DD241791A1 - Selektives adsorbens zur bildung von immunkomplexen - Google Patents
Selektives adsorbens zur bildung von immunkomplexen Download PDFInfo
- Publication number
- DD241791A1 DD241791A1 DD28179585A DD28179585A DD241791A1 DD 241791 A1 DD241791 A1 DD 241791A1 DD 28179585 A DD28179585 A DD 28179585A DD 28179585 A DD28179585 A DD 28179585A DD 241791 A1 DD241791 A1 DD 241791A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- immune complexes
- binding
- item
- selective adsorbent
- complexes according
- Prior art date
Links
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 18
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000006087 Silane Coupling Agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000005245 sintering Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 claims 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 claims 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 2
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010062746 Carditis Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010058556 Serositis Diseases 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088160 Staphylococcal Protein A Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005299 abrasion Methods 0.000 description 1
- 125000005396 acrylic acid ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- QXJJQWWVWRCVQT-UHFFFAOYSA-K calcium;sodium;phosphate Chemical compound [Na+].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O QXJJQWWVWRCVQT-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000008191 cerebritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- -1 diazo, sulfhydryl Chemical group 0.000 description 1
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000587 glutaral Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000001951 hemoperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021646 inflammation of heart layer Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000018 nitroso group Chemical group N(=O)* 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- External Artificial Organs (AREA)
Abstract
Die Erfindung offenbart ein Adsorbens zur selektiven und schonenden Entfernung von zirkulierenden Immunkomplexen aus Koerperfluessigkeiten durch biospezifische Bindung derselben an das Protein C1q, das an siliziumdioxidhaltige feste Phasen mittels Silanhaftmitteln und homo- oder heterobifunktionelle Reagentien immobilisiert ist, wobei die so gebundenen Immunkomplexe durch Abtrennung der festen Phase separiert werden und die feste Phase durch Behandlung mit nicht denaturierenden Medien regeneriert wird.
Description
Anwendungsgebiet der Erfindung'
Die Erfindung betrifft ein Adsorbens für die selektive Entfernung von zirkulierenden Immunkomplexen aus Körperflüssigkeiten unter wiederholtem und reproduzierbarem Einsatz eines beschichteten Trägers. Das Verfahren ist anwendbar in der Pharmazeutischen Industrie sowie der Medizin.
Es gilt als gesichert, daß den in Körperflüssigkeiten, z. B. im Blut, zirkulierenden Antigen- Antikörper-Komplexen (Immunkomplexen) eine wesentliche pathogenetische Bedeutung bei einer Vielzahl von Erkrankungen (u. a. Autoimmunerkrankungen wie Lupus erythematodes visceralis und Rheumatoid-Arthritis, Transplantatabstoßung, Infektionen, möglicherweise auch bei Neoplasien) zukommt. Zirkulierende Immunkomplexe können sich an den Gefäßwänden ablagern und über.verschiedene Wirkungsmechanismen entzündliche Reaktionen in den jeweils disponierten Organen mit den entsprechenden Symptomen (u.a. Vasculitis, Arthritis, Nephritis, Serositis, Karditis, Cerebritis, Anämie, Leukopenie, Throbopenie) induzieren. Insbesondere bei Autoimmunerkrankungen korreliert die Immunkomplexkonzentration im Serum/ Plasma oder anderen Körperflüssigkeiten mit der Aktvitität der Erkrankung. Deshalb erscheint es sinnvoll, den Pathomechanismus dieser Erkrankungen durch Entfernung zirkulierender Immunkomplexe aus den Körperflüssigkeiten zu beeinflussen, um dadurch das Fortschreiten der oben erwähnten Erkrankungen und unerwünschte Immunreaktionen zu verhindern, die Krankheitsaktivität zu mindern, die damit verbundenen Symptome zu lindern bzw. zu beseitigen. Die Erfolge der Plasmapheresebehandlung werden u.a. auf die Beseitigung bzw. Reduzierung der pathogenetisch bedeutsamen Immunkomplexe zurückgeführt [vgl. E.Apostoloff et al., Dt. Gesundheitsw. 34,64(1979); H. F. Parry et al., Ann. Rheum. Dis. 40, 224-228 (1981); T.Sharon et al., Plasma Ther. Transfus. Technol. 3,163-169 (1982); M.Valbonesi et al., Int. J. Art. Organs 4, 234-236 (1981); J.V.Jones et al., Arthritis Rheum 24,1113-1120 (1981)].
