CZ84399A3

CZ84399A3 - Tricyklické inhibitory farnesyl protein transferázy

Info

Publication number: CZ84399A3
Application number: CZ99843A
Authority: CZ
Inventors: Arthur G. Taveras; Alan K. Mallams; Adriano Afonso
Original assignee: Schering Corporation
Priority date: 1996-09-13
Filing date: 1997-09-11
Publication date: 1999-11-17
Also published as: NO991234L; ATE286046T1; ID21699A; ES2235252T3; EP0929545A1; HUP0000121A2; TR199901276T2; DE69732120D1; CN1237165A; DE69732120T2; WO1998011093A1; NZ334453A; CN1104427C; AU4337997A; PL332242A1; IL128928A0; BR9712831A; KR20000036120A; CA2266016C; JP2001500510A

Description

Tricyklické inhibitory farnesyl protein transferázy

Oblast techniky

WO 95/10516, publikovaný 20. dubna 1995 popisuje tricyklické sloučeniny užitečné k inhibici farnesyl protein transferázy.

Z pohledu současného zájmu o inhibitory farnesyl protein transferázy by byly vítaným příspěvkem sloučeniny užitečné k inhibici farnesyl protein transferázy. Tento vynález poskytuje takovýto příspěvek .

Dosavadní stav techniky

Tento vynález poskytuje sloučeniny užitečné pro inhibici farnesyl protein transferázy (FPT). Sloučeniny tohoto vynálezu jsou znázorněny obecným vzorcem I:

kde jeden ze skupiny a, b, c, a d představuje N nebo NR⁹, kde R⁹je O', -CH3 nebo -(CH₂)_nCO₂H, kde n je 1 až 3 a zbývající skupiny a, b, c a d představují CR¹ nebo CR²; nebo každý ze skupiny a, b, c a d jsou nezávisle vybrány ze skupiny CR¹ nebo CR² ; každé R¹ a každé R² je nezávisle vybráno z vodíku, halogenu, -CF3, -OR¹⁰ (např.

-OCH3), -COR¹⁰, -SR¹⁰, (např. -SCH3 a -SCH2C6H5), -S(O)tR¹¹ (kde t je 0,1 nebo 2, např. -SOCH3 a -SO2CH₃), -SCN, -N(R¹⁰)2, -NR¹⁰R¹¹, -NO2, -OC(O)R¹⁰, -CO2R¹⁰, -OCO2R¹¹, -CN, -NHC(O)R¹⁰, -NHSO2R¹⁰, -CONHR¹⁰ -CONHCH₂CH₂OH, -NR¹⁰COOR¹¹.

·· ·· ·· ···· · · ·· ···· ·· · t · · · • · · · ·· · · · · · • · ··· · · · · · ··· ··· ······ · · ·· · · ·· · ·· · ·

(II),

-SR¹¹C(O)OR¹¹ (např. -SCH2CO2CH3), -SR¹¹N(R⁷⁵)2, kde každé R⁷⁵ je nezávisle vybráno ze skupiny vodíku a -C(O)OR¹¹ (např. -S(CH2)2NHC(O)O-t-butyl a -S(CH2)2NH2, benztriazol-1 -yl-oxy, tetrazol-5-yl-thio, nebo substituovaný tetrazol-5-yl-thio (např. alkylem substituovaný tetrazol-5-yl-thio jako je 1-metyl-tetrazol-5-yl-thio), alkinyl, alkenyl nebo alkyl, zmíněná alkylová nebo alkenylová skupina volitelně substituovaná halogenem, -OR¹⁰ nebo -CO2R¹⁰;

R³ a R⁴ jsou stejné nebo odlišné, každé nezávisle představuje vodík, jakýkoliv substituent R¹ a R², nebo R³ a R⁴ společně představují nasycený nebo nenasycený kruh C5 až C7 spojený s benzenovým kruhem (kruh III);

Rs, R6, R7 nebo R₈ každé nezávisle představuje vodík, -CF₃, -COR¹⁰, alkyl nebo aryl, zmíněná alkylová nebo arylová skupina volitelně substituovaná -OR¹⁰, -SR¹⁰, -S(O)tR¹¹, -NR¹⁰COOR¹¹, -N(R¹⁰)2, -NO₂, -COR¹⁰, -OCOR¹⁰, -OCO2R¹¹, -CO2R¹⁰, OPO₃R¹⁰ nebo se R⁵ kombinuje s R⁶ a představuje =0, nebo =S a/nebo R⁷ se kombinuje s R⁸ a představuje =0 nebo =S;

R¹⁰ představuje vodík, alkyl, aryl nebo aralkyl (např. benzyl);

R¹¹ představuje alkyl nebo aryl;

X představuje N, CH nebo C, kde C může obsahovat variantně dvojnou vazbu (zobrazenou tečkovanou čarou) na uhlíkový atom 11;

tečkovaná čára mezi uhlíkovými atomy 5 a 6 představuje variantně dvojitou vazbu, pokud je tato dvojitá vazba přítomna, A a B nezávisle představují -R¹⁰, halogen, -OR¹¹, -0C02R¹¹ nebo -OC(O)R¹⁰, a pokud není přítomna dvojitá vazba mezi uhlíkovými atomy 5 a 6, A a B nezávisle představují H2, -(0R¹¹)2; vodík a halogen, dihalogen, alkyl a vodík, (alkyl)2, vodík a -OC(O)R¹⁰, vodík a -OR¹⁰, =0, aryl a vodík, =NOR¹⁰ nebo -0-(CH2)_p-0-, kde p je 2, 3 nebo 4; a

W představuje heteroarylovou, arylovou, heterocykloalkylovou nebo cykloalkylovou skupinu.

Sloučeniny tohoto vynálezu: (i) silně inhibují farnesyl protein transferázu, ale ne geranylgeranyl protein transferázu I in vitro; (ii) blokují fenotypové změny vyvolané tvorbou transformovaného genu Ras, který je farnesylovým příjemcem ale ne tvorbou transformovaného genu Ras, který je geranylgeranylovým příjemcem; (iii) blokuje intracelulární výrobu Ras, který je farnesylovým příjemcem, ale ne Ras který je geranylgeranylovým příjemcem a (iv) blokuje abnormální buněčný růst v kultuře ovlivněné transformovaným genem Ras.

Sloučeniny tohoto vynálezu inhibují farnesyl protein transferázu a farnesylaci onkogenního proteinu Ras. Proto tento vynález dále poskytuje způsob inhibice farnesyl protein transferázy (např. Ras farnesyl protein transferázy) u savců, zvláště u člověka, podáváním účinného množství výše popisovaných tricyklických sloučenin. Podávání sloučenin tohoto vynálezu pacientům k inhibici farnesyl protein transferázy je užitečné při léčbě níže popsaných zhoubných nádorů.

Tento vynález poskytuje způsob inhibice nebo léčby abnormálního buněčného růstu, včetně transformovaných buněk, podáváním účinného množství sloučeniny tohoto vynálezu. Abnormální buněčný růst se týká růstu buněk nezávislého na normálních regulačních mechanismech (např. ztráta kontaktní inhibice). Toto zahrnuje abnormální růst: (1) nádorových buněk s exprimovaným aktivovaným Ras onkogenem; (2) nádorových buněk, u kterých je protein Ras aktivován jakožto výsledek onkogenní mutace jiného genu; a (3) benigní a maligní buňky jiných proliferativních onemocnění u kterých se vyskytuje aberantní aktivace Ras.

Tento vynález poskytuje způsob inhibice nebo léčby nádorového růstu podáváním účinného množství tricyklických sloučeni, zde popisovaných, savcům (např. člověku) v případě nutnosti takové léčby. Tento vynález poskytuje zejména způsob inhibice nebo léčby nádorového růstu, kde je exprimován aktivovaný onkogen Ras, podáváním účinného množství výše popisovaných sloučenin. Příklady nádorů, které mohou být inhibovány nebo léčeny zahrnují bez omezení zhoubné karcinomy plic (např. adenokarcinom plic), karcinom slinivky břišní (např. karcinom slinivky jako je exokrinní karcinom slinivky břišní), karcinomy tlustého střeva (např. kolorektální karcinomy jako jsou adenokarcinom tlustého střeva a adenom tlustého střeva), myeloidní leukémie (jako např. akutní myeloidní leukémie (AML)), folikulární karcinom štítné žlázy,

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 999 9 9 9 9 9 999 999 • 9 9 9 · 9 9 9 _Λ 99 99 99 9 ·· ·· myelodysplastický syndrom (MDS), karcinom močového měchýře, epidermální karcinom, karcinom prsu a karcinom prostaty.

Věří se, že tento vynález také poskytuje způsob inhibice nebo léčby proliferativních onemocnění, jak benigních tak maligních, kde jsou proteiny Ras aberantně aktivovány jakožto důsledek onkogenní mutace jiných genů např. samotný gen Ras není aktivován mutací do onkogenní podoby zmíněnou inhibici nebo léčbou, které je dosaženo podáním účinného množství tricyklických sloučenin zde popisovaných savcům (např. člověku) v případě nutnosti takovéto léčby. Např. benigní proliferativní onemocnění neurofibromatóza nebo nádory, u kterých je Ras aktivován díky mutaci nebo přeexprimování tyrozin kinázových onkogenů (např. neu, src, abl, Ick a fyn) mohou být inhibovány nebo léčeny tricyklickými sloučeninami zde popisovanými.

Tricyklické sloučeniny jsou v tomto vynálezu použitelné k inhibici nebo léčbě růstu buněk. Bez vazby na teorii se věří, že tyto sloučeniny plní svou funkci přes inhibici funkce G-proteinu. Tak např. ras p21, kde G-protein je blokován isoprenylací, a tím jsou tyto sloučeniny užitečné k léčbě proliferativních onemocnění jako je nádorový růst a zhoubné nádory. Bez vazby na teorii se věří, že sloučeniny inhibují ras farnesyl protein transferázu a tím vykazují antiproliferativní aktivitu proti ras transformovaným buňkám.

Podstata vynálezu

Jak je zde uvedeno, následující pojmy jsou použity tak jak jsou níže definovány, pokud není uvedeno jinak.

MH+ znamená molekulu hmotnostního spektra, která obsahuje vodíkový kation; benztriazol-1-yl-oxy je znázorněn vzorcem III:

(III), ·· ·· • · 9 9 · • · · · ·

• ·

-methyl-tetrazol-5-yl-thio je znázorněn vzorcem IV:

' Γ

ch₃ (IV), acyl- představuje -C(O)-alkyl, -C(O)-alkenyl, -C(O)-alkinyl, -C(O)-cykloalkyl, -C(O)-cykloalkenyl nebo -C(O)-cykloalkinyl;

alkenyl představuje nerozvětvené nebo rozvětvené uhlíkové řetězce, které obsahují alespoň jednou mezi atomy uhlíku dvojnou vazbu a obsahují 2 až 12 atomů uhlíku, s výhodou 2 až 6 atomů uhlíku a nejvýhodněji 3 až 6 atomů uhlíku;

alkinyl představuje nerozvětvené nebo rozvětvené uhlíkové řetězce, které obsahují alespoň jednou mezi atomy uhlíku trojnou vazbu a obsahují 2 až 12 atomů uhlíku, s výhodou 2 až 6 atomů uhlíku;

alkyl (včetně alkylové části alkoxy-, aralkyl a heteroarylalkylové skupiny představuje nerozvětvené nebo rozvětvené uhlíkové řetězce, které obsahují jeden až 20 atomů uhlíku, s výhodou 1 až 6 atomů uhlíku;

aralkyl představuje arylovou skupinu, jak je definováno níže, vázanou k alkylové skupině, jak je definováno výše, s výhodou je alkylovou skupinou -CH2-, (např. benzyl);

aryl (včetně arylové části aralkylové, aryloxylové a arylalkyloxylové skupiny) představuje skupinu cyklických uhlovodíků, které obsahují 6 až 15 atomů uhlíku a mají alespoň jedno aromatické jádro (např. aryl je fenylové jádro), se všemi možnými substituovatelnými atomy uhlíku skupiny cyklických uhlovodíků, které jsou určeny jako možné body k připojení, zmíněné skupiny cyklických uhlovodíků volitelně substituované (např. 1 až 3) s jedním nebo více halogeny, alkylovou skupinou, alkoxylovou skupinou, fenoxylovou skupinou, CF₃, aminoskupinou, alkylaminoskupinou, dialkylaminoskupinou, -COOR¹⁰ nebo -NO₂;

aroyl představuje C(O)-aryl, kde aryl je definován výše;

-CH₂-imidazolyl představuje imidazolylovou skupinu vázanou jakýmkoliv substituovatelným uhlíkem imidazolového kruhu k -CH₂-, jak je znázorněno vzorcem V:

• ·· toto to··* • · to ·· · • · to ·· · • ··· ·· ·· • · · · · ··· ··· ·· ·· • toto · to · · · • · · to to · • ·

(V), jako např. -CH2-(2-, 4- nebo 5-) imidazolyl, např. vzorec č. VI:

cykloalkyl představuje nasycené cyklické uhlovodíkové kruhy nevětvené nebo větvené s 3 až 20 atomy uhlíku, s výhodou 3 až 7 atomy uhlíku;

cykloalkenyl představuje cyklický uhlovodíkový kruh, který má 3 až 8 atomů uhlíku a alespoň jednou je mezi dvěma atomy uhlíku kruhu dvojná vazba;

cykloalkinyl představuje cyklický uhlovodíkový kruh s alespoň 8 atomy uhlíku, s výhodou 8 až 15 atomů uhlíku a alespoň jednou trojnou vazbou mezi dvěma uhlíky takového řetězce;

halogenová skupina představuje fluor, chlór, bróm a jód;

heteroarylová skupina představuje cyklické skupiny, volitelně substituované s R³ a R⁴, které mají alespoň jeden heteroatom vybraný z O, S, a N, zmíněný heteroatom přerušuje strukturu cyklického uhlovodíkového kruhu a obsahuje dostatečný počet delokalizovaných π-elektronů k zajištění aromatického charakteru, s aromatickou heterocyklickou skupinou obsahující s výhodou 2 až 14 atomů uhlíku;

příklady zahrnují: (1) thienyl (např. 2- nebo 3-thienyl); (2) imidazolyl (např., (2-, 4nebo 5-) imidazolyl); (3) triazolyl (např., 3- nebo 5-[1,2,4-triazolyl], 3-amino-1,2,4triazolyl); (4) tetrazolyl; (5) substituovaný tetrazolyl jako např. sloučenina obecného vzorce VII:

N—N 7 (VII), • · • ·· · · • « · • · · • ·· · kde R¹² představuje: (a) aryl (např. fenyl), (b) aralkyl (např. benzyl), (c) heteroarylalkyl (heteroaralkyl), (d) alkyl (např. methyl), nebo (e) jejich substituované deriváty (např. zde zmíněné substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající se z: -OR¹¹, -N(R¹⁰)₂, alkyl, aryl a heteroaryl), je stanoveno, že zmíněný substituent není na a uhlíku alkylové skupiny (d) (tj., když R¹² je zmíněný alkylový substituent (e), který není na a uhlíku zmíněné alkylové skupiny; (6) thiazolyl (nebo thiazyl) (např., 2-, 4- nebo

5-thiazolyl); (7) pyrimidinyl (např. 2-pyrazinyl); (9) pyridazinyl (např. 3- nebo

4- pyridazinyl; (10) triazinyl (např. 2-, 4- nebo 6-[1,3,5-triazinylj); (11)3- nebo

5- [1,2,4-thiadizolyl]; (12) benzoxazolyl (např. 2-benzoxazolyl); (13) N-substituovaný

3-pyrazolyl, (14) oxazolyl (např. 2-, 4- nebo 5-oxazolyl); (15) 2-, nebo 4-pyridyl nebo pyridyl N-oxid (volitelně substituovaný R³ a R⁴), kde pyridyl N-oxid může být znázorněn vzorcem Vlil:

(Vlil) (16) izoxazolyl; (17) benzizoxazolyl; (18) benzimidazolyl; (19) radikály odvozené od purinu (např. 2-, 6-, nebo 8-); (20) radikály odvozené od adeninu (6- nebo 8adeninyl), (21) izoquinolinyl (2- nebo 8-); (22) quinolinyl (2- nebo 4-); (23) pyridopyrazinyl (2-, 3-, 5- nebo 7-); (24) nafthyridinyl (2-, 4-, 5- nebo 7); (25) izothiazolyl; (26) furazanyl; a (27) oxadiazolyl (např. 1,2,4-oxadiazolyl, 5-amino-1,2,4-oxadiazolyl a

3-amino-1,2,4-oxadiazolyl).

