DE2016703C3 - Verfahren zur Herstellung von Peptiden - Google Patents

Verfahren zur Herstellung von Peptiden

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Description

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Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Peptiden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
a) Peptide oder deren Derivate mit mindestens einer freien Aminogruppe mit Isobornyloxycarbonylchlorid in einem Lösungsmittel in Gegenwart eines säurebindenden Mittels bei - 15 bis + 50° C und bei einem pH-Wert zwischen 6 und 14 oder mit einem Isobornyloxy-carbonyl-aktivester umsetzt,
b) das erhaltene N-Isobornyloxycarbonyl-peptid oder eine gesondert hergestellte N-Isobornyloxycarbonyl-aminocarbonsäure, die keine freien Aminogruppen enthalten, mit einer Aminosäure, deren Aminogruppe frei und deren Carboxylgruppe durch Salzbildung oder eine Schutzgruppe blokkiert ist oder mit einem Peptid, das mindestens eine freie Aminogruppe enthält nach in der Peptidchemie üblichen Kondensationsmethoden umsetzt und gegebenenfalls nach weiteren Kondensationen mit Aminosäuren oder Peptiden mit freier Aminogruppe hiernach
c) den Isobornyloxycarbonyl-Rest durch Behandlung mit einer starken Säure abspaltet
Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendete Isobornyloxycarbonyl-Schutzgruppe, die zum Urethantyp gehört läßt sich, obwohl sie sich von einem sekundären Alkohol ableitet überraschend glatt mit Säuren wie z. B. Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Eisessig unter milden Bedingungen abspalten.
Die bisher am häufigsten benutzten Schutzgruppen für Amino- bzw. Iminofunfctionen von Aminosäuren zählen ebenfalls zum Urethäntyp, lassen sich aber in vielen Fällen, zumals wenn sie sich von einem primären oder sekundären Alkohol ableiten wie die Carbobenzoxy-, p-Phenylazocarbobenzoxy-, Düsopropylmethoxycarbonyl-, CyclopentyloxycarbonyK Cydohexyloxycar·· böfiyl-, 2-MethyI-cyclohexyloxycafbonyI-Gnippe nur unter härteren Bedingungen mit sehr starken Säuren wie Bromwasserstoff, wobei häufig zusätzlich erwärmt werden muß, abspalten (vgL E. Schröder und K. Lü b k e, »The Peptides«, New York and London, Band L 1965, Seiten 22 bis 41 sowie K. BIaha und J. Ru dt ng er, Collection Czechoslov. Chem. Commua, Band 30,1955, Seiten 599 bis 604). Die p-Methoxy-carbobenzoxy-, tert-Butyloxycarbonyl-, tert-Amyloxycarbonyl- und l-Adamantyloxycarbonyl-Gruppen kann man mit schwächeren Säuren wie Trifluoressigsäure abspalten, ihre Einführung in Aminosäuren ist aber durch den Umstand wesentlich eischwert, daß ihre Chloride bei Raumtemperatur instabil sind (Experientia, Band 25, 19S9, Seiten 576 bis 578 sowie Bulletin Chem. Soc Japan, Band 42, 1969, Seiten 809 bis 811) und man im allgemeinen auf die schwerer zugänglichen Azide oder Aktivester angewiesen ist Lediglich l-Arfamantyloxy-carbonylchlorid ist einigermaßen beständig, setzt sich aber mit zahlreichen Aminosäuren nur in schlechten Ausbeuten um (J- Amer. Chem. Soc, Band 88, 1966, Seite" 1983 bis 1992* und außerdem ist das als Ausgangsmaterial dienende 1-AdamantanoI relativ schwer zugänglich. Bei der p-Methoxycarbobenzoxy-Gruppe stört weiterhin die Instabilität gegen katalytische Hydrierung, so daß die oft erstrebte selektive Abspaltung der Carbobenzoxy-Gruppe, die mit katalytisch erregtem Wasserstoff leicht entfernbar ist nicht möglich ist Das zur Einführung der tert-Butyloxycarbonylgruppe verwendete tert-Butyloxycarbonylazid ist überdies physiologisch gefährlich (Chimia, Band 23, 1969. S. 298).
Die neue Amino- bzw. Iminoschutzgruppe besitzt diese Nachteile nicht da sie in sehr hohen Ausbeuten mittels des leicht zugänglichen und bei Raumtemperatur sehr stabilen Isobornyloxycarbonylchlorids einführbar ist Auch ist sie gegen kataiytische Hydrierung stabil und bei Raumtemperatur mit Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff leicht abspaltbar.
Die Herstellung der Isobornyloxycarbonyl-Peptide erfolgt durch Umsetzung von Peptiden bzw. deren Derivaten, die wenigstens eine oder mehrere freie Amino- oder Iminogruppen aufweisen, mit dem sehr stabilen Isobornyloxycarbonylchlorid, das man entweder vor Beginn oder im Verlauf der Acylierung zusetzt Man arbeitet in Gegenwart eines säurebindenden Mittels wie Alkali- oder Erdalkalihydroxyden, -carbonaten, -acetaten, -amiden, -alkoholaten oder tert-organische Aminen, wodurch eine freie Carboxylgruppe salzartig gebunden und freiwerdende Salzsäure abgefangen werden. So verwendet man z. B. Natriumhydroxyd. Kalhimhydroxyd, Lithiumhydroxyd, Bariumhydroxyd, Natrium- oder Kaliumcarbonat -amid, -acetat tert Amine wie Triethylamin, Tripropylamin, Tributytamin, N-Methyl-morphoIin, N-Äthylmorpholin. Man arbeitet bei - 15 bis +500C bevorzugt 0 bis 25° C, und einem pH-Wert von 6 bis 14, bevorzugt bei pH 8 bis 10. Es kann racemisches oder optisch aktives isobornyloxycarbonylchlorid (D- oder L-Form) verwendet werden; man erhält die Chloride leicht aus D.L Isoborneol bzw. D- und L-Isoborneol (J. Chem. Soc. [London], Band 91, 1907, Seiten 1973 bis 1981 sowie J. Chem, Soc, Band 127, 1925( Seiten 1478 bis 1479) mit Phosgen in an sich bekannter Weise.
Die neue Schutzgruppe kann ebenso mit Hilfe eines D.L-, D- oder L-isobornyloxycarbonyl-aktivesters wie z.B. 2.45-Trichlorphenyl- oder N-Hydroxysuccinimidesters eingeführt werden. Die benötigten Isobornyloxycarbonylaklivester sind z. B. aus Isobornyioxycarbo^
nylchlorid und der aktivierenden Komponente wie Trichlorphenol oder N-Hydroxysuccinimid leicht zugänglich.
AIs Lösungsmittel kommen bei der Einführung der Schutzgruppe Wasser, Dioxan, Tetrahydrofuran, Äther, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Pyridin und anderes, in der Peptidchemie gebräuchliche Lösungsmittel, aHein oder in Mischung miteinander, in Frage.
Das erfindungsgemäße Verfahren erlaubt die Verwendung von N-Isoborayloxvcarbonyl-Aminosäuren, die sich von allen in natürlich vorkommenden Peptiden anzutreffenden oder synthetisch zugänglichen α- oder ω-Amino- oder Immosäuren in ihrer L-, D- oder racemischen Form ableiten können, z. B. die Verwendung von neutralen NMsobomyloxycarbonyl-Aminosäuren wie z. B.
NMsobornyloxycarbonyl-grycm, -alanin, -valin, norvalin, -leucin, -isoleucin, -norleucin, -aminobuttersäure, -isovalin,
-aminocyclobc-ancarbonsäure, phenylalanin,
-f^-nVtorwilnXTjrtnficnfimmTx -olittornm -m<»thi<inin w K..-..j .o.j -..._, o —, a ,
und Diisobornyloxycarbonyl-cystin, ferner von N"-Isobomyloxycarbonyl-Aminosäuren wie z. B. N- Isobornyloxycarbonyl -^-alanin, -γ- aminobuttersäure, und -ε-aminocapronsäure, weiterhin von
N-Isobornyloxycarbonyl-Aminosäuren mit funktionellen Gruppen in den Seitenketten, die geschützt sein können, wie z. B. NMsobornyloxycarbonyl-serin, N^-Isobornyloxvcarbonyl-O-tert-butyl-serin, Ν*· Isobomyloxycarbonyl-threonin, NMsobornyloxycarbonyl-tyrosiii, NMsobornyloxycarbonyl-ö-tert-butyl-tyrosin, N^-Isobornyloxycarbonyl-dihydrox/phenylalanin, NMsobornyloxycarbonyl-S-benzyl-cystein, Να- Isoborny loxycarbonyl-tryptophan, N^-N^-Diisobornyloxycarbonyl-histidin, außerdem von
N-Isobornyloxycarbonyl-diaminosäuren, in denen die andere Aminogruppe mit einem zweiten Isobornyloxycarbonyl-rest oder mit einer anderen N-Schutzgruppe blockiert ist, wie z. B. N*-IsobornyIoxycarbonyI-NE-tert-butyloxycarbonyl-lysin, N^-Benzyloxycarbonyl-N£-Isobornyloxycarbonyl-lysin und NMsobornyloxycarbonyl-N^benzyloxycarbonyl-ornithin, des weiteren von N-Isobornyloxycarbonyl-aminodicarbonsäuren.die eine freie und eine geschützte Carboxylgruppe aufweisen, wie z. B.
NMsobornyloxycarbonyl-glutaminsäure-y-tert-butylester oder
NMsobornyloxycarbonyl-asparaginsäure-Ä-oder /7-benzylester, darüber hinaus von halogenhaltigen N-Iiobornyloxycarbonyl-aminosäuren wie z. B. N-Isobornyloxycarbonyl-0-chloraIanin, N-Isobornyloxycarbonyl-p-chlorphenylalanin, N - Isobornyloxycarbonyl-jodgorgosäure und N-Isobornyloxycarbonyl-thyroxin, schließlich von mit dem isobornyloxycarbonyi-rest geschützten aromatischen Aminosäuren wie z. B. N*Isobornyloxycarboπy^p-amίnobenzoesäureund schließlich von
N-Isobornyloxycarbonyl-Iminosäuren wie z. B. N-Isobornyloxycarbonyl-prolin.-hydroxy-prolin, -azetidin^-carbonsäure.-N-methylvalin, -N-methyHeucin und -N^methyl-ß-alanin.
Bei der unter b) erwähnten Arbeitsweise des erfindungsgemäßen Verfahrens werden die in der Peptidchemie (vgL Schröder und Lübke, The Peptides, Academic Press, New York und London, 1965 und 1966) bekannten Methoden verwendet, wobei, soweit erforderlich, die gebräuchlichen Schutzgruppen verwendet werden. Die wichtigsten Knüpfungsverfahren sind die Dicyclohexylcarbodnmid-, die Aktivesterund Gemischte-Anhydrid-Müthode.
ίο Als N-lsobornyloxycarbonyl-peptide können alle Peptide, in denen sämtliche Aminogruppen mit dem Isobornyloxycarbonyl-rest und außerdem mit anderen Schutzgruppen blockiert sind und in denen eine Carboxylgruppe in freier form vorliegt, eingesetzt
werfen, wobei andere funktionelle Gruppen in den Seitenketten geschützt sein können.
Diese Isobomyloxycarbonyl-Aminosäuren bzw. -Peptide können mit allen in natürlich vorkommenden Peptiden anzutreffenden oder synthetisch zugänglichen "- oder M-Amino- oder Iminosäuren in ihrer L-, D- oder raeemisehen Form einschließlich Diaminocarbon- und Aminodicarbonsäuren, in denen eine Aminogruppe frei vorliegt und die Carboxylgruppen durch Schutzgruppen oder Salzbildung blockiert sind und weitere funktionelle Gruppen in den Seitenketten geschützt sein können, umgesetzt werden, weiterhin mit Peptiden, die alle bereits erwähnten natürlich vorkommenden oder synthetisch zugängliche Aminosäuren enthalten können, eine freie Aminogruppe aufweisen und in denen andere funktionelle Gruppen geschützt sein können.
Die erfindungsgemäßen Peptide besitzen dank der neuen N-Schutzgruppe ausgezeichnete Löslichkeitseigenschaften in organischen Lösungsmitteln.
Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren lassen sich Peptide jeder beliebigen Zusammensetzung und Größe herstellen, falls keine Einschränkung durch die Methode der Peptidsynthese besteht
Die Abspaltung der Isobornyloxycarbonylschutzgruppe gelingt erfindungsgemäß durch Behandeln mit Säuren, wobei man, obwohl sich die neue zum Urethantyp gehörende Schutzgruppe von einem sekundären Alkohol ableitet, überraschenderweise auch schwächere Säuren als HBr/Eisessig verwenden kann, wie z. B. die anorganischen Säuren HCI, HF und HzS(X gegebenenfalls in organischen Lösungsmitteln, wie z. B. Eisessig, Essigester, Dioxan, Tetrahydrofuran, Nitromethan. Alkoholen oder Dimethylacetamid oder z. B. die organischen Säuren Trifluoressigsäure, Trichloressigsäure oder Ameisensäure. Trifluoressigsäure oder Ameisensäure können hierbei gleichzeitig als Lösungsmittel dienea Die Möglichkeit, die Isobornyloxycarbonylschutzgruppe unter diesen milden Bedingungen mit schwächeren Säuren als HBr abzuspalten und die Beständigkeit gegen katalytische Hydrierung und Basen, erlaubt eine Differenzierung gegenüber anderen Schutzgruppen, z. B. der Benzyloxycarbonylgruppe, die erst mit HBr entfernbar ist So kann man einerseits die Isobornyloxycarbonylgruppe z. B. mit HCl/Eisessig oder Trifluoressigsäure und andererseits die Benzyioxycarbonylgruppe durch katalytische Hydrierung selektiv abspalten. Außerdem kann die Abspaltung der neuen Schutzgruppen mit sauren Ionenaustauschern vorgenommen werden.
Die Verfahrensprodukte können als Therapeutika Verwendung finden oder zur Herstellung anderer therapeutisch wertvoller Peptide, wie z.B. Oxytocin, Vasopressin oder ACTH als Zwischenprodukte eingesetzt werden.
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Durch die nachstehenden Beispiele wird die Erfindung näher erläutert Es werden die in der Peptidchemie üblichen Abkürzungen für die einzelnen Aminosäuren und Schutzgruppen verwendet Für die lsobornylcarbonylgruppe in der racemischen Form wird die Abkürzung Ibc, für die in der D-Form D-Ibc und die in der L-Form L-Ibc eingeführt
Beispiel 1
Ibc-Pro-Gln-Ala-OH
Die Lösung von 2,15 g (5 mMol) H-Pro-Gln-Ala-OH · CF3COOH in 3 ecm Wasser und 1 ecm Dimethylacetamid wird mit 1,25 ecm (6 mMol) Ibc-Cl versetzt Unter Rühren tropft man anschließend 4 n-Natronlauge bei Raumtemperatur zu, wobei man den pH-Wert konstant bei 10 hält Nach dem Versuch von 4 ecm 4 n-Natronlauge säuert man mit Citronensäure an, extrahiert mit Essigester und wäscht die Essigester-Lösung mit Wasser, trocknet sie über Natriumsulfat und dampft sie im Vakuum ein. Der Rückstand, wird mit Äther verrieben. Ausbeute 1,75 g (71%); Schmp. 83° (Zersetzung).[«]f -50,4° (c= 1 in Chloroform).
C2^38N4O7 (494,6)
Ber. C 58,3, H 7,7, N 11,4%;
gef. C 583, H 75, N 11,1%.
Beispiel 2
IbC-PrO-LeU-GIy-NH2
«) Die Lösung von 1,62 g (53mMol) Ibc-OSu und 1,47 g (5 mMol) H-Pro-Leu-Gly-NH2 ■ V2 H2O in 20 ecm Dimethylformamid wird nach 3stündigem Rühren bei Raumtemperatur im Hochvakuum eingedampft Den sirupartigen Rückstand verreibt man in Wasser, wobei er kristallisiert
Ausbeute 231g (quantitativ); Schmp. 117-119°. [α] '„' - 66,6° fc= 1 in Chloroform).
C24H40N4O5 (464,6)
Ber. C 62,1, H 8,6, N 12,0%;
gef. C 61,8, H 8,6, N 12,0%.
ß) 1,47 a (5 mMol) H-Pro-Leu GIy-NH2 ■ '/2 H2O werden in 1 ecm Wasser und 1 ecm Dimethylacetamid suspendiert Nach der Zugabe von 1,25 ecm (6 mMol) Ibc-Cl tropft man unter Rühren bei Raumtemperatur und pH 12— 12,5 4 n-N&'ronlauge zu, versetzt mit 6 ecm Dimethylacetamid und säuert anschließend mit 0,5 m Citronensiure-Lösung an. Das ausgeschiedene öl nimmt man in Essigester auf und wäscht die Essigester-Lösung mit Wasser, trocknet sie über Natriumsulfat und dampft sie im Vakuum ein. Der amorphe Rückstand kristallisiert beim Verreiben in Wasser.
Ausbeute 1.65 g (71%); Sc'nmp. 118-120°. [α]?-67,Γ ("C=I in Chloroform). Das Produkt ist mit dem unter «) erhaltenen chromatographisch identisch.
60 Beispiel 3
H-Pro-Leu-Gly-NH2 - CF3COOH
1,00 g (2,15 mMol) Ibc-Pro-LeU-GIy-NH2 wird in 4 ecm Trifluoressigsäure gelöst Nach 1 Stunde Stehen» lassen bei Raumtemperatur engt man im Vakuum in der Kälte zum Öl ein und verreibt mit 50 ecm absol. Äther. Man dekantiert von den Kristallen, die man nochmals
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40 mit 50 ecm frischem absol. Äther behandelt und schließlich über KOH und P2Os im Hochvakuum trocknet
Ausbeute 0355 g (quantitativ). Zersetzung bei 95-100°. Die Substanz ist mit H-Pro-Leu-Gly-NH2 · CF3COOH dünnschichtchromatographisch identisch (Rp=O^l in Chloroform/Methanol 8:3, Fertigplatte Kieselgel).
Beispiel 4
Ibc-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2
4^2 g (10 mMol) H-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 und 3,24 g (11 mMol) Ibc-OSu werden in 20 ecm Dimethylformamid 4 Stunden gerührt Nach dem Eindampfen im Hochvakuum wird der Rückstand in Äther/Petroläther verrieben.
Ausbeute 5,34g (87%); Schmp. 112-115° (Zersetzung), [a] D -36,6° (c= 1 in Chloroform).
C33H49N5O6 (6113)
Ber. C 64,7, H 8,1, N 113%;
gef. C 64,4, H 8,1, N 11,7%.
Beispiel 5
H-Phe-Pro-Leu-GIy-NH2 - CF3COOH
0,61 g (1 mMol) Ibc-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 werden in 3 ecm Trifluoressigsäure gelöst Nach 1 Stunde Stehenlassen bei Raumtemperatur engt man die Lösung im Vakuum in der Kälte ein und verreibt den Rückstand mit absoL Äther. Die abgesaugten Kristalle wäscht man mit absoL Äther und trocknet sie über KOH und P2Os im Hochvakuum.
Ausbeute 031 g (93%); Schmp. 102-105° (Zersetzung). Das Produkt ist dünnschichtchromatographisch identisch mit H-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 · CF3COOH.
Beispiel 6
H-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 · HCI
l>ie Lösung von 1,22 g (2 mMol) Ibc-Phe-Pro-Leu-GIy-NH2 in 10 ecm HCl/Eisessig wird nach 2 Stunden Stehen bei Raumtemperatur mit 100 ecm ahsol. Äther versetzt Man saugt die Kristalle ab, wäscht sie mit absol. Äther und trocknet sie über KOH und P2Os.
Ausbeute 0,76 g (81%). Das Produkt ist chromatographisch mit H-Phe-Pro-LeU-GIy-NH2 identisch.
Beispiel 7
a) Ibc-Gly-OSu
10,2 g (4OmMoI) Ibc GIy-OH und 533 g (48 mMol) N-K/diOxysuccinimid in 80 ecm Essigester und 20 ecm Dimethylformamid werden bei 0° mit 8,27 g (40 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt Nach ^Mündigem Stehen bei 0° und lslündigem Stehen bei Raumtemperatur kühlt man wieder auf 0° ab, saugt vom Harnstoff ab und dampft das Filtrat im Vakuum ein. Den Rückstand behandelt man mit Methanol.
Ausbeute 10,5 g (75%), Zersetzung bei ca, 100°,
Ci7H24N2O6 (352,4)
Ber. N 8,0;
gef. N 8,2.
b) IbC-GIy-PrO-LeU-GIy-NH2
Man rührt die Lösung von 1,47 g (5 mMol) H-Pro-LeU-GIy-NH2 - V2 H2O und 1,76 g (5 mMol) ibc-
GIy-OSu in 10 ecm Dimethylformamid 3 Stunden bei Raumtemperatur, engt sie anschließend im Hochvakuum ein und verreibt den Rückstand in verdünnter wäßriger Citronensäure. Nach dem Dekantieren wird der ölige Rückstand über P2O5 getrocknet, in Essigester gelöst und das Produkt mit Petroläther ausgefällt, abgesaugt und getrocknet.
Ausbeute 2,27 g (87%), Schmp. 84-87° (Zersetzung). [<x]?-46,8° (c= 1 in Chloroform).
C26H43N5O6 · H2O (523,7)
Ber. C 59,7. H 8,7, N 13,4%;
gef. C 59,7, H 8,7, N 13,0%.
c) H-Gly-Pro-Leu-Gly-NH2 · CF3COOH
1,05 g (2mMol) IbC-GIy-Pr0-LeU-GIy-NH2-H2O werden in 2 ecm Trifluoressigsäure gelöst. Nach lstündigem Stehen bei Raumtemperatur engt man im Vakuum zum öi ein, verreibt mit absoi. Äther, saugt ab, wäscht mit absol. Äther und trocknet über K.OH und P2O5.
Ausbeute 0,83 g (91%), Schmp. 83-84° (Zersetzung). [<x]2o' -67,5° (c= 1 in Methanol).
Beispiel 8
a) Ibc-Ala-OPCP
2,69 g (10 mMol) Ibc-Ala-OH und 2,93 g (11 mMol) Pentachlorphenol in 10 ecm Essigester werden bei 0° mit 2,06 g (10 mMol) Dicyciohexylcarbodiimid versetzt Nach 12stündigem Stehen bei 0° saugt man vom Harnstoff ab, wäscht mit Essigester nach und dampft das Filtrat im Vakuum ein.
Ausbeute 5,08 g (95%). [«]?- 10,1° (c= 1 in Chloroform).
C20H22Cl5NO4 (533,7)
Ber. C 45,0, H 4,2, N 2,6, Cl 33,2%;
gef. C 45,3, H 4,2, N 2,4, Cl 33,5%.
b) IbC-AIa-PrO-LeU-GIy-NH2
<x) 1,12 g (2,2 mMol) Ibc-Ala-OPCP und 0,57 g (2 mMol) H-Pro-Leu-Gly-NH2 · '/2 H2O werden in 20 ecm Dimethylformamid gelöst. Nach 12stündigem Stehen bei Raumtemperatur wird im Hochvakuum eingedampft, der Rückstand mit Essigester verrieben, abgesaugt und in Äther/Petroläther verrieben. Ausbeute 032 g (84%). Schmp. 91-94° (Zersetzung). [oc]l! -493° (c= 1 in Chloroform).
C27H45N5O6 - V2 H2O (344,7)
Ber. C 59,6, H 8,5, N 125%;
gef. C 59,8, H 8,7, N 12,6%.
ß) Zur Lösung von 1,35 g (5 mMol) Ibc-Ala-OH und 0,7 ecm (5 mMol) Triäthylamin in 20 ecm Tetrahydrofuran fügt man unter Rühren bei 0° 0,48 ecm (5 mMol) Chlorameisensäureäthylester hinzu.
Den ausgefallenen Niederschlag löst man durch Zugabe von 20 ecm Dimethylformamid und 25 ecm Chloroform. Anschließend werden 1,47 g (5 mMol) H-Pro-Leu-Gly-NH2 - V2 H2O, in 20 ecm Dimethylformamid gelöst, zugegeben. Nach lstündigem Nachrühren dampft man im Hochvakuum ein, löst den öligen Rückstand in Essigester, wäscht die Essigester-Lösung jeweils dreimal mit Natriumhydrogencarbonat-Lösung, v-erd. Citronensäure-Lösung unri Wasser, trocknet sie über Natriumsulfat und dampft sie im Vakuum ein. Den Rückstand behandelt man mit Äther/Petroläther. Ausbeute 2,08 g (77%). Schmp. 90-94° (Zersetzung). Das Produkt ist mit dem unter a.) erhaltenen
dünnschichtchfomatographisch identisch.
γ) Die Lösung von 0,68 g (2,5 mMol) Ibc-Äla-OH und 0,45 g (2,75 mMol) S-Hydroxy^-oxo-S/l-dihydro-1,2,3-benzotriazin in 12 ecm Dimethylformamid wird bei 0° mit 0,52 g Dicyciohexylcarbodiimid versetzt. Nach 1 Stunde bei 0° und 1 Stunde bei Raumtemperatur wird abgesaugt und 0,74 g (23 mMol) H-Pro-Leu GIy-NH2 · V2 H2O in das Filtrat eingetragen. Man läßt 4 Stunden bei Raumtemperatur reagieren, filtriert anschließend und dampft das Filtrat im Hochvakuum ein.
Den Rückstand behandelt man mit Äther. Ausbeute 1,32 g (quantitativ). Schmp. 95-98° (Zersetzung). Die Substanz ist mit den unter «) und ß) erhaltenen chromatographisch identisch.
c) H-Ala-Pro-Leu-Gly-NH2 · CF3COOH
0,54 g (1 mMol) Ibc-Ala-Pro-Leu-Gly-NH2 · V2 H2O werden in 2 ecm Trifluoressigsäure gelöst. Nach 1 stündigem Stehen engt man im Vakuum zum Öl ein und
verreibt mit absol. Äther. Man saugt das Trifluoracetat ab, wäscht es mit absol. Äther und trocknet es über KOH und P2O5. Ausbeute 0,47 g (quantitativ). [<φ'-70,9β (i.= l in Methanol). RF = 0,22 in Butanol/ Eisessig/Wasser 3:1:1 (Dünnschichtfertigplatte Kieselgel).
Beispiel 9
a) Ibc-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2
«) Die Lösung von 4,43 g (10 mMol) Ibc-Phe-OSu hergestellt aus 3,45 g (10 mMol) Ibc-Phe-OH, 1,27 g (11 mMol) N-Hydroxysuccinimid und 2,06 g (10 mMol) Dicyciohexylcarbodiimid in 40 ecm Essigester in quantitativer Ausbeute) und 2,64 g (9 mMol) H-Pro-Leu-Gly-NHj ■ V2 H2O in 10 ecm Dimethylformamid wird nach 12stündigem Stehen bei Raumtemperatur im Hochvakuum eingedampft Den öligen Rückstand nimmt man in Essigester auf, wäscht die Essigester-Lösung mit Natriumhydrogencarbonat-Lösung, verd. Citronensäure und Wasser, trocknet sie über Natriumsulfat und dampft sie im Vakuum ein. Den schaumigen Rückstand verreibt man mit Äther/Petroläther. Ausbeute 4,51 g (82%), Schmp. 112-115° (Zersetzung). [a]i?-36,6° (c— 1 in Chloroform).
D° C33H49N5O6 (611,8)
Ber. C 64,7, H 8,1, N 11,4%;
gef. C 64,4, H 8,1, N 11,7%.
JS) 1,73 g (5 mMol) Ibc-Phe-OH werden in 20 ecm Tetrahydrofuran gelöst und unter Rühren bei —10° mit 0,7 ecm (5 mMol) Triäthylamin und 0,48 ecm (5 mMol) Chlorameisensäure-äthylester tropfenweise versetzt Man fügt noch 20 ecm Dimethylformamid und 25 ecm Chloroform zu, wobei eine klare Lösung entsteht Anschließend gibt man die Lösung von 1,50 g (5 mMol) H-Pro-Leu-Gly-NH2 · V2 H2O in 20 ecm Dimethylformamid zu und rührt 1 Stunde bei Raumtemperatur. Nach dem Eindampfen im Hochvakuum löst man den öligen Rückstand in Essigester und arbeitet wie unter «) auf. Ausbeute 2,36g (77%). [<x]?-34,6° (c=\ in Chloroform). Das Produkt ist mit dem unter α) erhaltenen dünnschichtchromatographisch identisch.
b) H-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 · HCl
Die Lösung von 1,22 g (2 mMol) Ibc-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 in 10 ecm 1 n-HCl in Eisessig wird nach 3stündigem Stehen bei Raumtemperatur mit 100 ecm absol. Äther versetzt Nach mehrstündigem Stehen und Verreiben saugt man rasch ab, wäscht mit absol. Äther und trocknet über KOH und P2O5. Ausbeute 0,76 g (81%). Zersetzung bei 127-130°.
C22H34ClN5O4 (468.0)
Ber. Cl 7,6%;
gef. Cl 73%.
c) H-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 ■ CF3COOH
Man löst 0,61 g (1 mMol) Ibc-Phe-Pro-Leu-Gly-NHj in 3 ecm Trifluoressigsäure. Nach 1 Stunde Stehen bei Raumtemperatur dampft man die Lösung im Vakuum ΖϊίϊΠ KJi ein üild VciTcibt mit übäüi. ΑίιϊΟΓ, Saugt ab,
wäscht mit absol. Äther und trocknet im Hochvakuum über P2Os und KOH. Ausbeute 0,53 g (97%). Zersetzung bei 102-105°. RF=031 in Chloroform/Methanol 8 :3 (Dünnschichtfertigplatte Kieselgel).
d) L-Ibc-Trp-Phe-Pro-Leu-Gly-N^
0^1 g (0,8 mMol) L-Ibc-Trp-OH, 0,38 g (0,8 mMol) H-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 · HCI und 0,22 g (1,6 mMol) 1-Hydroxybenzotriazol werden in 3 ecm Dimethylformamid gelöst Nach der Zugabe von 0,11 ecm (0,8 mMol) Triethylamin und 0,165 g (0,8 mMol) Dicyclohexylcarbodiiiuid bei 0° steht der Ansatz t Stunde bei 0° und 1 Stunde bei Raumtemperatur. Anschließend wird filtriert, das Filtrat im Hochvakuum eingedampft und der sirupartige Rückstand in Essigester gelöst Man wäscht die filtrierte Essigester-Lösung mit Natriumhydrogencarbonat-Lösung, verd. Citronensäure und Wasser, trocknet über Natriumsulfat und dampft im Vak. ein. Den Rückstand löst man in heißem Essigester, filtriert und fällt mit Petroläther das Produkt in kristalliner Form aus. Ausbeute 0,53 g (83%). Zersetzung bei 150-155°.
C44H59N7O7 (798,0)
Ber. C 66,2, H 7A N 123%;
gef. C 66,2, H 7,6, N 12,5%.
e)H-Trp-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 · CF3COOH
Die Lösung von 0,17 g (0,213 mMol) L-Ibc-Trp-Phe-Pro-Leu-Gly-NH2 in 1 ecm Trifluoressigsäure wird nach 1 stündigem Stehen bei Raumtemperatur mit 30 ecm absol. Äther versetzt Nach Verreiben saugt man die kristalle ab, wäscht sie mit absol. Äther und trocknet sie über KOH und P2O5 im Hochvakuum. Ausbeute 0,16 g (quantitativ). [<x]Sr-37>9o (c=\ in Methanol). RF=0,58 in Butanol/Eisessig/Wasser 3:1:1 (Dünnschichtfertigplatte Kieselgel).
Beispiel 10
a) IbC-CyS(BzI)-PrO-LeU-GIy-NH2
136 g (5 mMol) D-Ibc-GIn-Ala-Gln-Asn-Pro-Gln-AIa-OH · 2'/2 H2O V2 H2O und 135 g (10 mMol) 1-Hydroxybenzotriazol in 30 ecm Dimethylformamid werden bei 0° mit 1,03 g (5 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt Nach 1 Stunde bei 0° und 1 Stunde bei Raumtemperatur saugt man vom ausgefallenen Harnstoff ab, dampft das Ffltrat im Hochvakuum ein und nimmt den Rückstand in Essigester auf. Die Essigester-Lösung wäscht man mit Natriumhydrogencarbonat-Lösung, verdi Citronensäure und Wasser, trocknet sie über Natriumsulfat und dampft sie im Vakuum ein. Den Rückstand verreibt man in Äther/Petroläther. Ausbeute 2,66 g (81 %). Schmp. 86 - 90° (Zersetzung), [α] ? - 37,4° (C= 1 in Chloroform).
C34H51N5O6S (657,9)
Ber. C 62,1, H 7,8, N 10,6( S 4,9%;
gef. C 61,8, H 7,7, N 10,6, S 4,9%,
b) H-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-NH2 CJF3COOH
Die Lösung von 0,66 g (1 mMol) Ibc-Cys(Bzl)-Pro-LeU-GIy-NH2 in 2 ecm Trifluoressigsäure wird nach lstündigem Stehen bei Raumtemperatur im Vakuum eingeengt und das Öl mit 50 ecm absol. Äther verrieben. Die abgesaugten Kristalle werden mit absol. Äther gewaschen und über KOH getrocknet Ausbeute 0,55 g /oqn/.\
r_i» c-7 10 /„_ ι
*n Χ.Λ ni\+nnn\
Butanol/Eisesiig/Wasser
platte Kieselgel).
3:1:1 (Dünnschichtfertig-
Beispiel 11
a) D-Ibc-Gln-Ala-Gln-Asn-Pro-Gln-Ala-OH
Die Lösung von 0,42 g (13 mMol) D-Ibc-Gln-OH und 0,17 g(l,5 mMol)N-Hydroxysuccinimid in5 ecm Essigester versetzt man bei 0° mit 0,27 g (13 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid. Nach 20stündigem Stehen bei 0° saugt man vom Harnstoff ab und dampft das Filtrat im Vakuum zum Sirup ein, den man im Hochvakuum kurz trocknet.
Den Sirup löst man zusammen mit 0,75 g (1 mMol) H-AIa-GIn-Asn-Pro-Gln-Ala-OH · CF3COOH (nach DE-OS 19 24 802) in 5 ecm Dimethylformamid. Nach der Zugabe von 0,28 ecm (2 mMol) Triäthylamin bei 0° rührt man 12 Stunden bei Raumtemperatur und dampft dann die Lösung im Hochvakuum ein. Den sirupartigen Rückstand verreibt man mit 50 ecm Äther, saugt das kristallisierte Produkt ab, löst es in Methanol/Wasser und rührt die Lösung 30 Min. mit einem Ionenaustauscher vom Typ der kernsulfonierten Polystyrolharze (H-Form).
Man filtriert vom Ionenaustauscher ab, wäscht mit Methanol und dampft das Filtrat im Vakuum ein. Den Rückstand verreibt man zweimal mit heißem Essigester. Ausbeute 0,89 g (91%). Zersetzung bei 140-145° C.
C4IH65N11Oi4 · 2>/2 H2O (981,1)
Ber. C 50,2, H7Ä N 15,7%;
gef. C 49,9, H 7,0, N 15,6%.
b) H-Gln-Ala-Gln-Asn-Pro-Gln-Ala-OH · CF3COOH
0,75 g (0,756 mMol) D-Ibc-Gln-Ala-Gln-Asn-Pro-GIn-AIa-OH - 2V2 H2O werden in 2 ecm Trifluoressigsäure gelöst Nach 1 Stunde bei Raumtemperatur verreibt man mit 50 ecm absolutem Äther,_saugt die Kristalle ab, wäscht sie mit absolutem Äther und trocknet sie im Hochvakuum über KOH und P2O5-Ausbeute 0,66 g (95%). Zersetzung bei 130- 135°C
[a]f-62,r (c=\ in Methanol).
Beispiel 12
a) Ibc-GIn-OPCP
1,63 g (5 mMol) Ibc-Gln-OH und 1,47 g (5,5 mMol) Pentachlorphenol in 10 ecm Essigester werden bei 0°C mit 1,03 g (5 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt
65
Nach 12 Stunden bei C0C und 1 Stunde bei Raumtemperatur saugt man vom Harnstoff ab, wäscht mit Essigester und dampft das FÜtrat im Vakuum ein. Den Rückstand behandelt man mit Äther/Petroläther. Ausbeute 2,55 g (89%). Schmelzpunkt 78-80° C. [λ]?-9,4° (c= 1 in Chloroform).
C22H25Gl5N2O5 (5*43)
Ben C 46,0, H 4,4, N 4,9, Cl 30,8%;
gef. C 46,4, H 4,6, N 4,7, Cl 30.5%. ι ο
b) lbc-Gln-Ala-Gln-Asn-Pro-Gln-Aia-OH
Die Lösung von 0,63 g (1,1 mMol) Ibc-Gln-OPCP und 0,75 g (1 mMol) H-AIa-GIn-Asn-Pro-Gin-AIa-OH · CF3COOH (nach P 19 24 8023) in 8 ecm Dirnethylformamid versetzt man bei 0°C mit 0,28 ecm Triäthylamin. Nach 24stündigem Rühren bei Raumtemperatur wird abgesaugt und das Filtrat im Hochvakuum
heißem Essigester. Ausbeute 0,78 g (80%). Schmelzpunkt 190- 192° C (Zersetzung).
c) IbcPro-LysilbcJ-Ala-Gln-Asn-Pro-Gln-Ala-OH
Zur Lösung von 0,89 g (3 mMol) Ibc-Pro-OH und 0,49 g (3 mMol) S-Hydroxy^-oxo-S/t-dihydro-UJ-benzotriazin in 10 ecm Dimethylformamid werden bei 00C 0,62 g (3 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid zugegeben. Nach 1 Stunde bei 0°C und 1 Stunde bei Raumtemperatur saugt man vom Harnstoff ab und trägt in das Filtrat 1,12 g (1,2 mMol) H-LyS(IbC)-AIa-GIn-ASn-PrO-GIn-AIa-OH ein. Man verdünnt die Suspension mit 35 ecm Dimethylformamid und versetzt sie bei 00C mit 0,17 ecm (1,2 mMol) Triäthylamin. Nach dreistündigem Rühren bei Raumtemperatur dampft man die entstandene klare Lösung im Hochvakuum ein. Der ölige Rückstand kristallisiert beim Verreiben mit Essigester. Man löst ihn in Methanol/Wasser, rührt die Lösung mit einem Ionenaustauscher vom Typ der kernsulfonierten Polystyrolharze, filtriert, wäscht mit Methanol und dampft
uivuuiii t»iti.
n[ rriivj uua
i«]"-64,0° (c=l in 90proz. Essigsäure).
Das Produkt ist mit dem unter Beispiel 13a) erhaltenen chromatographisch identisch.
Beispiel 13
a) Z-LyS(IbC)-AIa-GIn-ASn-Pr0-GIn-AIa-OH
Die Lösung von 2,07 g (4,5 mMol) Z-Lys(Ibc)-OH (aus Z-Lys-OH in gleicher Weise wie Z-Lys(D-Ibc)-OH in quantitativer Ausbeute erhalten.
[α]? +12,8° (c= 1 in Chloroform)
und 0,73 g (43 mMol) 3-Hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazin in 15 ecm Dimethylformamid wird bei 0°C mit 0,93 g (4,5 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt Nach 1 Stunde bei 0°C und 1 Stunde bei Raumtemperatur wird vom Harnstoff abgesaugt und das Filtrat mit der Lösung von 2,25 g (3 mMol) H-Ala-Gln-Asn-Pro-Gln-Ala-OH · CF3COOH in
15 ecm Dimethylformamid vereinigt Nach der Zugabe von 0,83 ecm (6 mMol) Triäthylamin bei 0°C und zweistündigem Rühren bei Raumtemperatur dampft man die Lösung im Hochvakuum ein und verreibt den Rückstand in Essigester/Äther, saugt ab, trocknet, löst in Methanol/Wasser und rührt die Lösung 20 Minuten bei 10°C mit Dowex 50 (Η-Form). Dann saugt man vom Ionenaustauscher ab, wäscht mit Methanol und dampft das Filtrat im Vakuum ein. Den getrockneten Rückstand kocht man mit Isopropanol aus. Ausbeute 2,55 g (79%). Schmelzpunkt 208 - 210° C (Zersetzung).
[<x]?-23,9° (c= 1 in 90proz. Essigsäure).
C50H75N11O15 (1070,2)
Ber. C 56,1, H 7,1, N 14,4%;
gef. C 56,1, H 7,1, N 14,1%.
D)H-LyS(IbC)-AIa-GIn-ASn-PrO-GIn-AIa-OH
1,60 g (1,5 mMol) Z-LyS(IbC)-AIa-GIn-ASn-PrO-GIn-AIa-OH werden in Methanol/Wasser 50 Minuten in Gegenwart von Palladiumschwarz hydriert. Nach Entfernung des Katalysators dampft man die Lösung im Vakuum ein und trocknet den Rückstand über P2O5 im Hochvakuum. Ausbeute 1,22 g (88%). Das Produkt isi dünnschichtchromatographisch einheitlich (Rf=CL06 in Butanol/Eisessig/Wasser = 3:1:1, Fertigplatte Kiesel-. Dnu».—4..L
itv/iipiuuun
Isopropanol umkristallisiert Ausbeute 1,18 g (79%). Schmelzpunkt 194-197° C (Zersetzung).
[α]" - 68,8° (c= 1 in 90proz. Essigsäure).
C58H92N12O16-2 H2O (1249,4)
Ber. C 55,8, H 7,8, N 13,5%;
gef. C 55,9, H 8,0, N 13,4%.
d) H-Pro-Lys-Ala-Gln-Asn-Pro-Gln-AIa-OH · 2 CF3COOH
0,62 g (0,5 mMol) Ibc-Pro-LysObcJ-AIa-Gln-Asn-Pro-GIn-AIa-OH · 2 H2O werden in 2 ecm Trifluoressigsäure gelöst. Nach 1 Stunde Stehen bei Raumtemperatur engt man im Vakuum zum öl ein und verreibt dann mit 50 ecm absolutem Äther. Nach Stehen saugt man den Niederschlag ab und trocknet ihn über KOH und P2O5 im Hochvakuum. Ausbeute 0,53 g (98%). RF=O,11 in Pyridin/n-Butanol/Eisessig/Wasser 20 :30 :6 :24
(Dünnschichtfertigplatte Kieselgel).
[«]? - 71,5° (c= 1 in Methanol).
Beispiel 14
IbC-NH-(CH2)S-CO-AIa-GIn-ASn-PrO-GIn-AIa-OH
136 g (5 mMol) Ibc-e-Aminocapronsäure und 0,82 g (5 mMol) S-Hydroxy^-oxo-S/l-dihydro-l^-benzotriazin in 30 ecm Dimethylformamid werden bei 0°C mit 1,03 g (5 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt Nach 1 Stunde bei 0°C und 1 Stunde bei Raumtemperatur
so saugt man vom Harnstoff ab und vereinigt das Filtrat mit der Lösung von 2^5 g (3 mMol) H-Ala-GIn-Asn-Pro-GIn-AIa-OH ■ CF3COOH (nach DE-OS 19 24 802) in 30 ecm Dimethylformamid. Bei 0p C fügt man 0,83 ecm (6 mMol) Triäthylamin zu und rührt dann 2 Stunden bei Raumtemperatur. Nach dem Eindampfen im Hochvakuum verreibt man den Rückstand mit Essigester, saugt das kristallisierte Produkt ab, löst es in Methanol/Wasser und rührt 30 Minuten mit Dowex 50. Man filtriert vom Ionenaustauscher ab, wäscht mit Methanol/Wasser, dampft das Filtrat im Vakuum ein und trocknet den Rückstand im Hochvakuum über P2O5. Das Rohprodukt wird aus Isopropanol umkristallisiert. Ausbeute 1,98 g (72%). Schmelzpunkt 207 - 209° C (Zersetzung).
[x\f +58,7° (c= 1 in 90proz. Essigsäure).
(321,1)
Ber. C 54,7, H 7,4, N 15,2%;
gef. C 54,7, H 7,5, N 154%.
Beispiel \ά
a) Ibc-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBut)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH
von 28 g (181,5 mMol) D.L-, D- oder L-lsoborneol und 25 ecm Pyridin in 400 ecm trockenem Benzol zugetropft. Nach einstündigem Nachrühren bei 20°C wird abgesaugt, der Filterrückstand mit Benzol gründlich gewaschen und das Filtrat zweimal mi£ easkultem Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der ölige Rückstand wird nach Versetzen mit etwas Petroläther nochmals im Vakuum eingedampft und im Hochvakuum kurz
Die Lösung von 0,57 g (2 mMol) Ibc-Ser-OH und 0,36 g (2,2 mMol) S-Hydroxy^-oxo-S^-dihydro-l^.S-benzotriazin in 10 ecm Dimethylformamid wird bei 0°C mit 0,41 g (2 mMol) Dicyclohexylcärbodiimid versetzt Nach 1 Stunde bei O0C und 1 Stunde bei Raumtempera- io getrocknet tür saugt man vom Harnstoff ab und wäscht mit 5 ecm Ausbeute394 ö,(quantitativ). Dimethylformamid. In das Filtrat tragt man 1,34 g ·· ■ VM '
(1 mMol) H-Tyr-Ser-Met-Glu(OBut)-His-Phe-Arg-Try-GIy-OH (Liebigs Ann. Chem, Band 726 [1969], Seite 177) ein, fügt bei 0°C 0,11 ecm (1 mMol) N-Methylmor- 15 pholin zu und rührt 12 Stunden bei Raumtemperatur. Dann dampft man im Hochvakuum ein, verreibt den Rückstand mit Essigester/Äther, saugt ab und verreibt mit dem Gemisch aus 20 ecm Dimethylformamid, 10 ecm Me'hanol und 20 ecm Essigester Schließlich 20 CuH17CIOj (216,7) wird mit Isopropanol ausgekocht. Ausbeute 1,01 g (66%). Schmelzpunkt 238° C (Zersetzung).
Das Öl siedet bei 77 - 78° C/0,4 - 0,45 Torr,
ibc-, D-Ibc- und L-lbc-Chlorid zeigen
iR-Spektren.
identische
Optische Drehwerte [α]?? (c-
D-lbc-Chlorid -56,6°
L-Ibc-Chlorid +543°
1 in Chloroform):
[«]?- 13,1"C(C=I in90proz. Essigsäure).
C74H101N16O18S (1534,8)
Ber. C 57,9, H 6,6, N 14,6, S 2,0%;
gef. C 57,6, H 6,8, N 145, S 2,2%.
Ber. Cl 16,36%;
gef. Cl 16,2%.
25
b) Isobornyloxycarbonyl-aminosäuren
30
25 mMol Aminosäure und 6,25 ecm (30 mMol) Isobornyloxycarbonylchlorid werden in 5 ecm Wasser und 5 ecm Dioxan unter Rühren bei 20 bis 25° C tropfenweise mit 4 η-Natronlauge versetzt, wobei man anfangs den pH-Wert der Reaktionsmischung bei 8 bis 10, bevorzugt bei 10, hält Nach dem Anspringen der Acylierung sinkt unter Wärmeentwicklung der pH-Wert rasch ab; man führt die Reaktion unter weiterem Zutropfen von
bJH-Ser-Tyr-Ser-Met-Glf-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-NH2-Acetat
0,85 g des nach a) gewonnenen Ibc-Dekapeptids (0,55 mMol) und 12,5 g (0,5 mMoi) H-Lys(Boc)-Pro-Val-
Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(Boc)-Val-Tyr-NH2-Trihydrochlorid oder -Tritosylat (Chem. 35 4 η-Natronlauge entweder bei pH 10 oder bevorzugt bei Ber, 97 [1964], 1197) werden in 15 ecm reinem einem niedrigeren pH-Wert (7 bis 9) und tieferer Dimethylacetamid gelöst Nach Zugabe von 270 mg Temperatur (0 bis 1O0C) zu Ende, wobei insgesamt ca. (2 mMol) 1-Hydroxy-benzotriazol Fügt man bei Raum- 12,5 bis 13,5 ecm 4 η-Natronlauge bis zur Erreichung temperatur '/3 der Lösung von 650 mg (ca. 3 mMol) eines konstanten pH-Wertes verbraucht werden. Dicyclohexylcarbodiimid in 2 ecm Dimethylacetamid zu. 40 Entsteht ein in Äther unlösliches Natriumsalz der Nach einer halben Stunde wird ein weiteres Drittel, entsprechenden Ibc-Aminosäure, so entfernt man nun
überschüssiges Isobornyloxycarbonylchlorid durch Waschen mit Äther. Nach dem Ansäuern mit verdünnter Citronensäure auf pH 2 bis 3 nimmt man die freigesetzte Ibc-Aminosäure in Essigester auf, wäscht die Essigester-Lösung zweimal mit Wasser, trocknet sie über Natriumsulfat und dampft sie im Vakuum ein. Den Rückstand verreibt man mit Petroläther. Durch Auflösen in Äther oder gegebenenfalls in Petroläther
durch Chromatographie an Carboxymethylcellulose 50 und Zugabe von Dicyclohexylamin sind die Dicycloheunter Elution mit wäßrigem Ammonacetat oder xylaminsalze der entsprechenden Ibc-Aminosäuren Essigsäure steigender Molarität zugänglich.
In der folgenden Tabelle sind die nach dieser
Herstellung der Ausgangsstoffe Standardvorschrift hergestellten Ibc-Aminosäuren' auf-
.... , ,,, ., 55 geführt Sie wurden dünnschichtchromatographisch auf
a) Isobornyloxycarbonylchlond fhre Remhek überprüjt (K^gel, Chloroform/Metha-
Zur Lösung von 100 g Phosgen in 350 ecm trockenem nol 8 :3 und Butanol/Eisessig/Wasser 3:1 :1). Benzol wird unter Rühren bei —5 bis 4-5°C die Lösung
nach einer Stunde das letzte Drittel zugegeben. Man rührt noch 2 — 3 Stunden bei Raumtemperatur weiter und fällt dann das rohe, noch geschützte Corticotropin-(1 -23)-amid mit 150 ecm Äther aus. Ausbeute 2,0 g.
Zur Abspaltung der Schutzgruppen löst man in 20 ecm 90proz. Trifluoressigsäure, fällt nach einer Stunde Stehen bei Raumtemperatur mit 150 ecm Äther und reinigt das Reaktionsprodukt in bekannter Weise
Verbindung Ausgangsprodukt Ausb. WS" Schmp. — 78-80°
(c=l in -83°
(o/o) CHCI3)
Ibc-Gly-OH H-GIy-OH 100 182-183°
Ibc-Ala-OH H-AIa-OH 100 -303°*) 114-117°
Ibc-Leu-OH H-Leu-OH. 100 -7,8° '
Ibc-Phe-OH H-Phe-OH 100 +45,4°
Ibc-Gln-OH H-GIn-OH 100 + 143°
Fortsetzung 20 16 703 (C= 1 !Π 16 58-61° — 188-189° — 141-142° I
ψ.
15 Verbindung CHCh) 100-105° 114_H6°**) ί
+41,7° Sch m p. jj
Ausgangiprodukl Auib. + 12,5° 110-110,5°**)
Ibc-Tyr(Bzl)-OH -3,7° 89°**) Γ."
Ibc-Ser-OH (%) — a
Ibc-Cys(Bzl)-OH H-Tyr(BzI)-OH 95 + 43,3° I
Ibc-DL-Trp-OH H-Ser-OH 96 + 7,0°
Ibc-His(Ibc)-OH H-Cy5(BzI)-OH 90 -65,7°
IbC-GIu(OtBu)-OH H-Dl.-Trp-OH 92 —
Ibc-Pro-OH H-His-OH 100 f
Ibc-N-Methyl- H-GIu(OtBu)-OH 99 —
/?-AIa-OH H-Pro-OH 100 — i
Ibc-y-Abu-OH H-N-Methyl- 76**)
Ibc-s-Amino- ß-Ala-OH 5
H-y-Abu-OH 95 i.
ε-Amino- 98 if
capronsaure capronsaure 99 -32,6° 134-136 55-60° —
D-Ibc-Val-OH H-VaI-OH 98 -243° -66° 179° —
D-Ibc-Gln-OH H-GIn-OH 95 -22,6° — -70°
D-Ibc-Met-OH H-Met-OH 95 -293° -165°
D-Ibc-SerOH H-Ser-OH 92 -9.Γ
D-Ibc-Trp-OH H-Trp-OH 100 -10,9°
Z-Lys(D-Ibc)-OH Z-Lys-OH 100 + 31,4°
L-Ibc-Val-OH H-VaI-OH 100 + 31,3°
L-Ibc-Phe-OH H-Phe-OH 91 +41,4°
L-Ibc-Trp-OH H-Trp-OH
*) c=l in Methanol. **) Dicyclohexylaminsalz.
c) Ibc-OSu Die Lösung von 21,67 g (100 mMol) D,L-Isobornyl-
Dioxan tropfenweise versetzt. Nach fünfstündigem Nachrühren und zwölfstündigem Stehenlassen bei Raumtemperatur wird abgesaugt, mit wenig Dioxan
oxycarbonylchlorid und 15,0 g (130 mMo!) N-Hydroxy- 35 gewaschen und das Filtrat im Vakuum eingedampft Der succinimid in 100 ecm Dioxan wird bei 0°C unter ölige Rückstand wird in Methanol/Wasser kristallisiert. Rühren mit 8,2 ecm (100 mMol) Pyridin in 65 ecm Ausbeute23,78 g(81o/o),Schmelzpunkt95-97°C.
•09 625/91

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Herstellung von Peptiden, dadurch gekennzeichnet, daß man
    a) Peptide oder deren Derivate mit mindestens einer freien Aminogruppe mit Isobomyloxycarbonylchlorid in einem Lösungsmittel in Gegenwart eines säurebindenden Mittels bei —15 bis +50° C und bei einem pH-Wert zwischen 6 und 14 oder mit einem Isobomyloxy-carbonyl-aktivester umsetzt,
    b) das erhaltene N-Isobomyloxycarbonyl-peptid oder eine gesondert hergestellte N-Isobomyloxycarbonyl-aminocarbonsäure, die keine freien Aminogruppen enthalten, mit einer Aminosäure, deren Aminogruppe frei und deren Carboxylgruppe durch Salzbildung oder eine Schutzgruppe blockiert ist, oder mit einem Peptid, das mindestens eine freie Aminogruppe cütuöit, UaCu ϋϊ ucT κ Cfjuux^iv^uiiC tluuvaiCn Kondensationsmethoden umsetzt und gegebenenfalls nach weiteren Kondensationen mit Aminosäuren oder Peptiden mit freier Aminogruppe hiernach
    c) den Isobornyloxycarbonyl-Rest durch Behandlung mit einer starken Säure abspaltet
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