Nachteile dieser Methode sind das nicht selektive Entfernen aller Plasmabestandteile und die dadurch erforderliche Zuführung größerer Mengen Fremdplasma oder Humanalbumin, die auch aus Kapazitäts- und ökonomischen Gründen limitierend sein können. Aus den genannten Gründen existieren seit einigen Jahren Bemühungen um die Entwicklung von Adsorbentien, die eine selektive Entfernung zirkulierender Immunkomplexe aus Körperflüssigkeiten erlauben. Hierbei wurden im wesentlichen folgende Wege beschriften:
— Staphylokokken-Protein A, an einen unlöslichen Träger fixiert (fixierte Staphylokokken, Protein A-Sepharose) [vgl. D.S.Termanetal.,J. Immunol. 124,795(1980); New England J. Med. 305 1195 (1981); E. Behm u. H. Klinkmann, in Plasma Separation and Plasma Fractionation, S.254-265 (Karger, Basel 1983)]
— Poröses Harz vom Akrylsäureester-Typ [z. B. XAD-7, geliefert von Rohm und Hass Co., USA; vgl. T. Agishi, Zinko Zoki, 9,264 (1980)]
— Kationenaustauschglied wie Carboxymethylcellulose [vgl. L.D.Johnson et al., Can. J. Biochem. 42, (1964)]
— Adsorbens, enthaltend eine Oberfläche und mit der Oberfläche verbunden wenigstens ein hydrophobes Glied mit 6-700 Kohlenstoff-Atom en und wenigstens eine negative Ladung erzeugendes Glied [T. Kuroda et al., japanisches Patent J. P. P58-59199, P58-59197]
Diese Adsorbentien haben jedoch verschiedene Nachteile, Protein A ist in der Lage, Immunkomplexe zu binden; jedoch nicht ausreichend selektiv, denn es bindet ebenfalls nicht immunkomplexgebundenes IgG. Außerdem ist Protein A ein Fremdprotein mit den ihm anhaftenden Nachteilen beim Einsatz des Adsorbens, wenn es in Berührung mit den Körperflüssigkeiten gehalten wird. Die Herstellungskosten für Protein A sind sehr hoch. Die Verwendung inaktivierter Staphylokokken als „natürlichen" Träger des Protein A ermöglicht den Einsatz des Protein A ohne seine weitere Reinigung, bringt aber zusätzlich Probleme bei Berührung der Körperflüssigkeit mit den inaktivierten Bakterien (z. B. Freisetzen von Pyrogenen) mit sich. Weiterhin sollen Protein A-Trägerdas Komplementsystem aktivieren.
Das poröse Harz vom Acrylsäureester-Typ und Carboxymethylcellulose besitzen nur ungenügendes Adsorptionsvermögen und unzureichende Adsorptionsspezifität (u. a. wird Albumin aus Körperflüssigkeit absorbiert). Das aus einem hydrophoben und einem eine negative Ladung enthaltenden Glied bestehende Adsorbens ist ebenfalls für die Adsorption von Immunkomplexen nicht ausreichend spezifisch.
Es ist Ziel der Erfindung, zirkulierende Immunkomplexe selektiv, einfach und schonend aus Körperflüssigkeiten unter Verwendung eines an einer festen Phase (Träger) gebundenen humanen C1 q zu entfernen. Die Träger sollen sich einfach, schnell und reproduzierbar zwecks Wiederverwendung regenerieren und sterilisieren lassen.
