DD213947A1

DD213947A1 - Verfahren zur kultivierung von bakterien der species pasteurella multocida

Info

Publication number: DD213947A1
Application number: DD24857583A
Authority: DD
Inventors: Klaus-Dieter Flossmann; Heino Rosner; Manfred Hoefner; Wilfried Erler; Hans Feist; Christine Grajetzki
Original assignee: Akad Landwirtschaftswiss Ddr
Priority date: 1983-03-08
Filing date: 1983-03-08
Publication date: 1984-09-26

Abstract

Das Verfahren zur Kultivierung von Bakterien der Species Pasteurella multocida" bezieht sich auf das Anwendungsgebiet der Herstellung von Impfstoffen. Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Kultivierungsverfahren zu beschreiben, das ohne erhoehten Material- und Energieeinsatz eine verbesserte Impfstoffproduktion erlaubt. Das Wesen der Erfindung besteht darin, dass die Kultivierung zur Biomasseproduktion von P. multocida bei erniedrigten Kultivierungstemperaturen, zwischen 25 und 30 Grad C, am besten bei 27 Grad C, erfogt. Die Erfindung kann in der Grossproduktion von Pasteurella-multocida-Vakzine Anwendung finden.

Description

Titel der Erfindung

Verfahren zur Kultivierung von Bakterien der Species Pasteurella multocida

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Kultivierung von Bakterien der Species Pasteurella multocida. Die Vermehrung dieser Mikroorganismen, die als Erreger von Krankheiten eine Holle spielen, ist für die Herstellung von Impfstoffen bedeutsam.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen

Die Massenkultivierung für diese Zwecke geschieht in bekannter Weise bei 37⁰C in flüssigen Nährmedien unterschiedlicher Zusammensetzung - in chemisch definierten, teilweise definierten bzw. komplexen Medien mit mehr oder weniger hohen Anteilen Undefiniert zusammengesetzter natürlicher Bestandteile, z* B. Pepton, Trypton, Hefe-Extrakt, Serum, Pleischwasser u.a.

Die Biomasseproduktion ist je nach der Art der eingesetzten Nährlösungen ,und Kultivierungsbedingungen unterschiedlich hoch. Zur Massenkultivierung für die ImpfStoffproduktion eingesetzte Medien sind aufgrund ökonomischer Betrachtungen oft nicht geeignet, so daß die in Laboransätzen erreichten Ausbeuten dort kaum erreicht werden. Die Erfindung bezweckt deshalb, bei gleichem Materialeinsatz durch Veränderung der Kultivierungsbedingungen die Biomasseproduktion zu erhöhen.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Kultivierungsverfahren zu beschreiben, das ohne erhöhten Material- und Energieeinsatz eine verbesserte Impfstoffproduktion erlaubt.

Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß Stämme von Pasteurella multocida durch Erniedrigung der Bebrütungstemperatur kultiviert werden, wobei die Ausbeuten an Biomasse ohne zusätzlichen Materialeinsatz bei der Herstellung der Hährlösungen stark erhöht v/erden. Statt der bisher üblichen 37°C werden Temperaturen zwischen 25 und 3o C eingesetzt, wobei sich als praktikable Größe 27⁰C erweist. Damit wird bei gleichem Nährstoffangebot unter Temperaturerniedrigung um 1o C (also gleichzeitiger Einsparung von Energie) eine Ausbeutesteigerung von 1o - oo % erreicht.

Ausführungsbeispiele

1.Am Beispiel von P. multocida 383 aus der Stammsammlung des Instituts für bakterielle Tierseuchenforschung Jena soll die Abhängigkeit der Biomasse-Ausbeuten von der Kultivierung stemperatur gezeigt werden (als Maß für die produziete Biomasse dient die bei 650 lim gemessen=Extinktion am Photometer, E^₁- )j

Temperatur ( C)	Ausbeute (E
2o.	0,41
• 22	0,46
24	o,52
26	o,59
27	o,62
28	o,62
3o	o,57
32	o,56
37	o,49

Die Zahl der Lebendkeime ist bei erniedrigter Temperatur ebenfalls erhöht (P. multocida 383; 37⁰C: 5 χ 1o⁹/ml, 27⁰C:

7 x 1o /ml). Bei Kultivierung im Bakterienferment er werden gleichfalls analoge Ausbeuteerhöhungen beobachtet: 37⁰C;

Err- = o,6; 6 χ Ιο"¹ Lebendkeime/ml; 27⁰C: E/-r-_ = o,75; coo -ι 030

2 χ 1o Lebendkeime/ml.

Die vorgenannten Ergebnisse wurden mit einem chemisch definiertem Uährmedium (Rezept ⁿ9o6") folgender Zusammensetzung bei der Kultivierung erreicht (Angaben in g/l Aqua dest., pH 7,S - S):

12 H₂O 32,3

¹'36

HaCl ^ 1,19

MgSo₁ . 7 H₂O ο,25

Glucose 6

L-Arginin » HCl ο,2

L-Asparaginsäure 1,6

L-Cystin o,12

L-Glutaminsäure ο, 15

DL-Serin ο,2

(oder L-Serin o,1)

L-Isoleucin 0,065

L-Leucin 0,065

L-Phenylalanin 0,085

L-Tyrosin o,o9

Ca-Pantothenat o,oo2

Mcotinsäureamid 0,00 5

Thiamin . HCl o₅oo1

Orotsäure ' o,o15

Eisen-III-citrat o₅oo1

Die starke Ausbeuteerhöhung bei 27⁰C ist jedoch nicht auf ein bestimmtes !Tährmedium bei der Durchführung des Kultivierungsverfahrens beschränkt, wie die Versuche mit verschiedenen Medien beweisen. Auf 6 unterschiedlichen ITährmedien, die sowohl chemisch definierten, teildefinierten als auch komplexen Charakter hatten, wurden stets bei 27⁰C höhere Biomasseausbeuten erreicht (P. multocida 383):

(27⁰C)

0,60 o,77 o,9o 0,64 0,60 0,60

^wsiehe Seite 4

Medium	8o3S	(komplex)	TP ( J7 ^ώ65ο °⁷
Rezept	8o3	(teildefiniert)	o,55
	808	(teildefiniert)	o,73
	9o2	.(definiert)	0,80
	9o6	(definiert)	o,5o
	9o9	(definiert)	o,52
		o,51

die Nährmedienzusammensetzung ist v/ie folgt (g/l): 8o3: Na₂HPO. . 12 H₂O 32,3

₂₄ 1,36

MgSO₄ . 7 H₂O o,25

Glucose 6

L-Arginin . HCl . o,1

L-Asparaginsäure 1,6

L-Cystin ο,οβ

!-Glutaminsäure o,o75

DL-Serin o,1

(oder L-Serin o,o5)

Ca-Pantothenat o,oo2

Nicotinsäureamid ο,005

Thiamin . HCl o,oo1

Orotsäure o,o15

Hefe-Extrakt 5

8o3S: 8o3 mit 1o % Pferdeserum oder Kälberserum·

808: Na₂HPO₄ . 12 H₂O 32,3

KH₂PO₄ 1,36

MgSO₄ .7H₂O o,25

Glucose 6

L-Asparaginsäure 1,6

Fumarsäure 5,8

Hefe-Extrakt 5

9o2: Rezept 9o6 (siehe im Text weiter vorn) ohne Pe-Ill-citrat

9o9: Rezept 9o6 (siehe im Text weiter vorn) ohne Pe-Ill-citrat, ohne Tyrosin

2. Mit 11 repräsentativen P.-multocida-Stämmen unterschiedlicher Typen aus der Stammsammlung des Instituts für bakterielle Tierseuchenforschung Jena (383, 383 ts, 6417, 35), dem Institut "Pasteur" 3ukarest (B 85o), dem Central Public Health Laboratory, London (ICTC 1o322, 1o324, 1o326, 1o2o4, 1o3o2) und dein National Institute of Animal Health, Tokyo (VA 3j Bunia II) wurde das Verfahren in der beschriebenen Weise bei 27⁰C durchgeführt und ebenfalls in allen Fällen eine Ausbeutesteigerung erreicht:

Stamm S^r- (3-7 C; Ξ,-.- (^ 7 C)

383 o,46 o,59

383 ts · o,39 o,47

VA 3 o,45 o,5o

6417 o,34 0,46

B 35o 0,46 o,5o

35 o,54 o,58

Bunia II 0,48 o,52

I0324 o,5o 0,60

1o2o4 o,57 o,62

I0326 o,5o o,54

1o3o2 o,47 0,61

Claims

Erfindungsanspruch

1. Verfahren zur Kultivierung von Bakterien der Species

. Pasteurella multocida, dadurch gekennzeichnet, daß die Vermehrung zur Biomasseproduktion bei erniedrigten Kultivierungstemperaturen im Bereich von 25 bis 3o°C erfolgt*
2. Verfahren nach Punkt 1.,dadurch gekennzeichnet, daß die Kultivierung bei 27⁰G erfolgt.