DD228302A1 - METHOD FOR PRODUCING A POLYETHERAL-SIMILAR ANTIBIOTICS - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines polyetheraehnlichen Antibiotikums, Griseochelin, das eine inhibitorische Wirkung gegenueber grampositiven Bakterien aufweist und auf Grund der allgemeinen Eignung von Polyether-Antibiotika zum Einsatz in der industriellen Tierhaltung (Ergotropikum oder Veterinaerpharmakon) von potentiellen Nutzen ist. Insbesondere betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines neuen polyetheraehnlichen Antibiotikums der Bruttozusammensetzung C33H60O7 unter Verwendung eines Mikroorganismus Streptomyces griseus ZIMET 43681. Die Aufgabe wird in der Weise geloest, dass durch aerobe Fermentation des Stammes ZIMET 43681 in Medien mit geeigneten C-, N-Quellen und Mineralsalzen das polyetheraehnliche Antibiotikum Griseochelin gebildet und mit Hilfe extraktiver Verfahren aus Myzel und Kulturfiltrat isoliert und nachfolgend durch chromatografische Methoden gereinigt wird. Die Struktur des neuen polyetheraehnlichen Antibiotikums Griseochelin ist aus beiliegender Abb. 2 ersichtlich. Abb. 2The invention relates to a process for the preparation of a polyether-related antibiotic, griseochelin, which has an inhibitory activity against Gram-positive bacteria and is of potential use due to the general suitability of polyether antibiotics for use in industrial animal husbandry (ergotropic or veterinary pharmacokon). In particular, the invention relates to a process for the preparation of a novel polyether-like antibiotic of gross composition C33H60O7 using a microorganism Streptomyces griseus ZIMET 43681. The object is achieved by aerobic fermentation of the strain ZIMET 43681 in media with suitable C, N sources and mineral salts, the polyether-like antibiotic griseochelin is formed and isolated by means of extractive methods from mycelium and culture filtrate and subsequently purified by chromatographic methods. The structure of the new polyether-related antibiotic griseochelin is shown in Fig. 2. Fig. 2
Description
Titel der ErfindungTitle of the invention
Verfahren zur Herstellung eines Polyether-ähnlichen AntibiotikumsProcess for the preparation of a polyether-like antibiotic
Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines neuen Polyether-ähnlichen Antibiotikums mit der Bezeichnung Griseochelin, das auf Grund der allgemeinen Eignung der Carboxylsäure-Ionophore vom Typ der Polyether zum Einsatz in der Tierernährung sowie in der Veterinärmedizin von potentiellem Nutzen ist.The invention relates to a process for the preparation of a novel polyether-like antibiotic called griseochelin, which is of potential use due to the general suitability of the polyether-type carboxylic acid ionophores for use in animal nutrition as well as in veterinary medicine.
Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions
Es ist bekannt, daß Streptomyceten eine Reihe ionophorer Sekundärmetabolite produzieren, unter denen die sogenannten Polyether oder Carboxylsäure-Ionophore die zahlenmäßig und hinsichtlich ihrer ökonomischen Bedeutung wichtigste Gruppe bilden (WESTLEY, J.W,, 1977, Adv. Appl. Microbiol.v 22., 177-223;WBSTLEY, J.W., 1981, Antibiotics IV, Biosynthesis, Ed, CORCORAIi, J.W., Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-Hew-York, pp. 41-73)· Die volkswirtschaftliche Bedeutung einiger Polyether-Antibiotika aus Streptomyceten, so z. B· Monensin, Lasalocid, Salinomycin u. a., ergibt sich insbesondere aus ihrer Eigenschaft als Futtermittelzusatz für landwirtschaftliche Uutztiere, bevorzugt Wiederkäuer, eine ergotrope Wirkung entfalten zu können· Weiterhin ist der Einsatz als Coccidiostatikum in der Geflügelhaltung bekannt· Ein weiteres potentielles Anwendungsgebiet resultiert aus ihrer cardiovaskulären Wirkung (WESTLEY et al., 1977, Adv. Appl. Microbiol. 22., 177-223). Die Produktion der Polyether-Antibiotika erfolgt auf fermentativem Wege unter Verwendung entsprechender Produktionsstämme von Streptomyceten.It is known that streptomycetes produce a number of secondary ionophore metabolites, among which the so-called polyether or carboxylic acid ionophores constitute the most important group in terms of number and economic importance (WESTLEY, JW ,, 1977, Adv. Appl. Microbiol.v, 22, 177 -223; WBSTLEY, JW, 1981, Antibiotics IV, Biosynthesis, Ed, CORCORAI, JW, Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-Hew-York, pp. 41-73) The economic importance of some streptomycethene polyether antibiotics, supra z. B · monensin, lasalocid, salinomycin and the like a., results in particular from their property as a feed additive for farm animals, preferably ruminants, to develop an ergotrope effect · Furthermore, the use as a coccidiostat in poultry husbandry is known · Another potential application area results from their cardiovascular effect (WESTLEY et al. , 1977, Adv. Appl. Microbiol., 22, 177-223). The production of the polyether antibiotics is carried out by fermentation using appropriate production strains of Streptomycetes.
