DD294950A5 - Neue Cholecystokininhexapeptidanaloga und Verfahren zu ihrer Herstellung - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung neuer Cholecystokininhexapeptidanaloga, die als Antagonisten des Peptidhormons Cholecystokinin (CCK) wirksam sind. Die Verbindungen werden stufenweise aufgebaut oder durch Fragmentkondensation hergestellt. Nach Abspaltung der Schutzgruppen werden sie acyliert und sulfatiert. Die Anwendungsgebiete der Erfindung sind die medizinische Forschung und die pharmazeutische Industrie.{Cholecystokinin; CCK; Antagonisten; Peptidhormon; CCK-hexapeptide; CCK-hexapeptidanaloga; Fragmentkondensation; Acylierung; Sulfatierung; Medizin; Pharmazie}

Description

in der Acyl einen Aminosäurerest A oder einen Carbonsäurerest oder eine Schutzgruppe darstellt, SE für einen Sulfatesterrest am Tyrosin, X für einen Aminosäurerest B und Y für einen Aminosäurerest C steht und R₁ Alkylreste zwischen C₄ und C₇ und R₂ Alkylreste zwischen C₄ und C₇ oder Methoxypropyl darstellen.

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung neuer Antagonisten des Cholecystokinins der Formel I

Acyl-Tyr (SE J-XrGl y-Trp-Y-Glu-N ^x _(|)

in der Acyl ζ. B. Asparaginsäure, Bernsteinsäure oder eine Schutzgruppe, wie Boc oder Z sein kann, SE einen Sulfatesterrest bedeutet, X für Thr, Nie, Leu oder Met und Y für Met, Nie oder Leu stehen kann und Ri Alkylreste zwischen C₄ und C₇ und R₂ Alkylreste zwischen C₄ und C₇ oder Methoxypropyl darstellen. L-Trp in Formel I kann durch D-Trp ersetzt sein. Die Anwendungsgebiete sind die medizinische Forschung und die pharmazeutische Industrie.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen

Das gastrointestinal Peptldhormon Cholecystokinin (CCK) existiert in verschiedenen molekularen Formen, unter anderem als CCK-39, CCK-33, CCK-12 und CCK-8 (V.Mutt und E. Jürpes, Biochem. Journal 125,57 (1971]).

Es zeigt eine Reihe von wichtigen Effekten im Gastolntestinal-, Pankreas- und hepatobilären System. So stimuliert es die

Gallenblasenkontraktion und bewirkt die Relaxation des Sphincter oddi (Übersichten siehe J. E. Morley, Life Sei. 30,479 [1982] und Nieber, K., Henklein, P., Ott, und P.Oehme; Z. gesamte innere Medizin, 42,501 (1987]).

Nach dem Auffinden von CCK Im ZNS wurden weitere Effekte entdeckt. So spielt CCK unter anderem eine Rolle bei der Appetitsregulation, Analgesic, Ptosie und Katalepsie. Zur pharmakologischen Untersuchung all dieser Effekte sind Antagonisten wichtige Hilfsmittel. Die geger wärtig bekannten Antagonisten des Cholecystokinin sind Derivate der Glutaminsäure-Proglumid.

(A. L. Rovali, Minerva Medica 1967,58,3651; Makovec et al., Eur. J. Med.Chem.-Chim Ther.21,9 (1986], des Tryptophane-BenzotripMHahne, W. F., Jensen, T., Lemp, G. F. und J. D. Gardner Proc. Natl.Acad.Sci.78,6304 [1987]) bzw. verkürzte oder cyclische Sequenzen des Cholecystokinins (Spanarkel et al., J. BIoI. Chem. 258,6746 [1983], M. Ch. Galas, Am. J. Physiol. 254,

G 176 (1988) sowie R. M. Freidinger et al., Proc. 19th Europ. Peptid Symp. 1986, EP-PS 0132919 Derivate des Benzodiazepine besitzen ebenfalls entweder peripher oder zentral eine hohe antagonistische Aktivität (B.G. Bock, J. med. Chem., 31,264 [1988] und V.J. Lotti et al., Europ. J. Pharm. 162,273 [1989]). Kürzlich wurden auf der Basis von verkürzten Sequenzen neue wirksame Antagonlsten entwickelt (WP C 07 K/299762, WP C 07 K/299763 und WP C 07 K/276483). Alle bisher gefundenen Antagonisten auf Peptidbasis wiesen eine noch zu geringe antagonistische Aktivität auf (JCso-Werte 10~^e bis 10~⁸ Mol).

Ziel der Erfindung

Ziel der Erfindung ist es, neuartige Antagonisten des Cholecystokinlns auf Peptidbasis herzustellen, die eine höhere antagonistische Aktivität besitzen als die vergleichbaren bekannten Antagonisten auf Peptidbasis.

Darlegung des Wesen· der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Verf inren zu entwickeln, nach denen sich neuartige Sequenzen des Cholecystokinlns (CCK) mit antagonistischen Eigenschaften herstellen lassen. Die Aufgabe wurde dadurch gelöst, daß C-terminal verkürzte Sequenzen synthetisiert wurden, denen die C-terminale Aminosäure Phenylalanin fehlt und Asparaginsäure In Position 32 durch Glutaminsäure ersetzt wird. Die endständige Aminosäure GIu wurde in das entsprechende Dialkylamid umgewandelt. Die dadurch erhaltenen verkürzten CCK-Sequenzen zeigten überraschenderweise keinerlei CCK-Eigenschaften mehr, sind aber in der Lage, CCK in Konzentration von 10~⁸-10~* Mol/l zu hemmen. Die Verbindungen wurden peptidchemisch in üblicher Weise unter Verwendung bekannter Schutzgruppen hergestellt. Zu diesem Zweck wurde Boc-Trp-Met-Glu-Dialkylamld hergestellt, von der N-Schutzgruppe mit 2 N HCI/Eisessig befreit und mit Boc-Tyr-X-Gly-OH zum Hexapeptid umgesetzt. Das Hexapeptid Boc-Ty r-X-Gly-Trp-Y-Glu-Dialkylamid wird anschließend mit Pyridiniumacetylsulfat sulfatiert. Ein anderer Teil des ttoc-geschützten Hexapeptides wird von der Boc-Schutzgruppe befreit, acyliert und anschließend mit Pyridiniumacetylsulfat sulfatiert. Die endgültige Reinigung erfolgt durch RP 18-Mitteldruckchromatographie isokralisch an 25% Acetonitril/0,05N Ammoniumacetatlösung pH 6,5

Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden.

Beispiel 1

1. Boc-TyrlSEl-Nle-Gly-Trp-hlt-Glu-Dlpenthylamld

Boc-Trp-Met-OH wird mit H-Glu-Dipentylamid zum Boc-Trp-Met-Glu-Dipentylamid umgesetzt. Nach Abspalten der Boc-Schutzgruppe wird das Tripeptid H-Trp-Met-Glu-Dipentylamid mit Boc-Tyr-N/e-Gly-OH mittels TBTU (2-(1 H-Benzotriazol-1 -yl)-1,1,3,3-detramethyluroniumtetrafluoroborat) zum Hexapeptid verlängert. Erneutes Abspalten der Boc-Schutzgruppe und Acetylierung mit Bernsteinsäureanhyodrid führen zum Suc-Tyr-N/e-Gly-Trp-Met-Glu-Dipentylamid (1). Sulfatierung mit Pyridiniumacetylsulfat und Reinigung mittels präparativer HPLC 0,05 u Ammoniumacetat/25% Acetonitril, pH 6,5 liefert Boc-Tyr(SE)-N/e-Gly-Trp-Met-Glu-Dipentylamid

Fp. 132-138"C HPLC: Säule Vydac RP18,15-20Mm, 4-6mm i.D. x 250mm

Fluß2ml/min,UV220nm

R_T = 10,2 min

2. Suc-TyrfSEl-N/e-Gly-Trp-Met-Glu-Dlpentylamld

Sulfatierung von (1) mit Pyridiniumacetylsulfat und Reinigung mittels präparativer HPLC 0,05η Ammoniumacetat/25% Acetonitril, pH 6,5 liefert Suc-TyrfSEl-N/e-Gly-Trp-Met-Glu-Dipentylamid

Fp. 185-191⁰C

HPLC: Säule Vydac RP 18,15-20pm, 4,6mm i.D. χ 250mm

Fluß2ml/min,UV220nm

Rt = 30,2 min

Beispiel 2

Am isolierten Meerschweinchenileum antagonisiert Boc-TyrlSEl-N/e-Gly-Trp-Met-Glu-Dipentylamid die kontraktionsauslösende Wirkung von CCK-8 kompetitiv. Die Substanz zeigt bis zu einer Konzentration von 10"* Mol keine kontrahierende Eigenwirkung. Der pAj-Wert beträgt 6,84 ± 0,3 (n = 6).

Claims (5)

1. Verfahren zur Herstellung neuer Cholecystokininhexapeptidanaloga der allgemeinen Formel I,

Acyl-TyrCSEj-X-Gly-Trp-Y-Glu-N_ ^(l)'

^R2

in der Acyl einen Aminosäurerest A oder einen Carbonsäurerest oder eine Schutzgruppe darstellt, SE für einen Sulfatesterrest am Tyrosin, X für einen Aminosäurerest B und Y für einen Aminosäurerest C steht und R₁ Alkylreste zwischen C₄ und C₇ und R₂ Alkylreste zwischen C₄ und C₇ oder Methoxypropyl darstellen, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindung der Formel I stufenweise oder durch Fragmentkondensation aufgebaut und nach der Abspaltung der Schutzgruppen acyliert und sulfatiert werden.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Synthese unter Verwendung üblicher Schutzgruppen und beginnend von BoC-TrP-Y-GIu-NR₁R₂ erfolgt.

3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Aminosäurerest A vorzugsweise aus Asparaginsäure, der Carbonsäurerest vorzugsweise aus Bernsteinsäure, die Schutzgruppen z. B. aus t-Butyloxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) bestehen, der Aminosäurerest B vorzugsweise für Thr, Nie, Leu oder Met und C für Met, Nie oder Leu steht.

4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß in den Verbindungen der Formel I L-Trp durch D-Trp ersetzt wird.

5. Neue Cholecystokininhexapeptidanaloga der allgemeinen Formel I,

^R<

/ ¹
Acyl-Tyr(SE)-X-Gly-Trp-Y-Glu-N. (I),