2-pyrdylthio) · propionát (SPDP)
SDDP-di thiothre i tol
2-iminothiolan
Carlson a další, Biochem. J. 173, strana 723 (1978)
Carlson a další, Biochem. J. 173, strana 723 (1978)
King a další, Biochem. 17, strana 1499 (1978)
-352,2-iminothiolan +
4,4-dithiopyridin
3- methyl-3(4-dithiopyridyl)merkapto-propionimidát N-acetylhomocystein thiolakton anhydrid acetylmercaptosuccinové kyseliny + NH2OH m-maleimido-benzoyl-N-hydroxy succinimid ester succinimidyl-4-(N-maleimidomethylcyklohexan)-1-karboxylát N-succinimidyliodoacetát
4- hydroxy,3-nitromethylbenzimidát + acetimidát + Na2S204
4-hydroxy,3-nitromethylbenzimidát + acetimidát + NaNO2 oxidovaný Dextran + borohydrid vazba na volné hydroxylové skupiny proteinu potřebné reagencie:
cystamin + karbodimid
King a další, Biochem.17, strana 1499(1978)
Reiner a další, J. Mol. Catal. 2, strana 335 (1977)
Klotz and Heineg, Arch. Biochem. Biofys. 96, 690 (1979)
Liu a další, Biochem. 18, strana 690 (1979)
Yoshitake a další, Eur. J. Biochem. 101, strana 395 (1979)
Rector a další, J. Immun. Meth. 24, strana 321 (1978)
Můller and Pfleiderer, J. Appl. Biochem. 1, strana 301 (1979)
Můller and Pfleiderer, J. Appl. Biochem. 1, strana 301 (1979)
Hurwith a další, Eur. J. Cancer 14, strana 1213 (1978)
Erlanger a další, Meth.
Imm.Immunochem.1, strana 144 (1967)
Gilliland, Cancer Res. 40, strana 3564 (1980)
-36vazba na volné SH-skupiny proteinu potřebné reagencie: protein-SH protein-SH + Na2S402
Ellmanovo činidlo vazba na volné karbonylové skupiny proteinu potřebné reagencie: periodát vazba na volné karboxylové skupiny proteinu potřebné reagencie: cystamin + carbodiimid
Ghose and Blair, CRC Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 3, strana 263 (1987)
Masuko a další, BBRC 90, strana 320 (1979)
Raso and Griffin, J. Immunol.125, strana 2610 (1980)
Hurwitz a další, Cancer Res. 35 strana 1175 (1975)
Gilliland, Cancer Res. 40, strana 3564 (1980)
Výběr nukleotidové sekvence vkládaného genu podle vynálezu Nukleotidové sekvence podle vynálezu určené k tvorbě komplexu s nosičem mohou být jak ve formě DNA tak i RNA. V nejjednodušším případě jde o volná nukleotidové vlákna, která obsahují gen kódující požadovaný protein. Tento gen může být doplněn o promotorové sekvence nebo moduly specifické pro konkrétní buňku nebo virus.
Dále mohou být k tomuto genu přidány další virové promotorové sekvnece a/nebo enhancery, které slouží k zesílení a/nebo prodloužení exprese tohoto genu. takové promotory a/nebo enhancery jsou přehledně popsány například Dillonem, TiBTech
-3711, strana 167, (1993) . Příklady vhodných promotorů a/nebo enhancerů jsou následující:
LTR-sekvence viru Rousova sarkomu
LTR-sekvence retrovirů promotorové a enhancerová oblast viru CMV
LTR-sekvence a/nebo promotorové sekvence p5, pl9, p40 AAV virů
LTR-sekvence a/nebo promotorové sekvence adenovirů
LTR-sekvence a/nebo promotorové sekvence vakcinia viru
LTR-sekvence a/nebo promotorové sekvence herpesvirů promotorové sekvence parvovirů promotorové sekvence (regulační oblast proti směru transkripce) papillomavirů
Ve výhodném provedení vynálezu je nukleotidová sekvence vložena do plazmidu.
Vznik komplexu konjugovaného nosiče a genu
Konjugovaný nosič dává po smíšení s genem, respektive s nukleotidovou sekvencí podle vynálezu vzniknout komplexu. Ve výhodném provedení vynálezuje vybrán takový vzájemný poměr jednotlivých složek, který vede ke vzniku komplexů s neutrálním nebo kladným nábojem. Výhodnými poměry výchozích složek jsou například:
μπιοί lipidu/ 20μρ plazmidu 1 až 5 mg lipidu/ 10 až 20μg DNA/RNA 6,2 mg lipidu/ 1,55 až 3,1 μg DNA lipid/DNA-petid (5:1)
-38Celkového náboje je dosaženo inkubací nosiče s geny ve vhodném poměru. Tento změřením zeta-potenciálu, viz Dittgen a strana 541 (1987) .
pozitivně nabitého poměr lze stanovit další, Farmazie 42,
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Příprava účinné látky pro transfekci endotheliálních buněk
a) Příprava obalového glykoproteinu filovirů jakožto ligandů
Obalový glykoprotein filovirů má vyšší afinitu k buňkám endothelu. Příprava tohoto glykoproteinu probíhá způsobem popsaným v publikacích Will a další, J. Virol. 67, strana 1203 (1993); Feldmann a další, Virus Res. 24, strana 1 (1992) a
Volchkow a další, FEBS Lett. 305, strana 181 (1992).
Příprava glykoproteinu z viru Ebola
Virus Ebola kmene Zaire (EBO, Virologický Institut, Sergiev Posad, Rusko) byl pasážován v opicích makak rhesus. Z těchto opic byl převeden buněčné kultury (Vero-buňky) a poté byl izolován z kultivačního média, viz Volchkow a další, FEBS Lett. 305, strana 181 (1992) .
Klonování a sekvenování virové DNA
Genomová RNA se izoluje z virového purifikátu centrigfugací v cesiumchloridovém gradientu, viz Volchkow a další, (1992) . Tato RNA byla použita pro přípravu cDNA knihovny pomocí náhodných primérů a reverzní transkriptázy viru kuřecí myeloblastózy. RNA-cDNA hybridy byly vzaty jako základ pro amplifikaci genů pro glykoprotein pomocí PCR a následujících syntetických primérů:
-39primer NI
5'-GAAGGATCCTGTGGGGCAACAACACAATG (Sekvence Id. č.l), je komplementární s nukleotidy 114 až 142 mRNA po směru transkripce a je doplněná o 5'-terminální BamHI restrikční místo primer N2
5'-AAAAAGCTTCTTTCCCTTGTCACTAAA (Sekvence Id. č. 2), je komplementární s nukleotidy 2492 až 2466 na mRNA po směru transkripce a je doplněná o 5'-terminální restrikční místo enzymu HindlII.
Sekvenování nukleotidová sekvence DNA genu GP bylo provedeno na obou vláknech způsobem podle Maxama a Gilberta (Methods in Enzymology 65, strana 499 (1980) . Sekvence genu GP viru Ebola kmene Zaire byla uložena v Genově bance pod číslem U31033, viz Volchkow a další (1992).
Sekvence genu GP viru Ebola kmene Zaire (EBO) byla do velké míry identická s dosud publikovanou sekvencí, viz Sanchez a další, Virus Res. 29, strana 215 (1993) . Pouze v pozici 1019 až 1025 bylo nalezeno pouze sedm místo osmi po sobě jdoucích adeninů (v mRNA po směru transkripce).
