DD150352A5

DD150352A5 - Verfahren zur herstellung von antibiotikum 7 beta-[d-[carboxy-(4-hydroxyphenyl)acetyl]-7alpha-methoxy-3-[[(1-methyl-1h-tetrazol-5-yl)thio]methyl]-8-oxo-5-oxa-1-azabicyclo[4.1.0]-oct-2-en-2-carbonsaenrediammoniumsalz

Info

Publication number: DD150352A5
Application number: DD80220809A
Authority: DD
Inventors: Kuo S Yang
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1979-05-01
Filing date: 1980-04-30
Publication date: 1981-08-26
Also published as: HU184750B; SU860705A3; AT370108B; CH646434A5; IE49775B1; JPH0118077B2; KR830002779A; NZ193528A; ZA802475B; LU82411A1; CA1138867A; KR840000078B1; DE3061751D1; GB2047707A; DK177980A; ATA220980A; FR2455605A1; GR68202B; PL223753A1; IT8021697A0

Abstract

Ziel der Erfindung ist die Schaffung eines Verfahrens zur Herstellung des D-Diammoniumsalzes des Oxa-Beta-lactams in einer kristallinen Form, die praktisch kein L-Epimer enthaelt. Erfindungsgemaesz wird eine waeszrige Loesung der Oxa-Beta-lactamidisaeure mit Aceton versetzt, der pH-Wert der Loesung bei 15 bis 30 Grad C mit Ammoniumhydroxid auf 6 bis 7,5 eingestellt, die Loesung bis zum Truebungspunkt weiter mit Aceton verduennt, das E-Epimer des erhaltenen Diammoniumsalzes vom L-Epimer durch Auskristallisieren getrennt und das D-Diammoniumsalz angereichert.

Description

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Anwendungsgebiet der Erfindung:

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung des Diaminoniumsalzes des antibiotisch wirksamen Oxa-ßlactams der allgemeinen Formel I

22G809

4 0CHa A

- Acc" NK₄+ -4 j-c*

B τ

η—.

CH₂-S-J! j] *

4 j-c*₂-s-!i J

B τ >

COO NK₄ ⁺ CH₂

worin das Chiralitätszentrum der alpha-Carboxy-p-hydroxyphenylacetyl-Seitenkette die D-Konfiguration hat, in kristalliner Form/ die praktisch frei ist vom L-Diammoniumsalz.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen:

Die antibiotisch wirksame 1-0xa-ß-lactamdisäure_r aus der das erfxndungsgemäße Diammoniumsalz hergestellt wird, is^t aus US-PS 4 138 486 bekannt. Beschrieben werden darin Salze der Disäure unter Einschluß der Natrium- und Kaliumsalze und von Aminsalzen, wie dem Triethylammoniumsalz und dem Procainsalz. Bei den Salzen der Disäure handelt es sich um Formen des Antibiotikums/ die zur parenteralen Verabreichung geeignet sind. Wie bei den meisten ß-Lactamantibiotika, wie den Penicillinen und den Cephalosporinen, welche parenteral eingesetzt werden, stellt auch hier die Salzform dieses Antibiotikums die am häufigsten verabreichte pharmazeutische Form dar. Bei einer solchen pharmazeutisch geeigneten Salzform soll es sich zweckmäßigerweise um ein stabiles kristallines Salz handeln, das mit physiologischen Flüssigkeiten verträglich und in solchen löslich ist.

Pharmazeutisch unbedenkliche Salze der Oxa-ß-lactamdisäure sind bereits bekannt. Sie konnten jedoch nicht in einer kristallinen Form mit der gewünschen Stabilität hergestellt werden. Das entsprechende Oxa-ß-lactamdinatriumsalz stellt beispielsweise einen amorphen Feststoff dar. In der Anmeldung Nr. vom

der gleichen Anmelderin mit dem internen Aktenzeichen aus X-5352 wird das kristalline Oxa-ß-lactamsesquidinatriumsalz mit D-Konfiguration beschrieben, das eine pharmazeutisch brauchbare Form des Antibiotikums darstellt.

Ziel der Erfindung;

Ziel der Erfindung ist die Schaffung eines Verfahrens zur Herstellung des D-Diammoniumsalzes des Oxa-ß-lactams der eingangs genannten Formel I in einer kristallinen Form, die praktisch kein L-Epimer enthält.

