TWI856084B - 用於穩定含有蛋白質之配方之組合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於某些包含膽酸鹽界面活性劑之組合物的用途，其用於增強抗體及其他蛋白質在治療學上適用之配方中之儲存穩定性。

Description

用於穩定含有蛋白質之配方之組合物及方法
本發明係關於某些包含膽酸鹽界面活性劑之組合物的用途，其用於增強抗體及其他蛋白質在治療學上適用之配方中之儲存穩定性。
當需要蛋白質配方之穩定劑來保護蛋白質免於振盪、攪拌、剪切及凍融後變性或在靜止狀態下在界面處變性時，通常使用非離子清潔劑(亦即界面活性劑) (參見例如美國專利第5,183,746號)。其係藉由在許多含有蛋白質之產品中使用聚山梨醇酯來例示。舉例而言，聚山梨醇酯20及80 (亦稱為Tween® 20及Tween® 80)用於配製生物治療性產品以均用於防止表面吸收且用作抵抗蛋白質聚集之穩定劑(Kerwin, J. Pharm. Sci. 97(8):2924-2936 (2008))。聚山梨醇酯為由聚氧化乙烯(POE)脫水山梨糖醇之脂肪酸酯構成之兩性非離子型界面活性劑，聚山梨醇酯20係聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯且聚山梨醇酯80係聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。
不幸的係，聚山梨醇酯可經由氧化或水解進行降解。在聚山梨醇酯分子降解時，產生各種降解副產物，包括例如游離脂肪酸、POE脫水山梨糖醇、PEG、PEG酯及烷基酸。某些此等副產物(包括游離脂肪酸(FFA))可增加含有蛋白質之配方中之濁度及蛋白質聚集，且可減少可保護配方中之蛋白質免於聚集或氧化之完整聚山梨醇酯之量。因此，儘管聚山梨醇酯通常用作蛋白質穩定劑，但隨時間推移自聚山梨醇酯降解釋放之脂肪酸及其他降解副產物可能不利地影響聚山梨醇酯在含有蛋白質之配方中所呈現之保護效果。
蛋白質在純化及儲存期間經歷不同程度之降解，其中氧化(包括光誘導性氧化)為對蛋白質穩定性及效能具有破壞性作用之主要降解路徑中之一者。氧化反應引起胺基酸殘基破壞、肽鍵水解，且因此引起歸因於蛋白質之三元結構之更改的蛋白質不穩定性及蛋白質聚集(Davies, J. Biol. Chem. 262: 9895-901 (1987))。Nguyen (Formulation and Delivery of Protein and Peptides 第4章 (1994))、Hovorka, (J. Pharm Sci. 90:25369 (2001))及Li (Biotech Bioengineering 48:490-500 (1995))已評述蛋白質藥物之氧化。
鑒於上文，顯而易見，需要鑑別適用於增強含有蛋白質之配方中蛋白質之穩定性及防止蛋白質聚集及/或氧化之組合物。
本發明係基於以下新穎發現：某些膽酸鹽界面活性劑適用於穩定及/或減少治療學上適用之配方中之抗體或其他蛋白質之聚集以及用於減少此類配方中之聚山梨醇酯界面活性劑之降解。此外，本文中之膽酸鹽界面活性劑可適用於在低於其為至少約2.0 mM或至少約0.2% (重量體積，w/v)之臨界微胞濃度(CMC)值的濃度下作為蛋白質穩定劑或聚集減少劑來穩定含有蛋白質之治療性配方。在某些實施例中，與濃度低於CMC值之烷基醣苷界面活性劑相比，基於膽酸鹽之界面活性劑亦可更有效地保護治療性蛋白質配方。因此，在一個態樣中，本發明係關於蛋白質(諸如預期用於治療性用途之蛋白質)之配方，該等配方包含濃度低於其在25℃水中量測之CMC值的至少一種膽酸鹽界面活性劑。在某些實施例中，物質組合物中所存在之蛋白質為抗體，其可視情況為單株抗體。本發明亦係關於容納此類配方之容器、包含此類容器之物品及製備該等配方之方法。
在一些實施例中，配方可為水溶液，可在約2℃至8℃之溫度下穩定至少一年，及/或可在約30℃之溫度下穩定至少一個月。在一些實施例中，配方不包含聚山梨醇酯或泊洛沙姆(poloxamer)。在其他實施例中，配方包含聚山梨醇酯及/或泊洛沙姆。在一些實施例中，配方不包含烷基醣苷。在其他實施例中，配方包含烷基醣苷。在一些實施例中，配方不包含除膽酸鹽以外的其他界面活性劑。在其他實施例中，配方包含其他界面活性劑。
本發明尤其包含蛋白質配方，其包含蛋白質及至少一種膽酸鹽界面活性劑，該至少一種膽酸鹽界面活性劑在25℃下在水中具有2.0 mM或更大或0.2% (w/v)或更大的臨界微胞濃度(CMC)值。在一些實施例中，蛋白質為抗體，諸如單株抗體。在一些實施例中，膽酸鹽界面活性劑為兩性離子型、非離子型、陰離子型或選自CHAPS (3-[(3-膽醯胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽)、SGH (甘膽酸鈉水合物)、牛膽酸鈉水合物(STH)、膽酸鈉水合物(SCH)、SdTH、SdCH、ScdCH及BigCHAP (N,N'-雙-(3-D-葡糖醯胺基丙基)膽醯胺)。在一些實施例中，配方包含濃度(w/v)為0.5%或更少、0.4%或更少、0.3%或更少、0.1%或更少、0.05%或更少、0.04%或更少、0.025%或更少、0.02%或更少、0.01至0.5%、0.01至0.1%、0.01至0.05%或0.025%至0.05%之CHAPS。在一些實施例中，配方包含濃度為0.025%至0.05% (w/v)之CHAPS。在一些實施例中，配方包含濃度(w/v)為0.5%或更少、0.4%或更少、0.3%或更少、0.1%或更少、0.05%或更少、0.04%或更少、0.025%或更少、0.02%或更少、0.01至0.5%、0.01至0.1%、0.01至0.05%或0.025%至0.05%之BigCHAP。在一些實施例中，配方包含濃度為0.025%至0.05% (w/v)之BigCHAP。在一些實施例中，配方包含濃度(w/v)為0.5%或更少、0.4%或更少、0.3%或更少、0.1%或更少、0.05%或更少、0.04%或更少、0.025%或更少、0.02%或更少、0.01至0.5%、0.01至0.1%、0.01至0.05%或0.025%至0.05%之SGH、STH或SCH。在一些實施例中，配方包含濃度為0.025%至0.05%之SGH、STH或SCH。在一些實施例中，至少一種膽酸鹽界面活性劑存在之濃度係低於其在25℃水中之CMC值。
在一些實施例中，配方包含兩性離子型或非離子型膽酸鹽界面活性劑且為低離子強度配方。在一些此類情況下，配方含有小於50 mM的鹽、小於40 mM的鹽、小於30 mM的鹽或小於25 mM的鹽，諸如鈉鹽、精胺酸鹽或組胺酸鹽。
在一些實施例中，配方包含陰離子膽酸鹽界面活性劑且為高離子強度配方。在一些此類情況下，配方包含至少175 mM鹽、至少200 mM鹽、至少225 mM鹽或至少250 mM鹽，諸如鈉鹽、精胺酸鹽或組胺酸鹽。
在一些實施例中，該配方適用於治療性用途。在一些實施例中，該配方尚未經過凍乾，諸如係即用型液體配方。或者，該配方為經復原凍乾配方。
在一些實施例中，該配方不包含任何聚山梨醇酯、泊洛沙姆、普洛尼克(pluronic)、Brij或烷基醣苷界面活性劑。在一些實施例中，該配方不包含任何非膽酸鹽界面活性劑。在一些實施例中，該配方基本上由至少一種膽酸鹽界面活性劑、至少一種蛋白質物質、至少一種緩衝液物質及至少一種非界面活性劑穩定劑(例如糖、糖醇、胺基酸、肽、鹽或其他蛋白質)組成。在一些實施例中，該配方進一步包含至少一種聚山梨醇酯或泊洛沙姆，諸如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在一些實施例中，該配方包含1.0%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、0.02%或更小、或0.01%或更小之聚山梨醇酯20或80。在其他實施例中，該配方不包含除膽酸鹽界面活性劑及聚山梨醇酯20或80以外的任何界面活性劑。
本發明亦包括一種治療性蛋白質配方，該治療性蛋白質配方包含至少一種治療性蛋白質物質及界面活性劑，該界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、0.02%或更小、0.01至0.5%、0.01至0.1%、0.01至0.05%、或0.025%至0.05%的CHAPS組成，且該治療性蛋白質配方視情況進一步包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，視情況其中：(a)該配方為低離子強度；(b)該至少一種治療性蛋白質為抗體；及/或(c)該配方在使用之前為未經凍乾的液體配方。在一些實施例中，界面活性劑基本上由0.01至0.05%或0.025%至0.05% (w/v) CHAPS組成。在一些實施例中，本發明亦包括一種治療性蛋白質配方，該治療性蛋白質配方包含至少一種治療性蛋白質物質及界面活性劑，該界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、0.02%或更小、0.01至0.5%、0.01至0.1%、0.01至0.05%、或0.025%至0.05%的BigCHAP組成，且視情況進一步包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，視情況其中：(a)該配方為低離子強度；(b)該至少一種治療性蛋白質為抗體；及/或(c)該配方在使用之前為未經凍乾的液體配方。在一些實施例中，界面活性劑基本上由0.01至0.05%或0.025%至0.05% (w/v) BigCHAP組成。
本發明亦包括一種治療性蛋白質配方，該治療性蛋白質配方包含至少一種治療性蛋白質物質及界面活性劑，該界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、0.02%或更小、0.01至0.5%、0.01至0.1%、0.01至0.05%、或0.025%至0.05%的STH、SGH或SCH組成，其中該配方為高離子強度配方，該治療性蛋白質配方視情況進一步包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，且視情況其中：(a)該至少一種治療性蛋白質為抗體；及/或(b)該配方在使用之前為未經凍乾的液體配方。在一些實施例中，界面活性劑基本上由0.01至0.05%或0.025%至0.05% (w/v) STH、SGH或SCH組成。
在一些實施例中，該配方具有以下特性中之一或多者：(a)該配方在室溫下以每分鐘100轉(rpm)攪拌24小時之後未顯示可見聚集物；(b)該配方在室溫下以100 rpm攪拌24小時之後顯示不超過2%的高分子量蛋白質聚集物；(c)該配方在室溫下在100下攪拌24小時之後顯示不超過1%的高分子量蛋白質聚集物；(d)相較於未攪拌之對照組，在室溫下以100 rpm攪拌24小時之後，配方中之高分子量蛋白質聚集物增加不超過0.2%；(e)若該配方包含聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，則在40℃下儲存2週之後或在用假絲酵母南極脂肪酶B (Candida antarctica lipase B ) (CALB, Sigma Aldrich CAS# 9001-62-1)處理之後，該配方中之聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80比具有相同成分及濃度但不含膽酸鹽的配方保持更大完整程度。
本發明亦包括包含本文所揭示之配方的容器及包含含有該等配方之容器之製品。
本發明進一步包括製造本文中之蛋白質配方之方法，該等方法包含將蛋白質與至少一種膽酸鹽界面活性劑混合以形成含膽酸鹽水溶液。本發明亦包括抑制水溶液中所存在之蛋白質之聚集的方法，該方法包含向該水溶液添加至少一種膽酸鹽界面活性劑以形成含膽酸鹽水溶液，該至少一種膽酸鹽界面活性劑在25℃水中之臨界微胞濃度(CMC)值為約2.0 mM或更大或0.2% (w/v)，其濃度低於其在25℃水中之CMC值。在一些此類實施例中，蛋白質為抗體，諸如單株抗體。在一些實施例中，該等方法進一步包含將含膽酸鹽水溶液凍乾。在其他實施例中，該等方法不包含將含膽酸鹽水溶液凍乾。
參考對下文所包括之特定實施例及實例的以下詳細描述，可更容易理解本發明。
除非另有定義，否則結合本發明使用之科學與技術術語將具有一般熟習此項技術者通常理解之含義。此外，除非上下文另外需要，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。
在本申請案中，除非另有規定，否則使用「或」意謂「及/或」。在多個附屬項的上下文中，使用「或」僅以擇一方式重新提及超過一個前述獨立項或附屬項。此外，除非另外具體規定，否則諸如「元件」或「組件」之術語涵蓋包含一個單元之元件及組件以及包含超過一個次單元之元件及組件兩者。
如本文所描述，除非另有規定，否則任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍或整數範圍應理解為包括在所列舉範圍內之任何整數值及(在適當時)其分數(諸如整數之十分之一及百分之一)。
單位、前綴及符號係以其國際單位體系(Système International de Unites (SI))接受之形式表示。數值範圍包括限定該範圍之數值。考慮到有效數位及與量測相關之誤差，所量測值應理解為大致的。
除非另外規定，否則如本文所用，百分比(「%」)為重量與體積(「w/v」)的百分比。
本發明係關於包含蛋白質及膽酸鹽之配方。此類「配方」在本文中亦可互換地稱作「組合物」或「製劑」。
在本文之一些實施例中，配方可具有「低離子強度」或「高離子強度」。「離子強度」表示溶液中電場之強度，且等於所存在之各類型離子之重量莫耳濃度的總和乘以其電荷之平方。如本文所用，「低離子強度」配方具有50 mM或更低，諸如20 mM至50 mM之鹽濃度(例如鈉鹽、精胺酸鹽、組胺酸鹽或類似鹽)。如本文所用，高離子強度配方具有150 mM或更高，諸如150 mM至300 mM之鹽濃度(例如鈉、精胺酸、組胺酸或類似者)。
「等滲」配方係滲透壓基本上與人類血液相同之配方。等滲配方之滲透壓將一般為約250至350 mOsm。術語「低滲」描述滲透壓低於人類血液之滲透壓的配方。相對應地，術語「高滲」用於描述滲透壓高於人類血液之滲透壓的配方。等滲性可使用例如蒸氣壓滲透計或凝固點下降滲透計量測。本發明之配方可由於添加鹽及/或緩衝液而為高滲的。
「凍乾」配方為已經冷凍乾燥或經歷凍乾製程之配方。本文中之配方可經凍乾以供儲存，或替代地，可意欲以液體溶液形式儲存。「復原」配方係已藉由將凍乾蛋白質或抗體配方溶解於稀釋劑中以便蛋白質分散於復原配方中而製備的配方。復原配方可適用，諸如適用於投與給待用所關注蛋白質治療之患者。
「界面活性劑」為具有允許其在溶液中聚集以形成微胞之定義明確的極性及非極性區域之分子。視極性區域之性質而定，界面活性劑可為非離子型、陰離子型、陽離子型及兩性離子型。
如本文所用，「膽酸鹽」或「膽酸鹽界面活性劑」係指基於膽酸主鏈之分子，且可衍生自膽鹼基-CoA，其藉由移除膽酸鹽主鏈之C7及C12處之任一或兩個羥基而在共軛位點中變得官能化。本文中之膽酸鹽為一種類型的界面活性劑。
「多肽」或「蛋白質」」意謂鏈長足以產生三級結構之胺基酸序列。因此，本文中之蛋白質區別於「肽」，其為一般不具有任何三級結構之基於胺基酸之短分子。通常，本文中供使用之蛋白質將具有至少約5 kD至20 kD，或者至少約15 kD至20 kD，較佳至少約20 kD之分子量。本文中之多肽或蛋白質包括例如抗體。