Izolace, klonování a sekvenování mRNA pro EBO-GP mRNA pro EBO-GP byla izolována z přibližně 7xl07 buněk infikovaných EBO virem (1 až 10 PFU na jednu buňku, 1 den po infekci) pomocí kitu RNeasy firmy Qiagen. Pro syntézu cDNA bylo použito 10 μΐ roztoku mRNA (což odpovídalo přibližně l,4xl07 infikovaných buněk). Toto množství mRNA bylo inkubováno s reverzní transkriptázou viru ptačí myeloblastózy v přítomnosti primeru:
N3
-40oligo-d(T) 21 s vloženým restrikčním místem pro HindlII na 5 konci
Po reverzní transkripci byla RNA odstraněna inkubací směsi v 1 μg/μl RNA-ázy (37°C, 30 minut).
K amplifikaci nukleotidové sekvence kódující GP bylo použito primerů NI a N3.
PCR byla provedena při celkovém objemu reakční směsi 100 μΐ. Složení reakční směsi bylo následující: 1 až 5 μg cDNA v 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3), 2 mM MgCl2 s přídavkem
0,2 mM každého deoxynukleotidu a 0,3 μΜ každého z primerú.
Raekční směs byla nejprve zahřáta na 10 minut na teplotu 95°C a byla přidána Tag polymeráza (2,5 U/100 μΐ) . Bylo provedeno celkem 35 amplifikačních cyklů, přičemž jeden cyklus sestával z 1 minutové inkubace při 94°C, 1 minuty při 70°C a 1 minuty při 72°C. Po 3 5 cyklech byly ke směsi přidány sondy na 10 minut při teplotě 72 °C. Všechny komponenty pro PCR byly dodány firmou Perkin-Elmer Cetus. Produkty PCR byly přečištěny pomocí soupravy QIA quick Spin pro purifikací produkrú PCR, Qiagen. Přečištěná DNA byla neprodleně použita pro sekvenování, pro opakovanou PCR, a nebo pro klonování do plazmidových vektorů. Nukleotidové sekvence v oblasti proteinu GP, kde se překrývají čtecí rámce ORF I a ORF II, byla stanovena pomocí Sangerova způsobu (Sanger a další, PNAS 74, strana 5463, (1977), přičemž byl použit následující primery primer N4
5'-CGGACTCTGACCACTGAT (Sekvence Id. č.3) je komplementární k nukleotidům 1108 až 1091 primer N5
5'-TCGTGGCAGAGGGAGTGT (Sekvence Id. č.4) je komplementární k nukleotidům 1412 až 1395
-41PCR-fragmenty byly klonovány do vektoru pGEM2Zf(+) a tyto rekombinantní plazmidy byly enzymaticky sekvenovány, viz (Sanger a další, PNAS 74, strana 5463, (1977).
Většina klonů vykazovala (podobně jako vRNA) 7 po sobě jdoucích adenosinú mezi pozicemi 1018 až 1026 (mRNA ve směru transkripce), zatímco přibližně 20 % mRNA pro GP protein z buněk měla v této pozici 8 adenosinú.
mRNA s osmi adenosiny kóduje kompletní protein GP o délce 676 aminokyselin. Osmý adenosin tedy umožňuje posun čtecího rámce od ORF I k ORF II.
mRNA se pouhými sedmi adenosiny kóduje naproti tomu nestrukturální druhý glykoprotein (sGP - second Glycoprotein). Díky tomu je sGP identický s N-koncovou částí (274 aminokyselin) proteinu GP a je doplněn dalšími 70 aminokyselinami, které kóduje konec čtecího rámce ORF I.
Tento konec není v GP obsažen, díky tomu, že osmý adenosin umožní přejít z ORF I k ORF II a ORF I tudíž není dočten do konce.
Konstrukce rekombinantních plazmidů
PCR produkty, které obsahují kompletní ORF genu pro protein GP viru EBO, se inkubují s restrikčními enzymy BamHI a Hind III. Restrikční štěp se pak liguje do plamidu pGEM3Zf(+), který byl předtím naštěpen stejnými enzymy. Plazmid obsahuje promotor RNA polymerázy fága T7, které je využit při syntéze EBO-GP RNA za využití expresivního systému vakciniaviru/T7 polymerázy.
Plazmidy, které obsahovaly nukleotidovou sekvenci EBO vRNA kódující protein GP o plné délce (sedm po sobě jdoucích adenosinú) byly označeny pGEM-mGP7, zatímco plazmidy obsahující osm adenosinú byly pojmenovány pGEM-mGP8.
-42Nukleotidové sekvence kódující protein GP byly vystřiženy restrikčními enzymy BamHI a HindlIIz plazmidů pGEM-mGP7 a pGEM-mGP8, vzniklé konce byly doplněny působením Klenowova fragmentu DNA polymerázy I a vloženy do vektoru pScll (Promega, Madison, WI) naštěpeného restrikčním enzymem Smál. Vzniklé rekombinantní plazmidy (pSC*mGP7 a pSC-mGP8) byly použity k přípravě rekombinantních vakcinia virů.
Konstrukce rekombinantních vaccinia virů
Rekombinantní vaccinia viry byly připraveny homologní rekombinací mezi tK oblastmi rekombinantního plazmidů pSc-mGP7 nebo pSc-mGP8 a genomické DNA vakcinia viru kmene WR, viz Chakrabarti a další, Mol. Cell. Biol. 5, strana 3403 (1985) a pomocí lipofekční transfekce, viz Felgner a další, PNAS 84, strana 7413 (1987).
Rekombinantní viry byly přečištěny jednoduchým pasážováním v buňkách TK-143 a čtyřnásobným pasážováním v buňkách CV-1. Pro selekci byly využity plaky pozitivní na β-galaktosidázu.
Rekombinantní vakcinia viry, vzniknuvší z plazmidů pSc-mGP7, byly označeny vSc-mGP7, zatímco viry z plazmidů pSc-mGP8 byly označeny vSc-mGP8.
Exprese GP bylo dosaženo infekcí lxl0s buněk Hela nebo stejného množství buněk RK-13 10 PFU vSc-mGP7 nebo vSc-mGP8 na buňku.
Exprese genového produktu byla stanovena imunoblotingem. Nejprve bylo pomocí 10% SDS-PAGE (denaturační elektroforéza v dodecylsulfátu sodném na akrylamidovém gelu) rozděleny lyzáty z lxlO5 infikovaných Hela buněk nebo buněk RK-13, viz Laemmli, Nture 227, strana 680, (1970). Rozdělené proteiny byly pomocí polosuchého blotování přeneseny na PVDF membránu (Millipore). Sekretovaný sGP byl analyzován na gelu ze vzorku 20 μΐ
-43infikovaných buněk z přebytku inkubačního média (2 ml, lxlO5 buněk). Imunoanalýza byla provedena pomocí myšího-anti-EBO, koňského-anti-EBO a králičího-anti-EBO séra, přičemž jako sekundární protilátky bylo použito králičí-anti-myší, respektive anti-koňské protilátky, konjugované s křenovou peroxidázou. Sekundární protilátka byla detekována ECL-technikou (Amersham).
V buněčných lyzátech infikovaných buněk Hela, jakož i v lyzátech infikovaných RK-13 buněk, bylo možno dokázat produkci GP, jakož i sGP, přičemž po specifické infekci VSC-GP7 výrazně vzrostl podíl sGP a po infekci VSC-GP8 podíl GP.
Poté byly buněčné lyzáty inkubovány s endoklykosidázou H a podrobeny analýze na SDS-PAGE, která prokázala, že úplný GP má molekulovou hmotnost 125 až 140 kDa, a na rozdíl od neúplného GP je rezistentní proti štěpení endoklykosidázou H díky komplexně N-glykosidicky vázaným oligosacharidum.
Buňky RK-13 exprimují úplný GP s molekulovou hmotností 140 kDa, zatímco Hela buňky GP o hmotnosti 125 kDa. Rozdíl v hmotnosti jednotlivých glykoproteinů je dán buněčně specifickou rozdílnou N-glykosylací. 140 kDa GP produkovaný buňkami RK-13 jevil stejnou elektroforetickou pohyblivost jako GP ebolavirů (SDS-PAGE).
