DD268162A1 - Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpern gegen humanes immunglobulin m (igm) - Google Patents
Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpern gegen humanes immunglobulin m (igm) Download PDFInfo
- Publication number
- DD268162A1 DD268162A1 DD31218488A DD31218488A DD268162A1 DD 268162 A1 DD268162 A1 DD 268162A1 DD 31218488 A DD31218488 A DD 31218488A DD 31218488 A DD31218488 A DD 31218488A DD 268162 A1 DD268162 A1 DD 268162A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- igm
- sifin
- zim
- antibody
- antibodies
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims abstract description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 229940094342 human immunoglobulin m Drugs 0.000 claims abstract 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims abstract 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 abstract description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 10
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTFZMVUYAILXSB-UHFFFAOYSA-N 2,6,10,10-tetramethylpentadecane Chemical compound CCCCCC(C)(C)CCCC(C)CCCC(C)C MTFZMVUYAILXSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 206010057179 Toxoplasma infections Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000013377 clone selection method Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikoerper gegen humanes Immunglobulin M (IgM). Hauptanwendungsgebiet ist die medizinische Diagnostik. Es ist das Ziel dieser Erfindung, hochspezifische und hochreaktive Antikoerper in leicht beherrschbarer Weise und kostenguenstig in gereinigter Form herzustellen, um humanes IgM aus Koerperfluessigkeiten ueber diese Antikoerper fuer die Diagnostik akuter, erregerbedingter Erkrankungen an geeignete Traeger zu binden. Erfindungsgemaess werden Milzlymphozyten von AJ-Maeusen, die mit gereinigtem humanem IgM immunisiert wurden, mit Mausmyelomzellen der Linie P 3-X 63-AG 8.653 fusioniert und die antikoerperbildenden Hybridome Sifin - IgM - 8 D 10 (ZIM-Nr. 0254), Sifin - IgM - 9 G 1 (ZIM-Nr. 0253), Sifin - IgM - 10 F 6 (ZIM-Nr. 0252), Sifin - IgM - 11 G 4 (ZIM-Nr. 0255) fuer die Antikoerperproduktion ausgewaehlt.
Description
r!:?r*u 3 Seiten Zeichnungen
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern gegen humanes IgM. Das Hauptanwendungsgebiet dieser monoklonalen Antikörper liegt in der Medizin z. B. in der Diagnostik akuter erregerbedingter Erkrankungen in klinisch-diagnostischen Einrichtungen des Gesundheitswesens.
In der Diagnostik von akuten erregerbedingten Erkrankungen werden gegenwärtig der Bestimmung von spezifischen IgM-Antikörpern Prioritäten eingeräumt. Neben den klassischen Nachweismethoden der Auftrennung der Patientenseren mittels Dichtegradientenzentrifugation oder Gelfiltration und des anschließenden Nachweises des erregorspezifischen IgM mittels Hämagglutinationshemmtesten oder indirekten Fluoreszenzantikörpertesten haben sich gegenwärtig Enzymir imunbestimmungsmethoden (EIA) durchgesetzt (Voller et al., Bull. World Health Organ. 53 [1976], 55; Blomborg et al., J.Clin. Microbiol. 17 [1983], 1081; Kurstaket al., Bull. World Heclth Organ. 64 [1986], 465). Die anfänglich gewählten indirekten EIA-Methoden, bei denen trägerfixiertes Antigen spezifische Antikörper aus dem Patientenserum bindet, wurden wegen ihrer häufigen falsch negativen Aussagen, hervorgerufen durch die Konkurrenz von erregerspezifischen 3- und IgM-Antikörpern, zu Gunsten von direkten .IgM-capture-EIA'-Methoden zurückgedrängt.
Beim IgM-Antikörper-capture-EIA wird selektiv das IgM aus menschlichen Körperflüssigkeiten übT einen trägerfixierten Anti-Human-IgM-Antikörpor an die .feste Phase" gebunden (Duermeyer et al., J. Clin. Microbiol. 12 [19&U], 805; Schmitz et al., J. Gen.