如本文所使用之術語「抗體」包括單株抗體(包括具有免疫球蛋白Fc區之全長抗體)、具有多表位特異性之抗體組合物、多特異性抗體(例如雙特異性抗體、雙功能抗體及單鏈分子)以及抗體片段(例如Fab、F(ab')2 及Fv)。本文中之抗體包含位於共同識別特定抗原之重鏈(H)及輕鏈(L)可變域中的一組互補決定區(CDR)。本文中之抗體包含足以包括用於抗原識別之該組CDR的至少部分重鏈及輕鏈可變域胺基酸序列。在一些實施例中，抗體包含全長重鏈及輕鏈可變域。在一些實施例中，抗體進一步包含重鏈及/或輕鏈恆定區，其可為或可不為全長。
在本文中，術語「免疫球蛋白」(Ig)可與「抗體」互換使用。
術語「醫藥配方」或「治療配方」或「治療製劑」係指一種製劑或組合物，其包含至少一種活性成分(例如蛋白質)及至少一種額外組分或賦形劑物質，且呈如此形式以准許活性成份之生物活性在哺乳動物個體中有效，且「適合於治療性用途」或「適合於醫藥性用途」，意謂該配方整體上對於哺乳動物個體的毒性並非係不可接受的，且不含對將投與該配方的哺乳動物個體的毒性係不可接受的且濃度將使其呈現對個體不可接受的毒性的組分。
「穩定」配方為其中蛋白質在儲存時基本上保持其物理穩定性及/或化學穩定性的配方。可在所選溫度下持續所選時間段量測穩定性。較佳地，配方在室溫(約30℃)下或在40℃下穩定至少1個月及/或在約2℃至8℃下穩定至少1年，且較佳至少2年。舉例而言，在儲存期間之聚集程度可用作蛋白質穩定性之指標。因此，「穩定」配方可為其中小於10% (w/v)且較佳小於5%、小於3%或小於2%的蛋白質以聚集物形式存在於該配方中之配方。用於量測蛋白質穩定性之各種分析技術可在此項技術中獲得且綜述於例如Peptide and Protein Drug Delivery , 247-301, Vincent Lee編, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)及Jones,A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)中。
增加含有蛋白質之配方之「穩定性」可涉及減少(與未經處理之含有蛋白質之配方相比)或防止該配方中蛋白質聚集物之形成或該配方之其他組分之降解產物之形成，使得彼等其他組分可繼續起作用以便維持蛋白質之穩定性。
如本文所用之術語「穩定劑(stabilizing agent/stabilizer)」為添加至配方以使其維持穩定或不變狀態之化學品或化合物。在一些情況下，可添加穩定劑以幫助防止聚集、氧化、顏色變化或其類似者。
如本文所用之術語「聚集物」或「聚集」意謂集合在一起或聚集成一團或一體，例如如同蛋白質分子聚集。聚集物可自我聚集或由於其他因素而聚集，其他因素係例如存在聚集試劑、沈澱試劑、攪拌或使蛋白質集合在一起之其他方式及方法。「對聚集敏感」之蛋白質係已觀察到與其他蛋白質分子聚集，尤其在攪拌時聚集之蛋白質。可目測觀察到聚集，諸如在溶液中之先前澄清蛋白質配方變得混濁或含有沈澱時目測觀察到聚集，或藉由諸如按大小分離配方中之蛋白質的尺寸排阻層析法(SEC)之方法目測觀察到聚集。
聚集物可包括蛋白質物質之二聚體、三聚體及多聚體。如本文所使用，「高分子量物質」(HMWS)係指可例如藉由尺寸排外層析法觀察到且表示所需蛋白質分子之至少二聚體，亦即係配方中之所需蛋白質物質之分子量的至少兩倍之蛋白質聚集物。在蛋白質物質(諸如抗體)處於其正常或所需形式已為多聚體(例如二聚體或四聚體)之情況下，HMWS將表示蛋白質之正常、所需多聚體形式之至少一種二聚體。
「抑制」或「防止」攪拌誘發之聚集意欲表示防止、減少或減小攪拌誘發之聚集之量，該量係藉由將包含至少一種攪拌誘發之聚集抑制劑的含有蛋白質之溶液中所存在之聚集物的量與不包含至少一種攪拌誘發之聚集抑制劑的含有蛋白質之溶液中所存在之聚集物的量進行比較來量測。
「臨界微胞濃度(CMC)」為界面活性劑在溶液中聚集以形成稱為微胞之團簇的臨限濃度。如本文中所用，任何特定界面活性劑之CMC值係在25℃水中量測，且其可以mM或百分比(w/v)為單位表示。因為由組成性單體形成微胞涉及均衡，所以已確立存在微胞之較窄濃度範圍，低於該較窄濃度範圍，溶液含有可忽略之量的微胞，且高於該較窄濃度範圍，幾乎所有額外界面活性劑係以額外微胞形式存在。已由Mukerjee, P. and Mysels, K.J. (1971) Critical Micelle Concentrations of Aqueous Surfactant Systems, NSRDS-NBS 36準備水溶液中之數百個化合物之CMC之匯譯。文獻總監處，美國政府印刷局，華盛頓特區。亦參見http://www.anatrace.com/docs/detergent_data.pdf。
當用於描述本文所揭示之各種多肽及抗體時，「經分離」意謂已自其產生環境之組分鑑別、分離及/或回收之多肽或抗體。較佳地，經分離多肽與來自其產生環境之全部所有其他組分無關聯。其產生環境之污染物組分(諸如由重組型轉染細胞產生的污染物組分)為通常干擾多肽之診斷性或治療性用途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在一些實施例中，多肽將(1)在足以獲得N端或內部胺基酸序列之至少15個殘基的程度上藉由使用旋轉杯式測序儀(spinning cup sequenator)純化，或(2)在非還原或還原條件下使用考馬斯藍(Coomassie blue)或較佳銀染色藉由SDS-PAGE純化達到均質性。然而，通常，經分離多肽或抗體將藉由至少一個純化步驟來製備。
在本文之一些實施例中，醫藥配方「不包含」一或多種類型之賦形劑或成分，諸如一或多種非膽酸鹽界面活性劑。在此上下文中，表述「不包含」意謂例如由於其他有目的地添加之成分中發現之污染或雜質而不存在超出痕量之所排除成分。
當係指本文中之配方之成分混合物時，術語「基本上由…組成」指示雖然可存在除明確列出之彼等成分以外的成分，但此類成分係僅以痕量或以在其他方面足夠低而使得配方之基本特徵不變的量發現，該等基本特徵包括蛋白質濃度、蛋白質聚集水平、蛋白質氧化水平、黏度、熱穩定性、重量莫耳滲透濃度及pH。
蛋白質聚集 蛋白質之聚集主要由疏水性相互作用引起，最終導致變性。當部分或完全未摺疊之蛋白質的疏水區暴露於水時，由於通常埋入之疏水性內部現暴露於親水性的水性環境中，導致熱力學上不利之情境。因此，來自圍繞疏水區之結構性水分子之熵減少驅使變性蛋白質主要經由暴露之疏水區聚集。因此，蛋白質之溶解度亦可能受損。在一些情況下，天然或摺疊異常之蛋白質次單位之自締合可在某些條件下發生且此可導致沈澱及活性喪失。
影響溶液中蛋白質聚集之因素通常包括蛋白質濃度、pH、溫度、其他賦形劑及機械應力。在純化、混配、製造、儲存及使用期間，一些因素(例如溫度)可比其他因素(例如機械應力)更易於控制。配方研究將指示pH及賦形劑之適當選擇，其將不誘導聚集及/或實際上將幫助防止聚集。蛋白質濃度由所需治療劑量決定，且根據此濃度的多少將判定是否存在更高結合狀態(二聚體、四聚體等)的可能性，其隨後可導致溶液中的聚集。在配方開發期間必須進行謹慎研究，以判定何種因素會影響蛋白質聚集，且隨後可如何消除或控制此等因素。
需要鑑別用於非經腸或其他投與之抗體或其他蛋白質之穩定溶液製劑，此需要可導致用於評估各種添加劑對物理穩定性之影響的測試方法的開發。基於已知的影響蛋白質聚集之因素及對此類應用之要求，可使用涉及攪拌或旋轉蛋白質溶液之機械程序來評估物理穩定性。用以鑑別各種添加劑防止聚集之能力的物理應力測試方法可涉及暴露於水平面上的振盪或攪拌，或距離以「n 」rpm在豎直平面中旋轉的輪軸「x 」cm的旋轉。由聚集導致之濁度通常由目視檢驗或光散射分析判定為時間的函數。或者，可藉由HPLC分析將由於沈澱造成的可溶性蛋白質含量的降低定量為時間的函數。
水表面上之蛋白質將聚集，尤其在攪拌時聚集，係因為蛋白質單層展開且隨後聚集。界面活性劑可使蛋白質變性，但亦可使其穩定而抵抗表面變性。大體而言，離子型界面活性劑可使蛋白質變性。然而，非離子型界面活性劑即使在1% (w/v)之相對較高濃度下通常亦不會使蛋白質變性。本發明係基於以下新穎發現：某些膽酸鹽界面活性劑適用於穩定或減少治療上適用之配方中之抗體或其他蛋白質之聚集。
膽酸鹽界面活性劑及配方 本發明係基於以下新穎發現：某些膽酸鹽界面活性劑適用於穩定或減少治療上適用之配方中之抗體或其他蛋白質之聚集。例示性膽酸鹽包括(但不限於)：兩性離子型膽酸鹽，諸如CHAPS (3-[(3-膽醯胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽) (CAS 75621-03-3)，其在25℃水中的臨界微胞濃度(CMC)為約8至10 mM或0.5至0.6%；陰離子型膽酸鹽，諸如SGH (甘膽酸鈉水合物) (CAS 338950-81-5) (在25℃水中的CMC為約13 mM或約0.6% (w/v))、牛膽酸鈉水合物(STH) (CAS 345909-26-4) (在25℃水中的CMC為約3至11 mM或約0.2%至0.6%)及膽酸鈉水合物(SCH) (在25℃水中的CMC為約9至15 mM或約0.4%至0.7%)；以及非離子型膽酸鹽，諸如「BigCHAP」 (N,N'-雙-(3-D-葡糖醯胺基丙基)膽醯胺) (CAS 86303-22-2) (在25℃水中的CMC為約2.9至3.4 mM或約0.26%)。在一些實施例中，膽酸鹽在25℃水中的CMC可為至少1 mM，或至少2 mM，或至少0.1% (w/v)，或至少0.2% (w/v)。
特定膽酸鹽可單獨用作抗體或其他蛋白質穩定劑，或可與其他膽酸鹽組合使用。在本發明之特定實施例中，膽酸鹽(若用作單一藥劑)或多種膽酸鹽(若以組合形式採用)可以0.01%至0.5%之濃度存在於含有水性抗體之配方或其他含有蛋白質之配方中，該濃度可低於所採用之膽酸鹽之CMC值。在一些實施例中，一或多種膽酸鹽可以0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.2%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小之濃度存在。在一些實施例中，一或多種膽酸鹽可以0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、0.025%至0.05%或0.025%至0.1%之濃度存在。在一些實施例中，一或多種膽酸鹽可以0.01%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，一或多種膽酸鹽可以0.025%至0.05%之濃度存在。
在一些實施例中，特定膽酸鹽可在低於其在25℃水中之各別CMC值的濃度下用作抗體或其他蛋白質穩定劑。在一些實施例中，膽酸鹽在25℃水中的CMC可為至少1 mM，或至少2 mM，或至少0.1% (w/v)，或至少0.2% (w/v)。在一些實施例中，可採用膽酸鹽之混合物，使得該混合物之總濃度低於該混合物在25℃水中之CMC值。在一些此類實施例中，一或多種膽酸鹽可為存在於組合物中之唯一類型之界面活性劑；因此不存在其他界面活性劑。
大部分當前所用之治療學上可接受之非離子型界面活性劑來自聚山梨醇酯或聚醚基團。聚山梨醇酯20及80係市售治療性蛋白質配方中之現代界面活性劑穩定劑。然而，用於治療性蛋白配方之其他界面活性劑包括Pluronic® F-68及「Brij」類別之成員及泊洛沙姆以及烷基醣苷。在本文之一些實施例中，此等其他界面活性劑中無一者存在於該配方中，而在其他實施例中，包括此等其他類別之界面活性劑中之一或多者。
在一些實施例中，該組合物不包含聚山梨醇酯、普朗尼克(pluronics)、Brij、泊洛沙姆或烷基醣苷界面活性劑。在其他實施例中，該組合物包含至少一種其他界面活性劑。在其他實施例中，該組合物亦包含一或多種聚山梨醇酯，諸如PS20或PS80，或可包含烷基醣苷或烷基醣苷之組合。在配方包含聚山梨醇酯界面活性劑及/或烷基醣苷界面活性劑之一些此類情況下，該配方不包含除膽酸鹽及聚山梨醇酯及/或烷基醣苷界面活性劑之外的其他界面活性劑。
在一些實施例中，膽酸鹽界面活性劑為CHAPS。在一些實施例中，該配方包含濃度(w/v)為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.2%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小之CHAPS。在一些實施例中，CHAPS係以0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、0.025%至0.05%或0.025%至0.1%之濃度存在。在一些實施例中，CHAPS係以0.01%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，CHAPS係以0.025%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，該配方界面活性劑基本上由濃度為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.2%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小之CHAPS組成。在一些實施例中，CHAPS係以0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、0.025%至0.05%或0.025%至0.1%之濃度存在。在一些實施例中，CHAPS係以0.01%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，CHAPS係以0.025%至0.05%之濃度存在。
在一些實施例中，該配方包含至少一種治療性蛋白質物質及界面活性劑，該界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小、0.01%至0.5%、或0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、或0.025%至0.05%的CHAPS組成，且該配方視情況包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，視情況其中：該配方為低離子強度；該至少一種治療性蛋白質為抗體；及/或該配方在使用之前為未經凍乾的液體配方。在其他實施例中，該配方進一步包含聚山梨醇酯，諸如PS20或PS80。
在一些實施例中，膽酸鹽界面活性劑為BigCHAP。在一些實施例中，該配方包含濃度為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.2%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小之BigCHAP。在一些實施例中，BigCHAP係以0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、0.025%至0.05%或0.025%至0.1%之濃度存在。在一些實施例中，BigCHAP係以0.01%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，BigCHAP係以0.025%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，該配方界面活性劑基本上由濃度為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.2%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小之BigCHAP組成。在一些實施例中，BigCHAP係以0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、0.025%至0.05%或0.025%至0.1%之濃度存在。在一些實施例中，BigCHAP係以0.01%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，BigCHAP係以0.025%至0.05%之濃度存在。
