DD141261A5

DD141261A5 - Prostaglandin-derivate

Info

Publication number: DD141261A5
Application number: DD79210712A
Authority: DD
Inventors: Satoru Enomoto; Kiro Asano; Humio Tamura; Hiromitsu Tanaka
Original assignee: Kureha Chemical Ind Co Ltd
Priority date: 1978-01-31
Filing date: 1979-01-30
Publication date: 1980-04-23
Also published as: JPS54103858A; HU182517B; SU944502A3; RO77375A; YU42174B; ZA79305B; BE873380A; AT373268B; JPS5850236B2; YU20879A; ATA7979A; BG34611A3; PL127780B1; PL213122A1

Description

210 712

Prostaglandin-Derivate Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von neuen Prostaglandin-Derivaten mit außerordentlich geringen Nebenwirkungen und erheblicher physiologischer Wirksamkeit.

Charakterstik der bekannten technischen Lösungen

Prostaglandine kommen bekanntlich im menschlichen Körper vor. Sie sind wichtige physiologisch wirksame Verbindungen, welche den Blutdruck senken, die Magensaftsekretion inhibieren, die Blutblättchen-Agglutination inhibieren oder fördern und einenbron chiek tat i sehen Effekt aufweisen. Die Prostaglandine werden im folgenden mit den Buchstaben "PG" abgekürzt. PGE und PGF haben bekanntlich spezielle physiologische Wirkungen. Sie führen zu Hysterotrismus und zu Gelbkörperabbau. Sie sind daher brauchbar als Mittel zur Geburtsauslösung sowie zur Schwangerschaftsunterbrechung im anfänglichen oder mittleren Stadium der Schwangerschaft, zur Placenta-Lösung nach der Geburt und zur Behandlung von Menstrual-Störungen [Brit. Med. J. ,M, 618 (1968), Brit. Med. J., ±, 621 (1968), Anu.r. N.Y. Acad. Sei., j[8O,456 (1970)]. Ferner bietet sich die Möglichkeit der Beeinflussung des Geschlechtszyklus bei weiblichen Säugetieren und insbesondere der Herbeiführung einer Schwangerschaftsunterbrechung oder der Empfängnisverhütung.

Die brauchbaren Prostaglandine führen jedoch bei Verabreichung als Medikamente zu Übelkeit, Erbrechen, Diarrhöe sowie zu plötzlichen Änderungen des Blutdrucks, des Pulses und der Atmung. Wegen dieser schwerwiegenden Nebeneffekte ist die Verwendbarkeit der Prostaglandine eingeschränkt. Sie wurden bisher nur für spezielle therapeutische Zwecke verwendet. Es wurden daher erhebliche Anstrengungen unternommen, um neue Prostaglandin-Derivate zu entwickeln, welche erhebliche herabgesetzte Nebenwirkungen zeigen.

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-Z-Ziel der Erfindung

Es ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zur Herstellung von neuen Prostaglandin-Derivaten mit im Vergleich zu Prostaglandinen stark herabgesetzten Nebenwirkungen zu schaffen.

Darlegung des Wesens der Erfindung . .

Die neuen erfindungsgemäßen Prostaglandin-Derivate sind Konjugate von Prostaglandinen und Steroidhormonen mit Hydroxyl-, Acetoxy-, Propionyloxy-, Benzoyloxy- oder Oxo-Gruppen in 3-Position. Das Konjugat Prostaglandin-Steroidhormon kann hergestellt werden durch Umsetzung eines Prostaglandins oder eines acetylierten Prostaglandins mit der Hydroxyl-Gruppe in 17-Position oder in 21-Position eines Steroidhormons, welches in 3-Position eine Hydroxyl-Gruppe, eine Acetoxy-Gruppe, eine Propionyloxy-Gruppe, eine Benzoyloxy-Gruppe oder eine Oxo-Gruppe trägt, und zwar entweder durch direkte Reaktion oder unter Vermittlung durch eine der folgenden Brücken-Verbindungen:

X(CH₂J_nCOOH,

X(CH₂J_nCOX,

HOOC(CH₂)_nCOOH und

XOC(CH₂) CO*,

wobei η für 1 oder 2 und X für Halogen steht, und zwar mit oder ohne Acetylierung.

Die neuen Prostaglandin-Derivate haben die Formel (I) oder (I¹):

10 712

OR OR

In den Formeln*(I) oder (I¹) bedeutet R ein Wasserstoffatom oder eine Acetyl-Gruppe; Z eine der Gruppen -OR oder =0; η 1 oder 2 und m 0, 1 oder 2. In der Formel (I) bedeutet St eine Gruppe der folgenden Formeln (II) bis (IX):

(ID

(IV)

H₃C

-OCHg-C

(III)

HO

OR'

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(VI)

-OCH

(VII)

(VIII)

(IX)

wobei R¹ ein Wasserstoffatom, eine Acetyl-Gruppe, eine Propionyl-Gruppe oder eine Benzoyl-Gruppe bedeutet.

Im folgenden werden die erfindungsgemäßen Prostaglandin-Derivate näher klassifiziert. Die dabei auftretenden wichtigsten Prostaglandin-Reste und Steroid-Reste werden folgendermaßen abgekürzt:

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OH

OCOCH

OCOCH3 Einheit A¹, OCOCH₃ ^]

OH

Einheit A«:

OCOCH3 OCOCH₃ EinheitA'2

OH

J Einheit . A3 OH

OCOCH₃ OCOCH₃

Einheit. _K

210 712

Einheit; B

OH

Einheit B\

OCOCH₃

Einheit B"j

OCOCH₂CH₃

Einheit

210 712 - *

Bevorzugte Verbindungen der Gruppe I

¹J - B₁ A₂- B₁ A₂ - B₁. A₃-B₁ A^-B₁

-Bi A'j-Bi A₂-Bj A₂-BiA₃-B'! A'₃-B'l

A₁- Β'! ' Ai - B'i A₂ - B'l A₂ - b'1 A₃-B^₁ AVE¹¹!

A₁ - B'i* Ai - B'i' A₂-B"i A₂ - Β'Γ A₃-B"¹! A'3-B-

A₁ - B₂ A₁ - B₂ A₂- B₂ A₂ - B₂ A₃-B₂ A'₃-B₂

Bevorzugte Verbindungen der Gruppe II

oo ο ο

|l Il H ι H

Ai-OfCH₂^C-B₁ A₂-O(CH₂ %C-^B1

ο ο ο ο

i f^C

O O O . O

A₁-OfCH₂^₁C-B'i A'₁-O<CH2-)nC-B¹i A₂-OtCH₂^_nC-Bl A₂-OfCH₂I_nC-B₁

ο ο ο ο

' i

ο ο ο ο

Il ι il il , H

^C-B₂ A₁-OfCH₂)HC-B₂ A₂-OfCH₂^C-B₂ A₂-CXCHg)₅C-B₂ O O

A₃-O-fCH₂-)_HC-B^I ₁

A₃-O-(CH₂-)_7rC-B"¹ ₁ A¹S!

ο Ρ

A₃-O-^CH₂-)nC-B₂ A'₃-O-fCH₂JjC-B₂ (n= 1 or 2)

Die Einheit B. kann durch eine der folgenden Einheiten ersetzt sein:

- O

H-C

^H

r\r\ \ /

(IV)

HO

- O

OCH₂ - C

O=CH

(VI)

H₃C

Il

OCH₉-C

⁰ HO-C

(VII)

(VIII)

OCH₂-

(IX)

Dabei steht R¹ für ein Wasserstoffatom oder eine Acetyl-Gruppe, Propionyl-Gruppe oder Benzoyl-Gruppe.

Die Verbindungen der Gruppe II sind besonders wichtig.

Typische Prostaglandin-Derivate der Formel (I) sind östra-1,3,5(10)-trien-3-hydroxy-i7-oxycarbonylmethyl-9a,11a,15atrihydroxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat (PGF₂aE) oder (PGFE), östra-1, 3,5 (10)-trien-S-hydroxy-^-oxycarbonyläthyl-9a,11a,15a-trihydroxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat, östra-1,3,5(10)-trien-3-hydroxy-i7-oxycarbonylmethyl-9a,11a,15atriacetoxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat (PGFE-3AC); Östra-1,3,5(10)-trien-3-hydroxy-17-oxycarbonyläthy1-9a,11a,15a-triacetoxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat;.

Östra-1,3,5(10)-trien-3-acetoxy-i7-oxycarbonylmethyI-9α,11α,15a-triace£oxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat (PGFE-4AC); und Östra-1,3,5(10)-trien-S-acetoxy-^-oxycarbonyläthyl-9a,11a,15a-triacetoxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat.

Die Prostaglandin-Derivate (I) können hergestellt werden unter Verwendung von 9a,11a,15a-Trihydroxy-5(eis)-13(trans)-prostadiensäure (im folgenden als PGF„a bezeichnet) und östradiol als Haupt-Ausgangsmaterialien.

Wenn man diese Prostaglandin-Derivate (I( verabreicht, so treten die charakteristischen Nebenwirkungen von PGF-a nicht auf. Andererseits erzielt man die gewünschten pharmakologischen Effekt in ausgezeichnetem Maße, insbesondere die Stimulierung des Hysterotrimus, der Schwangerschaftsunterbrechung, des Gelbkörperabbaus und der Inhibierung der Nidation. Demgemäß sind die neuen Prostaglandin-Derivate (I) in hervorragendem Maße zur Schwangerschaftsunterbrechung, zur Parturitio-Auslösung, zur Verbesserung der Fruchtbarkeit, zur Östrus-Steuerung, zur Empfängsnisverhütung und zur Menstruations-Beeinflussung geeignet.

Im folgenden sollen die erfindungsgemäßen Verbindungen, die Verfahren zur Herstellung derselben, die pharmakologischen Wirkungen derselben sowie pharmazeutische Mittel mit einem Gehalt derselben, deren Verabreichung und Dosis näher erläutert werden. . . .

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- ίο -

Die Prostaglandin-Derivate (I) können folgendermaßen hergestellt werden. Erfindungsgemäß kann man PGE₁, ^PGEo' ^PGE3^f PGF.. a, PGF₂a und PGF.a als Prostaglandine einsetzen (Kagaku To Seibutsu, Band 15, Nr. 2, Seite 80 bis 88, 1977).

Konjugate von Prostaglandin und Steroidhormon können mit der Prostaglandin-Verbindüng und der Steroidhormon-Verbindung gebildet werden, und zwar durch direkte Umsetzung oder unter Verwendung einer die Bindung vermitteltenden Brückenverbindung. Als Brückenverbindung kann man eine Verbindung der Formel

X(CH₂J_nCOOH

verwenden, wobei η für 1 oder 2 und X für ein Halogenatom steht; z. B. α-Mon'ochloressigsäure, a-Monobromessigsäure und ß-Monobrompropionsäure; sowie eine Verbindung der Formel

X(CH₂)_nCOX

wie a-Monochloracetylchlorid und a-Monobromacetylbromid; sowie eine Verbindung der Formeln

HOOC(CH₂J_nCOOH

oder

XOC(CH₂J_nCOX

wie Malonsäure oder Bernsteinsäure oder deren Säurechloride. Diese Brücken-Verbindungen können nach üblichen chemischen Verfahren umgesetzt werden.

Die Prostaglandin-Derivate (I) können erhalten werden durch Umsetzung eines Steroidhormons, wie östron, östradiol, östriol oder Progesteron oder eines Steroidhormon-Derivats, welches eine Konjugationsgruppe aufweist, mit 9a,11a,15a-Trihydroxy-5(eis)-13(trans)-prostadiensäure oder einem Salz derselben. Die Steroidhormon-Derivate mit einer Brücken-Gruppe können leicht erhalten werden durch Umsetzung eines Steroidhormons, wie östradiol mit der oben erwähnten Brücken-Verbindung. Die Brückenverbindung sollte mit der OH-Gruppe in 17-Position oder in 21-Position des jeweiligen Steroidhormons reagieren. Die Reaktion des Steroidhormons, z. B. des östradiols, mit der Brücken-Verbindung wird vorzugsweise in einem Lösungsmittel, vorzugsweise in einem aprotischen Lösungsmittel, z. B. in wasserfreiem Tetrahydro-

210 712 - ·*-

furan, durchgeführt. Die Reaktionstemperatur ist gewöhnlich nicht sonderlich hoch. Sie liegt in vielen Fällen bei Zimmertemperatur oder darunter. Das Prostaglandin wird gewöhnlich in Form eines Salzes und insbesondere in Form des Silbersalzes eingesetzt. Es ist möglich, das Prostaglandin vor der Umsetzung mit dem Steroidhormon oder mit dessen Derivat zu acetylieren. Die Reaktion eines Metallsalzes eines Prostaglandins mit einem Steroidhormon-Derivat kann durchgeführt werden, indem man diese in einem Lösungsmittel, wie DMSO, im Dunkeln vermischt. Bei der Acetylierung setzt man Essigsäureanhydrid in einem inerten Lösungsmittel, wie Pyridin, zu. Die Reaktionstemperatur kann bei Zimmertemperatur liegen; sie kann jedoch variieren. Das erhaltene Produkt kann durch Säulenchromatographie an Silicagel und unter Elutionierung mit einem organischen Lösungsmittel gereinigt werden.

Im folgenden seien typische Prostaglandine genannt:

210

OH

PGF₁Ct

OH

PGF₂Ct OH

oh

OH

PGE₁

COOH

PGE,

OH

COOH

OH

COOH

210 712

Im folgenden soll die Herstellung von Prostaglandin-Derivaten (I) an ausgewählten Beispielen näher erläutert werden.

(1) PGFE kann in Form einer öligen Substanz erhalten werden durch Umsetzung von BrCH₃COBr mit der OH-Gruppe in 17-Position von östradiol unter Bildung von östra-1»3,5.(10) -trien-3-ol-l 7-bromacetat (erste Reaktionsstufe), welches sodann mit einem Metallsalz (Silbersalz) in der zweiten Reaktionsstufe der Carboxyl-Gruppe von PGF₂Ci in einem Lösungsmittel wie DMSO im Dunkeln umgesetzt wird.

(2) PGFE-4AC wird erhalten als ölige Substanz durch Umsetzung von BrCH₂COBr mit der OH-Gruppe in 17-Position von Östradiol unter Bildung von östra-1,3,5(10)-trien-3-ol-17-bromacetat in erster Reaktionsstufe, gefolgt von der Umsetzung des erhaltenen Produkts mit einem Metallsalz (Silbersalz) der Carboxylgruppe von PGF₂O, in einem Lösungsmittel, wie DMSO im Dunkeln in der zweiten Reaktionsstufe, gefolgt von einer Umsetzung des abgetrennten Reaktionsprodukts der zweiten Reaktionsstufe mit Essigsäureanhydrid in einem Lösungsmittel wie Pyridin.

(3) PGFE-3AC kann erhalten werden als ölige Substanz durch Acetylierung von PGF₃CX mit Essigsäureanhydrid in einem inerten Lösungsmittel, wie Pyridin, und Umwandlung des Säureteils des acetylierten PGF₃CX in ein Metallsalz (Silbersalz) des acetylierten PGF₃CX gefolgt von einer Umsetzung des erhaltenen Metallsalzes des acetylierten PGF₂Ct mit östra-1,3,5(10)-trien-3-ol-l7-bromacetat.

(4) Wenn man östra-1,3,5(10)-trien-3-ol-l7-brompropionat anstelle von östra-1,3,5(10)-trien-3-ol-l7-bromacetat verwendet, so erhält man die entsprechenden Produkte.

(5) Das Konjugat von PGF₃Cx mit östradiol kann ferner erhalten werden durch Bromierung der OH-Gruppe in 17-Position von Östradiol mit PBr₁- in einem inerten Lösungsmittel, wie Tetrahydrofuran, und Umsetzung des e.rhaltenen Produkts mit

einem Metallsalz (Silbersalz) des Prostaglandins in einem inerten Lösungsmittel, wie DMSO.

Andere Derivate können in gleicher Weise erhalten werden.

Die Strukturen der verschiedenen gebildeten Produkte wurden durch das IR-Spektrum, die Elementaranalyse und das NMR-Spektrum bestätigt. -

Im folgenden sollen die Nebenwirkungen der Produkte erläutert werden. Die akuten Toxizitäten (LD₅₀) von PGFE, PGFE-4AC und PGFE-3AC werden durch intravenöse Injektion in einer Dosis von 400 mg/kor ermittelt. Zur Durchführung des Tests werden 10 weibliche Mäuse (ICR-JCL) mit einem Alter von 4 Wochen herangezogen. Alle 10 Mäuse überlebten. Wenn man berücksichtigt, daß der LD^.-Wert von PGF₂a 56 mg/kg beträgt, so erkennt man, daß PGFE, PGFE-4AC und PGFE-3AC äußerst sichere Mittel sind.

Zur Aufnahme der Tachycardie, des Respirogramms und des Elektrocardiogramms von trächtigen Mäusen nach der Verabreichung von PGF-ct, PGFE, PGFE-4AC und PGFE-3AC wird der Biophysiograph 180-4(4ch) von San-ei Sokuki K.K. verwendet. Es werden keine unnormalen Effekte bei der Verarbreichung vpn PGFE, PGFE-4AC oder PGFE-3AC beobachtet. Demgegenüber treten unnormale Zustände deutlich bei Verarbreichung von PGF₂O, auf. Man erkennt somit, daß PGFE, PGFE-4AC und PGFE-3AC äußerst geringe Toxizitäten und äußerst geringe Nebenwirkungen zeigen.

Ferner wurde die Wirksamkeit von PGFE, PGFE-4AC und PGFE-3AC zur Schwangerschaftsunterbrechung untersucht. Hierzu werden trächtige Mäuse vom Stamm ICR-JCL herangezogen und die Testverbindungen wurden in zweckentsprechenden Dosen in zweckentsprechender Weise verabreicht. Es wurde festgestellt, daß PGFE, PGFE-4AC und PGFE-3AC hinsichtlich dieser Wirkung dem PGF₂Ct wesentlich überlegen sind. Im Falle einer kontinuierlichen

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Verabreichung von PGF₂a mit einer Dosis von 15 γ (4,24 χ 1Ο Mol)/Maus während 4 Tagen ist die Schwangerschaftsunterbrechung unvollständig. Befriedigende Ergebnisse werden jedoch im Falle von PGFE, PGFE-4AC oder PGFE-3AC bei der gleichen Dosis oder sogar einer geringeren Dosis festgestellt.

Bei den Hydroxyl-Gruppen in 9-Position, 11-Position und 15-Position des PGF₂O. handelt es sich um aktive Stellen. Gewöhnlich geht man davon aus, daß die Verbindung durch Acetylierung dieser Hydroxylgruppen inaktiv wird. Im Falle von PGFE-4AC und PGFE-3AG sind die Hydroxyl-Gruppen acetyliert und dennoch beobachtet man einen überraschenderweise erhöhten pharmakologischen Effekt.

Die Prostaglandin-Derivate (I) gemäß vorliegender Erfindung können in Mitteln zweckentsprechender Verabreichungsform enthalten sein, und zwar für Injektion, orale Verabreichung, intravaginale Verabreichung oder zur Auftragung. Es können z. B. feste Mittel hergestellt werden, und zwar Tabletten, Pillen, Pulver, Granulate, Kapseln, sowie flüssige Verabreichungsformen, wie Sirup für die orale Verabreichung. Im Falle von festen Mitteln kann man Stärke, Calciumcarbonat und Lactose als Trägerstoff verwenden. Ferner kann man Gleitmittel zusammen mit dem erfindungsgemäßen Wirkstoff verwenden. Im Falle einer flüssigen Verabreichungsform für die orale Verabreichung kann das erfindungsgemäße Produkt mit einem pharmakologisch verträglichen Trägerstoff vermischt werden, z. B. einem Emulgator, einem Suspendiermittel und einem Zusatzstoff für Sirup, Wasser, Alkohol, flüssiges Paraffin, Olivenöl oder dgl., sowie mit einem Süßstoff und einem Geschmacksstoff. Es ist ferner möglich, eine Kapsel unter Verwendung von Gelatine herzustellen. Im Falle fester Verabreichungsformen für die intravaginale Verabreichung kann der erfindungsgemäße Wirkstoff mit einem Wachs einer höheren Fettsäure und eines höheren Alkohols vermischt werden, welches einen geeigneten Schmelzpunkt hat, so daß es in der Vagina schmilzt.

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- Ίο-

Falls erforderlich, kann ein Desintegrator mit geeigneter Viskosität enthalten sein. Im Falle eines injizierbaren Mittels kann der erfindungsgemäße Wirkstoff in Wasser aufgelöst werden. Falls erforderlich, können Zusatzstoffe, wie Äthanol, oberflächenaktive Mittel, Emulgatoren, pH-Regler, Nährstoffe und Salzstabilisatoren beigegeben werden.

Die Konzentration des erfindungsgemäßen Produktes liegt vorzugsweise über 0,0025 Gew.-% im Falle von injizierbaren Mitteln und über 0,1 Gew.-% im Falle von oral verabreichbaren Mitteln.

Die Dosis des erfindungsgemäßen Mittels beträgt 0,1 \ig bis 500 jxg/Tag/Schwangere und vorzugsweise 0,001 bis 50 mg/Tag/ Schwangere. Die jeweils günstigste Dosis kann je nach der Verabreichungsmethode und je nach dem Schwangerschaftszustand gewählt werden.

210 712 - «·-

Ausführungsbeispiele

Beispiel 1

Herstellung von östra-1,3,5(10)-trien-3-hydroxy-17-oxycarbonylmethyl-Sa,11α,15a-trihydroxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat (PGFE) und des Kalium- oder Silbersalzes von 9a,1 la,15a-Trihydroxy-5(eis)-13(trans)-prostadiensäure(PGF₂a)

(a) Herstellung des Kaliumsalzes von

-4 1 ml Wasser wird zu 0,1053 g (2,97 χ 10 Mol) PGF₂a gegeben und das Gemisch wird bei +1 bis -2 C gerührt und 1 ml einer wässrigen Lösung von 0,0205 g KOH wird langsam zu dem Gemisch gegeben. Die Aufschlämmung wird beim Rühren während 1 h zu einer klaren Lösung mit einem pH im Bereich von 7,5 bis 8,5.

(b) Herstellung des Silbersalzes von PGF„a

0,05301 g AgNO₃ werden in einer kleinen Menge Wasser aufgelöst und die Lösung wird zu einer wässrigen Lösung des Kaliumsalzes von PGF«a gegeben, und zwar im Dunkeln. Die Lösung wird während etwa 15 min gerührt, wobei das weiße Silbersalz von PGF„a ausfällt. Nach dem Abfiltrieren des weißen Niederschlages wird dieser mit Wasser gewaschen und schließlich mit Äther gewaschen. Man erhält 0,1085 g eines weißen Silbersalzes welches bei Zimmertemperatur unter vermindertem Druck getrocknet wird (Ausbeute 79,14 %).

Herstellung von östra-1, 3 , 5 (10)-trien-Sß-ol-Hß-bromacetat

10 g östradiol werden in 400 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran (THF) aufgelöst und mit 8,8 g wasserfreiem Pyridin versetzt. Eine Lösung von 22,5 g a-Bromacetylbromid in 74 g Tetrachlorkohlenstoff wird tropfenweise zu einer Lösung von östradiol

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bei -5 bis -7 °C gegeben. Das Gemisch wird über Nacht stehengelassen, wobei die Umsetzung zu Ende geführt wird. Nach der Reaktion wird der Niederschlag abfiltriert und das Lösungsmittel wird vom Filtrat abdestilliert. Der Rückstand wird in Äther aufgelöst und umkristallisiert. Man erhält östra-1,3,5(I0)-trien-3,17ß-dibromacetat. Sodann werden 2 g des Produkts "in 900 ml Methanol aufgelöst und auf -5 ⁰C abgekühlt und mit 20 ml einer wässrigen Lösung von 0,2 g K₃CO₃ tropfenweise versetzt. Nach 30 min gibt man 1000 ml Wasser zu der Lösung und der gebildete Niederschlag wird abgetrennt und getrocknet. Die Elementaranalyse und das IR-Spektrum bestätigen, daß es sich bei dem Produkt um östra-1,3,5(10)-trien-3ß-ol-17ß-bromacetat handelt.

Reaktion des Silbersalzes von PGF ₂ O. mit östra-1,3,5 (10) -trien-3 ß-ol-17 ß-bromacetat;

-4 0,1085 g (2,35 χ 10 Mol) des Silbersalzes von PGF₂Ci werden in 2 ml Dimethylsulfoxid (DMSO) im Dunkeln aufgelöst und dann gibt man 0,1000 g östra-1,3,5(10)-3ß-ol-17ß-Bromacetat hinzu und das Gemisch wird während 2 Tagen bei Zimmertemperatur gerührt. Das ausgefällte Silberbromid wird entfernt und die verbleibende Lösung wird im abgekühlten Zustand zu einer Emulsion wenn man 20 ml Wasser zugibt. Man erhä-lt ein blaßgelbes öliges Produkt aus dieser Emulsion durch Zentrifugenabtrennung. Das Reaktionsprodukt wird an 42 g Silicagel chromatographiert, wobei man ein Lösungsmittelgemisch von Cyclohexan, Äthylacetat und Äthanol im Volumen-Verhältnis 45 : 45 : 1.0 verwendet. Man erhält dabei die gereinigte Substanz in einer Ausbeute von 68,95 %. Bei dem Produkt handelt es sich um ein Konjugat von PGF₂O, und östradiol gemäß folgender Formel .

210 712 - *

OH

OHV /—ι

,*\ ^^^^ r> — η— r. — C —-O (

pGF₂aE

OH

Konjugat von PGF _{α un}d Östradiol.

Elementar-Analyse: .

C H

berechnet (%}: 72,07 8,71

gefunden (%): 71,60 8,00

IR-Spektrum: (cm )

3400, 2920, 2850, 1735, 1610, 1580, 1495, 1440, 1378, 1350, 1280, 1215, 1140, 1075, 1040, 1020, 1000, 960, 920, 915, 865, 810 780, 720

Beispiel 2

Herstellung des Konjugatsvon PGF^g und östradiol:

1 g östradiol werden in 65 ml Tetrahydrofuran enthaltend 5 g CaCO₃ aufgelöst und 5,0 g PBr₅ werden im Verlauf von 30 min unter Rühren bei -4°C hinzugegeben und das Gemisch wird noch während 30 min -4°C gerührt und dann noch während 20 min bei 0 °C und während 3,5h bei 20 ⁰C. Das Reaktionsgemisch wird in eine wässrige Lösung von NaHCO., gegeben (bei 0 °C) Das Produkt wird mit Äther extrahiert und mit Aceton gereinigt, Man erhält 0,7 g des gereinigten Produkts. Dieses gereinigte Produkt (Bromid) wird mit PGF₂<x-Ag gemäß Beispiel 1 umgesetzt. Man .erhält dabei das folgende Konjugat.

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-w-

OH

PGF₂αΕ

(direkte Bindung)

IR-Spektrum: (cm ) .

3400, 2920, 2850, 1735, 1600, 1570, 1500, 1440, 1378, 1350, 1280, 1215, 1140, 1080, 1040, 1020, 1000, 955, 918, 910, 870, 810, 780, 712

Die physiologische Wirksamkeit dieses Konjugats wurde nach dem Verfahren des Beispiels 1 gemessen. Es wird festgestellt, daß das Konjugat mit dem gebundenen östrogenrezeptor Histerotrimus hervorruft.

Beispiel 3

Konjugat von PGE,, und Progesteron;

3,3 g 11-Desoxycorticosteron (Progesteron-Derivat) wurden in einem gemischten Lösungsmittel von 200 ml wasserfreiem THF und 10 ml wasserfreiem Pyridin aufgelöst und die Lösung wurde bei -5 bis -7 C stehengelassen. Eine Lösung von 0,3 g a-Bromacetylbromid in 80 g CCl₄ wurde tropfenweise zu der Lösung von 11-Desoxycorticosteron gegeben. Das Gemisch wurde über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Nach der Umsetzung wird der Niederschlag abfiltriert und das Lösungsmittel wird vom Filtrat abdestilliert und der Rückstand wird aus Äther umkristallisiert. Im IR-Spektrum wird die Absorptionsbande der OH-Gruppe in 21-Position nicht festgestellt. Es wird je-

— 1 doch die Absorptionsbande der Esterbindung bei 1735 cm

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festgestellt. Anhand des IR-Spektrums und der Elementar-Analyse wird ermittelt, daß die a-Bromacetyl-Gruppe mit der OH-Gruppe in 21-Position des 11-Desoxycorticosterons reagiert hat.

Die erhaltene Verbindung wird mit PGE₃-Ag umgesetzt, welches gemäß Beispiel 1 erhalten wurde. Dabei erhält man das Konjugat von PGE₂ und Progesteron (PGE₂P). Das UV-Absorptionsspektrum zeigt die charakteristischen Absorptionsbanden der konjugierten Carbonyl-Gruppe bei 241 nm. Die physiologische Wirksamkeit wurde gemäß .dem Verfahren des Beispiels 1 gemessen, wobei das erhaltene Konjugat eingesetzt wird. Es wird festgestellt, daß das Konjugat mit dem östrogenrezeptor verbunden ist und Hysterotrimus hervorruft.

OH

PGE₂P

Beispiel 4

Herstellung von östra-1,3,5(10)-trien-3-acetoxy-i7-oxycarbonylmethyl-9a,11a,15a-triacetoxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat

Das Kaliumsalz und Silbersalz von PGF₂O. und östra-1,3,5(10) trien-3-ol-17-bromacetat wird nach dem Verfahren des Beispiels 1 hergestellt und die Umsetzung des Silbersalzes von PGF₂O. mit östra-1,3,5(10)-trien-3-ol-l7-bromacetat wird nach dem Verfahren des Beispiels 1 durchgeführt.

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Acetylierung des Konjugats von PGFqCi und östradiol;

In einen 10 ml-Kolben konischer Gestalt gibt man 0,0290 g des Konjugats von PGF₂(X und östradiol (PGFE). Danach gibt man zur Auflösung 0,5 ml wasserfreies Pyridin hinzu. Sodann werden 0,15 ml Essigsäureanhydrid zugesetzt und das Gemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Nach der Reaktion wird das Lösungsmittel bei 45 ⁰C unter vermindertem Druck entfernt, wobei man 0,0351 g des acetylierten Konjugats von PGF₂O. und östradiol (PGFE-4AC) als öliges Produkt erhält.

Die Elementar-Analyse. und das IR-Spektrum bestätigen, daß dieses Produkt die folgende Struktur hat:

OCOCH₃ *

OCOCH₃

O O

C-O-CH₂-C-O

H₃C

PGFE-4AC

OCOCH₃

Elementar-Analyse:

berechnet (%) : gefunden (%):

-1

C H 69,06 7,91 68,8 8,0

IR-Spektrum: (cm )

2920, 2850, 1735, 1610, 1593, 1580, 1490. 1430, 1375, 1230, 1150, 1010, 960, 890, 865, 820, 793, 780, 750, 705, 676.

Beispiel 5

Herstellung von Östra-1,3,5(10)-trien-S-hydroxy-^-oxycarbonylmethyl-9a,11a,15a-triacetoxy-5(eis)-13(trans)-prostadienoat

In 1,0 ml wasserfreiem Pyridin werden 0,1008 g PGF₉Ci aufge-

210 712 -«

löst und dann gibt man 0,3 ml Essigsäureanhydrid hinzu und das Gemisch wird über Nacht stehengelassen. Nach der Umsetzung wird das Pyridin und das Essigsäureanhydrid bei 40 C unter vermindertem Druck entfernt und, der Rückstand wird mit Wasser gewaschen und das ölige Produkt wird abgetrennt. Sodann gibt man 2 ml Wasser und 3 ml Äthanol hinzu. Danach werden 0,0186 g Kaliumhydroxid_ hinzugesetzt und unter Kühlung mit Wasser während 1 h umgesetzt. Eine Lösung von 0,0515 g AgNO₃ . in 2 ml Wasser wird zu dem Reaktionsgemisch gegeben und mit diesem während 1 h umgesetzt, und zwar im Dunkeln. Man erhält 0,1140 g des Silbersalzes des acetylierten PGF₂Ci.

In 2 ml DMSO werden»0,11 g des Silbersalzes des acetylierten PGF₂Ct aufgelöst und dann gibt man 0,10 g östra-1,3,5 (10)-3-ol-17-bromacetat hinzu, worauf die Umsetzung während 48 h im Dunkeln stattfindet. Nach der Reaktion wird das AgBr über ein G-4-Filter abfiltriert. Das Filtrat wird mit 20 ml kaltem Wasser vermischt und das erhaltene ölige Produkt wird mit einer Zentrifuge abgetrennt. Das Produkt wird an 42 g Silieagel chromatographiert, wobei man ein gemischtes Lösungsmittel von Cyclohexan, Äthylacetat und Äthanol im Volumenverhältnis 45:45:10 verwendet. Man erhält ein gereinigtes öliges Produkt. Die Elementaranalyse und das IR-Spektrum bestätigen, daß dieses Produkt die folgende Strukturformel hat:

OCOCH₃

Q-CH₂-C

OCOCH₃

PGFE-3AC

OH

Elementar-Analyse:

berechnet (%) gefunden (%)

C	70	H	08
69,	90	8,	0
68,	8,

210 712

-M-

IR-Spektrum:(cm )

3400, 2920, 2850, 1735, 1610, 1580, 1500, 1440, 1370, ' 1230, 1145, 1080, 1020, 960, 915, 865, 812, 790, 780, 725

Beispiel 6

-4 0,1 g (2,17 χ 10 Mol) PGF₀CX-Ag-SaIz werden in 1 ml wasser-

-4 freiem DMSO aufgelöst und 0,13 g (2,60 χ 10 Mol) 3-Benzoyloxy-1,3,5(10)-trien-17-3-monobromacetat werden im Dunkeln hinzugeben und bei Zimmertemperatur umgesetzt. Nach der Umsetzung wird das AgBr abgetrennt und das Filtrat wird abgekühlt und mit Wasser vermischt und das Produkt wird als öliges Material mit Hilfe einer Zentrifuge abgetrennt. Dieses ölige Produkt wird im Vakuum getrocknet, wobei ein Exciccator verwendet wird. Dann wird das Produkt in einem gemischten Lösungsmittel von Äthylacetat, Cyclohexan und in Äthanol in einem Volumenverhältnis von 45:45:10 aufgelöst und die Lösung wird an einer Siligagelsäule gereinigt. Man erhält 0,12 g PGFE-BA mit einer Ausbeute von 71,8%.

OH

-Q-CH₂-C

OH

PGFE-BA

^C47^H62°9 Molekulargewicht 770

Elementar-Analyse:

berechnet (%) gefunden (%)

1

C	,25	H	05
73	,01	8,	98
73	7,

IR-Spektrum: (cm )3400, 2920, 2840, 1735, 1600, 1580, 1490, 1450, 1418,

1380, 1350, 1260, 1208, 1170, 1145, 1078, 1060, 1020, 1000, 960, 910, 890, 874. 812, 796, 780, 698, 680,

210 712 -»

Beispiel 7

21,0 mg (2,73 χ 10~ Mol) PGFE-BA werden in 0,5 ml wasserfreiem Pyridin aufgelöst und 0,15 ml Essigsäureanhydrid werden hinzugegeben und das Gemisch wird mit Eis abgekühlt und umgesetzt und das Reaktionsgemisch wird über Nacht stehengelassen. Nach der Umsetzung wird das Lösungsmittel im Vakuum bei 40 C abdestilliert und der Rückstand wird mit Äthylacetat und Cyclohexan (Volumenverhältnis 50:30) versetzt und die Lösung wird an Silicagel gereinigt, wobei man 23,5 mg PGFE-3AC-BA in einer Ausbeute von 96,31 % erhält.

OCOCH₃

; 0OCCH₃

OCOCH₃

0-CH₉-C-O H₃C

PGFE-3AC-BA

OCQ

Elementar-Analyse:

berechnet (%) gefunden (%)

-1

C	O	H	59
71,	2	7,	62
71,	7,

IR-Spektrum: (cm )

2920, 2850, 1735, 1600, 1580, 1490, 1450, 1425, 1370, 1240, 1170, 1145, 1078, 1060, 965, 915, 890, 705, 680

Beispiel 8

-4 0,1 g (2,17 χ 10 Mol) PGF₉O,-Ag-SaIz werden in 1 ml wasser-

-4 freiem DMSO aufgelöst und 0,114 g (2,6 χ 10 Mol) 3-Propionyloxy-1,3,5(10)-trien-17-ß-monoacetat werden im Dunkeln hinzugegeben, wobei die Umsetzung während 3 Tagen bei Zimmertemperatur stattfindet. Nach der Reaktion wird das AgBr abgetrennt und das Filtrat wird mit Wasser vermischt un3 das Produkt wird

210 712 -«*-

als öliges Material bei Zimmertemperatur durch Zentrifugentrennung abgetrennt. Das ölige Produkt wird in einem gemischten Lösungsmittel von Äthylacetat, Cyclohexan und Äthanol (Volumenverhältnis 45. : 45 : 10) aufgelöst und die Lösung wird an einer Silicagelsäule gereinigt, wobei man 0,12 g eines öligen Produkts erhält. Dabei handelt es sich um das angestrebte Produkt, nämlich PGFE-PR, was durch Elementar-Analyse und IR-Spektrum bestätigt wird.

OH

9 /

C-O-CH₂-C-O-C

PGFE-PR

OCOC₂H₅

Molekulargewicht 722 Elementar-Analyse

berechnet (%) gefunden (%)

71,47

71,30

8,59

8,55

IR-Spektrum: (cm" )

3400, 2920, 2840/1735, 1600, 1590/ 1580, 1490, 1430, 1373, 1230, 1150, 1010, 960, 890, 820, 793, 780, 750

Beispiel 9

0,145 g (2,60 χ 10~ Mol) 1l-Desoxycorticosteron-21-brom-

-4 acetat und 0,1 g (2,17 χ 10 Mol) PGF₂Oc-Ag-SaIζ werden in 1 ml wasserfreiem DMSO im Dunkeln während 3 Tagen umgesetzt, wobei man 1,3 g eines öligen Produkts erhält. Die Elementar-Analyse und das IR-Spektrum, bestätigen, daß es sich dabei um PGF-P handelt.

OH

210 712 -

OH

ο ο

C-O-CH₉-C-O-CH₂-C

PGFP

^C43^H64°9 Molekulargewicht 724

Elementar-Analyse:

8,84

8,62

berechnet (%) . 71,27 gefunden (%) 71,50

IR-Spektrum:(cm )

3420, 2950, 2920, 2850, 1750, 1725, 1665, 1612, 1450, 1420, 1385, 1320, 1270, 1230, 1190, 1145, 1080, 1050, 965, 940, 910, 860, 780, 760, 720, 680

Man arbeitet nach dem Verfahren des Beispiels 7, wobei man PGF-P als Ausgangsmaterial einsetzt. Dabei findet eine partielle Acetylierung statt. Man erhält ein öliges Produkt. Dabei handelt es sich um PGF-P-3AC, was durch Elementar-Analyse und IR-Spektrum bestätigt wird.

OCOCH₃

V 9 °

C-O-CH₂-C-O-CH₂-C ^{2 2} H₃C

OCOCH₃

PGF P-3AC

210 712

C	,77	H	77
68	,00	8,	52
69	8,

Elementar-Analyse:

berechnet* (%) gefunden (%)

IR-Spektrum: (cm )

3000, 2950, 2920, 1750, 1735, 1705, 1610, 1580, 1430, 1405, 1385, 1368, 1320, 1270, 1230, 1190, 1145, 1080, 1050, 965, 940, 910, 860, 780, 760, 720, 680

Beispiel 10

♦ _4

0,1 g (2,17 χ 10 Mol) PGE₃Ag-SaIz werden in 1 ml wasserfreiem DMSO aufgelöst und dann gibt man 0,13 g 3-Benzoyloxy-1,3,5(10)-trien-17-ß-monobromacetat im Dunkeln hinzu und der Ansatz wird~während 3 Tagen bei Zimmertemperatur umgesetzt. Nach der Reaktion wird das Produkt gereinigt und man erhält 0,12 g eines farblosen öligen Produkts. Die Elementar-Analyse und das IR-Spektrum bestätigen, daß es sich dabei um PGE₂E-BA handelt.

C-O-CH₀— C-O

OH

PGE₂E-BA

OCO

^C47^H61°9 Molekulargewicht 768 Elementar-Analyse: berechnet (% ) gefunden (%)

C	43	H	81
73,	12	7,	89
73,	7,

210 712

IR-Spektrum: (cm )

3420, 3000, 2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1585, 1490, 1450, 1418, 1380, 1368, 1350, 1235, 1145, 1090, 1018, 965, 890, 780, 720, 700, 680

Nach dem Verfahren des Beispiels 7 wird eine partielle Acetylierung herbeigeführt, wobei man PGE₂E-BA als Ausgangsmaterial einsetzt. Es wird bei Zimmertemperatur gearbeitet. Man erhält ein öliges Produkt. Das IR-Spektrum und die Elementar-Analyse bestätigen, daß es sich dabei um PGE₂E-2AC-BA handelt.

C-O-CH₂-C-O

OCOCH,

OCOCH₃

PGE₂E-2AC-BA

OCO

C	,83	H	51
71	,03	7,	59
72	7,

^C51^H64°11 Molekulargewicht 852 Elementar-Analyse: berechnet (%) gefunden (%)

IR-Spektrum: (cm*" )

2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1583, 1490, 1448, 1415, 1381, 1368, 1350, 1235, 1143, 1090, 1020, 970, 890, 780, 720, 698, 680

210 712

Beispiel 11

0,1 g PGE₁Ag-SaIz werden in 1 ml wasserfreiem DMSO aufgelöst und dann gibt man 0,13 g 3-Benzoyl-oxy-l,3,5(10)-trien-17-ßmonobromacetat im Dunkeln hinzu und die Umsetzung wird bei Zimmertemperatur während 3 Tagen durchgeführt. Nach der Reaktion wird das Produkt gereinigt und man erhält 0,12 g eines farblosen Produkts. Dabei handelt es sich um PGE.. E-BA, was durch Elementar-Analyse und IR-Spektrum bestätigt wird.

Il

C-O-CHj-C-O

O-CO

PGEjE-BA

C	24	H	05
73,	12	8,	89
73,	7,

^C47^H62°9 Molekulargewicht 770 Elementar-Analyse: berechnet (%) gefunden (%)

IR-Spektrum: (cm )

3420, 3000, 2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1585,

1490, 1450, 1418, 1380, 1368, 1350, 1235, 1145,

1090, 1018, 965, 890, 780, 720, 700, 680

Man arbeitet nach dem Verfahren des Beispiels 7, wobei man PGE₁E-BA als Ausgangsmaterial einsetzt. Die Umsetzung wird bei Zimmertempratur durchgeführt. Es tritt partielle Acetylierung ein, wobei man ein öli, ges Produkt erhält. Die Elementar-Analyse und das IR-Spektrum bestätigen, daß es sich dabei um PGE₁E-2AC-BA handelt.

210 712

C-O-CH₂-C-O

Il

OCOCH₃

H₃C

PGE j E- 2AC -BA

o-co

C	,66	H	73
71	,03	7,	59
72	7,

^C51^H66°11 Molekulargewicht 854 Elementar-Analyse: berechnet (%) gefunden (%)

IR-Spektrum: (cm" )

2950, 2920, 2850, 1735, 1705, 1583, 1490,

1448, 1415, 1381, 1368, 1350, 1235, 1143,

1090, 1020, 970, 890, 780, 720, 698, 680

Messung der physiologischen Wirkungen von PGFE;

Die Bindungsfunktion von Östradiol und PGFE an den Uterus von Kaninchen wird gemessen und zwar durch ein konkurrierendes Rezeptor-Assay. Östradiol wird mit Tritium ( H) markiert. Dieses Östradiol wird mit Kaninchen-Uterus inkubiert, um Bindung herbeizuführen. Sodann gibt man östradiol oder PGFE zu dem System. Um die Menge des freien H-östradiols festzustellen, welches durch Zusatz von östradiol oder PGFE ersetzt wird. Die Ergebnisse sind in Fig. 1 zusammengestellt. Man erkennt aus Fig. 1, daß PGFE die gleiche Bindungsfunktion in Bezug auf den Östrogen-Rezeptor aufweist, wie das östradiol selbst.

Das gleiche Verfahren wird auf Oxytocin angewandt. Es wird

2.1 O 712

untersucht, ob die Mittel Hysterotrimus hervorrufen. 5 γ PGF₀Cc oder 5 bis 50 γ PGFE ergeben bei der intravenösen Verabreichung an Ratten Hysterotrimus. Im ersteren Fall kommt es zu einem Herzstillstand,während in letzterem Falle die Herztätigkeit normal ist, und zwar selbs't bei Verabreichung von 50 γ des Konjugats. Es werden keine Nebenwirkungen beobachtet. Im Falle von PGFE beginnt der Hysterotrimus im Vergleich zu PGF_a verzögert. Diese" Tatsache zeigt, daß das selektiv im Uterus absorbierte PGFE zu freiem PGF₂Ct hydrolysiert wird.

Ferner wurde die Schwangerschaftsunterbrechung bei trächtigen Mäusen vom Stamm IGR-JCL untersucht, und zwar bei kontinuierlicher Verabreichung des Mittels während 4 Tagen. Die Nebenwirkungen wurden ebenfalls untersucht. Es wird eine 50%-ige Äthanol-Salz-Lösung, enthaltend PGFE verabreicht, und zwar in einer Dosis von 10 γ und 30 γ/Maus oder enthaltend PGF₂(X in einer Dosis von 15 γ/Maus, und zwar jeweils in einer Menge von 0,2 ml durch intravenöse. Injektion, und zwar einmal täglich während 4 Tagen. Einer Vergleichsgruppe wird lediglich Äthanol-Salζ-Lösung verabreicht. Die Mäuse werden gehalten bis bei der Vergleichsgruppe die Geburtsvorgänge eintreten. Das Ausbleiben der Geburtsvorgänge bei der mit dem Mittel behandelten Gruppe bestätigt die Wirksamkeit des erfindungsgemäßen Mittels zur Schwangerschaftsunterbrechung. Es wurden im einzelnen die folgenden Ergebnisse beobachtet.

Tabelle 1

Probe ' Dosis (γ/Maus) Parturitio Schwanger-

(5 Mäuse in schaftsjeder Gruppe) unterbrechung

	0	5	0
Vergleich 50 % Äthanol-Salz lösung .	15 .	5	0
Vergleich PGF-a-Lösung	10 30	0 0	100 100
Erfindung PGFE-Lösung

210 712 > -

Effinzienz Zahl d. Mäuse - Zahl der Geburten

der Schwanger- _ . ___ ..

schaftsunterbre-" .

chung Zahl der schwangeren Mäuse

Nebenwirkungen von PGFE-3AC und PGFE-4AC

Die akute Toxizität (LD₅ ) wurde ermittelt. Ferner wurde die abnormale Tachycardie, das Respirogramm und das Elektrocardiogramm mit Hilfe eines Biophysiographen ermittelt. Zur Messung der LD₁. verwendet man weibliche Mäuse vom STamm 1OICR-JCL mit einem Alter von 4 Wochen als eine.Gruppe. 0,2 ml einer 50 % Äthanol-Salz-Lösung, enthaltend den erfindungsgemäßen Wirkstoff, werden den Mäusen intravenös verabreicht, und zwar in mehreren Dosen während 7 Tagen. Man ermittelt auf diese Weise den LD₅ -Wert mit Hilfe der graphischen Methode von Litchfield-Wilcoxon. Es wird festgestellt, daß alle Mäuse überleben. Ferner werden keine Abnormalitäten beobachtet, und zwar selbst bei Verabreichung von 400 mg/kg PGFE-3AC oder PGFE-4AC. Dies ist etwa das 7-fache der LD₅₀ von PGF₂a (56 mg/ kg). Somit ist der LD₅ des erfindungsgemäßen Wirkstoffs äußerst hoch und in der Tat zu hoch, um direkt gemessen werden zu können. Dieses Tatsache zeigt, daß PGFE-3AC und PGFE-4AC eine äußerst geringe Toxizität haben.

Das Elektrocardiogramm wird mit Hilfe eines Biophysiographen (180-4(4ch) von San-ei Sokuki K.K.) aufgenommen, und zwar bei trächtigen Mäusen vom Stamm ICR-JCL (6. Tag), und zwar 3 min nach Verabreichung der jeweiligen Probe. Bei dem Test werden 0,2 ml einer 50%-igen Äthanol-Salz-Lösung des Wirkstoffs verabreicht, und zwar durch intravenöse Injektion in einer Dosis von 30 γ pro Maus. Zum Vergleich verwendet man PGF₃O. in einer Dosis von 15 γ pro Maus. Die Ergebnisse sind in den Figuren 2 bis 5 dargestellt. Auf der Ordinate ist die Spannung in m aufgetragen und auf der Abszisse ist die Zeit (-s) aufgetragen. Die Papiergeschwindigkeit beträgt 250 mm/s. Fig. 2 zeigt die Tachycardie, das Respirogramm und das Elektrocardiogramm im Falle der intravenösen Verab-

210 712 - *-

reichung von O,2 ml einer Lösung von PGFE-3AC in 50 % Äthanol-Salz-Lösung in einer Dosis von 30 γ/Maus. Man erkennt, daß die Tachycardie, das Respirogramra und das Elektrocardiogramm nach der Ver-abreichung von PGF₂O. (Fig. 3) sich erheblich vom Fall des Vergleichsversuchs (Fig. 2) unterscheiden. Bei Verabreichung von PGFE-3AC oder PGFE-4AC (Fig. 4 und 5) sind jedoch die Tachycardie, das Respirogramm und das Elektrocardiogramm im wesentlichen dem des Blindversuchs gleich. Demgemäß eignen sich PGFE-3AC und PGFE-4AC hervorragend als Medikamente, da sie nicht zu unnormalen Symptomen führen. Auch die anderen Prostaglandin-Derivate der vorliegenden Erfindung zeigen derartige Wirkungen.

Prüfung der Schwangerschaftsunterbrechung mit Hilfe von PGFE-3AC und PGFE-4AC

Zu diesem Versuch werden Mäuse des Stammes ICR-JCL herangezogen, und zwar im 6. Tag der Schwangerschaft (5 Mäuse pro Gruppe). Die Testverbindung wird kontinuierlich verabreicht. Die Effizienz der Schwangerschaftsunterbrechung aufgrund der erfindungsgemäßen Wirkstoffe und des zum Vergleich herangezogenen PGF₂O, wird ermittelt. Es werden jeweils 0,2 ml einer 5% Äthanol-Salz-Lösung, enthaltend PGFE-3AC, PGFE-4AC und PGF₂O. verabreicht, und zwar einmal pro Tag während 4 Tagen durch intravenöse Injektion und durch subkutane Injektion in der gleichen Dosis. Eine Vergleichs-Gruppe wird lediglich mit einer Salzlösung behandelt. Beide Gruppen werden beobachtet, bis bei der Vergleichs-Gruppe Parturitio eintritt. Hierdurch wird festgestellt, daß bei der Gruppe der behandelten Mäuse Schwangerschaftsunterbrechung erfolgte. Die Ergebnisse sind in den folgenden Tabellen zusammengestellt. Man erkennt aus den Testergebnissen, daß PGFE-4AC und PGFE-3AC hervorragend zur Schwangerschaftsunterbrechung geeignet sind, und zwar wesentlich besser als die bekannte Verbindung

210 712

Tabelle 2 Schwangerschaftsunterbrechung durch subkutane Injektion

	Dosis	(γ/Maus)	Parturitio (5 Mäuse/ Gruppe)	Effizienz d. Schwangersch.- unterbrechung(
Probe	Äthanol-	0	5	0
Blindprobe (5 % Salz-Lösung)		15 30	5 4	0 20
Vergleich PGF -Ct Il

Erfindung PGFE-4AC

PGFE-3AC

15 30 15

100 100 100

Tabelle 3 Schwangerschaftsunterbrechung durch intravenöse Injektion

Probe

Dosis (γ/Maus) Parturitio Effizienz d.

(5 Mäuse/ Schwangersch.-Gruppe) unterbrechung(%)

Blindprobe {5 % Äthanol-Sa Iz -Lösung)

Vergleich PGF„a	2,5	5	0
Il	5,0	5	0
M	15,0	4	20
Erfindung PGFE-4AC	2,5	3	40
1	5,0	0	100
PGFE-3AC	1,0	4	20
Il	2,5	2	60
Il	5,0	0	100

Ferner wird die Wirksamkeit anderer Prostaglandin-Derivate gemäß vorliegender Erfindung zur Schwangerschaftsunterbrechung untersucht. Diese erfindungsgemäßen Wirkstoffe werden mit verschiedenen Konzentrationen in Olivenöl aufgelöst, um die effektive Dosis zur Herbeiführung der Schwangerschaftsunterbrechung (100 % Effizienz) zu ermitteln. 0,2 ml der

210 712

Lösung werden subkutan an trächtige Mäuse (ICR-JCL) verabreicht (5 Mäuse pro Gruppe). Nach einer einzigen subkutanen Injektion von 0,2 ml einer Lösung des Wirkstoffs am 4. Tag der Schwangerschaft werden die Mäuse fortlaufend beobachtet, und zwar im Vergleich zu einer Vergleichs-Gruppe, bei der lediglich das öl verabreicht wurde,.bis bei der Vergleichs-Gruppe Parturitio eintritt. Hierdurch wird bestätigt, daß die Mittel im Sinne einer Schwangerschaftsunterbrechung wirken.

Beispiel 12 Tabelle 4 Schwangerschaftsunterbrechung durch einmalige subkutane

Injektion

Probe

Dosis Mol/Maus

Parturitio Schwangersch. Unterbr.(%)

Blindprobe	- Oliven . '.. · öl	- o	5	0
Vergleich	PGE₉	8.5xlO~⁸mol	5	0
	PGF ₂c/.	8.5xlO"⁸mol	1	0
Erfindung	PGFE-BA	5.6xlO~⁸mol	0	80
	PGFE-3AC- BA	5.6xlO-8mol	1	100
	PGFE-Pr	5.6xl0~⁸mol	1	80
	PGFP	8.5xlO"⁸mol	0	80
	PGF P-3AC	8. 5x10"⁸mol	1	.100
	PGE₂E-BA	5.6xlO~⁸mol	0	80
	PGE₂E-2AC -BA	5.6xlO"⁸mol	1	100
	PGE₁E-BA	5.6xlO"⁸mol	0	80
PGEjE-2AC -BA .	5.6xlO~⁸mol	100

210 712 - »-

Im folgenden seien die Zusammensetzungen einiger Mittel mit dem erfindungsgemäßen Wirkstoff angegeben:

Mittel 1

PGFE-4AC 0,05 Gew.-Teile

nicht-ionisches oberflächenaktives Mittel 2,0 "

Äthanol 30

physiologische Kochsalzlösung 95

Die Komponenten Verden vermischt und durch Erhitzen sterilisiert, wobei eine Injektionsflüssigkeit erhalten wird.

Mittel 2	PGFE-3AC	0,5	35	Gew.-Teile
	Mannit	5	Il
	Carboxymethylcellulose	5	Il
	Magnesiumstearat	25 ;	Il
	Sorbit	30	Il
	Talkum		Il

Die Komponenten werden vermischt und pulverisiert und zu Tabletten mit einem Durchmesser von 10 mm gepreßt.

Mittel 3

PGFE-3AC 0,02 g

Natriumphosphat 6 g

Benzylalkohol 0,9 ml

Wasser 100 ml.

Die Komponenten werden vermischt und sterilisiert, wobei eine Injektionsflüssigkeit erhalten wird.

210

OH

OH OH

PGF₂αΕ

OH

PGF₉ αΕ (direct binding)

OH OH

OCOCH₃ OCOCH₃

OCOCH₃

KJ

O Il

O	O
H	Il
C-O-CH₂-	-C-O

PGE₂P

PGFE-4AC

OCOCHo

OH

O Il

Il

C-O-CH₂-C-O-CH₀-C

OH

OCOCHg

♦Ο

Il Il

C-O-CH₂-C-O-CH

OCOCHg

OCOCH₃

PGFP

PGF P-3AC

C-O-CH_n-C-O

OH

PGE₂E-BA

OCO

Il

-CH₂-C-O

OCOCH^

OCOCH₃

PGE₂E-2AC-BA

OCO

/Λ

210 7ΛΖ

O C-O-CHg-C-O

OH

PGEjE-BA

O-CO

C-O-CH₂-C-O

PGE₁E-2AC-BA

OCOCH

(XI) OR'

10'712

(VIII)

(IX)

OH

OH OH

unit A

OH

unit Ar

OCOCH₃

OCOCH3

OCOCH₃

unit A',

OCOCH

unit A₂

OCOCH₃

unit A'2

unit B₁

21 O 712

OH

OCOCH₃

OCOCH₃ C-O-(CH₂^n-C-O-CH₂-G

H₃C

(XIII)

H₃C

OCOCH OR'

210 712

OR OR

(ID

OR¹

(III)

HO

OR¹

OCH₂-C

O=CH

(VI)

H₃C

Il /

-OCH₂-C (

HO-C —^ tr/A.

(VII)

H₃C

210 712

unit B¹

OCOCH₃

unit B"

OCOCH₂CH₃

unit

CO

OH

OH OH

OH

OH OH

COOH

PGF₁Ci

COOH

PGF₃«

COOH

PGE₁

COOH

PGE,

HgcV-l

/ N unit B₂

OH OH

COOH

PGE₃

2 -β«-.

OCOCH₃

PGF E-3AC

OH

OCOCH₃

II

C-O-CHo-C —

OCOCH

OH

Il C

OH PGFE-BA

OCO

C-O-CH„—C-O

PGFE-3AC-BA

OCO

PGFE-PR

OCOC₂H₅

Claims

210 712

PATEN T ANSPRUCH

1. Verfahren zur Herstellung eines neuen Prostaglandin-Derivats in Form eines Konjugats eines Prostaglandins und eines Steroidhormons mit einer Hydroxyl-Gruppe, Acetoxy-Gruppe, Propionyloxy-Gruppe, Benzoyloxy-Gruppe oder Oxo-Gruppe in 3-Position, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Prostaglandin oder ein acetyliertes Prostaglandin mit der Hydroxyl-Gruppe in 17-Position oder in 21-Position eines Steroidhormons mit einer Hydroxyl-, Acetoxy-, Propionyloxy-, Benzoyloxy- oder Oxo-Gruppe in 3-Position umsetzt, und zwar entweder durch direkte Reaktion oder über eine Brücke, welche durch eine der folgenden Verbindungen gebildet wird:

X(CH₂J_nCOOH,
X(CH₂J_nCOX,
HOOC(CH₂J_nCOOH, und
XOC

wobei η 1 oder 2 und X ein Halogenatom bedeutet, und zwar mit oder ohne Acetylierung.
2. Verfahren nach Punkt !,dadurch gekennzeichnet, daß die Brückenverbindung zunächst mit einem Steroidhormon umgesetzt wird, worauf das modifizierte Steroidhormon mit eine Prostaglandin oder einem acetylierten Prostaglandin umgesetzt wird.
3. . Verfahren nach Punkt \, dadurch gekennzeichnet, daß die Brückenverbindung zunächst mit einem Prostaglandin oder einem acetylierten Prostaglandin umgesetzt wird, worauf das modifizierte Prostaglandin mit einem Steroidhormon umgesetzt wird.
4. , Verfahren nach einem der Punkte .· 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Prostaglandin aus der Gruppe der Prostaglandine PGE₁, PGE₂, PGE-, PGF.a, PGF₂O. und PGF₃CX auswählt und daß man ein Steroidhormon aus der

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Gruppe östradiol, östriol, Testosteron, Pregn-4-en-21-ol-3,20-dion, Cortison, Androsteron und Progesteron auswählt.
5. Verfahren nach einem der* Punkte 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man das Steroidhormon mit der Brückenverbindung in einem Lösungsmittel unter Bildung eines modifizierten Steroidhormons. umsetzt, worauf man ein Salz des Prostaglandins mit dem modifizierten Steroidhormon in einem Lösungsmittel umsetzt.
6. Verfahren nach Punkt 5, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Silbersalz des Prostaglandins mit dem modifizierten Steroidhormon umsetzt.
7. Verfahren nach einem der Punkte 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß man die 3-Hydröxyl-Gruppe des Steroidhormons mit Essigsäure, Propionsäure, Benzoesäure, einem Anhydrid derselben oder einem Halogenid derselben umsetzt und in die Acetyloxy-, Pr opionyloxy- oder Benzoyloxy-Gruppe umwandelt.

8« Verfahren nach einem der Punkte 1 bis 7,

dadurch gekennzeichnet, daß man die Hydroxyl-Gruppen des Prostaglandins mit Essigsäure, einem Anhydrid oder einem Halogenid derselben umsetzt und in die Acetyloxy-Gruppen umwandelt.
9. Verfahren nach einem der Punkte 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Brückenverbindung der Formel X(CH₀) COX, wobei X ein Halogenatom bedeutet, mit der Hydroxy1-Gruppe des Steroidhorraons in 17-Position oder 21-Position in einem Lösungsmittel unter Bildung eines modifizierten Steroidhormons umsetzt, worauf man das modifizierte Steroidhormon mit einem Salz des Prostaglandins umsetzt.
10. Verfahren nach Punkt 9, dadurch gekennzeichnet, daß man das erhaltene Produkt mit Essigsäure, einem

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Anhydrid derselben oder einem Halogenid derselben acetyliert.

Hierzu„>3. Seiten Zeichnungen

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