Heteroarylalkyl představuje heteroarylovou skupinu, jak je výše definováno, vázanou na alkylovou skupinu, jak je výše definováno, s výhodou je alkylovou skupinou —CH₂- (např. -CH₂-(4- nebo 5-)imidazolyl);

heterocykloalkyl představuje nasycený, rozvětvený nebo nerozvětvený cyklický uhlovodíkový kruh, který obsahuje 3 až 15 atomů uhlíku, s výhodou 4 až 6 atomů uhlíku, kde cyklický uhlovodíkový kruh je přerušen 1 až 3 hetero skupinami vybranými z

99 • 9 9 9 9 » 9 · 9 9 • 9 999 999 • · · • ·· ·· ·· «· • · · · · · • · · · 99 • · 999 9 9 9 • · 9 9 9

99 99 ·♦ ····

-O, -S-, -NR¹⁰- (kde R¹⁰ je definováno výše) nebo -NR³²-, kde R³²je vybráno ze skupiny skládající se z:

(1) heteroaryl, (2) heterocykloalkyl, (3) acyl, (4) aroyl, (5) alkoxykarbonyl, (6) aryloxykarbonyl, (7) arylalkyloxykarbonyl, (8) sulfonyl [např. -SO₂R¹⁴, kde R¹⁴je vybráno ze skupiny skládající se z následujících: alkyl, heteroaryl, aralkyl a heteroaralkyl] a (9) fosfonyl [např. -P(O)(OR¹⁶)₂-, kde R¹⁶ je např. alkyl (např. ethyl)], vyhovující heterocykloalkylové skupiny zahrnují:

(1) tetrahydrofuranyl (např. 2- nebo 3-tetrahydrofuranyl), (2) tetrahydrothienyl (např. 2- nebo 3-tetrahydrothienyl), (3) piperidinyl (např. 2-, 3- nebo 4- piperidinyl), (4) pyrrolidinyl (např. 2- nebo 3- pyrrolidinyl), (5) piperazinyl (např. 2- nebo 3- piperazinyl), (6) dioxanyl (např. 2-dioxanyl), (7) tetrahydopyranyl, (8) pyranosidyl (tj. radikál odvozený od pyranosidů), např. pyranóza (např. glukopyranóza, mannopyranóza a galaktopyranóza), kde jedna nebo více -OH skupin jsou acylovány za vzniku sloučeniny obecného vzorce IX:

-O-C-R20 (IX), (také zastoupené jako -OCOR²⁰ nebo -OC(O)R²⁰) (např. -OCOCH₃) skupina, příklady zahrnují glukosidy (glukosidily) obecného vzorce X:

OCOR²⁰ (X), ·· ·· • · · · • · · 9 • · · ·· • Β BB

···« ♦

·· ·« • · Β ·

4 4 4

449 444

4

94 kde R²⁰ je alkyl (např. methyl);

(9) furanosidyl (tj. radikál odvozený od furanosidů, např. ribofuranóza a deoxyribofuranóza), např. furanóza, kde je jedna nebo více -OH skupin acylovány za vzniku -O-(O)CR²⁰ (např. -O-(O)CCH₃) skupiny, příklady zahrnují furanosidy obecného vzorce XI:

(XI), kde R²⁰ je definováno výše;

(10) radikál od trimethylen oxidu, např. 3-oxetanyl;

(11) radikál od azetidinu;

(12) 1-azacykloheptanyl;

(13) perhydroizoquinolinyl;

(14) dekahydroquinolinyl;

(15) 1,4-dioxanyl;

(16) 1,3-dioxanyl;

(17) thiazolidinyl;

(18) cyklické guanidiny (Y je NR²²) nebo cyklické amidiny (Y je CH₂) obecného vzorce XII:

(XII), kde n je 1 nebo 2; Y je znázorněno obecným vzorcem XIII:

_r24 (XIII),

44

4 4 4 • 4 4 ·

444 444

4

4 4 4 ·· • ♦ 4 4 • · 4 4 • 4 ·44 4

4 4 • 4 4«

4* 4444

4 4

4· · a R²⁴je vybráno ze skupiny skládající se z: vodíku, alkylarylu a aralkylu, příklady cyklických guanidinů zahrnují skupinu obecného vzorce XIV:

N —(CH

2J_n (XIV), kde Y je -NR²⁴ a R²⁴ je vodík a n je 1; příklady cyklických amidinů zahrnují sloučeniny, kde Y je CH₂ a n je 1.

Následující rozpouštědla a činidla jsou uváděna ve zkratkách: ethanol (EtOH); methanol (MeOH); kyselina octová (HOAc nebo AcOH); ethylacetát (EtOAc); N,N-dimethylformamid (DMF); trifluoroctová kyselina (TFA); anhydrid kyseliny octové (TFAA); 1-hydroxybenztriazol (HOBT); 1-(3-dimethilaminopropyl)-3-etyl karbodiimid hýdrochlorid (DEC); diizobutylaluminium hydrid (DIBAL); 4-methylmorfolin (NMM).

Vztah k pozici substituentů R¹, R², R³ a R⁴ je na základě číslované kruhové struktury obecného vzorce XV:

Znalci z oboru také ocení, že na 11. vazebném uhlíku je jak S tak i R stereochemie obecného vzorce XVI:

····

99

9 9 9

9 9 · ♦ · · *«· • · ·· ·· (xvi),

9 99 99

9 9 9 9 9 • 9 9 4 9 9 9

9 999 9 9 9 9

Mezi sloučeniny obecného vzorce I patří také sloučeniny, kde spodní piperidinylovou skupinou je 4- nebo 3- piperidinylová skupina, např. sloučeniny obecného vzorce XVIII:

(XVIII),

Mezi sloučeniny obecného vzorce I patří sloučeniny, kde R² a R⁴ jsou vodíky, a R¹a R³ jsou halogeny (s výhodou nezávisle vybrané z brómu nebo chlóru). Např. R¹ je bróm a R³ je chlór. Tyto sloučeniny zahrnují i sloučeniny, kde R¹ je na 3. pozici a R³ je na 8. pozici, např. 3-Br a 8-CI.

Sloučeniny obecného vzorce I také zahrnují sloučeniny, kde R² je vodík, a R¹, R³ a R⁴ jsou halogeny (s výhodou nezávisle vybrány z brómu a chlóru.

S výhodou jsou sloučeniny obecného vzorce I znázorněny obecným vzorcem

XVIII:

·· 44

99

9 9 9

999 999 • ·

44 ·« 4444

· 4

9 9

9 (XVIII), kde všechny substituenty jsou definovány pro obecný vzorec I.

S výhodou R²je vodík a R¹, R³ a R⁴ jsou halogeny; a je dusík a b, c a d jsou uhlíky; A a B jsou H₂; volitelná vazba mezi C⁵ a C⁶ chybí; X je CH; R⁵, R⁶, R⁷ a R⁸ jsou vodíky. Ještě výhodněji R¹, R³ a R⁴ jsou nezávisle vybrány z brómu a chlóru. Nejvýhodněji R¹ je bróm a R³ a R⁴jsou nezávisle vybrány z brómu a chlóru.

Ještě výhodněji sloučeniny obecného vzorce I jsou zastoupeny sloučeninami obecného vzorce XIX a XX:

(XIX) (XX)

44

4 · · «4

4·· 44

444444 4 • 4 4 4 4 •4 44 44

44

4 4 4 4

4 444 444

4 4 • 44 44 *4 ···· a nejvýhodněji sloučeninami obecného vzorce XXI a XXII:

kde a R¹, R³ a R⁴ jsou nezávisle vybrány z halogenů (s výhodou z brómu a chlóru); A, Β, X a Wjsou definovány pro vzorec I. Ještě výhodněji A a B jsou H2; volitelná vazba mezi C⁵ a C⁶ chybí; X je CH; nejvýhodněji R¹ je bróm; R³ a R⁴jsou nezávisle bróm nebo chlór, a ještě výhodněji R³ je chlór a R⁴je bróm; A a B jsou H2; volitelná vazba mezi C⁵ a C⁶ chybí; Xje CH; R⁵, R⁶, R⁷ a R⁸ jsou vodíky.

Příklady upřednostňovaných heteroarylových skupin pro W zahrnují: (1)

1- fenyl-1H-tetrazol-5-yl; (2) pyridyl (např. 2- nebo 4-pyridyl); (3) thiazolyl (např.

2- thiazolyl; (4) benzoxazolyl (např. 2-benzoxazolyl); (5) pyrimidinyl (např. 2-pyrimidinyl);

(6) 3-amino-1,2,4-triazolyl obecného vzorce XXIII:

(XXIII), (7) 5-amino-1,2,4-oxadiazolyl obecného vzorce XXIV:

ΝΗ<•Ν •0 ·· 0* »0·· 00 0« • · · 0 »0 · 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0000 • 0 000 0 0 0 0 0 000 000 0 0 0 0 0 0 0 «

00 00 0 00 00 »0·· (XXIV), (8) 3-amino-1,2,4- oxadiazolyl obecného vzorce XXV:

NIK

(XXV),

Příklady heterocykloalkylových skupin pro W obvykle zahrnují: (1) cyklické guanidiny, jako je např. sloučenina obecného vzorce XXVI:

(XXVI), (2) cyklické amidiny, jako je sloučenina obecného vzorce XXVII:

(XXVII), (3) pěti a šesti členné heterocykloalkylové kruhy; a (4) pyranosidyl (z pyranosidůy jako je např. 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-1-beta-D-glukopyranosyl např. obecného vzorce XXVIII:

99

9 9 9

999 999

9

99 • 9 9 • 9 9

999 9

9

9 9

9

999

(XXVIII),

Heterocykloalkylové skupiny s výhodou zahrnují 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-1-beta-D-glukopyranosyl.

Příklady cykloalkylových skupin pro W obecně zahrnují: cyklopropan, cykiopentan a cyklohexan. Proto W obvykle představuje cykiopentan.

Příklady arylových skupin pro W obvykle zahrnují fenyl. Sloučeniny obecného vzorce XXIX a XXX:

je upřednostňováno, když X je CH nebo dusík, R¹, R³ a R⁴ jsou halogeny.

Upřednostňované sloučeniny tohoto vynálezu jsou zastoupeny sloučeninami obecného vzorce XXXI a XXXII:

4 44

4 4 4 4 4

4 444 44 4

4 4 4 4

44 44

44

4 4 4 4 • 4 4 4 4 · 444444

4 4

44 44 *4 »44»

kde R¹, R³ a R⁴ jsou halogeny a zbývající substituenty jsou definovány výše, více jsou upřednostňovány sloučeniny obecného vzorce XXXII.

Reprezentativní sloučeniny obecného vzorce I, kde W je heteroaryl zahrnují sloučeniny obecného vzorce XXXIII, XXXIV, XXXV, XXXVI, XXXVII, XXXVIII, XXXIX, XL, XLI:

(XXXIII),

(XXXIV),

o ·· «·1Ι

·· *· • · » · • · · β ··· ··· • ·

(XXXVI),

(XXXVII),

(XXXVIII), ο

·· <»··« «· • » · · • · · · • · ···

9 9

99 • · 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 999999

9 9 9 9

9 < « » ««

Ο

Reprezentativní sloučeniny obecného vzorce I, kde W je heterocykloalkyl zahrnují sloučeniny obecného vzorce XLII, XLIII a XLIV:

(XLII), ·· • · · • · · ··· ·· ·· β··· ·· ·· • · · · · · • · · · · · · • · ··· · · · · · · · · · Λ ·· ·· «· · ··· ·* ··

(XLIII),

(XLIV),

Znalci z oboru také ocení, že vzorec XIV může být také zastoupen obecným vzorcem XLV:

kde R²⁶ představuje -C(O)CH3 • · · · • · ···

Reprezentativní sloučeniny obecného vzorce I, kde Wje cykloalkyl, zahrnují sloučeniny obecného vzorce XLVI:

(XLVI),

Sloučeniny tohoto vynálezu také zahrnují 1-N-oxidy, tj. např. sloučeniny obecného vzorce XLVII:

kZVZVXZV/' (XLVII), kde představuje zbytek sloučeniny, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty.

Optická rotace sloučenin ((+)- nebo (-)-) je měřena v methanolu nebo ethanolu při teplotě 25 °C.

Tento vynález zahrnuje výše uvedené sloučeniny v amorfním nebo krystalickém stavu.

• 4 4 4 • ·

4 4 4 4 4 · ···· • •44 ·· · ···· • 4 ··· 4444 4 444 444 ·· 4444 4 4

....... ·· ·*

Čáry vyznačené ke kruhovým systémům udávají, že určená vazba může být napojena na kterýkoliv substituovatelný atom uhlíku v kruhu.

Určité sloučeniny tohoto vynálezu existují v různých izomerických formách (např. enantiomery nebo diaštereóizomery) včetně atropizomerů (tj. sloučenin, kde 7-členný kruh je v pevné konformaci tak, že 11. atom uhlíku je umístěn nad nebo pod rovinou spojených benzenových jader vzhledem k přítomnosti bromu jakožto substituentu na

10. pozici. Tento vynález se zabývá takovými izomery jak v čisté formě, tak i ve směsi, včetně racemických směsí. Jsou zde také zahrnuty enolové formy.