Virol. 50 [1980], 59; Isaac e' il„ J. Med. Virol. 64 [1982], 55; Nielsen et al., J. Med. Virol. 22 [1987], 67). Nichterfaßtes IgG wird durch Waschen entfernt. Der erregerspezifische Nachweis wird über ein markiertes Antigen bzw. über einen markierten antigenspezifischen Antikörper geführt. Gegen die wichtigsten Infektionserkrankungen (Röteln, CMV1 Hepatitis A und B, Toxoplasmose, Mumps, Masern, Lues etc.) liegen international indirekte und direkte Testsysteme ve Der Aussagewert der IgM-capture-EIA hängt von der Qualität des trägergebundenen Anti-Human-Testreagens ab. Die Produktion konventioneller polyklonaler Antikörper benötigt extensive Absorptionsprozeduren zur Eliminierung von kreuzreagierenden Antikörpern. Auch die Bindungscharakteristika schwanken teilweise erheblich von Tier zu Tier und Abnahme zu Abnahme, so daß eine Chargenstandardisierung große Schwierigkeiten bereitet. Diese Probleme können durch monoklonal . '.nti-Human-Mntikorper (μ-kettenspezifisch) überwunden werden.
Die nach Spezifität und Bindungsverhalten für ein derartiaes Testsystem ausgewählten mAK garantieren die Standardisierung der Herstellung dos Festphasenantikörpers und seines Verhaltens im Testsystem.
Die bisher in der DDR vorliegenden monoklonalen Antikörper gegen humanes IgM, BL-lgM/1 (DD-PS 230879) und BL-lgM/11 (registriert in der ZIM-Hinterlegungsstolle unter den Nummern ZIM-0056 und ZIM-0093) sind für den genannten Anwendungsbereich nur t adingt einsetzbar. In vergleichenden Untersuchungen zum Toxoplasmose· und CMV-EIA war der BL-lgM/1-Antikörper pol>klona'en Antikörperpräparationen deutlich unterlegen.
Die Erfindung hat das Zitl, Ir? leicht beherrschbarer Weise und kostengünstig monoklonale Antikörper gegen humanes IgM bereitzustellen, die in ihren Reaktionsparametern (Spezifität und Affinität) für einen IgM-AntikrVper-capture-EIA geeignei sind und deren Stabilität in der Angebotsform „Lyophilisat" gewährleistet ist.
Darlegung des Wesens der Erfindung
Der Erfindung liegt die Aufgabs zugrunde, solche monoklonalen Antikörper mit Verfahren einzufinden, die eine frühestmögliche Auswahl der Antikörper orlauben. Das crfindungsgomäße Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern gegen humanes IgV. ist dadurch gekennzeichnet, daß aus dem Serum gesunder Spender humanes IgM nach an sich bekannten Methoden, wie Ammoniumsulfat-Präzipitation, Ultrazentrifugation und lonenaustauschchromatog.afie, isoliert wird, mit dem 8-10 Wochen alte weibliche AJ-Mäuse durch mehrere intreperitoneale Applikationen des Antigens immunisiert werden. Die Lymphozyten werden aus den Milzen der immunisierten Mäuse in bekannter Weise isoliert, mit Mausmyelomzellen der Linie P3-X63 -AG8.653 fusioniert und die Zellsuspension in Selektionsmedium kultiviert. Die Zellkulturüberstände mit Hybridzellwachstum werden auf antigenspezifischo Antikörperbildung im direkten EIA geprüft. Nach Klonselektion der positiv reagierenden Kavitäten und Überführung in die nächstgrößeren Zellkulturgefäße werden nur die Hybridzellen weiter vermehrt, die im direkten EIA mit humanem IgM, nicht aber mit den Immunglobulinen der Isotypen G und A redgieren. Die so erhaltenen Hybridoma werden kloniert und rekloniert und die erhaltenen spezifischen Subklone nach an sich bekannten Verfahren in flüssigem Stickstoff kryokonserviert.
Für die Entccoeidung, welche monoklonalen Antikörper geeignet sind, in einem Capture-EIA humanes IgM aus verdünnten Körperflüssigkviten zu binden, wird ein indirekter EIA herangezogen.
Nach bekannten Methoden wird durch einen polyklonalen Anti-Human-lgM-Festphasen-Antikörper IgM aus einem verdünnten Serumpool gebunden und den monoklonalen Antikörpern der Zellkulturüberstände als „natives Antigen" präsentiert. Die gebundenen monoklonalen Antikörper werden wie im direkten Nachweissystem bestimmt. Unter den etablierten Hybridomen befinden sich 4 Zellinien
Sifin-lgM-8D10 Sifin-lgM-9G1 Sifin-lgM-10F6 . Sifin-lgM-11G4,
die im direkten und indirekten EIA gleichermaßen hochaktiv reagieren. Diese Hybridome wurden in der ZIM-Hinterlegungsstelle für Zellinien unter den Nummern ZIM-0254, ZIM-0253, ZIM-0252 und ZIM-0255 hinterlegt.
Die monoklonalen Antikörper dieser Zellinien sind vom IgGHsotyp. Die μ-Kettenspezifität ist durch den Immunoblottest belegt.
Der Hauptvorteil derartiger Antikörper liegt in der strikten Standardisierung der Herstellung von hochspezifischen Testreagenzien, mit denen klinisch relevante Aussagen, wie die Ermittlung des akuten Infektionsstatus bei Schwangeren (Röteln, Toxoplasmose), mit höchstmöglicher Präzision getroffen werden müssen.
Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten monoklonalen Anti-Human-lgM-Antikörper weisen am Beispiel des Antikörpers der Zelünie Sifin-lgM-11G4 im indirekten EIA im Vergleich zum Antikörper der Zellinie BL-lgM/1 deutlich höhere Bindungseigenschaften auf (Abb. 1).
Die Überprüfung der Fangeigenschaften des nach an sich bekannten Verfahren gereinigten monoklonalen Antikörpers Sifin—IgM-11G4 weist im Gegensatz zu den monoklonalen Antikörpern BL-lgM/1 und BL-lgM/11 auf eine wesentliche Erhöhung der Empfindlichkeit für Capture-EIA in der Diagnostik akuter erregerbedingter Erkrankungen hin (Abb. 2).
Im direkten IgM-Antikörper-capture-EIA können gegenüber polyklonalen Anti-Human-lgM mit dem monoklonalen Antikörper Sifin-lgM-11G4 sowohl für die Diagnostik akuter Cytomegalievirusinfektionen (Abb. 3) uis auch akuter Toxoplaemoseinfektionen deutlich empfindlichere Testbedingungen geschaffen werden.
1. Milzzellen von AJ-Mäusen werden nach 3 intraperitonealen Injektionen mit einer menschlichen IgM-Fraktion gewonnen und nach den, bekannten Techniken (Kearney et al., J. Immunol. 123 [1979], 1548) mit Zellen der Myelomzellinie P3- X63-AG8.653 fusioniert. Die Zellsuspension wird in HAT-Selektionsmedium (Littlefield, Science 145 [1964), 709) RPMI 1640, supplemented mit 20% fetalem Kälberserum, 2mMol/i Glutamin, 5 χ 10~6Mol/l 2-Mercaptoethanol, 2g/l Natriumbicarbonat, 10mMol/l Hepes,240IE/ml Penicillin, 150pg/mlStreptomycin,4 x 10"'Mol/l Aminopterin. 1 χ 10"4Mol/l Hypoxanthin, 1,6 χ 10"6Mol/IThymidin, unter Zusatz von 1 χ 105Maus-Peritonealexsudatzellen/ml Kulturmedium bei 370C in einer wassergesättigten 5-6%igen CGyAtmosphäre irkubicrt.
2. Zur Selektion von Hybridzellen, die spezifische Antikörper gegen humanes IgM in das Kulturmedium sezernieren, wird nach dem ersten Mediumwechsel ein direkter EIA durchgeführt. Unte·· sterilen Bedingungen werden 20 μΙ Zellkulturüberstand der Masterplatten in 80μΙ Pufferlösung der mit einer humanen IgM-Fraktion beladenen EIA-Platten überfünrt. Die Hybridzellklone der Kavitäten mit positiver Reaktion werden in die nächstgrößeren Gewebekulturplatten überführt und deren Zellkulturüberstände im direkten EIA auf Vorhandensein spezifischer Antikörper mit den Beschichtungsantigenen humanes IgG, IgA und IgM geprüft. Von den IgM-spezifischen Hybridzellen werden sowohl Kryokonserven als auch Reklonierungen angelegt.
3. Zur Einschätzung dor Eignung der IgM-spezifischen monoklonalen Antikörper für einen IgM-Antikörper-capture-EIA werden die Zellkultui überstände mit einem indirekten EIA überprüft. Das Antigen, humanes IgM aus einem Serumpool, wird über einen adsorbtiv gebundenen polyklonalen Anti-Human-lgM-Antikörper (Ziege) den monoklonalen Antikörpern des Zellkulturüberstendes präsentiert und die Bindungsreaktion durch einen Peroxidase-markierten Anti-Maus-Antikörper (Ziege) angezeigt. Lediglich 20% der etablierten Hybridome zeigen in diesem Testsystem eine positive Reaktion.
4. Die Zellinien der im direkten und indirekten Testsystem hochaktiv reagierenden Antikörper
Sifin-lgM-8D10 (ZIM-Nr. 0254) Sifin-lgM-9G1 (ZIM-Nr.0253) Sifin-lgM-10F6 (ZIM-Nr.0252) Sifin-lgM-11 G4 (ZIM-Nr.0255)
werden mit den bekannten Zellkulturtechniken vermehrt bzw. wachsen nach Zelltransfer in mit Pristane (2 6,10,14 — Tetramethylpentadecan) behandelten syngenen Mäusen als Ascitestumor.
DL sezernierten monoklonalen Antikörper werden sowohl aus dem Zellkulturüberstand als auch auc dem Ascitespunktat nach bekannten Verfahren gereinigt. Besonders geeignete Präparationen lassen sich nach Affinitätschi omatografie über IgM-Sepharose darstellen.
Indirekte Ernymimmunbestimmung (EIA) von monoklonalen Anti-Human-lgM-Antikörpern (mAK) aus dem Zellkulturüberstand.
MikrotestplMten werden mit polyklonalen Anti-Human-lgM-Antikörpern (SIFIN) absorbtiv beschichtet und nach Bindung von IgM aus einem humanen Serumpool bzw. aus Serum eines Myelompatienten mit den angezeigten Verdünnungen von Zellkülturüberständen stationärer Kulturen der Zellinien Sifin—IgM — 11G 4 und BL-lgM/1 in Kontakt gebracht. Die Bindung von monoklonalen Anti-Human-lgM-Antikörpern aus den Zellkulturüberständen wird mit einem Anti-Maus-Ig-Antikörper-Peroxidasekonjugat (SIFIN) und dem Substrat H2O2 und Orthophenylendiamin angezeigt und photometrisch bewertet.
Abb. 2
Direktetnzymimmunbestimmung (EIA) von humanem IgM mit monoklonalen Festphasenantikörpern.
Mikrotestplatten werden mit den Sättigungskonzentrationen der gereinigten monoklonalen Antikörper Sifin-lgM-11 G4, BL-lgM/1 und BL-lgM/11 absorbtiv beschichtet und mit den angezeigten Serumkonzentrationen eines Spenderpools (30 Proben) in Kontakt gebracht. Die Bindung von humanem IgM wird mit einem polyklonalen Anti-Human-lgM-Antikörper-Peroxidasekonjugat und dem Substrat H2O2 und Orthophenyldiamin angezeigt und photometrisch bewertet.
Abb. 3
Vergleich von polyklonalen und monoklonalen Festphasen-Antikörpern zur Bewertung von Cytomegalievirus-spezifischdn IgM-Antikurpern in positiven Patientenseren.
Mikrotestplatten wurden parallel mit dem gereinigten monoklonalen Antikörper Sifin — IgM — 11G4 und einem polyklonalen Ami-Human-lgM-Antikörper beschichtet und mit den angegebenen Serumkonzentrationen von 3 ausgewählten positiven Patienten (Cytomegaüevirus-spezifische IgM-AK) in Kontakt gebracht.
Die Bindung von erregfspezifischem IgM wird mit einem Peroxidase-markierten CytoR.ogalievirusantigen und d 3m Substrat H2O2 und Orthophenylendiamin angezeigt und photometrisch bewertet.
Claims (2)
1. Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern ge^en humanes Immunglobulin M (IgM), dadurch gekennzeichnet, daß man Milzlymphozyten von AJ-Mäusen, die mit gereinigtem humanem IgM immunisiert wurden, mit Mausmyelomzellen der Linie P3-X63-AG 8.653 fusioniert, spezifische antikörperbildende Hybride über direkte und indirekte Enzymimmunbestimmungsmethoden selektiert, kloniert, kryokonserviert und kultiviert sowie die ausgewählten Hybridome Sifin- IgM -8D10 (ZIM-Nr.0254), Sifin - IgM -9G1 (ZIM-Nr.0253), Sifin - IgM - 10F6 (ZIM-Nr.0252), Sifin - IgM -11G 4 (ZIM-Nr.0255) für die Antikörperproduktion in der Zellkultur vermehrt bzw. in der Ascitesform in syngene Mäuse transplantiert.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Zollkulturüberstände der durch die Fusion erhaltenen Hybridome mit IgM aus einem verdünnten Serumpool, das durch einen polyklonalen Anti-Human-IgM-Festphasen-Antikörper gebunden ist, in Kontakt gebracht und diejenigen Hybr dorne ausgewählt werden, deren Antikörper gebunden werden und eine positive Reaktion zeigen.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD31218488A DD268162B1 (de) | 1988-01-12 | 1988-01-12 | Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpern gegen humanes immunglobulin m (igm) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD31218488A DD268162B1 (de) | 1988-01-12 | 1988-01-12 | Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpern gegen humanes immunglobulin m (igm) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD268162A1 true DD268162A1 (de) | 1989-05-24 |
| DD268162B1 DD268162B1 (de) | 1991-03-28 |
Family
ID=5596514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD31218488A DD268162B1 (de) | 1988-01-12 | 1988-01-12 | Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpern gegen humanes immunglobulin m (igm) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD268162B1 (de) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108330106A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-07-27 | 四川迈克生物新材料技术有限公司 | 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 |
| CN108330105A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-07-27 | 四川迈克生物新材料技术有限公司 | 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 |
-
1988
- 1988-01-12 DD DD31218488A patent/DD268162B1/de not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108330106A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-07-27 | 四川迈克生物新材料技术有限公司 | 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 |
| CN108330105A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-07-27 | 四川迈克生物新材料技术有限公司 | 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 |
| CN108330105B (zh) * | 2018-03-30 | 2020-07-14 | 四川迈克生物新材料技术有限公司 | 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 |
| CN108330106B (zh) * | 2018-03-30 | 2020-07-14 | 四川迈克生物新材料技术有限公司 | 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD268162B1 (de) | 1991-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS63157977A (ja) | ヒト腫瘍壊死因子に対するモノクローナル抗体を含有する敗血症治療薬及びリューマチ性疾患治療薬 | |
| JPH0731195B2 (ja) | 血清中の免疫複合体を検出する方法 | |
| DE3785967T2 (de) | Monoklonale Antikörper gegen C5A und DES-ARG74-C5A, ihre Herstellung und ihre Verwendung. | |
| JPS6024184A (ja) | ガン細胞に対するヒトのモノクロ−ン抗体の反応 | |
| JP2988635B2 (ja) | ヒトＩｇＥに対するモノクローナル抗体 | |
| DE3218312C2 (de) | Monoklonale Antikörper, Hybridoma-Zellklone, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung zur Erkennung von Brustkrebs und maligner Lymphogranulomatose | |
| JPH0526470B2 (de) | ||
| DE69224134T2 (de) | Monoklonale Antikörper gegen Hepatitis-C-Virus | |
| EP0274198B1 (de) | Immunologischer Testkit | |
| JPH0314139B2 (de) | ||
| DD268162A1 (de) | Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpern gegen humanes immunglobulin m (igm) | |
| JPS6028998A (ja) | 心筋ミオシン重鎖に対する単一クロ−ン抗体 | |
| Daniels,* et al. | A monoclonal antibody related to the human blood group Gerbich | |
| EP0205352A2 (de) | Monoklonale antimenschliche IgG4-Antikörper, ihre Herstellung und Verwendung | |
| DE102011008153A1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines monoklonalen Antikörpers gegen oligomeres Alpha-Synuclein | |
| Clark et al. | Detection of monoclonal antibodies against cell surface antigens: the use of antiglobulins coupled to red blood cells | |
| EP0259585B1 (de) | Monoklonale Antikörper gegen oberflächlichen IgE-Rezeptor, sowie Hybrid-Zellinien zu deren Herstellung und Verwendung | |
| Cucina et al. | Hybridoma monoclonal antibodies to human fetal haemoglobin | |
| JP2575015B2 (ja) | ＩｇＧ型モノクロ−ナルリウマトイド因子及びその調製法 | |
| JPH06153979A (ja) | 魚類イリドウイルスに対するモノクローナル抗体並びに該抗体を製造するためのハイブリドーマ及び方法 | |
| Bourel et al. | Murine monoclonal antibody suitable for use as an Rh reagent, anti‐e | |
| WO1989009789A1 (en) | Human monoclonal antibodies against rabies virus | |
| Kiesig et al. | Multireactive human monoclonal antibodies | |
| DD282029A5 (de) | Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikoerpen gegen menschliche B-erythrozyten | |
| DD274054A1 (de) | Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen das isoenzym bb der humanen glykogenphosphorylase b |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Economic patent (sect. 18(1)) | ||
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |