DE3147538C2 - Verfahren zur Bestimmung von Transferrin und dazu geeignetes Mittel - Google Patents

Verfahren zur Bestimmung von Transferrin und dazu geeignetes Mittel

Info

Publication number
DE3147538C2
DE3147538C2 DE3147538A DE3147538A DE3147538C2 DE 3147538 C2 DE3147538 C2 DE 3147538C2 DE 3147538 A DE3147538 A DE 3147538A DE 3147538 A DE3147538 A DE 3147538A DE 3147538 C2 DE3147538 C2 DE 3147538C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
iron
transferrin
solid substrate
salt
reagent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE3147538A
Other languages
English (en)
Other versions
DE3147538A1 (de
Inventor
Paolo Siena Neri
Alessandro Siena Tabacco
Paolo Monteriggioni Siena Tarli
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Istituto Sieroterapico E Vaccinogeno Toscano "sclavo" Spa Siena It
Original Assignee
Istituto Sieroterapico E Vaccinogeno Toscano "sclavo" Spa Siena It
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Istituto Sieroterapico E Vaccinogeno Toscano "sclavo" Spa Siena It filed Critical Istituto Sieroterapico E Vaccinogeno Toscano "sclavo" Spa Siena It
Publication of DE3147538A1 publication Critical patent/DE3147538A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE3147538C2 publication Critical patent/DE3147538C2/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/90Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving iron binding capacity of blood

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von Transferrin bzw. der Eisenbindungsfähigkeit von Transferrin, das darin besteht, daß man zu der zu untersuchenden Probe ein Reagenz zugibt, bestehend aus einer Lösung eines Eisen-III-Salzes sowie einer Suspension eines Adsorptionsmittels, insbesondere von Magnesiumcarbonat, das so erhaltene Gemisch zentrifugiert und das an Transferrin gebundene Eisen in der überstehenden Flüssigkeit bestimmt. Das Verfahren wird vorzugsweise durchgeführt mit Hilfe eines Mittels in Form eines einheitlichen Reagenzes, bestehend aus einer Suspension, in der ein Eisen-III-Salz an einem Adsorptionsmittel adsorbiert ist, gegebenenfalls einem Medium, das im Stande ist, den pH-Wert zwischen 8 und 9 einzustellen, und gegebenenfalls einem colorimetrischen Reagenz zur Bestimmung des Eisens.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung der Eisenbindungsfähigkeit von Transferrin sowie ein spezielles Mittel, das zur Durchführung dieses Verfahrens geeignet ist.
Transferrin ist ein Glycoprotein. das im Blut vorhanden ist und zum Transport des Eisens dient. Jedes Proteinmolekül kann zwei Eisen(III)-ionen binden.
Der Gehalt an Transferrin im Blut kann entweder direkt mit Hilfe immunologischer Methoden oder über die Bestimmung der Eisenbindungsfähigkeit mit Hilfe chemischer Methoden gemessen werden.
In Beziehung auf die zuletzt genannten Methoden ist aus Chim. Gin. Acta. 2. 221 (1957) sowie aus Klinische Laboratoriumsdiagnostik. 3. Aufl., S. 150 (1966) ein Verfahren bekannt, das die folgenden Schritte umfaßt:
— Sättigung des in der Probe, üblicherweise einer Serumprobe, enthaltenen Transferrins mit einer sauren Lösung, die einen Überschuß an Eisen(III)-ionen enthält.
— Entfernung der überschüssigen Eisenionen nach einer Inkubationszeit durch Zusatz von festem Magnesiumcarbonat und
— Bestimmung des an das Transferrin gebundenen Eisens, das in der überstehenden Flüssigkeit enthalten ist, mit Hilfe eines Reagenzes, das zur Bestimmung des Eisens in dem Serum geeignet ist, nach Zentrifugieren der so erhaltenen Aufschlämmung.
Bei anderen Verfahren wird umgekehrt unter entsprechenden Bedingungen der Oberschuß an Eisenionen bestimmt und durch Differenz das mit Hilfe des Transferrins entfernte Eisen berechnet, aus dem wiederum die vorhandene Menge an Transferrin berechnet werden kann.
Es ist Aufgabe der Erfindung, ein einfacheres Verfahren zur Bestimmung der Eisenbindungsfähigkeit von Transferrin zu entwickeln.
Diese Aufgabe wird gelöst durch das im Hauptanspruch angegebene Verfahren. Vorteilhafte Ausgestaltungen dieses Verfahrens sind in den Untf-ansprüchen angegeben.
Mit Hilfe des erfindungsgemäßen Verfahrens werden zahlreiche Vorteile gegenüber den oben angegebenen bekannten Verfahren erreicht. Die wichtigsten dieser Vorteile sind:
— Das Verfahren ist einfacher und die Anzahl der durchzuführenden Stufen, einschließlich der Inkubation, ist geringer.
Es sind weniger Manipulationen erforderlich, da es nicht mehr notwendig ist, das Magnesiumcarbonat in festem Zustand zu dem Reaktionsgemisch zuzusetzen.
Die Dosierung der Reagenzien ist besser reproduzierbar, und
das Transferrin wird in der Probe mit Eisenionen bei einem basischen pH-Wert gesättigt, wobei dieser in der Literatur als besonders geeignet zur Bindung von Eisen an Transferrin angegeben ist.
Aufgrund dieser Tatsachen wird eine Vereinfachung und Erhöhung der Genauigkeit der Bestimmung erreicht, wie sie bisher nicht möglich war.
Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren werden im einzelnen die folgenden Stufen durchgeführt:
— Zugabe einer Suspension des festen Substrats, an das eine Lösung des Eisen(lll)-salzes adsorbiert ist.
mit einem pH-Wert zwischen 8 und 9 zu der zu untersuchenden Probe.
— Zentrifugieren der so erhaltenen Aufschlämmung und
— Messung des in der überstehenden Flüssigkeit enthaltenen an Transferrin gebundenen Eisens.
Die Erfindung betrifft auch das in Anspruch 5 näher gekennzeichnete Mittel zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens.
Feste Substrate sind ausgewählt aus der Gruppe basisches Magnesiumearbonat und CaCOj, wobei basisches Magnesiumcarbonat bevorzugt ist.
Der gegebenenfalls vorhandene Puffer, der geeignet ist, den pH-Wert konstant zu halten, ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus HjPO4. H2PO4-, Barbitursäure und Barbituraten, wobei NaH2PO4 bevorzugt ist. Wenn ein colorimetrisches Reagenz angewandt wird.
sollte dieses vorzugsweise ausgewählt werden aus den für diesen Zweck üblichen Mitteln oder es kann ein solches angewandt werden, wie es in der IT-OS 20 177A/80 angegeben ist.
Die Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele näher erläutert.
Beispiel 1
Herstellung einer Reagenzsuspension
In 100 ml Wasser wurden 828 mg NaH2PO4 - H2O gelöst und anschließend 2^5 g basisches MgCO3 aufgeschlämmt Zu der so erhaltenen Suspension wurde unter Rühren 1 ml 0,01 n-HCi enthaltend 500 mg/dl pe+ + + gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bis zur Stabilisierung des pH-Werts stehengelassen.
Das so erhaltene Reagenz wurde 48ma! angewandt zur Bestimmung der Eisenbindungsfähigkeit von zusammengegebenen (pool) Humansera, wobei ein Mittelwert von 293,71 μg/d! erhalten wurde mit einem CV. von 3,48%.
Es wurden die folgenden Bedingungen eingehalten:
— Reagenzsuspension
— Humanblutserum
— Inkubation
— Zentrifugieren
1 ml
0,2 ml
5 min bei
Raumtemperatur
10 min bei 4000 UpM
Das in der überstehenden Flüssigkeit enthaltene Eisen wurde abgezogen und mit Hilfe eines üblichen Reagenzes bestimmt.
Beispiel 2
Zu fraktionierten Proben eiies Grundserums, in dem die Eisenbindungsfähigkeit bestimr t worden
wurden zunehmende Mengen an
zugegeben.
Die so angereicherten Serumproben wurden nach dem in Beispiel 1 angegebenen Verfahren untersucht sowie nach dem von Ramsay in Chimica Clinica Acta, 2,
"' 221 (1957) angegebenen Verfahren. Die Werte der Eisenbindungsfähigkeit, wie sie nach diesen beiden Verfahren erhalten worden waren, wurden in Zusammenhang gebracht mit der Gewichtsmenge an zugesetztem Transferrin, wobei man die folgende Regressions-
"' kurve erhielt:
χ = mg zugesetztes Transferrin
y = Eisenbindungsfähigkeit (in μg/dI gefundenem Eisen)
F.rfindungsgemäßes Verfahren
y = 0,90* + 277,2 mg/dl: Korrelationskoeffizient = 0,998
-" Ramsay-Verfahren
y = 031 x + 277,5 mg/dI:KorreIations-
kocffizient = 0397
,3 Der Wert für die Eisenbindungskraft des Grundserums betrug nach dem erfindungsgemäßen Verfahren 281 μg/dl und nach dem Ramsay-Verfahren 272μg/dl. Beide Werte stimmen zufriedenstellend überein mit den Werten der jeweiligem Sprünge in den Gleichungen der
J0 Geraden, wie oben angegeben.
Konzentrationsberpjche der Komponenten des Reagenzes:
war, Humantransferrin basisches Magnesiumcarbonat: 03—10 g/dl
Fe+ + + Ibis 100 mg/dl
H2PO4-O bis 200 mg/I

Claims (7)

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Bestimmung von Transferrin durch Zusammenbringen der zu untersuchenden Probe mit einem Überschuß eines Eisen(IIl)-salzes und einem festen Substrat, Zentrifugieren des so erhaltenen Gemisches und Messung des an Transferrin gebundenen Eisens in der überstehenden Flüssigkeit, dadurch gekennzeichnet, daß man das Eisenfjl I)-SaIz und das feste Substrat in Form einer Suspension zugibt, in der das Eisen(HI)-salz an das feste Substrat adsorbiert ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als festes Substrat basisches Magnesiumcarbonat und/oder Calciumcarbonat verwendet.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das angewandte Reagenz zusätzlich einen Puffer enthält, der im Stande ist, den pH-Wert zwischen 8 und 9 einzustellen.
4. Verfahren nach Anspruch 3. dadurch gekennzeichnet, daß der Puffer ausgewählt ist aus der Gruppe HjPO«. H2PO4-, Barbitursäure und Barbituraten.
5. Mittel zur Durchführung des Verfahrens nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einer Suspension eines festen Substrats besteht, an das eine Lösung eines Eisen(III)-saIzes adsorbiert ist, sowie gegebenenfalls einem Puffer, der den pH-Wert auf 8 bis 9 einstellen kann, und gegebenenfalls einem colorimetrischen Reagenz zur Bestimmung von Eisen.
6. Mittel nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Adsorptionsmittel basisches Magnesiumcarbonat und/oder Calciumcarbonat ist.
7. Mittel nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Puffer besteht aus Phosphorsäure. Phosphaten, Barbitursäure und/oder Barbiturate^
DE3147538A 1980-12-11 1981-12-01 Verfahren zur Bestimmung von Transferrin und dazu geeignetes Mittel Expired DE3147538C2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT26564/80A IT1148745B (it) 1980-12-11 1980-12-11 Metodo per la determinazione della transferrina e composizione adatta allo scopo

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE3147538A1 DE3147538A1 (de) 1982-06-24
DE3147538C2 true DE3147538C2 (de) 1983-09-08

Family

ID=11219789

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE3147538A Expired DE3147538C2 (de) 1980-12-11 1981-12-01 Verfahren zur Bestimmung von Transferrin und dazu geeignetes Mittel

Country Status (7)

Country Link
JP (1) JPS57122361A (de)
CA (1) CA1165215A (de)
DE (1) DE3147538C2 (de)
ES (1) ES508226A0 (de)
FR (1) FR2496270A1 (de)
GB (1) GB2089505B (de)
IT (1) IT1148745B (de)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6069557A (ja) * 1983-09-26 1985-04-20 Wako Pure Chem Ind Ltd 不飽和鉄結合能の測定方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1239121B (de) * 1964-01-29 1967-04-20 Haury Chem Fab Dr Heinz Verfahren zur Bestimmung der totalen Eisenbindungskapazitaet von Koerperfluessigkeiten, insbesondere Serum und Urin
US3709985A (en) * 1969-07-17 1973-01-09 Abbott Lab Method for determining total blood serum iron-binding capacity
US3996162A (en) * 1970-02-27 1976-12-07 Nuclear Medical Laboratories, Inc. Analytical sorbent and method of use
JPS529160B2 (de) * 1972-04-12 1977-03-14
JPS5913521B2 (ja) * 1975-06-19 1984-03-30 メイトウサンギヨウ カブシキガイシヤ 磁性酸化鉄・デキストラン複合体の製造法
US4154929A (en) * 1976-08-16 1979-05-15 American Monitor Corporation 9-(2-Pyridyl)-acenaphtho[1,2-e]-as-triazines

Also Published As

Publication number Publication date
FR2496270A1 (fr) 1982-06-18
JPS57122361A (en) 1982-07-30
DE3147538A1 (de) 1982-06-24
FR2496270B1 (de) 1984-03-02
CA1165215A (en) 1984-04-10
ES8303698A1 (es) 1983-02-01
GB2089505A (en) 1982-06-23
GB2089505B (en) 1984-03-21
IT1148745B (it) 1986-12-03
ES508226A0 (es) 1983-02-01
IT8026564A0 (it) 1980-12-11
JPH027429B2 (de) 1990-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3024044C2 (de)
DE3249743C2 (de)
DE69032422T2 (de) Reagenzzusammensetzung, Verfahren und Kits zur Quantifizierung von Magnesium oder Calcium und Magnesium
EP0035211B1 (de) Verfahren und Reagens zur Bestimmung der beta-Lipoproteine (LDL)
DE2943423C2 (de)
EP0071730A1 (de) Stabilisiertes Reagenz zum Nachweis von Wasserstoffperoxid
DE69233059T2 (de) Verfahren zur Lp(a)-Trennung durch Elektrophorese und Anwendung des Verfahrens auf die in vitro Bestimmung des Atherogen-Risikos in Zusammenhang mit der Anwesenheit des Lp(a)
DE102004044429A1 (de) Verfahren zur Entfernung von Fibronektin aus Plasmafraktionen
DE2721681A1 (de) Kontroll-loesung fuer diagnostische nachweisverfahren von im urin enthaltenen stoffen
DE3147538C2 (de) Verfahren zur Bestimmung von Transferrin und dazu geeignetes Mittel
DE3137668A1 (de) Verfahren zum testen auf vitamin b(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts) und testsatz zu seiner durchfuehrung
DE2517545C2 (de) Reagenz und Verfahren zur spektrophotometrischen Bestimmung von anorganischem Phosphor
DE2707913C2 (de) Verfahren zum Nachweis von rheumatoiden Faktoren
EP0042969A1 (de) Verfahren zur Stabilisierung der alkalischen Phosphatase
DE2256331B2 (de) Verfahren zur quantitativen kolorimetrischen Harnsäurebestimmung
EP0337467B1 (de) Verfahren zur Bestimmung von Thyroxin und dazu geeignete Standardlösung
DE1467292A1 (de) Verfahren zur kontinuierlichen Herstellung von Gips und Eisenoxyd
EP0583717B1 (de) Verfahren und Standardlösung zur Bestimmung von Thyroxin (T4) oder Trijodthyronin (T3)
DE3873837T2 (de) Analytisches verfahren und element fuer eine ferroion-probe.
DE3150416C2 (de) Verfahren und Reagenz zur Bestimmung der Aktivität von Angiotensin-konvertierendem Enzym
EP0351605B1 (de) Quantitative Bestimmung von Phosphor
EP0049849A2 (de) Verfahren zur Bestimmung der Streptokokken-Desoxiribonuclease B nach der Toluidinblau O-Methode
DE10123355B4 (de) Verwendung einer wässrigen Zinknitrit-Lösung und Verfahren zur Herstellung der Zinknitrit-Lösung
EP0009088A1 (de) Reagenz zur Bestimmung von Wassermann-Antikörpern, Verfahren zu dessen Herstellung, Anwendung und Verwendung dieses Reagenzes zur Bestimmung von Wassermann-Antikörpern sowie entsprechende Reagenziengarnitur
DE3427729A1 (de) Verfahren zur aufrechterhaltung des zinkgehaltes in zinkphosphatierbaedern

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8339 Ceased/non-payment of the annual fee