CZ9498A3

CZ9498A3 - Farmaceutický přípravek obsahující růstový hormon předem ošetřený zinkem a popřípadě lysinem nebo vápenatými ionty

Info

Publication number: CZ9498A3
Application number: CZ9894A
Authority: CZ
Inventors: Thorkild Christensen; Per Balschmidt; Hans Holmegaard Soerensen; Ole Hvilsted Olsen; Lars Thim
Original assignee: Novo Nordisk A/S
Priority date: 1995-07-14
Filing date: 1996-06-28
Publication date: 1998-06-17
Also published as: NO980155D0; CN1190897A; JPH11509212A; EP0839049A1; NO980155L; HUP9802287A2; ZA965368B; HUP9802287A3; KR19990028981A; PL324379A1; AU6353496A; MX9800358A; BR9609741A; IL122583A0; AU715997B2; CA2226523A1; WO1997003692A1

Description

Farmaceutický přípravek, způsob jeho výroby, použití zinku a popřípadě lysinu nebo iontů vápníku pro výrobu stabilizovaného přípravku a způsob léčení poruchy ovlivnitelné deficitem růstového hormonu

Oblast techniky

Předložený vynález se týká farmaceutického přípravku, který obsahuje růstový hormon, způsobu výroby tohoto farmaceutického přípravku, použití zinku popřípadě lysinu nebo iontů vápníku pro stabilizování přípravku s růstovým hormonem a způsobu léčení poruchy ovlivnitelné deficitem růstového hormonu.

Dosavadní stav techniky

Růstové hormony z člověka a z obvyklých domácích zvířat jsou proteiny s přibližně 191 aminokyselinou, které jsou syntetizovány a sekretovány z přední části podvězku mozkového. Lidský růstový hormon sestává ze 191 aminokyseliny.

Růstový hormon je klíčový hormon, který je zahrnut v regulaci nejen somatického růstu, ale také v regulaci metabolismu proteinů, uhlovodíků a tuků. Hlavním účinkem růstového hormonu je podporovat růst.

Mezi orgánové systémy, které jsou ovlivněny růstovým hormonem, patří kostra, pojivové tkáně, svaly a vnitřnosti, jako jsou játra, střeva a ledviny.

Až do vyvinutí rekombinantní technologie a klonování genu růstového hormonu, které nyní zvýšily výrobu např. lidského růstového hormonu (hGH) a Met-hGH v průmyslovém měřítku, mohl být lidský růstový hormon získáván pouze extrakcí z podvězků mozkových mrtvých lidí. Velmi omezené dodávky růstového hormonu omezovaly jeho použití pro podporu dlouživého růstu v dětství a v pubertě při léčení trpasličího vzrůstu, i když byl navržen mimo jiné pro léčeni krátké postavy (díky deficitu růstového • · • ·

hormonu, normální krátké postavy a Turnérova syndromu), deficitu růstového hormonu u dospělých, neplodnosti, léčení popálenin, hojení ran, dystrofie, zpevněni kostí, osteoporózy, difuznlho žaludečního krvácení a pseudoartrózy.

Dále byl růstový hormon navržen pro zvýšení rychlosti růstu domácích zvířat nebo pro snížení podílu tuku u zvířat, která se porážejí pro spotřebu lidí.

Farmaceutické přípravky růstového hormonu mají tendenci být nestálé. Degradační produkty, jako jsou deamidované nebo sulfoxylované produkty a dimerní nebo polymerni formy, vznikají zvláště v roztocích růstového hormonu.

Převládajícími degradačními reakcemi hGH jsou 1) deamidace přímou hydrolýzou nebo přes cyklický sukcinimidový meziprodukt za vzniku různých množství L-asp-hGH, L-iso-asp-hGH, D-asp-hGH a D-iso-asp-hGH [Y.-C.J.Wang a M.A.Hanson: J. Parenteral Science and Technology 42 (Suppl.). 53 (1988), M.C.Manning, K. Patel a R.T.Bochardt: Pharmaceutical Research 6(11). 903 (1989) a B.A. Johnson, J.M.Shirokawa, W.S.Hancock, M.W.Spellman, L.J. Basa a D.W.Asward: J. Biol. Chem. 264. 1462 (1989).] a 2) oxidace methioninových zbytků v polohách 14 a 125 [L.C.Teh a spol.: J. Biol. Chem. 262. 785 (1987), G.W.Becker a spol.: Biotech. Appl. Biochem. JLO, 326 (1988), R.A.Houghten a spol.: Arch. Biochem. Biophys. 178. 350 (1977), R.M.Riggin a spol.: Anal. Biochem. 167. 199 (1987), P.Gellerfors a spol.: Acta Paediatr. Scand. 370 (suppl.). 93 (1990) a M.J.Kaufman: Pharm. Res. 7(3) . 289 (1990).]. Hlavním degradačním produktem hGH v lyofilizovaném stavu stejně jako v roztoku je deamidovaný hGH.

