DE602004010931T2 - Für die behandlung von krankheiten wie krebs und atherosclerose geeignete substituierte isochinoline - Google Patents

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Description

  • Hintergrund der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung betrifft Isochinolin-Derivate, Zusammensetzungen und Medikamente, die diese enthalten, sowie Verfahren zur Herstellung und Verwendung solcher Verbindungen, Zusammensetzungen und Medikamente. Solche Isochinolin-Derivate sind von potentiellem therapeutischen Nutzen in der Behandlung von Krankheiten, die mit unangemessener oder pathologischer Angiogenese assoziiert sind.
  • Ein wichtige große Familie von Enzymen ist die Familie der Proteinkinaseenzyme. Gegenwärtig gibt es ungefähr 500 verschiedene bekannte Proteinkinasen. Proteinkinasen dienen zur Katalyse der Phosphorylierung einer Aminosäureseitenkette in verschiedenen Proteinen durch den Transfer des γ-Phosphats des ATP-Mg2+-Komplexes auf die Aminosäureseitenkette. Diese Enzyme kontrollieren die Mehrheit der Signalprozesse innerhalb der Zellen, wodurch Zellfunktion, Wachstum, Differenzierung und Zerstörung (Apoptose) durch reversible Phosphorylierung der Hydroxyl-Gruppen von Serin-, Threonin- und Tyrosin-Resten in Proteinen gesteuert wird. Untersuchungen haben gezeigt, daß Proteinkinasen Schlüsselregulatoren vieler Zellfunktionen sind, einschließlich Signaltransduktion, transkriptionelle Regulation, Zellmotilität und Zellteilung. Für einige Onkogene ist ebenfalls gezeigt worden, daß sie Proteinkinasen codieren, was darauf hinweist, daß Kinasen eine Rolle in der Onkogenese spielen. Diese Prozesse sind besonders reguliert, oft durch komplexe ineinandergreifende Stoffwechselwege, wobei jede Kinase selbst durch eine oder mehrere Kinasen reguliert wird. Konsequenterweise kann eine abweichende oder unangemessene Proteinkinaseataktivität zum Entstehen von Krankheitszuständen, die mit solch einer abweichenden Kinaseaktivität assoziiert sind, beitragen. Aufgrund ihrer physiologischen Relevanz, Vielfältigkeit und Allgegenwart wurden Proteinkinasen eine der wichtigsten und weitläufig untersuchtesten Enzymfamilie der biochemischen und medizinischen Forschung.
  • Die Proteinkinasefamilie von Enzymen wird typischerweise in zwei Hauptunterfamilien klassifiziert: Protein-Tyrosin-Kinasen (PTK) und Protein-Serin/Threonin-Kinase, basierend auf dem Aminosäurerest, den sie phosphorylieren. Die Serin/Threonin-Kinase (PSTK) einschließlich cyclisches AMP- und cyclisches GMP-abhängige Proteinkinasen, Calcium- und Phospholipid-abhängige Proteinkinase, Calcium- und Calmodulin-abhängige Proteinkinasen, Caseinkinasen, Proteinkinasen des Zellteilungszykluses und andere. Diese Kinasen sind normalerweise cytoplasmatisch oder mit besonderen Zellfraktionen assoziiert, möglicherweise durch Ankerproteine. Abweichende Protein-Serin/Threonin-Kinaseaktivität ist in einer Anzahl von Pathologien wie rheumatoider Arthritis, Psoriasis, septischem Schock, Knochenverlust, vielen Krebsarten und anderen proliferativen Krankheiten impliziert oder angenommen worden. Entsprechend sind Serin/Threonin-Kinasen und die Signaltransduktionswege, von denen sie ein Teil sind, wichtige Ziele für die Arzneistoffentwicklung. Die Tyrosinkinasen phosphorylieren Tyrosinreste. Tyrosinkinasen spielen eine ebenso wichtige Rolle in der Zellregulation. Diese Kinasen schließen einige Rezeptoren für Moleküle wie Wachstumsfaktoren und Hormone ein, einschließlich epidermalen Wachstumsfaktorrezeptor, Insulinrezeptor, Blutplättchen-abgeleiteter Wachstumsfaktorrezeptor und andere. Untersuchungen haben darauf hingewiesen, daß viele Tyrosinkinasen Transmembranproteine sind, deren Rezeptordomänen auf der Außenseite von Zellen und Kinasedomänen auf der Innenseite lokalisiert sind. Viel Arbeit erfolgt ebenfalls zur Zeit, um ebenfalls Modulatoren von Tyrosinkinasen zu identifizieren.
  • Der Prozeß der Angiogenese ist die Entwicklung von neuen Blutgefäßen, im allgemeinen Kapillargefäße, aus einer vorher vorhandenen Gefäßanordnung. Angiogenese wird definiert als mit sich bringend (i) Aktivierung von Endothelzellen; (ii) zunehmende vaskuläre Permeabilität; (iii) nachfolgende Auflösung der Basalmembran und Extravasion von Plasmakomponenten, was zur Bildung einer vorläufigen extrazellulären Fibringelmatrix führt; (iv) Proliferation und Mobilisierung von Endothelzellen; (v) Neuordnung von mobilisierten Endothelzellen zur Ausbildung funktioneller Kapillargefäße; (vi) Ausbildung einer Gefäßschleife; und (vii) Ablagerung der Basalmembran und Rekrutierung von perivaskulären Zellen, um Gefäße neu auszubilden. Normale Angiogenese wird während des Gewebewachstums, von der embryonalen Entwicklung bis zur Reife, aktiviert und tritt dann in eine Periode relativer Ruhe während des Erwachsenenstadiums. Normale Angiogenese wird ebenfalls während der Wundheilung und in bestimmten Stadien des weiblichen Reproduktionszyklusses aktiviert. Unangemessene Angiogenese wurde mit mehreren Krankheitszuständen assoziiert, einschließlich verschiedener Retinopathien; ischämischer Krankheit; Atherosklerose; chronische Entzündungsstörungen; und Krebs. Die Rolle der Angiogenese in Krankheitszuständen wird zum Beispiel in Fan et al., Trends in Pharmacol. Sci. 16: 54–66; Shawver et al., DDT Bd. 2, Nr. 2, Februar 1997; Folkmann, 1995, Nature Medicine 1: 27–31 diskutiert.
  • Für das Wachstum von soliden Tumoren in Krebs wurde gezeigt, daß dieses Angiogenese-abhängig ist. Der Verlauf der Leukämie sowie die Akkumulation von Fluid, das mit bösartigem Bauchwasser und pleuraler Effusionen assoziiert ist, involvieren ebenfalls proangiogene Faktoren. (Siehe J. Folkman, J. Natl. Cancer Inst., 1990, 82, 4–6.) Konsequenterweise ist das Abzielen auf proangiogene Stoffwechselwege eine Strategie, die weitläufig verfolgt wird, um neue Therapeutika auf diesen Gebieten des großen, unerreichten medizinischen Bedarfs bereitzustellen. Die Rolle von Tyrosinkinasen, die an der Angiogenese und der Vaskulierung von soliden Tumoren beteiligt sind, hat Interesse geweckt.
  • Bis vor kurzem wurde das meiste Interesse auf diesem Gebiet auf Wachstumsfaktoren, wie zum Beispiel Gefäßzell-Wachstumsfaktor (VEGF) und seine Rezeptoren, die als Gefäßzelle-Wachstumsfaktorrezeptor(en) (VEGFR) bezeichnet werden, fokussiert. Die Rollen von VEGF und VEGFRs, die sie in der Vaskulisierung von soliden Tumoren im Verlauf von hämatopoetischen Krebsarten und in der Modulation der vaskulären Permeabilität spielen, hat in der Wissenschaftsgemeinschaft großes Interesse geweckt. VEGF, ein Polypeptid, ist Mitose-auslösend für Endothelzellen in vitro und stimuliert angiogene Antworten in vivo. VEGF wurde ebenfalls mit unangemessener Angiogenese verbunden (H. M. Pinedo et al., The Oncologist, Bd. 5, Nr. 90001, 1–2, April 2000). VEGFR(s) sind Proteintyrosinkinasen (PTKs). PTKs katalysieren die Phosphorylierung spezifischer Tyrosylreste in Proteinen, die an der Regulierung des Zellwachstums und der Differentierung beteiligt sind. (A. F. Wilks, Progress in Growth Factor Research, 1990, 2, 97–111; S. A. Courtneidge, Dev. Supp. I, 1993, 57–64; J. A. Cooper, Semin. Cell Biol., 1994, 5(6), 377–387; R. F. Paulson, Semin. Immunol., 1995, 7(4), 267–277; A. C. Chan, Curr. Opin. Immunol., 1996, 8(3), 394–401).
  • Drei PTK-Rezeptoren für VEGF wurden identifiziert: VEGFR-1 (Flt-1); VEGFR-2 (Flk-1 oder KDR) und VEGFR-3 (Flt-4). Diese Rezeptoren sind an der Angiogenese beteiligt und partizipieren an der Signaltransduktion (T. Mustonen et al., J. Cell. Biol. 1995: 129: 895–898). Von besonderem Interesse ist VEGFR-2, das eine Transmembranrezeptor-PTK ist, die primär in Endothelzellen exprimiert wird. Die Aktivierung von VEGFR-2 durch VEGF ist ein kritischer Schritt im Signaltransduktionsweg, der Tumorangiogenese einleitet. Die VEGF-Expression kann konstitutiv für Tumorzellen sein und kann ebenfalls in Antwort auf bestimmte Stimuli hochreguliert werden. Ein solches Stimuli ist Hypoxie, bei der die VEGF-Expression sowohl im Tumor als auch im assoziierten Wirtsgewebe hochreguliert wird. Der VEGF-Ligand aktiviert VEGFR-2 durch Binden an dessen extrazelluläre VEGF-Bindungsstelle. Dies führt zu einer Rezeptordimerisierung von VEGFRs und Autophosphorylierung von Tyrosinresten in der intrazellulären Kinasedomäne von VEGFR-2. Die Kinasedomäne führt zum Transfer eines Phosphats von ATP auf die Tyrosinreste, wodurch Bindungsstellen für Signalproteine stromabwärts von VEGFR-2 bereitgestellt werden, was letztendlich zur Einleitung der Angiogenese führt (G. McMahon, The Oncologist, Bd. 5, Nr. 90001, 3–10, April 2000).
  • Agiopoieten 1 (Ang1), ein Ligand für die Endothel-spezifische Rezeptortyrosinkinase TIE-2, ist ein neuer angiogener Faktor (Davis et al., Cell, 1996, 87: 1161–1169; Partanen et al., Mol. Cell Biol., 12: 1698–1707 (1992); US-Patene Nrn. 5,521,073 ; 5,879,672 ; 5,877,020 und 6,030,831 ). Das Acronym TIE stellt "Tyrosinkinase-enthaltendes Ig und EGF-Homolog-Domänen" dar. TIE wird verwendet, um eine Klasse von Rezeptortyrosinkinasen zu identifizieren, die exklusiv in vaskulären Endothelzellen und frühen hämatopoetischen Zellen exprimiert werden. Typischerweise werden TIE-Rezeptorkinasen durch die Gegenwart einer EGF-ähnlichen Domäne und einer Immunglobulin(IG)-ähnlichen Domäne gekennzeichnet, die aus extrazellulären Faltungseinheiten, die durch Disulfidbrückenbindungen innerhalb der Kette stabilisiert werden, bestehen (Partanen et al., Curr. Tropics Microbiol. Immunol., 1999, 237: 159–172). Im Gegensatz zu VEGF, das während des frühen Stadiums der vaskulären Entwicklung wirkt, wirkt Ang1 und sein Rezeptor TIE-2 in den späten Stadien der vaskulären Entwicklung, d. h. während der vaskulären Ummodulierung (Ummodulierung bezieht sich auf die Ausbildung eines vaskulären Lumens) und Reifung (Yancopoulos et al., Cell, 1998, 93: 661–664; K. G. Peters, Circ. Res., 1998, 83(3): 342–3; Suri et al., Cell 87, 1171–1180 (1996)).
