DD296686A5 - SALTS OF N [EXP5], N [EXP10] -METHYLENE-5,6,7,8-TETRAHYDROFOLSAEURE - Google Patents

SALTS OF N [EXP5], N [EXP10] -METHYLENE-5,6,7,8-TETRAHYDROFOLSAEURE Download PDF

Info

Publication number
DD296686A5
DD296686A5 DD34292190A DD34292190A DD296686A5 DD 296686 A5 DD296686 A5 DD 296686A5 DD 34292190 A DD34292190 A DD 34292190A DD 34292190 A DD34292190 A DD 34292190A DD 296686 A5 DD296686 A5 DD 296686A5
Authority
DD
German Democratic Republic
Prior art keywords
salt
formula
tetrahydrofolic acid
methylene
salts
Prior art date
Application number
DD34292190A
Other languages
German (de)
Inventor
Fabrizio Marazza
Attilio Melera
Rene Viterbo
Nando Toderi
Original Assignee
Markus Zink,Ch
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Markus Zink,Ch filed Critical Markus Zink,Ch
Publication of DD296686A5 publication Critical patent/DD296686A5/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Es werden Salze von * der Formeln I a und I b in Form des (6RS)-Diastereoisomerengemisches oder in Form der einzelnen (6R) oder (6S) Diastereoisomeren beschrieben. Die Substituenten sind in Anspruch 1 definiert. Es werden auch drei Verfahren zur Herstellung dieser Salze beschrieben. Die genannten Salze der Formeln I a und I b koennen zur Herstellung eines Arzneimittels fuer die synergistische Beeinflussung einer Krebs bekaempfenden Verbindung und/oder fuer die Verminderung der Toxizitaet einer Krebs bekaempfenden Verbindung und/oder zum Schutz menschlicher und/oder tierischer Zellen verwendet werden. Formeln I a und I b{* * Alkalimetallsalze; Erdalkalimetallsalze; Ammoniumsalze; Alkylammoniumsalze; Herstellungsverfahren; Krebstherapie; Schutz menschlicher Zellen; Schutz tierischer Zellen}Salts of the formulas I a and I b in the form of the (6RS) -diastereoisomeric mixture or in the form of the individual (6R) or (6S) diastereoisomers are described. The substituents are defined in claim 1. Three methods of preparing these salts are also described. The abovementioned salts of the formulas Ia and Ib can be used for the preparation of a medicament for the synergistic influencing of a cancer-causing compound and / or for the reduction of the toxicity of a cancer-causing compound and / or for the protection of human and / or animal cells. Formulas I a and I b {* * alkali metal salts; alkaline earth metal; Ammonium salts; alkylammonium; Production method; Cancer therapy; Protection of human cells; Protection of animal cells}

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Salze von N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Herstellung eines Arzneimittels für die synergistische Beeinflussung einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder für die Verminderung der Toxizität einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder zum Schutz menschlicher und/oder tierischer Zellen.The present invention relates to salts of N 5 , N 10 -Methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, processes for their preparation and their use for the preparation of a medicament for the synergistic influence on a cancer-fighting compound and / or for the reduction of Toxicity of a cancer-fighting compound and / or for the protection of human and / or animal cells.

Hintergrund der ErfindungBackground of the invention

N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel Il (abgekürzt mit CH2-THF) ist die chemische Spezies, welche als Co-Faktor bei der Inhibierung des Enzyms Thymidilatsynthese (abgekürzt mit TS) mit 5-Fluorouracil (abgekürzt mit 5-FU) und/ oder einer der Vorstufen (prodrug), wie etwa Floxuridine, Tegafur, wirkt. 5-FU oder eine der Vorstufen werden metabolisch inN 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula II (abbreviated to CH 2 -THF) is the chemical species which co-factors in the inhibition of the enzyme thymidilate synthesis (abbreviated to TS) with 5-fluorouracil (abbreviated to 5-FU) and / or one of the precursors (prodrug), such as floxuridine, tegafur. 5-FU or one of the precursors become metabolically in

5F-Desoxyuridinemonophosphat (abgekürzt mit 5F-dUMP) transformiert, welches kovalent und irreversibel an TS in der Gegenwart von CH2-THF gebunden ist, wobei ein ternärer Komplex gebildet wird, welcher als 5F-dUMP/TS/CH2-THF beschrieben wird.5F-deoxyuridine monophosphate (abbreviated to 5F-dUMP) which is covalently and irreversibly bound to TS in the presence of CH 2 -THF to form a ternary complex, which is described as 5F-dUMP / TS / CH 2 -THF ,

5-FU und seine Vorstufen werden in großem Maß verwendet als chemotherapeutisches Mittel bei der Behandlung von Kolon, rektalem und pankreatischem Karzinom, wie auch bei weiteren Formen von Krebs, wie etwa Brustkrebs und Magenkrebs. Um die Cytotoxizität für die Tumorzellen zu erhöhen, muß die höchste Inhibitionsrate von TS erreicht werden. Dies erfordert eine geeignete Versorgung jener Zellen mit 5-FU (oder eine seiner Vorstufen) und mit dem Co-Faktor CH2-THF. Währenddem 5-FU (oder seine Vorstufen) exogene Verbindungen sind, welche einem Patienten in jeder gewünschten Menge verabreicht werden können, hat CH2-THF normalerweise seinen Ursprung in der endogenen Folat-Zusammenlegung via eine Anzahl von metabolischen Umwandlungen. Jedoch kann die auf diesem Weg gebildete Menge an CH2-THF nicht genügend sein für eine effiziente und komplette Inhibierung von TS.5-FU and its precursors are widely used as a chemotherapeutic agent in the treatment of colon, rectal and pancreatic carcinoma as well as other forms of cancer, such as breast cancer and gastric cancer. In order to increase the cytotoxicity for the tumor cells, the highest inhibition rate of TS must be achieved. This requires adequate supply of those cells with 5-FU (or one of its precursors) and with the co-factor CH 2 -THF. While 5-FU (or its precursors) are exogenous compounds which can be administered to a patient in any desired amount, CH 2 -THF normally has its origin in endogenous folate assembly via a number of metabolic transformations. However, the amount of CH 2 -THF formed in this way may not be sufficient for efficient and complete inhibition of TS.

Es hat sich daher zur Gewohnheit entwickelt, klinische Behandlungsprotokolle zu verwenden, in welchen Calcium-folinat (abgekürzt mit CaF), ein metabolischer Vorläufer von CH2-THF, in hohen Dosen zusammen mit 5-FU einem Patienten zur Verfügung gestellt werden. Siehe R. J. DeLap, The YaIe Journal of Biology and Medicine, 61,23 (1988). Diese hohen Dosen an CaF resultieren in Nebeneffekten, wie etwa Diarrhöe und Stomatitis; siehe G. Marini et al. Oncology 44,336 (1987). Die Versorgung eines Patienten mit adäquaten Mengen an CH2-THF, d.h. die den ternären Komplex bildende Species selbst, konnte bis jetzt nicht erreicht werden, weil kein großtechnisches Verfahren zur Herstellung einer genügend reinen, gut wasserlöslichen und stabilen Verbindung zur Verfügung stand.It has therefore become a habit to use clinical treatment protocols in which calcium folinate (abbreviated to CaF), a metabolic precursor of CH 2 -THF, is provided in high doses to a patient along with 5-FU. See RJ DeLap, The Journal of Biology and Medicine, 61, 23 (1988). These high doses of CaF result in side effects such as diarrhea and stomatitis; see G. Marini et al. Oncology 44,336 (1987). The supply of a patient with adequate amounts of CH 2 -THF, ie the ternary complex forming species itself, could not be achieved until now, because no large-scale process for producing a sufficiently pure, readily water-soluble and stable compound was available.

Stand der TechnikState of the art

Die Herstellung in kleinem Maßstab von CH2-THF als freie Säure ist von verschiedenen Autoren beschrieben worden; siehe R.LBIakley, Biochem. Journal,72,707 (1959); M.J.Osborn, P.T.Talbert, F.M.Huennekens, J. Am. Chem.Soc. 82,4921 (1960); R.G.Kallen,W.P.Jenks,J.Biol.Chem.241,5851(1966);P.R.Farina,LJ.Farina,S.J.Benkovic,J.Am.Chem.Soc.95,5409(1973);Small scale production of CH 2 -THF as a free acid has been described by several authors; see R. LBIakley, Biochem. Journal, 72,707 (1959); MJOsborn, PT Talbert, FM Huennekens, J. Am. Soc. 82.4921 (1960); RGKallen, WPJenks, J.Biol.Chem.241,5851 (1966); PRFarina, LJ.Farina, SJBenkovic, J.Am.Chem.Soc.95,5409 (1973);

R. P. Leary, Y. Gaumont, R. L. Kisliuk, Biochem. Biophys. Res. Comm. 56,484 (1974); R. L.Kisliuk, D.Strumpf, Y. Gaumont, R.P.Leary, L.Palnte,J. Med. Chem.20,1531 (1977); M.Poe, L.M.Jackman,S.T.Benkovic, Biochemistry 18,5527(1979) undLeary, Y. Gaumont, R.L. Kisliuk, Biochem. Biophys. Res. Comm. 56: 484 (1974); R.L.Kisliuk, D.Strumpf, Y. Gaumont, R.P. Leary, L.Palnte, J. Med. Chem. 20, 1531 (1977); M. Poe, L. M. Jackman, S. T.Benkovic, Biochemistry 18, 5527 (1979) and

R. Kalbermatten, W. Staedeli, J. H. Bieri, M. Viscontini, HeIv. Chim. Acta 64,2627 (1981).R. Kalbermatten, W. Staedeli, J.H. Bieri, M. Viscontini, HeIv. Chim. Acta 64,2627 (1981).

C.Zarow, A. M.Pellino, P.V.Daneberg, Prep. Biochem. 12,281 (1983) beschreiben ein Herstellungsverfahren „in großem Maßstab", welches eine enzymatische Reduktionsstufe umfaßt.C. Zarow, A.M. Pellino, P.V.Daneberg, Prep. Biochem. 12, 281 (1983) describe a "large scale" production process which involves an enzymatic reduction step.

In allen Fällen konnte jedoch das Produkt nicht anders isoliert werden als in lyophilisierter Form oder als ein amorphes Pulver (siehe C. M.Tatum Jr., P.A.Benkovic, S.T.Benkovic, R.Potts, Biochemistry 16,1903 [1977]) und in einer Reinheit von nicht höher als 80%, was diese Produkte unbrauchbar für die therapeutische Verwendung bei Menschen macht.In all cases, however, the product could not be isolated otherwise than in lyophilized form or as an amorphous powder (see CM Date Jr., PABenkovic, STBenkovic, R. Potts, Biochemistry 16, 1903 [1977]) and in a purity of not higher than 80%, making these products unusable for therapeutic use in humans.

Zwei Syntheseverfahren sind beschrieben worden, um CH2-THF als freie Säure zu erhalten.Two synthetic methods have been described to obtain CH 2 -THF as the free acid.

Erstes Verfahren 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure der Formel IVFirst process 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula IV

COOHCOOH

(IV)(IV)

CooHCOOH

wird mit einem Überschuß an Formaldehyd in wäßriger Lösung bei einem pH-Wert von 7 umgesetzt. Siehe dazu M. Poe, L.J.Jackman, S.T.Benkovic, Biochemistry 18,5527(1979); R.Kalbermatten, W.Staedeli, J.H. Bieri, M.Viscontini, HeIv. Chim. Acta 64,2627 (1981); C.Zarow, A. M. Pellino, P. V. Danenberg, Prep. Biochem. 12,381 (1983). Dieses Verfahren ist nur geeignet für die Herstellung von Milligramm-Mengen an freier Säure der Formel Ilis reacted with an excess of formaldehyde in aqueous solution at a pH of 7. See M. Poe, L.J. Jackman, S.T. Benkovic, Biochemistry 18, 5527 (1979); R. Kalbermatten, W. Staedeli, J.H. Bieri, M.Viscontini, HeIv. Chim. Acta 64,2627 (1981); C. Zarow, A.M. Pellino, P.V. Danenberg, Prep. Biochem. 12,381 (1983). This method is only suitable for the production of milligram quantities of free acid of the formula II

COOHCOOH

COOHCOOH

und führt, wegen der inhärenten Instabilität von CH2-THF in wäßriger Lösung mit pH 7, zu einem Produkt mit geringer Reinheit (weniger als 80%); siehe R.G.Kallen, W. P. Jenks, J. Biol.Chem. 241,5851 (1966).and, because of the inherent instability of CH 2 -THF in pH 7 aqueous solution, results in a product of low purity (less than 80%); see RGKallen, WP Jenks, J. Biol. Chem. 241, 5851 (1966).

Zweites VerfahrenSecond procedure

N5,N10-Methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure in Form des Chlorides der Formel VN 5 , N 10 -methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid in the form of the chloride of the formula V

COOHCOOH

(V)(V)

COOMCOOM

wird in einem wasserfreien Lösungsmittel mit NaBH4 reduziert. CH2-THF als freie Säure der oben genannten Formel Il wird als ein amorpher Festkörper mit einer Reinheit von 75 bis 80% isoliert; siehe dazu P. R. Farina, L. J. Farina, S. J. Benkovic, J. Am. Chem. Soc. 95, 5409 (1973); C. M.Tatum Jr., P.A. Benkovic, S.T.Benkovic, R. Potts, Biochemistry 16,1903 (1977). CH2-THF in Form der freien Säure ist praktisch unlöslich in Wasser, und ist als solche ungeeignet für parenterale pharmazeutische Präparate. Völlig überraschend wurden nun Verfahren gefunden, welche für die großtechnische Produktion geeignet sind, zur Herstellung von neuen, stabilen und therapeutisch annehmbaren, wasserlöslichen Salzen von CH2-THF, welche genügend rein sind, um einem Patienten verabreicht zu werden.is reduced in an anhydrous solvent with NaBH 4 . CH 2 -THF as the free acid of the above formula II is isolated as an amorphous solid having a purity of 75 to 80%; see PR Farina, LJ Farina, SJ Benkovic, J. Am. Chem. Soc. 95, 5409 (1973); CM Date Jr., PA Benkovic, ST Benkovic, R. Potts, Biochemistry 16, 1903 (1977). CH 2 -THF in the form of the free acid is practically insoluble in water, and as such is unsuitable for parenteral pharmaceutical preparations. Quite surprisingly, methods have now been found which are suitable for large-scale production, for the preparation of new, stable and therapeutically acceptable, water-soluble salts of CH 2 -THF, which are sufficiently pure to be administered to a patient.

Die vorliegende Erfindung ist durch die Merkmale in den unabhängigen Ansprüchen charakterisiert. Bevorzugte Ausführungsformen sind in den abhängigen Ansprüchen definiert.The present invention is characterized by the features in the independent claims. Preferred embodiments are defined in the dependent claims.

Beschreibung der ErfindungDescription of the invention

In der Tabelle 1 sind einige bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen zusammengefaßt.Table 1 summarizes some preferred compounds of the invention.

COO RCOO R

3 a R = H(bekannt)3 a R = H (known)

3 b R = Na+, Pyridinium3 b R = Na + , pyridinium

3 c R = (HO[CH2]2NH3)+ 3 c R = (HO [CH 2 ] 2 NH 3 ) +

3d R = {(HO[CH2]2)3NH}+ 3d R = {(HO [CH 2 ] 2 ) 3 NH} +

3e R = (HO[CH2]2NH[CH3]2)+ 3e R = (HO [CH 2 ] 2 NH [CH 3 ] 2 ) +

3f R = ([CH3I3CNHa)+ 3f R = ([CH 3 I 3 CNHa) +

3 g R = ([L]-Lysin)+ 3 g R = ([L] lysine) +

3 h R = ([L]-Arginin)+ 3 h R = ([L] arginine) +

3i R = V2Ca2+ 3i R = V 2 Ca 2+

3 k R = 1/2 Mg2+ 3k R = 1/2 Mg 2+

31 R = Na+ 31 R = Na +

3 m R = K+ 3 m R = K +

3 η R = Li+ 3 η R = Li +

In der Tabelle Il wird die Herstellung von einigen bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen schematisch dargestellt.In Table II, the preparation of some preferred compounds according to the invention is shown schematically.

Tabelle IITable II

R— N-f-H HR-N-f-H H

H-H-

-H-H

CooCoo

H + H +

COOHCOOH

H H HH H H

COOH 3clCOOH 3cl

I. MoOHI. MoOH

2.Second

1 R-hJHi 1 R-hJHi

oder 2 Me+ ~0W (MethodtA)or 2 Me + ~ 0W (MethodtA)

R-M H HR-M H H

coo"coo "

-H -H -H-H -H -H

coo-COO

oderor

H R—M-4-HH R-M-4-H

H-H-H-H

H COO"H COO "

coo"coo "

(HethodtB)(HethodtB)

3c-h,e.-n+ 3c-h, e.n +

31Λ31Λ

R = N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydropteroyl-R = N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydropteroyl-

Die verschiedenen erfindungsgemäßen Salze können entweder direkt aus der Verbindung der Formel 3a (Methode A) oder mittels der Reaktion eines Erdalkalimetallsalzes, beispielsweise das Kalziumsalz der Formel 3i, mit dem Oxalsäuresalz des entsprechenden Kations oder Amins (Methode B) hergestellt werden. Die HPLC Reinheit des auf diesem Wege erhaltenen CH2-THF Salzes variiert zwischen 83,8 und 92,4%; die Haüpt-„Verunreinigung" dieser Herstellung besteht aus der gut bekannten und therapeutisch wertvollen (6RS)-N6-Methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure, so daß die gesamte Menge an reduzierten Folaten bei der Herstellung im Durchschnitt 95% beträgt.The various salts according to the invention can be prepared either directly from the compound of formula 3a (method A) or by the reaction of an alkaline earth metal salt, for example the calcium salt of formula 3i, with the oxalic acid salt of the corresponding cation or amine (method B). The HPLC purity of the CH 2 -THF salt thus obtained varies between 83.8 and 92.4%; the high "contamination" of this preparation consists of the well-known and therapeutically valuable (6RS) -N 6 -methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, so that the total amount of reduced folates in the preparation averages 95%. is.

Methode AMethod A

Die Verbindung der Formel 3a wurde hergestellt mittels der Umsetzung der Verbindung der Formel V in einem Lösungsmittel, wie etwa DMSO (Dimethylsulfoxid) in der Gegenwart einer Base, wie etwa Pyridin, mit der jeweiligen Menge an NaBH4, wobei man die Verbindung der Formel 3 b erhält, welche weiter gelöst wird in einer kalten KOH-Lösung; die Verbindung der Formel 3 a wird erhalten mittels Ansäuern.The compound of formula 3a was prepared by reacting the compound of formula V in a solvent such as DMSO (dimethylsulfoxide) in the presence of a base such as pyridine with the appropriate amount of NaBH 4 to give the compound of formula 3 b, which is further dissolved in a cold KOH solution; the compound of formula 3a is obtained by means of acidification.

Die Verbindung der Formel 3a wird nacheinander umgesetzt mit einer pharmazeutisch annehmbaren Base, wie etwa Ethanolamin, Triethanolamin, 2-Dimethylaminoethanol, tert.-Butylamin, oder mit Aminocarbonsäuren, wie etwa Lysin, Arginin, wobei wasserlösliche Salze gebildet werden. Die Verbindung der Formel 3a kann auch mit Kationen umgesetzt werden, wie etwa Ca2+, Mg2+, Li+, Na", K+, wobei die entsprechenden wasserlöslichen Salze gebildet werden, welche isoliert werden mittels Ausfällen aus der wäßrigen Lösung mittels der Hinzugabe eines organischen Lösungsmittels, wie etwa Ethanol, Aceton. Siehe Tabelle II.The compound of formula 3a is reacted sequentially with a pharmaceutically acceptable base such as ethanolamine, triethanolamine, 2-dimethylaminoethanol, tert-butylamine, or with aminocarboxylic acids such as lysine, arginine to form water-soluble salts. The compound of formula 3a may also be reacted with cations, such as Ca 2+ , Mg 2+ , Li + , Na ", K + to form the corresponding water-soluble salts which are isolated by precipitation from the aqueous solution by means of Addition of an organic solvent, such as ethanol, acetone See Table II.

Methode BMethod B

Die Erdalkalimetallsalze, beispielsweise die Verbindung der Formel 3i, welche mittels der Methode A erhalten wurden, wurden mit dem Oxalsäuresalz des ausgewählten Amins oder der entsprechenden Aminosäure oder des entsprechenden Kations umgesetzt. Bedingt durch die Ausfällung des wasserunlöslichen Erdalkalimetalloxalates bleibt das entsprechend abgewandelte Salz in Lösung und wird erst ausgefällt mittels der Hinzugabe eines organischen wasserlöslichen Lösungsmittels, wie etwa Ethanol, Aceton. Siehe Tabelle Ii.The alkaline earth metal salts, for example, the compound of the formula 3i obtained by the method A, were reacted with the oxalic acid salt of the selected amine or the corresponding amino acid or the corresponding cation. Due to the precipitation of the water-insoluble Erdalkalimetalloxalates the corresponding modified salt remains in solution and is first precipitated by the addition of an organic water-soluble solvent, such as ethanol, acetone. See Table II.