Die Erfindung hat die Aufgabe, zirkulierende Immunkohnplexe aus Körperflüssigkeiten an eine feste Phase (Träger) biospezifisch zu binden, wobei die feste Phase wiederverwendbar und sterilisierbar sein soll. Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß das Protein C1q — eine Untereinheit der ersten Komplementkomponente — an siliziumdioxidhaltige Träger, vorzugsweise poröses Glas, Glasfasern oderflächenförmige Glasfaserfilter über Silanhaftmittel kovalent gebunden wird und dieses trägergebundene C1 q zur Bindung und Entfernung von zirkulierenden Immunkomplexen aus Körperflüssigkeiten eingesetzt wird, wobei die an dasCiq gebundenen Immunkomplexe aus den Körperflüssigkeiten durch Abtrennung der festen Phase separiert werden und die feste Phase durch Behandlung mit nicht denaturierenden Medien funktionell regeneriert wird. Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß das im menschlichen und tierischen Blut vorkommende und für die Bindung von Immunkomplexen und deren physiologische Eliminierung verantwortliche Protein C1q an siliziumdioxidhaltige Träger mit hinreichend großer Oberfläche und Porösität auf an sich bekannte vorherige chemische Oberflächenmodifizierung des Trägers mit Silanhaftmitteln und hetero- oder homobifunktionellen Reagenzien gebunden wird und dieses trägergebundene C1q für die in vivo- und in vitro-Entfernung der zirkulierenden Immunkomplexe aus Körperflüssigkeiten eingesetzt wird und danach die so gebundenen Immunkomplexe durch nicht denaturierende Medien wieder abgespalten werden, so daß die mit C1q beladene Matrix nach Sterilisation erneut eingesetzt werden kann. Der Träger hat eine unterschiedliche geometrische Form, wobei kugelförmige oder faserförmige Träger mit oder ohne Zusätze, die auch durch Packung, Sinterung oder Verwendung eines Bindemittels zu übergeordneten Strukturen (wie Filtern, Fritten und dergleichen) mit definierter Durchlässigkeit angeordnet sein können, besonders geeignet sind. Die siliziumdioxidhaltigen Materialien sind im wesentlichen poröse Gläser (s. hierzu F.Janowski, W. Heyer: Poröse Gläser, Deutscher Verlag für Grundstoffindustrie, Leipzig 1982), die bekanntlich problemlos sterilisiert und steril gehalten werden können, wobei deren Partikelgröße, Struktur und Porösität genau festgelegt wird. Besonders vorteilhaft sind ideal sphärische Partikel (DD-WP C03B2595548, DD-WP BO1J2694382, DD-WP BO1J2694390) mit Partikelgrößen zwischen 1 bis 1 000Mm und Porenweiten von 0,05 bis ΙΟΟμ,ηη, wobei sich die Porenweiten und die zur Verfügung stehende Fläche, die die Kapazität des Trägers entscheidend beeinflußt, reziprok proportional verhalten. Die ideal sphärische Form der Matrix hat einen entscheidenden Einfluß auf die schonenden Bedingungen des Verfahrens, da die auf die Proteine einwirkenden Scherkräfte drastisch reduziert sind. Des weiteren zeichnen sich die ideal sphärischen und abriebfesten Glaspartikel durch ihre Erosionsbeständigkeit, ihre günstigen hydrodynamischen Eigenschaften, ihre Variationsbreite der Textur und somit auch der Durchflußeigenschaften sowie durch die Abwesenheit toxischer Bestandteile aus. Insbesondere unter dem Aspekt technologischer Verfahren sind flächenförmige Träger oder Patronen mit Kornmaterial oder Membranen aus porösem Glas mit übergeordneten Strukturen bzw. flächenförmige Träger, die als Filter in geeigneten Filtrationssystemen eingesetzt werden, hervorzuheben. Hier zeichnen sich besonders Glasfasern enthaltende Filtermaterialien aufgrund ihrer mechanischen Festigkeit aus.