Die bisher bekannten Polyther-Produkte weisen bei ihrer Anwendung Nachteile, wie z. B. eine relativ hohe Toxizität für Hutztiere,The previously known polyther products have disadvantages in their application, such. B. a relatively high toxicity for breeding animals,
A -» IL'I- ΙΠΛ1 ... Λ f'l j\ i\ O ΛA - »IL'I- ΙΠΛ1 ... Λ f'l j \ i \ O Λ
- 2 aufCWESTLBY et al., 1977, Adv. Appl. Microbiol. 22,, 177-223).2 on CWESTLBY et al., 1977, Adv. Appl. Microbiol. 22, 177-223).
Ziel der ErfindungObject of the invention
Die Erfindung dient der Herstellung eines neuen Polyether-ähnlichen Antibiotikums mit der Bezeichnung Griseochelin, um die Palette bekannter Carboxylsäure-Ionophore durch einen in seiner Struktur neuartigen Wirkstoff zu erweitern, der für die industrielle Tierhaltung als Epgo/'tropikum oder als Coccidiostatikum von potentiellem Uutzen ist.The invention is for the preparation of a new polyether-like antibiotic called griseochelin to expand the range of known carboxylic acid ionophores by a novel in its active ingredient, which is for industrial animal husbandry as Epgo / 'tropikum or as Coccidiostatikum of potential Uutzen ,
Darlegung des Wesens der ErfindtangExplanation of the nature of inventing
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein technologisch einfaches Verfahren zu beschreiben, mit dessen Hilfe das Polyetherähnliche Antibiotikum Griseochelin aus Myzel und/oder Kulturfiltrat eines Streptomyces-Stammes auf einem leicht zugänglichen Medium unter Verwendung billiger Einsatzstoffe hergestellt, mit Hilfe organischer Lösungsmittel extrahiert und mit chromatografisehen Methoden gereinigt werden kann.The invention has for its object to describe a technologically simple method by which the polyether-like antibiotic griseochelin from mycelium and / or culture filtrate of a Streptomyces strain prepared on an easily accessible medium using inexpensive starting materials, extracted using organic solvents and chromatografisehen Methods can be cleaned.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß unter aeroben und sterilen KuItürbedingungen in einem flüssigen Medium mit entsprechenden Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie Mineralsalzen der Mikroorganismus oder seine Varianten und Mutanten gezüchtet werden. Der Mikroorganismus, der in diesem Verfahren Verwendung findet ist Streptomyces griseua ZIMET 43681. Er ist unter dieser Bezeichnung und Registriernummer in der Hinterlegungsstelle des Zentralinstituts für Mikrobiologie und experimentelle Therapie der Akademie der Wissenschaften der DDR, DDR 6900 Jena, Beutenbergstr. 11, hinterlegt.According to the invention the object is achieved in that under microbial and sterile KuItürbedingungen in a liquid medium with appropriate carbon and nitrogen sources and mineral salts of the microorganism or its variants and mutants are bred. The microorganism used in this process is Streptomyces griseua ZIMET 43681. It is under this name and registration number in the depository of the Central Institute for Microbiology and Experimental Therapy of the Academy of Sciences of the GDR, DDR 6900 Jena, Beutenbergstr. 11, deposited.
Biochemische und morphologische Eigenschaften dieses Mikroorganismus sind bei U. GRÄPE et al., 1981 Z„ AlIg. Mikrobiol., 21., 633-642, und U. GRÄPE et al., 1982, Z. AlIg. Mikrobiol., 2j2, 97-106, beschrieben.Biochemical and morphological properties of this microorganism are described in U. GRÄPE et al., 1981 Z "Al. Microbiol., 21, 633-642, and U. GRÄPE et al., 1982, Z. Al. Microbiol., 2j2, 97-106.