在一些實施例中，該配方包含至少一種治療性蛋白質物質及界面活性劑，該界面活性劑基本上由濃度為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小、0.01%至0.5%、或0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、或0.025%至0.05%的BigCHAP組成，且該配方視情況包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，視情況其中：該配方為低離子強度；該至少一種治療性蛋白質為抗體；及/或該配方在使用之前為未經凍乾的液體配方。在其他實施例中，該配方進一步包含聚山梨醇酯，諸如PS20或PS80。
在一些實施例中，膽酸鹽界面活性劑為SGH、STH或SCH。在一些實施例中，該配方包含濃度為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.2%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小之SGH、STH或SCH。在一些實施例中，SGH、STH或SCH係以0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、0.025%至0.05%或0.025%至0.1%之濃度存在。在一些實施例中，SGH、STH或SCH係以0.01%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，SGH、STH或SCH係以0.025%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，該配方界面活性劑基本上由濃度為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.2%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小之SGH、STH或SCH組成。在一些實施例中，SGH、STH或SCH係以0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、0.025%至0.05%或0.025%至0.1%之濃度存在。在一些實施例中，SGH、STH或SCH係以0.01%至0.05%之濃度存在。在一些實施例中，SGH、STH或SCH係以0.025%至0.05%之濃度存在。在包含SGH、STH或SCH界面活性劑之一些以上實施例中，溶液具有高離子強度。
在一些實施例中，該配方包含至少一種治療性蛋白質物質及界面活性劑，該界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更小、0.4%或更小、0.3%或更小、0.1%或更小、0.05%或更小、0.04%或更小、0.025%或更小、或0.02%或更小、0.01%至0.5%、或0.01%至0.1%、0.01%至0.05%、或0.025%至0.05%的膽酸鹽組成，且該配方視情況包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，視情況其中：該配方為高離子強度；該至少一種治療性蛋白質為抗體；及/或該配方在使用之前為未經凍乾的液體配方。在其他實施例中，該配方進一步包含聚山梨醇酯，諸如PS20或PS80。
在一些實施例中，整體配方具有低離子強度。本文之低離子強度配方可具有例如50 mM或更低之鹽濃度(例如鈉、乙酸鹽、磷酸鹽、精胺酸、組胺酸、檸檬酸鹽)，諸如10至50 mM、20至50 mM、20至40 mM、20至30 mM、15至30 mM、15至25 mM、40 mM或更低、30 mM或更低、25 mM或更低、或20 mM或更低。在一些實施例中，例如當使用陰離子膽酸鹽物質時，整體配方具有高離子強度。本文中之高離子強度配方可具有150 mM或更高的鹽濃度，諸如175 mM或更高、200 mM或更高、250 mM或更高、150至300 mM、200至300 mM、200至250 mM、175至250 mM、或150至250 mM。
例示性蛋白質 本發明配方可與多種蛋白質或多肽相容。
本文定義內所涵蓋之多肽之實例包括哺乳動物蛋白質，諸如各種抗體、腎素；生長激素，包括人類生長激素及牛生長激素；生長激素釋放因子；副甲狀腺素；促甲狀腺素；脂蛋白；α-1-抗胰蛋白酶；胰島素A鏈；胰島素B鏈；胰島素原；促卵泡激素；降鈣素；促黃體素；升糖素；凝血因子，諸如因子VIIIC、因子IX、組織因子及馮威里氏因子(von Willebrand factor)；抗凝血因子，諸如蛋白質C；心房利尿鈉因子；肺界面活性劑；纖維蛋白溶酶原活化因子，諸如尿激酶或人類尿液或組織型纖維蛋白溶酶原活化因子(t-PA)；鈴蟾素；凝血酶；造血生長因子；腫瘤壞死因子-α及腫瘤壞死因子-β；腦啡肽酶(enkephalinase)；RANTES (調節活化正常T細胞表現及分泌)；人類巨噬細胞發炎性蛋白質(MIP-1-α)；血清白蛋白，諸如人類血清白蛋白；穆氏(Muellerian)抑制物質；鬆弛素A鏈；鬆弛素B鏈；促鬆弛素；小鼠促性腺激素相關肽；微生物蛋白，諸如β-內醯胺酶；DNase；IgE；細胞毒性T淋巴球相關抗原(CTLA)，諸如CTLA-4；抑制素；活化素；血管內皮生長因子(VEGF)；用於激素或生長因子之受體；蛋白質A或D；類風濕性因子；神經營養因子，諸如骨源性神經營養因子(BDNF)、神經營養因子-3、神經營養因子-4、神經營養因子-5或神經營養因子-6 (NT-3、NT-4、NT-5或NT-6)或神經生長因子，諸如NGF-β；血小板衍生生長因子(PDGF)；纖維母細胞生長因子，諸如aFGF及bFGF；表皮生長因子(EGF)；轉型生長因子(TGF)，諸如TGF-α及TGF-β，包括TGF-β1、TGF- β2、TGF- β3、TGF- β4或TGF- β5；似胰島素生長因子I及II (IGF-I及IGF-II)；des(1-3)-IGF-I (腦IGF-I)，亦即似胰島素生長因子結合蛋白(IGFBP)；CD蛋白，諸如CD3、CD4、CD8、CD19及CD20；紅血球生成素；骨誘導性因子；免疫毒素；骨形態生成蛋白(BMP)；干擾素，諸如干擾素-α、干擾素-β及干擾素-γ；群落刺激因子(CSF)，例如M-CSF、GM-CSF及G-CSF；介白素(IL)，例如IL-1至IL-10；超氧化歧化酶；T細胞受體；表面膜蛋白質；衰變加速因子；病毒抗原，諸如AIDS包膜之一部分；轉運蛋白；歸巢受體；地址素(addressin)；調節蛋白；整合素，諸如CD11a、CD11b、CD11c、CD18、ICAM、VLA-4及VCAM；腫瘤相關抗原，諸如CA125 (卵巢癌抗原)或HER2、HER3或HER4受體；免疫黏附素；及以上列出之蛋白質中之任一者的片段及/或變異體以及結合於以上列出之蛋白質中之任一者的抗體，包括抗體片段。
經配製之蛋白質較佳基本上為純的且理想地基本上為均質(亦即，不含污染蛋白質)。「基本上純的」蛋白質意謂以組合物總重量計，組合物包含至少約90重量%、較佳至少約95重量%的蛋白質。「基本上均質」蛋白質意謂以組合物總重量計，組合物包含至少約99重量%的蛋白質。
若蛋白質之生物活性在給定時間在製備配方時所展現之生物活性之約10% (在分析之誤差內)內，則該蛋白質在醫藥配方中保留「生物活性」。在預期藉由結合至目標分子或抗原起作用之抗體或蛋白質的情況下，可藉由蛋白質在活體外或活體內結合至抗原且引起可量測之生物反應的能力來測定生物活性。
本文中之蛋白質大致涵蓋天然產生之蛋白質以及例如藉由將兩種不同蛋白質共價連接在一起而形成之融合蛋白，及蛋白質共軛物，該等蛋白質共軛物包括共價連接至其他蛋白質或諸如諸如核酸、小分子藥物或固相等非蛋白質分子之蛋白質。術語「固相」描述本發明蛋白質可黏附之非水性基質。本文所涵蓋之固相之實例包括部分或完全由玻璃(例如受控微孔玻璃)、多醣(例如瓊脂糖)、聚丙烯醯胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇及矽酮形成之彼等固相。在某些實施例中，視上下文而定，固相可包含分析板之孔；在其他實施例中，固相為純化管柱(例如親和性層析管柱)。此術語亦包括離散粒子(諸如美國專利第4,275,149號中所描述之離散粒子)之不連續固相。該術語亦涵蓋可懸浮於溶液中之珠粒或碎片。
本文中之蛋白質亦涵蓋抗體。
例示性抗體 抗體通常係針對所關注之「抗原」。「針對」或「特異性結合於」或「對」既定抗原「具有特異性」之抗體為結合於該特定抗原而實質上不結合於任何其他多肽或多肽抗原決定基的抗體。「針對」或「特異性結合於」或「對」特定多肽抗原上之特定多肽或抗原決定基「具有特異性」之抗體為結合於特定多肽抗原上之該特定多肽或抗原決定基而實質上不結合於任何其他多肽或多肽抗原決定基的抗體。
較佳地，抗原為生物學上重要分子且向患有疾病或病症之哺乳動物投與抗體可在該哺乳動物中產生治療益處。涵蓋針對蛋白質抗原與非蛋白質抗原(諸如腫瘤相關糖脂抗原；參見美國專利第5,091,178號)兩者之抗體。在抗原為蛋白質之情況下，其可為跨膜分子(例如受體)或配體，諸如生長因子。例示性抗原包括上文所論述之彼等蛋白質。本發明所涵蓋之抗體之例示性分子標靶包括CD多肽，諸如CD3、CD4、CD8、CD19、CD20及CD34；HER受體家族成員，諸如EGF受體(HER1)、HER2、HER3或HER4受體；細胞黏附分子，諸如LFA-1、Mac1、p150,95、VLA-4、ICAM-1、VCAM及av/b3整合素，包括其a或b次單位(例如，抗CD11a、抗CD18或抗CD11b抗體)；生長因子，諸如VEGF；IgE；血型抗原；flk2/flt3受體；肥胖(OB)受體；mpl 受體；CTLA-4；多肽C等。視情況與其他分子結合之可溶性抗原或其片段可用作產生抗體之免疫原。對於諸如受體之跨膜分子，此等跨膜分子之片段(例如，受體之細胞外域)可用作免疫原。或者，表現跨膜分子之細胞可用作免疫原。此類細胞可來源於天然來源(例如癌細胞株)或可為已藉由重組技術轉型以表現跨膜分子之細胞。
本文中待純化之抗體之實例包括(但不限於)： HER2抗體，包括曲妥珠單抗(trastuzumab) (HERCEPTIN®) (Carter等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 89:4285-4289 (1992)，美國專利第5,725,856號)及帕妥珠單抗(pertuzumab) (OMNITARG™) (WO01/00245)；CD20抗體(參見下文)；IL-8抗體(St John等人，Chest, 103:932 (1993)，及國際公開案第WO 95/23865號)；VEGF或VEGF受體抗體，包括人類化及/或親和力成熟VEGF抗體，諸如人類化VEGF抗體huA4.6.1貝伐單抗(bevacizumab) (AVASTIN®)及蘭比珠單抗(ranibizumab) (LUCENTIS®) (Kim等人，Growth Factors , 7:53-64 (1992)，國際公開案第WO 96/30046號及1998年10月15日公佈之WO 98/45331)；PSCA抗體(WO01/40309)；CD11a抗體，包括艾法珠單抗(efalizumab) (RAPTIVA®) (美國專利第6,037,454號、美國專利第5,622,700號、WO 98/23761，Stoppa等人的Transplant Intl. 4:3-7 (1991)及Hourmant等人的Transplantation 58:377-380 (1994))；結合IgE之抗體，包括奧馬珠單抗(omalizumab) (XOLAIR®) (Presta等人，J. Immunol. 151:2623-2632 (1993)，及國際公開案第WO 95/19181號；1998年2月3日頒佈之美國專利第5,714,338號或1992年2月25日頒佈之美國專利第5,091,313號、1993年3月4日公佈之WO 93/04173或1998年6月30日提交之國際申請案第PCT/US98/13410號、美國專利第5,714,338號)；CD18抗體(1997年4月22日頒佈之美國專利第5,622,700號，或如1997年7月31日公佈之WO 97/26912中)；Apo-2受體抗體(1998年11月19日公佈之WO 98/51793)；組織因子(TF)抗體(1994年11月9日授權之歐洲專利第0 420 937 B1號)；α4 -α7 整合素抗體(1998年2月19日公佈之WO 98/06248)；EGFR抗體(例如嵌合或人類化225抗體、西妥昔單抗(cetuximab)、ERBUTIX®，如1996年12月19日公佈之WO 96/40210中)；CD3抗體，諸如OKT3 (1985年5月7日頒佈的美國專利第4,515,893號)；CD25或Tac抗體，諸如CHI-621 (SIMULECT®)及ZENAPAX® (參見1997年12月2日頒佈之美國專利第5,693,762號)；CD4抗體，諸如cM-7412抗體(Choy等人，Arthritis Rheum 39(1):52-56 (1996))；CD52抗體，諸如CAMPATH-1H (ILEX/Berlex) (Riechmann等人，Nature 332:323-337 (1988))；Fc受體抗體，諸如針對FcγRI之M22抗體，如同Graziano等人，J. Immunol. 155(10):4996-5002 (1995)中)；癌胚抗原(CEA)抗體，諸如hMN-14 (Sharkey等人，Cancer Res . 55(23Suppl): 5935s-5945s (1995))；針對乳房上皮細胞之抗體，包括huBrE-3、hu-Mc 3及CHL6 (Ceriani等人，Cancer Res. 55(23): 5852s-5856s (1995)及Richman等人，Cancer Res. 55(23 Supp): 5916s-5920s (1995))；結合於結腸癌細胞之抗體，諸如C242 (Litton等人，Eur J. Immunol . 26(1):1-9 (1996))；CD38抗體，例如AT 13/5 (Ellis等人，J. Immunol . 155(2):925-937 (1995))；CD33抗體，諸如Hu M195 (Jurcic等人，Cancer Res 55(23 Suppl.):5908s-5910s (1995))及CMA-676或CDP771；EpCAM抗體，諸如17-1A (PANOREX®)；GpIIb/IIIa抗體，諸如阿昔單抗(abciximab)或c7E3 Fab (REOPRO®)；RSV抗體，諸如MEDI-493 (SYNAGIS®)；CMV抗體，諸如PROTOVIR®；HIV抗體，諸如PRO542；肝炎抗體，諸如Hep B抗體OSTAVIR®；CA125抗體，包括抗MUC16 (WO2007/001851；Yin、BWT及Lloyd, KO,J. Biol. Chem. 276:27371-27375 (2001))及OvaRex；個體基因型GD3抗原決定基抗體BEC2；αvβ3抗體(例如VITAXIN®; Medimmune)；人類腎細胞癌抗體，諸如ch-G250；ING-1；抗人類17-1An抗體(3622W94)；抗人類結腸直腸腫瘤抗體(A33)；針對GD3神經節苷脂之抗人類黑素瘤抗體R24；抗人類鱗狀細胞癌(SF-25)；人類白血球抗原(HLA)抗體，諸如Smart ID10及抗HLA DR抗體Oncolym (Lym-1)；CD37抗體，諸如TRU 016 (Trubion)；IL-21抗體(Zymogenetics/ Novo Nordisk)；抗B細胞抗體(Imferon)；B細胞靶向MAb (Immunogen/ Aventis)；1D09C3 (Morphosys/GPC)；LymphoRad 131 (HGS)；Lym-1抗體，諸如Lym-1Y-90 (USC)或抗Lym-1 Oncolym (USC/Peregrine)；LIF226 (Enhanced Lifesci.)；BAFF抗體(例如WO 03/33658)；BAFF受體抗體(參見例如WO 02/24909)；BR3抗體；Blys抗體，諸如貝利單抗(belimumab)；LYMPHOSTAT-B™；ISF154 (UCSD/Roche/Tragen)；魯昔單抗(gomilixima) (Idec 152；Biogen Idec)；IL-6受體抗體，諸如阿利珠單抗(atlizumab) (ACTEMRA™；Chugai/Roche)；IL-15抗體，諸如HuMax-Il-15 (Genmab/Amgen)；趨化因子受體抗體，諸如CCR2抗體(例如MLN1202；Millennium)；抗補體抗體，諸如C5抗體(例如，依庫珠單抗(eculizumab), 5G1.1；Alexion)；人類免疫球蛋白之口服配方(例如，IgPO；Protein Therapeutics)；IL-12抗體，諸如ABT-874 (CAT/Abbott)；替奈昔單抗(Teneliximab) (BMS-224818；BMS)；CD40抗體，包括S2C6及其人類化變異體(WO00/75348)及TNX 100 (Chiron/Tanox)；TNF-α抗體，包括cA2或英利昔單抗(infliximab) (REMICADE®)、CDP571、MAK-195、阿達木單抗(adalimumab) (HUMIRA™)、聚乙二醇化TNF-α抗體片段，諸如CDP-870 (Celltech)、D2E7 (Knoll)、抗TNF-α多株抗體(例如PassTNF；Verigen)；CD22抗體，諸如LL2或依帕珠單抗(epratuzumab) (LYMPHOCIDE®；Immunomedics)，包括依帕珠單抗Y-90及依帕珠單抗I-131、Abiogen的CD22抗體(Abiogen, Italy)、CMC 544 (Wyeth/Celltech)、combotox (UT Southwestern)、BL22 (NIH)及LympoScan Tc99 (Immunomedics)。
CD20抗體之實例包括：「C2B8」，其現稱為「利妥昔單抗」(「RITUXAN®」) (美國專利案第5,736,137號)；釔-[90]-標記之2B8鼠類抗體，被稱為「Y2B8」或「替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)」(ZEVALIN®)，其可購自IDEC Pharmaceuticals, Inc. (美國專利第5,736,137號；以ATCC寄存號HB11388於1993年6月22日保藏之2B8)；鼠類IgG2a「B1」，亦被稱作「托西莫單抗(Tositumomab)」，其視情況用131 I標記，生成可購自Corixa之「131I-B1」或「碘I131托西莫單抗」抗體(BEXXAR™) (亦參見美國專利第5,595,721號)；鼠類單株抗體「1F5」(Press等人，Blood 69(2):584-591 (1987))及其包括「框架補丁」之變異體或人類化1F5 (WO 2003/002607，Leung, S.；ATCC保藏號HB-96450)；鼠類2H7及嵌合2H7抗體(美國專利案第5,677,180號)；人類化2H7 (WO 2004/056312，Lowman等人)；2F2 (HuMax-CD20)，靶向B細胞之細胞膜中之CD20分子的全人類高親和力抗體(Genmab，Denmark；參見例如Glennie及van de Winkel,Drug Discovery Today 8: 503-510 (2003)及Cragg等人，Blood 101: 1045-1052 (2003)；WO 2004/035607；US2004/0167319)；WO 2004/035607及US2004/0167319中所闡述之人類單株抗體(Teeling等人)；US 2004/0093621中描述的具有與Fc區結合之複合N-糖苷連接的糖鏈之抗體(Shitara等人)；結合於CD20之單株抗體及抗原結合片段(WO 2005/000901，Tedder等人)，諸如HB20-3、HB20-4、HB20-25及MB20-11；CD20結合分子，諸如AME系列抗體，例如，如WO 2004/103404及US2005/0025764中闡述之AME 33抗體(Watkins等人，Eli Lilly/Applied Molecular Evolution, AME)；CD20結合分子，諸如US 2005/0025764中描述之彼等者(Watkins等人)；A20抗體或其變異體，諸如嵌合或人類化A20抗體(分別為cA20、hA20)或IMMU-106 (US 2003/0219433，Immunomedics)；CD20結合抗體，包括抗原決定基缺失之Leu-16、1H4或2B8，視情況與IL-2結合，如同US 2005/0069545A1及WO 2005/16969中(Carr等人)；結合CD22及CD20之雙特異性抗體，例如hLL2xhA20 (WO2005/14618，Chang等人)；可自International Leukocyte Typing Workshop獲得之單株抗體L27、G28-2、93-1B3、B-C1或NU-B2 (Valentine等人，在Leukocyte Typing III中(McMichael編，第440頁，Oxford University Press (1987))；1H4 (Haisma等人，Blood 92:184 (1998))；抗CD20奧瑞斯他汀E結合物(Seattle Genetics)；抗CD20-IL2 (EMD/Biovation/City of Hope)；抗CD20 MAb療法(EpiCyte)；抗CD20抗體TRU 015 (Trubion)。
例示性抗體結構 基礎的4鏈抗體單元係由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈組成的雜四聚醣蛋白。IgM抗體由5個基礎的雜四聚體單元及稱為J鏈之其他多肽組成且含有10個抗原結合位點，而IgA抗體包含2至5個基礎4鏈單元，其可聚合以與J鏈組合形成多價群集物。在IgG之情況下，該4鏈單元一般係約150,000道爾頓。各L鏈經一個共價二硫鍵連接至H鏈，而兩條H鏈視H鏈同型而定經一或多個二硫鍵彼此連接。各H鏈及L鏈亦具有有規律間隔之鏈內二硫橋鍵。各H鏈在N端具有可變域(VH )，對於α鏈及γ鏈中之每一者，該可變域之後有三個恆定域(CH )且對於μ及ε同型，該可變域之後有四個CH 域。各L鏈在N端具有可變域(VL )，在其另一端之後有恆定域。VL 與VH 配對且CL 與重鏈之第一恆定域(CH 1)配對。咸信特定胺基酸殘基在輕鏈與重鏈可變域之間形成界面。成對的VH 與VL 一起形成單一抗原結合位點。對於不同類別之抗體之結構及特性，參見例如Basic and Clinical Immunology ，第8版，Daniel P. Sties, Abba I. Terr及Tristram G. Parsolw (編), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994，第71頁及第6章。
來自任何脊椎動物物種之L鏈可基於其恆定域之胺基酸序列而歸為兩種顯著不同類型(稱為κ及λ)中之一種。視免疫球蛋白之重鏈(CH)之恆定域之胺基酸序列而定，其可歸為不同類別或同型。存在五種類別之免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其分別具有名為α、δ、ε、γ及μ之重鏈。基於CH序列及功能之相對較小差異，γ及α類別進一步分成子類，例如人類表現以下子類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。
術語「可變區」或「可變域」或「V域」或「V區」係指重鏈及輕鏈之某些區段的序列在抗體之間顯著不同的事實。V域介導抗原結合且限定特定抗體對其特定抗原之特異性。然而，可變性並非均勻分佈在整個可變域範圍內。實情為，V區由約15至30個胺基酸殘基的稱為構架區(FR)之相對恆定的幾段序列(stretches)組成，其被長度各自為大致9至12個胺基酸殘基的被稱為「高變區」(HVR)或有時稱為「互補決定區」(CDR)之極度可變的較短區域分隔開。天然重鏈及輕鏈之可變域各自包含四個FR，其大部分採用β-片層組態，由三個高變區連接，該等高變區形成連接β-片層結構之環且在一些情況下形成β-片層組態之一部分。各鏈中之高變區藉由FR緊密接近結合在一起，且與來自另一個鏈之高變區一起促成抗體之抗原結合位點之形成(參見Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。恆定域不直接參與抗體與抗原之結合，但展示各種效應功能，諸如參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。
當在本文中使用時，術語「高變區」(亦稱為「互補決定區」或CDR)係指在免疫球蛋白之V區結構域內之抗體胺基酸殘基(通常係三個或四個具有高度序列可變性之短區域)，其形成抗原結合位點且係抗原特異性之主要決定子。存在至少兩種鑑別CDR殘基之方法：(1)基於跨物種序列可變性之方法(亦即，Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, M S 1991)；及(2)基於抗原-抗體複合物之晶體學研究的方法(Chothia, C.等人，J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987))。然而，在兩種殘基鑑別技術定義重疊區域但非相同區域之程度上，其可組合以定義混合CDR。
如本文中所用之術語「單株抗體」係指一種自實質上均質之抗體群體獲得之抗體，亦即，除可能天然存在的突變及/或可能少量存在的轉譯後修飾(例如，異構化、醯胺化、去醯胺化)之外，包含該群體之個別抗體係相同的。單株抗體針對單一抗原位點具有高度特異性。此外，相比於通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之習知(多株)抗體製劑，各單株抗體針對抗原上之單一決定子。除了其特異性之外，單株抗體為有利的，因為其藉由融合瘤培養合成，未受其他免疫球蛋白污染。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質之抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，將根據本發明使用之單株抗體可由Kohler等人，Nature , 256: 495 (1975)首先描述之融合瘤方法製成或可藉由重組DNA方法(參見例如美國專利第4,816,567號)製成。亦可使用例如Clackson等人，Nature , 352:624-628 (1991)及Marks等人，J. Mol. Biol. , 222:581-597 (1991)中描述之技術自噬菌體抗體文庫分離「單株抗體」。
單株抗體在本文中具體包括「嵌合」抗體(免疫球蛋白)以及此類抗體之片段(只要該等片段展現所需生物活性)，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬於特定抗體類別或子類別之抗體中的對應序列相同或同源，而鏈之剩餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體類別或子類別之抗體中的對應序列相同或同源(美國專利案第4,816,567號；Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 81:6851-6855 (1984))。本文中所關注之嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，其包含源自非人類靈長類動物(例如，舊世界猴、猿等)之可變域抗原結合序列及人類恆定區序列。
「完整」或「全長」抗體為包含抗原結合位點以及CL且至少包含重鏈域CH 1、CH 2及CH 3之抗體。恆定域可天然序列恆定域(例如，人類天然序列恆定域)或其胺基酸序列變異體。較佳地，完整抗體具有一或多種效應功能。
術語「抗體」包括「抗體片段」及「抗原結合片段」。「抗體片段」或「抗體結合片段」包含完整抗體之一部分，該部分包括完整抗體之抗原結合部分及/或可變區且特異性結合於抗原。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2 及Fv片段；雙功能抗體；線抗體(參見美國專利第5,641,870號，實例2；Zapata等人，Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995])；由抗體片段形成之單鏈抗體分子及多特異性抗體。
番木瓜蛋白酶消化抗體產生兩種相同抗原結合片段(被稱作「Fab」片段)及殘餘的「Fc」片段，該名稱反映易於結晶之能力。Fab片段由完整L鏈以及H鏈之可變區結構域(VH )及一條重鏈之第一恆定域(CH 1)組成。各Fab片段就抗原結合而言係單價的，亦即，其具有單一抗原結合位點。胃蛋白酶處理抗體產生單一較大的F(ab')2 片段，該片段大致對應於經二硫鍵連接的具有不同抗原結合活性之兩個Fab片段且仍能夠交聯抗原。Fab'片段與Fab片段之不同之處在於，Fab'片段在CH 1域之羧基端具有若干個其他殘基，包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸。Fab'-SH係其中恆定域之半胱胺酸殘基帶有游離硫醇基之Fab'在本文中的名稱。F(ab')2 抗體片段最初係以中間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab'片段對形式產生。亦已知抗體片段之其他化學偶合。
Fc片段或「Fc」包含藉由二硫化物結合在一起的兩條H鏈之羧基端部分。抗體之效應功能由Fc區中之序列決定，該區亦由在某些特定類型之細胞上所發現之Fc受體(FcR)識別。
「Fv」為含有完整抗原識別及結合位點之最小抗體片段。此片段由緊密、非共價締合之一個重鏈可變區結構域與一個輕鏈可變區結構域之二聚體組成。此等兩個域之摺疊產生六個高變環(來自H鏈及L鏈各3個環)，其提供用於抗原結合之胺基酸殘基且賦予抗體抗原結合特異性。然而，即使單一可變域(或僅包含三個對抗原具有特異性之CDR之Fv之一半)能夠識別及結合抗原，但親和力比整個結合位點低。
「單鏈Fv」(亦縮寫為「sFv」或「scFv」)為包含連接成單條多肽鏈的VH 及VL 抗體域的抗體片段。較佳地，sFv多肽在VH 與VL 域之間進一步包含多肽連接子，其使sFv能夠形成抗原結合所需的結構。關於sFv之綜述，參見Pluckthun, 在The Pharmacology of Monoclonal Antibodies 中, 第113卷, Rosenburg及Moore編，Springer-Verlag, New York, 第269-315頁(1994)。
術語「雙功能抗體」係指藉由以下製備的較小抗體片段：用VH 與VL 域之間的短連接子(約5至個10個殘基)構建sFv片段(參見前述段落)，以便達成V域之鏈間配對而非鏈內配對，由此產生二價片段，亦即具有兩個抗原結合位點之片段。雙特異性雙功能抗體係兩個「交換」sFv片段之雜二聚體，其中兩個抗體之VH 及VL 域存在於不同多肽鏈上。雙功能抗體更詳細地描述於例如EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)中。
非人類(例如鼠類)抗體之「人類化」形式為大部分人類序列之嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2 或抗體之其他抗原結合子序列)，其含有源自非人類免疫球蛋白之最小序列。在極大程度上，人類化抗體為人類免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來自接受者的高變區(亦為CDR)之殘基經來自諸如具有所需特異性、親和力及能力之小鼠、大鼠或兔之非人類物種(供體抗體)的高變區之殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv構架區(FR)殘基經對應的非人類殘基置換。此外，如本文中所用之「人類化抗體」亦可包含既不存在於接受者抗體中亦不存在於供體抗體中之殘基。進行此等修飾以進一步優化及最佳化抗體效能。人類化抗體最佳亦將包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常係人類免疫球蛋白恆定區。關於其他細節，參見Jones等人，Nature , 321:522-525 (1986)；Reichmann等人，Nature , 332:323-329 (1988)；及Presta,Curr. Op. Struct. Biol. , 2:593-596 (1992)。「人類」或「完全人類」抗體包括含有在人類抗體中發現之構架及恆定域序列之抗體。
如本文所使用，術語「免疫黏附素」表示類抗體分子，其將異源蛋白質(「黏附素」)之結合特異性與免疫球蛋白恆定域之效應功能組合。結構上，免疫黏附素包含與抗體之抗原識別及結合位點不同的(亦即，「異源的」)、具有所需結合特異性之胺基酸序列與免疫球蛋白恆定域序列的融合物。免疫黏附素分子之黏附素部分通常為至少包含受體或配位體之結合位點的連續胺基酸序列。免疫黏附素中之免疫球蛋白恆定域序列可獲自任何免疫球蛋白，諸如IgG-1、IgG-2、IgG-3或IgG-4亞型、IgA (包括IgA-1及IgA-2)、IgE、IgD或IgM。Ig融合物較佳包括用本文所描述之多肽或抗體之結構域替代Ig分子內之至少一個可變區。在一尤佳實施例中，免疫球蛋白融合物包括IgG1分子之鉸鏈區、CH2及CH3區或鉸鏈區、CH1、CH2及CH3區。關於免疫球蛋白融合物之產生，亦參見1995年6月27日頒佈之美國專利第5,428,130號。
蛋白質配方及額外賦形劑 本文中之揭示內容係關於例如用於治療性用途之特定蛋白質配方。本文中之配方包含至少一種蛋白質物質及至少一種膽酸鹽界面活性劑，但亦可包含其他賦形劑或成分，如下文所描述。舉例而言，本文中之配方可包含以下一或多者：醫藥學上可接受之酸或鹼、緩衝液、鹽、凍乾保護劑(若該配方將經凍乾)、糖、糖醇、胺基酸、額外蛋白質物質、稀釋劑、防腐劑、多價金屬鹽及在一些情況下另一界面活性劑。
舉例而言，在一些實施例中，配方可包含蛋白質、膽酸鹽界面活性劑及至少一種緩衝液或鹽。在一些實施例中，配方可進一步包含一或多種穩定劑，諸如糖、糖醇、胺基酸或多價金屬鹽，其視待配製之蛋白質之需要而定。在一些實施例中，配方可包含另一種界面活性劑，諸如聚山梨醇酯、泊洛沙姆、普洛尼克、Brij或烷基醣苷界面活性劑。
本文中之「穩定劑」意謂添加至配方中以幫助將其維持在穩定或不變狀態之任何添加的賦形劑。在一些情況下，可添加穩定劑以幫助防止聚集、氧化、顏色變化或其類似者。
「醫藥學上可接受之酸」包括在配製的濃度及方式下無毒之無機酸及有機酸。舉例而言，適合之無機酸包括鹽酸、過氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磺酸、亞磺酸、對胺基苯磺酸、磷酸、碳酸等。適合之有機酸包括直鏈及分支鏈烷基、芳族、環狀、環脂族、芳基脂族、雜環、飽和、不飽和的單羧酸、二羧酸及三羧酸，包括例如甲酸、乙酸、2-羥基乙酸、三氟乙酸、苯乙酸、三甲基乙酸、第三丁基乙酸、鄰胺基苯甲酸、丙酸、2-羥丙酸、2-氧基丙酸、丙二酸、環戊丙酸、環戊烷丙酸、3-苯基丙酸、丁酸、丁二酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸、2-乙醯氧基-苯甲酸、抗壞血酸、肉桂酸、十二烷基硫酸、硬脂酸、黏康酸、杏仁酸、丁二酸(succinic)、恩波酸、反丁烯二酸、蘋果酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、丙二酸(malonic)、乳酸、檸檬酸、酒石酸、乙醇酸(glycolic)、甘醇酸(glyconic)、葡萄糖酸(gluconic)、丙酮酸、乙醛酸、草酸、甲磺酸(mesylic)、丁二酸、水楊酸、鄰苯二甲酸、棕櫚酸(palmoic)、軟脂酸(palmeic)、硫氰酸、甲磺酸(methanesulphonic)、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、萘-2-磺酸、對甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、4,4'-亞甲基雙-3-(羥基-2-烯-1-羧酸)、羥基萘甲酸(hydroxynapthoic)。
「醫藥學上可接受之鹼」包括在配製的濃度及方式下無毒之無機鹼及有機鹼。舉例而言，適合的鹼包括：由無機鹼形成金屬所形成之鹼，該等金屬諸如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣、銨、鐵、鋅、銅、錳、鋁；N-甲基葡糖胺；嗎啉；哌啶；及有機無毒鹼，包括一級胺、二級胺及三級胺、經取代胺、環狀胺及鹼性離子交換樹脂[例如N(R')4 + (其中R'獨立地為H或C1-4 烷基，例如銨，Tris)]，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙胺基乙醇、三甲胺(trimethamine)、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡鹼、普魯卡因(procaine)、海卓胺(hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可豆鹼、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、多元胺樹脂及其類似者。尤其較佳的有無毒機鹼為異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己胺、膽鹼及咖啡鹼。
可用於本發明之其他醫藥學上可接受之酸及鹼包括源自胺基酸(例如組胺酸、甘胺酸、苯丙胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸及天冬醯胺)之酸及鹼。
本文之配方亦可包括一或多種緩衝液或鹽。緩衝液及鹽包括源自以上所指示之酸及鹼之酸加成鹽及鹼加成鹽兩者的緩衝液及鹽。特定緩衝液及/或鹽包括精胺酸、組胺酸、丁二酸鹽及乙酸鹽。
若配方將被凍乾，則可添加凍乾保護劑。「凍乾保護劑」係一種在與所關注蛋白質組合時顯著防止或降低該蛋白質在凍乾及後續儲存時的物理化學不穩定性的分子。例示性凍乾保護劑包括糖及其對應糖醇；胺基酸，諸如麩胺酸單鈉或組胺酸；甲胺，諸如甜菜鹼；易溶鹽，諸如硫酸鎂；多元醇，諸如三羥基糖醇或更高分子量的糖醇，例如丙三醇(glycerin)、聚葡萄糖、赤藻糖醇、甘油(glycerol)、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇及甘露糖醇；丙二醇；聚乙二醇；Pluronics®；及其組合。其他例示性凍乾保護劑包括丙三醇及明膠，及糖類蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖及水蘇糖。還原糖之實例包括葡萄糖、麥芽糖、乳糖、麥芽酮糖、異麥芽酮糖及乳酮糖。非還原糖之實例包括選自糖醇及其他直鏈多元醇之多羥基化合物的非還原醣苷。較佳糖醇為單醣苷，尤其藉由還原雙醣而獲得的彼等化合物，諸如乳糖、麥芽糖、乳酮糖及麥芽酮糖。醣苷側基可為葡萄醣苷或半乳醣苷。糖醇之其他實例為葡萄糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇及異麥芽酮糖。較佳凍乾保護劑為非還原糖海藻糖或蔗糖。
凍乾保護劑係以「凍乾保護量」添加至預凍乾配方中，其意謂在凍乾保護量之凍乾保護劑存在下凍乾蛋白質之後，該蛋白質在凍乾及儲存時基本上保持其物理化學穩定性。
「醫藥學上可接受之糖」係一種與所關注蛋白質組合時顯著防止或降低該蛋白質在儲存時的物理化學不穩定性的分子。當預期將該配方凍乾且隨後復原時，「醫藥學上可接受之糖」亦可稱為「凍乾保護劑」。例示性糖及其對應糖醇包括：胺基酸，諸如麩胺酸單鈉或組胺酸；甲胺，諸如甜菜鹼；易溶鹽，諸如硫酸鎂；多元醇，諸如三羥基糖醇或更高分子量的糖醇，例如丙三醇、聚葡萄糖、赤藻糖醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇及甘露糖醇；丙二醇；聚乙二醇；Pluronics®；及其組合。其他例示性凍乾保護劑包括丙三醇及明膠，及糖類蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖及水蘇糖。還原糖之實例包括葡萄糖、麥芽糖、乳糖、麥芽酮糖、異麥芽酮糖及乳酮糖。非還原糖之實例包括選自糖醇及其他直鏈多元醇之多羥基化合物的非還原醣苷。較佳糖醇為單醣苷，尤其藉由還原雙醣而獲得的彼等化合物，諸如乳糖、麥芽糖、乳酮糖及麥芽酮糖。醣苷側基可為葡萄醣苷或半乳醣苷。糖醇之其他實例為葡萄糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇及異麥芽酮糖。較佳的醫藥學上可接受之糖為非還原糖海藻糖或蔗糖。
醫藥學上可接受之糖係以「保護量」添加至(例如預凍乾)配方，其意謂蛋白質在儲存期間(例如在復原及儲存之後)基本上保持其物理化學穩定性。
本文中所關注之「稀釋劑」為醫藥學上可接受(對於投與人類而言安全且無毒)且適用於製備液體配方(諸如凍乾後復原之配方)的稀釋劑。例示性稀釋劑包括無菌水、注射用抑菌水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理鹽水)、無菌生理鹽水溶液、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。在一替代性實施例中，稀釋劑可包括鹽及/或緩衝液的水溶液。
「防腐劑」為可添加至本文配方中以降低細菌活性之化合物。防腐劑之添加可例如促進多次使用(多劑量)配方之產生。潛在防腐劑之實例包括十八烷基二甲基苄基氯化銨、氯化六羥季銨、氯化苯甲烴銨(烷基苄基二甲基氯化銨之混合物，其中烷基為長鏈化合物)及苄索氯銨。其他類型之防腐劑包括芳族醇(諸如苯酚)、丁醇及苄醇、對羥苯甲酸烷基酯(諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯)、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇及間甲酚。本文中最佳防腐劑為苄醇。
本文所描述之配方可製備為經復原凍乾配方。將本文所描述之蛋白質或抗體凍乾且隨後復原以產生本發明之液體配方。在此特定實施例中，在如上文所描述製備所關注蛋白質之後，產生「預凍乾配方」。考慮所需劑量體積、投與模式等來確定預凍乾配方中存在之蛋白質之量。舉例而言，完整抗體之起始濃度可為約2 mg/ml至約50 mg/ml，較佳約5 mg/ml至約40 mg/ml且最佳約20至30 mg/ml。
待配製之蛋白質一般存在於溶液中。例如，在本發明之液體配方中，蛋白質可存在於pH約4至8且較佳約5至7之pH緩衝溶液中。緩衝液濃度可為約1 mM至約20 mM，或者約3 mM至約15 mM，視例如緩衝液及配方(例如經復原配方)之所需張性而定。例示性緩衝液及/或鹽為醫藥學上可接受且可由適合之酸、鹼及其鹽產生的彼等者，諸如在「醫藥學上可接受之」酸、鹼或緩衝液下所定義的彼等者。
在一些實施例中，凍乾保護劑添加至預凍乾配方中。預凍乾配方中凍乾保護劑之量一般應使得當復原時，所得配方具有等滲性。然而，高張性復原配方亦可為適合的。此外，凍乾保護劑之量不得太低，太低致使凍乾時蛋白質發生不可接受量之降解/聚集。然而，預凍乾配方中之例示性凍乾保護劑濃度為約10 mM至約400 mM，或者約30 mM至約300 mM，或者約50 mM至約100 mM。例示性凍乾保護劑包括糖及糖醇，諸如蔗糖、甘露糖、海藻糖、葡萄糖、山梨糖醇、甘露糖醇。然而，在特定情況下，某些凍乾保護劑亦可促使配方黏度增加。因而，應當謹慎選擇將此效果降至最低或中和此效果之特定凍乾保護劑。在上文的「凍乾保護劑」之定義下描述其他凍乾保護劑，其在本文中亦稱為「醫藥學上可接受之糖」。
對於各特定蛋白質或抗體及凍乾保護劑的組合，蛋白質與凍乾保護劑之比率可變化。在選擇抗體作為蛋白質且糖(例如蔗糖或海藻糖)作為凍乾保護劑以用於生成具有高蛋白質濃度之等滲性復原配方的情況下，凍乾保護劑與抗體之莫耳比可為約100至約1500莫耳凍乾保護劑比1莫耳抗體，且較佳為約200至約1000莫耳凍乾保護劑比1莫耳抗體，例如約200至約600莫耳凍乾保護劑比1莫耳抗體。
凍乾保護劑(諸如蔗糖或海藻糖)與增積劑(例如甘露糖醇或甘胺酸)之混合物可用於製備預凍乾配方。增積劑可允許產生均一凍乾餅而其中無過多囊袋等。其他醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑，諸如Remington's Pharmaceutical Sciences 第16版, Osol, A.編(1980)中所描述之彼等者，可包括於預凍乾配方(及/或凍乾配方及/或復原配方)中，限制條件為其對配方之所需特徵無不利影響。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者係無毒的且包括：其他緩衝劑；防腐劑；共溶劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；螯合劑，諸如EDTA；金屬複合物(例如，Zn-蛋白質複合物)；可生物降解聚合物，諸如聚酯；及/或成鹽相對離子，諸如鈉。
在凍乾配方之情況下，在將蛋白質、視情況選用之凍乾保護劑及其他視情況選用之組分混合在一起之後，將配方凍乾。有許多不同凍乾器可用於此目的，諸如Hull50TM (Hull, USA)或GT20TM (Leybold-Heraeus, Germany)凍乾器。藉由冷凍配方且隨後使冷凍內容物中的冰在適於初步乾燥的溫度下昇華來達成凍乾。在此條件下，產物溫度低於配方之共晶點或塌陷溫度。通常，在適合的壓力下(範圍通常為約50至250 mTorr)，初步乾燥之存放溫度將在約-30至25℃範圍內(限制條件為產物在初步乾燥期間保持冷凍)。配方、容納樣本之容器(例如玻璃小瓶)的大小及類型、及液體體積將主要決定所需的乾燥時間，該時間的範圍可為幾小時至數日(例如40至60小時)。視情況地，取決於產物中所需的殘餘水分含量，亦可進行二次乾燥階段。進行二次乾燥之溫度係在約0至約40℃之範圍內，主要取決於容器之類型及大小，及所用蛋白質之類型。例如，凍乾之整個除水階段的存放溫度可為約15至30℃ (例如約20℃)。二次乾燥必需的時間及壓力為產生適合的凍乾餅的時間及壓力，取決於例如溫度及其他參數。二次乾燥時間係由產物中所需的殘餘水分含量決定且通常花費至少約5小時(例如10至15小時)。壓力可與初步乾燥步驟期間所用的壓力相同。凍乾條件可根據配方及瓶子大小而變化。
在向患者投與之前，凍乾配方通常係用醫藥學上可接受之稀釋劑復原，使得復原配方中之蛋白質濃度為至少約50 mg/ml，例如約50 mg/ml至約400 mg/ml，或者約80 mg/ml至約300 mg/ml，或者約90 mg/ml至約150 mg/ml。在預期經皮下遞送復原配方的情況下，復原配方中之此等高蛋白質濃度被視為特別適用。然而，對於其他投與途徑(諸如經靜脈內投與)，復原配方中可能需要較低的蛋白質濃度(在復原配方中為例如約5至50 mg/ml，或約10至40 mg/ml蛋白質)。在某些實施例中，復原配方中之蛋白質濃度顯著高於預凍乾配方中之濃度。舉例而言，復原配方中之蛋白質濃度可為預凍乾配方中之蛋白質濃度的約2倍至40倍，或者3倍至10倍，或者3倍至6倍(例如至少三倍或至少四倍)。
復原一般在約25℃溫度下進行以確保完全水合，然而需要時亦可採用其他溫度。復原所需的時間將視例如稀釋劑類型、賦形劑及蛋白質之量而定。例示性稀釋劑包括無菌水、注射用抑菌水(BWF)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理鹽水)、無菌生理鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。稀釋劑視情況含有防腐劑。例示性防腐劑已描述如上，其中芳族醇(諸如苄醇或苯酚)為較佳防腐劑。防腐劑用量係藉由評估與蛋白質及防腐劑功效測試相容的不同防腐劑濃度來確定。舉例而言，若防腐劑為芳族醇(諸如苄醇)，則其可以約0.1至2.0%且較佳約0.5至1.5%、但最佳約1.0至1.2%之量存在。
較佳地，復原配方在每個小瓶中之大小≥10 µm的粒子少於6000個。
本文中之配方亦可含有超過一種為所治療之特定適應症所必需之蛋白質，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之補充活性的蛋白質。舉例而言，可能需要提供兩種或更多種結合於單一配方中之所需標靶(例如受體或抗原)之抗體。此類蛋白質宜以有效達成預期目的之量的組合存在。
可添加其他蛋白質，諸如白蛋白(例如人類血清白蛋白或牛血清白蛋白)或免疫球蛋白(例如IgG恆定區)以進一步穩定所關注蛋白質。
用於活體內投與之配方必須為無菌的。此易於藉由在凍乾及復原之前或之後經由無菌過濾膜過濾來實現。或者，可藉由例如將除蛋白質外的成分在約120℃熱壓處理約30分鐘來使整個混合物達成無菌性。
藉由混合具有所需純度之活性成分與其他視情況選用之載劑、賦形劑或穩定劑來製備治療性配方以供儲存(Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042 [1990])。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者係無毒的，且包括緩衝液、抗氧化劑(包括抗壞血酸、甲硫胺酸、維生素E、偏亞硫酸氫鈉)、防腐劑、等滲劑、穩定劑、金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)及/或螯合劑(諸如EDTA)。
當治療劑為抗體片段時，特異性結合於目標蛋白之結合域的最小片段可為較佳的。舉例而言，基於抗體之可變區序列，可設計保持結合目標蛋白序列之能力的抗體片段或甚至肽分子。此類肽可以化學方式合成及/或藉由重組DNA技術產生(參見例如Marasco等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 7889-7893 [1993])。
緩衝液用於將pH控制在最佳化治療有效性之範圍內，尤其在穩定性具pH依賴性之情況下。緩衝液較佳以約50 mM至約250 mM範圍內之濃度存在。適用於本發明之緩衝液包括有機酸及無機酸以及其鹽。舉例而言，檸檬酸鹽、磷酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、乙酸鹽。此外，緩衝液可包含組胺酸及三甲胺鹽，諸如Tris。
添加防腐劑以延緩微生物生長，且通常存在於0.2%至1.0% (w/v)範圍內。適用於本發明之防腐劑包括十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六羥季銨；苯甲烴銨鹵化物(例如氯化物、溴化物、碘化物)、苄索氯銨；硫柳汞、酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇、3-戊醇及間甲酚。
亦可包括張力劑例如以調整或維持液體組合物之張力。當與諸如蛋白質及抗體之較大帶電生物分子一起使用時，此類試劑可與胺基酸側鏈之帶電基團相互作用，從而減少分子間及分子內相互作用之可能性。考慮其他成分之相對量，張力劑可以0.1重量%至25重量%、較佳1重量%至5重量%之間的任何量存在。較佳張力劑包括多羥基糖醇，較佳包括三羥基糖醇或高級糖醇，諸如丙三醇、赤藻糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇或甘露糖醇。
在本文之一些配方中，包括其他界面活性劑。在本文中之其他配方中，僅包括膽酸鹽界面活性劑且不包括其他類型之界面活性劑。
其他界面活性劑之實例包括聚山梨醇酯，諸如聚山梨醇酯20 (PS20)及聚山梨醇酯80 (PS80)。其他界面活性劑可包括泊洛沙姆及普朗尼克，諸如泊洛沙姆188或普洛尼克F68或Brij。其他額外界面活性劑可包括烷基醣苷，諸如辛基麥芽糖苷、癸基麥芽糖苷、十二烷基麥芽糖苷或辛基葡糖苷。更一般而言，「烷基醣苷」包括如此項技術中已知的藉由與任何疏水性烷基之鍵連接之任何糖。疏水性烷基鏈與親水性醣之間的鍵可包括醣苷、酯、硫代醣苷、硫酯、醚、醯胺或醯脲鍵或鍵以及其他可能。例示性烷基醣苷提供於例如WO 2011/163458中。
其他賦形劑包括可充當以下一或多者的試劑：(1)增積劑、(2)溶解度增強劑、(3)穩定劑及(4)及防止變性或黏著於容器壁之試劑。此類賦形劑包括：多羥基糖醇(上文所枚舉的)；胺基酸，諸如丙胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸、離胺酸、鳥胺酸、白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機糖或糖醇，諸如蔗糖、乳糖、乳糖醇、海藻糖、水蘇糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、核糖醇、肌肉肌糖、肌肉肌醇、半乳糖、半乳糖醇、甘油、環醇(例如肌醇)、聚乙二醇；含硫還原劑，諸如脲、麩胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油及硫代硫酸鈉；低分子量蛋白質，諸如人類血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或其他免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；單糖(例如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖)；雙糖(例如乳糖、麥芽糖、蔗糖)；三糖，諸如棉子糖；及多醣，諸如糊精或聚葡萄糖。
本文中之配方亦可含有超過一種為所治療之特定適應症所必需之活性化合物，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之補充活性的活性化合物。或者或另外，組合物可包含細胞毒性劑、細胞介素或生長抑制劑。此類分子宜以有效用於預期目的之量組合存在。
亦可例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合將活性成分包埋於所製備之微膠囊中，例如羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊分別包埋於膠狀藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米囊劑)中或包埋於巨乳液中。此類技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences 第18版，見上文。
可以製備持續釋放型製劑。持續釋放型製劑之適合實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質呈成形物形式，例如膜或微膠囊。持續釋放型基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥基乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯(美國專利第3,773,919號)、L-麩胺酸與γ-乙基-L-麩胺酸之共聚物、不可降解之乙烯-乙酸乙烯酯、諸如LUPRON DEPOTTM (由乳酸-乙醇酸共聚物及亮丙瑞林乙酸鹽(leuprolide acetate)構成之可注射微球體)之可降解乳酸-乙醇酸共聚物及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。已成功地用人類生長激素(rhGH)、干擾素-(rhIFN-)、介白素-2及MN rgp120進行持續釋放之重組蛋白之微膠囊化。Johnson等人，Nat. Med. 2: 795-799 (1996)；Yasuda等人，Biomed. Ther. 27: 1221-1223 (1993)；Hora等人，Bio/Technology 8: 755-758 (1990)；Cleland, 「Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems」，在Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach 中，Powell及Newman編(Plenum Press: New York, 1995), 第439-462頁；WO 97/03692；WO 96/40072；WO 96/07399；及美國專利案第5,654,010號。
歸因於其生物相容性及範圍廣泛之生物可降解特性，使用聚乳酸-乙醇酸(PLGA)共聚合物來開發此等蛋白質之持續釋放型配方。PLGA、乳酸及乙醇酸之降解產物可以在人體內快速清除。此外，此聚合物之可降解性可視其分子量及組成而在數月至數年內進行調整。Lewis，「Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer」，在Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems 中(Marcel Dekker; New York, 1990), M. Chasin及R. Langer (編)第1-41頁。
雖然諸如乙烯-乙酸乙烯酯及乳酸-乙醇酸之聚合物使得分子能夠釋放超過100天，但某些水凝膠則在較短的時間段釋放蛋白質。若囊封抗體長時間留存於體內，則其可能因在37℃下暴露於水分而變性或聚集，導致生物活性損失及可能的免疫原性變化。可以設計合理的穩定策略，其視所涉及的機制而定。舉例而言，若發現聚集機制係經由硫基-二硫化物互換而形成分子間S-S鍵，則穩定化可藉由修飾巰基殘基、自酸性溶液凍乾、控制水分含量、使用適當添加劑及開發特定聚合基質組合物來達成。
脂質體或類蛋白質組合物亦可用於配製本文所揭示之蛋白質或抗體。參見美國專利第4,925,673號及第5,013,556號。
可經由使用無毒「水溶性多價金屬鹽」來增強本文所描述之蛋白質及抗體之穩定性。實例包括Ca2+ 、Mg2+ 、Zn2+ 、Fe2+ 、Fe3+ 、Cu2+ 、Sn2+ 、Sn3+ 、Al2+ 及Al3+ 。可與以上多價金屬陽離子形成水溶性鹽之例示性陰離子包括由無機酸及/或有機酸形成之陰離子。此類水溶性鹽在水中(在20℃下)之溶解度為至少約20 mg/ml，或者至少約100 mg/ml，或者至少約200 mg/ml。
可用於形成「水溶性多價金屬鹽」之適合的無機酸包括鹽酸、乙酸、硫酸、硝酸、硫氰酸及磷酸。可使用之適合有機酸包括脂族羧酸及芳族酸。此定義內之脂族酸可經定義為飽和或不飽和C2-9 羧酸(例如脂族單羧酸、二羧酸及三羧酸)。舉例而言，此定義內之例示性單羧酸包括飽和C2-9 單羧酸乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸及卡伯尼克酸(capryonic)，以及不飽和C2-9 單羧酸丙烯酸、丙炔酸(propriolic)、甲基丙烯酸、丁烯酸及異丁烯酸。例示性二羧酸包括飽和C2-9 二羧酸丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸及庚二酸，而不飽和C2-9 二羧酸包括順丁烯二酸、反丁烯二酸、甲基順丁烯二酸及甲基反丁烯二酸。例示性三羧酸包括飽和C2-9 三羧酸丙三羧酸及1,2,3-丁三羧酸。另外，此定義之羧酸亦可含有一個或兩個羥基以形成羥基羧酸。例示性羥基羧酸包括乙醇酸、乳酸、甘油酸、羥丙二酸、蘋果酸、酒石酸及檸檬酸。此定義內之芳族酸包括苯甲酸及水楊酸。
可用於幫助穩定本發明之經囊封多肽之常用水溶性多價金屬鹽包括例如：(1)鹵化物之無機酸金屬鹽(例如氯化鋅、氯化鈣)、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽及硫氰酸酯；(2)脂族羧酸金屬鹽(例如乙酸鈣、乙酸鋅、丙酸鈣、乙醇酸鋅、乳酸鈣、乳酸鋅及酒石酸鋅)；及(3)苯甲酸鹽之芳族羧酸金屬鹽(例如苯甲酸鋅)及水楊酸鹽。
配方之特性 與尚未儲存或經受應力之對照溶液相比，本文中包含膽酸鹽界面活性劑之某些配方可展示在儲存後或在受力(諸如攪拌或高溫儲存)後蛋白質聚集程度降低，無論係有可見聚集物抑或存在高分子量物質(HMWS)均如此。
本文之一些配方中可包括「攪拌誘導之聚集抑制」量的膽酸鹽。該量係可偵測到的抑制蛋白質(相較於在不存在膽酸鹽之情況下在諸如在室溫下以100 rpm攪拌24小時之特定條件集下經相同處理之蛋白質)之攪拌誘發之聚集的該膽酸鹽的量。舉例而言，可將配方中之聚集可與未經攪拌之對照溶液進行比較，以檢查係有可見聚集物抑或存在HMWS。