Die nicht denaturierenden Medien für die Abspaltung der gebundenen Immunkomplexe setzen sich aus gepufferten Lösungen hoher lonenstärke zusammen, wobei insbesondere 0,5 bis3M NaCI-Lösungen geeignet sind. Auf HaitharicAit Hanrlhahiinn nnri Wierifirverwenduna des C1a-beladenen Träaers wirkt sich besonders vorteilhaft aus, daß
Die Oberflächenmodifizierung der siliziumdioxidhaltigen Träger zum Zwecke der Schaffung von Bindungen für das Eingehen kovalenter Bindungen mit dem Protein C1q erfolgt durch sogenannte Silanhaftmittel wie
x-(GH0) „-Si ™- OR
d n ...^^ OR
wobei R Alkylreste und χ Amino-, Epoxy-, Diazo-, Sulfhydryl- oder Nitroso-Gruppen sind und durch Umsetzen der verbleibenden funktioneilen Gruppe auf an sich bekannte Art und Weise mit homo- oder heterofunktionellen Reagentien oder direkte Umsetzung mit den reaktiven Gruppen des Proteins. Die so mit dem Protein C1q beladene Matrix wird dann zur Bindung und Entfernung der zirkulierenden Immunkomplexe eingesetzt, wobei die Matrix insbesondere im Durchflußverfahren in üblicher Weise (Hämoperfusion, Plasmaperfusion) aber auch im Batch-Verfahren (bei der Isolierung von Immunkomplexen für in vitro-Untersuchungen) genutzt werden kann. Nach Ablauf der Reaktion werden die gebundenen Immunkomplexe durch geeignete nicht denaturierende Medien wie 2 M NaCI-Lösung abgespalten, so daß das kovalent gebundene C1 q zu einem erneuten Einsatz zur Verfügung steht. Das erfindungsgemäße Verfahren nutzt die physiologische Funktion des Proteins C1q für die selektive und schonende Bindung und damit Entfernung von zirkulierenden Immunkomplexen aus Körperflüssigkeiten. Im folgenden wird die Entfernung an einem Beispiel erläutert.
Beispiel: Poröse Glaskugeln mit einer Porenweite von 1 350 A werden nach Kochen mit 30%iger Salpetersäure und neutral Waschen mit einer 2%igen Lösung des Silanhaftmittels NB114 (Aminopropyltriäthoxysilan, VEB Chemiewerk Nünchritz) in Äthanol/Wasser (1:1), pH3,5 für 4h bei 600C und 6h bei 120°C aktiviert.
Nach Waschen mit Äthanol/Wasser sowie mehrmaligem Waschen mit PBS-Puffer, pH 7,4, wird das so funktionalisierte Glas mit 2%igem Glutardialdehyd in 0,1 M Phosphat-Puffer, pH 6,8, für 2 Stunden bei 37°C inkubiert. Nach erneutem Waschen mit PBS-Puffer wird das aktivierte Glas mit C1 q (500^g/ml) in PBS-Puffer, pH 7,4, der 1OmM EDTA enthält, versetzt und 4 Stunden bei 37°C inkubiert. Nach weiteren Waschvorgängen werden die noch freien Aldehydgruppen mit 1 M Äthanolaminlösung blockiert. Nach wiederholtem Waschen mit 0,01 M Phosphatpuffer, pH 7,4, der 0,05 M NaCI enthält, wird diese mit C1q-beladene Matrix zur Bindung der zirkulierenden Immunkomplexe eingesetzt. Hierzu werden die mitCiq beladenen Glaskugeln mit einem Patientenserum, das erhöhte Konzentrationen an zirkulierenden Immunkomplexen enthält (Patient mit einem Lupus erythematodes visceralis), im Batch-Verfahren versetzt und 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Nach Entfernung des Trägers durch Dekantieren oder Zentrifugieren wird dieser im folgenden mit 0,01 M Phosphat-Puffer, pH 7,4,0,05 M NaCI gewaschen und anschließend mit 2 M NaCI in PBS-Puffer, pH 7,4, regeneriert. Die Bestimmung der Immunkomplexe erfolgte mit einem Ciq-Festphasen-Enzymimmunoassay. Zur Ermittlung der unspezifischen Bindungen an den-Träger wurde die Eiweißkonzentration im spezifischen Eluat nach Lowry bestimmt sowie eine Immunelektrophorese durchgeführt. Tabelle 1 zeigt ein charakteristisches Ergebnis einer derartigen Behandlung.
zirkulierende Immunkomplexe
(/xg/ml Äquivalente
aggregierteslgG) (%)
Patientenserum
— vor Behandlung 90 100
. — nach Behandlung 68 73
Claims (12)
- Erfindungsanspruch:1. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen aus Körperflüssigkeiten auf der Grundlage biospezifischer Wechselwirkungen an festen Phasen, gekennzeichnet dadurch, daß als feste Phase siliziumdioxidhaltige Materialien verwendet werden, die nach vorheriger, an sich bekannter chemischer Oberflächenmodifizierung mit Silanhaftmitteln und hetero-oder homobifunktionellen Reagenzien oder direkt mit dem Protein C1q beladen werden und daß nach Bindung der zirkulierenden Immunkomplexe an das C1 q der festen Phase durch Perfusion von Körperflüssigkeiten (z. B. Blut, Plasma) und Abtrennung der festen Phase eine Regenerierung derfesten Phase durch Behandlung mit nicht denaturierenden Medien und Wiederverwendung der festen Phase erfolgt.
- 2. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen aus Körperflüssigkeiten nach Punkt !,gekennzeichnet dadurch, daß die siliziumdioxidhaltigen Materialien Formkörper aus Glas oder glasähnlichen Materialien sind.
- 3. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 2, gekennzeichnet dadurch, daß die Formkörper als Kugeln vorliegen.
- 4. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 2, gekennzeichnet dadurch, daß die Formkörper als Fasern vorliegen.
- 5. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 3, gekennzeichnet dadurch, daß die Kugeln porös sind und eine Porenweite von 0,05 bis ΙΟΟμ,Γη aufweisen.
- 6. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 3, gekennzeichnet dadurch, daß die Kugeln eine Teilchengröße von 1-1000μ,ιη aufweisen.
- 7. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 2-6, gekennzeichnet dadurch, daß die Formkörper durch Packung, Sinterung oder durch Verwendung eines Bindemittels zu übergeordneten Strukturen mit definierter Durchlässigkeit geformt sind.
- 8. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 4 und 7, gekennzeichnet dadurch, daß die übergeordneten Strukturen eine vorwiegend flächenförmige Ausdehnung wie Filter, Fritten, Hohlzylinder aufweisen.
- 9. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 4 und 7, gekennzeichnet dadurch, daß die Fasern als Vliese oder Gewebe vorliegen.
- 10. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 7, gekennzeichnet dadurch, daß die übergeordneten Strukturen vorwiegend Kolonnenpackungen sind.
- 11. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 1 bis 10, gekennzeichnet dadurch, daß die Oberflächenmodifizierung des Glases durch Silanhaftmittel und homo- oder heterobifunktionellen Reagenzien erfolgt.
