DE69330077T2 - Testsatz und verfahren zur bestimmung von pestiziden - Google Patents

Testsatz und verfahren zur bestimmung von pestiziden

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Claims (17)

1. Verfahren zur Bestimmung der Konzentration von Organophosphat- und Carbamatpestiziden in einer Testprobe, wobei das Verfahren umfasst:
a) Inkubieren einer Testprobe und eines Insektengehirnmaterials;
b) Zugeben eines 6-substituierten D-Luciferinesters zu der inkubierten Mischung, wobei die Hydrolyse des D-Luciferinesters in der Gegenwart des Pestizids inhibiert wird;
c) Inkubieren der Mischung aus Schritt b) zur Freisetzung von D-Luciferin;
d) Zugeben von Adenosintriphosphat und Luciferase zu der Mischung aus Schritt
c) , um Oxiluciferin freizusetzen und Lumineszenz zu emittieren;
e) Messen der emittierten Lumineszenz; und
f) Bestimmen der Konzentration des Pestizids in der Testprobe durch Vergleich der gemessenen, emittierten Lumineszenz mit der Lumineszenz einer Vergleichsprobe.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1, bei dem der Luciferinester von der folgenden Formel ist:
worin R C&sub1;-C&sub6; Alkly oder Phenyl ist.
3. Verfahren gemäß Anspruch 2, wobei der Luciferinester D-Luciferinacetat ist.
4. Verfahren gemäß Anspruch 1, 2 oder 3, wobei das Gehirnmaterial von Bienen, Schmeißfliegen, Hausfliegen, Seidenraupen oder anderen Gliederfüßern stammt.
5. Verfahren gemäß Anspruch 4, bei dem das Insektengehimmaterial ein Gehirnhomogenisat aus Honigbienenköpfen umfasst.
6. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei Schritt a) ein Inkubieren der Testprobe und des Insektengehirnmaterials für 2 bis 10 Minuten umfasst.
7. Verfahren gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei Schritt c) ein Inkubieren der D-Luciferinestermischung für 2 bis 5 Minuten umfasst.
8. Verfahren gemäß Anspruch 3, wobei die Konzentration des D-Luciferinacetats in der hergestellten Mischung in Schritt b) 1 · 10&supmin;¹¹ m oder weniger ist.
9. Verfahren gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, bei dem das Pestizid ausgewählt ist aus Methomyl, Propoxur, Carbofuran, Bendocarb, Mevinphos, Ethion, Chlorpyrifos, Phorat, Malathion, Oxidemeton-Methyl, Disulfoton, Methylparathion, DDVP, Naled und Diazanon.
10. Verfahren zur Bestimmung der Konzentration von Organophosphat- und Carbamatpestiziden in einer Testprobe, wobei das Verfahren umfasst:
a) Inkubieren einer Testprobe und eines homogenisierten Insektengehirnmaterials, das von Bienen, Fliegen oder Seidenraupen stammt;
b) Zugeben von D-Luciferinacetat zu der inkubierten Mischung;
c) Inkubieren der D-Luciferinacetatmischung zum Freisetzen von D-Luciferin;
d) Zugeben von Adenosintriphosphat und Luciferase zu der Mischung, um Oxiluciferin freizusetzen und Lumineszenz zu emittieren;
e) Messen der emittierten Lumineszenz während eines definierten Zeitraumes; und
f) Bestimmen der Konzentration des Pestizids in der Testprobe durch Vergleich der gemessenen, emittierten Lumineszenz mit der Lumineszenz einer Vergleichsprobe oder einem Standard.
11. Testkit für die Biolumineszenzbestimmung der Konzentration von Organophosphat- und Carbamatpestiziden in einer Testprobe, wobei das Testkit in Kombination umfasst:
a) eine gegenüber dem Pestizid empfindliche Insektengehirnzubereitung;
b) einen 6-substituierten D-Luciferinester, dessen Hydrolyse durch das Pestizid inhibiert wird, zur Zugabe und Inkubation mit einer inkubierten Testprobe und dem Gehirnmaterial; und
c) Luciferase und Adenosintriphosphat für die Zugabe zu einer inkubierten 6- substituierten D-Luciferinestermischung.
12. Testkit gemäß Anspruch 11, enthaltend:
a) Inkubationsmittel um zunächst die Testprobe mit dem Gehimmaterial und später die Testprobe und Gehirmaterial mit dem 6-substituierten D-Luciferinester zu inkubieren;
b) Mittel zur Messung der emittierten Lumineszenz; und
c) Vergleichsmittel zum Vergleich mit der gemessenen, emittierten Lumineszenz zur Bestimmung der Konzentration des Pestizids in der Testprobe.
13. Testkit gemäß Anspruch 11 oder 12, wobei der 6-substituierte D-Luciferinester D- Luciferinacetat ist.
14. Testkit gemäß Anspruch 11, 12 oder 13, worin das Gehimmaterial ein von Bienen, Schmeißfliegen, Hausfliegen, Seidenraupen oder anderen Gliederfüßern stammendes Gehirnhomogenisat ist.
15. Verfahren zur Herstellung eines Luciferinesters wie er in Anspruch 2 definiert ist, wobei das Verfahren umfasst:
Umsetzen eines N-acylierten Imidazols der Fomel:
in einem flüssigen Lösungsmittel, worin R C&sub1;-C&sub6; Alkyl oder Phenyl ist, mit D- Luciferin, um den Luciferinester und Imidazol bereitzustellen.
16. Verfahren gemäß Anspruch 15, wobei das N-acylierte Imidazol N-Acetylimidazol ist und der Luciferinester D-Luciferinacetat.
17. Verfahren gemäß Anspruch 16, wobei die Vollständigkeit der Umsetzung durch die Abnahme der Biolumineszenz mit dem Fortschreiten der Umsetzung überwacht wird.
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