Určité tricyklické sloučeniny jsou v přírodě kyselé, např. ty sloučeniny, které obsahují karboxylovou nebo fenolovou hydroxylovou skupinu. Tyto sloučeniny mohou tvořit farmaceuticky přijatelné soli. Příklady takových solí zahrnují soli sodíku, draslíku, vápníku, hliníku, zlata a stříbra. Byly zkoumány také soli tvořené s farmaceuticky přijatelnými aminy jako je např. čpavek, alkylové aminy, hydroxyalkylaminy, N-methylglukaminy apod.

Určité zásadité tricyklické sloučeniny mohou také tvořit farmaceuticky přijatelné soli, např. přídatné soli kyselin. Např. atomy pyrido-nitrogenových skupin mohou tvořit soli se silnými kyselinami, zatímco sloučeniny, které mají zásadité substituenty jako např. amino skupiny tvoří soli se slabšími kyselinami. Příkladem vhodných kyselin pro tvorbu solí jsou kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, octová, citrónová, šťavelová, malonová, salicylová, jablečná, fumarová, jantarová, askorbová, maleinová, methansulfonové, a jiné anorganické a karboxylové kyseliny, které jsou odborníkům dobře známy. Soli se připravují navázáním volné zásadité formy s požadovanou kyselinou ve vhodném množství, které je požadováno ke tvorbě soli konvenčním způsobem. Volné zásadité formy se mohou obnovit tím, že se na soli nechají působit vhodné zředěné zásadité vodné roztoky, jako je např. zředěný vodný NaOH, uhličitan draselný, čpavek nebo hydrogenuhličitan sodný. Volné zásadité formy se poněkud liší od jejich příslušných solných forem v určitých fyzikálních vlastnostech, jako je rozpustnost v polárních rozpouštědlech, ale jinak jsou pro účely tohoto vynálezu kyselé a zásadité soli ekvivalentní svým volným zásaditým formám.

Všechny takové kyselé a zásadité soli jsou myšlené jako farmaceuticky přijatelné soli v rámci tohoto vynálezu a všechny kyselé a zásadité soli jsou považovány za ekvivalentní k volným formám odpovídajících sloučenin pro účely tohoto vynálezu.

• 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

Sloučeniny tohoto vynálezu se připravují podle postupu popsaném ve WO 95/10516 vydaném 20. dubna 1995, přihláška č. 08/410,187 podaná 24. března 1995, přihláška č.08/577,951 podaná 22. prosince 1995 (nyní zrušená) přihláška č.08/615,760 podaná 13. března 1996 (nyní zrušená), WO 97/23478 vydaném 3. července 1997, kde je popsaná tématika č. 08/577,951 a 08/615,760 a žádost č. 08/713,323 podaná 13. září 1996; zde je zahrnuto objevení každé sloučeniny, které se připravují postupem popsaným níže.

Sloučeniny vynálezu se připravují reakcí sloučeniny obecného vzorce XLVIII:

(XLVIII), kde jsou všechny substituenty definovány pro obecný vzorec I, s vhodně chráněnou kyselinou piperidinyloctovou (tj. 1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyloctovou kyselinou) společně s DEC/HOBT/NMM v DMF při teplotě 25 °C po dobu 18 hodin dojde ke vzniku sloučeniny obecného vzorce XLIX:

(XLIX), ·· ·· ·· ·

Sloučenina obecného vzorce XLIX se nechá posléze reagovat s TFA nebo s 10% kyselinou sírovou v dioxanu a methanolu, následně s NaOH za vzniku sloučeniny obecného vzorce L:

• to • · · toto • · · · · • · · • · · • toto to • · ·· ··

(L),

Např. sloučenina obecného vzorce Ll:

(LI), se připravuje reakcí sloučeniny obecného vzorce XLVIII s

1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyl-4-octovou kyselinou, jak je výše popsáno.

Např. sloučeniny obecného vzorce Ll zahrnují sloučeniny vzorce Lil, Lili, LIV,LV,

LVI, LVII, LVIII, LIX, LX, LXI. LXII:

9 9 (LNI),

·· ·9 • 9 · 9 • 9 9 · • · · · · 9 • · • 9 99

(LVIII),

(LV), (LVU), (LIX), o

• 0

0000

(LXH),

Příprava těchto sloučenin je popsána níže v přípravných příkladech 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12a13.

Sloučeniny tohoto vynálezu se připravují reakcí sloučeniny obecného vzorce LXIII:

(LXIII),

ΦΦ φφ φ · · · φ φ φ φφφφ φ φ φ • φ φφφ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φφ φφ φφ φ • · φφφ φ

φ φ φφ φφφφ s vhodně chráněnou kyselinou piperidinyloctovou (např.

1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyloctovou kyselinou) společně s DEC/HOBT/NMM v DMF při teplotě 25 °C po dobu 18 hodin, přičemž dojde ke vzniku sloučeniny obecného vzorce LXIV:

LXIV

Sloučenina obecného vzorce LXIV se potom nechá reagovat s TFA nebo s 10% kyselinou sírovou v dioxanu a methanolu, následně s NaOH za vzniku sloučeniny obecného vzorce LXV:

Amidové sloučeniny tohoto vynálezu jsou znázorněny obecným vzorcem LXVI:

• ·

4>· ····

Tyto sloučeniny se připravují reakcí sloučeniny obecného vzorce LXV s vhodnou karboxylovou kyselinou za přítomnosti spojovacího prostředku jako je DEC a HOBT v dimethylformamidu. Eventuelně se sloučenina obecného vzorce LXV nechá reagovat s chloridem nebo anhydridem kyseliny v rozpouštědle jako je např. pyridin.

Sloučeniny obecného vzorce LXVII, které mají skupinu 1-N-O:

«ΛΑΛΑΑ (LXVII), se připravují z odpovídajících pyridylových sloučenin obecného vzorce LXVIII:

(LXVIII),

♦ · ···· oxidací s m-chlorperoxybenzoovou kyselinou. Tato reakce je prováděna ve vhodném organickém rozpouštědle, tj. dichlormethanu (obvykle bezvodém), při vhodné teplotě, za vzniku sloučenin tohoto vynálezu, které obsahují substituent N-0 na pozici 1 kruhu I tricyklického kruhového systému.

Obecně roztok organického rozpouštědla výchozí tricyklické reagující složky je ochlazen na teplotu 0 °C před přidáním m-chlorperoxybenzoové kyseliny. Reakce se potom nechá probíhat při teplotě místnosti. Požadovaný produkt lze získat standardními separačními postupy. Např. reakční směs se promývá vodným roztokem vhodné zásady, např. nasyceným hydrogenuhličitanem sodným nebo NaOH (např. 1N NaOH) a potom se vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Roztok, který obsahuje výsledný produkt se koncentruje ve vakuu. Produkt se purifikuje standardními postupy, např. chromatograficky za použití silikagelu (např. rychlé sloupcové chromatografie).

Jinak se sloučeniny N-0 připravují z meziproduktů obecného vzorce LXIX:

(LXIX), pomocí výše uvedeného oxidačního postupu s m-chlorperoxybenzoovou kyselinou a sloučeninou obecného vzorce LXX:

(LXX), *4 44*4 ··

4 4 4 4 4

4 444 44 4

4 4 4 4

44 44

44

4 4 4

4 4 ·

444 444 ·

44 kde Q je ochranná skupina, např. BOC. Po oxidaci se ochranná skupina odstraní obecně známými postupy.

Meziprodukty s N-0 skupinou se potom nechají reagovat za vzniku sloučenin tohoto vynálezu.

Sloučeniny obecného vzorce XLVIII zahrnují sloučeniny obecných vzorců LXXI a LXXII:

(LXXI),

(LXXII),

Např. sloučenina obecného vzorce LXXI1I:

(LXXIII),

Sloučeniny obecného vzorce LXXI a LXXII se připravují známým způsobem, např. způsobem zveřejněném ve WO 95/10516, v U.S. patentu 5,151,423 a níže uvedeným způsobem. Výše uvedené meziprodukty se také připravují postupem, skládajícím se z následujících kroků:

(a) reakcí amidu obecného vzorce LXXIV:

99

9 9 9 9

9 999 999 • · · • 99 99 ·· ·* • · · · * ·

9 9 9 9 9 • 9 999 99 9

9 9 9 9

99 99 ·· ··«·

(LXXIV), kde R^11a je bróm, R^5a je vodík a R^6a je Cí až C6 alkyl, aryl nebo heteroaryl; R^5a je Cí až C6 alkyl, aryl nebo heteroaryl a R^6a je vodík; R^5a a R^6a jsou nezávisle vybrány ze skupiny, která se skládá z Cí až Οβ alkylu nebo arylu; nebo R^5a a R^6a, společně s dusíkem, na který jsou připojeny, vytváří kruh, který se skládá ze 4 až 6 atomů uhlíku nebo 3 až 5 atomů uhlíku a jedné části vybrané ze skupiny, která se skládá z -O- a -NR^9a-, kde R^9a je vodík, Cí až C6 alkyl nebo fenyl;

se sloučeninou obecného vzorce LXXV:

(LXXV), kde R^1a, R^2a, R^3a a R^4a jsou nezávisle vybrány ze skupiny, skládající se z vodíku a halogenu a R^7a je chlór nebo bróm, za přítomnosti silné zásady se získá sloučenina obecného vzorce LXXVI:

(LXXVI), (b) reakcí sloučeniny dle kroku (a) s (i) POCI3 se získá kyano- sloučenina obecného vzorce LXXVII:

9· 99

9 9 9 9

9 999 999

9 9

99 99

9« 9999 • 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 999 · 9 9

9 9 9 9

99 99

(LXXVII), (ii) DIBALH se získá aldehyd obecného vzorce LXXVIII:

(LXXVIII), (c) reakcí kyano- sloučeniny nebo aldehydu s derivátem piperidinu obecného vzorce LXXIX:

MgL (LXXIX), kde L je odstupující skupina vybraná ze skupiny skládající se z chlóru a brómu, čímž se získá keton nebo alkohol obecného vzorce LXXX a LXXXI:

(d) (i) cyklizací ketonů s CF3SO3H se získá sloučenina obecného vzorce LXXI a LXXII, kde tečkovaná čára představuje dvojnou vazbu; nebo ·« ·« • · · · · • · · · ·

·· *· • * * · • · · · • · ··· • · · ·· ·· ·· ···· (d) (ii) cyklizací alkoholu s polyfosforečnou kyselinou se získá meziprodukt, kde tečkovaná čára představuje jednoduchou vazbu.

Způsoby přípravy meziproduktů popsané v WO 95/10516, U.S. 5,151,423 a níže uvedené používají jako meziprodukt tricyklické ketony. Např. meziprodukty obecného vzorce LXXXII:

(LXXXII), kde R^11b, R^1a, R^2a, R^3a a R^4a jsou nezávisle vybrány ze skupiny skládající se z vodíku a halogenu, se připravují podle následujícího postupu:

(a) reakcí sloučeniny obecného vzorce LXXXIII:

11b

Ν'

Br (LXXXIII), (i) s aminem obecného vzorec NHR^5aR^6a, kde R^5a a R^6a jsou definovány výše v postupu; za přítomnosti paládiového katalyzátoru a kysličníku uhelnatého se získá amid obecného vzorce LXXXIV:

11b

O

NR^5aR^6a (LXXXIV), (ii) s alkoholem obecného vzorce R^10aOH, kde R^10a je Ci až C6 nižší alkyl nebo C₃ až C₆ cykloalkyl, za přítomnosti paládiového katalyzátoru a kysličníku uhelnatého se získá ester obecného vzorce LXXXV:

00 • 0 0 0

0 0 0

000 »00

0

00 ·0

0 0 0 0 0

000000 00

0 0 0 0 0 »000 000

0000

(LXXXV), následnou reakcí esteru s aminem obecného vzorce NHR^5aR^6a se získá amid;

(b) reakcí amidu s benzylovou sloučeninou substituovanou jódem obecného vzorce LXXXVI:

(LXXXVI), kde R^1a, R^2a, R^3a, R^4a a R^7a jsou definovány výše, za přítomnosti silné zásady se získá sloučenina obecného vzorce LXXXVII:

R^2a

R^3a (LXXXVII) (c) cyklizací sloučeniny kroku (b) s činidlem obecného vzorce R^8aMgL, kde R^8a je Cí až Cs alkyl, aryl nebo heteroaryl a L je bróm nebo chlór, připraveným bezprostředně před cyklizací. Sloučeniny, kde R^5a nebo R^6a je vodík se nechají reagovat s vhodnou skupinou chránící N.

(+)-izomery sloučenin obecného vzorce LXXIII:

Br (10.2) (LXXIII)

99

9 9 9 9

9 9 9 9 · · · · • 9 9

99 99 • 9 » · · · • 9 · · 9 9

9 999 9 9 9

9 9 9 9

99 99

4« ·««· se připravují s vysokou enantioselektivitou postupem, který obsahuje enzymem katalyzovanou transesterifikaci. S výhodou se racemická sloučenina obecného vzorce LXXXVIII:

(LXXXVIII), nechá reagovat s enzymem jako např. Toyobo LIP-300 a acylačním činidlem jako např. trifluorethyl izobutyrát; výsledný (+)-amid se potom izoluje z (-)-enantiomerického aminu obecně dobře známou technikou, a potom se (+)-amid hydrolyzuje, např. refluxováním s kyselinou jako např. H2SO4, a výsledná sloučenina se potom redukuje s DIBAL obecně dobře známou technikou, tím se získá odpovídající opticky obohacený (+)-izomer obecného vzorce LXXIII. Jinou variantou je, že racemická sloučenina obecného vzorce LXXXVIII se nejprve redukuje na racemickou sloučeninu obecného vzorce LXXIII a potom se nechá působit enzym (Toyobo LIP-300) a acylační činidlo jak je popsáno výše, tím se získá (+)-amid, který se hydrolyzuje, čímž se získá opticky obohacený (+)-izomer.

Znalci z oboru ocení, že sloučeniny obecného vzorce I, které mají další substituenty R¹, R², R³ a R⁴ se připravují dle výše uvedeného enzymového postupu.

Sloučeniny obecného vzorce I lze připravit tak, že sloučeniny obecného vzorce L nebo LI se nechají reagovat s vhodným halogenem substituovaným heteroarylem, heterocykloalkylem nebo cykloalkylovou skupinou ve vhodném organickém rozpouštědle s vhodnou zásadou při přídavku vhodné skupiny W. Tyto kondenzační reakce jsou vedeny podle obecně dobře známých postupů.

Např. sloučeniny obecného vzorce L a obecného vzorce LI se nechají reagovat s vhodným halogenheteroarylem (např. Br-heteroarylem nebo Cl-heteroarylem) ve vhodném organickém rozpouštědle (např. dimethylformamidu) s vhodnou bází (např.

·· • · « · • · · 0 » *00 00« • 9

44 *0 «ΜΙ

0 00

9 9 9 9

9 9 4 · • 0 *00 » «

4 4 4

44 hydrogenuhličitanem sodným) za vzniku sloučenin obecného vzorce I, kde W je heteroaryl.

Také např. se sloučeniny obecného vzorce L a obecného vzorce Ll nechají reagovat s vhodným halogenheterocykloalkylem nebo halogencykloalkylem (např. Brheterocykloalkylem nebo Br-cykloalkylem) ve vhodném organickém rozpouštědle (např. dimethylformamidu) s vhodnou zásadou (např. NaH) za vzniku sloučenin obecného vzorce I, kde W je heterocykloalkyl.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde W je sloučeninou obecného vzorce LXXXIX:

N-R¹² (LXXXIX), se připravují obecně dobře známým postupem. Např. sloučenina obecného vzorce L nebo sloučenina obecného vzorce Ll se nechá kondenzovat s vhodně chráněným (jestliže R¹² je vodík) nebo substituovaným 3- nebo 4-piperidonem, tj. obecného vzorce XC:

O:

,N Protecting or group

N Protecting group or

(XC), za použití TiCLa redukcí meziproduktu NaCNBhL.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde W je heterocykloalkyl obsahující kyslík, např. obecného vzorce XCI:

o.

(xci), or or • · · · · • · · · · • · ··· ··· • · · « ·· ·· ·· ···<

·« <9?

• · · · · · • Β · · · · • · ··· · · · • · · · · ·· ·· ·· se připravují obecně dobře známým postupem alkylaci sloučeniny obecného vzorce L nebo Ll heterocykloálkylem substituovaným halogenem, např. obecného vzorce XCII:

Br

Br (xcii), za přítomnosti vhodné zásady (např. NaH) a vhodného rozpouštědla (např. THF). Také lze např. sloučeniny obecného vzorce L nebo Ll nechat reagovat s vhodným halogencyklickým guanidinem nebo halogencyklickým amidinem ve vhodném rozpouštědle (např. DMF) s vhodnou zásadou (např. Na₂CO₃) za vzniku sloučenin, kde Wje cyklický guanidin nebo cyklický amidin. Např. reakcí sloučeniny obecného vzorce XCIV (viz níže) se sloučeninami obecného vzorce XCIII:

Cl or

Cl' (XCIII), [připravenými jak je popsáno v „The Chemistry of the Carbon-Nitrogen Double Bond“, Saul Patai, Chapter 13, str. 597, John Wiley & Sons (1970)] s Na₂CO3 v DMF za vzniku sloučenin obecného vzorce XLII nebo XLIII.

Např. reakcí sloučeniny obecného vzorce XCIV:

(XCIV),

s výše zmíněným halogenem substituovaným heteroarylem, heterocykloalkylem nebo cykloalkylovou skupinou vzniká sloučenina obecného vzorce XCV:

Br

w (XCV), kde W je definováno pro sloučeninu obecného vzorce I.

Sloučeniny tohoto vynálezu jsou znázorněny na příkladech, které však nijak neomezují rozsah tohoto objevu.

Přípravné příklady provedení vynálezu

Přípravný příklad 1

Sloučenina obecného vzorce XCVI.

Krok A:

Step A:

O—N

co₂h (XCVI)

CO₂Et >

Ό—N

CO₂Et

4 4 4 • 4 • ••4 44 4 4 4 4 4 ···· ·· · · · · · • 4 ··· 4444 4 444 444

4 4 4 4 · · ·· · 4 44 4 44 44

Přípravný příklad 3

Sloučenina obecného vzorce XCVIII:

(XCVIII)

i

CO₂Et

Smísí se 14,95 g (39 mmol) 8-chlor-11-(1-ethoxykarbonyl-4-piperidinyl)-11H-benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridinu a 150 ml CH2CI2, potom se přidá 13,07 g (42,9 mmol) (nBu)4NNC>3 a směs se ochladí na teplotu 0 °C. Pomalu po dobu 1,5 hodiny se přidává (po kapkách) roztok 6,09 ml (42,9 mmol) TFAA ve 20 ml CH₂CI₂. Směs se ponechá přes noc při teplotě 0 °C, potom se postupně promyje nejprve nasyceným NaHCO3 (vodným), pak vodou a nakonec solankou. Organický roztok se usuší Na₂SO4, vakuově se koncentruje a destilační zbytek se chromatografuje (silikagel, ·· ···· • · · · · · · · · · · ···· · · · · · · · • · ··· · · · · · ··· ··· • · ···· · · • · ·· · · · ·· ·· 40

EtOAc/hexanový gradient) za zisku 4,32 g a 1,90 g dvou výsledných sloučenin 3A(i) a 3A(ii).

Hmotnostní spektrum pro sloučeninu 3A(i): MH+ = 428,2;

Hmotnostní spektrum pro sloučeninu 3A(ii): MH+ = 428,3.

KrokB

CO₂Et CO₂Et

Smísí se 22,0 g (51,4 mmol) produktu 3A(i) z kroku A, 150 ml 85% EtOH (vodný),

25,85 g (0,463 molů) práškového železa a 2,42 g (21,8 mmol/l) CaCI₂ a zahřívá se pod refluxem přes noc. Přidá se 12,4 g (0,222 molů) práškového železa a 1,2 g (10,8 mmol) CaCI₂ a zahřívá se pod refluxem po dobu 2 hodin. Přidá se dalších 12,4 g (0,222 molů) práškového železa a 1,2 g (10,8 mmol) CaCI₂ a zahřívá se pod refluxem další 2 hodiny. Horká směs se filtruje přes celíte®, celíte® se promyje 50 ml horkého EtOH a filtrát se vakuově koncentruje až na destilační zbytek. Přidá se 100 ml bezvodého EtOH, koncentruje se na destilační zbytek a ten se chromatografuje (silikagel, MeOH/CH₂CI₂gradient) za zisku 16,47 g produktu.

CO₂Et ···· · · • · · · ·♦ • · ··· · · · toto ···· • to ··

Smísí se 16,47 g (41,4 mmol) výsledné sloučeniny z kroku B a 150 ml 48% HBr (vodný) a ochladí se na -3 °C. Pomalu (po kapkách) se přidává 18 ml brómu, potom se pomalu přidává (po kapkách) roztok 8,55 g (0,124 molů) NaNO₂ v 85 ml vody. Míchá se po dobu 45 minut při teplotě -3 °C až 0 °C, potom se upraví pH = 10 přidáním 50% NaOH (vodného). Extrahuje se pomocí EtOAc, extrakt se promyje solankou a suší se na Na₂SO4. Koncentruje se na destilační zbytek a chromatografuje se (silikagel, EtOAc/hexanový gradient) za zisku 10,6 g a 3,28 g dvou výsledných sloučenin 3C(i) a 3C(ii).

Hmotnostní spektrum pro sloučeninu 3C(i): MH+ = 461,2;

Hmotnostní spektrum pro sloučeninu 3C(ii): MH+ = 539,0.

Výsledná sloučenina kroku 3C(i) se hydrolyzuje rozpuštěním v koncentrované HCI a zahříváním na teplotu 100 °C po dobu 16 hodin. Směs se ochladí, neutralizuje 1 M NaOH (vodným). Extrahuje se pomocí CH₂CI₂, extrakt se usuší na MgSO₄, filtruje se a vakuově koncentruje za zisku očekávané sloučeniny.

Hmotnostní spektrum: MH+ = 466,96.

Krok E:

φφ φφ φ φφφφ φ φ φ · φ φφφ φ φ φ φ φ φφ φφ ·· φφ φ · · · φ φ φφφφ φ · φ φ φφφφφ φ φφ φφφφ

Rozpustí se 1,160 g (2,98 mmol) sloučeniny získané z kroku D ve 20 ml DMF, míchá se při pokojové teplotě a přidá se 0,3914 g (3,87 mmol) 4-methylmorfolinu a 0,7418 g (3,87 mmol) DEC, 0,5229 g (3,87 mmol) HOBT a 0,8795 g (3,87 mmol) 1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyl-4-octové kyseliny. Směs se míchá po dobu 2 dní při teplotě místnosti, potom se vakuově koncentruje na destilační zbytek a ten se rozdělí mezi CH2CI2 a vodu. Organická část se postupně promyje nasyceným NaHCO3 (vodným), 10% NaH₂PO4 (vodným) a solankou. Organická část se usuší MgSO4, filtruje se a vakuově koncentruje na destilační zbytek. Zbytek se chromatografuje (silikagel,

2% MeOH/CH2Cl2 + NH3) za zisku produktu. Teplota tání = 94,0 až 94,5 °C.

Hmotnostní spektrum: MH+ = 616,3.

Elementární analýza: vypočtená - C, 60,54; H, 6,06; N, 6,83 naměřená - C, 59,93; H, 6,62; N, 7,45.

Smísí se 1,67 g (2,7 mmol) výsledné sloučeniny kroku E a 20 ml CH2CI2 a míchá se při teplotě 0 °C. Přidá se 20 ml TFA, směs se míchá po dobu 2 hodin, potom se směs alkalizuje pomocí 1N NaOH (vodného). Extrahuje se pomocí CH2CI2, organická část se vysuší MgSO4, filtruje se a vakuově koncentruje za zisku 1,16 g výsledné sloučeniny. Teplota tání = 140,2 až 140,8 °C. Hmotnostní spektrum: MH+ = 516,2.

Přípravný příklad 4

Sloučenina obecného vzorce XCIX:

4 · 4 4 4

4 4 4 4 4 • · · 444 444 ' 4 4 • 4 4 4 4

4 4 4 • 4 4 4

4 4 4

4 · 4 4 4 •4 4444

(XCIX)

Smísí se 25,86 g (55,9 mmol) ethylesteru kyseliny 4-(8-chlor-3-brom-5,6-dihydro11H-benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridin-11-ylidene)-1-piperidine-1-karboxylové a 250 ml koncentrované H2SO4 při teplotě -5 °C, potom se přidá 4,8 g (56,4 mmol) NaNO₃ a míchá se po dobu 2 hodin. Směs se nalije do 600 g ledu a alkalizuje se pomocí koncentrovaného NH4OH (vodného). Směs se filtruje, promyje se 300 ml vody, potom se extrahuje pomocí 500 ml CH2CI2. Extrakt se promyje 200 ml vody, usuší se pomocí MgSO₄, potom filtruje a vakuově se koncentruje na destilační zbytek. Ten se chromatografuje (silikagel, 10% EtOAc/CH₂CI₂) za zisku 24,4 g (86% výtěžnost) sloučeniny s teplotou tání 165 až 167 °C. Hmotnostní spektrum: MH+ = 506 (Cl),

Elementární analýza: vypočtená - C, 52,13; H, 4,17; N, 8,29 naměřená - C, 52,18; H, 4,51; N, 8,16.

KrokB

o

Λ och₂ch₃

och₂ch₃ ·» ···· • ·♦ • ·

Smísí se 20 g (40,5 mmol) výsledné sloučeniny kroku A a 200 ml koncentrované H2SO4 při teplotě 20 °C, potom se směs ochladí na 0 °C. Ke směsi se přidá 7,12 g (24,89 mmol) 1,3-dibrom-5,5-dimethylhydantoinu a míchá se po dobu 3 hodin při teplotě 20 °C. Směs se ochladí na 0 °C, přidá se další 1,0 g (3,5 mmol) dibromhydantoinu a míchá se při teplotě 20 °C po dobu 2 hodin. Směs se nalije na 400 g ledu, alkalizuje koncentrovaným NH4OH (vodným) při teplotě 0 °C, a vzniklá sraženina se odfiltruje. Sraženina se promyje 300 ml vody, rozmíchá se na kaši ve 200 ml acetonu a opět se filtruje se za zisku 19,79 g (85,6% výtěžnost) výsledné sloučeniny o teplotě tání 236 až 237 °C, hmotnostní spektrum: MH+ = 584 (Cl),

Elementární analýza: vypočtená - C, 45,11; H, 1,44; N, 7,17 naměřená - C, 44,95; H, 3,57; N, 7,16.

KrokC

Smísí se 25 g (447 mmol) železných pilin, 10 g (90 mmol) CaCb a suspenze 20 g (34,19 mmol) výsledného produktu kroku B v 700 ml 90:10 EtOH/voda při teplotě 50 °C. Směs se zahřívá pod refluxem přes noc, filtruje se přes celíte® a filtrační koláč se promyje pomocí 2 x 200 ml horkého EtOH. Filtrát se sloučí s roztoky po promývání a vakuově se koncentruje na destilační zbytek. Zbytek se extrahuje pomocí CH2CI2, promyje se 300 ml vody a usuší se MgSO4. Filtruje se a vakuově koncentruje na destilační zbytek a ten se chromatografuje (silikagel. 30% EtOH/C^Ch) za zisku 11,4 g (60% výtěžnost) výsledné sloučeniny o teplotě tání 211 až 212 °C, hmotnostní spektrum: MH+ = 554 (Cl)

Elementární analýza: vypočtená - C, 47,55; H, 3,99; N, 7,56 naměřená - C, 47,45; H, 4,31; N, 7,49.

·* ····

99

9 9 9

9 9 ·

999 999

9

99 • 999 9 9

9 9 9 9 9 • · ··· · · ·

9 9 9 9

99 99

Pomalu se přidá (po částech) 20 g (35,9 mmol) výsledné sloučeniny kroku C do roztoku 8 g (116 mmol) NaNO₂ ve 120 ml koncentrované HCl (vodné) při teplotě -10 °C Výsledná směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin, potom se pomalu přidá (po kapkách) 150 ml (1,44 mol) 50% H₃PO₂ při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny. Míchá se po dobu 3 hodin, při teplotě 0 °C, potom se nalije na 600 g ledu a alkalizuje koncentrovaným NH4OH (vodným). Extrahuje se pomocí 2 x 300 ml CH₂CI₂, extrakt se usuší MgSC>4, potom se filtruje a vakuově koncentruje na destilační zbytek. Zbytek se chromatografuje (silikagel, 25% EtOAc/hexan) za zisku 13,67 g (70% výtěžnost) výsledné sloučeniny o teplotě tání = 163 až 165 °C, hmotnostní spektrum: MH+ = 539 (Cl)

Elementární analýza: vypočtená - C, 48,97; H, 4,05; N, 5,22 naměřená - C, 48,86; H, 3,91; N, 5,18.

Smísí se 6,8 g (12,59 mmol) výsledné sloučeniny kroku D a 100 ml koncentrované HCl (vodné) a míchá se při teplotě 85 °C přes noc. Směs se ochladí, nalije se na 300 g ledu a alkalizuje se pomocí koncentrovaného NH4OH (vodného). Extrahuje se pomocí

9 9*9

9 9 9

9 9

999 • · ♦· • 9 · · · ·

9 9 · 9 9 φ 9 999 99 9

99 x 300 ml CH2CI2, extrakty se usuší MgSC>4, potom se filtrují a vakuově koncentrují na destilační zbytek. Zbytek se chromatografuje (silikagel, 10% MeOH/EtOAc + 2% NH4OH (vodný)) za zisku 5,4 g (92% výtěžnost) očekávané sloučeniny o teplotě tání 172 až 174 °C, hmotnostní spektrum MH+ = 467 (FAB),

Elementární analýza: vypočtená - C, 48,69; H, 3,65; N, 5,97 naměřená - C, 48,83; H, 3,80; N, 5,97.

Krok F:

Dodržuje se stejný postup jako u kroku C níže uvedeného přípravného příkladu 5, sloučenina vzorce XCIX výše uvedeného kroku E se nechá reagovat s 1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyl-4-octovou kyselinou za vzniku sloučeniny obecného vzorce C:

Krok G:

Dodržuje se stejný postup jako u kroku D níže uvedeného přípravného příkladu 5, ze sloučeniny získané krokem F je sejmuta chránící skupina za vzniku očekávané sloučeniny přípravného příkladu 4.

Přípravný příklad 5

Sloučenina obecného vzorce Cl:

• 4 ·· • 4 · * · • · 4 4 · · 444 444

Krok A:

·· • · · · • 4 4 · • · ··* • 4 · • 4 44

(Cl)

Hydrolyzuje se 2,42 g ethylesteru kyseliny 4-(8-chlor-3-brom-5,6-dihydro-11Hbenzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridin-11 -yliden)-1 -piperidin-1 -karboxylové stejným způsobem jako je popisováno v přípravném příkladě 3, krok D, za zisku 1,39 g (69% výtěžnost) výsledné sloučeniny.

KrokB

Smísí se 1 g (2,48 mmol) výsledné sloučeniny kroku A a 25 ml suchého toluenu, přidá se 2,5 ml 1M DIBAL v toluenu a směs se zahřeje pod refluxem. Po 0,5 hodině se přidá dalších 2,5 ml 1M DIBAL v toluenu a směs se zahřeje pod refluxem po dobu 1 hodiny. (Reakce je sledována pomocí tenkovrstvé chromatografie za použití 50%

0000

0 0 0 0 0 · 0 0 0 « *

0 00000 0 0 • · 0 0 0 0

00 00 0

00

O 0 0 0

0 0 0

000 000

0

0 0 0

MeOH/CH2CI_2 + NH₄OH (vodného).) Směs se ochladí na teplotu místnosti, přidá se 50 ml 1N HCl (vodné) a míchá se po dobu 5 minut. Přidá se 100 ml 1N NaOH (vodný), potom se extrahuje pomocí EtÓAc (3 x 150 ml). Extrakt se usuší MgSO4, filtruje se a vakuově koncentruje za zisku 1,1 g očekávané sloučeniny.

Krok C:

Smísí se 0,501 g (1,28 mmol) sloučeniny získané v kroku B a 20 ml suchého DMF, potom se přidá 0,405 g (1,664 mmol) 1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyl-4-octové kyseliny, 0,319 g (1,664 mmol) DEC, 0,225 g (1,664 mmol) HOBT a 0,168 g (1,664 mmol) 4-metylmorfolinu a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se vakuově koncentruje, zbytek se rozdělí mezi 150 ml CH₂CI₂ a 150 ml nasyceného NaHCO₃ (vodného). Vodná fáze se extrahuje pomocí dalších 150 ml CH2CI2. Organická fáze se usuší MgSO₄ a vakuově se koncentruje. Zbytek se chromatografuje (silikagel, 500 ml hexanu, 1 11% MeOH/CH₂Cl2 + 0,1% NH₄OH (vodného) potom 1 I 2% MeOH/CH₂CI₂ + 0,1% NH ₄OH (vodného) za zisku výsledné sloučeniny o teplotě tání 115 až 125 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 616.

·· ···· ·

·· ·· · · · > · · · • · ··· • · · ·· ♦* «· • · • · · • · · • 999 • 99

Smísí se 0,555 g (0,9 mmol) výsledné sloučeniny kroku C a 15 ml CH2CI2 a směs se ochladí na teplotu 0 °C. Přidá se 15 ml TFA a míchá se při teplotě 0 °C po dobu 2 hodin. Vakuově se koncentruje při teplotě 40 až 45 °C na destilační zbytek, zbytek se pak rozdělí mezi 150 ml CH₂CI₂ a 100 ml nasyceného NaHCO₃ (vodného). Vodná vrstva se extrahuje pomocí 100 ml CH₂CI₂, extrakty se sloučí a usuší MgSCU Vakuově se koncentruje za vzniku 0,47 g výsledné sloučeniny o teplotě tání 140 až 150 °C, hmotnostní spektrum: MH+ = 516.

Přípravný příklad 6

[racemická jak (+) tak i (-)-izomeryj

Krok A:

Smísí se 16,6 g (0,03 mol) výsledné sloučeniny přípravného příkladu 4, kroku D, s 3:1 roztokem CH₃CN a vody ( 212,65 ml CH₃CN a 70,8 ml vody) a vzniklá kaše se

·· • · · míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se 32,833 g (0,153 mol) NalO₄ a potom 0,31 g (2,30 mmol) RuO₂ a míchá se při teplotě místnosti za vzniku 1,39 g (69% výtěžnost) výsledného produktu. (Přidání RuO₂ je doprovázeno exotermickou reakcí a teplota vystoupá z 20 na 30 °C.) Směs se míchá po dobu 1,3 hodiny (teplota se vrátí k 25 °C po 30 minutách), potom se filtruje aby se odstranila sraženina a ta se promyje pomocí CH₂CI₂. Filtrát se koncentruje vakuově na destilační zbytek a ten se rozpustí v CH₂CI₂. Filtruje se, aby se odstranily nerozpustné částečky a ty se promyjí pomocí CH₂CI₂. Filtrát se promyje vodou, koncentruje se na objem 200 ml a promyje se bělidlem a potom vodou. Extrahuje se pomocí 6N HCI (vodné). Vodný extrakt se ochladí na teplotu 0 °C a pomalu se přidá 50% NaOH (vodný) k úpravě pH = 4, zatímco teplota se udržuje pod 30 °C. Dvakrát se extrahuje pomocí CH₂CI₂, usuší se MgSO₄ a vakuově se koncentruje. Zbytek se rozmíchá na kaši ve 20 ml EtOH a ochladí se na teplotu 0 °C. Vzniklá sraženina se odfiltruje a pak se vakuově usuší za zisku 7,95 g výsledné sloučeniny. ¹H NMR (CDCb, 200 MHz): 8,7 (s, 1H); 7,85 (m, 6H); 7,5 (d, 2H); 3,45 (m, 2H); 3,15 (m, 2H).

Krok B:

Smísí se 21,58 g (53,75 mmol) výsledné sloučeniny kroku A a 500 ml bezvodé směsi 1:1 EtOH a toluenu, přidá se 1,43 g (37,8 mmol) NaBH₄ a směs se zahřeje pod refluxem dobu 10 minut. Směs se ochladí na 0 °C, přidá se 100 ml vody, potom se upraví pH na 4 až 5 pomocí 1 M HCL (vodné) a teplota se udržuje < 10 °C. Přidá se 250 ml EtOAc a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se promyje solankou (3 x 50 ml) a potom se usuší Na₂SO₄. Vakuově se koncentruje a destilační zbytek (24,01 g) se chromatografuje (silikagel, 30 % hexan/CH₂CI₂) za zisku výsledné sloučeniny. Znečištěné frakce se purifikují rechromatografováním. Získá se celkově 18,57 g výsledné sloučeniny. ¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz). 8,5 (s, 1H); 7,9 (s, 1H); 7,5 (d-d, 2H); 6,2 (s, 1H); 6,1 (s, 1H); 3,5 (m, 1H); 3,4 (m, 1H); 3,2 (m, 2H).

• · • · · ·

Krok C:

• · 0 • · ·· 00 » 0 0 · • · 0 • · 0 · 0 · • 0

H

Smísí se 18,57 g (46,02 mmol) výsledné sloučeniny kroku B a 500 ml CHCb, potom se přidá 6,70 ml (91,2 mmol) SOCI2 a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Přidá se roztok 35,6 g (0,413 mol) piperazinu v 800 ml THF během doby 5 minut a směs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Směs se zahřívá pod refluxem přes noc, potom se ochladí na teplotu místnosti a zředí 1 I CH2CI2. Promyje se vodou (5 x 200 ml) a vodné extrakty se extrahují pomocí CHCI3 (3 x 100 ml). Sloučí se všechny organické roztoky, promyjí se solankou (3 x 200 ml) a usuší se pomocí MgSO₄. Vakuově se koncentrují a destilační zbytek se chromatografuje (silikagel, gradient 5%, 7,5%, 10% MeOH/CH₂CI2 + NH₄OH) za zisku 18,49 g očekávané sloučeniny v podobě racemické směsi.

Krok D: - Separace enantiomerů:

N

H • · · · • · · · • · · · • · · · · « • · · • · · ·

Racemická směs získaná v kroku C se separuje pomocí chirálně preparativní chromatografie (Chiralpack AD, 5 cm x 50 cm sloupec, průtok 100 ml/min., 20% iPrOH/hexan + 0,2% diethylamin) za zisku 9,14 g (+)-izomeru a 9,30 g (-)-izomeru.

Fyzikálně chemické údaje pro (+)-izomer: teplota tání = 74,5 ° až 77,5 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 471,9; [a]²⁵D = +97,4°(8,48 mg /2 ml MeOH).

Fyzikálně chemické údaje pro (-)-izomer: teplota tání = 82,9 ⁰ až 84,5 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 471,8; [cc]²⁵d = -97,4°(8,32 mg /2 ml MeOH).

Smísí se 3,21 g (6,80 mmol) (-)-izomeru z kroku D a 150 ml bezvodého DMF. Přidá se 2,15 g (8,8 mmol) 1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyl-4-octové kyseliny, 1,69 g (8,8 mmol) DEC, 1,19 (8,8 mmol) HOBT a 0,97 ml (8,8 mmol) N-methylmorfolinu a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Vakuově se koncentruje k odstranění DMF a přidá se 50 ml nasyceného NaHCO3 (vodného). Extrahuje se pomocí CH2CI2 (2 x 250 ml), extrakty se promyjí pomocí 50 ml solanky a usuší se pomocí MgSO₄. Vakuově se koncentruje a zbytek se chromatografuje (silikagel, 2% MeOH/CH₂Cl2 + 10% NH₄OH) za zisku 4,75 g výsledné sloučeniny. Teplota tání = 75,7 ⁰ až 78,5 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 697; [a]²⁵D = -5,5°(6,6 mg / 2 ml MeOH).

• · · ·

I · · « > · · «

Smísí se 4,70 g (6,74 mmol) výsledné sloučeniny z kroku D a 30 ml MeOH, potom se přidává 50 ml 10% H₂SO₄v dioxanu po 10 ml dávkách během jedné hodiny. Směs se nalije do 50 ml hody a přidá se 15 ml 50% NaOH (vodného) k úpravě pH na hodnotu 10 až 11. Vzniklá sraženina se odfiltruje a filtrát se extrahuje pomocí CH₂CI₂ (2 x 250 ml). Vodná vrstva se vakuově koncentruje k odstranění MeOH a opět se extrahuje pomocí 250 ml CH₂CI₂. Sloučené extrakty se usuší pomocí MgSO₄ a vakuově se koncentruje za zisku výsledné sloučeniny, teplota tání =128,1 ° až 131,5 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 597; [a]²⁵o = -6,02°(9,3 mg /2 ml MeOH).

Přípravný příklad 7

och₂ch₃ och₂ch₃ ·· ····

Smísí se 15 g (38,5 mmol) ethylesteru kyseliny 4-(8-chlor-3-brom-5,6-dihydro11H-benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridin-11-yliden)-1-piperidin-1 -karboxylové a 150 ml koncentrované H2SO4 při teplotě -5 °C, potom se přidá 3,89 g (38,5 mmol) KNO3 a míchá se po dobu 4 hodin. Směs se nalije na 3 I ledu a alkalizuje pomocí 50% NaOH (vodného). Extrahuje se pomocí CH2CI2, usuší se pomocí MgSO₄ a potom se filtruje a vakuově koncentruje na destilační zbytek. Zbytek se rekrystalizuje z acetonu za zisku 6,69 g výsledné sloučeniny. ¹H NMR (CDCb, 200 MHz). 8,5 (s, 1H); 7,9 (s, 1H); 7,75 (s, 1H); 7,6 (s, 1H); 7,35 (s, 1H); 4,15 (q, 2H); 3,8 (m, 2H); 3,5-3,1 (m, 4H); 3,0-2,8 (m, 2H); 2,6-2,2 (m, 4H); 1,25 (t, 3H).

Smísí se 6,69 g (13,1 mmol) výsledné sloučeniny z kroku A a 100 ml 85% vodného roztoku ethanolu, potom se přidá 0,66 g (5,9 mmol) CaCb a 6,56 g (117,9 mmol) železa a směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Horká reakční směs se filtruje přes celíte® a filtrační koláč se propláchne horkým EtOH. Filtrát se vakuově koncentruje za zisku 7,72 g výsledné sloučeniny. Hmotnostní spektrum: MH+ = 478,0.

Krok C:

o

Λ och₂ch₃

och₂ch₃

• · · · · · 0 · · 0 · • 000 ·· · »000 0 « 000 0 · · · · 000 00· 00 000· ·· ·· ·· ·· · ·· ··

Smísí se 7,70 g výsledné sloučeniny z kroku B a 35 ml HOAc, potom se přidá 45 ml roztoku Br₂ v HOAc a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se 300 ml 1N NaOH (vodného), potom se přidá 75 ml 50% NaOH (vodného) a extrahuje se pomocí EtOAe. Extrakt se usuší pomocí MgSO4 a vakuově se koncentruje na destilační zbytek. Zbytek se chromatografuje (silikagel, 20% až 30% EtOAe v hexanu) za zisku 3,47 g výsledné sloučeniny (společně s dalšími 1,28 g částečně purifikované sloučeniny). Hmotnostní spektrum: MH+=555,9.

¹H NMR (CDCfe, 300 MHz). 8,5 (s, 1H); 7,5 (s, 1H); 7,15 (s, 1H); 4,5 (s, 1H); 4,15 (m, 3H); 3,8 (br s, 2H); 3,4-3,1 (m, 4H); 9-2,75 (m, 1H); 2,7-2,5 (m, 2H); 2,4-2,2 (m, 2H);

1,25 (m, 3H).

Smísí se 0,557 g (5,4 mmol) t-butylnitritu a 3 ml DMF, směs se zahřeje na teplotu 60° až 70 °C. Pomalu (po kapkách) se přidává směs 2,00 g (3,6 mmol) výsledné sloučeniny z kroku C a 4 ml DMF, potom se směs ochladí na teplotu místnosti. Přidá se dalších 0,64 ml t-butylnitritu při teplotě 40 °C a směs se znovu zahřívá na teplotu 60° až 70 °C po dobu 0,5 hodiny. Směs se ochladí na teplotu místnosti a nalije se do 150 ml vody. Extrahuje se pomocí CH₂CI₂, extrakt se usuší pomocí MgSCU a vakuově se koncentruje. Zbytek se chromatografuje (silikagel, 10% až 20% EtOAe v hexanu) za zisku 0,74 g výsledné sloučeniny. Hmotnostní spektrum: MH+ = 541,0.

¹H NMR (CDCfe, 200 MHz). 8,52 (s, 1H); 7,5 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 4,15 (q, 2H);

3,9 - 3,7 (m, 2H); 3,5-3,1 (m, 4H); 3,0 - 2,5 (m, 2H); 2,4 - 2,2 (m, 2H); 2,1-1,9 (m, 2H); 1,26 (t, 3H).

Smísí se 0,70 g (1,4 mmol) výsledné sloučeniny z kroku D a 8 ml koncentrované HCI (vodné) a směs se zahřívá pod refluxem přes noc. Přidá se 30 ml 1N NaOH (vodného) a extrahuje se pomocí CH2CI2. Extrakt se usuší pomocí MgSO4 a vakuově se koncentruje za zisku 0,59 g očekávané sloučeniny. Hmotnostní spektrum: M+ = 468,7. teplota tání = 123,9 až 124,2 °C.

Krok F:

Nechá se reagovat 6,0 g (12,8 mmol) sloučeniny získané z kroku E a 3,78 g (16,6 mmol) 1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyl-4-octové kyseliny za použití stejného postupu jako je popsán u přípravného příkladu 5, kroku C, za vzniku 8,52 g výsledné sloučeniny. Hmotnostní spektrum: MH+ = 694,0 (FAB). ¹H NMR (CDCI3, 200 MHz). 8,5 (d, 1H); 7,5 (d, 2H); 7,2 (d, 1H); 4,15 - 3,9 (m, 3H); 3,8 - 3,6 (m, 1H); 3,5 - 3,15 (m, 3H) 2,9 (d, 2H); 2,8 - 2,5 (m, 4H); 2,4 - 1,8 (m, 6H); 1,8-1,6 (br d, 2H); 1,4 (s, 9H); 1,25-1,0(m, 2H).

4 44 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 4 9 9 9 · ··♦ ··* ·· φ Φ · φ * ·

ΦΦΦΦ Φφφ ΦΦ Φ·

Krok G:

Smísí se 8,50 g sloučeniny získané z kroku F a 60 ml CH2CI2, potom se směs ochladí na teplotu 0 °C a přidá se 55 ml TFA. Směs se míchá po dobu 3 hodin při teplotě 0 °C, potom se přidá 500 ml 1 N NaOH (vodného) a následně 30 ml 50% NaOH (vodného). Extrahuje se pomocí CH2CI2, usuší se přes MgSO₄ a vakuově se koncentruje za zisku 7,86 g výsledné sloučeniny. Hmotnostní spektrum: M+ = 593,9 (FAB). ¹H NMR (CDCI₃, 200 MHz). 8,51 (d, 1H); 7,52 (d - d, 2H); 7,20 (d, 1H); 4,1 3,95 (m, 2H); 3,8 - 3,65 (m, 2H); 3,5 - 3,05 (m, 5H); 3,0 - 2,5 (m, 6H); 2,45 - 1,6 (m, 6H); 1,4-1,1 (m, 2H).

Přípravný příklad 8

Sloučenina obecného vzorce CIV:

(CIV), [racemická, stejně tak (+)-izomery jako i (-)-izomery]

99

9 9 9 9

9 9 9 9 · 999 999

9 9

99 99

99 99 « 9 9 9 « 9 • 9 9 9 9 9

9 999 99 9

9 9 9 9

9999 99 • 9« 9

Krok A:

Připraví se roztok 8,1 g sloučeniny získané z přípravného příkladu 7, kroku E, v toluenu a přidá se 17,3 ml 1M roztoku DIBAL v toluenu. Směs se zahřívá pod refluxem a pomalu (po kapkách) se přidává po dobu 40 minut dalších 21 ml 1M roztoku DIBAL v toluenu. Reakční směs se ochladí na 0 °C a přidá se 700 ml 1M HCI (vodné). Organická fáze se odstraní. Vodná fáze se promyje pomocí CH2CI2, extrakt se odstraní, potom se vodná fáze alkalizuje přidáním 50% NaOH (vodného). Extrahuje se pomocí CH2CI2, extrakt se usuší pomocí MgSO₄ a vakuově se koncentruje za zisku 7,30 g očekávané sloučeniny, která je racemickou směsí enantiomerů.

Krok B - separace enantiomerů:

•» »« • · · ·

9 9 9

9 9 99

9 9

99 ·« ··*·

99

9 9

9 ·

999 999

9

99

Racemická směs z kroku A se separuje pomocí chirálně preparativní chromatografie (Chiralpack AD, 5 cm x 50 cm sloupec, je použito 20% iPrOH v hexanu + 0,2% diethylamin) za zisku (+)-izomeru a (-)-izomeru očekávané sloučeniny.

Fyzikálně chemické údaje pro (+)-izomer: teplota tání = 148,8 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 469; [cc]²⁵d = +65,6°(12,93 mg / 2 ml MeOH).

Fyzikálně chemické údaje pro (-)-izomer: teplota tání = 112 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 469; [oc]²⁵d = -65,2°(3,65 mg/2 ml MeOH).

Krok C:

Nechá se reagovat (+)-izomer sloučeniny získané z přípravného příkladu 8, kroku B, s 1,37 g 1-N-t-butoxykarbonylpiperidinyl-4-octové kyseliny při použití stejného postupu jako je popsáno u přípravného příkladu 5, kroku C, za zisku 2,78 g výsledné sloučeniny. Hmotnostní spektrum: MH+ = 694,0 (FAB); [<x]²⁵d= 34,1° (5,45 mg/2 ml, MeOH).

Krok D:

44 « 4 4 4 4

4 4 4 4 « « 444 444

4 4

44 • 4 4 4

4 4 4

4 444 ·

4 4

44 •4 4444

2,78 g výsledné sloučeniny kroku C se upraví stejným postupem jako je popsáno u přípravného příkladu 5, kroku D, za zisku 1,72 g výsledné sloučeniny. Teplota tání = 104,1 °C; hmotnostní spektrum: MH+ = 594; [oc]²⁵d = +53,4° (11,42 mg/2 ml, MeOH).

Přípravný příklad 9

Sloučenina obecného vzorce CV.

(CV), [racemická, stejně tak (+)-izomery jako i (-)-izomery]

Krok A:

Smísí se 40,0 g (0,124 mol) výchozího ketonu a 200 ml H2SO4 a ochladí se na 0 °C. Pomalu se přidává (po kapkách) 13,78 g (0,136 mol) KNO3 během 1,5 hodiny. Potom se směs ohřeje na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Dále se postupuje reakcí při použití stejného postupu jako je popsán u přípravného příkladu 4, krok A. Chromatografuje se (silikagel, 20%, 30%, 40%, 50% EtOAC v hexanu, potom 100% • · • · · 4 44 4

4

44

4444

44

4 4 · • 4 4 4 « 44· 444

4

44

EtOAc) za zisku 28 g 9-nitro sloučeniny, spolu s menším množstvím 7-nitro sloučeniny a 19 g směsi 7-nitro a 9-nitro sloučenin.

Krok B:

Nechá se reagovat 28 g (76,2 mmol) 9-nitro sloučeniny získané v kroku A, 400 ml 85% EtOH ve vodě, 3,8 g (34,3 mmol) CaCI₂ a 38,28 g (0,685 mol) železa při použití stejného postupu jako je popsán u přípravného příkladu 4, krok C, za zisku 24 g výsledné sloučeniny.

Smísí se 13 g (38,5 mol) výsledné sloučeniny kroku B, 140 ml HOAc a pomalu se přidá roztok 2,95 ml (57,8 mmol) Br₂ v 10 ml HOAc po dobu 20 minut. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti, potom se vakuově koncentruje. Přidá se CH₂CI₂ a voda, upraví se pH na 8 až 9 pomocí 50% NaOH (vodného). Organická fáze se promyje vodou, potom solankou a usuší se pomocí Na₂SO4. Vakuově se koncentruje za zisku 11,3 g výsledné sloučeniny.

Krok D:

99

9 9 9 9

9 999 999

9 9

99 99 ·· ·« • · · ?> ♦ · « · · · · · • 9 999 99 9

9 9 9 9

99 99

Ochladí se 100 ml koncentrované HCI (vodné) na teplotu 0 °C, potom se přidá

5,61 g (81,4 mmol) NaNO₂ a míchá se po dobu 10 minut. Pomalu (po částech) se přidává 11,3 g (27,1 mmol) výsledné sloučeniny kroku C a směs se míchá při teplotě 0°až 3 °C po dobu 2,25 hodiny. Pomalu (po kapkách) se přidává 180 ml 50% H₃PO₂(vodné) a směs se nechá stát při teplotě 0 °C přes noc. Pomalu se přidává (po kapkách) 150 ml 50% NaOH po dobu 30 minut, upraví se pH na hodnotu 9 a potom se extrahuje pomocí CH₂CI₂. Extrakt se promyje vodou, potom solankou a usuší se pomocí Na₂SO4. Vakuově se koncentruje a destilační zbytek se chromatografuje (silikagel, 2% EtOAc v CH₂CI₂) za zisku 8,2 g výsledné sloučeniny.

Smísí se 8,6 g (21,4 mmol) výsledné sloučeniny kroku D a 300 ml MeOH a směs se ochladí na 0 až 2 °C. Přidá se 1,21 g (32,1 mmol) NaBH4 a směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny. Přidá se dalších 0,121 g (3,21 mmol) NaBH4 a míchá se 2 hodiny při teplotě 0 °C, potom se ponechá stát přes noc při teplotě 0 °C. Vakuově se koncentruje a destilační zbytek se rozdělí mezi CH₂CI₂ a vodu. Organická fáze se oddělí a vakuově se koncentruje (50 °C) za zisku 8,2 g výsledné sloučeniny.

Krok F

Smísí se 8,2 g (20,3 mmol) výsledné sloučeniny kroku E a 160 ml CH₂CI₂, směs se ochladí na 0 °C, potom se pomalu přidává (po kapkách) 14,8 ml (203 mmol) SOCI₂

44

4 4 4 4

4 444 444

4 4

44 44 ♦ 4 4 · · · • 4 · · · ·

4 ·4· 4 4 4

4 4 4 4 • 4 44 44 ·4·4 po dobu 30 minut. Směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 4,5 hodin, potom se vakuově koncentruje, přidá se CH₂CI₂ a promyje se pomocí 1N NaOH (vodného), potom solankou a usuší se pomocí Na₂SO4. Vakuově se koncentruje na destilační zbytek, přidá se suchý THF a 8,7 g (101 mmol) piperazinu a míchá se při teplotě místnosti přes noc. Vakuově se koncentruje, přidá se CH₂CI₂ a promyje se pomocí 0,25 N NaOH (vodného), vodou a solankou. Usuší se pomocí Na₂SO₄ a vakuově se koncentruje za zisku 9,46 g surové sloučeniny. Chromatografuje se (silikagel, 5% MeOH v CH₂CI₂ + NH3) za zisku 3,59 g očekávané sloučeniny ve formě racemické směsi. ¹H NMR (CDCb, 200 MHz): 8,43 (d, 1H); 7,55 (d, 2H); 7,45 (d, 1H);

7,11 (d, 1H); 5,31 (s, 1H); 4,86 - 4,65 (m, 1H); 3,57 - 3,40 (m, 1H); 2,98 - 2,55 (m, 6H); 2,45-2,20 (m, 5H).

Krok G - separace enantiomerů:

Racemická směs sloučeniny získané v kroku F (5,7 g) se chromatografuje, jak je popsáno v přípravném příkladu 6, krok D, za použití 30% iPrOH v hexanu + 0,2% diethylamin za zisku 2,88 g R-(+)-izomeru a 2,77 g S-(-)-izomeru očekávané sloučeniny.

Fyzikálně chemické údaje pro R-(+)-izomer: hmotnostní spektrum: MH+ = 470,0; [a]²⁵D = +12,1⁰ (10,9 mg / 2 ml MeOH).

·« ···* • · • · · » · · • · • · ·· ·· • * · • ♦ ·

999 999 ·

99

Fyzikálně chemické údaje pro S-(-)-izomer: hmotnostní spektrum: MH+ = 470,0; [a]²⁵D = -13,2° (11,51 mg / 2 ml MeOH).

Krok H:

Podle stejného postupu jako u přípravného příkladu 5, kroku C a D, racemická sloučenina přípravného příkladu 9 se získá z racemické sloučeniny kroku F. Obdobně, za použití (-)- nebo (+)- izomeru z kroku G, se získá (-)- nebo (+)- izomer přípravného příkladu 9.

Přípravný příklad 10

Sloučenina obecného vzorce CVI:

Krok A:

4 4 4 *

4 4 4 4

4 444 444

4 4

44 44 • 4 44

4 4 4

4 444

4 4

44 ·* »···

4 • 4

4

4 • 4

Smísí se 13 g (33,3 mmol) sloučeniny získané z přípravného příkladu 4, kroku E, a 300 ml toluenu při teplotě 20 °C, potom se přidá 32,5 ml (32,5 mmol) 1 M roztoku DIBAL v toluenu. Směs se ohřívá pod refluxem po dobu 1 hodiny, ochladí se na teplotu 20 °C, přidá se dalších 32,5 ml 1 M roztoku DIBAL a zahřívá se pod refluxem po dobu jedné hodiny. Směs se ochladí na 20 °C a do směsi se přidá 400 g ledu, 500 ml EtOAc a 300 ml 10% NaOH (vodného). Vodná vrstva se extrahuje pomocí CH2CI2 (3 x 200 ml), organické vrstvy se usuší MgSO4, potom se vakuově koncentrují na destilační zbytek. Zbytek se chromatografuje (silikagel, 12% MeOH v CH2CI2 + 4% NH₄OH) za zisku 10,4 g očekávané sloučeniny ve formě racemické směsi. Hmotnostní spektrum: MH+ = 469 (FAB). Částečné ¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): 8,38 (s, 1H); 7,57 (s, 1H); 7,27 (d,

1H); 7,06 (d,1H); 3,95 (d, 1H).

Krok B - separace enantiomerů:

Racemická směs získaná v kroku A se separuje pomocí chirálně preparativní chromatografie (Chiralpack AD, 5 cm x 50 cm sloupec, je použito 5% iPrOH v hexanu + 0,2% diethylamin) za zisku (+)-izomeru a (-)-izomeru očekávané sloučeniny.

Fyzikálně chemické údaje pro (+)-izomer: hmotnostní spektrum: MH+ = 469 (FAB); [a]²⁵D = +43,5°(c= 0,402, EtOH); částečné ¹H NMR (CDCI₃, 400 MHz): 8,38 (s, 1H);

7,57 (s, 1H); 7,27 (d, 1H); 7,05 (d, 1H); 3,95 (d, 1H).

00 · 0 0 • 0 0 0

0 000

0 0

00 •9 ··♦*

00 > 0 0 0 ► 0 0 0

000 000

Fyzikálně chemické údaje pro (-)-izomer: hmotnostní spektrum: MH+ = 469 (FAB); [a]²⁵D = -41,8° (C= 0,328 EtOH); částečné ¹H NMR (CDCfe, 400 MHz): 8,38 (s, 1H);

7,57 (s, 1H); 7,27 (d, 1H); 7,05 (d, 1H); 3,95 (d, 1H).

Krok C:

Podle postupu přípravného příkladu 9, kroku H, se získá racemická sloučenina, (+)-izomer a (-)-izomer očekávané sloučeniny z přípravného příkladu 10.

Přípravný příklad 11

[racemická, stejně tak (+)-izomery jako i (-)-izomery]

Sloučenina obecného vzorce CVIII:

N l

H (CVIII),

0 0 • 0 0

000 0

0« • 0 ····

··

0 0 «

0 0 0

0 000 • 0 0

00 • 00 0

00 se připravuje podle postupu přípravného příkladu 40 dle WO 95/10516 (vydaným 20. dubna 1995) pokračuje se podle postupu popsaném v příkladě 193 WO 95/10516.

(+)- a (-)- izomery se separují podle stejného postupu jako u kroku D přípravného příkladu 6.

Fyzikálně chemické údaje pro R-(+)-izomer: ¹³C NMR (CDCh): 155,8 (C); 146,4 (CH); 140,5 (CH); 140,2 (C); 136,2 (C); 135,3 (C); 133,4 (C); 132,0 (CH); 129,9 (CH);

125,6 (CH); 119,3 (C); 79,1 (CH); 52,3 (CH₂); 52,3 (CH); 45,6 (CH₂); 45,6 (CH₂); 30,0 (CH₂); 29,8 (CH₂). [a]²⁵D = +25,8° (8,46 mg / 2 ml MeOH).

Fyzikálně chemické údaje pro S-(-)-izomer: ¹³C NMR (CDCI3): 155,9 (C); 146,4 (CH); 140,5 (CH); 140,2 (C); 136,2 (C); 135,3 (C); 133,3 (C); 132,0 (CH); 129,9 (CH);

125,5 (CH); 119,2 (C); 79,1 (CH); 52,5 (CH₂); 52,5 (CH); 45,7 (CH₂); 45,7 (CH₂); 30,0 (CH₂); 29,8 (CH₂). [ct]²⁵o = -27,9° (8,90 mg / 2 ml MeOH).

Dále se postupuje podle stejného postupu jako u přípravného příkladu 5, krok C a D, racemická sloučenina, (+)-izomer nebo (-)-izomer očekávané sloučeniny přípravného příkladu 11 se získá z odpovídající racemické sloučeniny, (+)-izomeru nebo (-)-izomeru sloučeniny obecného vzorce CVIII:

(CVIII) ··

9 9 9 9

9 9 9 · • · ··· » · » · · 9

99

Příklad 1

Sloučenina obecného vzorce XXXIII:

»· ····

9 9 9 9 9

9 9 999 ·99

9 9 9 • 99 99

(XXXIII),

Směs sloučeniny obecného vzorce VIIC:

(VIIC), (přípravný příklad 8) (0,10 g, 0,17 mmol), bezvodého dimethylformamidu (5 ml),

5-chlór-1-fenyl-1H-tetrazolu (0,03 g, 0,19 mmol) a bezvodého uhličitanu sodného (0,04 g, 0,34 mmol) se míchá při pokojové teplotě přes noc. Směs se vakuově koncentruje, naředí se dichlormethanem, promyje se vodou a usuší se bezvodým síranem hořečnatým. Filtrací a vakuovou koncentrací vzniká žlutý olej (0,10 g). Purifkuje se pomocí rychlé sloupcové chromatografíe (silikagel), používá se 50% ethyl acetát v hexanu, následně 100% ethyl acetát a získá se sloučenina obecného vzorce XXXIII (0,06 g, 46%, teplota tání 133 °C (dec)).

·· ··«* • · · · · · · ·--!

• · ·9« · · « « · **· ··· ·..· ..· ·..· : .· ··

Příklad 2

Sloučenina obecného vzorce XXXIV:

(XXXIV),

Směs sloučeniny obecného vzorce XCIV (přípravný příklad 8) (0,15 g, 0,25 mmol), bezvodého dimethylformamidu (5 ml), 2-bromthiazolu (0,08 g, 0,50 mmol) a bezvodého uhličitanu sodného (0,05 g, 0,50 mmol) se míchá při teplotě místnosti přes noc, potom se ohřívá pod refluxem po dobu 2,5 hodiny. Směs se vakuově koncentruje, naředí se dichlormethanem a promyje se pomocí 1 M kyseliny chlorovodíkové, pak 1 N vodným roztokem hydroxidu sodného a vysuší se bezvodým síranem hořečnatým. Filtrací a vakuovou koncentrací vzniká lepkavá pěna (0,13 g). Ta se přečistí pomocí preparativní deskové chromátografie (silikagel), používá se 2% methanol v dichlormethanu a vznikne sloučenina obecného vzorce XXXIV (0,07 g, 41%, teplota tání 117,6 °C (dec)).

Příklad 3

Sloučenina obecného vzorce XXXV:

o (XXXV),

Sloučenina obecného vzorce XCIV (přípravný příklad 8) (0,15 g, 0,25 mmol), bezvodý dimethylformamid (5 ml), 2-chlorbenzoxazol (0,08 g, 0,50 mmol) a bezvodý uhličitan sodný (0,05 g, 0,50 mmol) se míchají při teplotě místnosti přes noc. Směs se vakuově koncentruje, naředí se dichlormethanem a promyje se pomocí 1 M kyseliny chlorovodíkové, poté 1 N vodným roztokem hydroxidu sodného a usuší se bezvodým síranem hořečnatým. Filtrací a vakuovou koncentrací vzniká pěna (0,17 g). Ta se přečistí pomocí preparativní deskové ehromatografié (silikagel), používá se 2% methanol v dichlormethanu a získá se sloučenina obecného vzorce XXXV (0,08 g, 44%, teplota tání 125,6 °C).

Příklad 4

Sloučenina obecného vzorce XXXVI:

Br (XXXVI)

Sloučenina obecného vzorce XCIV (přípravný příklad 8) (0,15 g, 0,25 mmol), bezvodý dimethylformamid (5 ml), 2-brompyridin (0,16 g, 1,0 mmol) a bezvodý uhličitan sodný (0,05 g, 0,50 mmol) se míchají při teplotě místnosti přes noc a potom pod refluxem po dobu 1 hodiny. Směs se vakuově koncentruje, naředí se dichlormethanem a promyje se pomocí 1 M kyseliny chlorovodíkové, poté 1 N vodným hydroxidem sodným a usuší se bezvodým síranem hořečnatým. Filtrací a vakuovou koncentrací vzniká žlutý olej (0,24 g). Ten se přečistí pomocí preparativní deskové ehromatografié (silikagel), používá se 2% methanol v dichlormethanu a získá se sloučenina obecného vzorce XXXVI (0,08 g, 47%, teplota tání 91,3 °C).

Příklad 5

Sloučenina obecného vzorce XXXVII:

444 444

(XXXVII),

Sloučenina obecného vzorce XCIV (přípravný příklad 8) (0,15 g, 0,25 mmol), bezvodý dimethylformamid (5 ml), 2-brompyrimidin (0,16 g, 1,0 mmol) a bezvodý uhličitan sodný (0,05 g, 0,50 mmol) se míchají při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Směs se vakuově koncentruje, naředí se dichlormethanem a promyje se pomocí 1 M kyseliny chlorovodíkové, poté 1 N vodným hydroxidem sodným a usuší se bezvodým síranem hořečnatým. Filtrací a vakuovou koncentrací vzniká žlutý olej (0,36 g). Ten se přečistí pomocí preparativní deskové chromatografie (silikagel), používá se 5% methanol v dichlormethanu a získá se sloučenina obecného vzorce XXXVII (0,09 g, 53%, teplota tání 103,3 °C ).

Příklad 6

Sloučenina obecného vzorce XXXVIII:

(XXXVIII), ·

Pokud se bude dodržovat tento postup vznikne sloučenina obecného vzorce XXXVIII.

Sloučenina obecného vzorce XCIV (přípravný příklad 8) (0,15 g, 0,25 mmol), bezvodý dioxan (5 ml), 4-chlorpyridin hydrochlorid (0,04 g, 0,27 mmol) a bezvodý uhličitan sodný (0,07 g, 0,62 mmol) se míchají při teplotě 115 °C po dobu 3 dnů. Směs se ochladí na teplotu místnosti, vakuově se koncentruje, naředí se díchlormethanem a vodou, promyje se pomocí 1 M vodné kyseliny chlorovodíkové. Organická fáze se promyje pomocí 1M NaOH (vodný), poté se vysuší síranem hořečnatý, filtruje se a koncentruje rotační vakuovou odparkou. Takto vznikne sloučenina obecného vzorce XXXVIII.

Příklad 7

Sloučenina obecného vzorce XLVI:

Pokud se bude dodržovat tento postup vznikne sloučenina obecného vzorce XLVI Sloučenina obecného vzorce XCIV (přípravný příklad 8), bezvodý dimethylformamid, bromcyklopropan a bezvodý hydrid sodný se spolu smíchají. Směs se ochladí na teplotu místnosti, naředí se vodou, filtruje se a sraženina se promyje vodou. Pevná fáze se rozpustí v dichlormethaňu a promyje se pomocí 1 M kyseliny chlorovodíkové, poté 1 N vodným hydroxidem sodným a usuší se bezvodým síranem hořečnatým. Filtruje se, vakuově koncentruje a přečistí se pomocí preparativní deskové chromatografie (silikagel), používá se 5% methanol v dichlormethaňu a koncentrovaný hydroxid amonný a vznikne sloučenina obecného vzorce XLVI.

Příklad 8

Sloučenina obecného vzorce XXXIX:

(XXXIX),

Krok A:

-(3-brom-8-chlor-6,11 -dihydro-5H-benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyri di n-11 -y I )-4-[(4 piperidinyl)acetyl]-piperazin (přípravný příklad 11) (2,5 g) (1 ekvivalent) a difenylkyanokarbonimidát (1,38 g) (1,2 ekvivalentu) se rozpustí v 2-propanolu (65 ml) a roztok se zahřeje na teplotu 80 °C pod refluxem v dusíkové atmosféře po dobu 24 hodin. Směs se nechá odpařit do sucha a výsledná sloučenina se chromatografuje na silikagelovém sloupci (60 x 2,5 cm), používá se čistý ethylacetát jakožto eluční činidlo za vzniku očekávané sloučeniny (2,792 g; 87%), FABMS: m/z 661 (MH+).

Fenyl 4-[2-[4-(3-brom-8-chlor-6,11-dihydro-5H-benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridin11-yl)-1-piperazinyl]-2-oxoethyl]-N-kyano-1-piperidinkarboximidát (krok A) (1 ekvivalent) se rozpustí v methanolu. Přidá se hydrazin hydrát (1 ekvivalent) a směs se míchá při teplotě 25 °C po dobu 1 hodiny. Směs se nechá odpařit do sucha a chromatografuje se na silikagelu za vzniku sloučeniny obecného vzorce XXXIX (5-[4-[2-[4-(3-brom-8-chlor6,11-dihydro-5H-benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridin-11-yl)-1-piperazinyl]-2-oxoethyl]-1piperidinyl]-3-amino-1,2,4-triazol).

Příklad 9

Sloučeniny obecného vzorce XL a XLI.

(XL), (XLI) ·· to··· •·to ··· • · ·· ··

Fenyl 4-[2-[4-(3-brom-8-chlor-6,11-dihydro-5H-benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridin11-yl)-1-piperazinyl]-2-oxoethyl]-N-kyano-1-piperidinkarboximidát (krok A příkladu 8) (1 ekvivalent) se rozpustí v methanolu. Přidá se hydroxylamin (1 ekvivalent) a směs se míchá při teplotě 25 °C po dobu 1 hodiny. Směs se nechá odpařit do sucha a chromatografuje se na silikagelu za vzniku sloučeniny obecného vzorce XL (3-[4-[2-[4(3-brom-8-chlor-6,11-dihydro-5H-benzo[5,6] cyklohepta[1,2-b]pyridin-11 -yl)-1 piperazinylj-2-oxoethyl]-1-piperidinyl]-5-amino-1,2,4-oxadiazol) a sloučeniny obecného vzorce XLI (5-[4-[2-[4-(3-brom-8-chlor-6,11-dihydro-5Hbenzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridi n-11 -yl )-1 -piperazinyl]-2-oxoethyl]-1 -piperidi nyl]-3amino-1,2,4-oxadiazol).

Příklad 10

Sloučenina obecného vzorce XLIV:

(XLIV),

Ke sloučenině obecného vzorce XCIV (přípravný příklad 8) (0,20 g, 0,34 mmol), která se rozpustí v 1,4-dioxanu (5 ml) se přidá bezvodý uhličitan sodný (0,07 g, 0,68 mmol) a tetra-acetoxybrom-a-D-dlukóza (0,15 g, 1,1 ekv.). Směs se míchá pod refluxem přes noc, směs se vakuově koncentruje, naředí se dichlormethanem a promyje se pomocí 1 M kyseliny chlorovodíkové, poté 1 N vodným hydroxidem sodným a usuší se bezvodým síranem hořeČnátým. Filtrací a vakuovou koncentrací vzniká olej, který se přečistí pomocí preparativní deskové chromatografie (silikagel), používá se 2% methanol v dichlormethanu a koncentrovaný hydroxid amonný za vzniku sloučeniny obecného vzorce XLIV, (+)-4-(3,10-dibrom-8-chlor-6,11-dihydro-5H99 9999

9

99

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9 9

99 99 9 99 99 benzo[5,6]cyklohepta[1,2-b]pyridin-11 -yl)-1 -[[1 -[2,3,4,6-tetra-O-acetyl-1 -β-Dglukopyranosyl]-4-piperidinyl]acetyl]piperidin) (0,05 g, 16%).

Testy:

FPT IC50 (inhibice farnesyl protein transferázy, in vitro enzymový test) a COS Cell IC50 (buněčný test) byly stanoveny podle postupů popsaných ve WO 95/10516, vydáno 20. dubna 1995. GGPT IC50 (inhibice geranylgeranyl protein transferázy, in vitro enzymový test), Cell Mat Test a protinádorová aktivita (in vivo protinádorové studie) se stanovují podle postupu popsaného ve WO 95/10516. Objev WO 95/10516 je zde zahrnut v odkazech.

Další testy se provádějí podle stejných výše uvedených postupů, ale s náhradou alternativního indikátoru linie nádorových buněk na místě T24-BAG buněk. Testy se provádějí použitím DLD-1-BAG lidských buněk karcinomu tlustého střeva s expresí aktivovaného genu K-ras nebo SW620-BAG lidských buněk karcinomu tlustého střeva s expresí aktivovaného genu K-ras. Aktivita látek tohoto vynálezu proti nádorovým buňkám může být dokázána i při použití jiných buněčných nádorových linií, které jsou již známé.