K deamidaci zvláště dochází na Asn v poloze 149 a v menším rozsahu v poloze 152.

hGH se také snadno oxiduje v polohách 14 a 125.

Oxidace hGH v roztoku za vzniku sulfoxidů probíhá normálně • · díky kyslíku, který je v přípravku rozpuštěn. Rozpustnost kyslíku v destilované vodě je kolem 200 μΚ [M.J.Kaufman: Pharm. Res. 7(3) , 289 (1990).]. Jelikož koncentrace hGH v přípravku obsahujícím 4 m. j./ml je 1,3 mg/ml, což odpovídá 60nM hGH, bude kyslík za normálních podmínek skladování přítomen v asi 3000-násobném stechi ome tri ckém nadbytku pro oxidaci hGH. Není snadné vyřešit tento problém odvzdušněním pufrů před uzavřením a zabalením přípravků.

V dnešní době se nepředpokládá, že by tyto tyto deamidované formy a oxidované formy hGH měly mít toxickou nebo pozměněnou biologickou aktivitu nebo vlastnosti vázání na receptor, ale existuje náznak toho, že konformační stabilita sulfoxidů je snížena při srovnání s přírodním hGH.

Pro vyvinutí stabilního rozpuštěného přípravku obsahujícího hGH je důležité znát rychlost deamidace a tvorby sulfoxidů stejně jako způsoby regulace těchto reakcí.

Kinetiky degradace závisejí na teplotě, pH a různých přísadách nebo adjuvans v prostředku s hGH.

Vzhledem k nestabilitě je dnes růstový hormon lyofilizován a skladován v lyofilizované formě při 4 °C, dokud není rekonstituován pro použiti, aby se tak minimalizovala degradace.

Lyofilizované farmaceutické přípravky obsahující hGH jsou dnes rekonstituovány pacientem a potom jsou během používání skladovány jako roztok po dobu až 14 dnů při 4 °C, při čemž dochází k částečné degradaci.

Postup rekonstituování lyofilizovaného růstového hormonu představuje pro pacienta obtíže.

V dnešní době je tedy výhodné rekonstituovat růstový hormon co nejpozději před použitím a skladovat a zasílat přípravek v lyofilizovaném stavu. Řetěz od výrobce do lékárny je vhodný pro zacházení s prostředky za regulované nízké teploty, např. 4 °C, což umožňuje dlouhou životnost až dvou let.

Avšak rozšířené použití injekčních per pro samoléčení a rozšířená oblast používáni volá pro prostředku, který je stabilní po dostatečně dlouhou dobu i u konečného uživatele za podmínek, kde není vždy dostupné dostatečné” chlazení.

Prostředek by měl být stabilní s výhodou v lyofilizovaném stavu, u konečného uživatele po dobu jednoho měsíce a v injekčním peru v rekonstituovaném stavu další jeden měsíc pro zamýšlenou dobu používáni náplně.

Existuje tedy potřeba stabilnějších prostředků s růstovým hormonem v lyofilizovaném stavu za relativně vysoké teploty a po další dobu používáni za relativně vysoké teploty v roztoku. Tato stabilizace je velmi důležitá, jestliže se podávání růstového hormonu přenese z klinik do bytů jednotlivců, kteří mají být léčeni, při čemž tam nemusí být dostupné optimální podmínky, jak shora uvedeno.

Dále pak posun podávání růstového hormonu k použití injekčního pera opět volá po stabilním rozpuštěném přípravku obsahujícím růstový hormon, aby se usnadnilo zacházení, které musí pacient provádět. Stabilní rozpuštěný přípravek obsahující růstový hormon se může vyrábět pro okamžité použití ve formě náplně pro injekční pero používané pacientem, který se může vyhnout rekonstituování přípravku a tedy nemusí mít lyofilizovaný přípravek, vhodné ředidlo pro rekonstituci a také nutnou zručnost a sterilní zařízení pro sterilní rekonstituci přípravku.

Z bezpečnostních důvodů bude také žádoucí vyhnout se rekonstituci lyofilizovaného přípravku přímo před použitím přípravku .

Dále by bylo také výhodné vyhnout se stupni lyofilizace při výrobě přípravků s růstovým hormonem. Lyofilizace spotře• · · · • · bovává čas, jde o drahý postup a často také představuje úzké místo při výrobě vzhledem k omezené kapacitě vymrazovače.

Existuje tedy potřeba snížit rychlost degradačního procesu, aby se umožnilo, že rozpuštěné přípravky s hGH budou stabilní během svého skladování a během používáni po dobu až jednoho měsíce.

Dřívější pokusy stabilizovat hGH plně neuspěly při předcházení tvorbě diraeru. Tyto problémy související s tvorbou dimeru jsou zaznamenány např. Beckerem G.W.: Biotechnology and Applied Biochemistry 2, 478 (1987).

Mezinárodní patentový spis č. WO 89/09614 a australská patentová přihláška č. 30771/89 popisují stabilní farmaceutický prostředek, který obsahuje lidský růstový hormon, glycin a manitol. Tento přípravek vykazuje zlepšenou stabilitu během normálního zpracování a skladování v lyofilizovaném stavu stejně jako v době používání po rekonstituci.

Publikovaná evropská patentová přihláška č. 303 746 popisuje, že zvířecí růstový hormon může být stabilizován různými stabilizátory, které snižují tvorbu nerozpustných podílů a chrání aktivitu roztoku ve vodných prostředích. Mezi tyto stabilizátory patří některé polyoly, aminokyseliny, polymery aminokyselin s nabitou postranní skupinou při fysiologickém pH a soli cholinu. Polyoly jsou vybrány ze skupiny sestávající z neredukujících cukrů, cukerných alkoholů, cukerných kyselin, pentaerythritolu, laktosy, ve vodě rozpustných dextranů a Ficollu; aminokyseliny jsou vybrány ze skupiny sestávající z glycinu, sarkosinu, lysinu nebo jeho solí, šeřinu, argininu nebo jeho soli, betainu, Ν,Ν-dimethyl-glycinu, kyseliny aspartové nebo jejich solí, kyseliny glutamové nebo jejích solí; polymery aminokyselin, které mají nabitou postranní skupinu při fysiologickém pH, mohou být vybrány z polylysinu, polyaspartové kyseliny, polyglutamové kyseliny, polyargininu, polyhistidinu, polyornithinu a jeho solí; a cholinové deriváty jsou vybrány • · · · • · ze skupiny sestávající z cholinchloridu, cholindihydrogencitrátu, cholinhydrogenvínanu, cholinhydrogenuhličitanu, tricholincitrátu, cholinaskorbátu, cholinborátu, cholinglukonátu, cholinfosfátu, dicholinsulfátu a cholinmukátu.

USA patentový spis č. 4 917 685 popisuje dodávací zařízení navržené pro implantaci, které obsahuje růstový hormon stabilizovaný použitím stejných stabilizátorů, jako je uvedeno v evropském patentu 303 746.

Publikovaná evropská patentová přihláška č. 374 120 popisuje stabilizovaný přípravek obsahující hGH a polyol, který má tři hydroxyskupiny. Zmíněn je glycerol a tri(hydroxymethyl)-aminomethan. Dále je popsána přítomnost hydrochloridu histidinu jako pufru spolu s polyolem.

Mezinárodní patentový spis č. WO 92/00998 popisuje, že krystaly lze získat krystalizací růstového hormonu se zinkem.

Mezinárodní patentový spis č. WO 93/12811 popisuje stabilizované přípravky s růstovým hormonem ve formě lyofilizovaného prášku nebo vodného roztoku obsahujícího asparagin.

Mezinárodní patentový spis č. WO 93/12812 popisuje stabilní přípravky s růstovým hormonem ve formě lyofilizovaného prášku nebo vodného roztoku obsahujícího histidin. V těchto přípravcích je deamidace snížena o 25 až 30 % při srovnání s odpovídajícím přípravkem růstového hormonu, který obsahuje fosforečnanový pufr. Dále bylo popsáno, že se krystalizací růstového hormonu se zinkem v přítomnosti histidinu mohou vytvořit krystaly.

Mezinárodní patentový spis Č. WO 93/19776 popisuje proteinové přípravky s růstovým hormonem, které obsahují jako pufrovací látku citrát, jako stabilnější než přípravky, které obsahuji fosforečnanový pufr. Tyto přípravky mohou obsahovat také aminokyseliny, jako je glycin a alanin a/nebo manitol nebo jiné • · • · · · cukerné alkoholy a/nebo glycerol a/nebo jiné uhlovodíky a popřípadě ochranné Činidlo, jako je benzylalkohol.

Mezinárodní patentový spis Č. WO 94/03198 popisuje stabilní vodný přípravek s lidským růstovým hormonem, pufrem, neiontovým povrchově aktivním činidlem a popřípadě neutrální solí, manitolem nebo ochranným činidlem.

Publikovaná evropská patentová přihláška č. 177 478 popisuje prostředek s trvalým uvolňováním, který obsahuje zinek a somatotropin v kontinuální fázi s bioslučitelným olejem.

Publikovaná evropská patentová přihláška č. 216 485 popisuje prostředek s prodlouženým uvolňováním, který obsahuje zinek a somatotropin v ředidle, které obsahuje rostlinný olej a adjuvans, zvláště včelí vosk, stearát hlinitý, karnaubský vosk nebo parafin.

Publikovaná evropská patentová přihláška č. 277 043 popisuje isolaci somatotropinu z vodného roztoku přidáním soli přechodného kovu a vysrážení nerozpustného komplexu.

Mezinárodní patentový spis č. WO 93/13972 popisuje implantovatelné zařízení se zpožděným uvolňováním, které obsahuje somatotropin a zinek a popřípadě aminokyselinu s bazickou postranní skupinou solubilizující Zn-somatotropin, arginin, alanin, histidin a kyselinu glutamovou uvedené jako příklady aminokyselin.

Mezinárodní patentový spis č. WO 92/17200 popisuje stabilní přípravky růstového hormonu s iontem kovu ve formě dimeru, který vykazuje stabilitu vůči denaturaci. Tyto přípravky mohou obsahovat glycin a popřípadě další alanin, glutamin, asparagin, arginin nebo lysin. Tyto aminokyseliny jsou zvláště výhodné, jestliže se lyofilizuje přípravek, takže se vytvoří dostatečná hmota, která tvoři stabilní, suchý přípravek ve formě koláče.

• ·

Podstata vynálezu

Překvapivě bylo nyní zjištěno, že prostředek s lidským růstovým hormonem obsahující zinek a popřípadě lysin nebo ionty vápníku před výrobou konečného přípravku, vykazuje velmi vysokou stabilitu vůči deamidaci ve vodném rozotku a dále je snadno rozpustný ve vodných rozpouštědlech, když je lyofilizován. Stabilita tohoto produktu umožňuje skladování a zasílání tohoto přípravku v lyofilizovaném stavu nebo ve formě rozpuštěného nebo znovu rozpuštěného přípravku.

Farmaceutické přípravky podle vynálezu se mohou připravovat pro podávání jakýmkoliv vhodným způsobem, např. parenterálním nebo orálním podáváním nebo podáváním do mukózní membrány, např. nazálním podáváním. Farmaceutický přípravek se může připravit ve formě dávky, která je obsažena v lékovce nebo kazetě nebo v jakékoliv vhodné nádobě, jako je předem naplněná injekční stříkačka nebo injekční pero.

Přípravek podle vynálezu může tedy existovat ve formě lyofilizovaného prášku, který se musí později rekonstituovat konvenčními ředidly, jako je destilovaná voda nebo voda pro injekce, nebo ve formě roztoku obsahujícího růstový hormon. Tato ředidla mohou obsahovat konvenční ochranná činidla, jako je fenol, m-kresol nebo benzylalkohol.

Výhodným provedením podle vynálezu je taková forma farmaceutického přípravku s lidským růstovým hormonem, který je předem ošetřen zinkem a popřípadě lysinem nebo ionty vápníku, a který dále obsahuje nosič ve formě pufrovaného vodného roztoku růstového hormonu. Tento prostředek je připraven k okamžitému použití a může být skladován a zasílán jako vodný roztok bez jakékoliv značné degradace.

