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"Arzneipräparat mit Serumcholesterinspiegel-senkender Wirkung" Die
Erfindung betrifft ein Arzneipräparat, bestehend aus 2-Amino-4,6-diphenäthylsmino-s-triazin
als Wirkstoff und gegebenenfalls üblichen, pharmakologisch verträglichen Trägerstoffen
und Verdünnungsmitteln.
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20Amino-4,6-diphenäthjylamino-s-triazin ist bereits von Suter und
Zutter in "Holvotica Chimica Acta" 48 (1965) 1940-1944 beschrieben worden. Suter
und Zutter synthetisierten zwölf s-Triazinderivate, in der Hoffnung, oral wirksame
Antidiabetika zu finden. Die Versuche gründeten auf der Tatsache, daß die s-Triazinderivate
durch Ringschlußreaktion von BiguaniMen entstehen, deren Blutzucker-senkonde Wirkung
bekannt war. Wie aus der vorgenannten Literaturstelle hervorgeht, besitzt keines
der zwölf s-Triazinderivate, einschließlich 2-Amino-4,6-diphenäthylaminos
-triazin,
antidiabetische Wirkung. Darüber hinaus sind auch weder Einzelheiten der Darstellung
von 2-Ämino-4,6-diphe,näthylamino-s-triazin noch irgend welche pharmakologischen
Sigensehaften dieser Verbindung beschrieben.
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Von den gegenwärtigen Erfindern wurde kürzlich gefunden, daß neue
s-Triazinderivate die durch Endotoxin hervorgerufene abnormal gesteigerte Aktivität
des tierischen retikuloendothelialen Systems herabsetzen können. Des weiteren wurde
eine Beziehung zwischen dem vorgenannten Einfluß auf die Hyperfunktion des ratikuloandothelialen
Systems und der therap-u-ischen antiarteriosklerotischen Wirkung gefunden. Diese
neuen s-Triazinderivate hemmen die Lipoidabsch-eidung in den Arterienwänden ohne
den Serumcholesterinspiegel zu senken. Im Verlauf der weiteren Untersuchung über
den Mechanismus der antiarteriosklerotischen Wirkung und über den Zusammenhang zwischen
der antiarteriosklerotischen Aktivität und der Struktur der s-riazinderivate wurde
überraschenderweise gefunden, daß einige s-Triazinderivate Blut-bzw. Serumchlolesterinspiegel-senkende
Wirkung besitzen. Insbesondere das 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin unterdrückt
die Biosynthese des Cholesterins in der Leber, reduziert den Serumcholesterinapiegel
und verhindert die künstlich hervorgerufene Arteriosklerose. In dieser Wirkung zeichnet
sich das 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin vor den anderen s-Triazin deriva-ten
aus.
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Das Arzneipräparat der Erfindung ist insbesondere für die orale Applikation
geeignet.
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Die Beispiele erläutern die Erfindung.
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Herstellung von 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin Eine Suspension
von 3,3 g 2-Amino-4,6-dichlor-s-triazin in 100 ml Wasser wird unter Kühlen und Rühren
tropfenweise mit 9,7g Phenäthjylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden
unter Rühren erhitzt, nach dem Abkühlen wird der Niederschlag abgetrennt und aus
Isopropanol umkristallisiert. Hierbei erhält man 6,0 g des gewünschten Triazins
in Form farbloser Nadeln vom F. 140 bis 142 0C.
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Beispiel 1 Einfluß von 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin auf
den Serumcholesterinspiegel von mit cholesterinroicher Nahrung gefütterten Mäusen.
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Männliche, 8 Wochen alte Mäuse ( dd-Abstammung) mit einem Gewicht
von 20 bis 25 g werden in 3 Gruppen eingeteilt. Die erste Gruppe (A) wiri mit einer
Grundnahrung gefüttert. Die zweite Gruppe B) erhält ein cholesterinreicbes Futter,
das 2 Cholesterin und 0,1 % Cholsäure, bezogen auf die Grundnahrung, enthält. Die
dritte Gruppe (C) erhält ein Futter, das 2 % Cholesterin, 0,1 % Cholsäure und 0,0714
2-Amino-4,6-diphennthylamino-s-triazin, jeweils bezogen auf die Grundnahrung, enthält.
Die Mäuse werden 14 Tage gefüttert und am 14. Tag getötet. Hierbei wird nach Abschlagen
des- Kopfes das gesamte Blut aufgefangen. Im Serum wird nach der Methode von Zak
und Henly der Gesamtcholesteringehalt bastimmt. Die Ergebnisse sind in tabelle I
zusammengestellt.
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Klammern In der Spalte 1 der Tabelle I gibt die Zahl in /die Anzahl
der Versuchstiere an. Die in der letzten Spalte angegebene Senkungsrate
berechnet
sich wie folgt:
| Serumcholesterin-) (Serumcholenterin- |
| gehalt der Gruppe gehalt der Grup- |
| Senkungsrate ################## ###################. 100 |
| gehalt der Grup- gehalt der Grup- |
| pe B p e A |
Tabelle I Körperge- Serumchowichts- Nahrungs- Choleste- lesterin- senkungs-Gruppe
zunahme aufnahme rindosis gehalt*) rate (g) (g/kg/Tag) (g/kg/Tag) (mg %) (%) Grundnah-)rung
(9) 0,6 160,6 0 173,3i22,5 -Cholesterin-B)raiche Nah- 2,7 189,7 3,794 279,1#31,9
-rung (10) Cholesterin-C)reiche Nah- 1,1 163,2 3,264 215,4#30,3**) 56,5 rung + Triazin
(8) *) Nittelwert # statistische Abweichung.
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Erhebliche Senkung (P < 0,005) gegenüber der Gruppe B Tabelle
I zeigt, daß bei den mit der Triazin-haltigen Nahrung gefütterten Mäusen (Gruppe
C) der Serumcholesteringehalt gegenüber den Mäusen der Gruppe B erheblich herabgesetzt
ist.
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B e i s p i e l 2 Einfluß von 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-riazin
auf den serumchlolesterinspiegel bei Ratten Männliche, 10 Wochen alte Wistar-Ratten
von 236 bis 300 g Gewicht werden in 3 Gruppen eingeteilt, die mit einer Grundnahrung
gefüttert werden, die 0,0 (/a (Gruppe A), 0,1 % (Gruppe B) und 0,3 9t (Gruppe C)
2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin enthält. Die Ratten werden 14 Tage mit der
angegebenen Nahrung gefüttert und dann gemäß Beispiel 1 getötet. Die Ergebnisse
sind in Tabelle II zusammengestellt. In der ersten Spalte der Ta-Klammern belle
II gibt die Zahl in die Anzahl der Versuchsticere an.
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Tabelle II Gewicht der Körperge- Leber pro Serumcho-Gruppe wichtszu-
Triazin- 100 g Körper- lesterinnahme dosis gewicht*) gohalt*) (g) (mg/kg/Tag) (g)
(mg %) A) ohne Triazin 23,0 0 3,821#0,121 91,8#8,3 (6) B)0,1 % Triazin 3,8 58,1
4,310#0,630 100,2 # 26,6 (5) C)0,3 % Triazin 13,3 204,9 5,513#0,312 79,8 # 7,0 **)
(6) *) Mittelwert # statistische Abweichung.
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**) Erhebliche Senkung gegenüber der Gruppe (A) (P < 0,025).
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B e i s p i e l 3 Unterdrückung der Biosynthese von Cholesterin in
der Rattenleber durch 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin Es werden männliche
Wistar-Ratten, die 7 Tage mit einer Grundnahrung gefüttert Werden, die 0,1 bzw.
0,3 % desriazins enthält, mit denjenigen Ratten verglichen, die mit Triazin-freier
Grundnahrung gefüttert werden. Am achten Tag wird den Ratten in die Schwanzvene
pro 200 g Körpergewicht 1 ml einer 1
lösung (20 µCurie/20 µ Mol
pro 1 ml Lösung) injiziert. 60 Minuten danach werden die Ratten getötet. Die Lebern
der Tiere werden 3 Stunden bei 800C in 5 ml/1 g Leber einer 10-prozentigen alkoholischen
Kalilauge der Ifydrolyse unterworfen.
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Die erhaltene Lösung wird zur Trockne eingedampft, der Rückstand wird
mit 3 mal 30 ml Petroäther extrahiert. Die Petrolätherextrakte werden-zur Trockne
eingedampft, der Rückstand wird in 10 ml Petroläther gelöst, von denen 5 ml in ein
Prüfröhrchen übergeführt und nach dem Eindampfen zur Trockne in 2 ml Aceton gelöst
werden. Nach Versetzen dieser Lösung mit 4 ml einer 1-prozentigen Digitoninlösung
in wäßrigem Äthanol (1 : 1) läßt man das Reaktionsgemisch 15 Stunden stehen. Das
entstandene Cholesterindigitonid wird 2 mal mit wäßrigem Äthanol (Wasser Äthanol
= 1 t 3) gewaschen, in 3 ml Pyridin gelöst und mit Dioxan auf 10 ml verdünnt. Zur
Aktivitätsbestimmung werden 10 ml eines Dioxanszintillators mit 2 ml dieser Lösung
versetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt. In Tabelle III sind
in jeder Gruppe A, B und C jeweils 8 Versuchstiere verwendet worden.
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Tabelle III Anzahl der Zerfälle Gruppe Anzahl der Zerfälle prog Leber*)
(10/min) (10/min/g) A) ohne Triazin 18,65 2,72 + 0,97 B) 0,1 Triazin 7,76 0,80 #
0,14 C) 0,3 % Triazin 9,26 0,76 # 0,19 *) Mittelwert # statistische Abweichung.
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Tabelle III zeigt, daß bei den Versuchstieren, deren Nahrung 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin
enthält, die Biosynthese
-des Cholesterins aus Acetaten in der Leber
deutlich gehemm-t wird.
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B e i s p i e l 4 Einfluß von 2-Amino-4,6-diphenäthylaimino-s-triazin
auf die künstlich hervorgerufene Arteriosklerose bei Kaninchen Von 3 Gruppen aus
jeweils 5-Kaninchen wird die Gruppe (A)mit einer Gfundnahrung, die Gruppe mit einer
cholesterinreichen Nahrung, die 2 % Cholesterin, bezogen auf die Grundnahrung, und
die Gruppe(C)mit einer Grundnahrung, die 2 % Cholesterin und 0,2 o7o des Triazins
enthalten, 80 Tage gefüttert. Danach werden die Tiere getötet. Je nach dem Umfang
der makroskopisch ermittelten plaquesartigen Ein- bzw. Ablagerung von Cholesterin
(Atheromatose) erfolgt eine Bewertung von 0 bis 5. Die Ergebnisse sind in Tabelle
IV'zusammengestellt. Durch die Wirkung des 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazine
wird der Cholesterinspiegel in der Aorta und in der Leber beträchtlich herabgesetzt.
Aus der makroskopischen Bewertung geht hervor, daß 2-Amino-4,6-diphenäthylamino-s-triazin
hemmend auf die Entstehung von Arteriosklerose wirkt.
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Tabelle IV Cholesteringehalt Atheromatose Cholesteringehalt Gruppe
Lebergewicht*) der Leber*) Aorta der Aorta*) (g) (mg/g) Arch. Thrac. Abdom. (mg/g)
A) Grundnahrung 88 # 8 2,50 # 0,16 0 0 0 1,65 # 0,28 B) Cholesterinreiche 151 #
14 23,49 # 2,65 4,4 3,3 2,0 19,87 # 2,47 Nahrung 14,29 # 3,82**) 2, 1,2 0,4 7,38
# 2,10***) C) Cholesterinreiche 140 # 20 Kahrung + Triazin *) Mittelwert # statistische
Abweichung.
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**) Erhebliche Senkung (P<0,01) gegenüber der Gruppe B.
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***) @rhebliche Senkung (P<0,02) gegenüber der Gruppe B.