DD152142A1 - Verfahren zur herstellung von enzymgemischen zur verzuckerung von getreidemaischen - Google Patents

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DD152142A1 DD22267780A DD22267780A DD152142A1 DD 152142 A1 DD152142 A1 DD 152142A1 DD 22267780 A DD22267780 A DD 22267780A DD 22267780 A DD22267780 A DD 22267780A DD 152142 A1 DD152142 A1 DD 152142A1
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amylase
enzyme
saccharification
alpha
glucoamylase
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DD22267780A
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Rainer Borriss
Dieter Schmidt
Eberhardt Gorges
Heinz Ruttloff
Alfred Taeufel
Peter Lietz
Peter Steffen
Wolfgang Heinig
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Rainer Borriss
Dieter Schmidt
Eberhardt Gorges
Heinz Ruttloff
Alfred Taeufel
Peter Lietz
Peter Steffen
Wolfgang Heinig
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  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur simultanen Herstellung von Enzymgemischen in Enzymkulturloesungen deren Zusammensetzung die technologische Verzuckerung von Getreidemaischen fuer die Herstellung von Gaerungsaethanol ermoeglicht. Ziel der Erfindung ist es, waehrend der gemeinsamen Kultivierung von Mikroorganismen einem Fermenter, die vorwiegend alpha-Amylase und Glucoamylase synthetisieren den erforderlichen Anteil von alpha-Amylase einzustellen, so dasz ein Einsatz des Praeparates in Brennereien ohne zusaetzliche Enzymdosierung moeglich wird. Das Enzymgemisch enthaelt neben Glucoamylase einen fuer die Verzuckerung von Getreidemaischen ausreichenden Anteil an alpha-Amylase durch Kultivierung eines Glucoamylasebildners, vorzugsweise eines Stammes der Gattung Endomycopsis und danach im gleichen Fermenter bei Zusatz unverkleisterter Staerke eines alpha-Amylasebildners, vorzugsweise eines Stammes der Gattung Aspergillus. Als N-Quelle werden neben Maisquellwasser gemahlene Oelfruechte oder Oelpreszkuchen und als C-Quelle wird Staerke in an sich bekannter Weise vor dem Autoklavieren zugefuegt. Das Verfahren kann in Brennereien angewendet werden.

Description

222677
a) .^1ItβI11 ,der_ Erfindung; ' .
Verfahren zur Herstellung von Enzymgemischen zur Verzuckerung von Getreidemaische
"b) Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur simultanen Herstellung von Enzymgemischen in Enzymkulturlösungen deren Zusammensetzung die technologische Verzuckerung von Getreidemaische für die Herstellung von Gärungsäthanol ermöglicht,
c) Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Die Herstellung von Sohsprit bzv/. Rektifikat durch Verzuckerung von Getreidestärke mittels Brennereidarrmalz} Enzympräparaten oder Enzymkulturlösungen ist ein bekanntes und in der Produktion angewendetes Verfahren^ Die benötigten Hauptenzyme, 06-Amy läse und Glucoamylase werden dabei entweder in speziellen Enzymfabriken oder in den Brennereien selbst durch getrennte Kultivierung hergestellt. Dabei auftretende Nebenaktivitäten von Enzymen wie Zellulase-, Hemizellulase und Protease sind erwünscht und brauchen deshalb nicht abgetrennt zu werden.
Die erforderlichen Enzymmischungen für· die Verzuckerung der, Getreidemaische werden bisher so'hergestellt, daß in entsprechendem Verhältnis die Enzympräparate dosiert werdeiie Bei Enzymkulturlösurjgen, werden die benötigten Verhältnisse durch die Kultivierung von Enzymbildnern und die erforderliche Dosierung, der Enzymkulturlösungen in entsprechendem Verhältnis erreicht» In allen die sen.bekannten Pällen wird doppelter
... : _2_ 222 67 7
!Ferment at ionsr aum, eine Zwischenlagerung von Kultur lösungen und ein nicht immer wirkungsvolles Enzymspektrura vorliegen. Bei der im WP C12d/213397 dargestellten Kerstel-" lung eines Enzympräparates, das durch die Kultivierung zweier Mikroorganismenstämme gewonnen wird, erhält man einen für die Verzuckerung von Getreidemaische zu geringen An— teilo6-Amylasej so daß auch in diesem Palle eine Zudosierung notwendig ist.
^) Ziel der Erfindung
Ziel der Erfindung ist es, während der gemeinsamen Kultivierung von Mikroorganismen, die vorwiegendo6~Amyläse und Glucoamylase synthetisieren, den erforderlichen Anteilc^-Amyläseeinzustellen, so daß ein Einsatz des Präparates in Brennereien ohne zusätzliche Enzymdosierung möglich wird· und somit Enzymkosten verringert und eine gute Verzuckerung sowie Vergärung erreicht wirdo
e) Parlegung^des Wesens der Erfindung
Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, ein Verfahren zur Herstellung eines Enzymgemisches zu entwickeln, das ein für die Verzuckerung von Getreidemaische geeignetes Enzymspektrum aufweist» Das erfindungsgemäße Verfahren zur Her- · stellung des Enzymgemisches für diesen Zweck "besteht darin, daß in einem Fermenter das Kulturmedium, das.in bekannter V/eise als IT-Quelle neben Liaisquellwasser gemahlene Ölfrüchte oder Ülpresskuchen und als C-Quelle Stärke enthält, zuerst der Glucoarnylasebildner eingeimpft und nach Abschluß der log-Wachstumsphase der^-Amylasebildner in Verbindung mit der Zudosierung von unverkleisterter Stärke zugeführt . wird.
Das nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellte Bnzymgemisch läßt sich vorteilhaft zur Verzuckerung von Getreidemaischen in der Brennerei einsetzen« Als Beispiel für einenoC—Amylasebildner sei der Stamm Aspergillus oryzae angeführt, als Glucoamylasebildiier der Stamm Endomycopsrs "bispora* Der letzte Stamm wird nach der
_ 3 —
22 677
DDR-Patentschrift 60536 charakterisiert. Alsoi, -Amylasebildner wird der Stamm Aspergillus oryzae 3? 15 (deponiert als Aspergillus oryzae i 911 in der Pilzsammlung der Friedrich-Schiller-Universität Y/eimar) und seine Mutanten verwendet O
Die versetzte Beimpfung erfolgt wie in der DDR-Patentanmeldung "Verfahren zur Herstellung von Enzymen (W? C12d/ 213397) beschrieben wurde.
Ausführungsbeispiele
Beispiel 1
Mit 1 ml-einer Endomycopsis bispora-Vorkultur werden 100 ml Hauptkulturmedium (Grundmediumί 0,3 ί> (HH,)2ΗΡ0,, 0·,2 #
2PO4, 3 % MQW, 1 96 Stärke folgender Zusammensetzung: A) G-rundmedium + 2 % Rapsöl
B) " -f- 4 % Eapsmehl
C) " + 4 fo Rapsmehl +
2 % Rapsöl beimpft»
Der pH-V/ert wurde auf 5,5 eingestellt und auf einem Schütteltisch (250 rpm) bei 30° C inkubiert. Nach 24 h wird zu den Endomycopsis-Kulturen jeweils 1 ml einer Aspergillus—oryzae-Yorkultur hinzugefügt.
Parallel zu diesen beimpften Kolben erfolgt zu den gleichen Hährbodenzusammensßtzungen, außer dem 1 ml-Aspergillus-ory-•zae-Vorkultur, eine Zugabe von 1 g unverkleisterter Stärke. Die Zultivierungsdauer beträgt 96 h.
Folgende Ergebnisse werden erhaltend
Zuführung von 1% steriler unverkleisterter Stärke nach Beimpfung mit Asp. oryzae
Nährboden- Glucoamylase ct.- GIucοainylase ct^-Amylase Variante MSS GOD Amy läse MSS GOD ,_
A 3oo E/ml 22o E/ml- 1 30E/ml 250S/ml 1803/ml 250E/ml B 32o E/ml 208 E/ml 300E/ml 380E/ml 200S/ml 460E/ml C' 34ü E/ml 24o E/ml 250E/ml 4003/ml 260E/ml · 320E/iü1
-4- 222677
Beispiel 2
Mit 100 ml einer Endomycopsis b'ispora - Vorkultur wurden 20 1 eines Produktionsmediums folgender Zusammensetzung 'beimpft:
0,3 Io (NH4)2 HPO^, 0,2 % Na H2 PO^, 3'% Maisquellwasser, 1 <fo Rapsöl und 4 °b Rapsöl» Der pH-Wert wurde auf 5S5 eingestellt und Kultur in einem Glasfermenter (40, 1 Bruttovolumen) mit Rührung (100 U/min) und Zwangsbelüftung (0,6 vvm) bei 28 - 30° C fermentiert« Nach 24 h werden zu der Endomyeopsis-Kultur 100 ml einer Aspergillus oryzae-Vorkultur gegeben und gleichzeitig dem Medium 1 <fo unverkleisterte Stärke und 0,5 % Oa COo zugeführt*
Nach einer !Fermentationszeit von 72 h werden im Kulturfiltrat 190 E/ml .Glucoamylase und 410 E/ml :>£·-Amy läse nachgewiesen. Nach Abtrennung der Biomasse wurden durch Eindampfung in Vakuum ein Konzentrat mit 3000 E/ml G-lucoamylase und 7000 B/ml a-Amylase. erhalten«
Beispiel 3
Ein Enzymkonzentrat, das aus KuIturfi3.trat, welches unter den in Beispiel 2 geschilderten Bedingungen hergestellt wurde, gewonnen werden konnte, enthielt 3000 E/ml Glucoamylase und' 7000 E/ml a-Amylasee Im Hochdruckdampfverfahren wurde dieses Probemuster unter Laborbedingungen getestet, Als Vergleichswert diente folgende Enzymdosierungί
100 χ 10°/E Alpha-Amylase 80 χ der Pa0 Rapidase / t Stärke 20 χ 10 /E Glucoamylase AH 6 150 der Pa. Novo / t Stärke
bei der die Alkoholausbeute 66,3 IW pro dt Stärke beträgt. Mit einer Enzymdosierung von 47 x 10 E<x-Amylase /t Stärke und 20 χ 106 E Glucoamylase/t Stärke (^ 6,7 1 Konzentrat / t Stärke) wurden höhere Ergebnisse als beim Vergleichswert (67,1 IW Alkoholausbeute pro t Stärke) und bei einer Enzymdosierung von 35 χ ΙΟ6 ε a-Amylase / t Stärke und 15 x 105E Glucoamylase/t Stärke ( ^ 51 Konzentrat / t Stärke) gleichten die Alkoholausbeute denen, die mit der Vergleichsdosierung erzielt wurden» . '

Claims (2)

. _ 5- 222 677 Erf indungsanspruch
1. Verfahren zur· simultanen Herstellung eines Bnzyragemisch.es "bestehend aus, G-lucoamyläse und einem für die Verzuckerung von Getreidemaischen ausreichenden Anteil an ^-Amylase, dadurch gekennzeichnet, daß hei der in "bekannter Weise durchgeführten Herstellung des Kulturmediums, welches als N-Quelle ·' neben Maisquellwasser gemahlene Ölfrüchte oder Ölpresskuchen, und als C-Quelle Stärke enthält und stufenweiser Beimpfung zuerst mit dem G-lucoamylasebildner, vorzugsweise eines Stammes der G-attung Endomycopsis, und nach Abschluß der log - Wachstumsphase mit dem (^ -Amylasebildner % vorzugsweise der Gattung Aspergillus, gleichzeitig im Verlauf der fermentation unverkleisterte Stärke dem. Kulturmedium zugeführt v/ird«
2· Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß es zur Verzuckerung von Getreidemaischen für die Brennerei eingesetzt wird«
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