Buňky infikované VSC-GP7 vykazovaly pouze nepatrná množství sGP v buněčném lyzátu. Tento sGP měl jednotnou hmotnost 50 kDa. Převažující podíl sGP byl nalezen v kultivačním médiu (poměr mezi sekretovaným a intracelulárním sGP činil 25:1). Sekretovaný sGP má molekulovou hmotnost 50 až 55 kDa a je rezistentní k účinkům endoglukosidázy H.
-44Výběr GP a jeho přečištění
Pro přípravu nevirového vektrou podle vynálezu byl jako ligand vybrán glykoprotein EBO-GP o molekulově hmotnosti 140 kDa produkovaný buňkami RK-13.
Buňky RK-13 byly infikovány VSC-GP8 o koncentraci 10 PFU na jednu buňku. Proteiny v buněčném lyzátu byly rozděleny pomocí preparativní 8% SDS-PAGE a poté byly obarveny v Coomassie brilliant blue (CBB) . Část gelu obsahující GP byla vyříznuta a umístěna do zařízení BioTrap (firma Schleicher a Schůll) a použita jako vzorek do další horizontální elektroforézy. Elektroeluce probíhala v pufru obsahujícím 100 mM glycin, 20 mM Tris a 0,01 % SDS po dobu 16 až 20 hodin při teplotě 4°C a konstantním napětí 200 V. Eluát byl zachycen a zakoncentrován pomocí mikrokoncentrační cely Centricon-100 firmy Amicon.
Vzorek koncentrovaného eluátu byl elektroforeticky rozdělen na 10% SDS-PAGE, obarven pomocí Coomassie brilliant blue a poté byla stanovena jeho čistota pomocí imunoblotu.
Poté byl GP protein ještě chromatograficky přečištěn pomocí HPLC na reverzní fázi, přičemž byla použita kolona Shandon WP300 (0,46x25 cm), C 4,5 μπι. Chromatograf ie probíhala v acetonitrilovém gradientu (0% až 100% složky B během 40 minut, složka A: 0,1% TFA (kyselina trifluorooctová), 10% acetonitril, složka B: 0,1 % TFA, 90% acetonitril). Během chromatografického dělení byla udržována teplota 60°C a průtoková rycglost elučního činidla 1 ml/min.
Příklad 2: Příprava fúzního proteinu M2 influenza A viru Příprava fúzního proteinu M2 influenza A viru probíhala způsobem podrobně popsaným v publikacích Zebedee a další, J. Virol. 56, strana 502, (1985); Pinto a další, Cell 69, strana
517 (1992) a Black a další, J. Gen. Virol. 74, strana 1673, (1993) .
-45Příklad 3: Příprava kationtového proteinového nosiče podle vynálezu
Příprava a charakterizace nosného systému byla popsaána v dizertační práci Muller, Bazilej (1994) . Částice byly charakterizovány podle své velikosti (stanoveno fotonovou korelační spektroskopií), podle svého povrchového náboje (stanoveno měřením zetapotenciálu) a své morfologie (stanovena rastrovací elektronovou mikroskopií). Jednotlivá stanovení byla prováděna dobře způsoby známými způsoby, viz dizertační práce Muller, Bazilej (1994) a Junginger a další, Farm. Ztg. 25, strana 9 (1991).
Kationizace albuminu probíhala způsobem podrobné popsaným v publikacích Bergmann a další, Clin. Sci. 67, strana 35, (1984) a Kumagai a další, J. Biol. Chem. 262, strana 15214 (198 7) . Karboxylové skupiny lidského sérového albuminu byly nejprve aktivovány N-ethyl-N'-3-(dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridem a pak byl celý protein kationizován navázáním hexamethylendiaminu. Oddělení přebytečného nezreagovaného činidla bylo pováděno dialýzou a pomocí sloupcové chromatografie. Míra kationizace byla určena měřením zetapotenciálu a elektroforeticky.
Příprava kationizovaného lidského sérového albuminu (cHSA)
K 67 ml 2M roztoku hexamethylendiamunu bylo přidáno 5 ml 20% roztoku sérového albuminu a hodnota pH byla upravena na 7,8. Směs byla míchána 30 minut při pokojové teplotě a 100 otáčkách zaminutu a poté byl přidán 1 g N-ethylN'-3-(dimethyl-aminopropyl)-karbodiimidhydrochloridu. Poté byla opět překontrolována hodnota pH a směs byla 4 h inkubována za pokojové teploty. Přehřívání směsi bylo zabráněno příležitostnou inkubací v ledové lázni. Konečný produkt byl zakoncentrován a oddělen od nízkomolekulárních složek pomocí koncentrátoru Amicon (s mezí propustnosti 30 kDa) v pěti centrifugačních krocích. Stav purifikace byl
-46monitorován fotometricky (při vlonové délce 280 nm) a osmometricky. Přečištěný derivát byl lyofilizován a uskladněn při 4°C.
Charakterizace cHSA
Charakterizace kationizovaného cHSA byla prováděna známými elektroforetickými způsoby. Izolektrická fokusace v homogenním polyakrylamidovém gelu (5% T, 3% C) as amfolyty Pharmalyte’ Carrier v rozsahu pí 3 až 9 (Phast Gel IEF 3 až 9) ukázala posun izoelektrického bodu od pí 4 k pí 7 až 9. SDS-PAGE na gradientu Phast Gel 10 až 15 % (Phast Gel buffer strips, neredukující prostředí) prokázala, žemolekulová hmotnost 67 kDa nebyla kationizací pozměněna. Agragáty o vyšší molekulové hmotnosti nebyly touto technikou dokázány.
Kationizovaný albumin má absorbční maximum v UV oblasti při vlnové délce 276 až 278 nm. Míra kationizace byla stanovena flourometricky po substituci volných primárních aminoskupin fluoresceinaminem. Excitační vlnová délka byla 390 nm a emisní 4 75 nm, stanovování probíhalo při pH 7. Přepočítávací faktor 2,0 až 3,0 dokazoval úplnou substituci.
Kationizovaný albumin lze bez problémů fotometricky stanovit například ve směsi s plazmidy pomocí známého BCA-testu na proteiny při koncentracích 5 až 10 )xg/ml. Fotometrické stanovování se provádí při vlnové délce 562 nm.
Stanovení funkčnosti cHSA
a) Příprava makromolekulárního komplexu cHSA/plazmid
22,95 μg plazmidu CMV-lacZ bylo inkubováno 10 minut v 1,4 ml 0,9% sterilního roztoku chloridu sodného. Roztok byl míchán při 100 otáčkách za minutu při pokojové teplotě. Pak byl kt omuto roztoku po kapkách (jedna kapka za sekundu) přidáván 1 ml sterilně filtrovaného roztoku kationizovaného lidského sérového albuminu v 0,9 % chloridu sodném. Směs byla za
-47stálého míchání ponechána 5 minut za pokojové teploty tak, aby se vytvořil požadovaný komplex.
b) Charakterizace vzniklého komplexu
Koncentrace cHSA nutná pro neutralizaci a kationizaci plazmidu byla stanovena pomocí eiektroforézy na agarózovém gelu (1% agarózový gel, TAE pufr, pH7,4, 90 V, 3h) . Nenavázané přebytky plazmidu plazmid byly detekovány přídavkem ethidiumbromidu, podíl proteinové složky pomocí následného barvení Coomassie modří. Komplexy plazmid-protein s celkovým kladným nábojem putovaly za uvedených podmínek zřetelně ke kathodš. Komplexy připravené z 0,3 ml roztoku obsahujícího 8,3 mg/ml cHSA vykazovaly negativní celkový náboj, zatímco komplexy připravené z 0,6 ml; 1 ml; 1,5 ml a ze 2 ml vykazovaly celkový pozitivní náboj. Za žádné z vybraných koncentrací nebyly pozorovány volné plazmidy.
