DE3105122C2

DE3105122C2 - Neue Piperazin-Verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Immunverstärker

Info

Publication number: DE3105122C2
Application number: DE3105122A
Authority: DE
Inventors: Shiyoichiro Miyahara; Yutaka Okazaki; Hiroshi Mobara Chiba Tokuda; Yoshitsugu Oomuta Fukuoka Yamada
Original assignee: Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Current assignee: Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Priority date: 1980-02-15
Filing date: 1981-02-12
Publication date: 1985-05-15
Also published as: FR2478097A1; US4420481A; IT8147787A0; IT8147787A1; JPS56127369A; FR2478097B1; GB2069497B; IT1170713B; DE3105122A1; JPS6332764B2; GB2069497A

Abstract

Die Erfindung bezieht sich auf eine neue Piperazin-Verbindung der allgemeinen Formel (I) (1. Formel) worin R für eine Alkyl- oder Phenylgruppe steht und n die Zahl 4 oder 5 ist. Diese Verbindungen sind als Immunverstärker gegen chronisch rheumatoide Arthritis und zur Immuntherapie von Krebs von Wert.

Description

R_N N —C —Cl

li O

worin R wie oben definiert ist, mit einem cyclischen Amin der allgemeinen Formel (III)

HN

ÖD

worin η wie oben definiert ist, in an sich bekannter Weise kondensiert wird.

6. Immunverstärker, enthaltend eine Verbindung gemäß einem der Ansprüche I bis 4 in Form einer freien Base oder eines biologisch annehmbaren Säureadditionssalzes als wirksamem Bestandteil.

Die Erfindung betrifft Piperazin-Verbindungen, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen als aktiven Bestandteil enthaltende Immunverstärker.

Erfindungsgemäß werden Piperazin-Verbindungen der allgemeinen Formel (t)

R —N

(CH₂),

(D

worin R für eine Alkylgruppe mit 1-3 C-Atomen, die η-Butyl-, i-Butyl- oder Phenylgruppe >teht und /i die Zahl 4 oder 5 ist. zur Verfugung gestellt.

Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung ier o. g. Verbindungen, bei dem ein 1-substituiertes 4-Chlorcarbonylpiperazin der allgemeinen Formel (II)

R_N N —CCI

^w Il ο

(II)

HN

(CH₂).

(ΠΙ)

worin n eine Zahl 4 oder 5 ist, in un sich bekannter Weise kondensiert wird.

Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Immunverstärker, derals aktiven Bestandteil eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) enthält.

Dieser Immunverstärker wird gegen chronischen Rheumatismus und zur Immuntherapie des Krebses verwendet.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden nach der durch das folgende Reaktionsschema dargestellten Umsetzung erhalten:

R —N N —C —CI + HN (CH,),

^ Il O

(Π) (ΠΙ)

R—N

(D

Im einzelnen wird die Reaktion, wenn gewünscht, in eineiri inerten Lösungsmittel, wie Benzol oder Toluol, bei etwa 0 bis etwa 120⁰C und in 1 bis 5 h im allgemeinen duichgeführt.

Die Verbindung der allgemeinen Formel (I), nach der obigen Umsetzung erhalten, kann nach einer üblichen Methode isoliert und gereinigt werden, z. B. einer Methode, beider das Reaktionsgemisch mit einer verdünnten Säure extrahiert, der Extrakt zur Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung alkalisch gemacht und unter vermindertem Druck destilliert wird. Die so erhaltene freie Base der erfindungsgemäßen Verbindung kann in ein Säuresa!/ pach einer üblichen Arbeitsweise umgewandelt werden. Ferner kann eine Methode gewählt werden, bei der das Produkt in Form emes üaureadditionssaizes gereinigt und dann mit einem geeigneten Alkali behandelt wird, um eine freie Base zu erhalten.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (II) können nach einem bekannten Verfahren hergestellt werden, z. B. einem solchen, bei dem ein 1-substituiertes Piperazin mit Phosgen umgesetzt wird.

Spezielle Beispiele der erfindungsgemäßen Verbindungen sind folgende:

■MethyM-fN-pyrrolidinocarbonyilpiperazin, I-Äthyl-4-(N-pyrrolidinocarbonylipiperazin,
■n-PropyI-4-(N-pyrrolidinocarbonyl)piperazin, l-i-PropyM-tN-pyrrolidinocarbonylipiperazin,
■n-Butyl-4-(N-pyrrolidinocarbony!)pipera/in, I-i-Butyl-4-(N-pvrrolidinocarbon\l)piperazin.
■MethyM-(N-piperidinocarbonyl)piperazin, l-Äthyl-HN-pipcridinocatbonylipiperazin, -n-Propyl-.-iN-piperidinocarbonybpiperazin, l-i-Propyl-i-fN-piperidinocarbonylipiperazin,
■n-Butyl^-iN-pipen'Jinocar^onyl(piperazin, und l-i-ButyM-fN-piperidinocarbonylipiperazin.

Die erfindungsgemäßen VerOind ngen haben eine hohe immunverstärkende Wirkung. Die Toxizitäl ist sehr gering.

Bekannt ist, daß Diäthykarbamazin immunverstärkende Wirkungen besitzt (vgl C. A. 70 (1969), 56 183 z, C. A. 76 (1972), 81 242 ζ und C. A. 85(1976». 87 247 n), jedoch mit anderer Wirkungsrichtung und Intensität der Wirkungen als bei den rrfindungsgemäßen Verbindungen, die der in gleich hoher Dosis zum Vergleich herangezogen gut wirksamen Verbindung Levamisol überraschend überlegen sind.

Dieser Umstand wird nachfolgend unter Bezugnahme auf die Tests im einzelnen beschrieben:

Verschiedene Testsysteme unter Verwendung von Tieren wurden zur Bestimmung der immunverstärkenden Wirkung vorgeschlagen. Ergebnisse des Tests zur Verstärkung der verzögerten Überempfindlichkeit, der unter diesen Tests ein typischer Test ist, werden nachfolgend beschrieben.

Die verzögerte Überempfindlichkeit, die induziert wird, wenn Picrylchlorid(2-Chlt)r-1.3.5-trinitrobenzol)auf die Haut einer Maus aufgebracht wird, ist als eine typische Zellimmunität bekannt, und dies ist eines der weitweit gewählten Testsysteme (vgl. Asherson, G L, und Ptak. W.: Contact and Delayed Hypersensitivity in the Mouse I, Active Sensitization and Passive Transfer, immunology 15. 405 -416 (1968 m

Dieses Sv stern wurde für den Test zur Verstärkung der verzögerten Übererrpfindhehkeit herangezogen.

Test 1 (Test auf Verstärkung der verzögerten Überempfindlichkeit)

Testarbeitsweisen

Line Ciruppe von acht männlichen IC R-Mausen mitjeweils einem Körpergewicht von etwa 30 g wurde lürden Test verwendet

Die Sensibilisicrun^- .-rlolgte durch Aufbringen einer 7 ,igen Lösung von Picr.lchUirid in einem 4/1-Gemisch aus Olivenöl und Aceton auf den rasierten Unterleib der Maus

Gleichzeitig mit der Sensibilisierung wurde eine Lösung oder Suspension der erhndungsgemäßen Verbindung in 0.2'"niger I ösung von Carboxymethylcellulose in einer physiologischen Salzlösung der Maus in einer Dosis νυη 50 mg/kg kurpcrgcwiuht oral verabreicht. Ebenso wurde tier Kontrollgruppe eine O.2Toige Carbm)- ου melhylccllulose-Lösung in physiologischer Salzlösung verabreicht.

Die verzögerte Überempfindlichkeit wurde 7 Tage nach der Sensibilisierung geprüft, indem das Ohr der Maus durch eine Pinzette oder Zange ergriffen wurde, die mit einem mit einer l%igen Picrylchloridlösung in Olivenöl imprägnierten Filz belegt war, und die Lösung wird auf das Ohr aufgebracht. Die Dicke des Ohres wird davor und 24 h danach gemessen und das Verhältnis der Zunahme der Dicke (Durchschnittswert beider Ohren bei 8 Mäusen ± Standardabweichung) wurde erhalten, wie in Tabelle I gezeigt.

Ahnlich wurde der Test zum Vergleich durchgeführt, indem Lcvamisol-Hydrochlorid verwendet wurde, und die erhaltenen Ergebnisse zeigt ebenfalls Tabelle I. F ■ t-Tests wurden durchgeführt. Die Gruppe, bei der das

Testergebnis bei einem Wert von P < 0,05 signifikant war, wurden mit * markiert, und die Gruppe, bei der das Testergebnis bei einem Wert von Ζ³ < 0,01 signifikant war, wurde durch ** markiert.

Ergebnisse

Wenn die erfindungsgemäßen Verbindungen simultan mit der Sensibilisierung verabreicht wurde, wurde die durch die Prüfung verursachte verzögerte Überempfindlichkeit verstärkt, und der verstärkende Effekt war höher als der durch Levamisoi erzielte.

So bestät^:gte sich, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine die Zellimmunreaktion aktivierende Wirkung (immunverstärkende Wirkung) bei Mäusen haben, und diese Wirkung ist größer als die von Levamisoi.

Tabelle I

Ergebnisse von Tests zur Verstärkung verzögerter Überempfindlichkeit

Verbindung

Verhältnis der Zunahme der Ohrdicke (Durchschnittswert ± Standardabweichung, %)

Kontrolle

29,6 ±1,9

CH₃N N —C —N

Citrat

36,7 ± 2,5'

CH₃

Citrat

N N —C —r/ \

N / Il N /

^S-N N — C — t/ N ·

35 O

Levamisol-Hydrochlorid

Hydrochlorid

43,5 + 2,8**

45,0 + 4,6**

35,6 + 2,4

Die Aajuvans-Arthritis in Ratten, ausgelöst durch Injektion von Mycobacteriuni tuberculosis-Adjuvans, wird häufig als Modelltest für chronischen Rheumatismus von Menschen herangezogen.

Der Mechanismus des Inerscheinungtretens dieser Krankheit ist nicht vollständig durchleuchtet, bekannt ist aber, daß die Zellimmunität eine wichtige Rolle spielt. Die immunaktive Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindung wurde nach diesen bekannten Adjuvans-Arthritis-Tests getestet.

Test 1 (Adjuvans-Arthritis-Test, Tabelle II)

Testarbeitsweisen

Eine Gruppe von 10 männlichen SD-Ratten im Alter von 9 Wochen wurde für diesen Test verwendet. In 0,1 ml {lüssigem Paraffin wurden 0,4 mg trockene tote Zellen von Mycobacterium tuberculosis suspendiert, und die Suspension wurde unter die Fersenhaut des rechten Hinterbeines injiziert. Die erfindungsgemäße Verbindung wurde neunmal als Ganzes subkutan verabreicht, und zwar '"ir und nach der Injektion des Adjuvans. Die Testverbindung wurde in einer physiologischen Salzlösung gelöst und in einer Dosis von 5 mg/kg Körpergewicht verabreicht. Das Schwellungsvolumen des linken Hinterbeins wurde in der Zeit vom Tag der Injektion bis zum Tag des Testendes gemessen, und das Schwellungsverhältnis wurde errechnet. Der Test wurde zum Vergleich ebenso unter Verwendung von Levamisol-Hydrochlorid durchgeführt. Die erhaltenen Ergebnisse zeigt Tabelle II. F t-Tests erfolgten aufgrund der erhaltenen Testergebnisse. Die Gruppe, bei der das Testergebnis bei einem Wert von P< 0,05 signifikant war, wurde mit * markiert, die Gruppe, bei der das Testergebnis bei einem Wert von f<ü,ül signifikant war, wurde mit ** markiert.

Ergebnisse

Die Sekundärentzündung der Adjuvans-Arthritis wurde durch die erfindungsgemäßen Verbindungen merklich gesteuert, und die Wirkung war im Hinblick auf die Kontrollgruppe, der keine Verbindung verabreicht wurde, statistisch signifikant. Die Wirkung dererfindungsgemäßen Verbindungen war höher als die von Levamisoi, das als VergleicHsverbindung verwendet wurde, aber zwischen den beiden Verbindungen besteht kein statistisch signifikanter Unterschied. So wurde bestätigt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine immun-

modulierende Aktivität und eine antiarthritische Aktivität haben, und diese Aktivitäten sind höher als die von Levamisol.

Tabelle II

5 Ergebnisse des Adjuvans-Arthritis-Tests

Verbindung Schwellungsvcrhültnis

(Durchschnittswert ± Standardabweichung, %)

15 Tage 18 Tage 21 Tage

Kontrolle 84,4 ± 9,0 103,2 ±9,7 107,5 ±13,3

CH₁N N —C —N I· Citrat 54,6+11,3 61.7 ± 13,0* 73,3 ± 14,6 ^1S

Citrat 49.4±10,3* 62,0 ± 11,5* 68,1 ± 14,0

<f\— N N —C —N^/J> · Hydrochlorid 39,5 ±11.7** 56.1 ± 10.8** 74.4±13.9 ,₅

O
Levamisol-Hydrochlorid 65,2 ± 5,9 69,3 ±7,1* 80,7 ± 9,6

Wie in den Tests 1 und 2 veranschaulicht, sind die erfindungsgemäßen Verbindungen als Immunverstärker sehr wirksam, und daher als Heilmittel für Erkrankungen wirksam, die von einer Herabsetzung oder einer anomalen Änderung der Immunfunktionen begleitet sind, z. B. für Autoimmunerkrankungen, wie chronisch rheumatoide Arthritis.

Als Immuntherapie für Krebs kann ein Verfahren angesehen werden, bei dem eine spezifische oder nichtspezifische Immunfunktion, durch den krebsträchtigen Zustand herabgesetzt, durch die eine oder andere Reaktion erhöht und dem lebenden Körper zur Heilung des Krebses Widerstandsfähigkeit gegen diesen verliehen wird. Die Beteiligung von Makrophagen bei einer solchen Reaktion ist unerläßlich. Im einzelnen (1) hat deraktivierte Makrophage eine krebszellvermittelte Zytotoxizität, (2) ist der Makrophage eine der Einfluß ausübenden Zellen für die Antikörper-abhängige, zellvermittelte Zytotoxizität und (3) sollte, wenn eine spezifische Immunitat gegenüber Krebszellen aufgebaut ist und abtötende T-Zellen induziert sind, das Krebsantigen auf den Krebszellen auf die T-Zellen übertragen und als Antigen angesehen werden, zu diesem Zweck werden die durch die Reaktionen (1) und (2) vermittelten Krebszellen durch den Makrophagen phagocytisiert. Somit ist der Makrophage für die Immuntherapie von Krebs sehr wichtig.

Nachfolgend werden unter Bezugnahme auf die folgende Tabelle III die Ergebnisse des Tests zur Wirkung des wirksamen Bestandteils gemäß der Erfindung auf den Makrophagen beschrieben. Der abgetrennte Makrophage und EI-4-LeukämiezelIen wurden gemischt und gezüchtet, und ³H-Thymidin wurde einem Kulturmedium zugesetzt und die Menge des Ή-Thymidins, die in die EL-4-Zelle eingebaut war, bestimmt, um die Makrophagenaktivität zu prüfen. Wenn der Makrophage durch Verabreichung des wirksamen Bestandteils gemäß der Erfindung aktiviert wird, wird eine Hemmung des Wachstums der EL-4-Zelle, d. h. Phagocytosis der Krebszelle durch den Makrophagtn beobachtet. Wenn also die aufgenommene Menge an ³H-Thymidin gemessen wird und diese Menge sinkt, bestätigt sich, daß der Makrophage aktiviert worden ist.

Test 3 (in-vitro-Test zur Hemmung des Wachstums von Krebszellen durch Makrophagen}

Testarbeitsweisen

Einer Gruppe von drei weiblichen ddY-Mäusen (mit einem Körpergewicht von 25 g) wurden 0,5 ml einer Suspension von 2 mg des wirksamen Bestandteils gemäß der Erfindung in 5 ml einer physiologischen Salzlösung intraperitoneal verabreicht. Die Dosis war 8 mg/kg Körpergewicht. Ebenso wurde der Kontrollgruppe eine physiologische Salzlösung verabreicht. Nach 4 Tagen wurden abgestoßene Unterleibszellen gesammelt und auf eine Kunststoff-Petrischale gebracht, um Makrophagen zu sammeln.

Dann wurden 1 x 10⁶ der so erhaltenen Makrophagen und 1 x 10⁵ EL-4-LeukämiezeIIen der C57 BL/6J-Maus gemischt und in einem Kulturmedium RPM 1 1640, dem 10% Rinderembryosemm zugesetzt waren (bei 37°C in Gegenwart von 5% CO₂) 24 h gezüchtet. Dann wurden 0,1 ;iCi Ή-Thymidin zugesetzt und weitere 16 h kultiviert. Zellen wurden auf einem Filterpapier aus dem Kulturmedium gewonnen und die Menge des aufgenommenen Ή-Thymidins durch einen Flüssigszintillationszähler bestimmt. Das Aufnahmeverhältnis (%) wurde nach folgender Formel berechnet:

AuVnahmeverhältnis (%)

(Anzahl der Zählimpulse

(Anzahl der Zählimpulse - im Falle der Einzelkultur im Falle gemischter Kultur) von Makrophagen)

(Anzahl der Zählimpuise der Einzelkultur von El-4-Zellen)

x 100

Der Durchschnittswert (%) in einer Gruppe von drei Mäusen wurde bestimmt, um die in Tabelle III wiedergeguöenen Ergebnisse zu erhalten. Zum Vergleich wurde der Test ebenso unter Verwendung von Levamisol-Hydrochlorid durchgeführt.

Ergebnisse

Es bestätigte sich, daß der wirksame Bestandteil gemäß der Erfindung die Aufnahme von ³H-Thymidin durch EL-4-Leukämie-Zellen hervorragend hemmt, während Levamisol-Hydrochlorid eine solche Wirkung nicht zeigt.

Im einzelnen wurde bestätigt, daß der wirksame Bestandteil gemäß der Erfindung den Makrophagen dazu aktiviert, Phagocytose von Krebszellen auszulösen, während Levamisol eine solche Wirkung kaum zeigt.

Tabelle III

In-vitro-Test der Hemmung des Wachstums von Krebszellen durch Makrophagen

Verbindung

Aufnahmeverhältnis (Durchschnittswert, %)

Kontrolle

CHjN N —C—N

CH₃N N —C—N \. / a

Citrat

80,2

25,7

22,6

Ν — C-I

O Levamisol-Hydrochlorid

Hydrochloric 21,9

49,0

Die Krebsheilungsergebnisse von Tieren durch den wirksamen Bestandteil gemäß der Erfindung wird nachfolgend unter Bezugnahme auf die folgenden Tests 4 und 5 beschrieben.

Test 4 (Test der Antitumor-Wirkung bei Sarcoma 180 durch orale Verabreichung)

Testarbeitsweisen

Eine Gruppe von sechs weiblichen ICR-Mäusen wurde mit 2 x 10⁶ Sarcoma 180-Zellen intradermal beimpft, und während 10 Tagen nach Ablauf von 24 h wurde eine Lösung oder Suspension der wirksamen Verbindung in einer physiologischen Salzlösung in einer Dosis von 0,1 ml/10 g Körpergewicht einmal täglich oral verabreicht. Ebenso wurde der Kontrollgruppe eine physiologische Salzlösung verabreicht. Die Dosis der Verbindung war 100 mg/kg Körpergewicht. Der Durchmesser D (mm) des Tumors wurde gemessen, und der Durchschnittswert und die Anzahl ;VderlebendenMäusewurdebestimmt,umsodiein Tabelle IVwiedergegebenen Ergebnisse zu erhalten.

Ergebnisse

Die eingeimpften Tumorzeiien wurden vermehrt und wuchsen zu festen Tumoren. Wenn jedoch der wirksame Bestandteil gemäß der Erfindung wiederholt oral verabreicht wurde, wurde der Tumor kleiner oder verschwand. Ähnlich wurde der Vergleichstest mit Levamisol-Hydrochlorid durchgeführt, es wurde aber keine wesentliche karzinostatische Wirkung beobachtet.

Tabelle IV

Test des karzinostulischen Einflusses auf Sarcoma 180 bei oraler Verabreichung

Verbindung

/eil (Wochen)
0 2 4

10

Kontrolle

—C—N

Il ο

— C —

Il ο

Citrat

D -

/V 6

D -

N 6

10,6 15,2 22,4 31,5 37,6 ₁₀

6 6 6 5 1

7,7 6,3 5,5 4,7 0

6 6 6 6 6

6,0 4,7
6 6

4,8
6

3,3 0 6 6

Levamisol-Hydrochlorid

Hydrochlorid D —
N 6

D -
N 6

6,2 3,8 4,4 5,3 0 6 6 6 6 6

10,2 16,2 20,7 29,6 28,1 6 6 6 6 6

Anmerkung:

D: durchschnittlicher Durchmesser (mm) des Tumors.

N: Anzahl der lebenden Mäuse.

Test 5 (Test auf karzinostatischen Einfluß auf Sarcoma 180 durch subkutane Verabreichung

Testarbeitsweisen

Der Test erfolgte ebenso, wie bei Test 4 beschrieben, mit der Ausnahme, daß die wirksame Verbindung subkutan verabreicht wurde und die Dosis zu 20 mg/kg Körpergewicht abgeändert wurde.

Ergebnisse

Die Änderung des Durchmessers D (mm) des Tumors und die Anzahl der lebenden Mäuse wurde geprüft, um die in Tabelle V wiedergegebenen Ergebnisse zu erhalten. Selbst wenn die Dosis 1/5 der im Falle oraler Verabreichung gewählten Dosis war, konnte die gleiche Wirkung wie bei oraler Verabreichung erzielt werden. Im Gegensatz dazu hatte Levamisol-Hydrochlorid keine wesentliche karzinostatische Aktivität.

Tabelle V

Test des karzinostatischen Einflusses auf Sarcoma 180 bei subkutaner Verabreichung

Verbindung	D N	Zeit 0	(Wochen) 2	4	6	8	10
m S 1 Kontrolle >	D N	6	10,8 6	16,6 6	20,3 6	31,2 4	40,5 1
j CH₃N	D N	6	2,2 6	3,6 6	6,1 6	1,2 6	0 5
I CH₃N^	6	1,6 6	3,7 6	5,7 6	0,8 6	0 6


N—C—N ] · Citrat ' Il \X O
~N—C—N' y ■ Citrat ' Il ^-/ O

JLZ-Z.

Fortsetzung

Verbindung Zeit (Wochen)

0 2 4 6 8 10

Hydrochlorid D - 2,4 3,9 5,2 0,2 0 /V 6 6 6 6 6 6

D - 7,7 14,8 14,4 30,2 31,6 N 6 6 6 6 3 2

Anmerkung:

O: durchschnittlicher Durchmesser (mm) des Tumors

iV: Anzahl der lebenden Miiuse.

Wenn die in den Tests 4 und 5 erhaltenen Ergebnisse im Zusammenhang mit den in den Tests 1 und 3 erhaltenen Ergebnissen gesehen werden, zeigt sich, daß der wirksame Bestandteil gemäß der Erfindung die immunisierende Funktion des krebsträchtigen Wirts aktiviert und so eine karzinostatische Aktivität entwickelt. Der karzinostatische Einfluß der erfindungsgemäßen Verbindungen ist stärker als der von Levamisol.
Die Toxizität der erfindungsgemäßen Verbindungen wird nachfolgend unter Bezugnahme auf den Test 6

25 beschrieben.

Test 6 (Test der akuten Toxizität durch orale Verabreichung)

Testarbeitsweisen

Eine Lösung oder Suspension der Verbindung in einer physiologischen Salzlösung wurde einer Gruppe von drei männlichen ddY-Mäusen oral verabreicht, und nach 7 Tagen wurde der geschätzte LD_5Ö-Wert ermittelt.

Ergebnisse

Der geschätzte LD₅₀-Wert des erfindungsgemäß wirksamen Bestandteils lag im Bereich von 600 bis 1500 mg/kg, was viel höher liegt als der geschät7te LDso-Wert für Levamisol-Hydrochlorid, der im Bereich vnn 150 bis 200 mg/kg liegt. So bestätigte sich, daß die Toxizität der erfindungsgemäßen Verbindungen sehr gering ist.

AO Wenn die erfindungsgemäßen Verbindungen als Arzneimittel verwendet werden, können sie in Form einer freien Base verwendet werden. Im Hinblick auf die Stabilität und Leichtigkeit der Rezepturzusammenstellung eines Arzneimittels jedoch werden die Verbindungen bevorzugt in Form eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, wie eines Hydrochlorids, eines Citrats oder eines Phosphats, verwendet, insbesondere, wenn, wie im Falle einer Injektion, Wasserlöslichkeit erforderlich ist.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Form einer üblichen Zusammenstellung nach einer üblichen, für einen herkömmlichen immunverstärker oder karzinostatische Mittel gewählten Methode verabreicht werden. Als Präparat für die orale Verabreichung z. B. kann eine Kapsel, Granulat, eine Pille, ein Feingranulat, eine Tablette und ein Sirup erwähnt werden. Ferner eignet sich ein Suppositorium für die direkte, rektale Verabreichung. Weiter kann eine Injektion für intravenöse, subkutane oder intramuskuläre Verabreichung ange-

50 wandt werden.

Der erfindungsgemäße Immunverstärker kann zur Heilung von Krankheiten verwendet werden, die von einer Herabsetzung oder anomalen Änderung der immunisierenden Funktion begleitet sind, z. B. Autoimmunerkrankungen, wie chronisch rheumatoider Arthritis und multipler Myositis, verschiedener Infektionskrankheiten und verschiedener Krebsformen. Die Wiedergewinnung oder Normalisierung der immunisierenden Funktion von Patienten, die an diesen Krankheiten leiden, kann durch die Verabreichung einer erfindungsgemäßen Verbindung erwartet werden. Als Krebs, gegen den eine erfindungsgemäße Verbindung in geeigneter Weise angewandt wird, kann erwähnt werden: Magenkrebs, Dickdarm krebs, Rektalkrebs, Brustkrebs, Leberkrebs, Uteruskrebs, andere Tumore, Sarkom des Reticulums, Lymphosarkomatose, andere Sarkome und Leukose. Durch die Verabreichung einer erfindungsgemäßen Verbindung ist eine Linderung der subjektiven und objekti-

60 ven Symptome zu erwarten.

Die Anwendungsmethode und Herstellungsform kann je nach Art der Erkrankung und dem Zustand des Patienten geeignet gewählt werden. Im Falle oraler Verabreichung ist die Dosis einer erfindungsgemäßen Verbindung 1 bis 100 mg, vorzugsweise 1 bis 20 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Im Falle rektaler Verabreichung ist die Dosis vorzugsweise 1 bis 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag, im Falle intravenöser Verabreichung vorzugsweise 1 bis 10 mg/kg Körpergewicht pro Tag und im Falle subkutaner oder intramuskulärer Verabreichung ist die Dosis vorzugsweise 1 bis 30 mg/kg Körpergewicht. Vorzugsweise wird die Dosis der Art der Erkrankung und dem Zustand des Patienten angemessen geeignet eingestellt. Die Wirkung einer erfindungsgemäßen aktiven Verbindung kann durch die Verwendung anderer Arzneimittel in geeigneter Kombination je nach Art der

Erkrankung und dem Zustand des Patienten erhöht werden. Wenn beispielsweise chemotherapeutisch!- Krebsmittel, wie Antimetaboliten und Alkylierungsmittel, die Nebenwirkungen haben oder das Immunisierungsvermögen des Patienten herabsetzen, verabreicht werden, wird, wenn eine erfindungsgemäß wirksame Verbindung in Kombination verwendet wird, das Auftreten solcher Nebenwirkungen verhindert und die Heilwirkung synergistisch gesteigert.

Arzneimittel d.*r erfindungsgemäßen Verbindung können nach üblichen Rezepturen und Verfahren hergestellt werden, wie sie für gewöhnliche Immunverstärker oder Antitumormittel gewählt werden.

Herstellungsbeispiele ίο

Beispiel 1
l-MethyM-fN-pyrrolidinocarbonylipiperazin

In 50 ml Toluol wurden 8,1 g (0,05 Mol) l-Methyl-i-chlorcarbonylpiperazin bei Raumtemperatur gelöst, und eine Lös'irg von 10,7 g (0,15 Mol) Pyrrolidin in 50 ml Toluol wurde der obigen Lösung bei 0⁰C über 30 min zugetropft. Das Gemisch wurde 1 h bis zur beendeten Reaktion rückllußgekocht. Das Reaktionsgemisch wurde gekühlt, und die ausgefallenen gelben Kristalle (Pyrrolidin-Hydrochlorid) abfiltriert. Das Filtrat wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel Toluol unter vermindertem Druck destillativ entlernt., um rohe«; l-Methy!-4-(N-pyrTo!idinQcarbony!)p!per3Z!na!s Destillationsrückstand zu erhalten. Das Rohprodukt wurde unter vermindertem Druck destillativ gereinigt, um 6,6 g eines Reinproduktsmit einem Sdp. von 109,5-110,0°C/0,5-0,6 mm Hg (beobachtet) zu erhalten. Ausbeute 66,9%.

Elementaranalyse:

ber. für C,„H_|gN,O: C = 60,87%, H = 9,73%, N = 21,30%,
gef.: C = 61,07%, H = 9,89%, N = 21.20%.

Beispiel 2

l-Methyl-^HN-pyrrolidinocarbonyUpiperazin-Citrat

In 20 ml Aceton wurden 2,0 g (0,01 Mol) l-MethyI-4-(N-pyrrolidinocarbonyI)piperazin bei Raumtemperatur gelöst, und eine Lösung von 1,9 g(0,01 Mol)Zintronensäureanhydridin30 ml Aceton wurde bei Raumtemperatür über etwa 30 min der obigen Lösung zugetropft. Das Gemisch wurde eine bestimmte Zeit bei der gleichen Temperatur gerührt und der kristalline Niederschlag abfiltriert und mit Aceton gewaschen. Dieser kristalline Niederschlag wurde in 50 ml Äthylacetat bei 50⁰C unter 3-stündigem Rühren gewaschen. Die Kristalle wurden abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und zu 5,6 g l-MethyM-tN-pyrroIidinocarbonyljpiperazin-Citrat mit einem Schmp. von 160-161°C getrocknet. Ausbeute 71.9%. 40 t

Hementaranalyse: f

her für CH₂-N₁O,: C = 49,34%, H = 7,00%. N = 10,79%,

ge!': C - 49,21%, H = 7,00%. N = 11,00% 45 |

Beispie! 3 i

l-Methyl^-iN-piperidinocarbonyllpiperazin und sein Citrai

Umsetzung und Nachbehandlung erfolgten wie in Beispiel I beschrieben, mit der Ausnahme, daß 12,8 g (0.15 Mol) Piperidin anstelle von Pyrrolidin verwendet wurden, um l-Methyl-4-(N-piperidinocarbonyl)pipera-/in mit einem Sdp. von IS1 — l53°C/4—5 mm Hg (beobachtet) zu erhalten. ;

Llementaranalyse: 55 ,

her fur C₁₁₁Hi₁₁N₄O: C = 56,43%. H = 9,72%, N = 26.09%,

get.: C^- = 56.57%, H = 9,49%, N - 26,39%.

Die Umsetzung erfolgte in der gleichen Weise, wie in Beispiel 2 beschrieben, mit der Ausnahme, daß die so oo gebildete freie Base verwendet wurde, um ein Citrat mit einem Schmp. von 115-120°C (Zers.) zu erhalten.

Beispiel 4
l-PhenyM-CN-piperidinocarbonyOpiperazin und sein Hydrochlorid

Umsetzung und Nachbehandlung erfolgten wie in Beispiel 1 beschrieben, mit der Ausnahme, daß 11,2 g (0,05 Mol) l-Phenyl^-chlorcarbonylpiperazin anstelle von l-Methyl-4-chlorcarboiiylpiperazin und 12,8 g

(0,15 Mol) Piperidin anstelle von Pyrrolidin verwendet wurden, um l-Phenyl-4-(N-piperidinocarbonyl)piperazin mit einem Sdp. von 106-114°C/15 rnm Hg und einem Schmp. von 63-66,5°C zu erhalten.

Die so erhaltene freie Base wurde in Chloroform gelöst und die Lösung mit gasförmigem Chlorwasserstoff gesättigt und eine gewisse Zeit gerührt. Die Lösung wurde in üblicher Weise aufgearbeitet, um 1-Phenyl-4-(N-piperidinocarbonyl)piperazin-Hydrochlorid mit einem Schmp. von 186,5-189°C zu erhalten.

Elementaranalyse:

ber. für C₁₆H₁₄N ,OCl: C = 62,02%, H = 7,81%, N = 13,56%, Cl = 11,44%,
gef.: C = 62,04%, H = 7,86%, N = 13,60%, Cl = 11,23%.

Anwendungsbeispiele
I.) Tabletten mit l-MethyM-iN-pyrrolidinocarbonyDpiperazin-Citrat als wirksamem Bestandteil

Ein Gemisch aus 50 g l-Methyl^HN-pyrrolidinocarbonyljpiperazin-Citrat, 38 g Lactose, 35 g Maisstärke und

20 g kristalliner Cellulose wurde genügend gerührt und das Gemisch mit einer Lösung von 5 g Hydroxypropyl-

celluiose in 100 ml Wasser geknetet, granuliert und 4 h bei 50⁰C getrocknet. Das Granulat wurde mit 2 ■% Magne-

siumstearat gemischt und in einer Tablettiermaschine zu Tabletten mit einem Gewicht von jeweils 150 mg

gepreßt.

II.) Kapseln mit l-MethyM-CN-pyrrolidinocarbonylJpiperazin-Citrat als wirksamem Bestandteil

Ein Gemisch aus 100 g l-MethyW-iN-pyrrolidinocarbonyDpiperazin-Citrat, 94 g Lactose, 60 g Maisstärke, 40 g kristalliner Cellulose und 6 g Magnesiumstearat wurde genügend gerührt und in einer Menge von 300 mg pro Kapsel unter Verwendung einer Einkapselungsmaschine in harte Kapseln gefüllt.

III.) Granulat mit l-PhenyM-CN-piperidinocarbonyDpiperazin-Hydrochlorid als wirksamem Bestandteil

Ein Gemisch aus 100 g l-PhenyM-fN-piperidinocarbonyOpiperazin-Hydrochlorid, 152 g Lactose, 140 g Maisstärke und 80 g kristalliner Cellulose wurde genügend gerührt, das Gemisch mit einer Lösung von 20 g Hydroxypropylcellulose in 400 ml Wasser geknetet, granuliert und 4 h bei 50⁰C getrocknet. Die Granula wurden zur Klassierung durch ein Sieb mit einer lichten Maschenweite von 1,68 mm geführt, mit 8 g Magnesiumstearat ge-nischt und das Gemisch zu Granula ausreichend gerührt.

IV.) Suppositorien mit l-Methyl-4-(N-piperidinocarbonyi)piperazin-Citrat als wirksamem Bestandteil

Ein Gemisch aus 10 g l-Methyl-4-(N-piperidinocarbonyl)piperazin-Citrat und 90 g Suppositorienmasse auf der Basis von modifizierten Triglyceriden gesättigter Pfianzenfettsäuren wurdeauf 60⁰C erwärmt und geschmolzen und die Schmelze in Formen gegossen, so daß das Gewicht eines jeden Suppositoriums 1,5 oder 3 g betrug. Die vergossene Schmelze wurde gekühlt und erstarrte zu Suppositorien.

V.) Injektionslösungen mit l-Methyl-4-(N-piperidinocarbonyl)piperazin-Citrat als wirksamem Bestandteil

Em Gemisch aus 10 g I-McthyM-fN-piperidinocarbonyljpiperazin-Citrat und 0,4 g Natriumchlorid wurde in einer geeigneten Menge destillierten Wassers Tür Injektionen gelöst, so daß die Gesamtmenge 100 ml betrug. Die so gebildete Injektinnslösung eignete sich für die intravenöse Verabreichung.

Claims

Patentansprüche: 1. Piperazin-Verbindungen der allgemeinen Formel (I)

R_N N — C— N

(I)

worin R für eine Alkylgruppe mit 1 -3 C-Atomen, die η-Butyl-, i-Butyl- oder Phenylgruppe steht und η die Zahl 4 oder 5 ist, und deren anorganische oder organische Säuresalze.
2. Verbindung nach Anspruch 1, bei der R in der allgemeinen Formel (I) eine Methylgruppe und η Α ist.
3. Verbindung nach Anspruch 1, bei der R in der allgemeinen Formel (I) eine Methylgruppe und η 5 ist.
4. Verbindung nach Anspruch 1, bei der R in der allgemeinen Formel (I) eine Phenylgruppe und η 5 ist.
5. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß ein !-substituiertes 4-ChIorcarbonylpiperazin der allgemeinen Formel (II}