在本文之一些實施例中，配方在攪拌誘發之聚集實驗之後具有一或多種以下特性。如隨後實例中所描述之此類實驗可在適合之實驗室振盪設備上以諸如100 rpm之速度進行。具體言之，該配方在室溫下以100 rpm攪拌24小時之後可能未顯示可見聚集物；其在室溫下以100 rpm攪拌24小時之後可顯示不超過2%的高分子量蛋白質聚集物；其在室溫下以100 rpm攪拌24小時之後顯示不超過1%的高分子量蛋白質聚集物；及/或相較於未攪拌之對照組，在室溫下以100 rpm攪拌24小時之後，配方中之高分子量蛋白質聚集物增加不超過0.2%。舉例而言，可使用簡單目視檢驗，經由溶液渾濁度抑或沈澱之存在來檢查可見聚集物之存在。可例如藉由尺寸排阻層析法(SEC)偵測高分子量物質。可偵測高分子量物質或可根據尺寸、電荷、疏水性或質量分離配方中之物質的其他方式包括凝膠電泳、等電聚焦、毛細電泳法、層析法(諸如離子交換層析法、反相高效液相層析法)、肽作圖、寡醣作圖、質譜分析、紫外線吸收光譜法、螢光光譜法、圓二色性光譜法、等溫滴定熱量測定、差示掃描熱量測定、分析型超速離心、動態光散射、蛋白分解及交聯、濁度量測、過濾阻滯分析、免疫分析、螢光染料結合分析、蛋白質染色分析、顯微法及經由ELISA或其他結合分析偵測聚集物。
在一些實施例中，若配方包含聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，則在40℃下儲存2週之後或在用CALB脂肪酶處理之後，該配方中之聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80比具有相同成分及濃度但不含膽酸鹽的配方保持更大完整程度。例如，在一些實施例中，在40℃下儲存2週之後或在CALB脂肪酶處理之後，添加例如0.05%至0.5%膽酸鹽界面活性劑會減少或消除配方中之聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80游離脂肪酸之可見沈澱。例如，在一些實施例中，在40℃下儲存2週之後或在CALB脂肪酶處理之後，添加0.05%至0.5% CHAPS會減少或消除配方中之聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80游離脂肪酸之可見沈澱。
利用本發明之配方的治療性治療 「治療」係指治療性治療及預防性或防治性措施。需要治療者包括已患有病症者以及待預防病症者。治療包括個體之任何緩解或改善，諸如減少病症症狀、改善個體之生命品質以及穩定病症、預防病症惡化、治癒、降低復發風險及其類似者。
「個體」及「患者」可互換地使用且一般係指接受治療之哺乳動物。用於治療目的之「哺乳動物」係指任何分類為哺乳動物之動物，包括人類、家畜及農畜，及動物園動物、體育運動用動物或寵物動物，諸如狗、馬、兔、牛、豬、倉鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、貓等。在一些實施例中，個體為人類。
「病症」為將受益於用蛋白質治療之任何病狀。此病狀包括慢性及急性病症或疾病，包括使哺乳動物易患所討論之病症之病理學病狀。本文中欲治療之病症之非限制性實例包括癌瘤及炎症。
「治療有效量」為影響特定病症之可量測治療至少所需之最小濃度。已知蛋白質藥物之治療有效量為此項技術中所熟知，而下文發現之蛋白質之有效量可藉由在熟練技術人員(諸如普通醫師)之技能內之標準技術判定。
抗體及其他蛋白質可根據本發明按液體或凍乾形式配製。投與途徑係根據已知及可接受之方法，諸如藉由以適合的方式在長時段內之單次或多次快速注射或輸注，例如藉由皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內、動脈內、病灶內或關節內途徑之注射或輸注，局部投與，吸入或藉由持續釋放或緩釋方式。
對於疾病之治療，活性劑之適當劑量將取決於如上文所定義的待治療病症之類型、病症之嚴重程度及病程、藥劑係出於預防性目的抑或治療性目的投與、先前療法、個體之臨床病史及對藥劑之反應以及主治醫師之判斷。一次性或歷經一系列治療向患者適當地投與治療劑。
本文中之方法可與治療病症之已知方法組合，作為組合的或額外的治療步驟，抑或作為治療性配方之額外組成部分。本文中之醫藥組合物之劑量及所需藥物濃度可視所設想之特定用途而變化。
根據已知方法，可向需要蛋白質治療之哺乳動物(例如人類)投與本發明之配方(包括但不限於尚未凍乾之液體配方及經復原配方)，諸如以藥團形式或藉由連續輸注一段時間而靜脈內投與，藉由肌內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、經口、局部或吸入途徑投與。在一些實施例中，藉由皮下(亦即在皮膚下)投與來向哺乳動物投與配方。出於該等目的，可使用注射器注射配方。然而，其他用於投與配方之裝置係可用的，諸如注射裝置(例如Inject-ease™及Genject™裝置)；注射筆(諸如GenPen™)；自動注射裝置；無針裝置(例如MediJector™及BioJector™)；及皮下貼片遞送系統。
在一些特定實施例中，本發明係關於包含本發明之配方的容器。舉例而言，配方可包裝至單次用或多次用小瓶中或包裝至用於單次劑量投與單元之套組中。在本發明之另一實施例中，提供一種製品，其包括包含配方之容器且亦可提供其使用說明書。適合容器包括例如瓶子、小瓶(例如雙室小瓶)、注射器(諸如單室注射器或雙室注射器)及試管。容器可由多種材料(諸如玻璃或塑膠)形成。此類容器或套組包含單室或多室預填充注射器。例示性預填充注射器可自Vetter GmbH, Ravensburg, Germany獲得。裝有配方之容器上或與該容器相關之標籤可指示復原及/或使用的說明。標籤可進一步指示配方適用於或欲用於經皮下投與。裝有配方之容器可為多次用小瓶，其允許重複投與(例如，2至6次投與)。製品可進一步包含第二個容器，其包含例如用於復原凍乾配方之適合的稀釋劑(例如BWFI)。製品可進一步包括自商業及使用者角度來看合乎需要之其他材料，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器及具有使用說明之包裝說明書。
蛋白質之適當劑量(「治療有效量」)將取決於例如待治療之病狀、病狀之嚴重程度及病程、蛋白質係出於預防性目的抑或治療性目的而投與、先前療法、患者之臨床病史及對蛋白質之反應、所用蛋白質之類型及主治醫師之判斷。一次性或歷經一系列治療向患者適當地投與蛋白質且可在診斷後的任何時間向患者投與蛋白質。蛋白質可作為唯一治療投與，或與適用於治療討論中的病狀之其他藥物或療法聯合投與。
實例 參考以下實例將更充分地理解本發明。然而，其不應解釋為限制本發明之範疇。
實例 1 ： 對膽酸鹽界面活性劑防止蛋白質 / 抗體聚集之研究 通用方法 振盪或攪拌誘發之聚集
在此研究集合中，在室溫下，在臂式振盪器上以100 rpm對單株抗體之緩衝溶液(20 mM組胺酸乙酸鹽或200 mM精胺酸丁二酸鹽或20 mM乙酸鈉，pH 5.5至5.8)進行振盪。使用填充於15 cc玻璃小瓶中之5 mL抗體溶液進行此等研究。以規則時間間隔抽取樣品且使用尺寸排阻層析法(SEC)分析尺寸變異分佈。評估膽酸鹽類別之各種界面活性劑在振盪期間防止蛋白質聚集之有效性。界面活性劑係以低於或高於其各別臨界微胞濃度(CMC)之濃度使用。
實驗及結果 吾人首先研究0.05% (w/v)膽酸鹽是否足以保護單株抗體在低或高離子強度配方條件下免受嚴苛攪拌條件影響。吾人將0.05% (w/v)之膽酸鹽界面活性劑(CHAPS、SGH或STH)或對照界面活性劑(PS20或PX188)與含1 mg/mL例示性單株抗體(抗PDL1)之20 mM組胺酸乙酸鹽及240 mM蔗糖之低離子強度溶液(pH 5.5)或與含1 mg/mL另一例示性單株抗體(抗類胰蛋白酶)之200 mM精胺酸丁二酸鹽之高離子強度溶液(pH 5.8)進行混合。兩種溶液均填充至15 cc玻璃小瓶中，填充體積為5 mL。亦製備具有以上成分但不含界面活性劑之對照溶液且進行填充。在環境溫度下在臂式振盪器(Glas-Col桌上型臂式振盪器)中以100 rpm攪拌溶液24小時。如圖1及圖2中所示，攪拌不含界面活性劑之對照溶液產生明顯混濁之溶液，而所有其他溶液仍為明顯澄清的。
作為測定蛋白質聚集程度之方式，在攪拌24小時後，各溶液中HMWS之百分比亦藉由SEC量測。結果展示於下表1及表2中：表 1 - 攪拌研究 - 配製於低離子強度緩衝液中之抗 PDL1 抗體 - HMWS (%)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 總 HMWS %
對照 未經攪拌 1.00
非離子型 PS20 1.05
Px188 1.03
兩性離子型 CHAPS 0.97
陰離子型 SGH 1.87
STH 5.93
  不含界面活性劑的對照 經攪拌的，不含界面活性劑 23.13
表1展示在攪拌含1 mg/mL抗PDL1抗體之20 mM組胺酸乙酸鹽及240 mM蔗糖之低離子強度溶液(pH 5.5) 24小時之後的總HMWS百分比。陰離子型SGH及STH界面活性劑顯示比對照類別及其他界面活性劑類別高至少約2倍之總HMWS百分比。不含界面活性劑之對照樣本顯示HMWS百分比之顯著增加。表 2 - 攪拌研究 - 配製於高離子強度緩衝液中之抗類胰蛋白酶 - HMWS (%)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 總HMWS %
對照 未經攪拌 0.99
非離子型 PS20 1.03
PX188 1.01
兩性離子型 CHAPS 0.96
陰離子型 SGH 0.96
STH 0.97
不含界面活性劑的對照 經攪拌的，不含界面活性劑 65.01
表2展示在攪拌含1 mg/mL抗類胰蛋白酶抗體的包含200 mM精胺酸丁二酸鹽之高離子強度溶液(pH 5.8) 24小時之後的總HMWS百分比。如表2中所示，所有界面活性劑保護低濃度抗類胰蛋白酶抗體免受在高離子強度緩衝液條件下形成攪拌誘發之可溶性聚集物的影響。
由於兩性離子型CHAPS界面活性劑在保護抗體抵抗低離子強度緩衝液(表1；圖1)及高離子強度緩衝液(表2；圖2)兩者中之可溶性聚集物形成的方面表現良好，因此離子強度配方有可能在使陰離子型界面活性劑(SGH及STH)有效工作方面發揮作用。配方中存在高離子強度可產生電荷屏蔽，使得諸如SGH及STH之陰離子型界面活性劑主要充當界面活性劑。為測試此假設，吾人交換兩種溶液中之抗體且重複實驗。結果展示於下表3中。表 3 ： 攪拌研究 - 配製於高及低離子強度緩衝液中之抗類胰蛋白酶抗體 (HMWS (%))( 亦參考表 2)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 總HMWS % (呈高離子強度) 總HMWS % (呈低離子強度)
對照 未經攪拌 0.99 1.12
非離子型 PS20 1.03 1.10
Px188 1.01 1.02
兩性離子型 CHAPS 0.96 1.05
陰離子型 SGH 0.96 8.35
STH 0.97 28.33
表3提供與未經攪拌的對照相比之各緩衝液中之總HMWS百分比。結果顯示，CHAPS、PS20及PX188均保護抗類胰蛋白酶免受攪拌誘發之聚集影響，而不管離子強度如何。陰離子型膽酸鹽界面活性劑SGH及STH保護高離子強度配方中而非低離子強度配方中之抗類胰蛋白酶免受可溶性聚集物形成的影響。表4中展示抗PDL1之類似結果。表 4 ： 攪拌研究 - 配製於高及低離子強度緩衝液中之抗 PDL1 抗體 -HMWS (%)( 亦參考表 1)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 總HMWS % (呈高離子強度) 總HMWS % (呈低離子強度)
對照 未經攪拌 0.88 1.00
非離子型 PS20 1.02 1.05
Px188 0.90 1.03
兩性離子型 CHAPS 1.03 0.97
陰離子型 SGH 0.95 1.87
STH 0.87 5.93
實例 2 ： 測試離子強度對膽酸鹽界面活性劑進行之聚集保護之影響 在包含低離子強度配方(20 mM組胺酸乙酸鹽、240 mM蔗糖，pH 5.5)及高離子強度配方(20 mM組胺酸乙酸鹽，272 mM NaCl，pH 5.5)下的1 mg/mL抗Tau單株抗體之溶液中，用來自以下界面活性劑之濃縮儲備溶液的以0.01%、0.025%或0.05% (w/v)加標之各種膽酸鹽界面活性劑評估攪拌後之可見顆粒：甘膽酸鈉水合物(SGH)、牛膽酸鈉水合物(STH)、膽酸鈉水合物SCH)、去氧牛膽酸鈉水合物(SDTH)、去氧膽酸鈉水合物(SDCH)、鵝去氧膽酸鈉水合物(SCDCH)、CHAPS及BigCHAP。使用組胺酸乙酸鹽緩衝液製備所有配方，且使用氯化鈉代替精胺酸丁二酸鹽來製備高離子強度配方。其目的係使緩衝液物質保持不變。目的係理解離子強度是否實際起到防止HMWS形成但不防止配方中所使用之緩衝液物質(例如精胺酸)形成的作用。
在特定條件下是否觀測到可見顆粒描繪於下表5及表6中，而與未經攪拌之對照相比HMWS之形成顯示於下表7及表8中。表 5 ： 攪拌研究 - 配製於低離子強度緩衝液中之抗 Tau - 可見顆粒分析
界面活性劑類別 界面活性劑類型 是否觀測到可見顆粒？ (Y/N)
0.01% 0.025% 0.05%
陰離子型 SGH Y Y N
STH Y Y N
SCH Y N N
SdTH Y Y N
SdCH Y Y Y
ScdCH Y Y Y
兩性離子型 CHAPS Y N N
BigCHAP N N N
Y = 是；N = 否表 6 ： 攪拌研究 - 配製於高離子強度緩衝液中之抗 Tau - 可見顆粒分析
界面活性劑類別 界面活性劑類型 是否觀測到可見顆粒 ？ (Y/N)
0.01% 0.025% 0.05%
陰離子型 SGH Y N N
STH Y N N
SCH Y N N
SdTH Y N N
SdCH Y Y Y
ScdCH Y Y Y
兩性離子型 CHAPS Y N N
BigCHAP N N N
Y = 是；N = 否
表5及表6中之結果顯示，當在0.025%或0.05% (w/v)之濃度下測試時，陰離子型界面活性劑更好地保護抗Tau抗體免受在較高離子強度配方處的攪拌誘發之不溶性聚集物形成(可見顆粒形成)的影響。除了在任何所測試濃度下均不會保護抗Tau免受可見粒子形成的影響的SdCH及ScdCH以外，所有陰離子型界面活性劑及兩性離子型CHAPS在至少0.025% (w/v)之濃度下會很好地保護抗體免受可見粒子形成的影響。BigCHAP在所有測試濃度下均保護抗Tau免受攪拌誘發之可見粒子形成的影響，而不管配方之離子強度如何。表 7 ： 攪拌研究 - 配製於低離子強度緩衝液中之抗 Tau - HMWS (%)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 總HMWS (%)
對照 ( 未經攪拌) 0.01% 界面活性劑 0.025% 界面活性劑 0.05% 界面活性劑
陰離子型 SGH 0.19 NA NA 0.27
STH 0.15 NA 27.24 6.13
SCH 0.19 NA 0.14 0.14
SdTH 0.19 NA 20.88 0.78
SdCH NA NA NA NA
ScdCH NA NA NA NA
兩性離子型 CHAPS 0.17 2.96 0.15 0.13
BigCHAP 0.18 2.82 0.16 0.16
NA = 蛋白質已完全自溶液中沈澱析出表 8 ： 攪拌研究 - 配製於高離子強度緩衝液中之抗 Tau - HMWS (%)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 總HMWS (%)
對照 ( 未經攪拌) 0.01% 界面活性劑 0.025% 界面活性劑 0.05% 界面活性劑
陰離子型 SGH 0.73 20.41 0.74 0.74
STH 0.72 NA 0.93 0.73
SCH 0.75 20.3 0.73 0.67
SdTH 0.84 NA 0.83 0.82
SdCH NA NA NA NA
ScdCH NA NA NA NA
兩性離子型 CHAPS 0.83 12.65 0.85 0.85
BigCHAP 0.84 7.41 0.82 0.84
NA = 蛋白質已部分或完全自溶液沈澱析出
表7及表8中之結果顯示，當在0.025%或0.05% (w/v)之濃度下時，陰離子型界面活性劑更好地保護抗Tau抗體免受較高離子強度配方處之攪拌誘發之可溶性聚集物形成的影響。兩性離子型CHAPS、BigCHAP及陰離子型STH在0.025% (w/v)或0.05% (w/v)之濃度下保護抗Tau免受低及高離子強度配方中可溶性聚集物形成的影響。除了在任何所測試濃度下均不會保護抗Tau免受可溶性聚集物形成之影響的SdCH及ScdCH以外，所有陰離子型界面活性劑在至少0.025% (w/v)之濃度下會很好地保護抗Tau免受可溶性聚集物的影響。
此等研究之結果證實，配方之離子強度使得陰離子型界面活性劑能夠保護單株抗體免受攪拌誘發之物理不穩定性的影響，而非保護單株抗體免受配方中所用之賦形劑(氯化鈉精胺酸)類型的影響。
實例 3 ： 膽酸鹽界面活性劑對蛋白質電荷不均一性 (iCIEF) 之作用 - 攪拌研究 使用成像毛細管等電聚焦(iCIEF)評估實例2中所描述的在攪拌實驗後的抗體電荷變異分佈，以判定膽酸鹽是否對所測試抗體之相對電荷變異分佈有影響。下表9及表10中所示之結果指示在攪拌之後維持電荷變異分佈，且儘管其為帶電物質，但膽酸鹽不改變抗體之電荷不均一性。用含0.05%界面活性劑之20 mM組胺酸乙酸鹽(pH 5.5，低離子強度緩衝液)來培育抗PDL1 (1 mg/mL) (表9)。用含0.05%界面活性劑之200 mM精胺酸丁二酸鹽(pH 5.8，高離子強度緩衝液)來培育抗類胰蛋白酶(1 mg/mL) (表10)。表 9 ： 攪拌研究 - 配製於低離子強度緩衝液中之抗 PDL1 - 電荷變異分析結果 (icIEF)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 酸性 (%) 主峰 (%) 鹼性 (%)
對照 未經攪拌 26.7 68.7 4.4
非離子型 PS20 24.8 70.2 5.0
Px188 26.0 69.2 4.8
兩性離子型 CHAPS 26.1 69.0 5.0
陰離子型 SGH 26.5 68.7 4.9
STH 27.6 67.2 5.2
表 10 ： 攪拌研究 - 配製於低離子強度緩衝液中之抗類胰蛋白酶 - 電荷變異分析結果 (icIEF)
界面活性劑類別 界面活性劑類型 酸性 (%) 主峰 (%) 鹼性 (%)
對照 未經攪拌 46.9 50.4 2.6
非離子型 PS20 46.5 50.4 3.1
Px188 47.0 50.4 2.6
兩性離子型 CHAPS 46.8 50.6 2.6
陰離子型 SGH 47.3 50.0 2.7
STH 45.2 46.4 8.4*
*此係未預期之變化或值，且其可為分析偽影
基於本文中之實例1至3之結果，在24小時振盪應力之後，所有零淨電荷膽酸鹽界面活性劑在0.05% (w/v)之濃度下防止可溶性聚集物形成。陰離子界面活性劑(SGH、STH、SCH及SDTH)似乎會在諸如200 mM精胺酸丁二酸鹽之高離子強度緩衝液中比在諸如20 mM組胺酸乙酸鹽(HisOAc)之低離子強度緩衝液中更好地防止可溶性聚集物形成。相比之下，兩性離子型界面活性劑CHAPS未顯示對高離子強度或低離子強度之偏好，表明離子強度在陰離子型膽酸鹽界面活性劑中所見之差異中起作用。
實例 4 ： 膽酸鹽界面活性劑對蛋白質配方中聚山梨醇酯 20 之 酶降解之影響 在長期儲存時，聚山梨醇酯20 (PS20)可降解成可自溶液沈澱析出之游離脂肪酸物質(FFA)，可能導致對溶液中之蛋白質之保護較少，以及在蛋白質配方中或在復原後形成的PS20相關顆粒之存在並不合乎需要。此類降解可限制含有PS20之治療型蛋白質配方之存放期限。為測試在以加速方式模仿PS20降解的條件下添加低濃度膽酸鹽界面活性劑是否影響聚山梨醇酯穩定性，吾人將外加膽酸鹽至含有PS20之配方，使用脂肪酶驅使PS20降解且量測PS20降解。
具體言之，將含有在200 mM精胺酸丁二酸鹽配製之5 mg/mL抗類胰蛋白酶抗體、0.02% (w/v) PS20之溶液(pH 5.8)與各種濃度之膽酸鹽界面活性劑混合，接著外加0.04單位/mL CALB且在5℃下培育12小時。若配方中之膽酸鹽之存在保護PS20免於降解為FFA或使所形成之FFA溶解，則在蛋白質溶液中未觀測到可見的FFA相關粒子。若膽酸鹽不提供保護或溶解，則應在與未添加膽酸鹽之蛋白質溶液相同的程度上形成可見的FFA相關粒子。
此實驗之結果展示於圖 3 及圖 4 中。 結果顯示添加0.5% SCH、SGH或CHAPS防止溶液中形成可見顆粒，而此類顆粒仍在0.02%至0.1%各添加之界面活性劑處形成(圖3)。
量測起始物質中之PS20之量以藉由利用標準曲線方法之HPLC-ELSD提供0.25 mg/mL之對照最大量(Hewitt等人，Journal of Chromatography A. 1215 (2008) 156-160)。如圖4中所示，在脂肪酶處理之後，完整PS20之濃度降至低於0.1 mg/mL。相比之下，濃度為0.1%至0.5% (w/v)之CHAPS、SGH及STH保護溶液中之PS20免於降解。具體言之，起始PS20濃度僅經量測為剛好超過0.25 mg/mL，同時在脂肪酶降解之後在無界面活性劑添加的情況下下降至0.05 mg/mL。添加0.1%至0.5% (w/v)之CHAPS使得PS20濃度在脂肪酶處理後保持在約0.13%與0.17% (w/v)之間。添加0.1%至0.5% (w/v)之SGH使得PS20濃度在脂肪酶處理後保持在約0.06%與0.13% (w/v)之間。添加0.1%至0.5% (w/v)之STH使得PS20濃度在脂肪酶處理後保持在剛好超過0.10%及保持為約0.16% (w/v)。
實例 5 ： 膽酸鹽界面活性劑對蛋白質配方中聚山梨醇酯 20 之熱降解之作用 為進一步測試膽酸鹽是否可穩定含PS20蛋白質溶液，吾人將CHAPS或SGH添加至含有PS20之蛋白質溶液且在40℃下持續2週使溶液經受熱應力。在第0天(D0)、D7及D14抽出樣本且使用完整PS20 HPLC-ELSD定量方法進行測試。測試下列兩種單株抗體之基礎配方：含30 mg/mL抗PDL1之20 mM乙酸鈉，pH 5.5，及含抗類胰蛋白酶之200 mM精胺酸丁二酸鹽，pH 5.8。界面活性劑加標設置及使用抗PDL1抗體及抗類胰蛋白酶抗體之測試的結果提供於表11中。表 11 ： 共配製成抗體溶液之界面活性劑 - 在 40 ℃ 下持續 2 週 經受熱應力
樣本條件 PS20 濃度之變化(mg/mL)
抗PDL1 (30 mg/mL) (於低離子強度緩衝液中) 抗類胰蛋白酶(150 mg/ml) (於高離子強度緩衝液中)
1:1 (0.05:0.05%) PS20:CHAPS 0.008 0.085
1:2 (0.05:0.1%) PS20:SGH 0.027 0.086
僅PS20 0.028 0.10
起始PS20濃度為0.05% (w/v)
資料表明，當與PS20共配製時，CHAPS在保護PS20免於熱降解方面尤其有效。
圖1展示將0.05% (w/v)膽酸鹽界面活性劑或對照界面活性劑(膽酸鹽CHAPS、SGH或STH、聚山梨醇酯20 (PS20)或泊洛沙姆188 (PX188))與含1 mg/mL例示性單株抗PDL1抗體之20 mM組胺酸乙酸鹽及240 mM蔗糖(pH 5.5)混合的結果。溶液在15 mL玻璃小瓶中的體積為5 mL。亦製備具有以上成分但不含界面活性劑之對照溶液。該圖展示在環境溫度下在臂式振盪器(Glas-Col桌上型臂式振盪器)中以每分鐘100轉(rpm)攪拌24小時之後是否形成可見聚集物。 圖2展示將1 mg/mL的例示性單株抗類胰蛋白酶抗體於pH 5.8之200 mM精胺酸丁二酸鹽溶液中混合。溶液在15 mL玻璃小瓶中的體積為5 mL。亦製備具有以上成分但不含界面活性劑之對照溶液。該圖展示在環境溫度下在臂式振盪器中以100 rpm攪拌24小時之後是否形成可見聚集物。 圖3展示膽酸鹽可保護蛋白質溶液中之游離脂肪酸免於沈澱。將含有5 mg/mL抗類胰蛋白酶抗體及200 mM精胺酸丁二酸鹽以及0.02% PS20之pH 5.8的溶液與各種濃度之膽酸鹽界面活性劑混合，且隨後在5℃下外加0.04單位/mL的CALB。若膽酸鹽保護PS20免遭降解至FFA，則可見FFA沈澱粒子不應在蛋白質溶液中形成，或此類粒子一旦形成則應在添加膽酸鹽後再溶解，而若膽酸鹽不提供保護或溶解，則可見FFA沈澱粒子應在與不添加膽酸鹽之蛋白質溶液相同的程度上形成。結果展示添加0.5% SCH、SGH或CHAPS防止溶液中形成可見顆粒，但此類顆粒仍在0.02%至0.1%的各經添加的界面活性劑處形成。
圖4展示基於所添加之CALB脂肪酶誘導之PS20降解培育不同濃度之膽酸鹽界面活性劑之結果的彙總。圖形中之短劃線提供在完全降解後觀察到的PS20濃度，如由「僅脂肪酶」對照溶液所示。

Claims (30)

  1. 一種抗體配方，其包含抗體及在25℃水中具有2.0mM或更大或0.2%(w/v)或更大的臨界微胞濃度(CMC)值之至少一種膽酸鹽界面活性劑，其中該抗體配方係用於藉由皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內、動脈內、病灶內或關節內途徑之注射或輸注，其中該膽酸鹽界面活性劑為兩性離子型、非離子型、陰離子型或選自CHAPS(3-[(3-膽醯胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽)、SGH(甘膽酸鈉水合物)、膽酸鈉水合物(SCH)、去氧牛膽酸鈉水合物(SdTH)、去氧膽酸鈉水合物(SdCH)、鵝去氧膽酸鈉水合物(ScdCH)及BigCHAP(N,N'-雙-(3-D-葡糖醯胺基丙基)膽醯胺)。
  2. 如請求項1之抗體配方，其中該抗體為單株抗體。
  3. 如請求項1之抗體配方，其中該抗體配方包含濃度(w/v)為0.5%或更小之CHAPS。
  4. 如請求項1之抗體配方，其中該抗體配方包含濃度(w/v)為0.5%或更小之BigCHAP。
  5. 如請求項1之抗體配方，其中該抗體配方包含濃度(w/v)為0.5%或更小之SGH或SCH。
  6. 如請求項1之抗體配方，其中該抗體配方包含兩性離子型或非離子型 膽酸鹽界面活性劑且為包含小於50mM之鹽、小於40mM之鹽、小於30mM之鹽或小於25mM之鹽之低離子強度配方。
  7. 如請求項1之抗體配方，其中該抗體配方包含陰離子型膽酸鹽界面活性劑且為包含至少175mM之鹽、至少200mM之鹽、至少225mM之鹽或至少250mM之鹽之高離子強度配方。
  8. 如請求項6或7之抗體配方，其中該鹽為鈉鹽、精胺酸鹽或組胺酸鹽。
  9. 如請求項1至7中任一項之抗體配方，其尚未經過凍乾。
  10. 如請求項1之抗體配方，其為經復原凍乾配方。
  11. 如請求項1之抗體配方，其中該抗體配方不包含任何非膽酸鹽界面活性劑。
  12. 如請求項10或11之抗體配方，其中該抗體配方基本上由至少一種膽酸鹽界面活性劑、至少一種抗體物質、至少一種緩衝液物質及至少一種非界面活性劑穩定劑組成。
  13. 如請求項1至7、10及11中任一項之抗體配方，其中該抗體配方進一步包含至少一種聚山梨醇酯或泊洛沙姆。
  14. 如請求項13之抗體配方，其中該抗體配方進一步包含聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  15. 如請求項14之抗體配方，其中該抗體配方包含0.05%或更少或0.01%或更少之聚山梨醇酯20或80。
  16. 如請求項15之抗體配方，其中該抗體配方不包含除該膽酸鹽界面活性劑及該聚山梨醇酯20或80以外之任何界面活性劑。
  17. 如請求項1至7、10及11中任一項之抗體配方，其中該抗體配方為皮下(SC)或靜脈內(IV)配方。
  18. 如請求項1至7、10及11中任一項之抗體配方，其中該抗體配方非口服或腸溶配方。
  19. 如請求項1之抗體配方，其中該膽酸鹽界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更少的CHAPS組成，且視情況其中該抗體配方進一步包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，且視情況其中：a.該抗體配方為低離子強度，該抗體配方包含小於50mM之鹽、小於40mM之鹽、小於30mM之鹽或小於25mM之鹽；及/或b.該抗體配方在使用之前為未經凍乾之液體配方。
  20. 如請求項19之抗體配方，其中該膽酸鹽界面活性劑基本上由0.01%至0.05%或0.025%至0.05%(w/v)CHAPS組成。
  21. 如請求項1之抗體配方，其中該膽酸鹽界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更小的BigCHAP組成，且視情況其中該抗體配方進一步包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑、或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，且視情況其中：a.該抗體配方為低離子強度，該抗體配方包含小於50mM之鹽、小於40mM之鹽、小於30mM之鹽或小於25mM之鹽；及/或b.該抗體配方在使用之前為未經凍乾之液體配方。
  22. 如請求項21之抗體配方，其中該膽酸鹽界面活性劑基本上由0.01至0.05%或0.025%至0.05%(w/v)BigCHAP組成。
  23. 如請求項1之抗體配方，其中該膽酸鹽界面活性劑基本上由濃度(w/v)為0.5%或更小的SGH或SCH組成，且其中該抗體配方為高離子強度配方，該抗體配方包含至少175mM之鹽、至少200mM之鹽、至少225mM之鹽或至少250mM之鹽，且視情況其中該抗體配方進一步包含以下一或多者：緩衝液、鹽、凍乾保護劑或穩定劑，其包含糖、糖醇、胺基酸或其他蛋白質物質中之一或多者，且視情況其中該抗體配方在使用之前為未經凍乾之液體配方。
  24. 如請求項23之抗體配方，其中該膽酸鹽界面活性劑基本上由0.01至0.05%或0.025%至0.05%(w/v)SGH或SCH組成。
  25. 一種抗體配方，其包含抗體及在25℃水中具有2.0mM或更大或0.2%(w/v)或更大的臨界微胞濃度(CMC)值之至少一種膽酸鹽界面活性劑，其中該抗體配方係用於藉由皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內、動脈內、病灶內或關節內途徑之注射或輸注，其中該抗體配方包含濃度(w/v)為0.5%或更小之牛膽酸鈉水合物(STH)的該膽酸鹽界面活性劑。
  26. 一種製造如請求項1至25中任一項之抗體配方之方法，其包含將該抗體與該至少一種膽酸鹽界面活性劑混合，以形成含膽酸鹽水溶液。
  27. 一種抑制水溶液中所存在抗體之聚集的方法，該方法包含向該水溶液添加至少一種膽酸鹽界面活性劑，以形成含膽酸鹽水溶液，該至少一種膽酸鹽界面活性劑在25℃水中之臨界微胞濃度(CMC)值為約2mM或更大或0.2%(w/v)，其濃度低於其在25℃水中之CMC值。
  28. 如請求項27之方法，其中該抗體為單株抗體。
  29. 如請求項26至28中任一項之方法，其進一步包含將該含膽酸鹽水溶液凍乾。
  30. 如請求項26至28中任一項之方法，其中該方法不包含將該含膽酸鹽水溶液凍乾。
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