  • Konsequenterweise würde zu erwarten sein, daß die Inhibierung von TIE-2 zur Unterbrechung des Ummodulierens und der Reifung einer neuen Gefäßanordnung, die durch Angiogenese eingeleitet wird, dienen könnte, wodurch der angiogene Prozeß unterbrochen wird. Des weiteren würde die Inhibierung an der Kinasedomänebindungsstelle von VEGFR-2 die Phosphorylierung von Tyrosinresten blockieren und zum Unterbrechen der Einleitung der Angiogenese dienen. Wahrscheinlich sollte Inhibierung von TIE-2 und/oder VEGFR-2 dann die Tumorangiogenese unterbinden und zum Verzögern oder Auslöschen des Tumorwachstums dienen. Entsprechend könnte eine Behandlung für Krebs oder anderen Störungen, die mit einer unangemessenen Angiogenese assoziiert sind, bereitgestellt werden.
  • EphB4 ist eine andere Rezeptortyrosinkinase, die ursprünglich in J. Biol. Chem. als HTK (13. Mai 1994, 269(19): 14211–8) von B. D. Bennett et al. beschrieben wurde. Die kürzliche Beobachtung von vaskulären Defekten in Ephrin-B2- und EphB4-Knockout-Mäusen weist stark darauf hin, daß die Wechselwirkung zwischen dem Ephrin-B2-Ligand und seinem erkennenden EphB4-Rezeptor die Grenzen von arteriellen-venösen Domänen definiert. Ephrin-B2-Liganden werden weitgehend in einigen anderen nicht-vaskulären Geweben wie mesenchymalen Zellen, die an vaskuläre Endothelzellen angrenzen, exprimiert, jedoch sind EphB4-Rezeptoren einzig in vaskulären Endothelzellen lokalisiert. Nicht nur daß EphB4-Rezeptoren durch ihre entsprechenden Ephrin-B2-Liganden aktiviert werden, die ebenfalls Transmembranproteine sind, sondern auch EphB4-Rezeptoren aktivieren ihre Ephrin-B2-Liganden. Embryonen, die heterozygot für das EphB4-Allel sind, zeigen keine ersichtlichen Defekte im Vergleich zum Wildtyp. Jedoch zeigen homozygote Embryos kardiovaskuläre Defekte durch Verzögerung des endothelialen Zellwachstums und arretierter Herzentwicklung, und embryonaler Letalität mit hoher Häufigkeit. Diese Ergebnisse zeigen eindeutig, daß der EphB4-Signalweg eine wesentliche Rolle in der Vaskulogenese, Angiogenese und Gefäßreifung spielt, und daß diese Ereignisse ebenfalls untrennbar mit Krebs und Atherosklerose verbunden ist.
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung besitzen Aktivitäten zu einer oder mehreren der hier beschriebenen Tyrosinkinasen, insbesondere zu denen ausgewählt aus der Gruppe, die aus Tie-2, VEGFR-2 und EphB4-Protein besteht, die in Krebsarten oder Atherosklerose impliziert sind, durch Inhibieren oder Verhindern einer unangemessenen Angiogenese, einer Vaskulogenese, Gefäßreifung oder Zellmotilität. WO 99/20608 und WO 00/09495 offenbaren Verbindungen, die Angiogenese inhibieren.
  • Kurze Zusammenfassung der Erfindung
  • In einem Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I) bereitgestellt:
    Figure 00060001
    oder ein Salz oder ein Solvat davon, worin:
    eines von R1 und R2 H ist und das andere -NHCONHR4 darstellt,
    worin R4 eine Phenyl- oder Naphthyl-Gruppe (die gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein kann, die unabhängig ausgewählt sind aus -C1-5-Alkyl, -C1-5-Halogenalkyl, -CH2CH2CH2-, Halogen, C1-6-Alkoxy, C1-6-Halogenalkoxy, OH, NO2) oder C3-7-Cycloalkyl darstellt, oder R4 zusammen mit dem NH, an das es gebunden ist, eine Morpholino-Gruppe bildet, und
    R3 H oder NHR5 ist, worin R5 H, -Chinolinyl oder -Isochinolinyl, -(CONH)p-Phenyl (worin p 0 oder 1 ist und das Phenyl gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, -C1-6-Alkyl, -C1-6-Halogenalkyl, -Morpholino, -SO2NH2, Benzothiazol (gegebenenfalls mit Methyl substituiert)).
  • In einem zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, die eine Verbindung der Formel (I) oder ein Salz oder Solvat davon und einen oder mehrere aus pharmazeutisch annehmbaren Trägern, Verdünnungsstoffen und Exzipienten umfaßt.
  • In einem dritten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I) oder ein Salz oder Solvat davon zur Verwendung in der Therapie bereitgestellt.
  • Es wird ein Verfahren zum Behandeln einer Störung in einem Säugetier bereitgestellt, die durch mindestens eins aus unangemessener TIE-2-, EphB4- und VEGFR-2-Aktivität vermittelt wird, wobei das Verfahren das Verabreichen einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes, Solvats oder eines physiologisch funktionellen Derivats davon (das nicht Teil der Erfindung bildet) an das Säugetier umfaßt.
  • Es wird die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes oder Solvats davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Behandlung einer Störung, die durch mindestens eins aus unangemessener TIE-2-, EphB4- und VEGFR-2-Aktivität vermittelt wird, bereitgestellt.
  • Es wird ein Verfahren zur Behandlung einer Störung in einem Säugetier bereitgestellt, die durch mindestens eins aus unangemessener TIE-2-, EphB4- und VEGFR-2-Aktivität vermittelt wird, wobei das Verfahren folgendes umfaßt: Verabreichen an das Säugetier (i) einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes, Solvats oder physiologisch funktionellen Derivats davon und (ii) eines Mittels zum Inhibieren einer Wachstumsfaktorrezeptorfunktion (bildet keinen Teil der Erfindung).
  • Es wird eine Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes oder eines Solvats davon und eines Mittels zur Inhibierung einer Wachstumsfaktorrezeptorfunktion bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Störung bereitgestellt, die durch mindestens eins aus unangemessener TIE-2-, EphB4- und VEGFR-2-Aktivität vermittelt wird.
  • Es wird ein Verfahren zum Behandeln einer Störung in einem Säugetier bereitgestellt, die durch unangemessene Angiogenese gekennzeichnet ist, wobei das Verfahren folgendes umfaßt: Verabreichen an das Säugetier einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes, Solvats oder physiologisch funktionellen Derivats davon (bildet keinen Teil der Erfindung).
  • In einem vierten Aspekt der Erfindung wird die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes, Solvats oder physiologisch funktionellen Derivats davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer unangemessenen Angiogenese bereitgestellt.
  • Ausführliche Beschreibung der Erfindung
  • Wie hier verwendet, bedeutet der Begriff "effektive Menge" diejenige Menge eines Arzneistoffs oder pharmazeutischen Mittels, die die biologische oder medizinische Antwort eines Gewebes, Systems, Tiers oder Menschen auslöst, die zum Beispiel durch einen Forscher oder Kliniker begehrt wird. Des weiteren bedeutet der Begriff "therapeutisch effektive Menge" jedwede Menge, die im Vergleich zu einem entsprechenden Probanden, der eine solche Menge nicht erhalten hat, in einer verbesserten Behandlung, Heilung, Prävention oder Verbesserung einer Krankheit, Störung oder Nebenwirkung oder in einer Abnahme der Rate des Fortschreitens einer Krankheit oder Störung resultiert. Der Begriff schließt ebenfalls innerhalb seines Umfangs Mengen ein, die effektiv zum Steuern einer normalen physiologischen Funktion sind.
  • Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "Alkyl" ein geradkettiges oder verzweigtkettiges Kohlenwasserstoffradikal mit der spezifizierten Anzahl an Kohlenstoffatomen. Beispiele für "Alkyl", wie hier verwendet, schließen uneingeschränkt Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, t-Butyl, n-Pentyl, Isopentyl und dgl. ein. Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "C1-6-Alkyl" eine Alkyl-Gruppe, wie zuvor definiert, die mindestens 1 und höchstens 6 Kohlenstoffatome enthält. Beispiele für verzweigtkettige oder geradkettige "C1-6-Alkyl"-Gruppen, die nützlich in der vorliegenden Erfindung sind, schließen uneingeschränkt Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, Isobutyl, n-Butyl, t-Butyl, n-Pentyl und Isopentyl ein.
  • Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "Halogen" Fluor (F), Chlor (Cl), Brom (Br) oder Iod (I), und der Begriff "Halogen" bezeichnet die Halogenradikale Fluor (-F), Chlor (-Cl), Brom (-Br) und Iod (-I).
  • Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "C1-6-Halogenalkyl" eine wie zuvor definierte Alkyl-Gruppe, die mindestens 1 und höchstens 6 Kohlenstoffatome enthält und mit mindestens einer Halogen-Gruppe substituiert ist, wobei das Halogen wie hier definiert ist. Beispiele für verzweigtkettige oder geradkettige "C1-6-Halogenalkyl"-Gruppen, die nützlich in der vorliegenden Erfindung sind, schließen uneingeschränkt Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Isobutyl und n-Butyl ein, die unabhängig mit einen oder mehreren Halogenen, zum Beispiel Fluor, Chlor, Brom und Iod, substituiert sind.
  • Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "C3-7-Cycloalkyl" einen nicht-aromatischen cyclischen Kohlenwasserstoffring mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen. Beispiele für "C3-7-Cycloalkyl"-Gruppen schließen uneingeschränkt Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl ein.
  • Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "Alkoxy" die RaO-Gruppe, worin Ra ein wie zuvor definiertes Alkyl ist, und der Begriff "C1-6-Alkoxy" bezeichnet eine wie hier definierte Alkoxy-Gruppe, worin der Alkylrest mindestens 1 und höchstens 6 Kohlenstoffatome enthält. Beispiele für C1-6-Alkoxy-Gruppen, die nützlich in der vorliegenden Erfindung sind, schließen uneingeschränkt Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, n-Butoxy und t-Butoxy ein.
  • Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "Halogenalkoxy" die Gruppe RaO-, worin Ra ein wie zuvor definiertes Halogenalkyl ist, und der Begriff "C1-6-Halogenalkoxy" bezeichnet eine wie hier definierte Halogenalkoxy-Gruppe, worin der Halogenalkoxyrest mindestens 1 und höchstens 6 Kohlenstoffatome enthält. Beispiele für C1-6-Halogenalkoxy-Gruppen, die nützlich in der vorliegenden Erfindung sind, schließen uneingeschränkt Trifluormethoxy ein.
  • Wie hier verwendet, bedeutet der Begriff "gegebenenfalls", daß die nachfolgend beschriebenen Ereignisse auftreten können oder nicht, und schließt sowohl Ereignisse, die auftreten als auch Ereignisse, die nicht auftreten, ein.
  • Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff "physiologisch funktionelles Derivat" jedes pharmazeutisch annehmbare Derivat einer Verbindung der vorliegenden Erfindung, zum Beispiel einen Ester oder ein Amid, das, nach Verabreichung an ein Säugetier, in der Lage ist, (direkt oder indirekt) eine Verbindung der vorliegenden Erfindung oder ein aktives Stoffwechselprodukt bereitzustellen. Solche Derivate sind den Fachleuten ohne unnötiges Experimentieren und mit Verweis auf die Lehre von Burger's Medicinal Chemistry And Drug Discovery, 5. Auflage, Bd. 1: Principles and Practice, ersichtlich, das hier durch Verweis auf den Umfang hinsichtlich gelehrter physiologisch funktioneller Derivate eingefügt ist.
  • Wie hier verwendet, bezieht sich der Begriff "Solvat" auf einen Komplex von variabler Stöchiometrie, der durch einen gelösten Stoff (in dieser Erfindung eine Verbindung der Formel (I) oder ein Salz oder ein physiologisch funktionelles Derivat davon) und einem Lösungsmittel gebildet wird. Solche Lösungsmittel können zum Zwecke der Erfindung nicht die biologische Aktivität des gelösten Stoffs stören. Beispiele für geeignete Lösungsmittel schließen uneingeschränkt Wasser, Methanol, Ethanol und Essigsäure ein. Vorzugsweise ist das verwendete Lösungsmittel ein pharmazeutisch annehmbares Lösungsmittel. Beispiele für geeignete pharmazeutisch annehmbare Lösungsmittel schließen uneingeschränkt Wasser, Ethanol und Essigsäure ein. Am meisten bevorzugt ist das verwendete Lösungsmittel Wasser.
  • Wie hier verwendet, bezieht sich der Begriff "substituiert" auf eine Substitution mit dem/den bezeichneten Substituent oder Substituenten, wobei mehrere Grade an Substitution, sofern nicht anders angegeben, möglich sind.
  • Wie hier verwendet, bedeutet "eine Verbindung der Erfindung" eine Verbindung der Formel (I) oder ein Salz oder ein Solvat davon.
  • In einer Ausführungsform stellt R4 ein Phenyl-Gruppe (die gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein kann, die unabhängig ausgewählt sind aus -C1-6-Halogenalkyl, -CH2CH2CH2-, Halogen) oder C3-7-Cycloalkyl dar.
  • In einer Ausführungsform ist R3 H oder NHR5, worin R5 H, -Chinolinyl, -(CONH)p-Phenyl (worin p 0 oder 1 ist und das Phenyl gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, -C1-6-Halogenalkyl, -Morpholino, -SO2NH2, Benzothiazol (mit Methyl substituiert)) ist.
  • Vorzugsweise ist die Verbindung die der Formel (1a):
    Figure 00100001
    worin:
    eines von R6 und R7 H ist und das andere -NHCONHR9 darstellt;
    worin R9 eine Phenyl-Gruppe (jedes davon kann gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein, die unabhängig ausgewählt sind aus -C1-6-Halogenalkyl, -CH2CH2CH2-, Halogen) oder C3-7-Cycloalkyl darstellt.
  • R8 ist H oder NHR10, worin R10 H, Chinolinyl, -(CONH)p-Phenyl (worin p 0 oder 1 ist und das Phenyl gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, -C1-6-Halogenalkyl, -Morpholino, -SO2NH2, Benzothiazol (mit Methyl substituiert)) ist.
  • Vorzugsweise stellt R9 ein mit Fluor und Trifluormethyl disubstituiertes Phenyl dar.
  • Besonders bevorzugt ist NHCONHR9:
  • Figure 00100002
  • Vorzugsweise ist R10 H,
  • Figure 00110001
  • Spezifische Beispiele für Verbindungen der vorliegenden Erfindung schließen folgende ein:
    1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff,
    1-Cyclohexyl-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff,
    1-[3-(1-Amino-isochinolin-5-yl)phenyl]-3-(2-fluor-5-trifluormethyl-phenyl)harnstoff,
    1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(5-{3-[3-(2-fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-ureido]-phenyl}-isochinolin-1-yl)harnstoff,
    1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(chinolin-6-ylamino)-isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff,
    1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff,
    1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff,
    1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff,
    1-Indan-5-yl-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff,
    1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(4-morpholin-4-yl-phenylamino)-isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff und
    3-{5-[3-(3-Cyclohexyl-ureido)phenyl]-isochinolin-1-ylamino}benzolsulfonamid.
  • Typischerweise sind die Salze der vorliegenden Erfindung pharmazeutisch annehmbare Salze. Salze, die von dem Begriff "pharmazeutisch annehmbare Salze" umfaßt sind, beziehen sich auf nicht-toxische Salze von Verbindungen dieser Erfindung. Salze der Verbindungen der vorliegenden Erfindung können Säureadditionssalze, die von einem Stickstoff auf einem Substituenten in der Verbindung (I) abgeleitet sind, umfassen. Repräsentative Salze schließen die folgenden Salze ein: Acetat, Benzolsulfonat, Benzoat, Bicarbonat, Bisulfat, Bitartrat, Borat, Bromid, Calciumedetat, Camsylat, Carbonat, Chlorid, Clavulanat, Citrat, Dihydrochlorid, Edetat, Edisylat, Estolat, Esylat, Fumarat, Gluceptat, Gluconat, Glutamat, Glycollylarsanilat, Hexylresorcinat, Hydrabamin, Hydrobromid, Hydrochlorid, Hydroxynaphthoat, Iodid, Isethionat, Lactat, Lactobionat, Laurat, Malst, Malest, Mandelat, Mesylat, Methylbromid, Methylnitrat, Methylsulfat, Monokaliummaleat, Mucat, Napsylat, Nitrat, N-Methylglucamin, Oxalat, Pamoat (Embonat), Palmitat, Pantothenat, Phosphat/Diphosphat, Polygalacturonat, Kalium, Salicylat, Natrium, Stearat, Subacetat, Succinat, Tannst, Tartrat, Teoclat, Tosylat, Triethiodid, Trimethylammonium und Valerat. Andere Salze, die nicht pharmazeutisch annehmbar sind, können nützlich bei der Herstellung von Verbindungen dieser Erfindung sein, und diese bilden einen weiteren Aspekt der Erfindung.
  • Während es möglich ist, daß zur Verwendung in der Therapie therapeutisch effektive Mengen einer Verbindung der Formel (I) als auch Salze und Solvate davon als die Rohchemikalie verabreicht werden können, ist es möglich den aktiven Bestandteil als eine pharmazeutische Zusammensetzung anzubieten. Entsprechend stellt die Erfindung ferner pharmazeutische Zusammensetzungen bereit, die therapeutisch effektive Mengen der Verbindungen der Formel (I) und Salze und Solvate davon, und einen und mehrere pharmazeutisch annehmbare Träger, Verdünnungsmittel oder Exzipienten einschließen. Die Verbindungen der Formel (I) und Salze und Solvate davon sind wie oben beschrieben. Der Träger (die Träger), das Verdünnungsmittel (die Verdünnungsmittel) oder der Exzipient (die Exzipienten) muß (müssen) annehmbar im Sinne der Kompatibilität mit den anderen Bestandteilen der Formulierung und dürfen nicht schädlich für den Empfänger sein. Gemäß einem anderen Aspekt der Erfindung wird ebenfalls ein Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung bereitgestellt, das das Mischen einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes oder Solvats davon mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Trägern, Verdünnungsmitteln oder Exzipienten einschließt.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen können in Einheitsdosisformen dargeboten werden, die eine vorbestimmte Menge des aktiven Bestandteils pro Einheitsdosis enthalten. Solch eine Einheit kann zum Beispiel 0,5 mg bis 1 g enthalten, vorzugsweise 1 mg bis 700 mg, besonders bevorzugt 5 mg bis 100 mg der Verbindung der Formel (I), abhängig von dem zu behandelnden Zustand, dem Weg der Verabreichung und dem Alter, Gewicht und Zustand des Patienten, oder die pharmazeutischen Zusammensetzungen können in Einheitsdosisformen dargeboten werden, die eine vorbestimmte Menge des aktiven Bestandteils pro Einheitsdosis enthalten. Bevorzugte Einheitsdosierungszusammensetzungen sind die, die eine tägliche Dosis oder Subdosis, wie bereits oben vorgetragen, oder eine angemessene Fraktion davon, eines aktiven Bestandteils enthalten. Außerdem können solche pharmazeutischen Zusammensetzungen durch jedes auf dem Gebiet der Pharmazie dem Fachmann bekannte Verfahren hergestellt werden.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen können für die Verabreichung über jeden angemessenen Weg angepaßt sein, zum Beispiel über den oralen (einschließlich bukkalen oder sublingualen), rektalen, nasalen, toxischen (einschließlich bukkalen, sublingualen oder transdermalen), vaginalen oder parenteralen (einschließlich subkutanen, intramuskulären, intravenösen oder intradermalen) Weg. Solche Zusammensetzungen können durch jede dem auf dem Gebiet der Pharmazie vertrauten Fachmann bekannten Verfahren hergestellt werden, zum Beispiel durch das In-Kontakt-Bringen des aktiven Bestandteils mit dem Träger (den Trägern) oder dem Exzipient (den Exzipienten).
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die orale Verabreichung angepaßt sind, können als diskrete Einheiten dargeboten werden, wie zum Beispiel als Kapseln oder Tabletten; Pulver oder Granalien; Lösung oder Suspensionen in wäßrigen oder nicht-wäßrigen Flüssigkeiten; eßbare Schäume oder geschlagene Cremes; oder Öl-in-Wasser-Flüssigemulsionen oder Wasser-in-Öl-Flüssigemulsionen.
  • Zum Beispiel für die orale Verabreichung in der Form einer Tablette oder Kapsel kann die aktive Arzneistoffkomponente mit einem oralen, nicht-toxischen pharmazeutisch annehmbaren inerten Träger kombiniert sein, wie zum Beispiel Ethanol, Glycerin, Wasser und dgl. Pulver werden durch Zerkleinern der Verbindung in eine geeignete feine Größe und Mischen mit einem ähnlich zerkleinerten pharmazeutischen Träger hergestellt, wie zum Beispiel einem eßbaren Kohlenhydrat, wie zum Beispiel Stärke oder Mannit. Aromastoffe, Konservierungsstoffe, Dispergiermittel und Farbstoffe können ebenfalls vorliegen.
  • Kapseln werden durch Herstellen des Pulvergemisches, wie oben beschrieben, und Füllen in geformte Gelatinehülsen hergestellt. Gleitmittel und Schmiermittel, wie zum Beispiel kolloidale Kieselerde, Talkum, Magnesiumstearat, Calciumstearat oder festes Polyethylenglykol, können dem Pulvergemisch vor dem Abfüllen zugesetzt werden. Ein Spreng- oder Solubilisierungsmittel, wie zum Beispiel Agar-Agar, Calciumcarbonat oder Natriumcarbonat, können ebenfalls zugesetzt werden, um die Verfügbarkeit des Medikaments, wenn die Kapsel aufgenommen wird, zu verbessern.
  • Des weiteren, falls erwünscht oder notwendig, können geeignete Bindemittel, Schmiermittel, Sprengmittel und Farbstoffe ebenfalls in das Gemisch eingebracht werden. Geeignete Bindemittel schließen Stärke, Gelatine, natürliche Zucker wie Glucose oder beta-Lactose, Maissüßstoffe, natürliche und synthetische Kautschuks, wie Gummi arabicum, Tragacanthgummi oder Natriumalginat, Carboxymethylcellulose, Polyethylenglykol, Wachse und dgl. ein. Schmiermittel, die in diesen Dosierungsformen verwendet werden, schließen Natriumoleat, Natriumstearat, Magnesiumstearat, Natriumbenzoat, Natriumacetat, Natriumchlorid und dgl. ein. Sprengmittel schließen uneingeschränkt Stärke, Methylcellulose, Agar, Bentonit, Xanthangummi und dgl. ein. Tabletten werden zum Beispiel durch Herstellen eines Pulvergemisches, granulierend oder schlagend, Zugeben eines Schmier- und Sprengmittels und Verpressen in Tabletten formuliert. Ein Pulvergemisch wird durch Mischen der Verbindung, geeigneterweise zerkleinert, mit einem Verdünnungsmittel oder einer Basis, wie oben beschrieben, und gegebenenfalls mit einem Bindemittel, wie zum Beispiel Carboxymethylcellulose, einem Alginat, Gelatine oder Polyvinylpyrrolidon, einem Auflösungsverzögerer, wie zum Beispiel Paraffin, einem Abbaubeschleuniger, wie zum Beispiel ein quaternäres Salz, und/oder einem Absorptionsmittel, wie zum Beispiel Bentonit, Kaolin oder Dicalciumphosphat, hergestellt. Das Pulvergemisch kann durch Befeuchten mit einem Bindemittel, wie zum Beispiel Sirup, Stärkepaste, Akazienschleim oder Lösungen von Cellulose-basierenden oder polymeren Materialien und Treiben durch ein Drahtsieb granuliert werden. Als eine Alternative zur Granulierung kann das Pulvergemisch durch die Tablettiermaschine laufen gelassen werden, und das Ergebnis sind unvollkommen geformte Rohlinge, die in Granalien zerbrochen sind. Die Granalien können durch die Zugabe von Stearinsäure, eines Stearinsalzes, Talkum oder Mineralöls eingeschmiert sein, um zu verhindern, daß sie an den Tabletten-formenden Prägestempel haften bleiben. Das eingeschmierte Gemisch wird dann in Tabletten verpreßt. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können ebenfalls mit einem freifließenden inerten Träger kombiniert sein und direkt ohne das Durchführen der Granulierungs- oder Schlagungsschritte in Tabletten verpreßt werden. Eine klare oder undurchsichtige Schutzbeschichtung kann bereitgestellt werden, die aus einer versiegelten Schicht von Schellack, einer Beschichtung aus Zucker oder polymeren Materials und einer Polierbeschichtung aus Wachs besteht. Farbstoffe können zu diesen Beschichtungen hinzugegeben werden, um die verschiedenen Einheitsdosierungen zu unterscheiden.
  • Orale Flüssigkeiten, wie zum Beispiel Lösungen, Sirupe und Elixiere, können in einer Dosierungseinheitsform hergestellt werden, so daß eine gegebene Menge eine vorbestimmte Menge der Verbindung enthält. Sirupe können durch Auflösen der Verbindung in eine geeignete mit Geschmack versehene Lösung hergestellt werden, während Elixiere durch die Verwendung eines nicht-toxischen akoholischen Vehikels hergestellt werden. Suspensionen können durch Dispergieren der Verbindung in einem nicht-toxischen Vehikel formuliert sein. Solubilisierungsmittel und Emulgatoren, wie zum Beispiel ethoxylierte Isostearylalkohole und Polyoxyethylensorbitester, Konservierungsmittel, Geschmackzusätze, wie zum Beispiel Pfefferminzöl, und natürliche Süßstoffe oder Saccharin oder andere künstliche Süßstoffe und dgl. können ebenfalls zugesetzt werden.
  • Wo angebracht, können die Dosierungseinheitsformulierungen für die orale Verabreichung mikroeingekapselt sein. Die Formulierung kann ebenfalls hergerichtet sein, um die Freisetzung zu verlängern oder fortzusetzen, wie zum Beispiel durch Beschichten oder Einbetten von partikulärem Material in Polymeren, Wachs oder dgl.
  • Die Verbindungen der Formel (I) und Salze, Solvate und physiologisch funktionelle Derivate davon können ebenfalls in der Form von Liposom-Übertragungssystemen, wie zum Beispiel kleine unilammelare Vesikel, große unilammelare Vesikel und multilammelare Vesikel, verabreicht werden. Liposome können aus einer Vielfalt von Phospholipiden gebildet werden, wie zum Beispiel Cholesterin, Stearylamin oder Phosphatidylcholinen.
  • Die Verbindungen der Formel (I) und Salze und Solvate davon können ebenfalls durch Verwendung von monoklonalen Antikörpern als individuelle Träger zugeführt werden, an die die Verbindungsmoleküle gekoppelt sind. Die Verbindungen können ebenfalls mit löslichen Polymeren als zieleingestellte Arzneimittelträger verknüpft sein. Solche Polymere können Polyvinylpyrrolidon, Pyran-Copolymer, Polyhydroxypropylmethacrylamidphenol, Polyhydroxyethylaspartatamidphenol oder Polyethylenoxidpolylysin, das mit Palmitoyl-Resten substituiert ist, einschließen. Des weiteren können die Verbindungen an eine Klasse von bioabbaubaren Polymeren gekoppelt sein, die nützlich im Erreichen des kontrollierten Freisetzens eines Arzneistoffs sind, wie zum Beispiel Polymilchsäure, Polepsilon-caprolacton, Polyhydroxy buttersäure, Polyorthoester, Polyacetale, Polydihydropyrane, Polycyanoacrylate und vernetzte oder amphipatische Blockcopolymere von Hydrogelen.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die transdermale Verabreichung angepaßt sind, können als diskrete Pflaster dargeboten werden, die beabsichtigt sind, den unmittelbaren Kontakt mit der Epidermis des Empfängers für eine verlängerte Zeit beizubehalten. Zum Beispiel kann der aktive Bestandteil von dem Pflaster durch Iontophorese, wie allgemein beschrieben in Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986), zugeführt werden.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die topische Verabreichung angepaßt sind, können als Salben, Cremen, Suspensionen, Lotionen, Puder, Lösungen, Pasten, Gele, Sprays, Aerosole oder öle formuliert sein.
  • Zur Behandlung des Auges oder anderer äußerer Gewebe, zum Beispiel Mund und Haut, werden die Zusammensetzungen vorzugsweise als eine topische Salbe oder Creme aufgetragen. Wenn in einer Salbe formuliert, kann der aktive Bestandteil mit sowohl einer Paraffin-basierenden oder einer wassermischbaren Salbenbasis eingesetzt werden. Alternativ kann der aktive Bestandteil in einer Creme mit einer Öl-in-Wasser-Cremebasis oder einer Wasser-in-Öl-Basis formuliert sein.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die topische Verabreichung über das Auge angepaßt sind, schließen Augentropfen ein, worin der aktive Bestandteil in einem geeigneten Träger, speziell einem wäßrigen Lösungsmittel, aufgelöst oder suspendiert wird.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die topische Verabreichung über den Mund angepaßt sind, schließen Lutschtabletten, Pastillen und Mundwasser ein.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die rektale Verabreichung angepaßt sind, können als Suppositorien oder als Klistieren dargeboten werden.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die nasale Verabreichung angepaßt sind, worin der Träger ein Feststoff ist, schließen ein grobkörniges Pulver ein, das eine Teilchengröße zum Beispiel im Bereich von 20 bis 500 μm hat, das auf ähnliche Weise wie Schnupftabak eingenommen wird, verabreicht wird, d. h. durch rasches Inhalieren über den Nasengang aus einem Pulverbehälter, der nahe an die Nase gehalten wird. Geeignete Formulierungen zur Verabreichung als ein Nasenspray oder als Nasentropfen, worin der Träger ein Feststoff ist, schließen wäßrige oder Öl-Lösungen des aktiven Bestandteils ein.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die Verabreichung durch Inhalation angepaßt sind, schließen feine Partikelstäube oder -nebel ein, die durch verschiedene Arten an dosierten, Dosis-druckverdichteten Aerosolen, Nebulisatoren oder Insufflatoren erzeugt werden.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für vaginale Verabreichung angepaßt sind, können als Pessare, Tampons, Cremen, Gele, Pasten, Schäume oder Spray-Formulierungen vorliegen.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die parenterale Verabreichung angepaßt sind, schließen wäßrige und nicht-wäßrige sterile Injektionslösungen, die Antioxidantien, Puffer, Bakteriostatika und gelöste Substanzen, die die Zusammensetzung isotonisch mit dem Blut des beabsichtigten Empfängers machen, enthalten können; und wäßrige und nicht-wäßrige sterile Suspensionen ein, die Suspendiermittel und Verdickungsmittel einschließen können. Die Zusammensetzungen können in Einheitsdosis- oder Mehrfachdosisbehältern vorliegen, zum Beispiel in versiegelten Ampullen und Fläschchen, und können in einem gefriergetrockneten (lyophilsierten) Zustand gelagert werden, was nur die Zugabe eines sterilen Flüssigkeitsträgers unmittelbar vor der Verwendung erfordert, wie zum Beispiel Wasser für Injektionen. Unvorbereitete Injektionslösungen und -suspensionen können aus sterilen Pulvern, Granalien und Tabletten zubereitet werden.
  • Es sollte selbstverständlich sein, daß zusätzlich zu den besonderen oben erwähnten Bestandteilen die Formulierungen andere Mittel, die üblich auf dem Gebiet mit Hinsicht auf die Art der infragekommenden Formulierung sind, einschließen können, zum Beispiel solche geeignet für die orale Verabreichung können Aromastoffe einschließen.
  • Eine therapeutisch effektive Menge einer Verbindung der vorliegenden Erfindung wird von einer Anzahl von Faktoren abhängen, einschließlich zum Beispiel dem Alter und dem Gewicht des Tiers, dem genauen Zustand, der die Behandlung erfordert, und seiner Schwere, der Art der Formulierung und dem Weg der Verabreichung, und unterliegt letztendlich der Ermessensfreiheit des behandelnden Arztes oder Veterinärs. Jedoch wird eine effektive Menge einer Verbindung der Formel (I) für die Behandlung von neoplastischem Wachstum, zum Beispiel Darm- oder Brustkarzinoma, im allgemeinen im Bereich von 0,1 bis 100 mg/kg Körpergewicht des Empfängers (Säugetier) pro Tag sein, und gewöhnlicher im Bereich von 1 bis 10 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Daher würde die eigentliche Menge für ein erwachsenes Säugetier von 70 kg gewöhnlich von 70 bis 700 mg pro Tag sein, und diese Menge kann in einer einzelnen Dosis pro Tag oder für gewöhnlich in einer Anzahl (wie zwei, drei, vier, fünf oder sechs) an Sub-Dosen pro Tag gegeben werden, so daß die gesamte Tagesdosis die gleiche ist. Eine effektive Menge eines Salzes oder Solvats davon kann als ein Anteil der effektiven Menge der Verbindung mit der Formel (I) alleine bestimmt werden. Es ist ersichtlich, daß gleiche Dosierungen angemessen für die Behandlung der anderen Zustände, auf die oben Bezug genommen wurde, sein würden.
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung und ihre Salze und Solvate davon können alleine oder in Kombination mit anderen Therapeutika zur Behandlung der oben genannten Zustände eingesetzt werden. Insbesondere ist in der Antikrebstherapie eine Kombination mit anderen Chemotherapeutika, hormonellen Mitteln oder Antikörpermitteln vorgesehen, sowie eine Kombination mit der chirurgischen Therapie und Radiotherapie. Erfindungsgemäße Kombinationstherapien umfassen daher die Verabreichung mindestens einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvats davon und die Verwendung mindestens einer anderen Krebsbehandlungsmethode. Vorzugsweise umfassen die erfindungsgemäßen Kombinationstherapien die Verabreichung mindestens einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvats davon und mindestens eines anderen pharmazeutisch wirksamen Mittels, vorzugsweise eines antineoplastischen Mittels. Die Verbindung(en) der Formel (I) und das/die andere(n) pharmazeutisch wirksame(n) Mittel können zusammen oder getrennt verabreicht werden, und wenn getrennt verabreicht, dann kann dies simultan oder in einer nacheinanderfolgenden Reihe erfolgen. Die Mengen der Verbindung(en) der Formel (I) und des/der anderen pharmazeutisch wirksame(n) Mittel(n) und die relative zeitliche Koordinierung der Verabreichung wird ausgewählt, um den gewünschten kombinierten therapeutischen Effekt zu erhalten.
  • Die Verbindungen der Formel (I) oder Salze oder Solvate davon und mindestens eine zusätzliche Krebsbehandlungstherapie können in Kombination, gleichzeitig oder sequentiell in jeder therapeutisch angemessenen Kombination mit solch anderen Antikrebstherapien eingesetzt werden. In einer Ausführungsform ist die andere Antikrebstherapie mindestens eine zusätzliche chemotherapeutische Therapie, die die Verabreichung mindestens eines antineoplastischen Mittels einschließt. Die Verabreichung in Kombination der Verbindung der Formel (I) oder Salzen oder Solvaten davon mit anderen antineoplastischen Mitteln kann in Kombination gemäß der Erfindung durch gleichzeitige Verabreichung in (1) eine einheitlichen pharmazeutischen Zusammensetzung, die beide Verbindungen einschließt, oder (2) getrennte pharmazeutische Zusammensetzungen, die jeweils eine der Verbindungen einschließt, sein. Alternativ kann die Kombination getrennt in einer sequentiellen Art und Weise verabreicht werden, worin ein antineoplastisches Mittel zuerst verabreicht wird und das andere als zweites oder umgekehrt. Solch eine sequentielle Verabreichung kann zeitlich nah oder zeitlich entfernt vorliegen.
  • Antineoplastische Mittel können antineoplastische Effekte in einer Zellzyklus-spezifischen Art induzieren, d. h. sie sind phasenspezifisch und wirken in einer spezifischen Phase des Zellzykluses, oder binden DNA und wirken in einer Nicht-Zellzkylus-spezifischen Art, d. h. sie sind Nicht-Zellzyklus-spezifisch und agieren durch andere Mechanismen.
  • Antineoplastische Mittel, die nützlich in Kombinationen mit den Verbindungen der Formel (I) und Salzen oder Solvaten davon sind, schließen die folgenden ein:
    • (1) Zellzyklus-spezifische antineoplastische Mittel, die uneingeschränkt Diterpenoide, wie zum Beispiel Paclitaxel und sein Anologon Docetaxel; Vincaalkaloide, wie zum Beispiel Vinblastin, Vincristin, Vindesin und Vinorelbin; Epipodophyllotoxine, wie zum Beispiel Etoposid und Teniposid; Fluorpyrimidine wie 5-Fluorouracil und Fluorodesoxyuridin; Antimetabolite, wie zum Beispiel Allopurinol, Fludurabin, Methotrexat, Cladrabin, Cytarabin, Mercaptopurin und Thioguanin; und Camptothecine, wie zum Beispiel 9-Aminocamptothecin, Irinotecan, Topotecan, CPT-11 und verschiedene optische Formen von 7-(4-Methylpiperazino-methylen)-10,11-ethylendioxy-20-camptothecin einschließen;
    • (2) cytotoxische chemotherapeutische Mittel, die uneingeschränkt alkylierende Mittel, wie zum Beispiel Melphalan, Chlorambucil, Cyclophosphamid, Mechlorethamin, Hexymethylmelamin, Busulfan, Carmustin, Lomustin und Dacarbazin; Antitumor-Antibiotika, wie zum Beispiel Doxorubicin, Daunomycin, Epirubicin, Idarubicin, Mitomycin-C, Dacttinomycin und Methramycin; und Platin-Koordinationskomplexe, wie zum Beispiel Cisplatin, Carboplatin und Oxaliplatin einschließen; und
    • (3) andere chemotherapeutische Mittel, die uneingeschränkt Anti-Östrogene, wie zum Beispiel Tamoxifen, Toremifen, Raloxifen, Droloxifen und Iodoxyfen; Progesterone, wie zum Beispiel Megestrolacetat; Aromatase-Inhibitoren, wie zum Beispiel Anastrozol, Letrazol, Vorazol und Exemestan; Antiandrogene, wie zum Beispiel Flutamid, Nilutamid, Bicalutamid und Cyproteronacetat; LHRH-Agonisten und -Antagonisten, wie zum Beispiel Goserelinacetat und Luprolid, Testosteron-5α-dihydroreduktase-Inhibitoren, wie zum Beispiel Finasterid; Metalloprotease-Inhibitoren, wie zum Beispiel Marimastat; Antiprogestogene; Inhibitoren der Urokinaseplasminogen-Aktivatorrezeptorfunktion; Inhibitoren der Wachstumsfaktorfunktion, wie zum Beispiel Inhibitoren der Funktion der Hepatocyten-Wachstumsfaktors; für erb-B2, erb-B4, epidermalen Wachstumsfaktorrezeptor (EGFR), Blutplättchen-abgeleiteten Wachstumsfaktorrezeptor (PDGFR), vaskulären endothelialen Wachstumsfaktorrezeptor (VEGFR und EpHB4, TIE-2 (verschieden von solchen VEGFR-, EpHB2- und TIE-2-Inhibitoren, die in der vorliegenden Erfindung beschrieben sind)); und andere Tyrosinkinase-Inhibitoren einschließen, wie zum Beispiel Inhibitoren des CDK1 und CDK4-Inhibitoren.
  • Von den Verbindungen der Formel (I) und deren Salze oder Solvate wird angenommen, daß sie eine Antikrebswirkung haben, als ein Ergebnis der Inhibierung der Proteinkinase TIE-2, EpHB4 und/oder VEGFR-2 und ihres Effekts auf ausgewählte Zelllinien, deren Wachstum von TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Proteinkinaseaktivität abhängig ist.
  • Die vorliegende Erfindung stellt daher Verbindungen der Formel (I) und pharmazeutisch annehmbare Salze oder Solvate davon zur Verwendung in der medizinischen Therapie bereit, und im speziellen in der Behandlung von Störungen, die durch mindestens eines aus unangemessener TIE-2-, EpHB4- und VEGFR-2-Aktivität vermittelt werden.
  • Die unangemessene TIE-2-, EphB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität, auf die hier Bezug genommen wird, ist jede TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität, die von der normalen TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität, die in einem bestimmten Säugetierprobanden erwartet wird, abweicht. Eine unangemessene TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität kann die Form von zum Beispiel einer abnormalen Aktivitätszunahme oder einer Anomalie in der Zeitsteuerung und/oder Kontrolle der TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität annehmen. Eine solche unangemessene Aktivität kann dann von zum Beispiel einer Überexpression oder Mutation der Proteinkinase resultieren, die zu einer unangemessenen oder unkontrollierten Aktivierung führt. Des weiteren ist es selbstverständlich, daß eine unerwünschte TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität in einer abnormalen Quelle liegen kann, wie zum Beispiel einem bösartigen Tumor. Das heißt, das Level der TIE-2-, EpHB4-und/oder VEGFR-2-Aktivität muß nicht abnormal sein, um als unangemessen erachtet zu werden, vielmehr stammt die Aktivität von einer abnormalen Quelle. In ähnlicher Weise bezieht sich die unangemessene Angiogenese auf jede angiogene Aktivität, die von der normalen angiogenen Aktivität, die in einem bestimmten Säugetierprobanden erwartet wird, abweicht. Die unangemessene Angiogenese kann die Form von zum Beispiel einer abnormalen Zunahme in der Aktivität oder Anomalie in der Zeitsteuerung und/oder Kontrolle der angiogenen Aktivität annehmen. Eine solche unangemessene Aktivität kann dann zum Beispiel aus einer Überexpression oder Mutation einer Proteinkinase resultieren, die zu einer unangemessenen oder unkontrollierten Aktivierung führt. Des weiteren ist es selbstverständlich, daß eine unerwünschte angiogene Aktivität in einer abnormalen Quelle liegen kann, wie zum einem bösartigen Tumor. Das heißt, das Level der angiogenen Aktivität muß nicht abnormal sein, um als unangemessen angesehen zu werden, vielmehr stammt die Aktivität aus einer abnormalen Quelle.
  • Die vorliegende Erfindung ist auf die Verbindungen der Erfindung zur Verwendung in Verfahren zur Regulierung, Modulierung oder Inhibierung von TIE-2, EpHB4 und/oder VEGFR-2 zur Prävention und/oder Behandlung von Störungen, die einer unregulierten TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität zugeordnet sind, gerichtet. Insbesondere können Verbindungen der vorliegenden Erfindung ebenfalls in der Behandlung von bestimmten Formen von Krebs verwendet werden. Des weiteren können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden, um zusätzliche oder synergetische Effekte mit bestimmten existierenden Krebs-Chemotherapien bereitzustellen, und/oder können verwendet werden, um die Effektivität bestimmter existierender Krebs-Chemotherapien und Bestrahlung wieder herzustellen.
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind ebenfalls nützlich in der Behandlung einer oder mehrerer Krankheiten, die Säugetiere plagen, die durch zelluläre Proliferation im Bereich der Störungen, die mit Neovaskularisierung und/oder vaskulärer Permeabilität assoziiert sind, gekennzeichnet sind, einschließlich Blutgefäß-proliverative Störungen, einschließlich Arthritis und Restenose; fibrotische Störungen, einschließlich hepatische Zirrhose und Atherosklerose; mesangio-proliverative Störungen, einschließlich Glomerulonephritis, diabetische Nephropathie, bösartige Nephrosklerose, thrombotische Mikroangiopathie-Syndrome, Organtransplantatabstoßung und Glomerulopathien; und Stoffwechselstörungen, einschließlich Psoriasis, Diabetes mellitus, chronische Wundheilung, Entzündung und neurodegenerative Krankheiten.
  • Ein weiterer Aspekt ist ein Verfahren zur Behandlung eines Säugetiers, das unter einer Störung leidet, die durch mindestens eins aus unangemessener TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität vermittelt wird, einschließlich empfängliche bösartige Tumoren, das das Verabreichen einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, Solvats oder eines physiologisch funktionellen Derivats davon an das Subjekt einschließt. In einer bevorzugten Ausführungsform ist die Störung Krebs (nicht Teil der Erfindung).
  • Ein weiterer Aspekt ist ein Verfahren zur Behandlung eines Säugetiers, das unter Krebs leidet, wobei das Verfahren das Verabreichen einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvats davon, oder eines physiologisch annehmbaren Derivats davon an das Subjekt einschließt (nicht Teil der Erfindung).
  • Ein weiterer Aspekt ist die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvats davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Störung, die durch mindestens eins aus unangemessener TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität gekennzeichnet ist. In einer bevorzugten Ausführungsform ist die Störung Krebs.
  • Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung stellt die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eine pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Solvats davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krebs und bösartigen Tumoren bereit.
  • Das Säugetier, das der Behandlung mit einer Verbindung der vorliegenden Erfindung bedarf, ist typischerweise ein Mensch.
  • In einer anderen Ausführungsform können therapeutisch effektive Mengen der Verbindungen der Formel (I) oder Salze oder Solvate davon und Mittel, die eine Wachstumsfaktorrezeptorfunktion inhibieren, in Kombination an ein Säugetier zur Behandlung einer Störung verabreicht werden, die durch mindestens eins aus unangemessener TIE-2-, EpHB4- und/oder VEGFR-2-Aktivität vermittelt wird, zum Beispiel in der Behandlung von Krebs. Solche Wachstumsfaktorrezeptoren schließen zum Beispiel EGFR, PDGFR, erB2 und erbB4 ein. Wachstumsfaktorrezeptoren und Mittel, die eine Wachstumsfaktorrezeptorfunktion inhibieren, sind zum Beispiel in Kath, C. John, Exp. Opin. Ther. Patents (2000), 10(6): 803–818 und in Shawver et al., DDT, Bd. 2, Nr. 2, Februar 1997, beschrieben.
  • Die Verbindungen der Formel (I) oder Salze oder Solvate davon und das Mittel zur Inhibierung einer Wachstumsfaktorrezeptorfunktion können in Kombination gleichzeitig oder sequentiell in jeder therapeutisch angemessenen Kombination eingesetzt werden. Die Kombination kann in Kombination gemäß der Erfindung durch gleichzeitiges Verabreichen in (1) einer einheitlichen pharmazeutischen Zusammensetzung, die beide Verbindungen einschließt, oder (2) getrennten pharmazeutischen Zusammensetzungen, die jeweils eine der Verbindungen einschließt, eingesetzt werden. Alternativ kann die Kombination getrennt in einer sequentiellen Art und Weise verabreicht werden, wobei eine Verbindung zuerst verabreicht wird und die andere als zweite oder umgekehrt. Solch eine sequentielle Verabreichung kann zeitlich nahe oder zeitlich entfernt sein.
  • In einem anderen Aspekt wird ein Verfahren zur Behandlung einer Störung in einem Säugetier bereitgestellt, die durch unangemessene Angiogenese vermittelt wird, einschließlich: Verabreichen einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes, Solvats oder physiologisch funktionellen Derivats davon an das Säugetier. In einer Ausführungsform besteht die unangemessene angiogene Aktivität aufgrund mindestens eins aus unangemessener VEGFR-2-, EpHB4- oder TIE-2-Aktivität. In einer anderen Ausführungsform besteht die unangemessene Angiogenese aufgrund einer unangemessenen VEGFR-2- und TIE-2-Aktivität. In einer weiteren Ausführungsform schließt das Verfahren ferner das Verabreichen eines VEGFR-2-Inhibitors zusammen mit den Verbindungen der Formel (I) oder Salzen, Solvaten oder physiologisch funktionellen Derivaten davon ein. Vorzugsweise ist die Störung Krebs (nicht bildender Teil der Erfindung).
  • In einem anderen Aspekt wird die Verwendung einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes oder Solvats davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Behandlung einer Störung in einem Säugetier bereitgestellt, die durch unangemessene Angiogenese gekennzeichnet ist. In einer Ausführungsform besteht die unangemessene angiogene Aktivität aufgrund mindestens eins aus unangemessener VEGFR-2-, EpHB4-, VEGFR3- oder TIE-2-Aktivität. In einer anderen Ausführungsform besteht die unangemessene Angiogenese aufgrund einer unangemessenen VEGFR-2-, EpHB4- und TIE-2-Aktivität. In einer weiteren Ausführungsform schließt die Verwendung ferner die Verwendung eines VEGFR-2-Inhibitors zur Herstellung des Medikaments ein.
  • Die Kombination einer Verbindung der Formel (I) oder eines Salzes oder Solvats davon, mit einem VEGFR-2-Inhibitor kann in Kombination gemäß der Erfindung durch gleichzeitiges Verabreichen (1) einer einheitlichen pharmazeutischen Zusammensetzung, die beide Verbindungen einschließt, oder (2) getrennten pharmazeutischen Zusammensetzung, die jeweils eine der Verbindungen einschließt, eingesetzt werden. Alternativ kann die Kombination getrennt in einer sequentiellen Art und Weise verabreicht werden, wobei eine Verbindung zuerst verabreicht wird und die andere als zweite oder umgekehrt. Solch eine sequentielle Verabreichung kann zeitlich nah oder zeitlich entfernt sein.
  • Die Verbindungen dieser Erfindung können durch eine Vielzahl von Verfahren hergestellt werden, einschließlich Standardchemie. Jede zuvor definierte Variante, soweit nicht anderweitig angegeben, behält weiterhin die zuvor definierte Bedeutung. Illustrative allgemeine Syntheseverfahren werden nachfolgend dargelegt, und spezifische Verbindungen der Erfindung werden dann in den Arbeitsbeispielen hergestellt.
  • Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können durch Verfahren, die auf dem Gebiet der organischen Synthese bekannt sind, wie im Teil durch die nachfolgenden Syntheseschemata dargelegt, hergestellt werden. In all den nachfolgend beschriebenen Schemata ist es selbstverständlich, daß Schutzgruppen für sensitive oder reaktive Gruppen da eingesetzt werden, wo es gemäß den allgemeinen Prinzipien der Chemie notwendig ist. Schutzgruppen werden gemäß den Standardverfahren der organischen Synthese manipuliert (T. W. Green und P. G. M. Wuts (1991), Protecting Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons). Diese Gruppen werden in einem passenden Arbeitsgang in der Verbindungssynthese unter Verwendung von Verfahren, die den Fachleuten leicht ersichtlich werden, entfernt. Die Auswahl der Verfahren sowie die Reaktionsbedingungen und Reihenfolge ihrer Ausführung wird übereinstimmend mit der Herstellung der Verbindung der Formel (I) sein. Die Fachleute werden erkennen, wenn ein Stereozentrum in den Verbindungen der Formel (I) existiert. Entsprechend schließt die vorliegende Erfindung beide mögliche Stereoisomere ein, und schließt nicht nur racemische Verbindungen sondern auch die individuellen Enantiomere ein. Wenn eine Verbindung als ein einzelnes Enantiomer erwünscht ist, kann es durch stereospezifische Synthese und durch Trennung des Endprodukts oder jeder konventionellen Zwischenstufe erhalten werden. Trennen des Endprodukts, einer Zwischenstufe oder eines Ausgangsmaterials kann durch jedes geeignete fachbekannte Verfahren besorgt werden. Stereochemistry of Organic Compounds von E. L. Eliel, S. H. Wilen und L. N. Mander (Wiley-Interscience, 1994).
  • Die Verbindungen der Formel (I) können gemäß den synthetischen Sequenzen, die nachfolgend allgemein und durch illustrative Beispiele dargestellt werden, hergestellt werden und ferner durch spezifische Beispiele veranschaulicht werden.
  • Figure 00250001
  • Bestimmte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden nun durch Beispiele alleine veranschaulicht. Die physikalischen Daten, die für exemplarische Verbindungen angegeben sind, sind konsistent mit den zugeordneten Strukturen dieser Verbindungen.
  • Beispiele
  • Wie hier verwendet, sind die in diesem Verfahren, Schemata und Beispielen verwendeten Symbole und Konventionen konsistent mit denen, die in der wissenschaftlichen Gegenwartsliteratur, zum Beispiel dem Journal of the American Chemical Society oder dem Journal of Biological Chemistry verwendet werden. Standard-Ein-Buchstagen- oder Drei-Buchstaben-Abkürzungen werden im allgemeinen verwendet, um Aminosäurereste, soweit nicht anders vermerkt, zu bezeichnen, von denen angenommen wird, daß Sie in der L-Konfiguration sind. Soweit nicht anders angegeben, wurden alle Ausgangsmaterialien von kommerziellen Lieferanten erhalten, und ohne weitere Aufreinigung verwendet. Speziell die folgenden Abkürzungen können in den Beispielen für die gesamte Beschreibung verwendet werden:
    • g
    (Gramm)
    mg
    (Milligramm)
    l
    (Liter)
    ml
    (Milliliter)
    μl
    (Mikroliter)
    psi
    (Pfund pro Quadratinch)
    M
    (Molar)
    mM
    (Millimolar)
    i. v.
    (intravenös)
    Hz
    (Hertz)
    MHz
    (Megahertz)
    mol
    (Mol)
    mmol
    (Millimol)
    Rt
    (Raumtemperatur)
    min
    (Minuten)
    h
    (Stunden)
    Smp.
    (Schmelzpunkt)
    TLC
    (Dünnschichtchromatographie)
    Tr
    (Retentionszeit)
    RP
    (reverse Phase)
    MeOH
    (Methanol)
    i-PrOH
    (Isopropanol)
    TEA
    (Triethylamin)
    TFA
    (Trifluoressigsäure)
    TFAA
    (Trifluoressigsäureanhydrid)
    THF
    (Tetrahydrofuran)
    DMSO
    (Dimethylsulfoxid)
    AcOEt
    (Ethylacetat)
    DME
    (1,2-Dimethoxyethan)
    DCM
    (Dichlormethan)
    DCE
    (Dichlorethan)
    DMF
    (N,N-Dimethylformamid)
    DMPU
    (N,N'-Dimethylpropylenharnstoff)
    CDI
    (1,1-Carbonyldiimidazol)
    IBCF
    (Isobutylchlorformiat)
    HOAc
    (Essigsäure)
    HOSu
    (N-Hydroxysuccinimid)
    HOBt
    (1-Hydroxybenzotriazol)
    mCPBA
    (meta-Chlorperbenzoesäure)
    EDC
    (Ethylcarbodiimidhydrochlorid)
    BOC
    (tert-Butyloxycarbonyl)
    FMOC
    (9-Fluorenylmethoxycarbonyl)
    DCC
    (Dicyclohexylcarbodiimid)
    CBZ
    (Benzyloxycarbonyl)
    AC
    (Acetyl)
    atm
    (Atmosphäre)
    TMSE
    (2-(Trimethylsilyl)ethyl)
    TMS
    (Trimethylsilyl)
    TIPS
    (Triisopropylsilyl)
    TBS
    (t-Butyldimethylsilyl)
    DMAP
    (4-Dimethylaminopyridin)
    BSA
    (Rinderserumalbumin)
    ATP
    (Adenosintriphosphat)
    HRP
    (Meerrettichperoxidase)
    DMEM
    (Dulbecco's modifiziertes Eagle-Medium)
    HPLC
    (Hochleistungsflüssigkeitschromatographie)
    BOP
    (Bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphinchlorid)
    TRAF
    (Tetra-n-butylammoniumfluorid)
    HBTU
    (O-Benzotriazol-1-yl-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorphosphat)
    HEPES
    (4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinethansulfonsäure)
    DPPA
    (Diphenylphosphorylazid)
    fHNO3
    (geräuchertes HNO3); und
    EDTA
    (Ethylendiamintetraessigsäure).
  • Alle Verweise auf Ether beziehen sich auf Diethylether; Salzlösung bezieht sich auf eine gesättigte wäßrige Lösung aus NaCl. Soweit nicht anders angegeben, werden alle Temperaturen in °C (Grad Celsius) ausgedrückt. Alle Reaktionen werden soweit nicht anders angegeben unter einer inerten Atmosphäre bei Raumtemperatur durchgeführt.
  • 1H-NMR-Spektren wurden auf einem Varian VXR-300-, einem Varian Unity-300-, einem Varian Unity-400-Instrument, einem Brucker AVANCE-400 oder einem General Electric QE-300 aufgenommen. Chemische Verschiebungen werden in Teile pro Million (ppm, δ-Einheiten) ausgedrückt. Kupplungskonstanten sind in Hertz(Hz)-Einheiten. "Splitting"-Muster beschreiben die anscheinlichen Multiplizitäten und werden als s (Singulett), d (Dublett), t (Triplett), q (Quartett), qunit (Quintett), m (Multiplett) und br (breit) bezeichnet.
  • HPLC wurde auf einem HPLC- oder Shimazu-HPLC-System mit den folgenden Bedingungen aufgezeichnet. Säule: 50 × 4,6 mm (id) rostfreier Stahl, gepackt mit 5 μm Phenomenex Luna C-18; Flußrate: 2,0 ml/min; mobile Phase: A-Phase = 50 mM Ammoniumacetat (pH 7,4), B-Phase = Acetonitril, 0–0,5 min (A: 100%, B: 0%), 0,5–3,0 min (A: 100–0%, B: 0–100%), 3,0–3,5 min (A: 0%, B: 100%), 3,5–3,7 min (A: 0–100%, B: 100–0%), 3,7–4,5 min (A: 100%, B: 0%); Detektion: UV 254 nm; Injektionsvolumen: 3 μl.
  • Niedrig-Auflösungsmassenspektren (MS) wurden auf einem JOEL JMS-AX505HA-, JOEL SC-102- oder einem SCIEX-APliii-Spektrometer aufgezeichnet; LC-MS wurden auf einem Micromass 2MD und Waters 2690 aufgezeichnet; Hochauflösungs-MS wurde unter Verwendung eines JOEL SX-102A-Spektrometers erhalten. Alle Massenspektren wurden unter Elektrosprayionisation (ESI), chemischer Ionisation (CI), Electron-Impact (EI) oder durch "fast atom bombadment"(FAB)-Verfahren aufgezeichnet. Infrarot(IR)-Spektren wurden auf einem Nicolet 510 FT-IR-Spektrometer unter Verwendung einer 1 mm-NaCl-Zelle erhalten. Die meisten der Reaktionen wurden durch Dünnschichtchromatographie auf 0,25 mm E. Merck Kieselgelplatten (60F-254) überwacht, und mit UV-Licht, 5% ethanolische Phosphomolybdänsäure oder p-Anisaldehyd-Lösung sichtbar gemacht. "Flash"-Säulenchromatographie wurde auf Kieselgel (230–400 mesh, Merck) durchgeführt.
  • Beispiel 1
  • 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff
    Figure 00280001
  • a. 5-Bromisochinolin
  • Zu einer Suspension aus AlCl3 (156,7 g, 1,18 mol) CH2Cl2 (500 ml) wurde eine Lösung aus Isochinolin (605 mmol, 71 ml) in CH2Cl2 (100 ml) bei einer Rate zugetropft, so daß die Reaktion behutsam refluxiert wurde. Nach Zugabe wurde CH2Cl2 durch Destillation entfernt. Der schwarze Rückstand wurde bei 120°C geschmolzen, und die Temperatur dann auf 100°C eingestellt. Zu dem Gemisch wurde Br2 (31 ml, 605 mmol) über einen Zeitraum von 2 h bei 100°C zugetropft und für 30 Minuten bei der gleichen Temperatur gerührt, dann über Nacht bei 75°C gerührt. Die Reaktion wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, dann vorsichtig in Eiswasser gegossen. Das wäßrige Gemisch wurde mit aq. NaOH basifiziert und mit Ether extrahiert. Die organischen Schichten wurden über Na2SO4 getrocknet, dann eingedampft. Sequenzaufreinigung über zweimalige SiO2-Säulenchromatographie und Kristallisation (aus Hexan), ergab die Titelverbindung (34,5 g, 28%).
  • b. 5-(3-Nitrophenyl)isochinolin
  • Ein Gemisch aus 5-Bromisochinolin (4,16 g, 20 mmol), Pd(PPh3)4 (290 mg, 0,25 mmol) und 3-Nitrophenylboronsäure (3,67 g, 22 mmol) wurden mit N2-Gas gespült und dann Dioxan (200 ml), Ethanol (40 ml) und 2 M aq K2CO3 hinzugegeben. Das Gemisch wurde über Nacht bei 100°C gerührt. Nach Abkühlen wurde das Gemisch eingedampft, um Dioxan zu entfernen, und wurde dann mit AcOEt extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, dann über Na2SO4 getrocknet. Nach Eindampfen wurde der Rückstand durch SiO2-Säulenchromatographie aufgereinigt, um die Titelverbindung (4,65 g, 93%) zu ergeben.
  • c. 5-(3-Aminophenyl)isochinolin
  • Zu einer Lösung aus 5-(3-Nitrophenyl)isochinolin (751 mg, 3 mmol) wurde Zn-Pulver (ca. 1 g) hinzugegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Unlösliche Materialien wurden durch Filtration entfernt, dann eingedampft, um das Lösungsmittel zu entfernen. Der Rückstand wurde mit AcOEt extrahiert. Die organische Schicht wurde mit aq. NaHCO3 und Salzlösung gewaschen, dann über Na2SO4 getrocknet. Nach Eindampfen wurde der Rückstand durch SiO2-Säulenchromatographie und durch SCX-SPE aufgereinigt, um die Titelverbindung (521 mg, 79%) zu ergeben.
  • d. 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff
  • Zu einer Lösung aus 5-(3-Aminophenyl)isochinolin (30 mg, 0,136 mmol) in THF (1,5 ml) wurde 2-Fluor-5-(trifluormethyl)phenylisocyanat (24 μl, 0,16 mmol) zugegeben, dann für 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde durch SCX-SPE aufgereinigt und der gebildete Feststoff dann mit MeOH gewaschen, um die Titelverbindung (61,2 mg, 98%) zu ergeben.
  • Beispiel 2
  • -Cyclohexyl-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff
    Figure 00290001
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-(3-Aminophenyl)isochinolin und Cyclohexylisocyanat wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Beispiel 3 und 4
  • 1-[3-(1-Amino-isochinolin-5-yl)phenyl]-3-(2-fluor-5-trifluormethyl-phenyl)harnstoff (Beispiel 3) und 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(5-{3-[3-(2-fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-ureido]-phenyl}-isochinolin-1-yl)harnstoff (Beispiel 4)
    Figure 00300001
  • a. 5-Bromisochinolin-N-oxid
  • Zu einer Lösung aus 5-Bromisochinolin (20,8 g, 100 mmol) in CH2Cl2 (500 ml) wurde mCPBA (80% Test, 23,7 g, 110 mmol) hinzugegeben und über Nacht bei 45°C gerührt. Nach Abkühlen wurde das Gemisch mit Na2S2O3 abgeschreckt, dann mit CH2Cl2 extrahiert. Die organische Schicht wurde mit aq. NaOH gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und dann eingedampft. Sequenzkristallisation (aus CH2Cl2-Ether) ergab die Titelverbindung (20,1 g, 90%).
  • b. 5-Brom-1-chlorisochinolin
  • Zu einer Lösung aus 5-Bromisochinolin-N-oxid (20,1 g, 89,5 mmol) in CH2Cl2 (500 ml) wurde POCl3 (20 ml, 215 mmol) hinzugegeben und über Nacht bei 45°C gerührt. Nach Abkühlen wurde das gemischt eingedampft, um POCl3 zu entfernen, dann Wasser hinzugegeben. Die Reaktion wurde mit CH2Cl2 extrahiert. Die organische Schicht wurde mit aq. NaHCO3 gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und eingedampft. Der gebildete Feststoff wurde mit MeOH gewaschen, um die Titelverbindung (16,1 g, 74%) zu ergeben.
  • c. 1-Amino-5-bromisochinolin
  • Eine Suspension aus 5-Brom-1-chlorisochinolin (2,0 g, 8,25 mmol) in gesättigtem NH3-MeOH (100 ml) wurde für 15 Tage in einem Autoklaven auf 180°C erhitzt. Nach Abkühlen wurde das Lösungsmittel durch Verdampfung entfernt. Der Rückstand wurde mit CH2Cl2 gewaschen, dann über SXC-SPE aufgereinigt. Der gebildete Feststoff wurde mit Hexan gewaschen, um die Titelverbindung (1,57 g, 85%) zu ergeben.
  • d. 1-Amino-5-(4-aminophenyl)isochinolin
  • Die Titelverbindung wurde aus 1-Amino-5-bromisochinolin und 4-(4,4,5,5-Tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)anilin wie in Beispiel 1b beschrieben hergestellt.
  • e. 1-[3-(1-Amino-isochinolin-5-yl)phenyl]-3-(2-fluor-5- trifluormethyl-phenyl)harnstoff und 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(5-{3-[3-(2-fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-ureido]-phenyl}-isochinolin-1-yl)harnstoff
  • Die Titelverbindungen wurde aus 1-Amino-5-(4-aminophenyl)isochinolin wie in Beispiel 1d als Gemisch hergestellt. Diese Verbindungen wurden durch Säulenchromatographie aufgetrennt.
  • Beispiel 5
  • 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(chinolin-6-ylamino)isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff
    Figure 00310001
  • a. 5-Brom-1-(chinolin-6-yl)aminoisochinolin
  • Zu einer Lösung aus 5-Brom-1-chlorisochinolin (3,0 g, 12,4 mmol) in iPrOH (100 ml) wurden 6-Aminochinolin (4,5 g, 31,2 mmol), 4 M HCl-Dioxan (5 ml) und MeOH (15 ml) hinzugegeben und für 3 Tage bei 80°C gerührt. Nach Abkühlen wurde das Gemisch eingedampft, um das Lösungsmittel zu entfernen, dann in AcOEt suspendiert. Das Gemisch wurde mit aq. NaHCO3 basifiziert, und dann wurde das geformte Präzipitat durch Filtration gesammelt und mit AcOEt gewaschen, um die Titelverbindung (3,4 g, 78%) zu ergeben.
  • b. 5-(4-Aminophenyl)-1-(chinolin-6-yl)aminoisochinolin
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-Brom-1-(chinolin-6-yl)aminoisochinolin und 4-(4,4,5,5-Tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)anilin wie in Beispiel 1b beschrieben hergestellt.
  • c. 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(chinolin-6-ylamino)-isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-(4-Aminophenyl)-1-(chinolin-6-yl)aminoisochinolin wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Beispiel 6
  • 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff
    Figure 00320001
  • a. 1-[4-(6-Methyl-benzothiazol-2-yl)-phenyl]amino-5-bromisochinolin
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-Brom-1-chlorisochinolin und 4-(6-Methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamin wie in Beispiel 4a beschrieben hergestellt.
  • b. [5-(4-Amino-phenyl)-isochinolin-1-yl]-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenyl]-amin
  • Die Titelverbindung wurde aus 1-[4-(6-Methyl-benzothiazol-2-yl)-phenyl]amino-5-bromisochinolin und 4-(4,4,5,5-Tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)anilin wie in Beispiel 1b beschrieben hergestellt.
  • c. 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff
  • Die Titelverbindung wurde aus [5-(4-Amino-phenyl)-isochinolin-1-yl]-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenyl]-amin wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Beispiel 7
  • 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff
    Figure 00330001
  • a. [5-(3-Amino-phenyl)-isochinolin-1-yl]-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenyl]-amin
  • Die Titelverbindung wurde aus 1-[4-(6-Methyl-benzothiazol-2-yl)-phenyl]amino-5-bromisochinolin und 3-Aminophenylboronsäurehydrochlorid wie in Beispiel 1b beschrieben hergestellt.
  • b. 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff
  • Die Titelverbindung wurde aus [5-(3-Amino-phenyl)-isochinolin-1-yl]-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenyl]-amin wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Beispiel 8
  • 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff
    Figure 00330002
  • a. 5-(4-Aminophenyl)isochinolin
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-Bromisochinolin und 4-(4,4,5,5-Tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)anilin wie in Beispiel 1b beschrieben hergestellt.
  • b. 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-(4-Aminophenyl)isochinolin wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Beispiel 9
  • 1-Indan-5-yl-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff
    Figure 00340001
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-(4-Aminophenyl)isochinolin und 5-Indanyl wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Beispiel 10
  • 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(4-morpholin-4-yl-phenylamino)-isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff
    Figure 00340002
  • a. 5-(3-Nitrophenyl)isochinolin-N-oxid
  • Zu einer Lösung aus Peressigsäure (hergestellt aus 64 ml AcOH und 32 ml 30% H2O2) wurde 5-(3-Nitrophenyl)isochinolin (3,75 g, 15 mmol) hinzugegeben, dann über Nacht bei 80°C gerührt. Nach Abkühlen wurde das Gemisch mit AcOEt extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Wasser, aq. NaHCO3, aq. NaHSO3 und Salzlösung gewaschen, dann über Na2SO4 getrocknet. Nach Eindampfen wurde der Rückstand durch SiO2-Säulenchromatographie und Sequenzkristallisation aus MeOH aufgereinigt, um die Titelverbindung (Ausbeute nicht bestimmt) zu ergeben.
  • b. 1-Chlor-5-(3-nitrophenyl)isochinolin
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-(3-Nitrophenyl)isochinolin-N-oxid wie in Beispiel 3b beschrieben hergestellt.
  • c. 1-[4-Morpholin-4-ylphenyl)amino]-5-(3-nitrophenyl)isochinolin
  • Die Titelverbindung wurde aus 1-Chlor-5-(3-nitrophenyl)isochinolin und 4-Morpholin-4-ylanilin wie in Beispiel 4a beschrieben hergestellt.
  • d. 5-(3-Aminophenyl)-1-[4-(morpholin-4-ylphenyl)amino]isochinolin
  • Die Titelverbindung wurde aus 1-[4-(Morpholin-4-ylphenyl)amino]-5-(3-nitrophenyl)isochinolin wie in Beispiel 1c beschrieben hergestellt.
  • e. 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(4-morpholin-4-yl-phenylamino)-isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff
  • Die Titelverbindung wurde aus 5-(3-Aminophenyl)-1-[4-(morpholin-4-ylphenyl)amino]isochinolin wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Beispiel 11
  • 3-{5-[3-(3-Cyclohexyl-ureido)phenyl]-isochinolin-1-ylamino}benzolsulfonamid
    Figure 00350001
  • a. 3-[5-(3-Nitrophenyl)isochinolin-1-ylamino]benzolsulfonamid
  • Die Titelverbindung wurde aus 1-Chlor-5-(3-nitrophenyl)isochinolin und 3-Aminobenzolsulfonamid wie in Beispiel 4a beschrieben hergestellt.
  • b. 3-[5-(3-Aminophenyl)isochinolin-1-ylamino]benzolsulfonamid
  • Die Titelverbindung wurde aus 3-[5-(3-Nitrophenyl)isochinolin-1-ylamino]benzolsulfonamid und 3-Aminobenzolsulfonamid wie in Beispiel 1c beschrieben hergestellt.
  • c. 3-{5-[3-(3-Cyclohexyl-ureido)phenyl]-isochinolin-1-ylamino}benzolsulfonamid
  • Die Titelverbindung wurde aus 3-[5-(3-Aminophenyl)isochinolin-1-ylamino]benzolsulfonamid und Cyclohexylisocyanat wie in Beispiel 1d beschrieben hergestellt.
  • Biologische Daten
  • TIE-2-Enzymtest (TIE2-E)
  • Der TIE-2-Enzymtest verwendet das LANCE-Verfahren (Wallac) und GST-TIE-2, Baculovirus-exprimierte rekombinante Konstrukte der intrazellulären Domänen des humanen TIE-2 (Aminosäuren 762–1104, GenBank Accession #: L06139), durch GST getaggt. Das Verfahren maß die Fähigkeit des aufgereinigten Enzyms zum Transfer des γ-Phosphats vom ATP auf Tyrosin-Reste in einem biotinylierten synthetischen Peptid, D1-15 (Biotin-C6- LEARLVAYEGWVAGKKK-Amid) zu katalysieren. Diese Peptid-Phosphorylierung wurde unter Verwendung des folgenden Verfahrens detektiert: für eine Enzym-Präaktivierung wurde GST-TIE-2 für 30 min bei Raumtemperatur mit 2 mM ATP, 5 mM MgCl2 und 12,5 mM DTT in 22,5 mM HEPES-Puffer (pH 7,4) inkubiert. Präaktiviertes GST-TIE-2 wurde für 30 Minuten bei Raumtemperatur in Platten mit 96 Vertiefungen mit 1 μM D1-15-Peptid, 80 μM ATP, 10 mM MgCl2, 0,1 mg/ml BSA und der Testverbindung (verdünnt aus einer 10 mM Stammlösung in DMSO, DMSO-Endkonzentration war 2,4%) in 1 mM HEPES (pH 7,4) inkubiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von EDTA (Endkonzentration 45 mM) beendet. Streptavidin-verknüpftes APC (Allophycocyanin, Molecuar Probe) und Europium-markierter anti-phosphoryliertes Tyrosin-Antikörper (Wallac) wurden dann bei einer Endkonzentration von 17 μg/Vertiefung bzw. 2,1 μg/Vertiefung hinzugegeben. Das APC-Signal wurde unter Verwendung eines ARVO-"Multilabel"-Zählers (Wallac Berthold, Japan) gemessen. Die Prozentinhibierung der Aktivität wurde relativ zur Blindkontrollvertiefung berechnet. Die Konzentration der Testverbindung, bei der 50% der Aktivität inhibiert wird (IC50), wurde unter Verwendung einer nicht-linearen Regression (Levernberg-Marquardt) und der Gleichung y = Vmax (1 – x/(K + x)) + Y2 interpoliert, wobei "K" dem IC50-Wert gleich war. Die IC50-Werte wurden zu pIC50-Werte umgewandelt, d. h. –log IC50 in Molarkonzentration.
  • VEGF-R2-Enzymtest (VEGF-E)
  • Enzymtest:
  • Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden auf ihre Aktivität, die Tyrosinkinase des vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor 2 (VEGFR) zu inhibieren in Substrat-Phosphorylierungstests getestet. Dieser Test untersucht die Fähigkeit niedrigmolekulare organischer Verbindungen die Tyrosinphosphorylierung eines Peptid-Substrats zu inhibieren.
  • Homogene Zeit-aufgelöste Fluoreszenz-(HTFR)-Test
  • Die Substrat-Phosphorylierungstests verwendeten die katalytische Domäne von VEGFR-2, die in Sf9-Insektenzellen als ein Amino-terminales GST-getaggtes Fusionsprotein exprimiert wurde.
  • Autophosphorylierung ermöglicht Enzymen vor der Zugabe zu den Peptidsubstraten vollständig aktiviert zu werden. Die Tests wurden unter Verwendung des Enzyms, das durch Autophosphorylierung durch Präinkubation in Puffer mit ATP und Magnesium aktiviert worden ist, durchgeführt. Das aktivierte Enzym wird dann verdünnt und zu der titrierten Verbindung und dem Substratgemisch hinzugegeben. 200 nM VEGFR-2-Enzym wurde für 20 Minuten bei Raumtemperatur durch Inkubierung des Enzym in Puffer aktiviert, der 100 mM HEPES (pH 7,2), 75 μM ATP, 0,3 mM DTT, 0,1 mg/ml BSA und 10 mM MgCl2 enthielt. Nach der Aktivierung wurde VEGFR-2, 100-fach in zweimal-Verdünnungspuffer verdünnt: 200 mM HEPES (pH 7,5), 0,2 mg/ml BSA, 0,6 mM DTT. 20 μl verdünnten Enzymgemischs wurde zu 20 μl eines 2×-Substratgemischs (150 μM ATP, 20 mM MgCl2, 0,72 μM biotinyliertes Peptid) in den Testplatten hinzugegeben. Die Endtestbedingungen waren wie folgt: 100 mM HEPES (pH 7,2), 75 μM ATP, 10 mM MgCl2, 0,1 mg/ml BSA, 0,3 mM DTT, 0,36 μM biotinyliertes Peptid und 1 nM VEGFR-2-Enzym. Die Testplatten wurden für 1,5 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert, bevor 30 μl von 100 mM EDTA zu den Vertiefungen hinzugegeben wurde, um die Enzymreaktion zu beenden. 40 μl/Vertiefung an HTRF-Gemisch wurde dann zu den Testplatten für die Detektion des phosphorylierten Substrats hinzugegeben. Endtestbedingungen waren wie folgt: 100 mM HEPES (pH 7,2), 0,1 mg/ml BSA, 15 nM Streptavidin-markiertes Allophycocyanin (PerkinElmer) und 1 nM Europium-markierter Anti-Phosphotyrosin-Antikörper (PerkinElmer). Die Testplatten wurden unversiegelt stehengelassen und wurden in einem Wallac "Multilabel"-Zähler 1420 (PerkinElmer) gezählt.
  • Die Daten für die Dosisantworten wurden als % Kontrolle, berechnet mit der Datenreduktionsformel 100·(U1 – C2)/(C1 – C2), gegen Konzentration der Verbindung geplottet, wobei U der unbekannte Wert ist, C1 der Durchschnittskontrollwert, erhalten aus DMSO, und C2 der Durchschnittskontrollwert, erhalten aus 0,05 M EDTA, ist. Die Daten wurden an die Kurve angeglichen, die durch: y = ((Vmax·x)/(K + x)) beschrieben ist, wobei Vmax die obere Asymptote und K der IC50-Wert ist. Die Resultate für jede Verbindung wurden als pIC50 aufgezeichnet, berechnet wie folgt: pIC50 = –Log10(K).
  • EphB4-Enzymtest
  • Der EphB4-Enzymtest verwendete die "Scintillation Proximity Assay"-Technologie, um die Enzymaktivität zu messen. Dieses Verfahren maß die Fähigkeit der aufgereinigten Enzyme, den Transfer des γ-Phosphats von ATP auf Tyrosinreste in einem biotinylierten synthetischen Peptid zu katalysieren. Das Peptid, das für den EphB4-Enzymaktivitätstest verwendet wurde, war Biotin-Ahx-MAHFENYEFFHAKKK-CONH2 (SEQ ID NO: 1). Das verwendete Enzym war GST-EphB4, Baculovirus-exprimierte rekombinante Konstrukte der intrazellulären Domänen des humanen EphB4 (Aminosäuren 600–617, BR #: 21454), getaggt durch GST. Die Peptidphosphorylierung wurde unter Verwendung des folgenden Verfahrens detektiert: für die Enzympräaktivierung wurde 7,4 μM GST-EphB4 für 30 Minuten bei Raumtemperatur mit 50 μM ATP und 10 mM MgCl2 in 30 mM HEPES-Puffer (pH 7,4) inkubiert. Präaktiviertes GST-EpHB4 wurde dann für 3 Stunden bei Raumtemperatur in Platten mit 96 Vertiefungen mit 6 μM Peptid, 1 μM ATP, 10 mM MgCl2, 0,1 mg/ml BSA, 5 μCi/ml P33, 1 mM DTT, 1 mM CHAPS, 5 mM KCl und 23–25 μM Testverbindung in 100 mM HEPES (pH 7,4) inkubiert. Jede Reaktion wurde durch die Zugabe von 0,1 mg Streptavidin-SPA-Perlen in 100 mM EDTA/1x PBS, pH 7,2, terminiert. Das Signal wurde unter Verwendung eines Wallac "Trilux"-Szintillationszählers (Wallac) gemessen. Die Prozentinhibierung der Aktivität wurde relativ zu positiven (C1) und negativen (C2) Kontrollvertiefungen berechnet, unter Verwendung von 100·(1 – (U1 – C2)/(C1 – C2)). Die Konzentration der Testverbindung wurde unter Verwendung der Gleichung y = ((Vmax·x)/(K + x)) + Y2 bestimmt, wobei "K" dem IC50 gleich war. Die IC50-Werte wurden in pIC50-Werte umgewandelt, d. h. –Log IC50 in Molarkonzentration.
  • Die Verbindungen der Beispiele zeigen alle inhibitorische Aktivität gegen mindestens eine der drei getesteten Kinasen bei einem pIC von >5,0.

Claims (11)

  1. Verbindung der Formel (I):
    Figure 00390001
    worin: eines von R1 und R2 H ist und das andere -NHCONHR4 darstellt, worin R4 eine Phenyl- oder Naphthylgruppe (die gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein kann, die unabhängig ausgewählt sind aus -C1-6-Alkyl, -C1-6-Halogenalkyl, -CH2CH2CH2-, Halogen, C1-6-Alkoxy, C1-6-Halogenalkoxy, OH, NO2) oder C3-7-Cycloalkyl darstellt, oder R4 zusammen mit dem NH, an das es gebunden ist, eine Morpholinogruppe bildet, und R3 H oder NHR5 ist, worin R5 H, -Chinolinyl oder -Isochinolinyl, -(CONH)p-phenyl (worin p 0 oder 1 ist und das Phenyl gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, -C1-6-Alkyl, -C1-6-Halogenalkyl, -Morpholino, -SO2NH2, Benzothiazol (mit Methyl substituiert)) ist, oder ein Salz oder Solvat davon.
  2. Verbindung gemäß Anspruch 1, worin R4 eine Phenylgruppe (die gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein kann, die ausgewählt sind aus -C1-6-Halogenalkyl, -CH2CH2CH2-, Halogen) oder C3-7-Cycloalkyl darstellt.
  3. Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 bis 2, worin R3 H oder -NHR5 ist, worin R5 H, Chinolinyl, -(CONH)p-phenyl (worin p 0 oder 1 ist und das Phenyl gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, -C1-6-Halogenalkyl, -Morpholino, -SO2NH2, Benzothiazol (mit Methyl substituiert)) ist.
  4. Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 bis 3 der Formel (1a):
    Figure 00400001
    worin eines von R6 und R7 H ist und das andere -NHCONHR9 darstellt; R9 eine Phenylgruppe (die gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein kann, die unabhängig ausgewählt sind aus -C1-6-Halogenalkyl, -CH2CH2CH2-, Halogen) oder C3-7-Cycloalkyl darstellt; R8 H oder NHR10 ist; R10 H, Chinolinyl, -(CONH)p-phenyl (worin p 0 oder 1 ist und das Phenyl gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halogen, -C1-6-Halogenalkyl, -Morpholino, -SO2NH2, Benzothiazol (mit Methyl substituiert)) ist.
  5. Verbindung gemäß Anspruch 4, worin NHCONHR9
    Figure 00400002
    darstellt.
  6. Verbindung gemäß den Ansprüchen 4 und 5, worin R10 H,
    Figure 00400003
    Figure 00410001
  7. Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 bis 6, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus folgendem besteht: 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff, 1-Cyclohexyl-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff, 1-[3-(1-Amino-isochinolin-5-yl)phenyl]-3-(2-fluor-5-trifluormethyl-phenyl)harnstoff, 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(5-{3-[3-(2-fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-ureido]-phenyl}-isochinolin-1-yl)harnstoff, 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(chinolin-6-ylamino)-isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff, 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff, 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(3-{1-[4-(6-methyl-benzothiazol-2-yl)-phenylamino]-isochinolin-5-yl}-phenyl)harnstoff, 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-(4-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff, 1-Indan-5-yl-3-(3-isochinolin-5-ylphenyl)harnstoff, 1-(2-Fluor-5-trifluormethyl-phenyl)-3-{3-[1-(4-morpholin-4-yl-phenylamino)-isochinolin-5-yl]-phenyl}harnstoff und 3-{5-[3-(3-Cyclohexyl-ureido)phenyl]-isochinolin-1-ylamino}benzol-sulfonamid, oder ein Salz oder Solvat davon.
  8. Pharmazeutische Zusammensetzung, die folgendes umfaßt: eine therapeutisch effektive Menge einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 oder eines Salzes oder Solvats davon und eines oder mehrere aus pharmazeutisch annehmbaren Trägern, Verdünnungsstoffen und Exzipienten.
  9. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 8, die ferner ein Mittel zur Inhibierung einer Wachstumsfaktor-Rezeptorfunktion umfaßt.
  10. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 oder ein Salz oder Solvat davon zur Verwendung in der Therapie.
  11. Verwendung einer Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 bis 7 oder eines Salzes oder Solvats davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer unangemessenen Angiogenese.
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