Pufrem, který se používá v roztoku předem ošetřeného růstového hormonu, může být např. histidinový, citrátový, vínanový nebo fosforečnanový pufr. Výhodným pufrem je histidinový pufr.

• · • · · ·

Roztok před ošetřením se s výhodou upraví na hodnotu pH v rozmezí od 2 do 9, výhodněji od 6 do 8, ještě výhodněji od 7 do 7,3.

Kvůli stabilitě se pH v konečném přípravku předem ošetřeného růstového hormonu s výhodou upraví na hodnotu 2 až 9, výhodněji 6 až 8, zvláště na hodnotu 6,0 až 6,8.

Aby se získal stabilizující účinek zinku a popřípadě lysinu nebo iontů vápníku, přidává se zinek s výhodou v množství až 2 mM, výhodněji v množství 1 až 4 moly zinku na mol růstového hormonu, výhodněji i až 2 moly zinku na mol růstového hormonu, nejvýhodněji 1 mol zinku na mol růstového hormonu.

Zinek se s výhodou přidává ve formě farmaceuticky přijatelné soli, jako je chlorid.

Vápenaté ionty, jestliže jsou přítomny, se s výhodou přidávají ve formě fysiologicky přijatelné rozpustné soli, jako je chlorid.

Farmaceutický přípravek podle vynálezu může dále obsahovat soli nebo cukerné alkoholy pro úpravu tonicity a popřípadě ex*· cipient, aby se usnadnilo jeho zpracování, např. lyofilizace, a rychlé a úplné rozpuštění lyofilizovaného přípravku, když se přípravek před použitím rekonstituuje.

Excipient může být vybrán z disacharidů, jako je laktosa, trehalosa a sacharosa, cukerných alkoholů, jako je sorbitol nebo manitol, polysacharidů, jako jsou polymemí formy Dextranu¹”, jako je Dextran^(R> 40, Dextran^ÍR> 70 nebo Dextran^<R) 75, a Ficoll^<R’, a vícemocných alkoholů, jako je polyethylenglykol nebo polyvinylalkohol nebo kombinace dvou nebo více z uvedených. ^V

V dalším aspektu se tento vynález týká způsobu přípravy farmaceutického přípravku obsahujícího růstový hormon předem • · · · • · ošetřený se zinkem a popřípadě lysinera nebo ionty vápníku, při čemž růstový hormon je rozpuštěn v roztoku obsahujícím zinek a popřípadě lysin nebo ionty vápníku, rozpuštěním chloridu zinečnatého v deionizované vodě, popřípadě obsahující lysin nebo ionty vápníku, ponecháním roztoku chvíli stát, přidáním růstového hormonu a popřípadě úpravou pH na hodnotu od 2 do 9.

Hodnota pH se může upravit přidáním kyseliny, která nemá žádný nepříznivý účinek na růstový hormon, s výhodou fysiologicky přijatelné kyseliny, např. minerální kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová nebo kyselina dusičná, nebo organické kyseliny, jako je kyselina octová.

V provedení podle způsobu podle vynálezu se přidávají případně soli a excipient, načež se roztok naplní do nádoby a lyofilizuje se.

Ještě jiný aspekt vynálezu se týká použití zinku a popřípadě lysinu nebo iontů vápníku pro předběžné ošetření růstového horomnu pro přípravu stabilizovaného přípravku růstového hormonu.

V ještě jiném aspektu se tento vynález týká způsobu léčení poruchy, která je ovlivnitelná růstovým hormonem, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání přípravku, který obsahuje růstový hormon předem ošetřený zinkem a popřípadě lysinem nebo ionty vápníku.