Desetiminutová inkubace ve fyziologickém roztoku plazmidu nijak viditelně neuškodila.
Velikost komplexů vhodná pro transfekci byla stanovena pomocí fotonově korelační spektroskopie (Zetasizer 1, AZ 110, 90°, vlnová délka 633 nm) . Velikost komplexů byla nastavena na 310 až 360 nm pomocí změn v :
v objemech jednotlivých reakčních složek složení a iontové síle inkubačního média koncentraci cHSA době inkubace cHSA rychlosti přidávání roztoku cHSA hodnotě pH inkubačního média.
Popsaným způsobem se získá opaleskující roztok komplexu plazmidu podle vynálezu.
-48c)
Transfekce buněk pomocí komplexů cHSA/CMV-lacZ
Buňky 3T3 byly kultivovány v médiu DMEM s přídavkem 10 % fetálního telecího séra (FCS, fetal calf sérum), pH 7,1. Kultivační médium neobsahovalo žádná antibiotika. Kultivace probíhal při 37°C v atmosféře 5% CO2 a 89% vlhkosti.
d) Přenos genu
200.000 buněk 3T3 bylo vyseto na Petriho misky s želatinou (průměr misek 3 cm) a byly kultivovány 24 h do dosažení přibližně 50% konfluence. Poté bylo médium odstraněno, buňky promyty PBS bez vápníku a hořčíku, pH 7,4. Poté byly buňky převedeny do 2 ml média DMEM bez fetálního séra nebo do 1 ml 150mM NaCl/lOmM HEPES, pH 7,4. Poté bylo přidáno 0,84 ml výše popsaného komplexu plazmidu/cHSA (to odpovídá přibližné 8 μg DNA) a inkubováno 1 h (NaCl/HEPES) při teplotě 37°C, respektive 2 h (DMEM) při stejné teplotě.
Doplňkově byly k transfekční směsi přidávány různá činidla kvůli modifikaci fúzogenních a lysozómotropních vlastností. Takovým činidlem byl například 85% sterilizovaný glycerol (200 μΐ; 1,84 ml). Po inkubaci bylo transfekční médium odsáto a na 48 h nahraženo médiem DMEM s fetálním telecím simulaci lysozómotropnho efektu byla část směsi odebrána po 1 hodinově, respektive 2 hodinové transfekční inkubaci, a poté byla další 3 hodiny inkubována v médiu DMEM s obsahem chlorochinu (DMEM, sérem. Pro transfekční
2,5 % FCS, 0,1 mM nehražen DMEM s 10 ; chlorochin. FCS.
Poté byl roztok chlorochinu
Jako kontrola transfekčních podmínek byla provedena transfekce buněk 3T3 lipofektaminem způsobem popsaným v literatuře (10 μΐ činidla, 2 μg DNA).
Po 48 hodinách bylo médium odstraněno, buňky jednou promyty PBS bez vápníku a hořčíku a 10 minut fixovány v 0,1% glutaraldehydu v PBS. Přebytečný glutaraldehyd byl odstraněn
-49dvojnásobným promytím v PBS. Transfikované buňky byly obarveny inkubací v 0,003M roztoku ferrikyanidu draselného, 0,003M ferrokyanidu draselném a 0,08% X-Gal (zásobní roztok v 2% DMF) v PBS. Barvení bylo prováděno přesnoc při pokojové teplotě. Vyhodnocení výsledků bylo prováděno mikroskopicky.
Čistý komplex plazmid/cHSA nevedl v žádném případě ke transfekcí. Přídavek 85% glycerolu ke kultivačnímu médiu způsobil již po 1 h odumření buněk. V médiu pufrovaném NaCl/HEPES byly po chlorochinovém šoku pozorovány transfekční rychlosti odpovídající hodnotám uváděným v litaratuře pro DAE-dextran. V médiu DMEM byl přenos genů podstatně slabší.
Tabulka 1: Přehled způsobů charakterizace lidského sérového albuminu
| Způsob | Výsledek | |
| Rozpustnost | dobrá ve vodě a fyziologických mediích | |
| pí | izoelektrická fokusace | pí 7 až 9 |
| Molekulová hmotnost | SDS-PAGE | 67.000 |
| Vysokomolekulární agregáty | SDS-PAGE | žádné |
| Absorpční maximum | UV- spektroskopie | 276 až 278 nm |
| Míra kationizace | Fluorimetrie | teoreticky: 2,18 |
| (fluorescenamin) | prakticky:2,0 až 3,0 | |
| Stanovení celkového | elektroforéza na | pozitivní náboj |
| náboje | agarovém gelu | |
| Stanovení množství | BCA- test na proteiny | - |
-50Tabulka 2: Vyhodnocení podmínek pro vznik komplexu
Objemy reakční směsi pro inkubaci
110 μΐ
1,4 ml
Složení a iontová síla inkubačního média redestilovaná voda
PBS bez vápníku a hořčíku, pH 7,4 fyziologický roztok (NaCl)
150mM NaCl, lOmM HEPES, pH7,4
DMEM bez séra
Koncentrace cHSA
Testované koncentrace:
0,1 μg, 1 μg, 10 μg, 100 μg, 0,5 mg, 1 mg, 1,5 mg, 2 mg, 2,5 mg, 3 mg, 5 mg, 10 mg vždy na 1 ml roztoku
Vybraně koncentrace:
2,49 mg, 5,16 mg, 8,3 mg, 12,45 mg, 16,6 mg vždy na 1 ml roztoku
Doba inkubace
5, 30, 60, 120 a 180 minut Hodnota pH v inkubačním médiu pH 4,0 pH 7,4 pH 9
Rychlost přidávání cHSA kapka za sekundu
-51okamžité přidání cHSA
Příklad 4: Příprava plazmidu
Lidský promotor endothelinu-1 (v pozici -170 až -10), viz Wilson a další, Mol. Cell Biol. strana 4654, (1990)) nebo jeho varianta zkrácená o TATA box (pozice -170 až -40) byl navázán na svém 3' konci na 5' konec modulu CDE-CHR-Inr (pozice -20 až +121) lidského genu cdc25C (UK 950.6466.3). K navázání byly použity běžně dostupně enzymy a způsoby odborníkům dobře známé.
Takto sestavená chiméra obsahující promotorový modul endothelinu-l/transkripční jednotku byla dále svým 3'koncem navázána na 5'konec DNA, která obsahovala kompletní kódující oblast lidské β-glukoronidázy (pozice 27 až 1982, viz Oshima a další, PNAS USA 84, strana 685 (1987)). Tato DNA obsahovala rovněž signální sekvenci důležitou pro sekreci (22 N-koncových aminokyselin). Pro usnadnění této buněčné sekrece byla tato signální sekvence nahražena signální sekvencí imunoglobulinů (pozice 63 až 107, viz Reichmann a další, Nátuře 332, strana 323, (1988)). Sekvence pro kontrolu transkripce a DNA pro β-glukoronidázu byly vloženy do plazmidových vektorů odvozených od pUC18/l9 nebo Bluescript. K tomuto vložení byly použity běžně dostupné enzymy a způsoby odborníkům dobře známé.
Příklad 5: Tvorba komplexu kationizovaného nosiče s plazmidem Tvorba komplexu nosiče s plazmidem probíhala během inkubace obou komponent ve vhodném vzájemném poměru. Míra asociace byla ovlivňována změnou zetapotenciálu.
6,5 ml 20% roztoku kationizovaného HSA (příprava výše popsána, vybrán HSA z rozmezí 5 až 35 %) bylo přidáno k roztoku plazmidu (vybrán z rozmezí 1:1 až 1:10) v poměru 1:2.