- 12. Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen nach Punkt 1 bis 11, gekennzeichnet dadurch, daß die nicht denaturierenden Medien gepufferte Lösungen hoher lonenstärke sind.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD28179585A DD241791A1 (de) | 1985-10-16 | 1985-10-16 | Selektives adsorbens zur bildung von immunkomplexen |
| EP86113784A EP0222146B1 (de) | 1985-10-16 | 1986-10-04 | Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen |
| DE86113784T DE3689645D1 (de) | 1985-10-16 | 1986-10-04 | Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD28179585A DD241791A1 (de) | 1985-10-16 | 1985-10-16 | Selektives adsorbens zur bildung von immunkomplexen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD241791A1 true DD241791A1 (de) | 1986-12-24 |
Family
ID=5572191
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD28179585A DD241791A1 (de) | 1985-10-16 | 1985-10-16 | Selektives adsorbens zur bildung von immunkomplexen |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD241791A1 (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19727830A1 (de) * | 1996-07-12 | 1998-02-05 | Imtec Immundiagnostika Gmbh | Selektives Adsorbens zur Bindung von Retroviren |
-
1985
- 1985-10-16 DD DD28179585A patent/DD241791A1/de unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19727830A1 (de) * | 1996-07-12 | 1998-02-05 | Imtec Immundiagnostika Gmbh | Selektives Adsorbens zur Bindung von Retroviren |
| DE19727830C2 (de) * | 1996-07-12 | 1998-10-15 | Imtec Immundiagnostika Gmbh | Selektives Adsorbens zur Bindung von Retroviren |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3382834T3 (de) | Sorbentmittel und dessen Herstellungsverfahren | |
| DE60319702T2 (de) | Polymeraffinitätsmatrix, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung | |
| AT509192B1 (de) | Sorptionsmittel für endotoxine | |
| AT507846B1 (de) | Sorptionsmittel für endotoxine | |
| DE2839170A1 (de) | Chromatographisches material | |
| DE69432859T2 (de) | Verfahren zur reinigung von kollagenase | |
| DE19538641C2 (de) | Patientenspezifische Immunadsorber für die extrakorporale Apherese und Verfahren für deren Herstellung | |
| JPH026750A (ja) | 生物試料分離用のカラム充填材若しくはクロマトグラフィー部材として用いるアガロースコーティングガラス繊維 | |
| EP0858831B1 (de) | Vorrichtung zur Reinigung proteinhaltiger Lösungen, Verfahren zur Herstellung eines Trägermaterials für die Vorrichtung und Verwendung der Vorrichtung | |
| DE69935929T2 (de) | Verfahren zur reinigung von blutbestandteilen | |
| EP0222146B1 (de) | Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen | |
| DE4113602A1 (de) | Endotoxinadsorber und verfahren zu seiner herstellung | |
| DE19900681A1 (de) | Verfahren zur Reinigung von Nukleinsäuren | |
| DD241791A1 (de) | Selektives adsorbens zur bildung von immunkomplexen | |
| EP0035726B1 (de) | Verfahren und diagnostisches Mittel zur direkten Bestimmung des Lipidgehaltes der beta-Lipoproteine des Blutes | |
| DE4209988A1 (de) | Endotoxinadsorber und verfahren zu seiner herstellung | |
| WO2002089975A1 (de) | Adsorbentien zur perfusion von blut und deren herstellungsverfahren | |
| EP0888172A1 (de) | Endotoxin-spezifische membranen | |
| DE19740770A1 (de) | Mikrofiltrationsfilterschicht sowie deren Verwendung | |
| DE10053553C2 (de) | Vorrichtung zum Nachweis und zum Anreichern von Biomolekülen | |
| EP0321597A1 (de) | Selektives Adsorbens zur Bindung von Lipoproteinen niedriger Dichte | |
| DD241789A1 (de) | Selektives adsorbens zur bindung von immunkomplexen | |
| DD241790A1 (de) | Selektives adsorbens zur bindung von immunkomplexen | |
| DD280174A1 (de) | Verfahren zur beseitigung von immunglobulinaggregaten in immunglobulinpraeparaten | |
| DD265470A1 (de) | Spezifisches adsorbens zur bindung von anti-dna-autoantikoerpern |