Darlegung des Wesens der Erfindung:

Das obige Ziel wird erfindungsgemäß erreicht durch ein Verfahren zur Herstellung von Antibiotikum 7ß-/D-/Carboxy(4-hydroxyphenyl)acetyiy-7alpha-methoxy-3-/V (1-methyliH-tetrazol-5-yl)thio/methyiy-8-oxo-5-oxa-1-azabicyclo-. [k . 1.0/oct-2-en-2-carbonsäurediammoniumsalz der Formel I

OCH₃*—·_ν (1 *

COO" NH₄ ⁺ \—\

COO

COO NH₄ Ch

in kristalliner Form, die praktisch frei von dem L-Diammoniumsalz ist, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man

(a) eine wäßrige Lösung der Oxa-ß-lactamdisäure der Formel II _Λ OCHa

mit Aceton versetzt,

(b) die erhaltene wäßrige Acetonlösung der Säure bei einer Temperatur zwischen 15 und 30 ⁰C solange mit Ammoniumhydroxid versetzt, bis der pH-Wert der Lösung zwischen 6 und 7,5 liegt,

(c) die Lösung bis zum Trübungspunkt, an dem die Oxaß-lactamdisäure in Form des D-Epimers oder des L-Epimers oder .eines Gemisches hieraus vorliegt, weiter mit Aceton verdünnt,

(d) das D-Epimer dieses Diammoniumsalzes in vom L-Epimer praktisch freier Form auskristallisiert,

(e) das gemäß Stufe (d) erhaltene D-Diammoniumsalz gegebenenfalls durch Hochdruckflüssigchromatographie anreichert und

(f) eine Lösung dieses angereicherten Diammoniumsalzes des D-Epimers in Wasser bei einer Temperatur zwischen 2O und 30 ⁰C gegebenenfalls solange mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel verdünnt, bis die Lösung den Trübungspunkt erreicht hat und das D-Epimer in vom L-Epimer praktisch freier Form auskristallisiert ist.

208Of

Weiter ist die Erfindung auch auf ein Verfahren zur Herstellung von Antibiotikum 7ß-A>-/Carboxy(4-hydroxyphenyl) acety_l/-7alpha-methoxy-3-// (1 -methyliH-tetrazol-5-yl)thio/methyjy-e-oxo-S-oxa-i-azabicyclo-/4.1.0/oct-2-en-2-carbonsäurediammoniumsalz der genannten Formel I gerichtet, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man

(a) eine wäßrige Lösung des D,L-Epimergemisches des Diammoniumsalzes des antibiotisch wirksamen Oxaß-lactams der Formel I bis zum Erreichen des Trübungspunktes mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel versetzt und

(b) das D-Epimer dieses Diammoniumsalzes in vom L-Epimer praktisch freier Form auskristallisiert.

Das_ kristalline D-Diammoniumsalz fällt beim erfindungsgemäßen Verfahren oder bei Kristallisation aus wäßrigen organischen Lösungsmitteln als Tetrahydrat an. Dieses kristalline Tetrahydx'at zeigt in einer Kupfer-Nickel- ^l

Strahlung bei einer Wellenlänge von 1,54 A folgendes RöntgenpulverbeugungsSpektrum, wobei d den Interplanarabstand angibt und 1/I₁ die relative Intensität bedeutet:

2208Of

χ 100

9,60

8,79

8,11

7,25

6,62

5,92

5,10

4,58

4,35

3,40

3,67

3,54

3,36

3,21

3,10

2,97

2,82

2,71

2,62

2,41

2,35

2,30

2,19

2,05

50

10

35

10

40

100

10

15

10

10 10 5 5 1 5 1 1 1

le$n> ^4> 'SfcS^ **&F ^pf p-

Eine elektrometrische Titration de"s Diammoniumsalzes in 66-prozentigem Dimethylformamid ergibt einen anfänglichen pH-Wert von 7,38 und pK -Werte von 5,0 (C00~),

- ₍ el

6,2 (C00~), 9,5 (2NH₄ ) und 12,9 (p-Hydroxygruppe).

Das D-Diammoniumsalz der obigen Formel wird chemisch als 7ß-/D-_/Carboxy (4-hydroxyphenyl) ac e ty I₁/-7 alphamethoxy-3-//(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)thio_/methyl/-8-oxo-5-oxa-1 -azabicyclo-/^ .1.0/oct-2-en-2-carbonsäurediammoniumsalz bezeichnet. Der Einfachheit halber wird dieses Disalz vorliegend lediglich entweder als D-Diammoniumsalz oder als Oxa-ß-lactam-D-diammoniumsalz benannt.

Das erfindungsgemäß erhältliche D-Diammoniumsalz stellt eine pharmazeutisch brauchbare Form dar, die bei üblichen Temperatur- und Feuchtigkeitsbedingungeh stabil ist. Dieses Salz läßt sich in der Masse lagern und kann dann später beispielsweise zur Herstellung von Einheitsdosierungsformen in Ampullen verwendet werden.

Das vorliegende Diammoniumsalz kristallisiert in Form des D-Epimers aus, das praktisch kein L-Epimer enthält. Dieses D-Epimer des Salzes ist gegenüber einigen gramnegativen Bakterien, wie beispielseise gegenüber Escherichia coli, stärker antibakteriell wirksam als die DL-Form des Salzes.

Zur erfindungsgemäßen Herstellung des kristallinen D-Diammoniumsalzes löst man die Oxa-ß-lactamdisäure der Formel II

·— icon /-\y

I Ϊ

COOH CHc

2 20809

in Wasser und verdünnt die erhaltene Lösung dann mit Aceton in einer Menge von etwa 10 Volumenprozent. Der pH-Wert der Lösung wird mit Ammoniumhydroxid auf 6 bis 7,5 eingestellt, worauf man das Ganze bis zum Erreichen des Trübungspunktes weiter mit Aceton verdünnt. Beim Stehenlassen kristallisiert das kristalline D-Diammoniumsalz aus und es wird dann von der Mutterlauge abgetrennt. .

Die beim .erfindungsgemäßen Verfahren verwendete Disäure der obigen Formel kann als L-Epimer oder irgendein Gemisch aus D- und L-Epimer vorliegen.

Die Disäure liegt in der wäßrigen Lösung vorzugsweise in einer Konzentration von 10 % vor. Es kann jedoch auch mit Konzentrationen zwischen 5 und 15 % gearbeitet werden. Vor der Zugabe des Ammoniumhydroxids verdünnt man die wäßrige Lösung der Disäure mit Aceton, und zwar vorzugsweise in einer Menge von 10 Volumenprozent, wobei zu dieser Verdünnung jedoch auch mehr oder weniger Aceton verwendet werden kann.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird zweckmäßigerweise unter Einsatz von konzentriertem Ammoniumhydroxid durchgeführt, da ein Arbeiten mit verdünnteren Lösungen dieser Base zu einem größeren Volumen der Kristallisationslösung führt, so daß mehr Aceton zugesetzt werden muß. Bei großtechnischen Kristallisationen sollten nach Möglichkeit größere Volumina vermieden werden.

Wahlweise kann man die wäßrige Lösung der Disäure zur Einstellung des pH-Wertes auch mit einer Lösung von Ammoniumhydroxid in Aceton versetzten. Hierzu

werden 1 normale bis 1,5 normale Lösungen bevorzugt. Der gewünschte pH-Wert läßt sich ferner auch einstellen, indem man in die jeweilige wäßrige Disäurelösung unter Kühlung Ammoniak einleitet.

Wie oben erwähnt, wird der pH-Wert der mit Aceton verdünnten wäßrigen Disäurelösung mittels Ammoniumhydroxid auf pH 6 bis 7,5 eingestellt. Vorzugsweise wird der pH-Wert auf pH 6,5 eingestellt. Nach erfolgter Zugabe des Ammoniumhydroxids zur Einstellung des entsprechenden pH-Werts wird die Lösung solange weiter mit Aceton verdünnt, bis sie trüb wird. Das kristalline Diammoniumsalz kristallisiert aus der trüben Lösung in Form des D-Epimers aus, das praktisch frei vom L-Epimer ist. Die erhaltenen Kristalle werden durch Filtrieren, Zentrifugieren oder sonstige geeignete Abtrennmethoden geerntet, von Mutterlauge freigewaschen und getrocknet. Das Verfahren führt zu Ausbeuten an D-Diammoniumsalz von im allgemeinen wenigstens 85 %.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird zweckmäßigerweise bei Temperaturen zwischen 15 und 30 ⁰C, vorzugsweise > bei einer Temperatur von 25 ⁰C, durchgeführt.

Unter den pH-Bedingungen und Temperaturbedingungen des Verfahrens kommt es bei der Oxa-ß-lactamsäure und dem in Lösung gebildeten Diaminoniumsalz der Disäure zu einer raschen Epimerisierung am Chiralitätszentrum an der alpha-Carboxy-p-hydroxyphenylacetylseitenkette. Hat die als Ausgangsmaterial verwendete Disäure beispielsweise die L-Konfiguration, dann epimerisiert diese Säure oder das Diaminoniumsalz in Lösung rasch zu einem Gleichgewichtsgemisch aus den D- und L-Epimeren. Dieses Gleichgewicht wird durch Ausfällung des

kristallinen D-Diammoniumsalzes gestört, wie folgendes Diagramm zeigt:

D-Ep4.mer L-Epimer

kristallines

, D-DiammoniuRisal. z

Das D-Diairano.niumsalz kristallisiert demnach als das am wenigsten lösliche Epimer des Salzes aus, so daß es infolge der raschen Epimerisierung in Lösung zu einer Einstellung des Gleichgewichts unter Bildung von weiterem D-Diammoniumsalz kommt, welches ebenfalls auskristallisiert. Die obige rasche Epimerisierung wird bei Verfahrenstemperaturen von 15 bis 30 ⁰C begünstigt, und sie verläuft am besten bei einer Temperatur von etwa 25 ⁰C. Mit abnehmender Temperatur erniedrigt sich auch die Epimerisierungsgeschwindigkeit, und infolgedessen kommt es zu einer langsameren Kristallisation und zu geringeren Ausbeuten an D-Diammoniumsalz. Obwohl eine Temperaturerniedrigung auch zu einer Erniedrigung der Löslichkeit des D-Diammoniumsalzes führt, wird hiervon infolge der verzögerten Epimerisierungsgeschwindigkeit doch weniger in der Kristallisationslösung verfügbar. Unter den beim erfindungsgemäßen Verfahren anzuwendenden Bedingungen kommt es infolge einer raschen Epimerisierung zu hohen Ausbeuten an kristallinem D-Diammoniumsalz, während das D-Epimer des Dianunoniumalzes praktisch unlöslich ist. Bei Temperaturen oberhalb der Verfahrenstemperaturen nimmt die Epimerisierungsgeschwindigkeit zu. Es erhöht

sich dabei jedoch auch die Löslichkeit des D-Epimers des Salzes, so daß sich niedrigere Ausbeuten an gewinnbarem kristallinem Salz ergeben.

Das D-Epimer des Oxa-ß-lactamdiammoniumsalzes fällt beim erfindungsgemäßen Verfahren in einer vom L-Epimer praktisch freien Form an. Unter einer solchen vom L-Epimer praktisch freien Form wird verstanden, daß darin wenigstens 95 % D-Epimer vorhanden sind. Der prozentuale Anteil an D-Epimer im als Produkt erhaltenen kristallinen Diammoniumsalz wird durch Hochleistungsflüssigchroinatographie (HPLC) bestimmt. Die Bestimmung des prozentualen Anteils an D-Epimer und L-Epimer läßt sich beispielsweise unter. Verwendung des folgenden HPLC-Systems durchführen.

Säule: Water's Associates Bonopak C-18 Strömungsgeschwindigkeit: 3 ml/Min. Lösungsmittel: 0,1 η Ammoniumacetat (100 Teile)

Methylalkohol (6 Teile)

Probenlösungsmittel: Phosphatpuffer pH 7,4 Probenkonzentration: 1 mg/ml Probenvolumen: 15 Mikroliter

Die zur Herstellung des erfindungsgemäßen Salzes benötigte D,L-Oxa-ß-lactamdisäure läßt sich durch Hochleistungsflüssigchromatographie in angereichertes D-Epimer und L-Epimer auftrennen. Vorzugsweise wird die D,L-Disäure verwendet.

Bei einer weiteren Ausführungsform der Erfindung erhält man kristallines D-Diammoniumsalz mit erhöhter Epimerenreinheit zusammen mit nichtkristallinem Diammoniumsalz, das wesentliche Mengen an L-Epimer enthält. Diese Ausführungsform der Erfindung ist ein Kristallisationsverfahen für D-Diammoniumsalz, das darin besteht, daß

I <£

man das Diammoniumsalz in Wasser löst und die erhaltene wäßrige Lösung bis zum Erreichen des Trübungspunktes mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel versetzt, wie Ethylalkohol, Isopropylalkohol, n-Propylalkohol oder Acetonitril. Beim Stehenlassen am Trübungspunkt kristallisiert das D-Diammoniumsalz aus der Lösung in einer Form aus, die praktisch kein L-Diammoniumsalz enthält.

Das Kristallisationsverfahren wird bei Temperaturen zwischen 20 und 35 ⁰C durchgeführt. Ein Merkmal dieses Kristallisationsverfahrens ist, daß hierbei das D-Epimer des Diammoniumsalzes aus der wäßrigen Lösung selektiv auskristallisiert. Das zur Kristallisation verwendete nichtkristalline Diammoniumsalz kann ein Gemisch aus den D- und L-Epimeren in unterschiedlichen Verhältnissen sein. So kann es sich hierbei beispielsweise um ein Disalz handeln, das das D-Epimer in durch Hochleistungsflüssigchromatographie angereicherter Form enthält, oder dieses Material kann auch ein etwa 5O:5O-Gemisch aus den beiden Epimeren sein.

Die Konzentration der wäßrigen Lösung an nichtkristallinem epimerem Gemisch des Diammoniumsalzes ist nicht kritisch. Ist diese Konzentration jedoch zu niedrig, dann braucht man größere Volumina an organischem Lösungsmittel, wobei die Ausbeuten im allgemeinen niedriger sind. Die Konzentration soll daher zweckmäßigerweise zwischen O,1 und 0,5 g/ml Wasser betragen.

Das D-Diammoniumsalz kristallisiert aus der wäßrigen Lösung als Tetrahydrat aus. Das beim vorliegenden Kristallisationsverfahren erhaltene Produkt enthält aufgrund einer Analyse durch Hochleistungsflüssigchromatographie wenigstens 95 % D-Epimer. ·

Ausführungsbeispiele . · ^

Die Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele weiter erläutert.

Beispiel 1

Eine Lösung von 5 g der 1-Oxa-ß-lactamdisäure (40:60 D, L-Gemisch) in 15 ml eines Gemisches aus 90 Volumteilen Aceton und 10 Volumteilen Wasser wird bei Raumtemperatur unter kräftigem Rühren solange mit einer 1,4 normalen Lösung von Ammoniumhydroxid in Aceton versetzt, bis die Lösung einen pH-Wert von 6,5 erreicht hat. Sodann wird der Lösung solange weiteres Aceton zugegeben, bis sie trüb geworden ist. Hierauf impft man die Lösung mit D-Diammoniumsalz an und läßt sie zum Auskristallisieren stehen. Das dabei erhaltene kristalline D-Diammoniumsalz wird abfiltriert, mit wäßrigem Isopropylalkohol (1 Volumenteil Wasser auf 9 Volumenteile Isopropylalkohol) gewaschen und getrocknet. Die Ausbeute an getrockneten Kristallen beträgt 4,5 g. Das erhaltene kristalline Salz besteht aufgrund einer Hochleistungsflüssigchromatographie zu 97 % aus D-Epimer.

Beispiel 2 Umkristallisation von D-Diammoniumsalz

Man löst 100 mg vorwiegend in D-Konfiguration vorliegendes nichtkristallines Oxa-ß-lactamdiammoniumsalz (durch Hochleistungsflüssigchromatographie unter Verwendung von 0,1 normalem Ammoniumacetat als Puffer zur Elution angereichertes D-Epimer) in 0,5 ml Wasser. Die Lösung wird dann bis zum Erreichen des Trübungspunktes langsam mit

Isopropylalkohol verdünnt, worauf man sie mehrere Stunden bei Raumtemperatur stehen läßt. Zur Sicherstellung einer vollständigen Auskristallisierung werden periodisch kleine Mengen an weiterem Isopropylalkohol zugesetzt. Die erhaltenen Kristalle werden abfiltriert, mit einem Gemisch aus 1 Volumenteil Wasser und 9 Volumenteilen Isopropylalkohol gewaschen und mehrere Stunden unter Vakuum getrocknet. Das dabei erhaltene kristalline Diammoniumsalz enthält aufgrund einer Hochleistungsflüssigchromatographie 98 % D-Epimer. , .