Methode CMethod C

Völlig überraschend wurde nun noch ein weiteres, drittes Verfahren, welches für die großtechnische Produktion geeignet ist, zur Herstellung von Erdalkalimetallsalzen von N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure gefunden.Quite surprisingly, yet another, third method, which is suitable for large-scale production, for the production of alkaline earth metal salts of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid found.

Mit dem dritten erfindungsgemäßen Verfahren werden die Erdalkalimetallsalze in großer Ausbeute und in großer Reinheit erhalten. Zudem wird in diesem erfindungsgemäßen Verfahren in wäßrigem Medium gearbeitet, was die Isolierung der gewünschten Erdalkalimetallsalze erheblich vereinfacht.With the third process according to the invention, the alkaline earth metal salts are obtained in high yield and in high purity. In addition, this process according to the invention is carried out in an aqueous medium, which considerably simplifies the isolation of the desired alkaline earth metal salts.

Bei diesem erfindungsgemäßen Verfahren legt man eine wäßrige Lösung eines wasserlöslichen Salzes der 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure vor und bringt diese dann mit Formaldehyd zur Reaktion. Anschließend wird eine wäßrige Lösung eines Erdalkalimetallsalzes hinzugegeben, wobei das entsprechende Erdalkalimetallsalz ausfällt.In this process according to the invention, an aqueous solution of a water-soluble salt of 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid is introduced and then brought to reaction with formaldehyde. Subsequently, an aqueous solution of an alkaline earth metal salt is added, wherein the corresponding alkaline earth metal salt precipitates.

Das Calciumsalz und das Magnesiumsalz der N6,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure sind bevorzugt.The calcium salt and the magnesium salt of N 6 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid are preferred.

Die 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure kann beispielsweise gemäß den Angaben von E. Khalifa, A. N. Ganguly, J. H. Bieri undThe 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid, for example, as described by E. Khalifa, A.N. Ganguly, J.H. Bieri and

M. Viscontini, HeIv. Ch. Acta (1980), 63,2554 hergestellt werden.M. Viscontini, HeIv. Ch. Acta (1980), 63, 2554.

Die erfindungsgemäßen Salze können verwendet werden zur Herstellung eines Arzneimittels für die synergistische Beeinflussung einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder für die Verminderung der Toxizität einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder zum Schutz menschlicher und/oder tierischer Zellen. Ein solches Arzneimittel enthält gewöhnlich wenigstens ein aktives Salz in einer Menge von 1 mg bis 500mg, insbesondere von 5 mg bis 150 mg, pro Dosiseinheit. Das Arzneimittel liegt vorzugsweise in Form eines parenteralen und/oder oralen pharmazeutischen Präparates vor.The salts of the present invention can be used to prepare a medicament for synergistically affecting a cancer-combating compound and / or for reducing the toxicity of a cancer-controlling compound and / or protecting human and / or animal cells. Such a medicament will usually contain at least one active salt in an amount of from 1 mg to 500 mg, in particular from 5 mg to 150 mg, per dosage unit. The medicament is preferably in the form of a parenteral and / or oral pharmaceutical preparation.

Die nachfolgenden Beispiele dienen der Illustration der Erfindung. Klinische Resultate und therapeutische Anwendungen dieser Verbindungen werden ebenfalls beschrieben.The following examples serve to illustrate the invention. Clinical results and therapeutic applications of these compounds are also described.

BeispieleExamples Beispiel 1example 1

Herstellung der (6RS)-N6,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3a.Preparation of (6RS) -N 6 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula 3a.

Zu einer Lösung von 24,6 g der Verbindung der Formel V (hergestellt gemäß C.Temple, R. D. Elliot, J. D. Rose, J. A. Montgomery,To a solution of 24.6 g of the compound of formula V (prepared according to C.Temple, R.D. Elliot, J.D. Rose, J.A. Montgomery,

J. Med. Chem. 22,731 [1979]) in einem Gemisch aus 300ml trockenem DMSO und 100ml trockenem Pyridin, gerührt unter Sauerstoffausschluß bei Raumtemperatur, wurde tropfenweise eine Lösung von 2,0g NaBH^n 100ml DMSO während einer Stunde hinzugegeben. Dieses Gemisch wurde anschließend mit zwei Liter Aceton während einer Zeitspanne von 20 Minuten verdünnt. Nach einem weiteren Rühren des Gemisches während einer Stunde bei einer Temperatur von+4°C wurde das gefällte gemischte Salz der Formel 3b mittels Filtration gesammelt und dreimal mit frischem Aceton gewaschen. Nach dem Trocknen unter reduziertem Druck wurden 16,17g rohe Verbindung der Formel 3 b isoliert.J. Med. Chem. 22, 731 [1979]) in a mixture of 300 ml of dry DMSO and 100 ml of dry pyridine, stirred with exclusion of oxygen at room temperature, was added dropwise a solution of 2.0 g of NaBH 4 N 100 ml of DMSO for one hour. This mixture was then diluted with two liters of acetone over a period of 20 minutes. After further stirring the mixture for one hour at a temperature of + 4 ° C, the precipitated mixed salt of Formula 3b was collected by filtration and washed three times with fresh acetone. After drying under reduced pressure, 16.17 g crude compound of formula 3b were isolated.

Die HPLC-Analyse zeigte, daß dieses Produkt 87,1 % rein war.HPLC analysis showed that this product was 87.1% pure.

Das oben genannte Produkt wurde zu 420ml entgastem Wasser hinzugegeben, und unter Sauerstoffausschluß bei einer Temperatur von +40C gerührt. 0,5M kalte KOH wurde anschließend tropfenweise zur gerührten Suspension hinzugegeben, bis eine vollständige Auflösung beobachtet wurde. Der pH-Wert der so erhaltenen Lösung betrug 7,5 und die freie Säure der Formel 3a wurde ausgefällt mittels der tropf en weisen Hinzugabe von kalter 1 NHCI, bis der pH-Wert der überstehenden Lösung einen Wert von 3,95 erreichte. Nach einem weiteren Rühren bei +40C während 10 Minuten wurde die freie Säure der Formel 3 a mittels Filtration gesammelt, einmal mit kaltem Wasser gewaschen sowie einmal mit Aceton und einmal mit peroxidfreiem Diethyläther gewaschen.The above product was added to 420ml of degassed water and stirred under exclusion of oxygen at a temperature of +4 0 C. 0.5M cold KOH was then added dropwise to the stirred suspension until complete dissolution was observed. The pH of the solution thus obtained was 7.5 and the free acid of formula 3a was precipitated by the dropwise addition of cold 1 NHCI until the pH of the supernatant reached 3.95. After further stirring at +4 0 C for 10 minutes, the free acid of formula 3a was collected by filtration, washed once with cold water, and washed once with acetone and once with diethyl ether peroxide.

Nach dem Trocknen unter reduziertem Druck wurden 11,36g der amorphen Verbindung der Formel 3a isoliert.After drying under reduced pressure, 11.36 g of the amorphous compound of formula 3a were isolated.

HPLC-Analyse: 86,5% Reinheit/7,6% N5-Methyl-THF.HPLC analysis: 86.5% purity / 7.6% N 5 -methyl-THF.

Dieses Produkt wurde nicht weiter gereinigt, sondern in verschiedene Salze, wie weiter unten beschrieben, übergeführt.This product was not further purified but converted into various salts as described below.

Beispiel 2Example 2

Herstellung des Ethanolaminsalzes von (6RS)-N6,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3c (Methode A).Preparation of the ethanolamine salt of (6RS) -N 6 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 3c (Method A).

Zu einer Lösung von 11,36g der Verbindung der Formel 3a, gelöst in 170 ml trockenem DMSO und gerührt bei Raumtemperatur unter Sauerstoffausschluß, wurde eine Lösung von 3,0ml Ethanolamin (2Equivalente) in 50ml DMSO tropfenweise hinzugegeben. Das Gemisch wurde anschließend mittels Filtration von einer leichten Trübung befreit und langsam zu 600ml gerührtem Ethylacetat hinzugegeben. Nach einem weiteren Rühren während 20 Minuten bei Raumtemperatur wurde das ausgefallene Produkt mittels Filtration gesammelt und zweimal mit Ethylacetat und einmal mit Diethylether gewaschen. Nach dem Trocknen unter reduziertem Druck wurden 14,22g der Verbindung der Formel 3c isoliert.To a solution of 11.36 g of the compound of formula 3a dissolved in 170 ml of dry DMSO and stirred at room temperature with exclusion of oxygen was added dropwise a solution of 3.0 ml of ethanolamine (2 equivalents) in 50 ml of DMSO. The mixture was then freed by filtration from a slight haze and slowly added to 600 ml of stirred ethyl acetate. After further stirring for 20 minutes at room temperature, the precipitated product was collected by filtration and washed twice with ethyl acetate and once with diethyl ether. After drying under reduced pressure, 14.22 g of the compound of formula 3c were isolated.

HPLC-Analyse: 83,8% Reinheit/7,1 % N5-Methyl-THF.HPLC analysis: 83.8% purity / 7.1% N 5 -methyl-THF.

UV (c = 20mg/l in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3): Amax = 293nm (ε = 43000) Amin = 247nm Amax/Amin = 3,9. [a]D = +10,4°(c = 1 in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3).UV (c = 20 mg / l in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3): A max = 293 nm (ε = 43,000) A min = 247 nm A max / A min = 3.9. [a] D = + 10.4 ° (c = 1 in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3).

NMR (220 MHz/in DMSO-Pyridin 9:1 ):2 charakteristische Doublets (J = 4Hz) bei 5,05ppM (1 H)/3,85ppM (1 H) für die C-11 Methylenprotonen.NMR (220 MHz / in DMSO-pyridine 9: 1): 2 characteristic doublets (J = 4Hz) at 1.05ppM (1H) / 3.85ppM (1H) for the C-11 methylene protons.

Beispiel 3Example 3

Herstellung des Triethanolaminsalzes von (6RS)-NB,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3d (Methode A).Preparation of triethanolamine salt of (6RS) -N B , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula 3d (method A).

Zu einer Lösung von 4,35g der Verbindung der Formel 3a in 50 ml trockenem DMSO, gerührt bei Raumtemperatur unter Argon, wurde tropfenweise eine Lösung von 2,84g Triethanolamin (2 Equivalente) in 14 ml DMSO hinzugegeben. Nach dem Abfiltrieren einer kleinen Menge an weißem Niederschlag wurde die Lösung tropfenweise zu einem gerührten Gemisch von 220ml Ethanol und 110 ml Diethylether hinzugegeben.To a solution of 4.35 g of the compound of formula 3a in 50 ml of dry DMSO, stirred at room temperature under argon, was added dropwise a solution of 2.84 g of triethanolamine (2 equivalents) in 14 ml of DMSO. After filtering off a small amount of white precipitate, the solution was added dropwise to a stirred mixture of 220 ml of ethanol and 110 ml of diethyl ether.

Die Suspension wurde während weiteren 30 Minuten bei einer Temperatur von +4°C gerührt. Der Festkörper wurde mittels Filtration gesammelt, einmal mit Ethanol/Diethylether 2:1, und einmal mit Diethylether gewaschen, und unter reduziertem Druck getrocknet, wobei man 4,88g der Verbindung der Formel 3d erhielt.The suspension was stirred for a further 30 minutes at a temperature of + 4 ° C. The solid was collected by filtration, washed once with ethanol / diethyl ether 2: 1, once with diethyl ether, and dried under reduced pressure to give 4.88 g of the compound of formula 3d.

HPLC-Analyse: 90,3% Reinheit/5,8% N5-Methyl-THF.HPLC analysis: 90.3% purity / 5.8% N 5 -methyl-THF.

UV (c = 20mg/l in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3):UV (c = 20 mg / l in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3):

\max = 295 nm (ε = 37 800) Xmi„ = 246 nm Amax/Amin = 4,9.\ max = 295 nm (ε = 37,800) X mi "= 246 nm A max / A min = 4.9.

[a]D = +11,7° (c = 1 in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3).[a] D = + 11.7 ° (c = 1 in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3).

NMR (220MHz/inD2O/NaOD):2 charakteristische Doublets (J = 4Hz) bei 5,03 ppM(1H)/3,90 ppm (iH)fürdie C-11 Methylenprotonen.NMR (220MHz / inD 2 O / NaOD): 2 characteristic doublets (J = 4Hz) at 5.03ppm (1H) / 3.90ppm (iH) for the C-11 methylene protons.

Beispiel 4Example 4

Herstellung des 2-Dimethylaminoethanolsalzes von (6RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3e (Methode A).Preparation of the 2-dimethylaminoethanol salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 3e (Method A).

Zu einer Lösung von 4,0g der Verbindung der Formel 3a in 46ml trockenem DMSO, gerührt bei Raumtemperatur unter Sauerstoffausschluß, wurde tropfenweise eine Lösung von 1,76ml 2-Dimethylaminoethanol (2 Equivalente) in 13 ml DMSO hinzugegeben. Nach dem Abfiltrieren einer kleinen Menge an Niederschlag wurde die Lösung tropfenweise zu einem gerührten Gemisch aus 200ml Ethanol und 100 ml Diethylether bei einer Temperatur von +40C hinzugegeben. Nach dem Rühren während weiteren 30 Minuten bei dergleichen Temperatur wurde der Festkörper mittels Filtration gesammelt, und einmal mit Ethanol-Diethylether 2:1 und einmal mit Diethylether gewaschen. Nach dem Trocknen unter reduziertem Druck wurden 3,93g der Verbindung der Formel 3e isoliert.To a solution of 4.0 g of the compound of formula 3a in 46 ml of dry DMSO, stirred at room temperature with exclusion of oxygen, was added dropwise a solution of 1.76 ml of 2-dimethylaminoethanol (2 equivalents) in 13 ml of DMSO. After filtering off a small amount of precipitation, the solution was added dropwise to a stirred mixture of 200 ml of ethanol and 100 ml of diethyl ether at a temperature of +4 0 C. After stirring for a further 30 minutes at the same temperature, the solid was collected by filtration and washed once with ethanol-diethyl ether 2: 1 and once with diethyl ether. After drying under reduced pressure, 3.93 g of the compound of formula 3e were isolated.

HPLC-Analyse: 91 % Reinheit/5,7% Ns-Methyl-THF.HPLC analysis: 91% purity / 5.7% N s -methyl-THF.

UV (c = 20mg/l in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3):UV (c = 20 mg / l in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3):

\msx = 295nm (ε = 31200) \m!n = 246nm Amax/Amin = 4,5. \ msx = 295nm (ε = 31200) \ m! n = 246nm A max / A min = 4.5.

[a]D = +12,1° (c = 1 in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3).[a] D = + 12.1 ° (c = 1 in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3).

NMR (220 MHz/in D2O/NaOD): 2 charakteristische Doublets (J = 4Hz) bei 5,03 ppM (1 H)/3,90ppm (1 H) für die C-11 Methylenprotonen.NMR (220 MHz / in D 2 O / NaOD): 2 characteristic doublets (J = 4Hz) at 5.03 ppM (1H) / 3,90ppm (1H) for the C-11 methylene protons.

Beispiel 5Example 5

Herstellung des tert.-Butylaminsalzes von (6 RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3f (Methode A).Preparation of the tert-butylamine salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 3f (Method A).

Zu einer Lösung von 4,3g der Verbindung der Formel 3a in 60 ml trockenem DMSO, gerührt bei Raumtemperatur unter Argon, wurde tropfenweise eine Lösung von 1,97ml tert.-Butylamin (2 Equivalente) in 17 ml DMSO hinzugegeben. Nach wenigen Minuten des Rührens wurde ein dicker Niederschlag gebildet. Das Gemisch wurde weiter bei einer Temperatur von +180C während einer Stunde gerührt. Das Produkt wurde isoliert mittels wiederholter Zentrifugation bei 3500 U/Min, (rpm), wobei das Produkt vorgängig in einem Gemisch von 100ml Ethanol und 50ml Diethylether und danach in reinem Diethylether suspendiert wurde.To a solution of 4.3 g of the compound of formula 3a in 60 ml of dry DMSO, stirred at room temperature under argon, was added dropwise a solution of 1.97 ml of tert-butylamine (2 equivalents) in 17 ml of DMSO. After a few minutes of stirring, a thick precipitate was formed. The mixture was further stirred at a temperature of +18 0 C for one hour. The product was isolated by repeated centrifugation at 3500 rpm, (rpm), the product being previously suspended in a mixture of 100 ml of ethanol and 50 ml of diethyl ether and then in pure diethyl ether.

Nach dem Trocknen unter reduziertem Druck wurden 4,63g der Verbindung der Formel 3f isoliert.After drying under reduced pressure, 4.63 g of the compound of formula 3f were isolated.

HPLC-Analyse: 89% Reinheit/7,1 % N5-Methyl-THF.HPLC analysis: 89% purity / 7.1% N 5 -methyl-THF.

UV (c = 20mg/l in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3):UV (c = 20 mg / l in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3):

\max = 295nm (ε = 32700) Xmin = 246nm Amax/Ami„ = 4,5. \ max = 295nm (ε = 32700) X min = 246nm A max / A mi "= 4.5.

[a]D =+11,0° (c = 1 in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3).[a] D = + 11.0 ° (c = 1 in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3).

NMR (220 MHz/in D2O/NaOD): 2 charakteristische Doublets (J = 4Hz) bei 5,03 ppM (1 H)/3,90ppm (1 H) für die C-11 Methylenprotonen.NMR (220 MHz / in D 2 O / NaOD): 2 characteristic doublets (J = 4Hz) at 5.03 ppM (1H) / 3,90ppm (1H) for the C-11 methylene protons.

Beispiel 6Example 6

Herstellung des (L)-Lysinsalzes von (6RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3q (Methode A).Preparation of the (L) -lysine salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 3q (Method A).

Zu einer Lösung von 4,05g der Verbindung der Formel 3a in 55 ml trockenem DMSO, gerührt bei Raumtemperatur unter Argon, wurdetropfenweise eine Lösung von 2,60g (L)-Lysin (2 Equivalente) in 15ml DMSO hinzugegeben. Nachdem Rühren während einigen Minuten wurde ein dicker Niederschlag gebildet. Das Gemisch wurde weiterhin bei einer Temperatur von +18°C während einer Stunde gerührt. Das Produkt wurde isoliert durch wiederholte Zentrifugation bei 3 500 rpm, wobei das Produkt vorgängig in einem Gemisch von 100ml Ethanol und 50ml Diethylether und anschließend in reinem Diethylether suspendiert wurde.To a solution of 4.05 g of the compound of formula 3a in 55 ml of dry DMSO, stirred at room temperature under argon, was added dropwise a solution of 2.60 g of (L) -lysine (2 equivalents) in 15 ml of DMSO. After stirring for a few minutes, a thick precipitate was formed. The mixture was further stirred at a temperature of + 18 ° C for one hour. The product was isolated by repeated centrifugation at 3,500 rpm, the product being previously suspended in a mixture of 100 ml of ethanol and 50 ml of diethyl ether and then in pure diethyl ether.

Nach dem Trocknen unter reduziertem Druck wurden 5,03g der Verbindung der Formel 3q isoliert.After drying under reduced pressure, 5.03 g of the compound of formula 3q were isolated.

HPLC-Analyse: 90% Reinheit/6,1 % N5-Methyl-THF.HPLC analysis: 90% purity / 6.1% N 5 -methyl-THF.

UV (c = 20mg/l in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3):UV (c = 20 mg / l in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3):

Amax = 295 nm (ε = 29500) \min = 246 nm Amax/Amin = 4,4.A max = 295 nm (ε = 29,500) \ min = 246 nm A max / A min = 4.4.

[a]D = +11,5° (c = 1 in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3).[ a ] D = + 11.5 ° (c = 1 in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3).

NMR (220 MHz/in D2O/NaOD): 2 charakteristische Doublets (J = 4Hz) bei 5,03 ppM (1 H)/3,90ppm (1 H) für die C-11 Methylenprotonen.NMR (220 MHz / in D 2 O / NaOD): 2 characteristic doublets (J = 4Hz) at 5.03 ppM (1H) / 3,90ppm (1H) for the C-11 methylene protons.

Beispiel 7Example 7

Herstellung des (L)-Argininsalzesvon (6 RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3 h (Methode A). Das (L)-Argininsalz der Formel 3h wurde in analoger Art und Weise, wie in Beispiel 6 beschrieben, hergestellt.Preparation of the (L) -arginine salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula 3h (Method A). The (L) -arginine salt of Formula 3h was prepared in an analogous manner as described in Example 6.

Beispiel 8Example 8

Herstellung des Calciumsalzes von (6RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3i (Methode A).Preparation of the calcium salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 3i (Method A).

1,0g der rohen Verbindung der Formel 3b wurde in kleinen Mengen zu einem Gemisch aus 16ml entgastem Wasser und einem Tropfen 1 N NaOH hinzugegeben, und heftig bei einer Temperatur von+4°C gerührt. Während der Hinzugabe wurde der pH-Wert des Gemisches bei etwa 9,0 mittels der gelegentlichen Hinzugabe von 1 N NaOH gehalten. Danach wurden 0,92 ml einer 2M Kalziumchloridlösung zum Gemisch hinzugegeben. Nach dem Rühren während 10 Minuten wurde die Lösung von einem unlöslichen Niederschlag mittels Filtration befreit. Letztendlich wurde das Gemisch tropfenweise mit 20 ml Aceton unter Rühren bei einer Temperatur von +40C verdünnt, wobei man einen gelblichen Niederschlag erhielt, welcher mittels Filtration isoliert wurde, und einmal mit absolutem Ethanol und einmal mit Aceton gewaschen wurde und unter reduziertem Druck getrocknet wurde. Auf diese Art und Weise wurden 673 mg des Kalziumsalzes der Formel 3i isoliert. HPLC-Analyse: 91 % Reinheit/6% N6-Methyl-THF.1.0 g of the crude compound of formula 3b was added in small portions to a mixture of 16 ml of degassed water and one drop of 1N NaOH and stirred vigorously at a temperature of + 4 ° C. During the addition, the pH of the mixture was maintained at about 9.0 by the occasional addition of 1N NaOH. Thereafter, 0.92 ml of a 2M calcium chloride solution was added to the mixture. After stirring for 10 minutes, the solution was freed from an insoluble precipitate by filtration. Finally, the mixture was diluted dropwise with 20 ml of acetone with stirring at a temperature of +4 0 C to give a yellowish precipitate, which was isolated by filtration, and washed once with absolute ethanol and once with acetone and dried under reduced pressure has been. In this way, 673 mg of the calcium salt of formula 3i were isolated. HPLC analysis: 91% purity / 6% N 6 -methyl-THF.

UV (c = 20mg/1 in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3):UV (c = 20 mg / l in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3):

Amax = 296nrn(e = 28900) Km]n = 245nm Am3X/Amin = 3,68.A max = 296nrn (e = 28900) K m] n = 245nm A m3X / A min = 3.68.

Ia]0 = +12,6° (c = 1 in 0,01 N NaOH). Ia] 0 = + 12.6 ° (c = 1 in 0.01 N NaOH).

H2O Gehalt (nach Karl Fischer): 8,9%.H 2 O content (according to Karl Fischer): 8.9%.

Elementaranalyse für CH2-THF-Ca X 3,5H2OElemental analysis for CH 2 -THF-Ca X 3,5H 2 O

Berechneter Wert exp.WertCalculated value exp.Value

%c% c 43,0243.02 43,2743.27 %H%H 5,055.05 4,844.84 %N% N 17,5617.56 17,5717.57 %Ca% Ca 7,187.18 6,99.6.99.

Beispiel 9Example 9

Herstellung des Magnesiumsalzes von (6RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3k (Methode A). 1,0g der rohen Verbindung der Formel 3b wurden in kleinen Portionen zu einem Gemisch aus 16ml entgastem Wasser und einem Tropfen 1 N NaOH hinzugegeben, und heftig bei einer Temperatur von +40C gerührt. Während der Hinzugabe wurde der pH-Wert des Gemisches bei etwa 9,0 mittels der gelegentlichen Hinzugabe von 1 N NaOH gehalten. Anschließend wurden 0,92 ml einer 2 M Magnesiumchloridlösung zum Gemisch hinzugegeben. Nachdem Rühren während 10 Minuten wurde die Lösung von einem kleinen unlöslichen Niederschlag mittels Filtration befreit. Das Gemisch wurde tropfenweise mit 20 ml Aceton verdünnt, wobei das Gemisch bei einer Temperatur von +4°C gerührt wurde. Man erhielt einen gelblichen Niederschlag, welcher mittels Filtration isoliert wurde, und einmal mit H2O, einmal mit Ethanol, und einmal mit Aceton gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet wurde. Auf diese Art und Weise wurden 537 mg des Magnesiumsalzes der Formel 3 k isoliert. HPLC-Analyse: 92,4% Reinheit/3,4% N6-Methyl-THFPreparation of the magnesium salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula 3k (method A). 1.0 g of the crude compound of formula 3b was added in small portions to a mixture of 16 ml of degassed water and one drop of 1 N NaOH, and stirred vigorously at a temperature of +4 0 C. During the addition, the pH of the mixture was maintained at about 9.0 by the occasional addition of 1N NaOH. Subsequently, 0.92 ml of a 2 M magnesium chloride solution was added to the mixture. After stirring for 10 minutes, the solution was freed from a small insoluble precipitate by filtration. The mixture was diluted dropwise with 20 ml of acetone, the mixture being stirred at a temperature of + 4 ° C. A yellowish precipitate was obtained, which was isolated by filtration and washed once with H 2 O, once with ethanol, once with acetone and dried under reduced pressure. In this way, 537 mg of the magnesium salt of the formula 3 k were isolated. HPLC analysis: 92.4% purity / 3.4% N 6 -methyl-THF

UV (c = 20 mg/l in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3): Xmax = 296nm(e = 27600) Amin = 244nm Amax/Amin = 3,68UV (c = 20 mg / l in 0.1M phosphate buffer at pH 7.3): X max = 296nm (e = 27600) A min = 244nm A max / A min = 3.68

Ia]0 = +12,1° (C= 1 in 0,1 N NaOH) Ia] 0 = + 12.1 ° (C = 1 in 0.1 N NaOH)

H2O Gehalt (nach Karl Fischer): 8,9%.H 2 O content (according to Karl Fischer): 8.9%.

Elementaranalyse* für CH2-THF1Mg X 5 H2OElemental analysis * for CH 2 -THF 1 Mg X 5 H 2 O

Berechneter Wert exp.WertCalculated value exp.Value

%c% c 42,1742.17 42,2642.26 %H%H 5,495.49 5,515.51 %N% N 17,2117.21 16,3016.30 %Mg% Mg 4,274.27 5,02.5.02.

* Probe getrocknet in der Luft: 15,8% H2O = Pentahydrat.* Air dried sample: 15.8% H 2 O = pentahydrate.

Beispiel 10Example 10

Herstellung des Natriumsalzes von (6RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 31 (Methode B).Preparation of the sodium salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 31 (Method B).

1,0g Kalziumsalz der Formel 3i wurden zu 15ml einer 0,133 M Lösung von Natriumoxalatin H2O hinzugegeben und bei einer Temperatur von +40C unter Sauerstoffausschluß gerührt. Nach 30 Minuten Rühren bei der gleichen Temperatur wurde das ausgefällte Kalziumoxalat mittels Zentrifugation vom Gemisch entfernt, und es wurde eine klare überstehende Lösung erhalten, welche langsam mit 75 ml Aceton unter Rühren bei einer Temperatur von +40C verdünnt wurde. Der erhaltene Niederschlag wurde mittels Filtration isoliert, einmal mit frischem Aceton gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 737 mg der Verbindung der Formel 31 als ein gelbes Pulver zu ergeben.1.0 g of calcium salt of the formula were added 3i 2 O to 15 ml of a 0.133 M solution of H Natriumoxalatin and stirred at a temperature of +4 0 C with exclusion of oxygen. After 30 minutes of stirring at the same temperature, the precipitated calcium oxalate was removed by centrifugation from the mixture and a clear supernatant solution was obtained, which was slowly diluted with 75 ml of acetone with stirring at a temperature of +4 0 C. The resulting precipitate was isolated by filtration, washed once with fresh acetone and dried under reduced pressure to give 737 mg of the compound of formula 31 as a yellow powder.

HPLC-Analyse: 88,6% Reinheit/4,5% N5-Methyl-THF.HPLC analysis: 88.6% purity / 4.5% N 5 -methyl-THF.

UV (c = 20 mg/1 in 0,1 M Phosphat-Puffer bei pH 7,3):UV (c = 20 mg / l in 0.1 M phosphate buffer at pH 7.3):

Xmax= 296nm(s = 29600) Äm!„ = 245nm Amax/Amin = 4,00.X max = 296nm (s = 29600) Ä m! "= 245nm A max / A min = 4.00.

[a]0 = +12,5° (c = 1 in 0,01 NaOH).[a] 0 = + 12.5 ° (c = 1 in 0.01 NaOH).

Beispiel 11Example 11

Herstellung destert.-Butylaminsalzesvon (6RS)-Ns,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3f (Methode B). 1,0g Kalziumsalz der Formel 3i wurde zu 15ml einer 0,133M Lösung des Oxalsäuresalzes vontert.-Butylamin hinzugegeben und bei einer Temperatur von +40C unter Argon gerührt. Nach 30 Minuten Rühren bei gleicher Temperatur wurde derPreparation of tert-butylamine salt of (6RS) -N s , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula 3f (Method B). 1.0 g of calcium salt of the formula was added 3i vontert.-butylamine to 15ml of a solution of 0,133M oxalic acid salt and stirred at a temperature of +4 0 C under argon. After stirring for 30 minutes at the same temperature was the

Kalziumoxalatniederschlag mittels Zentrifugation entfernt, und die erhaltene klare überstehende Lösung wurde langsam mit 75 mi Aceton unter Rühren bei einer Temperatur von +40C verdünnt. Der erhaltene Niederschlag wurde mittels Filtration isoliert, einmal mit frischem Aceton gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet. Um 965 mg der Verbindung der Formel 3f als ein gelbes Pulver zu ergeben.Kalziumoxalatniederschlag removed by centrifugation and the clear supernatant solution was diluted slowly with 75 ml of acetone with stirring at a temperature of +4 0 C. The resulting precipitate was isolated by filtration, washed once with fresh acetone and dried under reduced pressure. To give 965 mg of the compound of formula 3f as a yellow powder.

HPLC-Analyse; 87,2% Reinheit / 5,1 % N5-Methyl-THF.HPLC analysis; 87.2% purity / 5.1% N 5 -methyl-THF.

(Weitere analytische Daten: siehe Beispiel 5.)(Further analytical data: see example 5.)

Beispiel 12Example 12

Herstellung des Magnesiumsalzes von (6RS)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3k (Methode C).Preparation of the magnesium salt of (6RS) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 3k (Method C).

65g von 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure wurden in 400 ml Wasser suspendiert und der pH-Wert wurde auf einen Wert von 9,0 mittels der Hinzugabe von konzentriertem Ammoniak gebracht, wobei eine klare Lösung erhalten wurde. Dann wurden 13ml einer 36%igen wäßrigen Formaldehydlösung hinzugetropft, und das Gemisch wurde während 10 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen.65 g of 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid were suspended in 400 ml of water and the pH was brought to a value of 9.0 by the addition of concentrated ammonia, whereby a clear solution was obtained. Then, 13 ml of a 36% aqueous solution of formaldehyde was dropped, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 10 minutes.

Nach der Zugabe einer Lösung aus 50g MgCI2 · 6 H2O in 50 ml Wasser rührte man das so erhaltene Gemisch während 30 Minuten bei Raumtemperatur und ließ es dann während 2 Stunden stehen. Dann wurde das gewünschte Produkt abgenutscht, und einmal mit Wasser und einmal mit Ethanol gewaschen. Nach dem Trocknen bei vermindertem Druck bei 50°C wurden 27g des reinen N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure-Magnesiumsalzes isoliert.After the addition of a solution of 50 g MgCl 2 · 6 H 2 O in 50 ml water by stirring the resulting mixture for 30 minutes at room temperature and then allowed to stand for 2 hours. Then, the desired product was filtered with suction, and washed once with water and once with ethanol. After drying at 50 ° C under reduced pressure, 27 g of the pure N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid magnesium salt were isolated.

HPLC-Analyse: 98,8% Reinheit.HPLC analysis: 98.8% purity.

UV (c = 20mg/l in 0,01 N NaOH):UV (c = 20 mg / l in 0.01 N NaOH):

\max = 296nmte = 30200) Amin = 245nm Amax/Amin = 4,82.\ max = 296nmte = 30200) A min = 245nm A max / A min = 4.82.

[a]D = +9,4° (c = 1 in 0,01 N NaOH).[a] D = + 9.4 ° (c = 1 in 0.01 N NaOH).

Beispiel 13Example 13

Herstellung des Calciumsalzes von (6RS)-Ns,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel 3i (Methode C).Preparation of the calcium salt of (6RS) -N s , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula 3i (Method C).

190 g von 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure wurden in 1250 ml Wasser suspendiert. 90 ml konz. Ammoniak und 50 ml Pyridin wurden dann zugegeben, wobei man einen pH-Wert von 8,5 erreichte.190 g of 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid were suspended in 1250 ml of water. 90 ml conc. Ammonia and 50 ml pyridine were then added to reach a pH of 8.5.

Nach der Zugabe von 40 ml wäßriger, 36%iger Formaldehydlösung wurde das Gemisch durch eine Schicht aus Aktivkohle und Celite filtriert.After the addition of 40 ml aqueous, 36% formaldehyde solution, the mixture was filtered through a layer of charcoal and celite.

Zur erhaltenen klaren Lösung wurden unter Rühren 200 ml einer 30%igen Calciumchlorid Lösung zugegeben, und der pH-Wert wurde mittels der Zugabe von konz. Ammoniak auf einen Wert von 9,0 eingestellt.200 ml of a 30% calcium chloride solution were added with stirring to the clear solution obtained, and the pH was adjusted by means of the addition of conc. Ammonia adjusted to a value of 9.0.

Dann wurde auf eine Temperatur von +5°C abgekühlt, und man ließ das Gemisch während 2 Stunden stehen. Anschließend wurde abfiltriert, und das erhaltene Produkt wurde einmal mit Wasser und einmal mit Ethanol gewaschen. Nach dem Trocknen unter vermindertem Druck bei einer Temperatur von 500C wurden 180 g des reinen N5,N10-MethyIen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure-Calciumsalzes isoliert.It was then cooled to a temperature of + 5 ° C, and the mixture was allowed to stand for 2 hours. It was then filtered off and the product obtained was washed once with water and once with ethanol. After drying under reduced pressure at a temperature of 50 0 C, 180 g of the pure N 5, N 10 -MethyIen-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid calcium salt was isolated.

HPLC-Analyse: 96,5% Reinheit / 0,6% N6-Methyl-THF.HPLC analysis: 96.5% purity / 0.6% N 6 -methyl-THF.

UV (c = 20mg/l in 0,01 N NaOH):UV (c = 20 mg / l in 0.01 N NaOH):

\max = 296nm (ε = 26400) Xmin = 245nm Amax/Amin = 4,87.\ max = 296nm (ε = 26400) X min = 245nm A max / A min = 4.87.

[a]D =+17,3° (c = 1/0,01 N NaOH).[a] D = + 17.3 ° (c = 1 / 0.01 N NaOH).

(6R)- und (6S)-N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäuresalze gemäß den Beispielen 2-11 wurden in derselben Art und Weise erhalten, wenn man jeweils von den (6R)-und (6S)-freien Säuren ausgeht.(6R) - and (6S) -N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid salts according to Examples 2-11 were obtained in the same manner when each of the (6R) - and (6S) -free acids.

Stabilität der Verbindungen der Formeln 3 c, 3 d, 3 e und 3f in 0,1M Phosphat-PufferStability of the compounds of formulas 3c, 3d, 3e and 3f in 0.1M phosphate buffer

Eine 0,1%ige Lösung in 0,1 M Phosphat-Puffer/pH 9,0 von jeder der Titelverbindungen wurde mittels HPLC bei den Zeiten 0,60, 120,300 Minuten analysiert, wobei jeweils 2,5 μΙ Injektionen getätigt wurden. Die prozentuale Wiedergewinnung bei der Zeit χ (Rx) wurde erhalten mittels derfolgenden Formel:A 0.1% solution in 0.1 M phosphate buffer / pH 9.0 of each of the title compounds was analyzed by HPLC at times 0.60, 120, 300 minutes, with 2.5 μΙ injections each. The percentage recovery at time χ (R x ) was obtained by the following formula:

, Rx = (B/A)-100, wobei, R x = (B / A) -100, where

A die integrierte CH2-THF Peak-Fläche zur Zeit 0 darstellt und B die integrierte Peak-Fläche zur Zeit χ darstellt.A represents the integrated CH 2 -THF peak area at time 0 and B represents the integrated peak area at time χ.

Zeit Rx (3 c) Rx (3d) Rx (3 e) Rx (3 f)Time R x (3 c) R x (3d) R x (3 e) R x (3 f)

00 100100 100100 100100 100100 6060 96,796.7 95,795.7 97,697.6 97,097.0 120120 93,393.3 92,192.1 94,294.2 94,394.3 300300 85,185.1 -- 88,388.3 87,587.5

Pharmazeutische Präparate für Injektionen a) Ampullen mit FlüssigkeitenPharmaceutical preparations for injections a) Ampoules containing liquids

Die Verbindungen der Beispiele 2 bis 13, in einer Menge von 5-150mg, wurden in einem pharmazeutisch annehmbaren Puffer, wie etwa 0,1 M Phosphat-Puffer, gelöst, so daß die Lösung einen pH-Wert von 9,0 hatte.The compounds of Examples 2 to 13, in an amount of 5-150 mg, were dissolved in a pharmaceutically acceptable buffer, such as 0.1 M phosphate buffer, so that the solution had a pH of 9.0.

Die Lösung wurde bis zur Sterilität filtriert und in dunkle Glasampullen gefüllt, welche unter sterilen Bedingungen abgedichtet wurden.The solution was filtered to infinity and filled into dark glass vials which were sealed under sterile conditions.

Beispielexample

Eine Verbindung der Beispiele 2-13: 5-150mg; Pufferlösung, eingestellt auf pH9,0:1-50 ml.A compound of Examples 2-13: 5-150 mg; Buffer solution adjusted to pH9.0: 1-50 ml.

b) Lyophilisierte Präparateb) lyophilized preparations

Die Verbindungen der Beispiele 2 bis 13, in einer Menge von 50-250mg, wurden entweder in einem pharmazeutisch annehmbaren Puffer, wie etwa 0,1 M Phosphat-Puffer, oder in einer physiologischen Natriumchloridlösung gelöst. Die Lösung wurde bis zur Sterilität filtriert, in Proberöhrchen abgefüllt und in einer dem Fachmann bekannten Art lyophilisiert. Bei Bedarf kann das lyophilisierte Pulver wieder rekonstitutioniert werden mittels der Hinzugabe von sterilem Wasser vorgängig der Verabfolgung.The compounds of Examples 2 to 13, in an amount of 50-250 mg, were dissolved either in a pharmaceutically acceptable buffer, such as 0.1 M phosphate buffer, or in a physiological sodium chloride solution. The solution was filtered to infinity, filled into sample tubes and lyophilized in a manner known to those skilled in the art. If necessary, the lyophilized powder may be reconstituted by the addition of sterile water prior to administration.

Beispielexample

Eine Verbindung der Beispiele 2-13: 50-250mg;A compound of Examples 2-13: 50-250 mg;

entweder Pufferlösung oder physiologische Natriumchloridlösung: 3-2OmI.either buffer solution or physiological sodium chloride solution: 3-2OmI.

Lyophilisieren der sterilen Lösung.Lyophilize the sterile solution.

Pharmazeutische Präparate für die orale AnwendungPharmaceutical preparations for oral use

Als ein Beispiel eines oralen Präparates werden Formulierungen für enterisch beschichtete Tabletten beschrieben, wobei klar ist, daß weitere orale Formen, wie etwa enterisch beschichtete Kapseln, in analoger Art und Weise hergestellt werden können.As an example of an oral preparation, formulations for enteric coated tablets are described, it being understood that other oral forms, such as enteric coated capsules, can be prepared in an analogous manner.

Enterisch beschichtete TablettenEnteric coated tablets

Die enterisch beschichteten Tabletten, welche von 5-30 mg einer der Komponente der Beispiele 2-13 enthalten können, werden in der per se im Stand der Technik bekannten Art hergestellt, wobei die Enterobeschichtung ausgeführt wird gemäß „Remington Pharmaceutical Sciences", Seite 1614,15th edition, 1975 und „Theory and Practice of Industrial Pharmacy", Lackman-, Liberman, Canig, Seiten 116,371,470-2nd edition 1976.The enteric coated tablets, which may contain from 5-30 mg of one of the components of Examples 2-13, are prepared in the manner known per se in the art, the entero-coating being carried out according to "Remington Pharmaceutical Sciences", page 1614, 15th edition, 1975 and "Theory and Practice of Industrial Pharmacy", Lackman, Liberman, Canig, pages 116,371,470-2nd edition 1976.

Beispielexample Verbindung der Beispiele 1-13:Compound of Examples 1-13: 5 bis 30 mg5 to 30 mg Lactose USP:Lactose USP: 150 bis 125 mg150 to 125 mg Stärke NF:Starch NF: 35 bis 30 mg35 to 30 mg Magnesiumstearat NF:Magnesium stearate NF: 3mg3mg EudragitNF:EudragitNF: 4mg4mg TaIcNFTaIcNF 4 mg4 mg Polyethylenglycol 6000 NF:Polyethylene glycol 6000 NF: 0,4mg0.4mg

Klinische Resultate und therapeutische Anwendungen von Salzen der N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäureClinical results and therapeutic applications of salts of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid

Als Beispiele der möglichen therapeutischen Anwendungen der beschriebenen Verbindungen liegen folgende klinische Ergebnisse vor:As examples of the possible therapeutic applications of the compounds described, the following clinical results are available:

Patient A:Patient A:

Geschlecht: weiblich Alter: 19Gender: female Age: 19

Diagnose: osteogenes Sarkom mit Atmungs- und SchluckbeschwerdenDiagnosis: osteogenic sarcoma with respiratory and swallowing symptoms

Behandlung: 5-Fluorouracil intravenös verabreicht (300-750 mg/Woche) in Kombination mit intravenös verabreichtem N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure-Calciumsalz(100 mg/Woche).Treatment: 5-fluorouracil administered intravenously (300-750 mg / week) in combination with intravenous N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid calcium salt (100 mg / week).

Klinischer Befund nach 5wöchiger Behandlung:·Clinical findings after 5 weeks of treatment: ·

— Sichtbare Reduktion des Tumorvolumens- Visible reduction of tumor volume

- Verschwinden der Atmungs- und Schluckbeschwerden.- disappearance of respiratory and swallowing symptoms.

Patient B:Patient B:

Geschlecht: männlich Alter: 52Sex: male Age: 52

Diagnose: Rektum Tumor mit LebermetastasenDiagnosis: rectum tumor with liver metastases

Behandlung: 5-Fluorouracil intravenös verabreicht (300 mg/Woche) in Kombination mit intravenös verabreichtem N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure-Calciumsalz (100 mg/Woche).Treatment: 5-fluorouracil administered intravenously (300 mg / week) in combination with intravenous N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid calcium salt (100 mg / week).

Klinischer Befund nach 5wöchiger Behandlung:Clinical findings after 5 weeks of treatment:

- Nekrose des Tumors und Ausscheidung des nekrotischen Gewebes- Necrosis of the tumor and excretion of the necrotic tissue

— Gewichtszunahme des Patienten.- Weight gain of the patient.

Es sei festgestellt, daß eine vorherige Behandlung des Patienten mit äquivalenten Mengen von 5-Fluorouracil und Leucovorin Calcium keine feststellbare Verbesserung des klinischen Zustands ergab.It should be noted that prior treatment of the patient with equivalent amounts of 5-fluorouracil and leucovorin calcium resulted in no detectable improvement in clinical condition.

Patient C:Patient C:

Geschlecht: Alter: Diagnose: BehandlungGender: Age: Diagnosis: Treatment

weiblich 53 Brustkarzinom links 5-Fluorouracil intravenös verabreicht (2x 250 mg/Woche) während 3 Wochen und anschließend (2x 250mg/Woche) während 2 Wochen in Kombination mit intravenös verabreichtem N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure-CalciumsalzOOOmg/B-Fluorouracil Verabreichung).female 53 Left breast carcinoma 5-fluorouracil administered intravenously (2x 250 mg / week) for 3 weeks and then (2 × 250 mg / week) for 2 weeks in combination with intravenous N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8 tetrahydrofolic acid calcium salt 100 μg / B fluorouracil administration).

Klinischer Befund nach 8 Wochen:Clinical findings after 8 weeks:

— Tumor praktisch nicht mehr sichtbar oder faßbar- Tumor practically no longer visible or tangible

- Heilende fibrotische Narben.- Healing fibrotic scars.

Die möglichen therapeutischen Anwendungen beschränken sich nicht auf die Behandlung der oben erwähnten Tumore mit Salzen der N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure in Kombination mit 5-Fluorouracil, sondern schließen auch Behandlungen von anderen Tumorarten mit Salzen der N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure in Kombination mit 5-Fluorouracil oder anderen Chemotherapeutika, wie ζ. B. Floxuridin (FUDR), Methotrexat, Cisplatin, Adriamycin, Vincristin, usw., ein.The potential therapeutic applications are not limited to the treatment of the above-mentioned tumors with salts of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid in combination with 5-fluorouracil, but also include treatments of other types of tumors with salts N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid in combination with 5-fluorouracil or other chemotherapeutic agents, such as ζ. , Floxuridine (FUDR), methotrexate, cisplatin, adriamycin, vincristine, etc.

Claims (18)

Patentansprüche:
1. Salze von N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formeln I a und Ib
claims:
1. Salts of N 5 , N 10 -Methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formulas I a and Ib
COOCOO Ibib in Form des (6RS)-Diastereoisomerengemischesoderin Form der einzelnen (6R) oder (6S) Diastereoisomeren, worinin the form of the (6RS) diastereoisomeric mixture or in the form of the individual (6R) or (6S) diastereoisomers, wherein R ein mehrwertiges organisches und/oder anorganisches Kation ist, R1 und R2 ein einwertiges organisches und/oder anorganisches Kation sind, wobei R1 und R2 R is a polyvalent organic and / or inorganic cation, R 1 and R 2 are a monovalent organic and / or inorganic cation, wherein R 1 and R 2 gleich oder verschieden sein können, und
A einen Rest der Formel
may be the same or different, and
A is a radical of the formula
ist.is.
2. Salze nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es sich um pharmazeutisch und/oder therapeutisch annehmbare Salze handelt.2. Salts according to claim 1, characterized in that they are pharmaceutically and / or therapeutically acceptable salts. 3. Salze nach einem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß die anorganischen Kationen Alkali- oder Erdalkalimetallkationen sind, vorzugsweise Li+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+.3. Salts according to one of claims 1 to 2, characterized in that the inorganic cations are alkali or alkaline earth metal cations, preferably Li + , Na + , K + , Ca 2+ , Mg 2+ . 4. Salze nach einem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß die organischen Kationen ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Ethanolamin, Triethanolamin, 2-Dimethylaminoethanol, tert.-Butylamin, einer basischen Aminocarbonsäure, wie etwa Lysin, insbesondere (L)-Lysin, oder Arginin, insbesonder (L)-Arginin.4. Salts according to one of claims 1 to 2, characterized in that the organic cations are selected from the group consisting of ethanolamine, triethanolamine, 2-dimethylaminoethanol, tert-butylamine, a basic aminocarboxylic acid, such as lysine, in particular (L ) Lysine, or arginine, especially (L) arginine. 5. Verfahren zur Herstellung von Salzen nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man N5, N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel Il5. A process for the preparation of salts according to any one of claims 1 to 4, characterized in that N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula II COOHCOOH COOHCOOH in Form des (6RS)-Diastereoisomerengemischesoder in Form der einzelnen (6R) oder (6 S)-Diastereoisomeren vorlegt und dann mit einer organischen und/oder anorganischen Base oder mit einem Salz eines anorganischen Kations zur Reaktion bringt.in the form of the (6RS) -diastereoisomeric mixture or in the form of the individual (6R) or (6S) -diastereoisomers and then reacting with an organic and / or inorganic base or with a salt of an inorganic cation. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Reaktion in wenigstens einem Lösungsmittel erfolgt, vorzugsweise ausgewählt aus Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid, N,N-Dimethylacetamid, N-Methylpyrrolidon und Wasser.6. The method according to claim 5, characterized in that the reaction takes place in at least one solvent, preferably selected from dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone and water. 7. Verfahren zurHerstellung von Salzen nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Erdalkalimetallsalz der Formel 1117. Process for the preparation of salts according to one of claims 1 to 4, characterized in that an alkaline earth metal salt of the formula III (Hl)(Hl) R' ein Erdalkalimetallkation ist, vorzugsweise Ca2+, Mg2+, gemäß dem Verfahren nach einem der Ansprüche 5 bis 6 herstellt und dann mit einem entsprechenden Oxalsäuresalz zur Reaktion bringt, wobei das Erdalkalimetalloxalat ausfällt und wobei gleichzeitig das entsprechende organische und/oder anorganische Salz der Verbindung der Formel I gebildet wird, dann das ausgefällte Erdalkalimetalloxalat abtrennt, und dann aus der Lösung das gewünschte Salz der Formel I mittels Zugabe von wenigstens einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, beispielsweise Aceton, Methanol oder Ethanol, ausfällt.R 'is an alkaline earth metal cation, preferably Ca 2+ , Mg 2+ , prepared according to the process of any one of claims 5 to 6 and then reacted with a corresponding oxalic acid salt, wherein the alkaline earth metal oxalate precipitates and wherein at the same time the corresponding organic and / or inorganic Salt of the compound of formula I is formed, then the precipitated Erdalkalimetalloxalat separates, and then from the solution, the desired salt of formula I by addition of at least one water-miscible organic solvent, for example acetone, methanol or ethanol precipitates. 8. Verfahren zur Herstellung von Erdalkalimetallsalzen von N5, N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure der Formel Γ8. A process for the preparation of alkaline earth metal salts of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of the formula Γ in Form des (eRSj-Diasteroismerengemisches oder in Form der einzelnen (6R)-oder (6S)-Diastereoisomeren, worinin the form of the (eRSj-diastereoisomeric mixture or in the form of the individual (6R) or (6S) -diastereoisomers, wherein R' ein Erdalkalimetallkation ist, vorzugsweise Ca2+ oder Mg2+, dadurch gekennzeichnet, daß man eine wäßrige Lösung eines wasserlöslichen Salzes der 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure der Formel IVR 'is an alkaline earth metal cation, preferably Ca 2+ or Mg 2+ , characterized in that an aqueous solution of a water-soluble salt of 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid of formula IV COOHCOOH (IV)(IV) CooHCOOH vorlegt und dann mit Formaldehyd zur Reaktion bringt, und anschließend eine wäßrige Lösung eines Erdalkalimetallsalzes hinzugibt, wobei das entsprechende Erdalkalimetallsalz der Formel Γ ausfällt.initially introduced and then reacted with formaldehyde, and then adding an aqueous solution of an alkaline earth metal salt, wherein the corresponding alkaline earth metal salt of the formula Γ precipitates. 9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß man vor der Hinzugabe von Formaldehyd noch eine wasserlösliche, aromatische, Stickstoff enthaltende Base hinzugibt, welche insbesondere ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Pyridin und substituierten Pyridinen, beispielsweise Picoline, Lutidine, Ethylpyridine, wobei Pyridin bevorzugt ist.9. The method according to claim 8, characterized in that prior to the addition of formaldehyde is added to a water-soluble, aromatic, nitrogen-containing base, which is in particular selected from the group consisting of pyridine and substituted pyridines, such as picolines, lutidines, ethylpyridines, pyridine being preferred. 10. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß man das wasserlösliche Salz der 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure herstellt durch Umsetzung der freien Säure in Wasser mit einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Alkalihydroxiden, Alkalicarbonaten, Alkalihydrogencarbonaten, Ammoniak und organischen, Stickstoff enthaltenden Basen, wie beispielsweise Pyridin, Triethylamin, Triethanolamin.10. The method according to any one of claims 8 to 9, characterized in that one prepares the water-soluble salt of 5,6,7,8-tetrahydrofolic acid by reaction of the free acid in water with a compound selected from the group consisting of alkali metal hydroxides, Alkali carbonates, alkali hydrogencarbonates, ammonia and organic nitrogen-containing bases such as pyridine, triethylamine, triethanolamine. 11. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß man nach der Hinzugabe der Erdalkalimetallsalzlösung den pH-Wert auf einen Wert im Bereich von 8,5 bis 9,5, insbesondere 9,0, einstellt, vorzugsweise mittels der Hinzugabe einer wäßrigen Ammoniaklösung.11. The method according to any one of claims 8 to 10, characterized in that one adjusts the addition of the alkaline earth metal salt solution, the pH to a value in the range of 8.5 to 9.5, in particular 9.0, preferably by means of the addition an aqueous ammonia solution. 12. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß man die Reaktion bei einer Temperatur im Bereich von 10°C bis 300C, vorzugsweise bei Raumtemperatur, durchführt.12. The method according to any one of claims 8 to 11, characterized in that one carries out the reaction at a temperature in the range of 10 ° C to 30 0 C, preferably at room temperature. 13. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß man das Magnesiumsalz der N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure herstellt durch Umsetzung bei Raumtemperatur der 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure in Wasser mit einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Alkalihydroxiden, Alkalicarbonaten, Alkalihydrogencarbonaten, Ammoniak und organischen, Stickstoff enthaltenden Basen, wie beispielsweise Pyridin, Triethylamin, Triethanolamin, dann diese so hergestellte Salzlösung mit Formaldehyd zur Reaktion bringt, und anschließend eine wäßrige Lösung eines Magnesiumsalzes hinzugibt, wobei das Magnesiumsalz der N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure ausfällt.13. The method according to any one of claims 8 to 12, characterized in that one prepares the magnesium salt of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid by reaction at room temperature of 5,6,7,8- Tetrahydrofolic acid in water with a compound selected from the group consisting of alkali metal hydroxides, alkali metal carbonates, alkali metal bicarbonates, ammonia and organic nitrogen-containing bases, such as pyridine, triethylamine, triethanolamine, then reacting this salt solution prepared with formaldehyde, and then a aqueous solution of a magnesium salt added, wherein the magnesium salt of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid precipitates. 14. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß man das Calciumsalz der N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure herstellt durch Umsetzung bei Raumtemperatur der 5,6,7,8-Tetrahydrofolsäure in Wasser mit einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Alkalihydroxiden, Alkalicarbonaten, Alkalihydrogencarbonaten, Ammoniak und organischen, Stickstoff enthaltenden Basen, wie beispielsweise Pyridin, Triethylamin, Triethanolamin, dann zu dieser so hergestellten Salzlösung eine wasserlösliche, aromatische, Stickstoff enthaltende Base hinzugibt, welche insbesondere ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Pyridin und substituierten Pyridinen, beispielsweise Picoline, Lutidine, Ethylpyridine, wobei Pyridin bevorzugt ist, dann diese so hergestellte Salzlösung mit Formaldehyd zur Reaktion bringt, und anschließend eine wäßrige Lösung eines Calciumsalzes hinzugibt, wobei das Calciumsalz der N5,N10-Methylen-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure ausfällt.14. The method according to any one of claims 8 to 12, characterized in that one prepares the calcium salt of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid by reaction at room temperature of 5,6,7,8- Tetrahydrofolic acid in water with a compound selected from the group consisting of alkali metal hydroxides, alkali metal carbonates, alkali metal bicarbonates, ammonia and organic nitrogen-containing bases such as pyridine, triethylamine, triethanolamine, then to this salt solution prepared a water-soluble, aromatic, nitrogen-containing base added, which is in particular selected from the group consisting of pyridine and substituted pyridines, for example, picolines, lutidines, ethylpyridines, pyridine is preferred, then bringing this prepared salt solution with formaldehyde to the reaction, and then adding an aqueous solution of a calcium salt, wherein the calcium salt of N 5 , N 10 -methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid e fails. 15. Arzneimittel für die synergistische Beeinflussung einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/ oder für die Verminderung der Toxizität einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder zum Schutz menschlicher und/oder tierischer Zellen, dadurch gekennzeichnet, daß es als wenigstens eine aktive Verbindung wenigstens ein Salz nach einem der Ansprüche 1 bis 4 enthält, vorzugsweise in einer Menge von 1 mg bis 500 mg, insbesondere von 5 mg bis 150 mg, pro Dosiseinheit, und daß es vorzugsweise in der Form eines parenteralen und/oder oralen pharmazeutischen Präparates vorliegt.15. Medicaments for the synergistic influencing of a cancer-combating compound and / or for reducing the toxicity of a cancer-combating compound and / or for the protection of human and / or animal cells, characterized in that it comprises at least one salt after at least one active compound of claims 1 to 4, preferably in an amount of 1 mg to 500 mg, in particular from 5 mg to 150 mg, per dosage unit, and that it is preferably in the form of a parenteral and / or oral pharmaceutical preparation. 16. Verwendung der Salze nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels für die synergistische Beeinflussung einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder für die Verminderung der Toxizität einer Krebs bekämpfenden Verbindung und/oder zum Schutz menschlicher und/oder tierischer Zellen.16. Use of the salts according to one of claims 1 to 4 for the manufacture of a medicament for the synergistic influencing of a cancer-combating compound and / or for the reduction of the toxicity of a cancer-combating compound and / or for the protection of human and / or animal cells. 17. Verwendung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß das Salz pro Dosiseinheit in einer Menge von 1 mg bis 500mg, insbesondere von 5mg bis 150mg,im Arzneimittel vorhanden ist.17. Use according to claim 16, characterized in that the salt per dosage unit in an amount of 1 mg to 500mg, in particular from 5mg to 150mg, is present in the drug. 18. Verwendung nach einem der Ansprüche 16 bis 17, dadurch gekennzeichnet, daß das Arzneimittel in Form eines parenteralen und/oder oralen, pharmazeutischen Präparates vorliegt.18. Use according to any one of claims 16 to 17, characterized in that the medicament is in the form of a parenteral and / or oral, pharmaceutical preparation.
DD34292190A 1989-07-21 1990-07-19 SALTS OF N [EXP5], N [EXP10] -METHYLENE-5,6,7,8-TETRAHYDROFOLSAEURE DD296686A5 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH273689A CH678854A5 (en) 1989-07-21 1989-07-21 N,N-methylene-5,6,7,8-tetra:hydro-folic acid salt (I)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DD296686A5 true DD296686A5 (en) 1991-12-12

Family

ID=4240456

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DD34292190A DD296686A5 (en) 1989-07-21 1990-07-19 SALTS OF N [EXP5], N [EXP10] -METHYLENE-5,6,7,8-TETRAHYDROFOLSAEURE

Country Status (2)

Country Link
CH (1) CH678854A5 (en)
DD (1) DD296686A5 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CH678854A5 (en) 1991-11-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3034843C2 (en)
EP0348641B1 (en) Process for the preparation of tetrahydrofolates
DE2332878C2 (en) Salts of cephalosporins with arginine and lysine, their manufacture and injectable pharmaceutical preparations
EP0455013B1 (en) Ammoniumsalts of N(5)-methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid
DE69225484T2 (en) GALLIUM III COMPLEXES, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING IT
EP1044975A1 (en) Stable crystalline salts of 5-methyltetrahydrofolic acid
EP2774920A1 (en) Crystalline forms of 5-amino-2,3-dihydrophthalazine-1,4-dione sodium salt and their medical use
EP0773221B1 (en) Stable crystalline tetrahydrofolic acid salts
EP0350448A1 (en) Biaryl compounds
DE3318989C2 (en) ß, gamma-dihydropolyprenyl alcohol derivatives and medicaments containing them and their use
EP0409125B1 (en) Salts of N5, N10-methylene-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid
EP1581506B1 (en) Use of 2-amino-2h-quinazoline derivatives for producing therapeutic agents
CH634060A5 (en) METHOD FOR PRODUCING NEW (3-AMINO-5-SUBSTITUTED-6-FLUORPYRAZINOYL OR -PYRAZINAMIDO) GUANIDINE AND THEIR DERIVATIVES.
DE2709506C2 (en) Use of 10-deazaminopterin for the treatment of leukemia and ascitic tumors
DD296686A5 (en) SALTS OF N [EXP5], N [EXP10] -METHYLENE-5,6,7,8-TETRAHYDROFOLSAEURE
DE1963317A1 (en) Chemical processes and products
DE3105122C2 (en) Novel piperazine compounds, processes for their preparation and immune enhancers containing them
DE2322561A1 (en) TRISUBSTITUTED IMIDAZOLES
DE69307894T2 (en) NG-MONOMETHYL-L-ARGININE HYDROCHLORIDE DERIVATIVES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
EP0061654B1 (en) Vincamine cyclamate, process for its preparation and medicaments containing it
EP0196330B1 (en) Use of pyrrothine derivatives
EP0253293B1 (en) Guanidinium salts of aspartic acid
DE2223051C2 (en) Monohydrate of d (+) - glucosamide of 1- (p-chlorobenzoyl) 2-methyl-5-methoxy-indolyl-3-acetic acid, process for its preparation and pharmaceutical preparation
DE2560038C2 (en) H2-chloroethyl) -1 nitroso-3- (hydroxycyclohexyl) ureas, medicinal products containing the same and processes for the preparation of the former
DE3143592A1 (en) QUATERNAERE N, N (ARROW HIGH) 3 (ARROW HIGH) -DI (SS-BROMPROPIONYL) -N ', N (ARROW HIGH) 2 (ARROW HIGH) -DISPIROTRIPIPERAZINE SALTS, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND MEDICINAL PRODUCTS WITH A CYTOSTAKER

Legal Events

Date Code Title Description
BER Correction/amendment

Free format text: DER INHABER IST ZU AENDERN IN:SAPEC S.A. FINE CHEMICALS, CH-6917 BARBENGO, CH

ENJ Ceased due to non-payment of renewal fee