93,5 ml organické fáze sestávající z dichlormethanu s mthanolem v poměru 1:1 s 0,5% přídavkem Klucelu GF bylo 3 0
-52minut temperováno na 20°C a poté byla při průtokové rychlosti 500 ml/min smíchána s roztokem albuminu . Do emulse byly 15 minut pouštěny pulzy o velikosti 65 Wattů. Poté bylo ke směsi přidáno 6,6 mmol glutaraldehydu v methylenchloridu pro zesíčování. Během zesíčování byla směs promíchávána při 2200 otáčkách/min po dobu 80 až 100 minut.
Příklad 6: Zavedení lipofilních skupin
Zavedení lipofilních skupin bylo prováděno acylací za podmínek, které jsou odborníkům dobře známy. Při tomto postupu reaguje derivát karboxylové kyseliny s primárními aminoskupinami albuminu známým adičně-eliminačním mechanismem acylace za vzniku amidu karboxylové kyseliny.
0,1 g chloridu kyseliny olejové bylo smíšeno s 5 až 10 ml bezvodého dioxanu a po kapkách přidáno k suspenzi částic (připraveny tak, jak bylo popsáno části c)) v dioxanu v poměru 1:4 (vybráno z rozmezí 1:1 až 1:10) . Směs byla intenzivně protřepávána. Po přidání nadbytku vodného roztoku amoniaku byla směs 10 minut míchána a lehce okyselena zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Částice byly odděleny centrifugací a zneutralizovány promytím vodou.
Příklad 7: Konjugace ligandů a fúzogenních proteinů na nosiči Spojení ligandů a fúzogenních proteinů s nosným systémem bylo prováděno kovalentní konjugací podle metody SPDP, viz Khawli a další, Int. J. Rad. Appl. Instrum. B 19, strana 289, (1992) a
Candiani a další, Cancer Res. 62, strana 623, (1992). Primární aminoskupiny lysinových zbytků albuminu při tomto postupu reagují se SPDP za vzniku derivátů obsahujících disulfidovou skupinu. Ty lze odborníkům známým způsobem kovalentně navázat na sulfhydrylové skupiny ligandů a fúzogenního proteinu za známých podmínek.
-53200 nmol činidla SPDP v 99,5% ethanolu bylo po dobu 30 minut při pokojové teplotě inkubováno spolu se 74 nmol kationizovaných a lipofilizovaných HSA částic (připraveny podle odstavce c) v PBS. Ke konjugační směsi byl přidán roztok glykoproteinu GP Ebolaviru (připraven podle odstavce a) a fúzogenního proteinu M2 chřipkového viru (připraven podle odstavce b) v poměru 1:1 (vybráno z rozmezí 1:1 až 1:10) . Konjugační směs byla za stálého míchání inkubována přes noc při pokojové teplotě. Nenavázané složky byly odděleny centrifugací.
Příklad 8:
Specifické
Využitelnost specifických vektorů pro zavedení genů do cílových buněk podle vynálezu vektory pro zavedení genů do cílových buněk připravené podle popsaných příkladů se po systémovém podání, výhodně po intravenózním nebo intraarteriálním podání, tkáňově specificky vážou díky svým ligandům přednostně na endotheliální buňky. Po přijmutí těchto vaktorů endozómy dochází k jejich proniknutí do cytoplazmy. Toto proniknutí je umožněno fúzogenním proteinem. Díky tkáňově specifické promotorové sekvenci a promotorovému modulu určenému k regulaci buněčného cyklu dochází k převážné expresy vloženého geu v proliferujících endotheliálních buňkách. Díky vloženému genu se z proliferujících buněk uvolňuje β-glukuronidáza, která štěpí farmakologicky inaktivní β-glukuronidy (promotor léčiva) na aktivní složky. Těmito aktivními složkami mohou být látky, které působí například jako antiproliferativa nebo inhibici růstu proliferujícich inhibici okolních tumorů nebo zánětů. Znamená to, že účinná látka podle vynálezu omezí vznik antiproliferativní nebo cytostatické substance na místo tomorové nebo zánětlivé angiogenze, a díky tomu je i snesitelnost takové léčby dobrá.
cytostatika. Tím dojde k endotheliálních buněk a k
-54Volbou (nevirových) nosičů pro vybraný gen nejsou způsobena žádná rizika mutace pacientových genů, ke kterým by mohlo dojít po aktivaci klidových genomických virů nebo po rekombinaci s divokými viry.
-55INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA:29 párů basí (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: exon (B) UMÍSTĚNÍ:1 až 29 (xi) POPIS SEKVENCE ID.Č. 1:
GAAGG ATCCT GTGC-G GCAAC AACAC AATG
INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 27 párů basí (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: exon (B) UMÍSTĚNÍ:! až 27 (xi) POPIS SEKVENCE ID.Č. 2:
AAAAA GCTTC TTTCC CTTGT CACTA AA
-56INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 18 páru basí (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: exon (B) UMÍSTĚNÍ:1 až 18 (xi) POPIS SEKVENCE ID.Č. 3:
CGGAC TCTGA CCACT GAT
INFORMACE O SEKVENCI ID. Č. 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 18 párů basí (B) TYP: nukleová kyselina (C) POČET VLÁKEN: jedno (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) CHARAKTERISTICKÉ RYSY:
(A) JMÉNO/KLÍČ: exon (B) UMÍSTĚNÍ:1 až 18 (xi) POPIS SEKVENCE ID.Č. 3:
TCGTG GCAGA GGGAG TGT
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Specifické vektory pro zavedení alespoň jednoho genu do cílových buněk některého organismu vyznačuj ící se tím, že obsahují následující komponenty:a) nevirový nosič přenášeného genub) ligand, který je schopen specifické vazby na požadované cílové buňkyc) protein nebo fúzogenní peptid umožňující proniknutí vektoru do cytoplazmy cílové buňkyd) přenášený genVektor podle nároku 1 vyznačující se tím, že jednotlivé komponenty tohoto specifického vektoru jsou na^-vzájem vázány kovalentní a/nebo adsorbční vazbou.
- 3. Vektor podle libovolného z nároků 1 nebo 2 vyznačující se tím, že nevirový nosič (a) je vybrán ze skupiny tvořené proteiny, polypeptidy, polysacharidy, fosfolipidy, kationickými lipidy, glykoproteiny, lipoproteiny nebo lipopolyaminy.
- 4. Vektor podle nároku 3 vyznačující se tím, že nevirový nosič (a) je kationizován pozitivně nabitými postranními skupinxin! a vazba mezi nevirovým nosičem a pozitivně nabitými postranními skupinami je kovalentní nebo adsorbční.
- 5. Vektor podle libovolného z nároků 1 až 4 vyznačující se tím, že nevirový nosič (a) má kovalentě nebo adsorbčně navázané lipofilní postranní skupiny, čímž získá amfifilní vlastnosti.
6 . Vektor v y z n (a) je podle a č u j albumin libovolného ící se nebo xylan. z nároků tím, že 1 až 5 nevirový nosič 7 . Vektor podle libovolného z nároků 1 až 5 v y z n a č u j ící se tím, že se ligand (b) rrtůže specificky vázat na vnější buněčnou membránu zvířecí nebo lidské buňky. t • - 8. Vektor podle nároku 7 vyznačující se tím, že se ligand (b) může specificky vázat na endotheliální buňky a je vybrán ze skupiny tvořené monoklonálními protilátkami se specifitou k endotheliálním buňkám, nebo jejich fragmenty, kininem nebo jeho analogy či homology, glykoproteiny, glykolipidy nebo polysacharidy obsahujícími sacharidové řetězce zakončené manózou, cytokiny, růstovými faktory, adhezivními molekulami nebo obalovými glykoproteiny virů, které mají afinitu k endotheliálním buňkám.
- 9.Vektor tím, podle nároku 7 vyznačuj i c i že se ligand (b) může specificky vázat na buňky hladkého svalstva vybrán ze skupiny tvořené monoklonálními protilátkami se specifitou k aktinu nebo buněčným memránovým receptorům, růstovými faktory nebo obalovými glykoproteiny hladkým svalovým buňkám.virů, které mají afinitu vyznačující se (b) může specificky vázat na vybrán ze skupiny se specifitou k makrofágů a/nebo
- 10. Vektor podle nároku 7 tím, že se ligand makrofágy a/nebo na lymfocyty a je tvořené monoklonálními protilátkami membránovým antigenům na povrchu lymfocytů, intaktními imunoglobuliny nebo Fc fragmenty polyklonálních nebo monoklonálních protilátek specifických k membránovým antigenům makrofágů a/nebo-59lymfocytů, cytokiny, růstovými faktory dále pak peptidy, proteiny, lipidy nebo polysacharidy obsahujícími sacharidové řetězce zakončené manózou a nebo obalovými glykoproteiny virů, proteinem HEF z influenza-C viru mutovaným na nukleotidová pozici 872 nebo štěpným produktem proteinu HEF influenza-C viru, který obsahuje katalytickou triádu serin-71, histidin-368 nebo 369 a kyselinu asparagovou 261.
- 11. Vektor podle nároku 7 vyznačující se tím, že se ligand (b) může specificky vázat na gliové buňky a je vybrán ze skupiny tvořené protilátkami se specifitou k. membránovým strukturám gliových buněk nebo jejich fragmenty, adhezivními molekulami a dále pak peptidy, proteiny, lipidy nebo polysacharidy obsahujícími sacharidové řetězce zakončené manózou, růstovými faktory a obalovými glykoproteiny virů s afinitou ke gliovým buňkám.
- 12. Vektor podle nároku 7 vyznačující se
tím, že se ligand (b) může specificky vázat na krvetvorné buňky a je vybrán ze skupiny tvořené protilátkami nebo jej ich fragmenty se specifitou k některému receptorů pro faktor kmenových buněk, k receptorů pro IL-1 (k receptorů typu I nebo II) , k receptorů pro IL-3 (k receptorů typu -a nebo β), k receptorů pro IL-6 nebo GM-CSF, jakož i intaktními imunoglobuliny nebo Fc fragmenty protilátek s výše uvedenou specifitou a dále pak růstovými faktory jakož i jejich fragmenty schopnými vazby na příslušné receptory. - 13. Vektor podle nároku 7 vyznačuj i-ci se tím, že se ligand (b) může specificky vázat na leukemické buňky nebo buňky tumoru a je vybrán ze skupiny tvořené steroidními hormony, peptidovými hormony, protilátkami, fragmenty protilátek, imunoglobuliny nebo-60Fc-fragmenty, které vykazuji specifickou vazbu k membránovým strukturám na povrchu leukemických buněk jako jsou například CD13, CD14, CD15, CD33, CAMAL, Sialosyl-Le, CD5, CDle, CD23, M38, IL-2 receptory, T-buněčné receptory, CALLA nebo CD19, jakož i růsotvé faktory či jejich fragmenty nebo retiniody.
- 14 .* vyznačuj ícíVektor podle nároku 7 tím, že se ligand (b) může specificky vázat na buňky infikované virem a je vybrán ze skupiny tvořené protilátkami, fragmenty protilátek, intaktními imunoglobuliny nebo specifickou vazbu k infekci tímto virem buňky.Fc-fragmenty, které vykazují virovým antigenúm, které se po exprimují na povrchu infikované
- 15 .Vektor podle nároku 7 vyznačující se tím, že se ligand (b) může specificky vázat na buňky bronchiálního epitelu, jaterní sinusoidální jaterní buňky a je vybrán ze skupiny transferinem, asialoglykoproteiny asialoorosomukoidem, neoglykoproteinem, inzulínem, nebo peptidy, proteiny, buňky, tvořené j ako galaktózou, lipidy nebo polysacharidy zakončenými manózovými zbytky, dále pak intaktními imunoglobuliny nebo Fc-fragmenty, které se specificky vážou na tyto cílové buňky a obalovými glykoproteiny virů s afinitou k cílovým buňkám.
- 16 .Vektor podle libovolného z nároků 1 až 15 vyznačující se tím, že fúzogenní protein (c) je vybrán ze skupiny tvořené hemaglutininem influenza-A nebo B viru, komponentou HA2 hemaglutininu influenza-A nebo B viru, jakož i jejich peptidovými analogy, M2 proteinem influenza-A viru, proteinem HEF influenza-C viru, transmembránovými proteiny filovirú, transmembránovými glykoproteiny viru vztekliny, viru-61vesikulární stomatitidy, Semliki Forest viru, viru klíšúové encefalitidy, fúzogenním proteinem viru HIV, viru Sendai nebo viru respirační syncytialidy, jakož i fragmenty těchto virových proteinů nebo transmembránových glykoproteinů u nichž byla odstraněna jejich transmembránová část.
- 17.Vektor podle vyznačuj (d) je ve formě libovolného ící se plazmidu.z nároků tím, že1 až 16 přenášený gen
- 18 .Léčivo vyznačující se tím, vektor podle libovolného z nároků 1 až 17.že obsahuje
- 19.podle libovolného z pro intravenózní, intrakraniální, nebo lokální zavedení buňky.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19605279A DE19605279A1 (de) | 1996-02-13 | 1996-02-13 | Zielzellspezifische Vektoren für die Einschleusung von Genen in Zellen, Arzneimittel enthaltend derartige Vektoren und deren Verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ41997A3 true CZ41997A3 (en) | 1997-09-17 |
Family
ID=7785279
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ97419A CZ41997A3 (en) | 1996-02-13 | 1997-02-11 | Specific vectors for introducing genes into target cells, medicaments containing such vectors and their use |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5916803A (cs) |
| EP (1) | EP0790312A3 (cs) |
| JP (1) | JPH104979A (cs) |
| KR (1) | KR970062042A (cs) |
| AU (1) | AU716916B2 (cs) |
| CA (1) | CA2197265A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ41997A3 (cs) |
| DE (1) | DE19605279A1 (cs) |
| HU (1) | HUP9700428A3 (cs) |
| ZA (1) | ZA971159B (cs) |
Families Citing this family (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3767222D1 (de) * | 1986-06-11 | 1991-02-14 | Olympia Werke Ag | Farbbandkassette fuer schreib-oder bueromaschinen aehnlicher bauart. |
| CA2198462A1 (en) | 1994-08-26 | 1996-03-07 | Hans-Harald Sedlacek | Genetic therapy of diseases caused by the immune system, said therapy using a cell-specific active substance regulated by the cell cycle |
| GB9506466D0 (en) | 1994-08-26 | 1995-05-17 | Prolifix Ltd | Cell cycle regulated repressor and dna element |
| DE19605279A1 (de) * | 1996-02-13 | 1997-08-14 | Hoechst Ag | Zielzellspezifische Vektoren für die Einschleusung von Genen in Zellen, Arzneimittel enthaltend derartige Vektoren und deren Verwendung |
| DE19617851A1 (de) | 1996-05-03 | 1997-11-13 | Hoechst Ag | Nukleinsäurekonstrukte mit Genen kodierend für Transportsignale |
| DE19639103A1 (de) | 1996-09-24 | 1998-03-26 | Hoechst Ag | Nukleinsäurekonstrukte mit Hybridpromotoren für gentherapeutische Maßnahmen |
| DE19651443A1 (de) | 1996-12-11 | 1998-06-18 | Hoechst Ag | Selbstverstärkende, pharmakologisch kontrollierbare Expressionssysteme |
| DE19701141C1 (de) | 1997-01-16 | 1998-04-09 | Hoechst Ag | Genkonstrukte für durch Proteasen aktivierbare Wirksubstanzen |
| EP0860445A1 (en) | 1997-02-18 | 1998-08-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | New nucleotide sequences for the cell cycle regulated expression of structural genes |
| CA2283536C (en) * | 1997-03-11 | 2009-09-01 | Cambridge Genetics Limited | Compositions and methods for elimination of unwanted cells |
| US5837283A (en) * | 1997-03-12 | 1998-11-17 | The Regents Of The University Of California | Cationic lipid compositions targeting angiogenic endothelial cells |
| CA2302316A1 (en) * | 1997-09-15 | 1999-03-25 | Genetic Immunity, Llc. | Method of delivering genes to antigen presenting cells of the skin |
| DE19743135A1 (de) | 1997-09-30 | 1999-04-01 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Biologisch verträgliche niedermolekular Polyethylenimine |
| DE19751587A1 (de) | 1997-11-21 | 1999-07-29 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Onkogen- oder virusgesteuerte Expressionssysteme |
| DE19756975A1 (de) | 1997-12-20 | 1999-06-24 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Bindungspartner für Inhibitoren von cyclinabhängigen Kinasen und ihre Verwendung zur Suche nach Inhibitoren, zur Diagnose oder zur Therapie einer Erkrankung |
| US20030118567A1 (en) * | 1999-03-26 | 2003-06-26 | Stewart Duncan John | Cell-based therapy for the pulmonary system |
| US9585916B2 (en) * | 1999-03-26 | 2017-03-07 | Northern Therapeutics Inc. | Cell based therapy for the pulmonary system |
| US6482406B1 (en) | 1999-03-26 | 2002-11-19 | Duncan J. Stewart | Cell-based gene therapy for the pulmonary system |
| CA2266805C (en) | 1998-03-27 | 2015-04-28 | An-Go-Gen Inc. | Cell-based gene therapy in the treatment of pulmonary disorders |
| CZ121599A3 (cs) | 1998-04-09 | 1999-10-13 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Jednořetězcová molekula vázající několik antigenů, způsob její přípravy a léčivo obsahující tuto molekulu |
| DE19900743A1 (de) | 1999-01-12 | 2000-07-13 | Aventis Pharma Gmbh | Neue komplexbildende Proteine |
| DE19921419A1 (de) * | 1999-05-08 | 2000-11-16 | Univ Ruprecht Karls Heidelberg | Verfahren zum spezifischen Nachweis und zur Identifizierung retroviraler Nukleinsäuren / Retroviren in einem Untersuchungsgut |
| DE19929104A1 (de) * | 1999-06-24 | 2000-12-28 | Aventis Pharma Gmbh | Neue Vektorkomplexe und deren Verwendung für die Gentherapie |
| DE60038664T2 (de) * | 1999-11-10 | 2009-05-28 | Japan Science And Technology Agency, Kawaguchi | Genträger |
| US6372722B1 (en) | 2000-01-19 | 2002-04-16 | Genteric, Inc. | Method for nucleic acid transfection of cells |
| JP4751556B2 (ja) | 2000-02-28 | 2011-08-17 | ジーンシーグス， インコーポレイテッド | ナノカプセルカプセル化システムおよび方法 |
| US6319715B1 (en) | 2000-04-21 | 2001-11-20 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method of enhancing the delivery of nucleic acids using silica nanoparticles |
| AU2002237559B2 (en) * | 2001-03-13 | 2006-10-26 | Japan Science And Technology Agency | Gene carriers with the use of polysaccharide and process for producing the same |
| US8241622B2 (en) * | 2001-07-13 | 2012-08-14 | University Of Iowa Research Foundation | Adeno-associated virus vectors with intravector heterologous terminal palindromic sequences |
| US20060199778A1 (en) * | 2001-09-19 | 2006-09-07 | Rutledge Ellis-Behnke | Methods and products related to non-viral transfection |
| US20040038303A1 (en) * | 2002-04-08 | 2004-02-26 | Unger Gretchen M. | Biologic modulations with nanoparticles |
| CA2529055C (en) * | 2003-06-19 | 2013-10-15 | Advanced Bionutrition Corp. | Improved absorption of fat-soluble nutrients |
| DE10337770A1 (de) * | 2003-08-14 | 2005-03-24 | TransMIT Gesellschaft für Technologietransfer mbH | Endothelzellspezifisches Gentransfersystem |
| US8062891B2 (en) | 2003-10-24 | 2011-11-22 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides to plants |
| CA2543257C (en) | 2003-10-24 | 2013-12-31 | Gencia Corporation | Methods and compositions for delivering polynucleotides |
| US8507277B2 (en) | 2003-10-24 | 2013-08-13 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides |
| US20090123468A1 (en) | 2003-10-24 | 2009-05-14 | Gencia Corporation | Transducible polypeptides for modifying metabolism |
| US8133733B2 (en) | 2003-10-24 | 2012-03-13 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides to target tissues |
| US20090208478A1 (en) * | 2003-10-24 | 2009-08-20 | Gencia Corporation | Transducible polypeptides for modifying metabolism |
| WO2006122401A1 (en) * | 2005-05-16 | 2006-11-23 | Institut De Recherches Cliniques De Montreal/I.R.C.M. | Negative regulation of nk cell functions by eat-2, a sap-related adaptor expressed in innate immune cells |
| EP2424879A4 (en) * | 2009-04-29 | 2013-06-05 | Ca Minister Health & Welfare | INFLUENZA VACCINE |
| EP3296398A1 (en) * | 2009-12-07 | 2018-03-21 | Arbutus Biopharma Corporation | Compositions for nucleic acid delivery |
| CN111700877A (zh) | 2014-09-03 | 2020-09-25 | 吉倪塞思公司 | 治疗性纳米粒子和相关的组合物、方法和系统 |
| EP3265112B1 (en) * | 2015-01-19 | 2025-12-24 | Technion Research & Development Foundation Limited | Ubiquitin ligase kpc1 and p50 for use in the treatment of cancer |
| WO2017139381A1 (en) | 2016-02-08 | 2017-08-17 | University Of Iowa Research Foundation | Methods to produce chimeric adeno-associated virus/bocavirus parvovirus |
| CA3016985C (en) | 2016-03-07 | 2023-07-04 | University Of Iowa Research Foundation | Aav-mediated expression using a synthetic promoter and enhancer |
| WO2017205739A1 (en) | 2016-05-26 | 2017-11-30 | University Of Iowa Research Foundation | cis AND trans REQUIREMENTS FOR TERMINAL RESOLUTION OF HUMAN BOCAVIRUS 1 |
| US11142775B2 (en) | 2017-01-13 | 2021-10-12 | University Of Iowa Research Foundation | Bocaparvovirus small noncoding RNA and uses thereof |
| EP3826675A1 (en) * | 2018-07-24 | 2021-06-02 | January Therapeutics, Inc. | Nanoparticle compositions |
| CN113710229B (zh) | 2019-02-25 | 2026-01-06 | 芝加哥大学 | 用与抗炎剂连接的ecm亲和肽治疗炎症性和自身免疫性病症的方法和组合物 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5166320A (en) * | 1987-04-22 | 1992-11-24 | University Of Connecticut | Carrier system and method for the introduction of genes into mammalian cells |
| KR0154872B1 (ko) * | 1987-12-21 | 1998-10-15 | 로버트 에이. 아미테이지 | 발아하는 식물종자의 아크로박테리움 매개된 형질전환 |
| US5460831A (en) * | 1990-06-22 | 1995-10-24 | The Regents Of The University Of California | Targeted transfection nanoparticles |
| US5521291A (en) | 1991-09-30 | 1996-05-28 | Boehringer Ingelheim International, Gmbh | Conjugates for introducing nucleic acid into higher eucaryotic cells |
| SE503225C2 (sv) | 1991-10-30 | 1996-04-22 | Leif Lindholm Konsult Ab | Virus-antikroppskomplex för införing av virus i mammalieceller |
| EP0650370A4 (en) * | 1992-06-08 | 1995-11-22 | Univ California | METHODS AND COMPOSITIONS TARGETED ON SPECIFIC TISSUES. |
| DE4412629A1 (de) * | 1993-04-14 | 1995-01-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Nukleinsäure-transferpeptide und deren Verwendung zur Einschleusung von Nukleinsäuren in eukaryontische Zellen |
| US5578475A (en) * | 1993-07-12 | 1996-11-26 | Life Technologies, Inc. | Composition and methods for transfecting eukaryotic cells |
| US5631236A (en) * | 1993-08-26 | 1997-05-20 | Baylor College Of Medicine | Gene therapy for solid tumors, using a DNA sequence encoding HSV-Tk or VZV-Tk |
| DE4339922C1 (de) * | 1993-09-03 | 1994-10-06 | Max Planck Gesellschaft | Vektor für Leber-Gentherapie |
| IL112372A (en) * | 1994-02-07 | 2001-08-26 | Res Dev Foundation | Non-viral vector for the delivery of genetic information to cells |
| EP0753069A1 (en) | 1994-04-15 | 1997-01-15 | Targeted Genetics Corporation | Gene delivery fusion proteins |
| DE4421079C1 (de) * | 1994-06-16 | 1995-08-17 | Peter Dr Rer Nat Seibel | Chimäres Peptid-Nukleinsäure-Fragment, Verfahren zu seiner Herstellung und die Verwendung des Fragments zur zielgerichteten Nukleinsäureeinbringung in Zellorganellen und Zellen |
| DE4426429A1 (de) * | 1994-07-26 | 1996-02-01 | Boehringer Ingelheim Int | Verfahren zum Einführen von DNA in höhere eukaryotische Zellen |
| GB9506466D0 (en) | 1994-08-26 | 1995-05-17 | Prolifix Ltd | Cell cycle regulated repressor and dna element |
| DE19524720A1 (de) | 1995-07-12 | 1997-01-16 | Hoechst Ag | Zellspezifische Gentherapie mit Hilfe eines neuen Promotors für den "Tissue Inhibitor of Metalloproteinasn-3" |
| DE19605279A1 (de) * | 1996-02-13 | 1997-08-14 | Hoechst Ag | Zielzellspezifische Vektoren für die Einschleusung von Genen in Zellen, Arzneimittel enthaltend derartige Vektoren und deren Verwendung |
| DE19605274A1 (de) | 1996-02-13 | 1997-08-14 | Hoechst Ag | Nukleinsäurekonstrukte für die zellzyklusregulierte Expression von Genen, derartige Konstrukte enthaltende Zellen sowie deren Verwendung zur Herstellung von Heilmitteln |
-
1996
- 1996-02-13 DE DE19605279A patent/DE19605279A1/de not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-01-31 EP EP97101506A patent/EP0790312A3/de not_active Withdrawn
- 1997-02-11 CZ CZ97419A patent/CZ41997A3/cs unknown
- 1997-02-11 CA CA002197265A patent/CA2197265A1/en not_active Abandoned
- 1997-02-11 AU AU12651/97A patent/AU716916B2/en not_active Ceased
- 1997-02-12 HU HU9700428A patent/HUP9700428A3/hu unknown
- 1997-02-12 ZA ZA9701159A patent/ZA971159B/xx unknown
- 1997-02-13 JP JP9029462A patent/JPH104979A/ja active Pending
- 1997-02-13 US US08/799,825 patent/US5916803A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-13 KR KR1019970004185A patent/KR970062042A/ko not_active Ceased
-
1999
- 1999-03-29 US US09/280,068 patent/US6358524B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE19605279A1 (de) | 1997-08-14 |
| HUP9700428A2 (hu) | 1998-06-29 |
| AU716916B2 (en) | 2000-03-09 |
| EP0790312A3 (de) | 1999-09-01 |
| HUP9700428A3 (en) | 2003-08-28 |
| AU1265197A (en) | 1997-08-21 |
| JPH104979A (ja) | 1998-01-13 |
| US5916803A (en) | 1999-06-29 |
| HU9700428D0 (en) | 1997-03-28 |
| US6358524B1 (en) | 2002-03-19 |
| ZA971159B (en) | 1997-11-13 |
| EP0790312A2 (de) | 1997-08-20 |
| KR970062042A (ko) | 1997-09-12 |
| CA2197265A1 (en) | 1997-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ41997A3 (en) | Specific vectors for introducing genes into target cells, medicaments containing such vectors and their use | |
| Erbacher et al. | Glycosylated polylysine/DNA complexes: gene transfer efficiency in relation with the size and the sugar substitution level of glycosylated polylysines and with the plasmid size | |
| Midoux et al. | Specific gene transfer mediated by lactosylated poly-L-lysine into hepatoma cells | |
| Simões et al. | Gene delivery by negatively charged ternary complexes of DNA, cationic liposomes and transferrin or fusigenic peptides | |
| Nobusawa et al. | Comparison of complete amino acid sequences and receptor-binding properties among 13 serotypes of hemagglutinins of influenza A viruses | |
| Ohuchi et al. | Regulation of receptor binding affinity of influenza virus hemagglutinin by its carbohydrate moiety | |
| CA2192687C (en) | Use of a bacterial component to enhance targeted delivery of polynucleotides to cells | |
| CN1271992C (zh) | 作为遗传物质转移系统的阳离子病毒体 | |
| Bagai et al. | Hemagglutinin-neuraminidase enhances F protein-mediated membrane fusion of reconstituted Sendai virus envelopes with cells | |
| JPH09511382A (ja) | 抗ｂ型肝炎性ポリ及びオリゴヌクレオチド | |
| Derrien et al. | Muramyl dipeptide bound to poly-L-lysine substituted with mannose and gluconoyl residues as macrophage activators | |
| Niidome et al. | Gene transfer into hepatoma cells mediated by galactose-modified α-helical peptides | |
| JP2001515051A (ja) | 核酸送達用の脂質−ポリアミド結合体および組成物 | |
| US5733762A (en) | Complexes of nucleic acid and polymer, their process of preparation and their use for the transfection of cells | |
| Tikchonenko et al. | Transfer of condensed viral DNA into eukaryotic cells using proteoliposomes | |
| Bitzer et al. | Sendai virus efficiently infects cells via the asialoglycoprotein receptor and requires the presence of cleaved F0 precursor proteins for this alternative route of cell entry | |
| KR19990063814A (ko) | 핵산 형질감염용으로 유용한 약학 조성물 및 이의 용도 | |
| Madon et al. | Receptor–Mediated Delivery of Hepatitis B Virus Dna and Antisense Oligodeoxynucleotides to Avian Liver Cells | |
| Montier et al. | Efficient gene transfer into human epithelial cell lines using glycosylated cationic carriers and neutral glycosylated co-lipids | |
| WO2000034343A1 (en) | Method for the immobilization of oligonucleotides | |
| KR102417845B1 (ko) | 시알산 화합물이 결합된 바이러스 수용체 모방 화합물 | |
| CZ188299A3 (cs) | Transfekční přípravek vhodný pro genovou terapii, který obsahuje rekombinantní virus a transfekční činidlo | |
| CN116115769B (zh) | 一种磷酸核苷化蛋白质胞内递送体系及其制备方法与应用 | |
| KR100869195B1 (ko) | 양이온성 ｄｏｓｐｅｒ 비로솜 | |
| CN121463960A (zh) | 一种含有阳离子脂质的药物组合物及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |