DE3303151C2

DE3303151C2 - Perfluorcycloamine und diese Verbindungen enthaltende Blutersatzmittel und Perfusionsflüssigkeiten

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Publication number: DE3303151C2
Application number: DE3303151A
Authority: DE
Inventors: Yoshio Suita Arakawa; Chikara Osaka Fukaya; Yoshihisa Kyoto Inoue; Youichiro Hirakata Naito; Taizo Osaka Ono; Tadakazu Kyoto Suyama; Yoshio Takarazuka Tsuda; Kazumasa Toyonaka Yokoyama
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1982-08-30
Filing date: 1983-01-31
Publication date: 1986-10-16
Also published as: LU84614A1; CA1192494A; GB2125787A; US4423061A; GB2125787B; NL8300357A; SE8300451D0; SE442634B; SE8300451L; FR2532309A1; CH658051A5; BE895756A; JPH0261922B2; JPS5939870A; DE3303151A1; GB8302398D0; FR2532309B1

Abstract

Beschrieben sind neue Perfluorcycloamine der allgemeinen Formel I (Formel I) die in jeder beliebigen Stellung durch eine Perfluormethylgruppe substituiert sein können. Die Verbindungen eignen sich zur Herstellung wäßriger Emulsionen, die aufgrund ihrer Fähigkeit, Sauerstoff zu tragen, als Blutersatzmittel und Perfusionsflüssigkeit dienen.

Description

Es ist bekannt, daß Emulsionen auf der Basis von Fluorkohlenstoffverbindungen als Blutersatzmittel und Pcrfusionsflüssigkeit eingesetzt werden können; vgl. Leland C. Clark, jr., F. Becattini, S. Kaplan, The Physiology of Synthetic Blood, Journal of Thoracic Cardiovascular Surgery, Bd. 60 (1970), S. 757-773; R. P. Geyer, Fluorocarbon - Polyol Artificial Blood Substitutes, New Engl. J. Med., Bd. 289 (1973), S. 1077-1082.

Die bisher bekannten Emulsionen auf der Basis von FluorkohlenstofFverbindungen haben den Nachteil, daß sie pharmazeutisch instabil sind. Es ist deshalb notwendig, stabile Präparate zu entwickeln, bei denen die Teilchengröße der Fluorkohlenstoffverbindungen während der Lagerung sich nicht ändert.
Bei den Emulsionen der Fluorkohlenstoffverbindungen spielt die Teilchengröße eine wichtige Rolle hinsichtlieh der Toxizität und Wirksamkeit der Emulsion; vgl. K. Yokoyama, K. Yamanouchi, M. Watanabe, R. Murashima, T. Matsumoto, T. Hamano, H. Okamoto, T. Suyama, R. Watanabe und R. Naito, Preparation of Perfluoridecalin Emulsion, an Approach to the Red Cells Substitute, Federation Proceedings, Bd. 34 (1975), S. 1478-1483. Emulsionen mit großer Teilchengröße der Perfluordecalins haben eine hohe Toxizität und die Retentionszeit der Teilchen im Blutstrom ist kurz. Bei der Verwendung einer Emulsion auf der Basis von FluorkohlenstofTvcrbindungen als Blutersatzmittel für Patienten mit massiven Blutungen soll die Teilchengröße der emulgicrtcn Teilchen höchstens0,3 Mikron, vorzugsweise höchstens 0,2 Mikron sein; vgl. DE-OS 21 44 094. Abgesehen von der Teilchengröße der Fluorkohlenstoffverbindungen müssen sie rasch aus dem Körper ausgeschieden werden, sobald sie ihre Aufgabe als Mittel zum Sauerstofftransport erfüllt haben; vgl. US-PS 39 11 138. Clark bezeichnet solche Fluorkohlenstoffverbindungen als RES-phobe Verbindungen zum Unterschied von RES-philen Vcrbindüngen; die durch die Gegenwart eines Heteroatoms, ζ. B. eines Sauerstoff- oder Stickstoffatoms in ihrem Molekül gekennzeichnet sind.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, RES-phile Perfluorcycloamine und diese Verbindungen enthaltende Blutersatzmittel und Perfusionsflüssigkeiten zu entwickeln, welche die vorstehenden Bedingungen erfüllen, d. h. die über lange Zeit stabile Emulsionen mit extrem feiner Teilchengröße bilden und die besonders rasch aus dem Körper ausgeschieden werden.

Die Erfindung betrifft somit den in den Patentansprüchen gekennzeichneten Gegenstand. In den Verbindungen der allgemeinen Formel I ist die Stellung der Perfluormethylgruppe nicht kritisch. Vorzugsweise sind die Verbindungen durch eine Perfluormethylgruppe substiuiert.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I können durch Fluorierung der entsprechenden Perhydrovcrbindung hergestellt werden. Beispiele für Fluorierungsverfahren sind die unmittelbare Fluorierung, die Fluorierung mittels Kobaltfluorid und die elektrolytische Fluorierung. Die elektrolytische Fluorierung ist bevorzugt. In diesem Fall wird in eine Elektrolysezelle wasserfreier Fluorwasserstoff und die Perhydroverbindung gegeben und das Gemisch der Elektrolyse unterworfen. Normalerweise beträgt die Spannung bei der Elektrolyse 3 bis 9 V, die Anodenstromdichte 1 bis 300 A/dm² und die Zellentemperatur 4 bis 10⁰C. Die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I ist in wasserfreiem Fluorwasserstoffunlöslich und scheidet sich am Boden der Elektrolysezelle ab. Die Isolierung und Reinigung der Verbindungen der allgemeinen Formel I erfolgt beispielsweise durch Vermischen der Fällung mit dem gleichen Volumen einer wäßrigen Alkalilösung und einer Aminverbindung, Rückflußkochen, Abtrennung der Verbindungen der allgemeinen Formel I von der untersten Schicht (zu diesem Zeitpunkt sind partiell fluorierte Verbindungen in der Aminschicht gelöst), Waschen der Verbindungen der allgemeinen Formel I mit der entsprechenden Menge eines Gemisches aus Wasser und Aceton, das Kaliumiodid cnthüH, um Verbindungen mit Flucrstcrricr! am Stickstoff üb/ulrcriricri. Danach wird das "r;;dük! !r;\kiii>nierend destilliert.

Als Blutersatzmittel und Perfusionsflüssigkeit geeignete wäßrige Emulsionen auf der Basis von Fluorkohle-nstolTverbindungen sind an sich bekannt. Die Emulsionen selbst sind ähnlich den bekannten Emulsionen. I is

(ι5 handelt sich um ÖI-in-Wasscr-Fimulsionen, bei denen das Pcrlluorcycloamin in Wasser dispcrgicrl isl und der Gehalt an Perfluorcycloamin 5 bis 50% (Gew./Vol.), vorzugsweise 10 bis 40% (Gew./Vol.) beträgt.

Zur Herstellung der Emulsionen wird ein polymeres nichtionogenes Tensid oder ein P'iospholipid oder deren Gemisch als Emulgator in einer Menge von 1 bis 5% (Gew./Vol.) verwendet.

Das polymere nichtionogene Tensid hat ein Molekulargewicht von etwa 2 000 bis 20 000. Spezielle Beispiele sind Poiyoxyäthylen-Polyoxypropylen-Copolymerisate, Polyoxyäthylen-Fettsäureester und Polyoxyäthylen-Casloröl-Derivale. Beispiele für Phospholipide sind Vitellinphospholipid und Sojabohnenphospholipid.

Der r.mulsion kann zusätzlich noch mindestens eine Fettsäure mit 8 bis 22 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 14 bis 20 Kohlenstoffatomen, oder ein physiologisch verträgliches Salz, z. B. ein Alkalimetallsalz, wie das Natrium- oder Kaliumsalz oder deren Monoglycerid als Emulgator zugesetzt werden. Spezielle Beispiele für die verwendbaren Fettsäuren sind Caprylsäure, Caprinsäure, Laurinsäure, Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, Bchensäure, Palmitoleylsäure, Ölsäure, Linolsäure, Arachidonsäure oder deren Natrium- oder Kaliumsalze oder Monoglyceride. Die verwendete Menge beträgt 0,001 bis 0,01 % (Gew./Vol.).

Als wäßriges Medium kann eine physiologisch verträgliche wäßrige Lösung, beispielsweise physiologische Kochsalzlösung oder Milchsäure enthaltende Ringer-Lösung verwendet werden.

Erforderlichenfalls kann die Emulsion der Erfindung auf den osmotischen Druck des Blutes eingestellt werden. Zu diesem Zweck wird z. B. Glycerin verwendet. Ferner kann der Emulsion ein Plasmaexpander, z. B. I lydroxyäthylstärke oder Dextran, einverleibt werden, um den kolloid-osmotischen Druck der Emulsion einzustellen.

Die Emulsionen der Erfindung können durch Vermischen der entsprechenden Bestandteile in beliebiger Reihenfolge, grobes Emulgieren und anschließendes feines Homogenisieren mit Hilfe eines Hochdruck-Homogenisalors, z. B. eines Homogenisators des Manton-Gaulin-Typs, hergestellt werden, bis die Teilchengröße höchstens 0,3 Mikron beträgt; vgl. auch DE-AS 24 04 564.

Die Emulsionen der Erfindung können Tieren oder Menschen als Blutersatzmittel in Gegenwart von Sauerstoff in einer Menge, die der zu ersetzenden Blutmenge entspricht, verabfolgt werden. Außer als Blutersatzmittel kann die Emulsion der Erfindung auch zur Perfusion für die Konservierung von inneren Organen verwendet werden.

Bei der Verwendung als Blutersatzmittel zum Sauerstofftransport werden die Emulsionen gewöhnlich intravenös in einer Dosis von 50 bis 2000 ml an Patienten gegeben.

Die Bcipicle erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

Als Elektrolysezelle wird ein Behälter aus Monel-Metall mit einer Kapazität von 1,5 Liter verwendet. Die Zelle enthält Elektroden aus Nickel einer Reinheit von mindestens 99,6% (6 Anoden und 7 Kathoden), die abwechselnd in einem Abstand von 1,7 bis 2,0 mm angeordnet sind. Die effektive Anodenoberfiäche beträgt 10,5 dnr. Weiterhin ist die Zelle mit einem Rückflußkühler aus Kupfer ausgerüstet.

Die Elektrolysezelle wird mit 1,2 Liter wasserfreier Fluorwasserstoffsäure beschickt. Gegebenenfalls vorhandene geringe Mengen an Verunreinigungen (Wasser und Schwefelsäure) werden durch vorherige Elektrolyse entfernt. Sodann werden 130 g (0,85 Mol) N-Cyclohexylpyrrolidin in der wasserfreien Fluorwasserstoffsäure gelöst. In den Bodenteil der Elektrolysezelle wird Helium in einer Geschwindigkeit von 100 ml/min eingeleitet. Die Elektrolyse wird bei einer Anodenstromdichte von 1,0 bis 2,0 A/dm², einer Spannung von 4,0 bis 6,2 V und einer Badlempcratur von 4 bis 10⁰C durchgeführt. Die Elektrolyse wird während 1051 A · Std. durchgeführt, bis die Elcklrolysenspannung 9,0 V erreicht. Sodann werden weitere 200 ml wasserfreie Fluorwasserstoffsäure pro 24 Stunden zugegeben. Das während der Elektrolyse erzeugte Gas wird durch ein mit Natriumfluoridplätzchen gefülltes Eisenrohr geleitet, um den mitgerissenen wasserfreien Fluorwasserstoff abzutrennen. Sodann werden die Gase in einer Kühlfalle verflüssigt, die mit einem Gemisch aus Trockeneis und Aceton gekühlt wird. Die Falle enthält 9,5 g einer farblosen Flüssigkeit. Die Badlösung in der Elektrolysezelle trennt sich in zwei Phasen. Die obere Schicht enthält Fluorwasserstoff und die untere Schicht organische Fluorverbindungen. Die unlere Schicht wird abgetrennt. Ausbeute 263 g.

Die beim Abkühlen der Gase in der Kühlfalle aufgefangene Flüssigkeit sowie die untere Schicht der Elektrolysezelle werden vereinigt, und mit einem gleichen Volumen 70prozentiger Kalilauge und Diisobutylamin versetzt. Das Gemisch wird 7 Tage unter Rückfluß erhitzt. Sodann wird das Perfluorcycloamin in einem Scheidetrichter abgetrennt und mit 90prozentiger wäßriger Acetonlösung gewaschen, die 10 Gewichtsprozent Kaliumjodid enthält. Hierauf wird das rohe Perfluorcycloamin mittels einer Drehbandkolonne fraktionierend destilliert. Es werden 44 g (8% d. Th.) Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin vom Kp. 145 bis 152°C/760 Torr erhalten. Die Struktur der Verbindung wird bestätigt durch das IR-Absorptionsspektrum, das F-kernmagnetische Resonanzspektrum und das Massenspektrum.

Gemäß Beispiel 1 werden folgende Perfluorcycloamine hergestellt:

Pcrfluor-N-p'-methylcyclohexyD-pyrrolidin, Kp. 156 bis 165°C/760 Torr;
Pcrfluor-N-cyclohexyl^-methylpyrrolidin, Kp. 156 bis 165°C/760 Torr;
Pcrlluor-N-cyclohexyl-j-methylpyrrolidin, Kp. 156 bis 165°C/760 Torr;

l^>erlluor-N-(2'-methylcyclohexyl)-pyrrolidin, Kp. 156 bis 165°C/760 Torr; (.0

, Kp. '.5G bis

|li Beispiel 2

j! 400 g Vilellin-Phospholipid werden in 8,5 Liter Milchsäure enthaltende Ringer-Lösung eingetragen und ver-

f'iji rührt. Sodann wird die erhaltene Emulsion mit 2,5 kg Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin versetzt und kräftig

!;'; gerührt. Die erhaltene grobe Emulsion wird in den Flüssigkeitsbehälter eines Homogenisators des Manton-

|& Gaulin-Typs gegeben und bei einer Temperatur von 50 ± 5⁰C und einem Druck von 200 bis 500 kg/crrr umge-

wälzt. Die Konzentration des Perfluor-N-cyclohexylpyrroIidins in der erhaltenen Emulsion beträgt 27,3% (GewVVol.). Die Teilchengröße wird nach der Zentrifugen-Sedimentationsmethode bestimmt. Sie beträgt 0,05 bis 0,25 Mikron. Die Emulsion wird in Ampullen abgefüllt und sterilisiert. Die Teilchengröße ändert sich nur unwesentlich.

Beispiel 3

Gemäß Beispiel 2 wird eine Emulsion mit Perfluor-N-Q'-methylcyclohexyO-pyrroIidin hergestellt. Die Teilchengröße der erhaltenen Emulsion beträgt 0,05 bis 0,25 Mikron.

Versuchsbericht 1. Stabilität der Emulsionen

20 g Perfluorcycloamin und 4 g Vitellin-Phospholipid werden mit Wasser auf ein Volumen von 200 ml aufgefüllt. Die Emulgierung wird in einem Homogenisator des Manton-Gaulin-Typs im Stickstoffstrom bei einem Druck von 200 bis 600 kg/cm² und einer Flüssigkeitstemperatur von 40 bis 45°C durchgeführt. Jede Emulsion wird durch ein 0,65 Mikron Membranfilter filtriert, in 20 ml fassende Ampullen abgefüllt und nach dem Verdrängen der Luft durch Stickstoff 30 Minuten auf 100⁰C erhitzt. Anschließend werden die Ampullen bei Raumtemperatur auf 4°C gelagert. Die Teilchengröße der Emulsion wird nach der Zentrifugen-Sedimentationsmethode von Yokoyama et al., Chem. Phairn. Bull., Bd. 22 (1974), S. 2966, bestimmt. Aus den erhaltenen Werten wird die durchschnittliche Teilchengrößenverteilung mit einem Mikrorechner berechnet.

Die Teilchengrößenverteilung der Perfluorcycloamin-Emulsionen vor und nach dem Erhitzen und der Lagerung bei 4°C und Raumtemperatur (15 bis 28°C) sind in den Tabellen I und II zusammengefaßt. Aus den Ergebnissen ist ersichtlich, daß die Emulsionen der Erfindung sehr stabil gegen Erhitzen sind, daß sich die durchschnittliche Teilchengröße praktisch nicht ändert. Auch bei der Lagerung bei 4⁰C nach dem Erhitzen ist keine Zunahme der durchschnittlichen Teilchengröße der Emulsionen selbst nach 5 Monaten zu beobachten.

Tabelle 1 30 Stabilität einer Perfiuor-N-cyclohexylpyrrolidin-Emulsion

	Durchschnittliche Teilchengröße, 'i	Teilchengrößenverteilung, <0,l μ 0.1-0,2 ;x	Durchschnittliche Teilchengröße,	52,7	62,7	Gew.-% 0,2-0,3 u	>0,3 ;,
Vor dem Erhitzen	0,114	40,1	0,133	56,9	63,4	7,2	0
unmittelbar nach dem Erhitzen	0,115	39,1	0,132			4,0	0
Nach 2 Wochen				58,4	64,2
bei 4°C	0,114	40,3	0,131	58,6	65,3	1,3	0
bei Raumtemperatur	0,122	39,6	0,133		1,8	0
Nach 4 Wochen			58,1
bei 4°C	0,113	39,0	60,9	2,9	ü
bei Raumtemperatur	0,122	33,1		6,0	0
Nach 5 Monaten			57,4
bei 4°C	0,114	40,3		2,3	0
Tabelle II
Stabilität einer Perfluor-N-O'-methylcycIohexyO-pynOlidin-Emulsion	Teilchengrößenverteilung, <0,l μ 0,1-0,2 λ
	28,0	Gew.-% 0,2-0,3 μ	>0,3 ,,
Vor dem Erhitzen	28,5	9,3	0
unmittelbar nach dem Erhitzen		8,1	0
Nach 2 Wochen	28,1
bei 4°C	27,5	7,7	0
bei Raumtemperatur	7,2	0

Fortsetzung

Durchschnittliche Tcilchengröl.icnverteilung, Gew.-%

Teilchengröße,

•i <0,l :< 0,1-0.2·, 0,2-0,3_:

:0,3 ·

Nuch 4 Wochen
bei 4°C
bei Raumtemperatur

Nach 5 Monaten
bei 4°C

0,132
0,135

0,133

27,8 26,8

27,0

7,9
6,9

7,9

2. Akute Toxizität

Die Bestimmung der akuten Toxizität erfolgt an Emulsionen der Erfindung, deren Zusammensetzung in der Tabelle III angegeben ist. Die Emulsionen sind auf den osmotischen Druck des Blutes eingestellt worden. Für die Versuche werden männliche Wistar-Ratten mit einem Gewicht von 100 bis 120 g verwendet. Die Emulsion wird intravenös gegeben, und die Tiere werden 1 Woche beobachtet. Bei einer Dosis von 100 ml/kg Körpergewicht können weder bei einer Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin noch bei einer Perfluor-N-(3'-methylcyclohexyl)-pyrrolidin enthaltenden Emulsion toxische Symptome beobachtet werden.

Tabelle III	Menge, %
Zusammensetzung	(Gew./Vol.l

Ölkomponente (9 Volumteile)	30
Perfluorcycloamin
Emulgator	4,0
Vitellin-Phospholipid
Elektrolyt (1 Volumteil)	6,00
NaCI	2,1
NaHCO₃	0,336
KCI	0,427
MgCK ·6Η,0	0,356
CaCl₂ ■ 2 H₂O	1,802
D-Glucose

pH

8,0

3. Verteilung der Perfluorcycloamine in Organen

Männlichen Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 120 bis 130 g wird die in Beispiel 3 hergestellte Emulsion durch die Schwanzvene in einer Menge von 4 g Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin pro kg Körpergewicht gegeben. Während eines Zeitraums von 3 Monaten wird die Perfluorcycloamin-Konzentration in der Leber, Milz und im Fettgewebe gaschromatographisch bestimmt.

In Tabelle IV ist der Gehalt an Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin in den Organen nach 1 Woche, 2 Wochen und 4 Wochen sowie 3 Monaten nach der Verabreichung angegeben. Die Verbindung wird in größerer Menge in den rcticulo-cndothelialen Organen kurz nach der Verabreichung aufgenommen, danach jedoch rasch ausgeschieden, lis gibt keine Hinweise auf eine Schädigung der Leber oder Milz.

Die Halbwertszeit des Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidins beträgt 16 Tage.

Tabelle IV	Zeitspanne nach der Infusion	Restmenge an Perfluor cycloamin, %
Organ	1 Woche 2 Wochen 4 Wochen 3 Monate	21,23 13,63 4,98 0.24
Leber

	33 03	151	Restmenge
Fortsetzung			an Perfluor-
Organ	Zeitspanne	cycloamin, %
	nach der	12,33
	Infusion	10,49
Milz	1 Woche	8,52
	2 Wochen	0,51
	4 Wochen
	3 Monate

4. Anatomische Befunde

Männlichen Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 120 bis 130 g werden 4 g/kg der Perfluorcycloamin-Emulsion von Beispiel 2 oder 3 intravenös gegeben. Während eines Zeitraums von 3 Monaten nach der Infusion werden Proben aus der Leber und Milz entnommen und untersucht. Ferner werden die Leberund Milz gewogen, um eine Gewichtsveränderung festzustellen.

Die Lunge, die Leber und die Milz werden 1 Woche, 2 Wochen, 4 Wochen und 3 Monate nach der Infusion beobachtet. Aufgrund der raschen Elimination sind keine Organverändeiungen festzustellen.

In der nachstehenden Tabelle V sind verschiedene bekannte Perfluorkohlenstoffe und ein tertiäres Stickstoffatom enthaltende Perfluorkohlenstoffe einer Perfluorpyrrolidin-Veroindung der Erfindung gegenübergestellt.

wmtmmsm Tabelle V	Verbindung	Struktur	Emulsions	LD₅₀	η«,	Löslichkeit	Löslichkeit	Dampfdruck,	Bemerkungen	OJ
Literatur			stabilität	(g/kg)	Tage	von O2,	von CO₂,	Torr		OJ
						Vol.-Vo	Vol.-%			O OJ
	Perfluordecalin		schlecht	36	7,2	45	154	12,7	schlechte Stabilität	on
CA.									der Emulsion
83, 120852q		I
		A
	Perfluor-l,3-di-	I ^F1	schlecht	<2	rasch	44,5	172	67,2	hohe Toxizität
CA.	methylcyclohexan	\A
82, 106605J		_A/l
	Perfluor-l-methyl-	*(^)*	schlecht		190	41,7	126	4,8
	decalin	W
	Perfluortributyl-	(C₄F₉J₁N	gut	_	895	38,9	142	1,14	sehr lange
CA.	amin								Halbwertszeit
76, 131465X	Perfluoroctan	c„i··,«	schlecht	Lungen	10-20	_	_	41	—
				emphysem
	Pcrliuor-1-butyl	[AJ-C₄F,	_	desgl.	-	48,5	160	-	-
	tetrahydrofuran	*\ / ~4» 4** 0

Forlsetzung

Literatur Verbindung

Struktur

Emulsions- LD_5n Γι/ι, Löslichkeit Löslichkeit Dampfdruck, Bemerkungen Stabilität (g/kg) Tage von O₂, von CO₁, Torr

Vol.-% Vol.-"/,.

DE-OS Perlluorpropyl-

15 928 cyclohexan

Perfluoroctahydroinden

Perfluor-1-oxadecalin

(Freon E₃)

Perfluortripropylamin

F I F

F(CFCF₂O)₂CF₂CF₃

CF₃

(C₃F₇J₃N

CF₃ /

F N-C₃F₇ schlecht

schlecht

schlecht 2-4

29

rasch 42,2

4,6 44,9

rasch 44

64,7 46,3

62,4

184

186

185

166

28	Lungenemphysem	U) U) O U) h—k
34,5	Lungenemphysem
25,5	Lungenemphysem
48,5 18,5	hohe Toxizität
8,7	Lungenemphysem

O F N-C₄F₉

50,6

Lungenemphysem Lungenemphysem

Erfindung

Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin

F N sehr gut

>30

8,6

ungiftig

Beispiel 4

Beispic! 2 wird wiederholt, jedoch wird als Perfluor-Verbindung Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin, Perfluor-N-O'-methylcyclohexylpyrrolidin und Perfluor-N-cycIohexyl^-methylpyrrolidin und als Vergleichsverbindung Pcrfluor-r^N-diäthylcyclohexylamin (vgl. DE-OS 23 15 928) verwendet Anstelle von 8,5 Liter Milchsäure enthaltender Ringer-Lösung wird der in der nachstehenden Tabelle aufgeführte Elektrolyt verwendet.

Es werden Emulsionen mit einem Teilchengrößendurchmesser von höchstens 0,2 Mikron erhalten. Die Emulsionen haben im übrigen die gleiche Zusammensetzung wie sie in Tabelle III angegeben ist.

Zur Bestimmung der Stabilität der Emulsionen werden diese 30 Minuten auf 100⁰C erhitzt und danach bei 4°C gelagert. Nach 3monatiger Lagerung wird die Teilchengröße der Emulsion nach der Methode von Yokoyama et al., a. a. O., bestimmt. Die Stabilität wird als gut bezeichnet, wenn weniger als 20% der Teilchen eine Zunahme der Teilchengröße im Vergleich zum Wert unmittelbar nach der Herstellung zeigten.

Zur Bestimmung der akuten Toxizität (LD₅₀) wurden die Emulsionen intravenös durch die Schwanzvene Gruppen von jeweils fünf Wistar-Ratten mit einem Gewicht von 120 bis 130 g gegeben. Die Tiere werden 1 Woche beobachtet. Sofern die Tiere bei einer Injektion der Perfluor-Verbindung in einer Menge bis zu 30 g/kg kein Lungenemphysem zeigen, werden sie als ungiftig bezeichnet.

Zur Bestimmung der Halbwertszeit der Elimination werden die Emulsionen männlichen Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 120 bis 130 g in einer Menge von 4 g/kg der Emulsion intravenös gegeben. Während eines Zeitraums von 3 Monaten nach der Infusion werden Blut, Leber, Milz und Fett auf ihren Gehalt an Perfluor-Vcrbindung gaschromatographisch untersucht. Aus den Ergebnissen werden die Halbwertszeiten berechnet.

Der Dampfdruc.k der Perfluor-Verbindungen wird nach der Methode vom Ramsay-Young bestimmt.

Zur Bestimmung der Löslichkeit von SauerstofTin der Perfluor-Verbindung wird die mit Sauerstoff gesättigte Verbindung durch eine 10 cm lange Kieselgel-Säule und sodann durch eine 2 m lange, mit einem Molekularsieb 5 Λ gefüllte Säule geleitet, um das Wasser zu adsorbieren. Die Ergebnisse sind in Tabelle Vl zusammengestellt.

Tabelle VI

I'erfluor-Vcrbindung Dampfdruck, Löslichkeit Stabilität LP50* 7"i/2 Tage

Torr der Emulsion von O2, Vol.-% g/kg

Perfluor-r^N-diäthylcyclohexylamin 8,7 44 gut >30 62

(DE-OS 23 15 928)

Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin	8,6	46	gut	>30	16
Perfluor-N-(3'-methylcyclohexyl)- pyrrolidin	5,2	45	gut	>30	30
Perfiuor-N-cyclohexyl-2- methylpyrrolidin	5,0	44	gut	>30	28

Aus der Tabelle ergibt sich für die Verbindungen der Erfindung eine erheblich geringere Halbwertszeit der Elimination.

Claims

Patentansprüche:
1. Perfluorcycloamine der allgemeinen Formel

(D

die in jeder beliebigen Stellung durch eine Perfluormethylgruppe substituiert sein können.
2. Perfluor-N-cyclohexylpyrrolidin.

3. Perfluor-N-O'-methylcyclohexyO-pyrrolidin.

4. Perfluor-N-cyclohexyl^-methylpyrrolidin.

5. Perfluor-N-cyclohexylO-methylpyrrolidin.

6. Perfluor-N-fi'-methykyclohexylJ-pyrrolidin.
7. Perfluor-N-(4'-methyIcyclohexyl)-pyrrolidin.

8. Blutersatzmittel und Perfusionsflüssigkeit, enthaltend eine Verbindung nach Anspruch I zusammen mit pharmazeutischen unbedenklichen Hilfs- und Trägerstoffen.