V předložené souvislosti růstový hormon může znamenat růstový hormon jakéhokoliv původu, jako je ptačí, hovězí, koňský, lidský, ovčí, prasečí, lososový, pstruhový nebo tuňákový růstový hormon, s výhodou hovězí, lidský nebo prasečí, nejvýhodnějším je lidský růstový hormon. Růstový hormon používaný podle vynálezu může znamenat přírodní růstový hormon isolovaný z přírodního zdroje, např. extrakcí podvězků mozkových konvenčním způsobem, nebo růstový hormon připravený rekombinantními technikami, např. tak, jak popisují E.B.Jensen a S.Carlsen:

Biotech. and Bioeng. 36, 1 (1990). Růstový hormon může znamenat také upravenou formu růstového hormonu, v němž je jeden nebo více zbytků aminokyselin deletován(o), jeho analog, v němž jeden nebo více aminokyselinových zbytků v přírodní molekule je substituován(o) zbytkem jiné aminokyseliny, s výhodou zbytkem přirozené aminokyseliny, pokud tato substituce nemá nějaký nepříznivý vliv, jako je antigeničnost nebo snížený účinek, nebo jeho derivát, např. takový, který má prodloužení na N- nebo C-konci, jako je Met-hGH. Výhodným růstovým hormonem je hGH.

Pojem dávka růstového hormonu se týká množství, které poskytuje léčivý účinek při režimu podávání. Přípravky se připravují tak, aby obsahovaly alespoň 0,1 mg/ml hGH, s výhodou až 10 mg/ml, s výhodou od l mg/ml do 40 mg/ml, výhodněji od 1 mg/ml do 25 mg/ml, např. od 1 mg/ml do 5 mg/ml, vypočteno pro přípravek určený k okamžitému použití. Při použití těchto prostředků pro podávání člověku, který trpí trpasličím vzrůstem díky nízké funkci podvězku mozkového, tyto přípravky obsahují například od 0,1 mg/ml do 10 mg/ml, podle běžně zamýšleného režimu dávkování pro zamýšlené léčení. Koncentrační rozsah není pro vynález rozhodující, může se měnit podle dohledu lékaře nad podáváním.

Lysin, který se používá podle předloženého vynálezu, s výhodou znamená přirozeně se vyskytující «-aminokyselinu. Lysin může znamenat 1 nebo d lysin nebo jejich směs.

V předložené souvislosti se vysoká stabilita získává tehdy, když přípravek je stabilnější než konvenčni přípravek, který obsahuje fosforečnanový pufr, a s výhodou tak stabilní, jako odpovídající přípravek, který jako stabilizátor obsahuje histidin, v němž je deamidace hGH snížena o přibližně 20 % při srovnání s fosforečnanovým pufrem, jak je popsáno ve spisu WO 93/12812.

Rozpouštědlo použité ve způsobu podle vynálezu může znamenat vodu, alkoholy, jako je ethyl-, propyl-, isopropyl- nebo • · · · ti · · butyl-alkohol, nebo jejich směsi. Rozpouštědlo může obsahovat ochranné činidlo, jako je fenol, m-kresol nebo benzylalkohol.

Pojem předem ošetřený je používán v předložené souvislosti s přípravky růstového hormonu k označeni růstového hormonu, který je ošetřen zinkem a popřípadě lysinem nebo ionty vápníku před přidáním dalších složek nebo k dalším složkám při výrobě přípravku s růstovým hormonem.

Tento vynález je podrobněji vysvětlen v následujících příkladech, které ilustrují vynález. Tyto příklady nejsou zamýšleny jako omezení rozsahu vynálezu tak, jak je definován připojenými nároky.

Přiklad provedeni vynálezu

Zmenšení deamidace

Rychlost deamidace po různých předběžných ošetřením byla zkoumána při 37 °C u hGH přípravků obsahujících 4 mg/ml hGH, 0,18 mM ZnCl₂, 3 mM histidinu, 1,5 % (hmotn.) benzylakoholu, pH

6.8, při srovnání s histidinem a fosforečnanovým pufrem při pH

6.8.

hGH přípravky byly připraveny rozpuštěním 24 mg hGH ve 2,5 ml: a) 2mM CaCl₂ + 0,36mM ZnCl₂, pH 7 až 7,3,

b) 2mM lysinu + 0,36mM ZnCl₂, pH 7 až 7,3 nebo

c) 0,36mM ZnCl₂, pH 7 až 7,3.

Po skladování 1 h při 4 °C (aby se nechal Zn⁺* zkomplexovat s hGH) byly přípravky a) až c) přeformulovány použitím odsolovací kolony PD10 (Pharmacia) ve 3 ml 6mM histidinu, 0,36mM ZnCl₂, 8 mg/ml hGH. Potom byly přidány 3 ml 3% (hmotn.) benzylalkoholu, čož vedlo ke konečnému přípravku se 4 mg/ml hGH, 3mM histidinem, 0,18mM ZnCl₂ a 1,5% (hmotn.) benzylalkoholem (pH přidáním HCl/NaOH bylo upraveno na hodnotu 6,8).

Jako referečnl přípravky byly použity: a) 4 mg/ml hGH, 3mM histidin, 0,18mM ZnCl₂, 1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8, b) 4 mg/ml hGH, 3mM histidin, 1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8 a c) 4 mg/ml hGH, 3mM Na₂HP0₄, 1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8. Referenční přípravky nebyly předem ošetřeny Zn⁺⁺.

hGH prostředky uvedené níže v tabulce byly skladovány 7 dnů při 37 °C a analyzovány na obsah deamidovaného hGH IE-HPLC. Výsledky jsou zřejmé z následující tabulky.

Tabulka přípravek počáteční pH/ /koncové pH obsah* deamidovaného hGH (%) obsahy deamidováných forem při srovnáni s His (%)

3mM histidin, 6,78/6,84 10,0 84

0,18mM ZnCl₂,

1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8, předem ošetřeno podle postupu ad a)

3mM histidin, 6,75/6,83 11,3 88

0,18mM ZnCl₂,

1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8, předem ošetřeno podle postupu ad b) • · · ·

Tabulka (dokončení)

přípravek	počáteční pH/ /koncové pH	obsah* deamidovaného hGH (%)	obsahy deamidovaných forem při srovnání s His (%·)
3mM histidin, 0,18mM ZnCl₂, 1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8, předem ošetřeno podle postupu ad c)	6,79/6,87	11,5	89
3mM histidin, 0,18mM ZnCl₂, 1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8, bez předběžného ošetření	6,84/6,92	12,8	99
3mM histidin, 1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8	6,84/6,92	12,9	100
3mM Na₂HPO₄, 1,5% (hmotn.) benzylalkohol, pH 6,8	6,83/6,86	15,9	123
* Obsah deamido	opraven o 1 % na	odchylku 0,1	jednotky pH od

hodnoty 6,8.

Ze shora uvedené tabulky je vidět, že rychlost deamidace hGH je snížena na 84 % vzhledem k histidinu (68 % vzhledem k fosforečnanovému přípravku), jestliže se roztok hGH ošetří Zn⁺⁺v přítomnosti Ca⁺⁺ nebo lysinu před opětovným osolením v koneč15 ném histidinovém přípravku.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje růstový hormon předem ošetřený zinkem a popřípadě lysinem nebo ionty vápníku.
2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje nosič ve formě pufrovaného vodného roztoku růstového hormonu předem ošetřeného zinkem a popřípadě lysinem nebo ionty vápníku.
3. Farmaceutický přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se t í m, že pH je upraveno na hodnotu v intervalu od 2 do 9.
4. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 1 až

3, vyznačující se tím, že koncentrace zinku je až 2 mM.
5. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 1 až

4, vyznačující se tím, že dále obsahuje soli a/nebo sacharidy a/nebo cukerné alkoholy.
6. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 1 až

5, vyznačující se tím, že růstový hormon znamená lidský růstový hormon.
7. Způsob výroby farmaceutického přípravku, který obsahuje růstový hormon předem ošetřený zinkem a popřípadě lysinem nebo ionty vápníku, vyznačující se tím, že růstový hormon je rozpuštěn v roztoku, který obsahuje zinek a popřípadě lysin nebo vápenaté ionty, rozpuštěním chloridu zinečnatého v deionizované vodě, která popřípadě obsahuje lysin nebo vápenaté ionty, roztok se ponechá chvíli stát, přidá se růstový hormon, popřípadě se přidá ochranné činidlo a popřípadě se upraví pH na hodnotu od 2 do 9.
8. Způsob výroby farmaceutického přípravku podle nároku Ί, vyznačující se t í m, že se popřípadě přidají soli a/nebo cukerné alkoholy a excipient, načež se roztok naplní do zásobníku a lyofilizuje se.
9. Použiti zinku a popřípadě lysinu nebo iontů vápníku pro předběžné ošetření růstového hormonu pro výrobu stabilizovaného přípravku s růstovým hormonem.
10. Způsob léčení poruchy ovlivnitelné deficitem růstového hormonem, vyznačující se tím, že se podává přípravek podle nároku 1.