Test na měkkém agaru:

Pro nádorové buněčné linie je charakteristický růst buněk, který je nezávislý na připevnění buňky. Lidské nádorové buňky se suspendují v růstovém médiu, které obsahuje 0,3% agarózu a určitou koncentraci inhibitoru farnesylové transferázy. Roztok se přelije na růstové médium ztužené pomocí 0,6% agarózy, která obsahuje na vrchu stejnou koncentraci inhibitoru farnesyl protein transferázy. Poté když vrchní vrstva ztuhne, plotny se nechají inkubovat k zajištění růstu buněčných kolonií po dobu 10 až 16 dní při teplotě 37 °C a při 5% koncentraci CO2. Po inkubaci se kolonie obarví tak, že se na agar přelije roztok MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-dofenyltetrazolium bromid, Thiazolylová modř) (1 mg/ml v PBS). Kolonie se počítají a stanovují se IC50.

U sloučenin obecného vzorce XXXIII, XXXIV, XXXV, XXXVI, XXXVII a XLIV bylo FPT IC50 (H-ras) v rozmezí od 4,6 do 140 nmol (nanomol).

U sloučenin obecného vzorce XXXV, XXXVI a XLIV bylo FPT (K-ras) IC50 v rozmezí od 29 do 91 nmol (nanomol).

U sloučenin obecného vzorce XXXV, XXXVI, XXXVII a XLIV bylo Cos Cell IC50 v rozmezí od 35 do 120 nmol.

U sloučenin obecného XXXVI a XLIV bylo IC50 na měkkém agaru v rozmezí od 80 do více než 500 nmol.

Znalci v oboru ocení, že když W je pyranosa, pyranosid, furanosa nebo furanosid, mohou vést kyselé podmínky (např. v žaludku) k odstranění této skupiny W. Proto by bylo žádoucí přípravky, které obsahují sloučeniny s těmito skupinami W ochránit při podávání ústy před účinky kyselin, např. střevním povlakem.

Pro farmaceutické sloučeniny připravované z látek popisovaných v tomto vynálezu se používají neutrální farmaceuticky přijatelné nosiče ve formě jak pevné tak tekuté. Mezi přípravky v pevné formě patří prášek, tablety, dispergovatelné granule, kapsle, tobolky a čípky. Prášky a tablety obsahují 5 až 70 procent aktivní přísady. Jsou známé vhodné pevné nosiče, např. uhličitan hořečnatý, stearát hořečnatý, talek, cukr, laktosa. Tablety, prášky, tobolky a kapsle se používají jako pevné dávkovači formy vhodné pro podávání ústy.

Pro přípravu čípků se nejprve rozpustí snadno měknoucí vosk jako je směs glyceridů mastných kyselin nebo kakaové máslo, potom se mícháním homogenně rozptýlí aktivní přísada. Změklá homogenní směs se potom nalije do forem vhodné velikosti, nechá se ochladit a tím ztuhne.

Mezi přípravky v tekuté formě patří roztoky, suspenze a emulze. Jako příklad lze uvést vodu nebo roztok vody s propylen glykolem pro parenterální injekce.

Mezi přípravky v tekuté formě patří také roztoky pro podávání nosem.

Mezi aerosolové přípravky vhodné k inhalaci patří roztoky a pevné látky v práškové formě, které jsou kombinací farmaceuticky přijatelného nosiče, jako je např. stlačený inertní plyn.

Také sem patří přípravky v pevné formě, které jsou určeny k přeměně krátce před použitím na přípravky v tekuté formě jak pro podání ústy tak i pro parenterální podávání. Takovéto tekuté formy zahrnují roztoky, suspenze a emulze.

0' ' 0‘0 ’ ·»' ' • * · · 0· ·«·· 00 • 0 000 00 0

0 0 0 0

00 00 '0 0 00 ♦ 0 0 0 0

0 0 0 0 • · 000 000 0 0 0 0 00 00

00

Příklady farmaceutické dávkové formy

Příklad A

Tablety

č.	Přísada	mg / tbl	mg / tbl
1.	Aktivní látka	100	500
2.	Laktosa USP	122	113
3.	Kukuřičný škrob, konzumační čistoty, v podobě 10% pasty v purifikované vodě	30	40
4.	Kukuřičný škrob, konzumační čistoty,	45	40
5.	Stearát hořečnatý	3	7
Celkem	300	700

Způsob výroby

Smíchají se položky pod č. 1 a 2 ve vhodném mixéru po dobu 10 až 15 minut. Směs se nechá granulovat s položkou č. 3. Pokud je nutno, navlhčené granule se rozmělní přes hrubé síto (např. 1/4, 0,63 cm). Vlhké granule se nechají usušit. Suché granule se přesejí, smísí s položkou č. 4 a míchají se po dobu 10 až 15 minut. Přidá se položka č. 5 a míchá se po dobu 1 až 3 minut. Směs se vtlačí do přístroje na výrobu tablet o vhodné velikosti a hmotnosti.

Příklad B

Kapsle

Č.	Přísada	mg / kps	mg / kps
1.	Aktivní látka	100	500
2.	Laktosa USP	106	123
3.	Kukuřičný škrob, konzumační čistoty,	40	70
4.	Stearát hořečnatý NF	7	7
Celkem	253	700

44

4 4 4 4 4 • 4 4 4 4 4

4 444 44 44

4 4 4 4 4

4· 44 4

44

4 4 4

444 444 • 4 • 4 44 44

Způsob výroby

Smíchají se položky pod č. 1, 2 a 3 ve vhodném mixéru po dobu 10 až 15 minut. Přidá se položka č. 4 a míchá se po dobu 1 až 3 minut. Směs se plní do vhodné dvoudílných želatinových kapslí na přístroji na výrobu kapslí.

Zatímco tento současný vynález je specificky popisován, může být použito mnoho jiných alternativ, modifikací a variací, které jsou běžně známé. Všechny tyto alternativy, modifikace a variace jsou brány v úvahu v rámci tohoto současného vynálezu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I:

kde jeden ze skupiny a, b, c, a d představuje N nebo NR⁹, kde R⁹ je O, -CH₃ nebo -(CH₂)_nCO₂H, kde n je 1 až 3 a zbývající skupiny a, b, c a d představují CR¹ nebo CR²; nebo každý ze skupiny a, b, c a d jsou nezávisle vybrány ze skupiny CR¹ nebo CR²; každé R¹ a každé R² je nezávisle vybráno z vodíku, halogenu, -CF₃, -OR¹⁰,

-COR¹⁰, -SR¹⁰, -S(O),R¹¹ (kde t je 0, 1 nebo 2), -SCN, -N(R¹⁰)2, -NR¹⁰R¹¹, -NO2, -OC(O)R¹⁰, -CO2R¹⁰, -OCO2R¹¹, -CN, -NHC(O)R¹⁰, -NHSO2R¹⁰, -CONHR¹⁰, -CONHCH2CH₂OH, -NR¹⁰COOR¹¹, sloučenina vzorce II:

-SR¹¹C(O)OR¹¹, -SR¹¹N(R⁷⁵)2, kde každé R⁷⁵ je nezávisle vybráno ze skupiny vodíku a -C(O)OR¹¹, benztriazol-1-yl-oxy, tetrazol-5-yl-thio, nebo substituovaný tetrazol-5-yl-thio, alkinyl, alkenyl nebo alkyl, zmíněná alkylová nebo alkenylová skupina volitelně substituovaná halogenem, -OR¹⁰ nebo -CO2R¹⁰;

R³ a R⁴ jsou stejné nebo odlišné, každé nezávisle představuje vodík, jakýkoliv substituent R¹ a R², nebo R³ a R⁴ společně představují nasycený nebo nenasycený kruh C5 až C₇ spojený s benzenovým kruhem (kruh III);

ΦΦ ΦΦ

Φ Φ Φ Φ

Φ 9 9 9

9 999 999

9 9

ΦΦ ΦΦ φφ Φ··· » · Φ Φ 9 · • · Φ · Φ Φ · • · ®ΦΦ Φ Φ · 9

9 9 9 9 Φ 0

99 99 99 0

R⁵, R⁶, R⁷ nebo R⁸ každé nezávisle představuje vodík, -CF3, -COR¹⁰, alkyl nebo aryl, zmíněná alkylová nebo arylová skupina volitelně substituovaná -OR¹⁰, -SR¹⁰, -S(O),R¹¹, NR¹⁰COOR¹¹, -N(R¹⁰)2i -NO_2i -COR¹⁰, -OCOR¹⁰, -OCO2R¹¹, -CO2R¹⁰, OPOsR¹⁰ nebo se R⁵ kombinuje s R⁶ a představuje =0, nebo =S a/nebo R⁷ se kombinuje s R⁸ a představuje =0 nebo =S;

R¹⁰ představuje vodík, alkyl, aryl nebo aralkyl;

R¹¹ představuje alkyl nebo aryl;

X představuje N, CH nebo C, kde C může obsahovat variantně dvojnou vazbu (zobrazenou tečkovanou čarou) na uhlíkový atom 11;

tečkovaná čára mezi uhlíkovými atomy 5 a 6 představuje variantně dvojnou vazbu, pokud je tato dvojná vazba přítomna, A a B nezávisle představují -R¹⁰, halogen, -OR¹¹, -OCO2R¹¹ nebo -OC(O)R¹⁰, a pokud není přítomna dvojná vazba mezi uhlíkovými atomy 5 a 6, A a B nezávisle představují H2, -(0R¹¹)2; vodík a halogen, dihalogen, alkyl a vodík, (alkyl)2, vodík a -OC(O)R¹⁰, vodík a -OR¹⁰, =0, aryl a vodík, =NOR¹⁰ nebo -O-(CH2)_P-O- kde p je 2, 3 nebo 4; a

W představuje heteroarylovou, arylovou, heterocykloalkylovou nebo cykloalkylovou skupinu.
2. Sloučenina podle nároku 1, kde R² je vodík; R¹ je vybrán ze skupiny skládající se z: bromu a chloru; R³ je vybrán ze skupiny skládající se z: bromu a chloru; R⁴je vybrán ze skupiny skládající se z: vodíku, bromu a chloru; R⁵, R⁶, R⁷ a R⁸ jsou vodíky; A a B jsou H₂; a volitelná vazba mezi C⁵ a C⁶ chybí.
3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, kde W je vybrán ze skupiny skládající se z:

(A) heteroaryl vybraný ze skupiny, která obsahuje (1) 1-fenyl-1 H-tetrazol5-yí; (2) pyridyl; (3) thiazolyl; (4) benzoxazolyl; (5) pyrimidinyl; a skupiny obecného vzorce XLII, XLIII a XLIV:

(XLII),

NH,

NH (XLIII), (7)

N

NH, (8) nh₂

N (XLIV), (6) 'N

N and ·» «

•

99 9

9 9 9 • · · • 9 « 9

9 9 ··· ·· ·· • * • · • · ·· ·«· ·· • · 9 • · 9

9 999 •

(B) Heterocykloalkyl vybraný ze skupiny, která obsahuje: (1) cyklické guanidiny, (2) cyklické amidiny, (3) pěti- až šesti- členné heterocykloalkylové kruhy; (4) pyranosidyl;

(C) cykloalkyl vybraný ze skupiny, která obsahuje: cyklopropan, cyklopentan a cyklohexan.
4. Sloučenina podle nároku 1 až 3, kde R⁴je vodík.
5. Sloučenina podle nároku 1 až 3, kde R⁴je vybraný ze skupiny, která obsahuje: chlor nebo brom.
6. Sloučenina podle nároku 1 až 5, kde X je CH.
7. Sloučenina podle nároku 1 až 6, kde W je vybrán ze skupiny skládající se z:

(A) heteroaryl vybraný ze skupiny, která obsahuje (1)1 -fenyl-1 H- . tetrazol-5-yl; (2) pyridyl; (3) thiazolyl; (4) benzoxazolyl;

(5) pyrimidinyl (B) heterocykloalkyl vybraný ze skupiny, která obsahuje skupiny obecného vzorce XLV a XLVI:

(XLV), (XLVI), a 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-1 -β-D-glukopyranosyl.
8. Sloučenina podle nároku 1 až 7 vybraná ze skupiny sloučenin obecného vzorce (XXII), ·· ·· • · 4 · • · · · • · 444 • 4 4

99 99 ·· ··*·

99 9999 99 99
9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

999 9 999 999

9 9 9 9 9

99 9 99 99 kde a R¹, R³ a R⁴ jsou nezávisle vybrány z halogenů; a A, Β, X a W jsou definovány u nároku 1.

9. Sloučenina podle nároku 1 až 8, kde R¹ je brom; a R³ je chlor; a R⁴je brom.
10. Sloučenina podle nároku 1 až 9, kde zmíněnou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce XXII:

(XXII),
11. Sloučenina podle nároku 1 je vybrána ze sloučenin obecného vzorce XXXIII XXXIV, XXXV, XXXVI, XXXVII, XXXVIII, XXXIX, XL, XLI, XLII, XLIII, XLIV, nebo XLVI (XXXIII), (XXXIV), o

·· ·· • » · · · · • · · · · · • · ··· · · · • · · · ·

99 99 99 ·· *··»

99 99

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 999 999

9 9 9

9 99 99 ta (XXXVI), (XXXVII), (XXXVIII), ⁸⁶ «

99 «99 9

99 99 • 9 9 9 9 9 • 999 99

9 9 999 99 9

9 9 9 9 9

9> 99 99

99 99 • 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9999 999

9 9 9

9 99 99 (XXXIX), (XL), (XLI), (XLII),

44 44 • 4 4 4 4

4 * 4 4 4 • 4 444 444

4 4 4 • 44 44

A

44 44 • 4 4 4 • · 4 4 • 4 444

44 4444 (XLIII), (XLIV), (XLVI),
12. Způsob léčby nádorových buněk vyznačující se tím, že se podává účinné množství kterékoliv látky podle nároků 1 až 11.
13. Způsob léčby podle nároku 12 vyznačující se tím, že léčenými buňkami jsou nádorové buňky slinivky břišní, nádorové buňky nádorů plic, nádorové buňky myeloidní leukémie, nádorové buňky folikulárních nádorů štítné žlázy, nádorové buňky myelodysplastických nádorů, nádorové buňky kožních nádorů, nádorové buňky nádorů

44 44

4 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4 4

4 4 444 4 4 4

4 · 4 4 4

44 44 44 i

•4 4444

44 44

4 4 4 4 4

4 4 4 4 4

A 4 4 A 4 444

4 4 4

4 44 44 močového měchýře, nádorové buňky nádorů tlustého střeva, nádorové buňky nádorů prsu nebo nádorové buňky nádorů prostaty.
14. Způsob inhibice farnesyl protein transferázy vyznačující se tím, že se podává účinné množství kterékoliv látky podle nároků 1 až 11.
15. Farmaceutická látka vyznačující se tím, že účinné množství kterékoliv látky podle nároků 1 až 11 se podává v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem.
16. Použití kterékoliv látky podle nároků 1 až 11 vyznačující se tím, že se používá k léčbě nádorových buněk.
17. Použití kterékoliv látky podle nároků 1 až 11 vyznačující se tím, že se používá k výrobě léků k léčbě nádorových buněk.
18. Použití kterékoliv látky podle nároků 1 až 11 vyznačující se tím, že inhibuje farnesyl protein transferázu.
19. Použití kterékoliv látky podle nároků 1 až 11 vyznačující se tím, že se používá pro výrobu léků k inhibici farnesyl protein transferázy.