Die Kultivierung des Streptomyces griseus ZIMET 43681 erfolgt unter aeroben Bedingungen. In Glucose/Gelatine C5%ig) lyophilisierte Myzelfragmente werden auf geeignete Agarnährböden und nachfolgend in flüssige, vorher sterilisierte Nährmedien eingeimpft, und das entsprechende Myzel wird in an sich bekannter Weise bei einer Tem-Cultivation of Streptomyces griseus ZIMET 43681 is carried out under aerobic conditions. Glucose / gelatin C5% lyophilized mycelial fragments are inoculated onto suitable agar media and subsequently into liquid, previously sterilized nutrient media, and the corresponding mycelium is collected in a manner known per se at a temperature of 30 ° C.
peratur zwischen 20 0C und 38 0G, vorzugsweise bei 28 0C, über einen Zeitraum von 2 Tagen bia 6 Tagen, vorzugsweise 4 Tagen, bei einer Azidität kultiviert, die zu Beginn des Fermentationsprozesses zwischen pH 5,5 und pH 8,3 liegt· Das Mhrmedium besteht aus Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie aua Mineralsalzen. Als Kohlenstoff- und Stickstoffquellen können die in der Fermentationsindustrie üblichen Einsatzstoffe verwendet werden» Die Fermentation des Stammes Streptomyces griseus ZIMET 43681 kann in Steilbrustflaschen und Rundkolben verschiedenen Inhalts, in Glasfermentern sowie in V2A-Tanks durchgeführt werden·temperature between 20 0 C and 38 0 G, preferably cultured at 28 0 C, for a period of 2 days bia 6 days, preferably 4 days, at an acidity at the beginning of the fermentation process is between pH 5.5 and pH 8.3 · The medium consists of carbon and nitrogen sources as well as mineral salts. The feedstocks which are customary in the fermentation industry can be used as sources of carbon and nitrogen. The fermentation of the strain Streptomyces griseus ZIMET 43681 can be carried out in steep-breasted bottles and round-bottomed flasks of various contents, in glass fermenters and in V2A tanks.
Die Isolation des neuen Polyether-ähnlichen Antibiotikums Griseochelin erfolgt in an sich für lipophile Substanzen üblicher Weise nach dem Separieren der angesäuerten Kulturl'dsung sowohl aus dem Myzel durch Extraktion mit organischen Lösungsmittelgemischen, vorzugsweise Chloroform/Methanol (1:1, v/v), als auch aus dem Kulturfiltrat durch Extraktion mit organischen Extraktionsmitteln, vorzugsweise Butylacetat (Abb. 1),The isolation of the new polyether-like antibiotic griseochelin is carried out in per se for lipophilic substances after separation of the acidified culture solution both from the mycelium by extraction with organic solvent mixtures, preferably chloroform / methanol (1: 1, v / v), as well as from the culture filtrate by extraction with organic extractants, preferably butyl acetate (Figure 1),
Durch Einengen der erhaltenen Extrakte des Myzels oder des Kulturfiltrates werden Rohprodukte erhalten, die säulenchromatografisch an organophilen Extrangelen gereinigt werden· Dabei kristallisiert ein Teil des neuen Carboxylsäure-Ionophors Griseochelin I- (Abb· 2) als Komplexsalz mit ein-· und zweiwertigen Kationen, vorzugsweise Calcium, aus·Concentration of the extracts of the mycelium obtained or the culture filtrate raw products are obtained which are purified by column chromatography on organophilic Extrangelen · It crystallized part of the new carboxylic ionophore Griseochelin I - (Fig x 2) as a complex salt with mono- · and divalent cations, preferably Calcium, off ·
Die den Polyether in Form der Eydroxysäure enthaltenden Fraktionen werden durch Säulenchromatografie an Kieselgel unter Verwendung unpolarer Lösungsmittelgemische weiter gereinigt· Das natürlich vorkommende Komplexsalz des Polyethers Griseochelin wird durch Chromatografie an organophilen Dextrangelen in hochreiner Form erhalten· Durch Säulenchromatografie an Kieselgel unter Verwendung eines Essigsäure-haltigen Solvens wird aus dem natürlich vorkommenden Komplexsalz dann gleichfalls hochreine Hydroxysäure J[ hergestellt· Außerdem wird aus I1. durch Behandeln einer Lösung in Chloroform mit Ca(OH)ρ das reine Calciumsalz 2_ erhalten· Auf Grund der physikochemischen Analyse (IR, MS, Osmometrie, 25 MHzThe fractions containing the polyether in the form of the hydroxy acid are further purified by column chromatography on silica gel using nonpolar solvent mixtures. The naturally occurring complex salt of the polyether, griseochelin, is obtained by chromatography on organophilic dextran gels in a highly purified form by column chromatography on silica gel using an acetic acid-containing solvent is then equally high purity hydroxy J [prepared from the naturally occurring complex salt · also, from I first by treating a solution in chloroform with Ca (OH) ρ, the pure calcium salt 2_ obtained. Based on the physicochemical analysis (IR, MS, osmometry, 25 MHz
-5C und 400 MHz H HMR (Bruker WM 400), Atomabsorptionsspektrometrie) besitzt das Polyether-Antibiotikum Griseochelin die in der Abb. 2 gezeigte Struktur 1_ einer Tetrahydropyrantetrahydroxysäure mit der Bnttoformel ^33%οΟ7*- 5 C and 400 MHz H HMR (Bruker WM 400) atomic absorption spectrometry) has the polyether antibiotic Griseochelin the structure shown in Figure 2 1_ a Tetrahydropyrantetrahydroxysäure with the Bnttoformel ^ 33% ο Ο 7 *.
- 4 - - 4 -
Tab. 1 zeigt die physikochemisehen Eigenschaften von J_ und des reinen Calciumsalzes 2.Table 1 shows the physicochemical properties of J_ and the pure calcium salt 2.
Tab· 2 enthält die Zuordnung der JQ UHR-Signale von I-. Die in Abb. 2 gezeigte Struktur von 2. sowie die Bildung von Komplexsalzen mit verschiedenen ein- und zweiwertigen Kationen wurden durch umfangreiche 400 MHz H-Kernresonanzuntersuchungen nachgewiesen (TJ· GRÄFE et al., Publikation in Vorbereitung; L. RADIOS, Publikation in Vorbereitung)·Tab · 2 contains the assignment of J Q CLOCK signals from I -. The structure of 2 shown in Fig. 2 as well as the formation of complex salts with various monovalent and divalent cations were demonstrated by extensive 400 MHz H nuclear resonance studies (TJ · GRÄFE et al., Publication in preparation, L. RADIOS, publication in preparation ) ·
Der nachweis der antibiotischen Wirkung des Polyethers Griseochelin erfolgt durch Testung der methanolischen Lösung der Hydroxysäure I1 oder des Ca-Salzes 2, gegenüber Bacillus subtilis ATCC 6633 als Testkeim mit Hilfe des Loehplatten-Diffusionstests oder des Röhrchen-Verdünnungstestes* Im Lochplatten-Diffusionstest wurde als minimale Hemmkonzentration ein Wert von 1.10 g ermittelt. Im Röhrchen-Verdünnungstest wurde eine signifikante antibiotische Wirkung in einer Konzentration oberhalb von 4.1Qg · ml" nachgewiesen· Die Wachstumshemmung erstreckt sich auch auf andere grampositive Keime, während Griseochelin gegenüber aeroben gramnegativen Organismen und Pilzen unwirksam ist. Die EDcq Ratte, orale Applikation als ITa-SaIz oder Suspension von V) liegt bei über 1 g pro kg, bei intravenöser Verabreichung (Maus) dagegen bei 1-2 mg/kg.The antibiotic action of the polyether griseochelin is demonstrated by testing the methanolic solution of the hydroxy acid I 1 or the Ca salt 2, compared to Bacillus subtilis ATCC 6633 as a test germ using the Loeh plate diffusion test or the tube dilution test * In the perforated plate diffusion test as minimal inhibitory concentration determined a value of 1.10 g. In the tube dilution test, a significant antibiotic effect was detected in a concentration above 4.1Qg.ml ". Growth inhibition also extends to other gram-positive bacteria, while griseochelin is ineffective against aerobic gram-negative organisms and fungi.The EDcq rat, oral administration as ITa -SaIz or suspension of V) is greater than 1 g per kg, with intravenous administration (mouse), however, 1-2 mg / kg.
Ausführungsbeispieleembodiments
1· An Erde lyophil getrocknete Myzelfragmente des Stammes ZIMET 43681 dienen zur Beimpfung eines für Streptomyceten üblichen Agarmediums folgender Zusammensetzung (g.l" ): Backhefe 15, Maisstärke 10, HaCl 5, Fleischpepton 1, Agar 20; pH 7. Inokulumkultüren werden durch Einsaat von Myzelstücken der Agarkultur oder von gefriergetrockenten (lyophilisierten Myzelien als Stammkultur in ein Medium folgender Zusammensetzung erhalten (g.l"1)^: Sojamehl 40, Glucose 40, HaCl 2,5, HaCO^ 5, KH2PO^ 0,25» pH 6,3. Die zweite Vorkultur erfolgt auf dem gleichen Medium. Hach 4Bstündiger Bebrütung der Vorkultur (500 ml Steilbrustflaschen, 80 ml Inhalt, 25 0C, Rundschwingtisch, 240 U.p.M.) wird die stufenweise Maßstabvergrößerung durch Übertragung von Kulturproben in 5 1-Steilbrustflaschen (0,5 1 Medium), und weitere 24 h Bebrütung bei 27 0C durchgeführt. Pur die Kultivierung in JPermentoren wird ein Medium folgender1 · Mycelium fragments of strain ZIMET 43681 dried to soil are used to inoculate an agar medium of the following composition (gl "): baker's yeast 15, corn starch 10, HaCl 5, meat peptone 1, agar 20, pH 7. Inoculum cultures are cultivated by sowing mycelium pieces of the agar culture or of freeze-dried (lyophilized mycelia as stock culture in a medium of the following composition (gl " 1 ): soybean meal 40, glucose 40, HaCl 2.5, HaCO 5, KH 2 PO 4 .25 pH 6,3 . the second preculture is carried out on the same medium. Hach 4Bstündiger incubation the pre-culture (500 ml reagent bottles, 80 ml, 25 0 C, round oscillating table, 240 rpm), the gradually scale up by transmission of culture samples in 5 1 reagent bottles (0.5 1 medium), and a further 24 h incubation at 27 0 C. Pur the cultivation in a medium of the following JPermentoren
- 5 Zusammensetzung eingesetzt (g.l~ ): Sojamehl 30, Glucose 30, NaCl 2,5, CaCO3 2, (HHOgSO- 3, KH3I1O4 0,5; pH 6,2 (vor der Sterilisation)« Die Belüftung erfolgt mit steriler Luft (1:1), die Fermentationszeit beträgt 72 h bis 144 h, vorzugsweise 96 h, die Rührgeschwindigkeit 280 ü«p.H«. Die Schaumbildung kann durch Zusatz kleiner Mengen an siliconhaltigen Schaumschutzmittein kontrolliert werden. Each 96 h Fermentation wird das Myzel durch Separatoren abgetrennt und bei 80 0C getrocknet. Die Kulturlösung wird mit 0,2 Volumenteilen Butylacetat extrahiert.- 5 Composition used (gl ~): soya flour 30, glucose 30, NaCl 2.5, CaCO 3 2, (HHOgSO 3, KH 3 I 1 O 4 0.5, pH 6.2 (before sterilization) "The Aeration is carried out with sterile air (1: 1), the fermentation time is 72 h to 144 h, preferably 96 h, the stirring speed 280 is "pH." Foaming can be controlled by adding small amounts of silicone-containing antifoam agents the mycelium separated by separators and dried at 80 0 C. The culture solution is extracted with 0.2 parts by volume of butyl acetate.
2. 500 1 Kulturlösung ergeben ca. 25 kg feuchten Myzelrückstand, der mit Resten des Mediums vermischt ist und der 5 kg bis 7 kg trocknem Myzelrückstand entspricht. Feuchtes Myzel wird 48 h bei Raumtemperatur mit 5 l/kg Aceton extrahiert. Nach Einengen des organischen Extraktes werden pro kg Trockenmyzel 50 g Rückstand erhalten, der auf eine Kieselgelsäule (1 m χ 2 cm, Benzen als Solvens) gegeben wird. Anschließend erfolgt die Elution zunächst mit 2 1 Benzen, dann mit einem Gemisch von Benzen/Aceton (9:1 bis 4:6, v/v)· Dabei wird eine rohe Fraktion (6 g) erhalten, die durch ihre rote Anfärbung im Dünnschichtchromatogramm bei Verwendung von 1 % Vanillin in konz. HpSO- als Sprühreagenz erkannt werden kann. Die weitere Reinigung erfolgt durch Säulenchromatografie über organophile Dextrangele unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel· Aus den Polyetherfraktionen kristallisieren 0,5 g des natürlich vorkommenden Komplexsalzes mit verschiedenen ein- und zweiwertigen Kationen, vorzugsweise Calcium, aus· Die freie Rydroxysäure 1_ verbleibt in der methanolischen Lösung und. wird mit Aktivkohle unter Rückfluß behandelt. Nach Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum werden 3 g 1. erhalten.2. 500 1 of culture solution yield about 25 kg of wet mycelium residue, which is mixed with the remainder of the medium and which corresponds to 5 kg to 7 kg of dry mycelial residue. Moist mycelium is extracted for 48 h at room temperature with 5 l / kg acetone. After concentration of the organic extract, 50 g of residue are obtained per kg dry mycelium, which is placed on a silica gel column (1 m χ 2 cm, benzene as solvent). The elution is then carried out initially with 2 1 benzene, then with a mixture of benzene / acetone (9: 1 to 4: 6, v / v). This gives a crude fraction (6 g), which is characterized by its red coloration in the thin-layer chromatogram when using 1 % vanillin in conc. HpSO- can be recognized as Sprüheagent. The further purification is carried out by column chromatography on organophilic dextran gels using methanol as solvent. From the polyether fractions 0.5 g of the naturally occurring complex salt crystallize with various monovalent and divalent cations, preferably calcium. The free Rydroxy acid 1_ remains in the methanolic solution and. is treated with charcoal at reflux. After removal of the solvent under reduced pressure, 3 g of 1 are obtained.
3. 250 1 Kulturlösung einer 96 h-Kultur des Streptomyces. griseus ZIMET 43681 werden nach Ansäuern auf pH 2 bis pH 4 mit 0,2 Volumina Butylacetat extrahiert und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Im Rückstand (200 g) wird I1. durch Säulenchromatografie an organophilen Dextrangelen unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel weiter angereidßrt. Aus den Polyetherfraktionen, kenntlich durch ihre charakteristische rote Anfärbung im Dünnschichtchromatogramm durch 1 % Vanillin in konz. H3. 250 1 culture solution of a 96 h culture of Streptomyces. Griseus ZIMET 43681 are extracted after acidification to pH 2 to pH 4 with 0.2 volumes of butyl acetate and the solvent removed in vacuo. In the residue (200 g) becomes I 1 . further purified by column chromatography on organophilic dextran gels using methanol as solvent. From the polyether fractions, recognizable by their characteristic red coloration in the thin-layer chromatogram by 1 % vanillin in conc. H
kristallisieren bis zu 2,5 g des Komplexsalzes mit verschiedenen ein- und zweiwertigen Kationen, vorzugsweise Calcium, aus, das durch Säulenchromatografie an organophilen Dextrangelen unter Verwendung von Methanol/Essigester (1:1, v/v) weiter gereinigt wird· Die die freie Hydroxysäure J[ enthaltenden Fraktionen werden durch Säulenchromatografie an Kieselgel weiter gereinigt· Dabei wird zunächst mit Benzen, dann mit einem Gradienten von Benzen/Aceton (9:1 bis 4:6, v/v) eluiert. Es werden auf diese Weise 1,5 gj, erhalten, die in Methanol gelöst und mit Aktivkohle unter Rückfluß erwärmt werden· Ausbeute: 1 g I1,up to 2.5 g of the complex salt crystallize out with various monovalent and divalent cations, preferably calcium, which are further purified by column chromatography on organophilic dextran gels using methanol / ethyl acetate (1: 1, v / v) Hydroxysäure J [containing fractions are further purified by column chromatography on silica gel. It is eluted first with benzene, then with a gradient of benzene / acetone (9: 1 to 4: 6, v / v). There are obtained in this way 1.5 gj, which are dissolved in methanol and heated with charcoal under reflux · Yield: 1 g I 1 ,
4. Die freie Hydroxysäure I- wird aus dem natürlich vorkommenden Komplexsalz mit verschiedenen ein-"und zweiwertigen Kationen, vorzugsweise Calcium, durch Säulenschromatografie über Kieselgel (Hexan/CHC1,/Eisessig, 45:45:10, v/v) oder durch Lösen des Komplexsalzes in 2,5 % methanolischer KOH (48 h) und nachfolgendes Ansäuern bis pH 1 und Extraktion mit CHCIo erhalten. Ausbeute: quantitativ.4. The free hydroxy acid I - is from the naturally occurring complex salt with various mono- and divalent cations, preferably calcium, by column chromatography on silica gel (hexane / CHCl, / glacial acetic acid, 45:45:10, v / v) or by dissolving of the complex salt in 2.5 % methanolic KOH (48 h) and subsequent acidification to pH 1 and extraction with CHClO.Yield: quantitative.
5. Das reine Ca-SaIz 2_ des Polyether-Antibiotikums Griseochelin 1_ wird durch Schütteln einer Lösung von 1_ i** CHCl^ mit einer halbmolaren Menge an Ca(OH)2 erhalten* Nach Abdampfen des Lösungsmittels wird reines 2_ isoliert, Ausbeute: quantitativ·5. The pure Ca salt 2_ of the polyether antibiotic griseochelin 1_ is obtained by shaking a solution of 1_i ** CHCl ^ with a half molar amount of Ca (OH) 2 *. After evaporation of the solvent pure 2_ is isolated, yield: quantitative ·
Das auf diesem Wege gewonnene Polyether-Antibiotikum Griseochelin 1. und gleichermaßen auch sein Ca-SaIz 2_ sind beideThe polyether antibiotic griseochelin 1 obtained in this way and likewise its Ca salt 2_ are both
- als Epgotropikum in der Hutztierhaltung sowie- As an epigram in the Hützierhaltung as well
- als Coccidiostatikum in der Veterinärmedizin einsetzbar.- Can be used as a coccidiostat in veterinary medicine.
Abb. 1: Aufarbeitungsschema Kulturflüssigkeit (96 h bis 120 h) 50QlFig. 1: work-up scheme culture fluid (96 h to 120 h) 50Ql
Kulturlösung (250 1) Myzelrückstand Culture solution (250 l ) mycelial residue
C5 -7 kg Trockengewicht)C5 -7 kg dry weight)
• Extraktion mit organischen Lösungsmitteln . Rückstand (200 g) Rückstand (100 - 150 g)• Extraction with organic solvents. Residue (200 g) residue (100-150 g)
SG, organophile SC,Kieselgel, GradientSG, organophilic SC, silica gel, gradient
Dextrangele Benzen/AcetonDextrangele benzene / acetone
Rohpolyether 1 Komplexsalz .Rohpolyether 1 (6 g) Crude polyether 1 complex salt. Crude polyether 1 (6 g)
Ua. 1,5 S) (ca. 0,5 g) 'Among others. 1.5 S) (about 0.5 g) '
I SG, organophile DextrangeleI SG, organophilic dextran gels
SC, Kieselgel, Gradient BenzenSC, silica gel, gradient benzene
Aceton Polyether 1_(3 g)Acetone Polyether 1_ (3 g)
Polyether 1 Polyether 1
1515
CH3 CH3 CH 3 CH 3
Abb 2Fig. 2
Tab. 1: Physikochemische Charakteristika des Polyether-Antibiotikums Griseochelin und des Ca-Salzes 2Table 1: Physicochemical characteristics of the polyether antibiotic griseochelin and the Ca salt 2
Freie Hydroxysäure 1 Ga-SaIz 2Free hydroxy acid 1 Ga salt 2
Eigenschaft en Schmelzpunkt (0C) Molekulargewicht (MS) 725 Property en Melting Point ( 0 C) Molecular Weight (MS) 7 25
Molekulargewicht (Osmometrie)Molecular weight (osmometry)
Formelformula
Analyse Gefunden (%) Berechnet IR (CHOU)Analysis Found (%) Calculates IR (CHOU)
Charakteristische MS PeaksCharacteristic MS peaks
farbl. Ölcolor oil
550.4197 (M+-H2O, ber. 550 4233)550.4197 (M + -H 2 O, calc. 550 4233)
0°, (c UO, CHCl.)0 °, (c UO, CHCl)
°33Η6Ο°7° 33 Η 6Ο ° 7
C 71.8, H 10.8, 0 17.4C 71.8, H 10.8, 0 17.4
C 72.0,.Η 10,5, 0 17.5C 72.0, .Η 10.5, 0 17.5
3220 cm"1 (OH) -13220 cm " 1 (OH) -1
3390 cm"1 (QH)3390 cm " 1 (QH)
3250 cm""1 (CO-OH)3250 cm "" 1 (CO-OH)
1732 cm"1 (COOH)1732 cm " 1 (COOH)
1200 cm"1 (CO-OH)1200 cm " 1 (CO-OH)
428,3169 (ber. 428.3138 für C24H44O6)428.3169 (calc. 428.3138 for C 24 H 44 O 6)
229.1429 (ber. 229.1440 für C12H21O4)229.1429 (cf 229.1440 for C 12 H 21 O 4 )
211.1307 (ber. 211.1334 für C12H19O3)211.1307 (report 211.1334 for C 12 H 19 O 3 )
171.1012 (ber. 171.1021 für C9H15O3)171.1012 (calc. 171.1021 for C 9 H 15 O 3 )
153.0931 (ber, 153.0915 für C9H13O2)153.0931 (ber, 153.0915 for C 9 H 13 O 2 )
141.1276 (ber. 141.1279 für C9H17O) weiße Kristalle 235 - 237141.1276 (calc. 141.1279 for C 9 H 17 O) white crystals 235 - 237
+17.3° (c 1,0, CHCl3) 1170± 20+ 17.3 ° (c 1.0, CHCl 3 ) 1170 ± 20
C66H118°nCa 01^0> C6?,5, H 10,0, 0 13,0, Ca C 6?.f, H 10.-?, 0 19.-Ii, Ca 3540 cm"1(OH) 3280 cm**1 (OH) C 66 H 118 ° n Ca 01 ^ 0> C6?, 5, H 10.0, 0 13.0, Ca C 6? .F, H 10.- ?, 0 19.-Ii, Ca 3540 cm -1 (OH) 3280 cm ** 1 (OH)
1580 cm 1425 cm'1580 cm 1425 cm '
—1 -1-1 -1
(CO2"*) as (C02")s(CO 2 "*) as (C0 2 ") s
Tab. 2: Zuordnung der 50 MHz- ^G-NMR-Signale des Polyethers 1 (Bruker, V/P 200/SY, chemische Verschiebung in ppm, relativ zu TMS als int. Standard, CDCl, als Solvens; Multiplizität im off-resonance-Spektrum:"s: Singulett; d: Dublett; t: Triplett; qj Quartett)Table 2: Assignment of the 50 MHz ^ G NMR signals of the polyether 1 (Bruker, V / P 200 / SY, chemical shift in ppm, relative to TMS as int. Standard, CDCl, as solvent, multiplicity in the off- Resonance Spectrum: "s: singlet; d: doublet; t: triplet; qj quartet"
Chemische Verschiebung (ppm) 'Chemical shift (ppm) '
176.09 135.63 134.71 133.57 132.33 84.46 83.45 82.14 76.32 74.36 69*33 42.21 40.04 37.94 , 37.28 36.72 34.37 33.24 32.03 31.88 28.64 26.39 25.19 .20.99 20.67 17.48 17.11 15.58 14.18176.09 135.63 134.71 133.57 132.33 84.46 83.45 82.14 76.32 74.36 69 * 33 42.21 40.04 37.94, 37.28 36.72 34.37 33.24 32.03 31.88 28.64 26.39 25.19 .20.99 20.67 17.48 17.11 15.58 14.18
Chemische Verschiebung (ppm)Chemical shift (ppm)
12.38 11.27 10.87 10.7712.38 11.27 10.87 10.77
Claims (4)
Priority Applications (1)
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| DD26489784A DD228302A1 (en) | 1984-03-08 | 1984-03-08 | METHOD FOR PRODUCING A POLYETHERAL-SIMILAR ANTIBIOTICS |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| DD26489784A DD228302A1 (en) | 1984-03-08 | 1984-03-08 | METHOD FOR PRODUCING A POLYETHERAL-SIMILAR ANTIBIOTICS |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD228302A1 true DD228302A1 (en) | 1985-10-09 |
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ID=5558551
Family Applications (1)
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1984
- 1984-03-08 DD DD26489784A patent/DD228302A1/en not_active IP Right Cessation
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |