DE69432500T2 - Rekombinante Foamy-Virus-Vektoren zur medizinischen und diagnostischen Verwendung und Verfahren zur Herstellung rekombinanter Foamy-Virus-Vektoren - Google Patents
Rekombinante Foamy-Virus-Vektoren zur medizinischen und diagnostischen Verwendung und Verfahren zur Herstellung rekombinanter Foamy-Virus-VektorenInfo
- Publication number
- DE69432500T2 DE69432500T2 DE69432500T DE69432500T DE69432500T2 DE 69432500 T2 DE69432500 T2 DE 69432500T2 DE 69432500 T DE69432500 T DE 69432500T DE 69432500 T DE69432500 T DE 69432500T DE 69432500 T2 DE69432500 T2 DE 69432500T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- foamy virus
- nucleic acid
- virus vector
- exogenous nucleic
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 156
- 241000714192 Human spumaretrovirus Species 0.000 title claims abstract description 137
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 75
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 36
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 19
- 241000713673 Human foamy virus Species 0.000 claims description 14
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims description 11
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 5
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 claims 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 79
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 19
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 abstract description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000006798 recombination Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005215 recombination Methods 0.000 abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 22
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 8
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 6
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 6
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 description 5
- 102400001282 Atrial natriuretic peptide Human genes 0.000 description 5
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 5
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 5
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 5
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 5
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 4
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 4
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 4
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 4
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 3
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 3
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 3
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 3
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 2
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 2
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 2
- 108700041567 MDR Genes Proteins 0.000 description 2
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 2
- 108010035766 P-Selectin Proteins 0.000 description 2
- 102100023472 P-selectin Human genes 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 2
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 2
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 2
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 3-[6-[4-(trifluoromethoxy)anilino]-4-pyrimidinyl]benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC(C=2N=CN=C(NC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C=2)=C1 WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000014303 Amyloid beta-Protein Precursor Human genes 0.000 description 1
- 108010079054 Amyloid beta-Protein Precursor Proteins 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108010073254 Colicins Proteins 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102100026662 Delta and Notch-like epidermal growth factor-related receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 108020004437 Endogenous Retroviruses Proteins 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000711557 Hepacivirus Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 208000000563 Hyperlipoproteinemia Type II Diseases 0.000 description 1
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 206010029333 Neurosis Diseases 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710150344 Protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 108010087776 Proto-Oncogene Proteins c-myb Proteins 0.000 description 1
- 102000009096 Proto-Oncogene Proteins c-myb Human genes 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 241000713675 Spumavirus Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010045261 Type IIa hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000750042 Vini Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700022715 Viral Proteases Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 201000009628 adenosine deaminase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 208000036556 autosomal recessive T cell-negative B cell-negative NK cell-negative due to adenosine deaminase deficiency severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 101150055766 cat gene Proteins 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- -1 electroporation Substances 0.000 description 1
- 244000079386 endoparasite Species 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 201000001386 familial hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000034737 hemoglobinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018337 inherited hemoglobinopathy Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002743 insertional mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001452 natriuretic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 208000015238 neurotic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 229940075461 other therapeutic product in atc Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 108010089520 pol Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150088264 pol gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N prometryn Chemical compound CSC1=NC(NC(C)C)=NC(NC(C)C)=N1 AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 201000007497 subacute thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/17011—Spumavirus, e.g. chimpanzee foamy virus
- C12N2740/17022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/17011—Spumavirus, e.g. chimpanzee foamy virus
- C12N2740/17041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/17043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
- C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/44—Vectors comprising a special translation-regulating system being a specific part of the splice mechanism, e.g. donor, acceptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/80—Vectors comprising a special translation-regulating system from vertebrates
- C12N2840/85—Vectors comprising a special translation-regulating system from vertebrates mammalian
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Psychiatry (AREA)
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft rekombinante Foamy-Virus-Vektoren. Die Erfindung zeichnet sich durch den sicheren und wirkungsvollen Transfer therapeutischer und weiterer Gene in eukaryotische Zellen durch Foamy-Virus-Vektoren aus.
- Die rekombinanten Foamy-Virus-Vektoren der vorliegenden Erfindung sind durch die in den Ansprüchen genannten Merkmale gekennzeichnet. Der hier verwendete Begriff "Foamy-Virus-Vektor(en)" bezieht sich auf "Foamy Virus-Vektor(en)" der vorliegenden Erfindung.
- Die Foamy-Virus-Vektoren erreichen ein extrem breites Spektrum eukaryotischer Zellen: sie transduzieren bzw. überführen eine sehr breite Vielzahl von Säugetier-Zellen; sie können insbesondere zum Transfer von Genen in viele unterschiedliche somatische Zellen beim Menschen verwendet werden.
- Die Foamy-Virus-Vektoren zeichnen sich durch ein großes Vermögen zur Annahme exogener DNA-Fragmente aus.
- Die Exprimierung bzw. Expression exogener DNA in den Foamy-Virus- Vektoren kann stringent z. B. durch den viralen Transaktivator bel-1 reguliert werden, falls kein exogener Promotor im Vektor verwendet wird.
- Die aus Foamy-Virus abgeleiteten Foamy-Virus-Vektoren sind nicht pathogen beim Menschen und daher anwendungssicher. Es gibt keinen Beleg dafür, dass menschlicher Foamy-Vinas pathologische Effekte beim Mensch verursacht. Frühere Berichte, in denen darüber spekuliert wurde, dass menschlicher Foamy-Virus in neurologischen Krankheiten, Graves' Krankheit, weiteren Autoimmun-Bedingungen, de Quervain-Thyroiditis oder amyotropher Lateralsklerose involviert ist, können nun auf der Basis intensiver Analysen bezüglich des Foamy-Virus in derartigen klinischen Proben ganz klar verneint werden. Die Sicherheit von Foamy-Virus-Vektoren bei deren Anwendung leitet sich auch aus der Tatsache ab, dass homologe DNA- Sequenzen, die Anlass zu homologer Rekombination von Foamy-Virus-Vektor und zellulärer DNA geben können, in menschlicher chromosomaler DNA nicht vorhanden sind. Foamy-Viren unterscheiden sich phylogenetisch von anderen. Retroviren.
- Foamy-Virus und daraus abgeleitete Vektoren weisen kein bekanntes onkogenes Potenzial auf.
- Replikations-kompetente Foamy-Virus-Vektoren werden u. a. durch Löschung der viralen Gene bel-2 und bel-3 hergestellt.
- Beispielsweise besitzen die Foamy-Virus-Vektoren pFOV-1, pFOV-2 und pFOV-3 gemeinsam eine Löschung von ca. 420 Basenpaaren in der 3'- Richtung, die an das bel-1-Gen angrenzt.
- Außerdem wurden Replikations-inkompetente Foamy-Virus-Vektoren, wie z. B. pFOV-4, hergestellt, die in Verpackungs-Zellinien erzeugt werden können, die gleichfalls durch Gen-Technologie hergestellt werden.
- Foamy-Virus-Vektoren eignen sich zur Expression exogener DNA in menschlichen oder tierischen Ziel-Zellen, um therapeutisch aktive Proteine oder Antisense-RNA- oder Lock-RNA zu bilden. Foamy-Virus-Vektoren eignen sich auch zur Expression exogener DNA bei Menschen oder Tieren zur Erzeugung humoraler und/oder zellulärer Immunität.
- Mittels einer Auswahl der exogenen Nucleinsäure des Vektors können Foamy-Virus-Vektoren in geeigneter Weise zur Inaktivierung unerwünschter Gene durch homologe Rekombination in der chromosomalen DNA der Ziel- Zellen bei Menschen oder Tieren oder zur Komplementierung von Gen-Mängeln angewandt werden.
- Durch Regulierung der Expression eines Reporter-Gens im Ziel-Gewebe oder mittels weiterer Gen-Konstruktionen eignen sich Foamy-Virus-Vektoren zur Verwendung als Diagnose-Mittel.
- Human-Foamy-Virus (HFV) gehört zur Spumarirus-Familie der Retroviren. Die Spumavirus-Familie der Retroviren unterscheidet sich ganz klar von weiteren Retroviren (R. M. Flügel et al. EMBO J. 6, 2077-2084 (1987); B. Maurer et al. J. Virol. 62, 1950-1997 (1988); A. Rethwilm et al. Nucleic Acids Res. 18, 733-738 (1990)).
- Es ist von besonderer Wichtigkeit für die vorliegende Erfindung, dass sich HFV-Isolate bisher nicht als pathogen bei Menschen erwiesen haben. Da HFV ferner eine Vielzahl unterschiedlicher Zell-Typen in menschlichem Gewebe transduziert bzw. dahin überträgt, wurden Vektoren als "Gen-Lieferungssysteme" entwickelt, die sich aus dem infektiösen molekularen Klon pHSRV ableiten (A. Rethwilm et al. Nucleic Acids Research 18, 733-738 (1990)). In seiner Verwendung als Vektor zur "Gen-Lieferung" ist Foamy-Virus neu.
- HFV-Vektoren unterscheiden sich grundsätzlich von anderen retroviralen Vektoren, wie z. B. von MoMLV (Moloney-Maus-Leukose-Virus), woraus die weit verbreiteten N2-Vektoren abgeleitet sind (A. D. Miller et al. Biotechniques 7, 980-990)). Insofern ist HFV nicht dafür bekannt, irgendein onkogenes Potenzial aufzuweisen, und HFV-Vektoren müssen als anwendungssicher angesehen werden. Außerdem haben Foamy-Viren Zugang zu einem extrem breiten Wirts-Spektrum, das fibroblastoide, epitheloide und lymphatische Zellen einschließt. Ferner stellen HFV-Derivate sichere Vektoren wegen der Tatsache dar, dass die Gegenwart des viralen Transaktivators bel-1 geboten ist, wenn der Foamy-Virus LTR (long terminal repeat) transkriptionell aktiv sein soll. Enthält allerdings der Vektor die genetische Information für den bel-1-Transaktivator nicht, kann kein mobilisierbarer, Replikations-kompetenter HFV-Vektor, z. B. mit onkogenem Potenzial, in der Zelle erzeugt werden, weil die LTR-Seguenz die Transkription ohne ein transaktivierendes bel-1-Gen nicht aktiviert. Die Aktivierung zellulärer Onkogene durch Insertionsmutagenese ist gleichfalls unwahrscheinlich. Ein weiterer Sicherheitsfaktor bei Anwendung von HFV- Derivaten als Vektoren beruht darauf, dass endogene Homologe von Foamy- Viren unbekannt sind und daher für eine Rekombination mit endogenen Retroviren nicht in Frage kommen. Diese Beobachtung ist ebenfalls für den besonders hohen Grad genetischer Stabilität von Foamy-Virus-Vektoren bei deren Anwendung von Wichtigkeit.
- Rekombinante Foamy-Viren, wie sie z. B. in den unten angegebenen Aufbaubeispielen für pFOV-1 bis pFOV-4 beschrieben sind, eignen sich zum Transfer von genetischem Material in permanente tierische oder menschliche Zellinien oder in somatische Zellen bei Menschen oder Tieren. Sie stellen einen Vektor zur Einführung von Erbinformation in eukaryotische Zellen dar, was Vorteile gegenüber herkömmlichen Gen-Transfersystemen (MoMLV, Adeno-bezogenem Virus oder Sindbis-Virus oder gegenüber Formulierungen von DNA mit Adenovirus-Partikeln, Detergenzien und weiteren Additiven oder gegenüber physikalischen Verfahrensw4eisen) im Bereich möglicher Anwendungen beim Wirkvermögen des Gen-Transfers in die Ziel-Zellen und bei der Handhabungssicherheit zeigt und ergibt.
- Somit können die Foamy-Virus-Vektoren, die in den Beispielsversuchen genannt sind und eine Mehrfach-Cloniersequenz zur Insertion exogener Nucleinsäuren in die Region des bel-1- oder bel-2-Gens besitzen, für die unten angegebenen Zwecke angewandt werden. Allerdings ist es auch möglich, andere Löschungen in der proviralen DNA von pHFV oder in weiteren Foamy-Virus-Isolaten durchzuführen, um eine Mehrfach-Cloniersequenz zu inserieren und dadurch alternative Foamy-Virus-Vektoren aufzubauen.
- Da solche rekombinanten Foamy-Virus-Vektoren fähig sind, eine exogene Nucleinsäure (DNA-Fragment) an- bzw. aufzunehmen, welche ganz leicht 1700 Basenpaare in der Länge übersteigen können, können solche Foamy- Vektoren eine exprimierbare, exogene DNA für eine Vielzahl möglicher Anwendungen in Zellinien zum Zweck einer entsprechenden Erzeugung oder in somatische Zellen für medizinische oder diagnostische Zwecke einführen:
- Die exogene Nucleinsäure in einem rekombinanten Foamy-Virus-Vektor kann ein oder mehrere komplette Gene zur Expression eines oder mehrerer Polypeptide umfassen. Solche Peptide können sich in der Folge ihrer Expression durch diesen Foamy-Virus-Vektor in transduzierte Ziel-Zellen, dazu eignen, humorale, d. h. die Körperflüssigkeit betreffende und/oder zelluläre Immunität bei Menschen oder Tieren hervorzubringen. Es ist gezeigt worden, dass es sich dabei um ein besonderes Polypeptid handelt, das intrazellulär gebildet worden ist, welches von Wichtigkeit ist, um zelluläre Immunität hervorzubringen (J. B. Ulmer et al. Science 259, 1745- 1749 (1993)).
- Foamy-Virus-Vektoren, die exogene Nucleinsäure aufweisen und eincodieren und in transduzierten somatischen Ziel-Zellen die viralen Proteine von HIV, HTLV, Hepatitis B, Hepatitis C, menschlichem Papilloma-Virus, Zytomegalovirus, HSV oder von Influenza-Virus oder von tierischen Herpes- Viren, wie z. B. von PRV, BHV oder EHV oder von weiteren Viren, exprimieren, können wirkungsvolle Impfstoffe darstellen, die prophylaktisch oder als therapeutisches Verfahren in der Folge einer Infektion von Menschen oder Tieren durch ein pathogenes Virus angewandt werden können.
- Ferner können Foamy-Virus-Vektoren gemäß dem gleichen Prinzip zur Impfung gegen bakterielle Infektionen, gegen Mycoplasma-Infektionen oder gegen Infektionen durch Plasmodien oder weitere Endoparasiten angewandt werden. Für solche Impfungen werden Replikations-inkompetente, aber infektiöse Foamy-Virus-Vektorpartikel mit einem Titer von 10³ bis 10&sup7; oder mehr Partikeln pro mL wässriger Puffer-Lösung subkutan oder intramuskulär zur in vivo Übertragung von Zellen gespritzt. Andernfalls werden Fibroblasten, Myoblasten oder weitere somatische Zellen ex vivo durch Co- Kultivierung solcher Zellen mit Foamy-Virus erzeugenden Zellen oder durch Inkubieren somatischer Zellen von Interesse mit gepufferten wässrigen Suspensionen transduziert bzw. übertragen, die Titer des Foamy-Virus- Vektors im Bereich von 10³ bis 10&sup7; oder mehr Partikeln pro mL enthalten.
- Die exogene Nucleinsäure in rekombinanten Foamy-Virus-Vektoren kann ein oder mehrere Gene umfassen, die, in transduzierten Zellen, RNA exprimieren, welche eine komplementäre (Antisense) Nucleotid-Basensequenz zu derjenigen unerwünschter RNA-Moleküle in der Ziel-Zelle oder eine sonstige Nuclease-aktive Ribozym-RNA besitzen.
- Diese unerwünschten RNA-Moleküle können die genomische RNA von Lentiviren oder weiterer RNA-Viren sein. Sie können auch die Messenger-RNA- Moleküle intrazellulärer Pathogene wie von Lentiviren (u. a. von HIV, HTLV), Heptatitis-B-Viren, Hepatitis-C-Viren, menschlichen Papilloma- Viren, Zytomegaloviren, Epstein-Barr-Viren, Herpes simplex-Viren, Herpesviren von Lebewesen (z. B. von PRV, BHV und von EHV) oder weiterer pathogener Viren oder Mycoplasmen oder intrazellulär replizierender Prokaryoten sein.
- Jedoch können die unerwünschten RNA-Moleküle auch mRNA-Transkripte von Onkogenen oder weiterer Gene sein, die in verursachender Weise zum bösartigen Wachstum somatischer Zellen beitragen. Somit würden Foamy- Virus-Vektoren, die Antisense-RNA z. B. gegen das c-myc-RNA-Transkript exprimieren, im Fall bösartiger Störungen wie von Burkitt's Lymphomen angewandt werden. Die unerwünschten RNA-Moleküle können auch Proteine codieren, die in verursachender Weise an der Genese oder Manifestation von Autolimun-Störungen oder metabolischer Störungen beteiligt sind. Durch Anwendung komplementärer Antisense-RNA, die mit einem rekombinanten Foamy-Virus-Vektor eincodiert werden kann, können solche unerwünschten RNA- Moleküle in transduzierten Zellen in einer Sequenz-selektiven Weise durch Watson-Crick-Basenpaarung inaktiviert werden. Foamy-Virus-Vektoren können daher in infizierten oder pathologisch veränderten Zellen unter Anwendung von Antisense-RNA-Expression zur Therapie von Infektionskrankheiten, die durch Bakterien, Viren oder weitere Organismen verursacht sind, und von Krebs- oder Autoimmun-Krankheiten verwendet werden.
- Die Antisense-RNA oder Ribozym-RNA, die unter Anwendung von Foamy- Virus-Vektoren exprimiert werden, können auch gegen weitere Gene gerichtet werden, die in metabolischen oder Neurose-erzeugenden Störungen involviert sind. Somit kann, unter Anwendung von Antisense-RNA oder Ribozym-RNA, die durch Foamy-Virus-Vektoren exprimiert werden, die Inaktivierung von mRNA, die Alzheimer's β-Amyloid-Protein-Vorstufe eincodiert, oder von Acetylcholinesterase in Neuronalgewebe ebenfalls von therapeutischem Wert sein.
- Anstatt exogener Nucleinsäure, die Antisense-RNA eincodiert, kann eine exogene Nucleinsäure in rekombinante Foamy-Virus-Vektoren durch Insertion eingebracht werden, die therapeutisch verwendet werden sollen und eine Lock-RNA eincodieren.
- Lock-RNA kann einen starken antiviralen Effekt ausüben, und z. B. zur Behandlung viraler Infektionen angewandt werden.
- Zu diesem Zweck enthält die Lock-RNA besondere Nucleotid- Basensequenzen, die, ihrerseits, Virus-Proteine binden, die zur Replikation eines pathogenen Virus wesentlich sind. Somit können Lock-RNA- Sequenzen z. B. Mehrfach-Kopien der TAR-Nucleotid-Basensequenzen und der REV-reagiblen Element-Nucleotid-Basensequenz (PRE) aus HIV enthalten und kompetitiv die tat- und rev-Regulatorproteine von HIV binden, wodurch der Replikationsumsatz von HIV in der infizierten Zelle erniedrigt wird. Dies bedeutet einen therapeutischen antiviralen Effekt.
- Allerdings kann die Lock-RNA auch die Verpackungssequenz aus Lentiviren, wie z. B. für HIV beschrieben, in der genomischen RNA zwischen der 5'-LTR enthalten, welche sich in die gag-Sequenz erstreckt.
- Mit Foamy-Virus-Vektoren zur Lieferung therapeutischer Nucleinsäuren in somatische Zellen von Interesse können zwei unterschiedliche Verfahrensweisen zur ex vivo- oder in vivo Foamy-Virus-Anwendung im Allgemeinen angewandt werden:
- Zur ex vivo-Transduktion bzw. -Übertragung einer Probe somatischer Zellen, die die zu übertragenden Zellen enthalten, können diese Zellen zusammen mit einer Foamy-Virus-Vektor erzeugenden Zellinie in einem geeigneten Zell-Kulturmedium eine bestimmte Inkubationszeit lang co- kultiviert werden. Gewöhnlich beträgt die Inkubationszeit zur ex vivo- Übertragung 4 bis 36 h. Die Bedingungen der Co-Kultivierung werden so gewählt, dass eine wirkungsvolle Übertragung von Ziel-Zellen und auch die Abtrennung der Ziel-Zellen und der Foamy-Virus-Vektor erzeugenden Zellinie nach der Inkubation ermöglicht werden, um übertragene somatische Zellen erneut einzuspritzen oder durch Fusion einzubringen. Die Verfahrensweisen zur ex vivo-Übertragung somatischer Zellen für klinische Anwendungen sind im Fall eines retroviralen Gen-Transfers gut etabliert. Derartige Verfahrenstechniken, über die im Detail in der wissenschaftlichen Literatur berichtet ist, können auch zur Übertragung von Zellen durch Foamy-Virus-Vektoren angewandt werden (zum Überblick siehe Richard C. Mulligan: "The Basic Science of Gene Therapy" in: Science, Bd. 260, 926-932, 1993; W. French Anderson: "Human Gene Therapy" in: Science, Bd. 256, 808 -813, 1992; A. Dusty Miller: "Human gene therapy comes of age" in : Nature, Bd. 357, 455-460, 1992).
- Zur in vivo Übertragung somatischer Zellen mit einem Foamy-Virus- Vektor wird eine gepufferte wässrige Suspension, die 10³ bis 10&sup7; Foamy- Virus-Vektorpartikel pro mL enthält, in das Gewebe gespritzt, das die Ziel-Zellen enthält, die übertragen werden sollen. Foamy-Virus-Vektor enthaltende Suspensionen mit einem Volumen von 1 uL bis 1 mL oder mehr können in unterschiedliche Gewebe in vivo gespritzt werden, d. h. u. a. in Knochenmark, die Leber, Blut, Lymphknoten, Skelettmuskel, Haut- Epidermalgewebe, Haut-Fibroblastgewebe, Gehirn, Thymus oder in weitere Organe. Die in vivo Übertragung kann durch nicht-invasive Foamy-Virus- Vektor-Anwendungen wie eine topische Verabreichung von Foamy-Virus-Vektor enthaltenden Virus-Formulierungen, einschließlich von Pasten oder Creme, oder mittels Aerosolen, Schäumen oder Pulver-Formulierungen zur Inhalation durchgeführt werden.
- Zur Erzeugung eines Foamy-Virus-Vektors zur ex vivo- und in vivo- Anwendung muss auch erwähnt werden, dass sogenannte Pseudotypen dieser Vektorpartikel verwendet werden können. Foamy-Virus-Vektoren vom Pseudo- Typ werden durch genetisch veränderte Verpackungs-Zellinien oder durch Anwendung von Produktions-Zellinien erzeugt, die gezielt durch ein Virus wie Vesicula stomatitis-Virus oder Replikations-inkompetentes HIV oder weitere Viren infiziert sind, die Proteine wie Umhüllungs-Glycoproteine exprimieren. Diese fremden viralen Proteine können in den Foamy-Virus- Vektor-Proteinüberzug aufgenommen werden, um eine heterogen zusammengesetzte Umhüllung des Vektors zu bilden. Solche Pseudotyp-Vektoren zeigen und ergeben bestimmte Anwendungsvorteile. Sie können zur Erhöhung der Konzentration der Foamy-Virus-Vektorpartikel im Überstand von Verpackungszellen verwendet werden. Sie können auch zur Verbreiterung des Wirts-Bereichs der Foamy-Virus-Vektorpartikel verwendet werden. Insbesondere sind Pseudotyp-Foamy-Virus-Vektoren, die HIV-Umhüllungsprotein aufweisen, von Interesse, um den Vektor spezifisch auf Ziel-Zellen zu richten, die CD4-Rezeptor exprimieren. Desgleichen sind Pseudotyp-Foamy- Virus-Vektoren von Interesse, die vorzugsweise durch heterologe Umhüllungsproteine auf weitere Zell-Typen wie Leberzellen gerichtet sind, wobei Hepatitis-Virus-Proteine oder Rhinovirus-Proteine verwendet werden, um beispielsweise auf ICAM-1 exprimierende Zellen abzuzielen.
- Zusätzlich zu diesem Vorteil bringen heterologe Proteine wie HIV- Umhüllungsprotein in Pseudotyp-Foamy-Virus-Vektor wünschenswerte Immun- Reaktionen hervor.
- Die exogenen Nucleinsäure in einem rekombinanten Foamy-Virus-Vektor kann ein oder mehrere Gene zur Expression von Polypeptiden umfassen. Werden diese Polypeptide in der durch den Vektor übertragenen Ziel-Zelle exprimiert, können sie Regulator-Proteine sein, die in einer transdominant-negativen Weise wirken und den Replikationsumsatz eines pathogenen Virus verzögern, weshalb sie einen antiviralen Effekt ausüben. Regulator- Proteine, die in einer transdominant-negativen Weise wirken, sind z. B. Proteine, die Anordnung und Aufbau von Viruspartikeln stören oder ein alterniertes tat- oder rev-Protein von HIV darstellen.
- Während diese veränderten Proteine immer noch an die TAR- oder RRE- Sequenz von HIV-RNA binden, wird deren biologische Funktion, nämlich die Anti-Tenninierung der Transkription (die tat-Funktion) oder die RNA- Verarbeitungsfunktion von rev, nicht länger wegen einer Mutation im nicht-bindenden Teil des Proteins exprimiert.
- Weitere antivirale Polypeptide mit einem therapeutischen Effekt bei Virus-Krankheiten sind diejenigen, die dem Rezeptor zur Einverleibung des pathogenen Virus an der Virus-Bindungsstelle ähneln. Mit einem Foamy- Virus-Vektor können Polypeptide exprimiert und im Organismus ausgeschieden werden, welcher an diejenige Bindungsstelle des pathogenen Virus bindet, welche zur Bindung des Virus an den zellulären Rezeptor wichtig ist und somit die Aufnahme des Virus in die Zelle blockiert. In diesem Zusammenhang könnte ein Foamy-Virus-Vektor therapeutisch wirkungsvoll sein, welcher ein CD4-Polypeptid-Fragment exprimiert, das durch Bindung an HIV gp 120 die de-novo-Infektion menschlicher Zellen durch HIV verhindert.
- In ähnlicher Weise könnte das Peptid, das mit Hilfe von rekombinantem Foamy-Virus-Vektor gebildet wird, einen löslichen Rest eines Wachstumsfaktor-Rezeptors darstellen und exprimierten Wachstumsfaktor einfangen, welcher zu bösartigem Zellwachstum führt. Durch diese Mittel und Maßnahmen würde der Foamy-Virus-Vektor Anti-Tumor-Eigenschaften exprimieren.
- Dieses Prinzip könnte zur Behandlung von Autoimmun-Krankheiten angewandt werden. Zwei Beispiele können in diesem Zusammenhang genannt werden:
- 1. Zum Zweck einer Immun-Unterdrückung und zur Verhinderung der Abstoßung eines transplantierten Organs wird ein Foamy-Virus-Vektor verwendet, welcher, mittels seiner exogenen Nucleinsäure, einen ausscheidbaren Anti-Interleukin-2-Antikörper im Ziel-Gewebe exprimiert.
- 2. Der Foamy-Virus-Vektor exprimiert ein ausscheidbares Polypeptid im Ziel-Gewebe, wobei das Polypeptid ein Peptid-Fragment der α-Untereinheit des Acetylcholin-Rezeptors enthält und zur Bindung und Inaktivierung von Antikörpern bei Patienten befähigt ist, die an Myasthenia gravis leiden.
- Weitere Polypeptide, die unter Anwendung rekombinanter Foamy-Virus- Vektoren exprimiert werden, könnten Lymphokine, wie z. B. Interleukin 2, in Zellen sein, die neoplastisch transformiert, aber an der Fortpflanzung durch chemische oder physikalische Mittel für die Zwecke einer Krebs- Immuntherapie gehindert sind. In diesem Fall werden die zur Immuntherapie anzuwendenden Zellen ex vivo mit Foamy-Virus-Vektor übertragen. Desgleichen kann eine Immuntherapie von Krebs durch in vivo Übertragung von Tumorzellen mit Foamy-Vinis-Vektor durchgeführt werden, wie dies im Beispiel II dargelegt ist.
- Die durch Foamy-Virus-Vektor mediierte Expression eines oder mehrerer Interferone im Ziel-Gewebe ist ebenfalls als Mittel zur antiviralen oder Krebs-Therapie denkbar.
- Ferner können neoplastisch transformierte Zellen oder Zellen, die mit Lentiviren oder Hepatitis-Viren infiziert sind, mit rekombinanten Foamy-Virus-Vektoren durch die Vektoren therapeutisch behandelt werden, die im Ziel-Gewebe ein Toxin oder ein sonstiges Polypeptid exprimieren, das in ein zytotoxisches Polypeptid durch das intrazelluläre Pathogen oder den besonderen Metabolismus der neoplastisch transformierten Zelle überführt wird. Foamy-Virus-Vektoren könnten erstellt werden, um Ricin A oder Diphtherie-Toxin oder Staphylococcus aureus-Enterotoxin B oder Colicin E oder weitere Toxine zu exprimieren. Zur Sicherstellung der Expression solcher Produkte, welche für die Zelle oder das Organ spezifisch wäre, würden Foamy-Virus-Vektoren erstellt, die das zytotoxische Polypeptid unter Steuerung eines Promotors bilden, der Zell- oder Organ spezifisch wäre.
- Weitere therpeutische Produkte, die endogen in Ziel-Zellen durch rekombinante Foamy-Virus-Vektoren exprimiert werden können, sind z. B. Protease-Inhibitoren gegen Virus-Proteasen pathogener Lentiviren oder Heptatitisviren. Sie können auch Protease-Inhibitoren gegen Elastase und/oder Trypsin und weitere Proteasen sein, wlche im Atmungsstress- Syndrom und Emphysemen von Erwachsenen und in weiteren Krankheitszuständen inhibiert werden müssen. Sie können auch Proteine wie z. B. Tumor- Nekrose-Faktor (TNF) sein, der mit Foamy-Virus-Vektoren zur Behandlung von Krebs angewandt werden kann. Ferner können fehlende Tumor- Unterdrückungsgene mit Hilfe von Foamy-Virus-Vektoren exprimiert werden.
- Ein weiteres Beispiel einer wichtigen Anwendung des Foamy-Virus- Vektors ist die Verwendung dieses Vektors zum Transfer des Mehrfach- Arznei-Resistenz-Gens (MDR) in Blut-Bildungszellen zum Schutz der Knochenmark-Zellen (Knochenmark-Stammzellen, CD34-Progenitor-Zellen und weiterer hämatopoietischer Zellen) während einer Tumor-Therapie mit zytostatischen chemotherapeutischen Mitteln oder weiteren solchen Mitteln, die das Knochenmark schädigen.
- Unerwünschte Gene, z. B. provirale DNA von Lentiviren, vergrößerte Onkogene, Erbstörungen hervorbringende Gene und weitere Gene, können durch Foamy-Virus-Vektoren inaktiviert werden, die exogene Nucleinsäure enthalten, die DNA-Sequenzen besitzt, die homolog zu den unerwünschten Genen sind. Zu diesem Zweck wird die exogene Nucleinsäure der Foamy- Virus-Vektoren in solch einer Weise ausgewählt, dass dies, bei hoher Häufigkeit und in bevorzugter Weise, zur Zerstörung der entsprechenden zellulären Gene durch homologe Rekombination führt. Allerdings kann ein defektes Gen auch auf diesem Weg am Gen-Ort durch Rekombination mit dem intakten Gen der exogenen Nucleinsäure der Foamy-Virus-Vektoren korrigiert werden.
- Erbkrankheiten, wie z. B. Mängel in den Blut-Koagulationsfaktoren VIII oder IX oder Adenosin-Deaminasemängel oder Hämoglobinpathien oder zystische Fibrose oder familiäre Hpercholesterolämie oder Erbemphyseme oder Duchenne-Muskeldystrophie oder weitere Erbkrankheiten, können durch Transfer des geeigneten, korrekten Gens in somatische Zellen mit Foamy- Virus-Vektoren behandelt werden.
- Rekombinante Foamy-Virus-Vektoren können konstruiet und erstellt werden, deren exogene Nucleinsäure ein oder mehrere Gene zur Expression von Polypeptiden umfassen, die die Wirkung zur Regulierung des Blutdrucks aufweisen und ausüben. So können die Polypeptide z. B. aterielle natriuretische Regulator-Peptide sein, die in einer transdominant-negativen Weise wirken. Sie können Polypeptide zur Bindung und Inaktivierung des zirkulierenden ANP (atriellen natriuretischen Peptids) oder des ANF (atriellen natriuretischen Faktors) sein. Diese Polypeptide können z. B. Antikörperartige Proteine sein, oder sie können z. B. lösliche Rezeptor-Derivate von ANP- oder ANF-Bindungsrezeptoren sein. Sie können Inhibitoren von Renin oder Inhibitoren der Angiotensin-Umwandlungsenzyme sein, um nur einige Beispiele zu nennen.
- Die Gene der exogenen Nucleinsäure in Foamy-Virus-Vektoren können auch Produkte codieren, die die Entwicklung von Arteriosklerose oder weiterer Herzkranzgefäß-Krankheiten inhibieren. Diese Produkte können Substanzen sein, die die Fortpflanzung endothelialer Zellen oder Zellen der Weichmuskulatur, z. B. Antisense-RNA gegen c-myb-mRNA oder gegen TGF-β- mRNA, um Beispiele zu nennen, inhibieren.
- In diesem Zusammenhang kann das durch einen Foamy-Virus-Vektor gebildete therapeutische Produkt auch der LDL-Rezeptor sein.
- Foamy-Virus-Vektoren können zur Expression von Antisense-RNA oder Ribozym-RNA konstruiert und erstellt werden, welche gegen adhäsive Proteine, wie z. B. gegen E- oder P-Selektin, gerichtet ist. Neben einer Inhibierung der Translation der mRNA ausgewählter adhäsiver Proteine durch komplementäre RNA können die Foamy-Virus-Vektoren auch exogene Nucleinsäure zur Expression von Polypeptiden enthalten, die in die Blutzirkulation ausgeschieden werden und die Wechselwirkung von Blutzellen unter einander (z. B. die Blutplättchen-Aggregation) oder von Blutzelen mit endothelialen Zellen durch selektive Bindung an adhäsive Proteine, wie z. B. an E- oder P-Selektin, blockieren.
- Die Blockierung adhäsiver Proteine im Blut und auf endothelialen Zellen ist von Wichtigkeit als therapeutisches Prinzip bezüglich pathologischer Änderungen der Blutgefäße und bezüglich entzündlicher Krankheiten.
- Die exogene Nucleinsäure rekombinanter Foamy-Virus-Vektoren können ein Gen oder Gen-Fragment umfassen, welche in der Zelle durch eine Substanz aktiviert werden, welche nachzuweisen ist und dabei spezifisch und mit einem vergrößerbaren Signal die Substanz in einer hochempfindlichen Weise nachweisbar macht.
- Der Nachweis eines viralen oder bakteriellen Transaktivator- Proteins in Zellen aus Biopsie-Material, Körperflüssigkeiten, Zellinien, Produktions-Zellinien oder weiteren Zellen kann hier als Beispiel genannt werden. Mittels Kopplung einer transaktivierbaren Gen-Sequenz an ein stromabwärts liegendes Reporter-Gen, wie z. B. Luciferase oder β- Galactosidase oder an Peroxidase, können solche Transaktivator-Proteine, die ihrerseits die Existenz einer Infektion bestätigen können, durch einen Foamy-Virus-Vektor in den zu untersuchenden Zellen empfindlich nachgewiesen werden.
- Der infektiöse molekulare Klon pHSRV-2 (Fig. 1) ist ein Derivat von pHSRV-1. pHSRV-1 wurde durch cDNA-Klonierung und Klonierung von nicht- integrierter viraler DNA von menschlichem Foamy-Virus erhalten (A. Rethwilm et al. Gene 59, 19-28 (1987); A. Rethwilm et al. Nucleic Acids Res. 18, 733-738 (1990)). In pHSRV-1 sind ca. 500 bp aus der U3-Region der 5'LTR und ca. 350 bp aus der U3-Region der 3'LTR gelöst (A. Rethwilm et al. unveröffentlicht). In pHSRV-2 sind 500 bp in beiden LTRs gelöscht. Dies wurde durch Ersatz eines Afl II/Xba I-Fragments in der 3'LTR von pHSRV-1 durch das entsprechende Fragment der 5'LTR erleichtert. Beide Plasmide geben Anlass zu infektiösem Virus nach Transfektion empfänglicher Zellen. Zum Erhalt der in Fig. 2 bis 7 dargestellten pFOV-Vektoren wurden Löschungen im bel-2/bel-3 mit Hilfe von Restriktions-Endonucleasen Acc I und Hind III zwischen den Nucleotid-Positionen 10420 bzw. 10844 von pHSRV-2 eingeführt (Fig. 1). Eine Mehrfach-Kloniersequenz mit den Spaltungsstellen für EcoR V, Sma I und Nru I wurde in diese Löschung in pFOV- 1 inseriert bzw. eingereiht. In pFOV-1 wird eine fremde DNA-Sequenz als Fusionsprotein an ein C-terminales trunkiertes bet-Protein exprimiert. In pFOV-2 wurde ein internes ribosomales Landungspolster in die Acc I/Hind III-Löschung inseriert bzw. eingereiht. Ausserdem sind zwei Stopp-Codone in den bel-2-Offen-Ableserahmen eingeführt worden (G. Baunach et al. J. Virol. 67, 5411-5418 (1993). pFOV-3, pFOV-5 und pFOV-6 sind Derivate von pFOV-2, worin die Spleiß/Falz-Donor-Stelle im bel-1-Offen-Ableserahmen (pFOV-3), die Splice/Falz-Akzeptor-Stelle des bel-2-Offen-Ableserahmens (pFOV-5) oder beide (pFOV-6) mutagenisiert worden sind. PFOV-2, pFOV-3, PFOV-5 und pFOV-6 geben Anlass zu authentischem Protein, das durch eine Fremd-DNA-codiert wird, die in diese Vektoren inseriert bzw. eingereiht wird.
- Diese Vektoren sind Replikations-kompetent und wurden nach einander zur Expression exogener Nucleinsäure (z. B. zur Expression des CAT-Gens (Chloramphenicol-Acetyltransferase)) angewandt.
- Der Vektor pFOV-4 (Fig. 1 und 5) wurde durch Löschung der proviralen DNA zwischen den EcoR I-(Nucleotid-Position 9529)- und Hind III- (Nucleotid-Position 10844)-Restriktionsstellen hergestellt. Dieser Foamy- Virus-Vektor ist Replikations-inkompetent.
- Die Replikations-kompetenten Foamy-Virus-Vektoren, wie z. B. pFOV-1 bis pFOV-3, können in Zellinien wie z. B. in HEL 299 (ATCC CCL 137), Human-Embryo-Lungen-Firoblastzellen, BHK-21 (C-13) (ATCC CCL 10), Hamster- Nierenzellen, CF2TH (ATCC CRL 1430), Hunde-Thymus-Zellinie, MRCS (ATCC CCL 171), Human-Lungen-Zellinie, CHO (Chinesischer Hamster-Ovar)- Zellinie, VERO (ATCC CCL 81), Afrikanischer Grünaffen-Nieren-Zellinie, 3TS-TK (ATCC CCL 92), Maus-Fibroblast-Zellinie und in weiteren Zellinien oder in Primär-Gewebe-Kulturen oder in infizierten Lebewesen fortgepflanzt werden. Die Zellkultur-Überstände oder -Flüssigkeiten aus infizierten Lebewesen, die die infektiösen Foamy-Vektorpartikel enthalten, können zur Infizierung von Ziel-Zellen angewandt werden.
- Replikations-inkompetente Foamy-Virus-Vektoren werden unter Anwendung rekombinant veränderter Verpackungs-Zellinien erzeugt. Der Replikations-inkompetente Foamy-Virus-Vektor besitzt Gen-Löschungen, die eine Replikation des Vektors in einer somatischen Zelle ausschließen, die mit Replikations-kompetenten Foamy-Viren infiziert ist. Zusätzlich zu den bel-Genen können diese Gen-Löschungen die gag- oder die pol- und/oder die env-Gen-Region umfassen.
- Die Proteine des oder der gelöschten Gene werden durch ein oder mehrere Foamy-Virus-Gene, die transfiziert worden sind, z. B. durch herkömmlichen Gen-Transfer (z. B. Elektroporation oder CaPO&sub4;-Fällung) in einer Verpackungs-Zellinie gebildet. Ein Merkmal der Verpackungs-Zellinie beruht darauf, dass sie ein oder mehrere Foamy-Virus-Proteine, wie die gag-, pol- und/oder env-Proteine, exprimiert, welche jene dazu befähigen, die genomische RNA dieser Vektoren, welche auch die exogene Nucleinsäure einschließt, in infektiösen Foamy-Viruspartikeln zu verpacken, da diese Proteine in trans in der Verpackungs-Zellinie bereitgestellt werden.
- Infektiöse, aber Replikations-inkompetente Foamy-Virus- Vektorpartikel werden auf diesem Weg aus Sicherheitsgründen erzeugt. Die Verpackungs-Zellinie kann eine der oben genannten Zellinien oder, alternativ dazu, eine weitere geeignete Zellinie sein.
- Alternativ dazu, kann der Foamy-Virus-Vektor auch als reine provirale DNA aus einer geeigneten clonierten Plasmid-DNA isoliert und, mit oder ohne Formulierungshilfsstoffe wie z. B. kationische Lipide oder Proteine, die einen Träger darstellen, in die Ziel-Zellen für medizinische oder diagnostische Anwendungen durch Injektion, Elektroporation, Partikel-Bombardierung oder ähnliche technische Verfahrensweisen eingeführt werden.
- Zellen von Gewebekulturen (ex vivo) der Gewebezellen in Lebewesen (in vivo) können mit Foamy-Virus-Vektoren transduziert werden, um die Expression besonderer Gene in diesen Zellen unter Anwendung des Vektors hervorzubringen. Dadurch können eine besondere physiologische Bedingung, ein besonderes Metabolismus-Ergebnis oder eine besondere biochemische Eigenschaft der Zellen ex vivo oder in vivo erzeugt werden. Diese Zellen, die auf diesem Weg verändert worden sind, können von großem Wert für physiologische, pharmakologische oder medizinische Untersuchungen sein. Sie können z. B. ex vivo oder in vivo zur Bestimmung der Funktion eines Gens oder zur Bestimmung des Effekts einer Wirkverbindung oder eines Medikaments, welche untersucht werden, getestet werden. Ferner können solche transduzierten Zellen (Zellen, die durch den Vektor genetisch verändert worden sind) eine aussergewöhnlich wertvolle Hilfe bei der Suche, durch ex-vivo-Zelltests oder durch in vivo-Tierversuche, nach Wirkverbindungen (Substanzen, die chemosynthetisch oder biologisch hergestellt werden) sein, welche sich zur weiteren Entwicklung als Medikamente eignen (rastermässige Entwicklung und Untersuchung einer Wirkverbindung). Konkrete Beispiele werden durch Anwendung des Vektors zum Transfer von Onkogenen wie von c-myc, ras, bcr-abl oder von HIV-tat in ausgewählte Lebewesenorgane angegeben und bereitgestellt, um das onkogene Potenzial der Onkogene in den genetisch veränderten Zellen und Onkogen-abhängige Tumorgenese zu untersuchen und Wirkverbindungen in vivo bezüglich ihrer Befähigung zur Inhibierung einer Tumorgenese zu testen.
- Eine bel-1 exprimierende Verpackungs-Zellinie kann angewandt werden, um pFOV-4-Vektor zu erzeugen, der ein HIV-LTR-Reporter-Gen-Konstrukt enthält. Dieser Vektor infiziert primäre Human-Makrophagen, Neuronalzellen und weitere somatische Zellen. Solche transduzierte Makrophagen oder weitere primäre Zellen können für diagnostische Zwecke, wie in Beispiel VII aufgezählt, zum empfindlichen HIV-Nachweis durch Co-Kultivierung mit Proben angewandt werden, die bezüglich einer HIV-Kontamination analysiert werden. Weil es HIV-Isolate klinischer Relevanz gibt, die nur auf einen engen Wirksbereich beschränkt sind, kann daher nicht in peripheralen Blut-Lymphozyt-Proben gezüchtet werden.
- Solche pVOF-4-transduzierten Makrophagen oder weitere Zellen sind ebenfalls eine HIV-inhibierende Substanz. Wird ferner das Reporter-Gen von PFOV-4 durch potenzielle Selbstmord-Gene wie Staphylococcus- Enterotoxin B oder Ricin A oder weitere Gene, die ein zytotoxisches Produkt codieren, ersetzt, wird pFOV-4 zur rastermäßigen Untersuchung von Selbstmord-Genen angewandt, die bei HIV-Infektion solcher primärer somatischer Zellen aktiviert werden.
- Ferner können menschliche Zell-Adhäsionsproteine (Selektine) unter Anwendung von Foamy-Virus-Vektoren in verschiedenen somatischen Lebewesenzellen exprimiet werden, wodurch es ermöglicht wird, entzündungshemmende, Selektin-bindende Wirkverbindungen im Lebewesen (z. B. in der Maus) rastermäßig zu untersuchen. Dies sind zwei Beisiele von Test-Modellen für eine "molekulare Pharmakologie" unter Anwendung menschlicher Proteine in Lebewesen, welche mit Hilfe der Foamy-Virus-Vektoren durchgeführt und realisiert werden.
- Diagrammatische Darstellung der genomischen Struktur von pHFV (infektiöser proviraler DNA'des menschlichen Spumaretrovirus pHSRV-2) und der Foamy-Virus-Vektoren pFOV-1, pFOV-2 und pFOV-3, die daraus durch Löschung an den Acc I und Hind III-Spaltungsstellen (Nucleotid-Positionen 10420 bzw. 10844) abgeleitet sind. Der Replikatons-inkompetente Vektor pFOV-4 besitzt eine größere Löschung zwischen EcoR I (Nucleotid-Position 959) und Hind III (Nucleotid-Position 10844). Mehrfach-Klonierstellen, z. B. die EcoR V-, Sma I- und Nru I-Spaltungsstellen, die hier gezeigt sind, wurden anstatt der Löschungen inseriert bzw. eingereiht.
- Restriktionsplan des Foamy-Virus-Vektors pFOV-1
- Restriktionsplan des Foamy-Virus-Vektors pFOV-2
- Restriktionsplan des Foamy-Virus-Vektors pFOV-3
- Restriktionsplan des Foamy-Virus-Vektors pFOV-4
- Restriktionsplan des Foamy-Virus-Vektors pFOV-5
- Restriktionsplan des Foamy-Virus-Vektors pFOV-6
Claims (9)
1. Rekombinanter Foamy-Virus-Vektor, gekennzeichnet durch:
i) eine funktionelle spumaretrovirale lange terminale Repeat
(Wiederholungs) (LTR)-Nucleinsäure-Sequenz an jedem Ende des Genoms des
viralen Vektors,
ii) eine Insertion eines exogenen Nucleinsäure-Fragments in die
virale genomische Nucleinsäure zwischen den zwei LTR-Enden,
iii) Insertion eines oder mehrerer Fragmente exogener
Nucleinsäure-Fragmente in die spumaretroviralen Gen-Sequenzen der bel-1-, bel-2-
oder bel-3-Gene oder durch Ersatz der bel-1-, bel-2- oder bel-3-Gene oder
durch Insertion der exogenen Nucleinsäure in weitere Löschungen in der
proviralen DNA durch Ersatz der gag-, pol- oder env-Sequenzen.
2. Foamy-Virus-Vektor gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
dass der Foamy-Virus-Vektor ein Derivat von menschlichem Foamy-Virus ist.
3. Foamy-Virus-Vektor gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch
gekennzeichnet, dass die exogene Nucleinsäure ein komplettes Gen oder mehrere
komplette Gene zur Expression von Polypeptiden zur humoralen und/oder
zellulären Immunisierung entählt.
4. Foamy-Virus-Vektor gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch
gekennzeichnet, dass die exogene Nucleinsäure ein Gen zur Expression von
Antisense-RNA, Ribozym-RNA oder von Lock-RNA enthält.
5. Foamy-Virus-Vektor gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch
gekennzeichnet, dass die exogene Nucleinsäure Gen-Produkte zur Inhibierung
einer Tumorbildung exprimiert.
6. Foamy-Virus-Vektor gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch
gekennzeichnet, dass die exogene Nucleinsäure Gen-Produkte exprimiert, die die
Gen-Defekte im Ziel-Organismus heilen.
7. Foamy-Virus-Vektor gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, der
eine exogene Nucleinsäure-Sequenz zur Expression eines Produkts zur
diagnostischen Anwendung enhält.
8. Medikament enthaltend einen Foamy-Virus-Vektor gemäß einem
der Ansprüche 1 bis 6.
9. Verwendung eines Foamy-Virus-Vektors gemäß Anspruch 1 oder 2
zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Autoimmun-
Krankheiten, Herzkranzgefäß-Krankheiten, Tumoren, viraler Erkrankung oder
von Gen-Defekten.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE69432500T DE69432500T2 (de) | 1993-06-03 | 1994-05-24 | Rekombinante Foamy-Virus-Vektoren zur medizinischen und diagnostischen Verwendung und Verfahren zur Herstellung rekombinanter Foamy-Virus-Vektoren |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4318387A DE4318387A1 (de) | 1993-06-03 | 1993-06-03 | Rekombinante Foamy Virus Vektoren für medizinische und diagnostische Anwendungen sowie Verfahren zur Herstellung von rekombinanten Foamy Virus Vektoren |
| DE69432500T DE69432500T2 (de) | 1993-06-03 | 1994-05-24 | Rekombinante Foamy-Virus-Vektoren zur medizinischen und diagnostischen Verwendung und Verfahren zur Herstellung rekombinanter Foamy-Virus-Vektoren |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE69432500D1 DE69432500D1 (de) | 2003-05-22 |
| DE69432500T2 true DE69432500T2 (de) | 2003-11-20 |
Family
ID=6489499
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE4318387A Withdrawn DE4318387A1 (de) | 1993-06-03 | 1993-06-03 | Rekombinante Foamy Virus Vektoren für medizinische und diagnostische Anwendungen sowie Verfahren zur Herstellung von rekombinanten Foamy Virus Vektoren |
| DE69432500T Expired - Lifetime DE69432500T2 (de) | 1993-06-03 | 1994-05-24 | Rekombinante Foamy-Virus-Vektoren zur medizinischen und diagnostischen Verwendung und Verfahren zur Herstellung rekombinanter Foamy-Virus-Vektoren |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE4318387A Withdrawn DE4318387A1 (de) | 1993-06-03 | 1993-06-03 | Rekombinante Foamy Virus Vektoren für medizinische und diagnostische Anwendungen sowie Verfahren zur Herstellung von rekombinanten Foamy Virus Vektoren |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5646032A (de) |
| EP (1) | EP0632129B1 (de) |
| JP (2) | JPH06343477A (de) |
| AT (1) | ATE237693T1 (de) |
| CA (1) | CA2124769C (de) |
| DE (2) | DE4318387A1 (de) |
| DK (1) | DK0632129T3 (de) |
| ES (1) | ES2196014T3 (de) |
| PT (1) | PT632129E (de) |
| SI (1) | SI0632129T1 (de) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2707091B1 (fr) | 1993-06-30 | 1997-04-04 | Cohen Haguenauer Odile | Vecteur rétroviral pour le transfert et l'expression de gènes dans des cellules eucaryotes. |
| FR2727429B1 (fr) * | 1994-11-30 | 1997-11-28 | Haguenauer Odile Cohen | Lignees d'encapsidation et vecteurs d'expression pour la transcomplementation de vecteurs retroviraux defectifs |
| DE19503082A1 (de) * | 1995-02-01 | 1996-08-08 | Univ Ludwigs Albert | Gegenstand und Verfahren zur bevorzugt transienten Expression und möglichen Translation spezifischer RNA im cytoplasmatischen Bereich höherer eukaryontischer Zellen |
| US5888767A (en) * | 1996-11-27 | 1999-03-30 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Method of using a conditionally replicating viral vector to express a gene |
| CA2279673A1 (en) * | 1995-12-15 | 1997-06-16 | Enzo Therapeutics, Inc. | Property effecting and/or property exhibiting constructs for the expression of non-native nucleic acids for therapeutic and diagnostic uses |
| US6492165B1 (en) | 1997-02-12 | 2002-12-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Retrovirus isolated from humans |
| US5882912A (en) * | 1997-02-12 | 1999-03-16 | Center For Disease Control And Prevention | Retrovirus isolated from humans |
| AU1629197A (en) * | 1997-03-14 | 1998-09-17 | Transgene S.A. | Expression of a foamy virus envelope protein |
| US6623952B1 (en) | 1998-10-27 | 2003-09-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Spumavirus isolated from humans |
| DE19858441C2 (de) * | 1998-12-17 | 2001-02-15 | Deutsches Krebsforsch | FV-Vektoren zur Expression von Fremdgenen in Säugern und deren Verwendung |
| WO2000041732A1 (en) * | 1999-01-19 | 2000-07-20 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Hydrogel compositions for controlled delivery of virus vectors and methods of use thereof |
| US6800475B1 (en) | 1999-06-14 | 2004-10-05 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Isolation of a human retrovirus |
| WO2004003153A2 (en) * | 2002-06-27 | 2004-01-08 | The Government Of The United States Of America, Asrepresented By The Secretary Department Of Health And Human Services Centers For Disease Control And Prevention | Live replicating spumavirus vector |
| WO2004022003A2 (en) | 2002-09-06 | 2004-03-18 | University Of South Florida | Materials and methods for treatment of allergic diseases |
| US20080214437A1 (en) * | 2002-09-06 | 2008-09-04 | Mohapatra Shyam S | Methods and compositions for reducing activity of the atrial natriuretic peptide receptor and for treatment of diseases |
| AU2005227870A1 (en) * | 2004-02-17 | 2005-10-13 | University Of South Florida | Materials and methods for treatment of inflammatory and cell proliferation disorders |
| US20090202488A1 (en) * | 2004-06-04 | 2009-08-13 | Deutsches Krebsforschungczentrum | Use Of The Foamy Virus Bet Protein For Inactivating APOBEC |
| CA2656990A1 (en) * | 2006-04-28 | 2007-11-08 | University Of South Florida | Materials and methods for reducing inflammation by inhibition of the atrial natriuretic peptide receptor |
| US10184942B2 (en) | 2011-03-17 | 2019-01-22 | University Of South Florida | Natriuretic peptide receptor as a biomarker for diagnosis and prognosis of cancer |
| EP3684421A4 (de) * | 2017-09-18 | 2021-08-04 | Children's Hospital Medical Center | Starker isolator und seine verwendung im gentransfer |
-
1993
- 1993-06-03 DE DE4318387A patent/DE4318387A1/de not_active Withdrawn
-
1994
- 1994-05-24 SI SI9430447T patent/SI0632129T1/xx unknown
- 1994-05-24 PT PT94107918T patent/PT632129E/pt unknown
- 1994-05-24 DE DE69432500T patent/DE69432500T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-24 AT AT94107918T patent/ATE237693T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-05-24 EP EP94107918A patent/EP0632129B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-24 ES ES94107918T patent/ES2196014T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-24 DK DK94107918T patent/DK0632129T3/da active
- 1994-05-30 JP JP6137880A patent/JPH06343477A/ja active Pending
- 1994-05-31 CA CA002124769A patent/CA2124769C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-28 US US08/345,278 patent/US5646032A/en not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-12-20 JP JP2006343352A patent/JP2007082562A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SI0632129T1 (en) | 2003-08-31 |
| ATE237693T1 (de) | 2003-05-15 |
| PT632129E (pt) | 2003-08-29 |
| JP2007082562A (ja) | 2007-04-05 |
| CA2124769A1 (en) | 1994-12-04 |
| JPH06343477A (ja) | 1994-12-20 |
| EP0632129A1 (de) | 1995-01-04 |
| EP0632129B1 (de) | 2003-04-16 |
| CA2124769C (en) | 2007-07-10 |
| DE4318387A1 (de) | 1994-12-08 |
| DE69432500D1 (de) | 2003-05-22 |
| US5646032A (en) | 1997-07-08 |
| ES2196014T3 (es) | 2003-12-16 |
| DK0632129T3 (da) | 2003-08-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69432500T2 (de) | Rekombinante Foamy-Virus-Vektoren zur medizinischen und diagnostischen Verwendung und Verfahren zur Herstellung rekombinanter Foamy-Virus-Vektoren | |
| DE69434860T2 (de) | Herstellung von helfer-freien retroviren mit hohem titer mittels transienter transfektion | |
| DE69829471T2 (de) | Auf lentivirus basierende gentransfer-vektoren | |
| DE69615650T2 (de) | Virale vektoren für die gentherapie | |
| DE3587899T2 (de) | Transkriptionsfaktoren mit transaktivität. | |
| DE69534902T2 (de) | Rekombinanter viraler DNS Vektor zur Transfektion tierischer Zellen | |
| DE69535560T2 (de) | Ein verstärkter, durch viren vermittelter dna-transfer | |
| DE69114997T2 (de) | Von Adeno-assoziierte Viren rekombinante Vektoren. | |
| DE69232438T2 (de) | Interne ribosom eintrittsstellen enthaltene retrovirale vektoren | |
| DE60023600T2 (de) | Replizierende retrovirale Konstrukte, ihre Herstellung und Verwendungen für den Gentransfer | |
| DE69616559T2 (de) | Hilfsvirus für die herstellung von rekombinanten virusvektoren | |
| EP0778349A2 (de) | Genkonstrukt und dessen Verwendung | |
| JPH10500852A (ja) | 遺伝子治療のための安全なベクター | |
| EP0790313A2 (de) | Nukleinsäurekonstrukte für die zellzyklusregulierte Expression von Genen, derartige Konstrukte enthaltende Zellen sowie deren Verwendung zur Herstellung von Heilmitteln | |
| EP0926237A2 (de) | Nukleinsäurekonstrukte für die Gentherapie, deren Aktivität von Inhibitoren cyclinabhängiger Kinasen beeinflusst wird | |
| EP0805209A2 (de) | Nukleinsäurekonstrukte mit Genen kodierend für Transportsignale | |
| DE19710643A1 (de) | Der Promotor des cdc25B Genes und seine Verwendung in der Gentherapie | |
| EP1097232A1 (de) | Expressionssysteme enthaltend chimäre promotoren mit bindungsstellen für rekombinante transkriptionsfaktoren | |
| DE19751587A1 (de) | Onkogen- oder virusgesteuerte Expressionssysteme | |
| DE69534633T2 (de) | Implantat und vektor zur behandlung von erworbenen krankheiten | |
| DE69716581T2 (de) | Retroviraler vektor und dessen verwendung in gentherapie | |
| DE69426303T2 (de) | Verfahren zur unterdrückung der immunantwort durch gentherapie | |
| DE69634297T2 (de) | Verfahren zur verlängerung der expression eines interessierenden gens unter verwendung von löslichen ctla4 molekülen | |
| DE69621949T2 (de) | Toxisches protein exprimierende viren und produktionszellinien | |
| DE19858441C2 (de) | FV-Vektoren zur Expression von Fremdgenen in Säugern und deren Verwendung |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: BAYER HEALTHCARE AG, 51373 LEVERKUSEN, DE |
|
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: VECTORIA FORSCHUNGSFOERDERUNGSVEREIN E.V., 970, DE |