Das oben beschriebene Verfahren wird unter Verwendung von vier weiteren Ausgangsmaterialien an nichtkristallinem Diammoniumsalz unter Prozentgehalten an D-Epimer von 98 %, 85 %, 82 % und 76 % wiederholt. Man gelangt zu praktisch den gleichen Ergebnissen.

Claims

Erfindungsansprüche

1. Verfahren zur Herstellung von Antibiotikum

7ß-/D-/Carboxy(4-hydroxyphenyl)acetyl/-7alpha-methoxy-3-//(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)thio/methyV-8-oxo-5-oxa-T-azabicyclo-/4.1.0/oct-2-en-2-carbonsäurediainmoniumsalz der Formel I

OCHa HO- ^A

COO NH4⁺ CH3

* ⁸ Γ0Ο NH* η .^ ,,- — - -_N

in kristalliner Form, die praktisch frei von dem L—Diammoniumsalz ist, dadurch gekenn-zeichnet , daß man

(a) eine wäßrige Lösung der Oxa-ß-lactamdisäure der Formel II _0CH,

—CH—C—NH-f

.00H mit Aceton versetzt,

(b) die erhaltene wäßrige Acetonlösung der Säure bei einer Temperatur zwischen 15 und 30 ⁰C solange mit Ammoniumhydroxid versetzt, bis der pH-Wert der Lösung zwischen 6 und 7,5 liegt,

(c) die Lösung bis zum Trübungspunkt, an dem die Oxaß-lactamdisäure in Form des D-Epimers oder des L-Epimers oder eines Gemisches hieraus vorliegt, weiter mit Aceton verdünnt,

(d) das D-Epimer dieses Diammoniumsalzes in vom L-Epimer praktisch freier Form auskristallisiert,

(e) das gemäß Stufe (d) erhaltene D-Diammoniumsalz gegebenenfalls durch Hochdruckflüssigchromatographie anreichert und

(f) eine Lösung dieses angereicherten Diammoniumsalzes des D-Epimers in Wasser bei einer Temperatur zwischen 20 und 30 ⁰C gegebenenfalls solange mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel verdünnt, bis die Lösung den Trübungspunkt erreicht hat und das D-Epimer in vom L-Epimer praktisch freier Form auskristallisiert ist.
2. Verfahren nach Punkt 1, dadur'ch gekennzeichnet , daß man bei Verfahrensstufe (b) zur Einstellung des pH-Wertes 28-prozentiges wäßriges Ammoniumhydroxid verwendet.
3. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet , daß man zur Einstellung des pH-Wertes eine 1 normale bis 1,5 normale Lösung von Ammoniumhydroxid in Aceton verwendet.
4. Verfahren nach Punkt 1 bis 3, dadurch

gekennzeichnet , daß man den pH-Wert auf 6,5 einstellt.
5. Verfahren nach Punkt 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet , daß man mit einer
wäßrigen Lösung arbeitet, deren Konzentration an Disäure 5 bis 15 % (Gewicht/Volumen) beträgt.
6. Verfahren zur Herstellung des antibiotisch
wirksamen D-Diammoniumsalzes von Oxa-ß-lactam der in Anspruch 1 angegebenen Formel I, dadurch
gekennzeichnet , daß man

(a) eine wäßrige Lösung des D,L-Epimergemisches des
Diammoniumsalzes des antibiotisch wirksamen Oxaß-lactams der Formel I bis zum Erreichen des Trü-

' bungspunktes mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel versetzt und

(b) das D-Epimer dieses Diammoniumsalzes in vom L-Epimer praktisch freier Form auskristallisiert.
7. Verfahren nach Punkt 6, dadurch
gekennzeichnet , daß man die Stufe (a) bei einer Temperatur zwischen 20 und 30 ⁰C durchführt.
8. Verfahren nach Punkt 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Lösung verwendet, deren Konzentration an D,L-Epimergemisch zwischen 0,1 und 0,5 g/ml Wasser liegt.
9. Verfahren nach Punkt 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet , daß man als mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel Isopropylalkohol verwendet.