DE69719528T2

DE69719528T2 - Hautpflegemittel enthaltend kombinationen aus verbindungen die die wirkungvon retinsaüre auf der haut nachbilden

Info

Publication number: DE69719528T2
Application number: DE69719528T
Authority: DE
Inventors: Robert Burger; Paton Granger; Koichi Iwata; Vincent Rawlings; Richard Scott; Hua Zhang
Original assignee: Unilever NV
Current assignee: Unilever NV
Priority date: 1996-09-27
Filing date: 1997-09-18
Publication date: 2003-11-06
Anticipated expiration: 2017-09-19
Also published as: JP2000503031A; CZ295983B6; CA2265635C; CA2265635A1; EP0932387A1; PL332430A1; DE69719528D1; EP0932387B1; PL188574B1; WO1998013020A1; AR009096A1; KR20000048705A; BR9712124A; JP3589469B2; AU4775897A; CN1105554C; TW503112B; CN1253493A; KR100330678B1; ZA978660B

Description

Gebiet der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft Hautpflegezusammensetzungen, die bestimmte Verbindungen in Kombination mit Retinol und/oder Retinylester enthalten, und kosmetische Verfahren, die das Auftragen solcher Zusammensetzungen auf die Haut einbeziehen.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Retinol (Vitamin A) ist eine endogene Verbindung, die im menschlichen Körper natürlich vorkommt und für normale epitheliale Zelldifferentiation wesentlich ist. Natürliche und synthetische Vitamin-A-Derivate wurden bei der Behandlung einer Vielzahl von Hautstörungen ausgiebig verwendet und wurden als Hautreparier- und -erneuerungsmittel verwendet. Retinsäure wurde angewendet, um eine Vielzahl von Hautzuständen zu behandeln, beispielsweise Akne, Falten, Psoriasis Altersflecken und Verfärbung. Siehe beispielsweise Vahlquist, A. et al., J. Invest. Dermatol., Band 94, Holland D. B. und Cunliffe, W. J. (1990), Seiten 496-498; Ellis, C. N. et al., "Pharmacology of Retinols in Skin", Vasel, Karger, Band 3 (1989), Seiten 249-252; Lowe, N. J. et al., "Pharmacology of Retinols in Skm", Band 3 (1989), Seiten 240-248; PCT Patent Anmeldung Nr. WO 93/19743.
Es wird angenommen, dass die Verwendung von Retinol oder Estern von Retinol gegenüber Retinsäure bevorzugt sein würde. Retinol kommt natürlich im menschlichen Körper vor und wird als viel sicherer als Retinsäure angesehen. Ester von Retinol hydrolysieren in vivo, um Retinol zu erzeugen. Es wird angenommen, dass Retinolester und Retinol gemäß dem nachstehenden Mechanismus metabolisch auf der Haut zu Retinsäure umgewandelt werden:
Das Meiste des endogen aufgetragenen Retinols wird allerdings schnell in inaktive Fettsäureester zur Lagerung in epidermalen Zellen (Keratinozyten) umgewandelt. Die Veresterung von Retinol in inaktive Retinylester wird in Zellen durch die Übertragung einer Fettacylgruppe von Acyl-CoA, katalysiert durch die Enzym-Acyl-CoA-Retinoltransferase (ARAT) oder durch die Übertragung einer Acylgruppe aus Phosphatidylcholin, katalysiert durch das Enzym Lecithin-Retinol- Acyl-transferase (LRAT), erreicht. Diese Veresterungsreaktionen sind bei Keratinozyten sehr wirksam. Bie Mehrheit (95%) von zellulären Retinoiden liegt in Form von Retinylfettsäureestern vor. Somit sind leider, obwohl Retinol und Retinylester zur Anwendung sicherer als Retinsäure sind, diese beim Bereitstellen von Hautvorteilen weniger wirksam als Retinsäure.
Die vorliegende Erfindung basiert zum Teil auf dem Auffinden, dass bestimmte Verbindungen diese Veresterungsreaktionen inhibieren und somit die Wirkung von Retinol durch Erhöhen der Menge von zur Umwandlung zu Retinsäure verfügbarem Retinol fördern. Somit ist ein Gemisch von diesen Verbindungen mit Retinol oder Retinylestern, was Retinsäure nachahmt, beim Verwenden noch sicherer als Retinsäure.

Kurzdarstellung der Erfindung

Die vorliegende Erfindung schließt teilweise eine hautkonditionierende Zusammensetzung ein, enthaltend:
a) 0,001% bis 10% einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Retinol, Retinylester und Gemischen davon;
b) 0,0001% bis 50% einer Verbindung, die bei einer Konzentration von 100 uM mindestens 20% einer LRAT oder ARAT katalysierten Retinolveresterung, wie durch ein hierin beschriebenes mikrosomales in-vitro-Assay gemessen, inhibiert; wobei die Verbindung kein Fettsäureamid oder Dimethylimidazolidinon darstellt und aus der Gruppe, bestehend aus cyclischen aliphatischen ungesättigten Kohlenwasserstoffen, Diterpenen und Fettsäurehydroxyethylimidazolintensiden der nachstehenden Struktur:
worin R eine aliphatische gesättigte oder ungesättigte gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette mit 8 bis 20 Kohlenstoffatomen darstellt und Gemischen davon ausgewählt ist und
c) einen kosmetisch verträglichen Träger.
Die in die vorliegende Erfindung eingeschlossenen Verbindungen in Kombination mit Retinol und/oder Retinylester werden, bezogen auf die Fähigkeit solcher Kombinationen Retinsäurewirkungen auf der Haut nachzuahmen, ausgewählt. Andererseits, wenn die Verbindung ausreichend LRAT ARAT katalysierte Retinolveresterung, wie durch ein mikrosomales in-vitro-Assay gemessen, inhibiert, wird sie in Kombination mit Retinol oder Retinylester wirken, um die Wirkung von Keratinocyten (Hautzellen) von Retinsäure nachzuahmen.
Die Erfindung stellt weiterhin ein kosmetisches Verfahren zum Konditionieren von Haut bereit, umfassend örtliches Auftragen der vorliegenden Zusammensetzung auf die Haut. Die Erfindung stellt auch ein kosmetisches Verfahren bereit, unter Nachahmen der Wirkung von Retinsäure auf der Haut, umfassend örtliches Auftragen der vorliegenden Zusammensetzung auf die Haut.
Der wie hierin verwendete Begriff "Konditionieren" bedeutet Verhinderung und Behandlung von einem oder mehreren der nachstehenden: trockene Haut, lichtgeschädigte Haut, Aussehen von Falten, Altersflecken, gealterte Haut. Die Zusammensetzungen sind auch zum Erhöhen der Stratum Corneum- Biegsamkeit, Aufhellung der Hautfarbe, Steuern der Sebumexkretion und im Allgemeinen Erhöhen der Qualität der Haut verwendbar. Die Zusammensetzung kann verwendet werden, um Hautabschuppung und epidermale Differentiation zu verbessern.
Das Vorliegen der ausgewählten Verbindungen in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung verbessert im Wesentlichen die Leistung von Retinol oder Retinylester.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird aufgrund des Einschlusses einer Menge einer Verbindung, die bei 100 um Konzentration mindestens 20% von ARAT oder LRAT katalysierter Retinolveresterung, wie gemessen durch ein mikrosomales in-vitro-Assay in Retinol oder einen Retinylester enthaltenden Zusammensetzungen wirksam inhibiert, die Leistung der Zusammensetzungen im Wesentlichen verbessert.

BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN

Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen enthalten als einen ersten, wesentlichen Bestandteil eine Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Retinol und Retinylester. Der Begriff "Retinol" schließt unter anderem die nachstehenden Isomeren von Retinol: all-trans-Retinol, 13- cis-Retinol, 11-cis-Retinol, 9-cis-Retinol, 3,4-Didehydroretinol ein. Bevorzugte Isomeren sind all-trans-Retinol, 13- cis-Retinol, 3,4-Didehydroretinol, 9-cis-Retinol. Besonders bevorzugt ist all-trans-Retinol aufgrund seiner breiten kommerziellen Verfügbarkeit.
Retinylester ist ein Ester von Retinol. Der Begriff "Retinol" wurde vorstehend definiert. Retinylester, die zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung geeignet sind, sind C&sub1;-C&sub3;&sub0;-Ester von Retinol, vorzugsweise C&sub2;-C&sub2;&sub0;-Ester und besonders bevorzugt C&sub2;-, C&sub3;- und C&sub1;&submin;&sub6;-Ester, weil sie üblicherweise verfügbar sind. Beispiele für Retinylester schließen ein, sind jedoch nicht begrenzt auf: Palmitinsäureretinylester, Ameisensäureretinylester, Essigsäureretinylester, Propionsäureretinylester, Buttersäureretinylester, Valeriansäureretinylester, Isovaleriansäureretinylester, Hexansäureretinylester, Heptansäureretinylester, Octansäureretinylester, Nonansäureret inylester, Decansäureretinylester, Undecansäureretinylester, Laurinsäureretinylester, Tridecansäureretinylester, Myristinsäureretinylester, Pentadecansäureretinylester, Heptadecansäureretinylester, Stearinsäureretinylester, Isostearinsäureretinylester, Nonadecansäureretinylester, Arachidonsäureretinylester, Behensäureretinylester, Linolsäureretinylestet und Ölsäureretinylester.
Der bevorzugte Ester zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung ist aus Palmitinsäureretinylester, Essigsäureretinylester und Propionsäureretinylester ausgewählt, weil diese die am besten kommerziell Verfügbaren sind und deshalb die Kostengünstigsten. Linolsäureretinylester ist aufgrund seiner Wirksamkeit ebenfalls bevorzugt.
Retinol und/oder Retinylester wird in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung in einer Menge von 0,001% bis 10%, vorzugsweise in einer Menge von 0,01% bis 1%, besonders bevorzugt in einer Menge von 0,01% bis 0,5%, angewendet.
Der zweite wesentliche Bestandteil der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen ist eine Verbindung, die ein mikrosomales in-vitro-Assay besteht. Eine zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung geeignete Verbindung inhibiert bei 100 uM Konzentration mindestens 20% LRAT oder ARAT -katalysierte Retinolveresterung wie durch mikrosomales in-vitro- Assay gemessen. Das zum Bestimmen der Eignung des Einschlusses der Verbindung der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen angewendete mikrosomale in-vitro-Assay ist wie nachstehend:
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird eine Verbindung ausgewählt, die bei einer Konzentration von 100 uM mindestens 40% und besonders bevorzugt mindestens 50% von LRAT oder ARAT katalysierte Retinolveresterung inhibiert.

Mikrosomales in-vitro-Assay:

Mikrosomen werden wie in: J. C. Saari und D. L. Bredberg, "CoA and Non-CoA Dependent Retinol Esterification in Retinal Pigment Epithelium" J. Biol. Chem. 263, 8084-90 (1988) beschrieben erhalten.
Eine Lösung, enthaltend 0,1 M Natriumphosphat, pH 7 Puffer, 5 mM Dithiothreitol, 2 mg/ml Rinderserumalbumin, 40 mikromolar Palmitoyl CoA, 40 mikromolar Dilauroylphosphatidylcholin, 10 mikromolar Retinol und eine Testverbindung oder ein reines Lösungsmittel, wird 1 Stunde bei 37ºC mit einer mikrosomalen Fraktion, die aus retinalen Pigment-Rinder-Epithelialzellen isoliert wurden, inkubiert. Nach Inkubation wird die Reaktion durch Zugabe eines gleichen Volumen Ethanol gestoppt und die gebildeten Retinylester (Laürinsäureretinylester aus der LRAT katalysierten Reaktion und Palmitinsäureretinylester aus ARAT katalysierter Reaktion) werden mit Hexan extrahiert. Die Hexanschicht wird entfernt und der Stickstoff verdampft und der Rückstand durch HPLC an einer 3,9 · 300 mm C&sub1;&sub8;-Umkehrphasensäule, unter Verwendung einer mobilen 80% Methanol-in-Tetrahydrofuran-Phase und Fluoreszenzdetektion (325 nm Anregung, 480 nm Emission), analysiert, um den Retinylester zu quantifizieren. Die Menge an in Gegenwart des reinen Lösungsmittels gebildetem Ester wird als 100% angenommen und diese wird verwendet, um die Prozent Inhibierung der Esterbildung für die getesteten Verbindungen zu berechnen. Als eine Kontrolle wird eine aliquote Menge an Mikrosomen durch Sieden für 5 Minuten inaktiviert, was mindestens 95% Inhibierung der Esterbildung ergibt.
Cyclische aliphatische ungesättigte Kohlenwasserstoffe, Diterpene und bestimmte Fett-Hydroxyethylimidazolin- Tenside sind Beispiele der Verbindungen, die dem vorstehend beschriebenen microsomalen in-vitro-Assay genügen. Diese Verbindungen werden einzeln nachstehend beschrieben. Andere Verbindungen, die hierin nicht explizit beschrieben wurden, sind natürlich in die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen eingeschlossen, solange sie den hierin beschriebenen microsomalen in-vitro-Test bestehen.

Cyclische aliphatische ungesättigte Verbindungen

Geeignete cyclische aliphatische ungesättigte Verbindungen werden gemäß dem vorstehend beschriebenen mikrosomalen in-vitro-Assaytest ausgewählt.
Eine bevorzugte cyclische aliphatische ungesättigte Verbindung aus cyclischen aliphatischen ungesättigten Aldehyden, Ketonen, Alkoholen und Estern ausgewählt wird.
Bevorzugte cyclische aliphatische ungesättigte Aldehyde, Ketone, Alkohole und Ester sind: α-Damascon, β-Damascon, δ-Damascon, Isodamascon, Damascenon, α-Jonon, β-Jonon, Allyl-α-jonon, Isobutyljonon, α-Methyljonon, γ-Methyljonon, Brahmanol, Sandanol, α-Terpineol, Lyral, Safransäureethylester und Gemische davon. Strukturen von diesen Verbindung sind wie nachstehend:
Um vorzugsweise die Leistung bei minimalen Kosten zu maximieren, wird eine cyclische aliphatische ungesättigte Verbindung aus der Gruppe, bestehend aus Damasconen und Jononen mit den vorstehend beschriebenen Strukturen, ausgewählt.
Besonders bevorzugt ist eine cyclische aliphatische ungesättigte Verbindung ein α-Damascon und/oder α-Jonon.
Die cyclische aliphatische ungesättigte Verbindung kann in die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in einer Menge im Bereich von 0, 0001% bis 50 Gewichtsprozent der Zusammensetzung eingeschlossen sein, vorzugsweise wird sie in einer Menge von 0,01% bis 10%, besonders bevorzugt 0,1% bis 5% verwendet.

Diterpene

Zum Einschluss in die vorliegende Erfindung geeignete Diterpene sind jene, die das vorstehend beschriebene mikrosomales in-vitro-Assay bestehen. Eine bevorzugte Diterpenverbindung ist Geranylgeraniol, das die nachstehende Struktur aufweist:
Diterpen kann in die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in einer Menge im Bereich von 0,0001% bis 50% eingeschlossen sein, vorzugsweise wird es in einer Menge von 0,01% bis 10%, besonders bevorzugt 0,1% bis 5%, verwendet.

Fettsäurehydroxyethylimidazolintenside

Fettsäurehydroxyethylimidazolintenside, die in die vorliegende Erfindung eingeschlossen sind, bestehen den vorstehend beschriebenen mikrosomalen in-vitro-Assaytest. Bevorzugte Fettsäurehydroxyethylimidazoline haben die nachstehende allgemeine Struktur:
worin R eine aliphatische gesättigte oder ungesättigte, gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette, enthaltend 8 bis 20 Kohlenstoffatome, darstellt.
Beispiele für geeignete Fettsäurehydroxyethylimidazoline schließen ein, sind jedoch nicht begrenzt auf Cocoylhydroxyethylimidazolin (R ist abgeleitet von Kokosnussölfettsäuren, meist C&sub1;&sub2; und etwas längerer Kette), Laurylhydroxyethylimidazolin (R=CH&sub3;(CH&sub2;)), Myristylhydroxyethylimidazolin (R =CH&sub3;(CH&sub2;)&sub1;&sub2;), Stearylhydroxyethylimidazolin (R=CH&sub3;(CH&sub2;)&sub1;&sub6;) und Oleylhydroxyethylimidazolin (R=CH&sub3;(CH&sub2;)&sub7; CH=CH(CH&sub2;)&sub7;).
Vorzugsweise enthält R in dem Fettsäurehydroxyethylimidazolin 8 bis 18 Kohlenstoffatome, bevorzugter 11 bis 18 Kohlenstoffatome, besonders bevorzugt ist das Fettsäurehydroxyethylimidazolin Oleylhydroxyethylimidazolin aufgrund seiner kommerziellen Verfügbarkeit und Wirksamkeit.
Das Fettsäurehydroxyethylimidazolin kann in die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in einer Menge im Bereich von 0,0001% bis 50% eingeschlossen sein, vorzugsweise wird es einer Menge von 0,01% bis 10%, besonders bevorzugt 0,1% bis 5%, verwendet.

Kosmetisch verträglicher Träger

Die erfindungsgemäße Zusammensetzung umfasst auch einen kosmetisch verträglichen Träger, um als Verdünnungsmittel, Dispersant oder Träger für das Retinol und/oder den Retinylester und den Wirkstoff in der Zusammensetzung zu wirken, um seine Verteilung zu erleichtern, wenn die Zusammensetzung auf die Haut aufgetragen wird.
Träger, die von Wasser verschieden sind oder zusätzlich zu Wasser vorliegen, können flüssige oder feste Erweichungsmittel, Lösungsmittel, Feuchthaltemittel, Verdicker und Pulver einschließen. Ein besonders bevorzugter nichtwässeriger Träger ist ein Polydimethylsiloxan und/oder ein Polydimethylphenylsiloxan. Die erfindungsgemäßen Silikone können jene mit Viskositäten im Bereich von etwa 10 bis 10 000 000 mm²/s (Centistokes) bei 25ºC sein. Besonders erwünscht sind Gemische von Silikonen mit niedriger und hoher Viskosität. Diese Silikone sind von der General Electric Company unter den Handelsmarken Vicasil, SE und SF, und von der Dow Corning Company unter der 200er- und 550er-Reihe erhältlich. Mengen von Silikon, die in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen angewendet werden können, liegen im Bereich von etwa 5% bis 95%, vorzugsweise 25% bis 90 Gewichtsprozent, der Zusammensetzung.
Der kosmetisch verträgliche Träger wird gewöhnlich 5% bis 99,9%, vorzugsweise 25% bis 90 Gewichtsprozent, der Zusammensetzung ausmachen und kann in Abwesenheit von anderen kosmetischen Hilfsmitteln den Rest der Zusammensetzung bilden. Vorzugsweise ist der. Träger mindestens 50%, bevorzugter mindestens 80 Gewichtsprozent Wasser, auf das Gewicht des Trägers. Vorzugsweise umfasst Wasser mindestens 50 Gewichtsprozent der erfindungsgemäßen Zusammensetzung, besonders bevorzugt 60 bis 80 Gewichtsprozent, auf das Gewicht der Zusammensetzung.

Wahlweise Hautvorteilsmaterialien und kosmetische Hilfsstoffe

Ein Öl oder öliges Material kann zusammen mit einem Emulgator vorliegen, unter Bereitstellung von entweder einer Wasser-in-Öl-Emulsion oder einer Öl-in-Wasser-Emulsion, größtenteils in Abhängigkeit von dem mittleren hydrophilenlipophilen Ausgleich (HLB) des angewendeten Emulgators.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen schließen vorzugsweise Sonnenschutzmittel ein. Sonnenschutzmittel schließen jene Materialien, die üblicherweise angewendet werden, um Ultraviolettlicht zu blockieren, ein. Erläuternde Verbindungen sind die Derivate von PABA, Cinnamat und Salicylat. Beispielsweise können Methoxyzimtsäureoctylester und 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon (auch bekannt als Oxybenzon) verwendet werden. Methoxyzimtsäureoctylester und 2-Hydroxy- 4-methoxybenzophenon sind unter den Handelsmarken Parsol MCX bzw. Benzophenon-3 erhältlich. Die exakte Menge an in den Emulsionen angewendetem Sonnenschutzmittel kann in Abhängigkeit vom erwünschten Schutzgrad vor UV-Sonnenstrahlung variieren.
Ein weiterer bevorzugter, wahlweiser Bestandteil ist ausgewählt aus essentiellen Fettsäuren (EFAs); das heißt jenen Fettsäuren, die für die Plasmamembranbildung von allen Zellen essentiell sind, wobei Keratinozyten-EFA-Mangel Zellen hyperproliferativ macht. Die Ergänzung von EFA korrigiert dies. EFA erhöhen auch die Lipidbiosynthese der Epidermis und stellen Lipide für die Sperrbildung der Epidermis bereit. Die essentiellen Fettsäuren werden vorzugsweise aus Linolsäure, γ-Linolensäure, Homo-γ-linolensäure, Columbinsäure, Eicosan-(n-6,9,13)-triensäure, Arachidonsäure, Timnodonsäure, Hexaensäure und Gemischen davon, ausgewählt.
In die erfindungsgemäßen kosmetischen Zusammensetzungen werden häufig Erweichungsmittel eingearbeitet. Anteile von solchen Erweichungsmitteln können im Bereich von 0,5% bis 50%, vorzugsweise zwischen 5% und 30 Gewichtsprozent, der Gesamtzusammensetzung liegen. Erweichungsmittel können in solche allgemeinen chemischen Kategorien, wie Ester, Fettsäuren und Alkohole, Polyole und Kohlenwasserstoffe, eingeteilt werden.
Ester können Mono- oder Diester sein. Annehmbare Beispiele von Fettsäurediestern schließen Adipinsäuredibutylester, Sebacinsäurediethylester, Dimersäurediisopropylester und Bernsteinsäuredioctylester ein. Annehmbare verzweigtkettige Fettsäureester schließen Myristylsäure-2- ethylhexylester, Stearinsäureisopropylester und Palmitinsäureisostearylester ein. Annehmbare dreibasige Säureester schließen Trilinolsäuretriisopropylester und Zitronensäuretrilaurylester ein. Annehmbare geradkettige Fettsäureester schließen Palmitinsäurelaurylester, Milchsäuremyristylester, Erucasäureoleylester und Ölsäurestearylester ein. Bevorzugte Ester schließen Cococaprylat/Caprat (ein Gemisch von Cococaprylat und Cococaprat), Propylenglycolmyristyletheracetat, Adipinsäurediisopropylester und Octansäurecetylester ein.
Geeignete Fettalkohole und -säuren schließen jene Verbindungen mit 10 bis 20 Kohlenstoffatomen ein. Besonders bevorzugt sind solche Verbindungen, wie Cetyl-, Myristyl-, Palmitin- und Stearylalkohole und -säuren.
Unter den Polyolen, die als Erweichungsmittel dienen können, sind lineare und verzweigtkettige Alkylpolyhydroxylverbindungen. Beispielsweise sind Propylenglycol, Sorbit und Glycerin bevorzugt. Auch verwendbar können polymere Polyole, wie Polypropylenglycol und Polyethylenglycol, sein. Butylen- und Propylenglycol sind insbesondere auch als Eindringverstärker bevorzugt.
Beispielhafte Kohlenwasserstoffe, die als Erweichungsmittel dienen können, sind jene mit Kohlenwasserstoffketten, von etwa 12 bis 30 Kohlenstoffatomen. Spezielle Beispiele schließen Mineralöl, Vaseline, Squalen und Isoparaffine ein.
Eine weitere Kategorie von funktionalen Bestandteilen innerhalb der erfindungsgemäßen kosmetischen Zusammensetzungen sind Verdickungsmittel. Ein Verdickungsmittel wird gewöhnlich in Mengen etwa von 0,1 bis 20 Gewichtsprozent, vorzugsweise von 0,5% bis 10 Gewichtsprozent, der Zusammensetzung vorliegen. Beispielhafte Verdickungsmittel sind vernetzte Polyacrylatmaterialien, die unter der Handelsmarke Carbopol von B. F. Goodrich Company erhältlich sind. Gummen können als Xanthan-, Carrageenan-, Gelatine-, Karaya-, Pektin- und Johannesbrotbaumgummi angewendet werden. Unter bestimmten Umständen kann die verdickende Funktion durch ein. Material, das auch als ein Silikon oder Erweichungsmittel dient, bewirkt werden. Beispielsweise haben Silikongummies mit einer Viskosität oberhalb 10 Centistokes und Ester, wie Stearinsäureglycerinester, duale Funktionalität.
In die erfindungsgemäße kosmetische Zusammensetzung können Pulver eingearbeitet werden. Diese Pulver schließen Kreide, Talkum, Fullers-Erde, Kaolin, Stärke, Smectittone, chemisch modifiziertes Magnesiumaluminiumsilikat, organisch modifizierten Montmorillonitton, hydratisiertes Aluminiumsilikat, pyrogene Kieselsäure, Aluminiumstärkeoctenylsuccinat und Gemische davon ein.
Andere in geringerer Menge vorliegende Hilfskomponenten können auch in die kosmetischen Zusammensetzungen eingearbeitet werden. Diese Bestandteile können färbende Mittel, Opazitätsmittel und Parfums einschließen. Mengen dieser anderen in geringer Menge vorliegenden Hilfskomponenten können im Bereich von etwa 0,001% bis zu 20 Gewichtsprozent der Zusammensetzung liegen.

Verwendung der Zusammensetzung

Die erfindungsgemäße Zusammensetzung ist hauptsächlich als Produkt zur örtlichen Auftragung auf menschliche Haut, insbesondere als Mittel zum Konditionieren und Glätten der Haut und Verhindern oder Vermindern des Aussehens von faltiger oder gealterter Haut vorgesehen.
Bei der Verwendung wird eine kleine Menge der Zusammensetzung, beispielsweise 1 bis 100 ml, auf exponierte Flächen der Haut aus einem geeigneten Behälter oder Applikator aufgetragen und, falls erforderlich, wird sie dann darüber verteilt und/oder unter Verwendung der Hand oder Finger oder einer geeigneten Vorrichtung in die Haut eingerieben.

Produktform und Verpackung

Die erfindungsgemäße örtliche Hautbehandlungszusammensetzung kann als Lotion, Fluidcreme, Creme oder Gel formuliert werden. Die Zusammensetzung kann in einem geeigneten Behälter verpackt werden, der sich für ihre Viskosität und zur vorgesehenen Verwendung durch den Verbraucher eignet. Beispielsweise kann eine Lotion oder Creme in eine Flasche oder einen Rollkugelapplikator oder eine Kapsel oder eine mit Treibmittel betriebene Aerosolvorrichtung oder einen mit einer Pumpe zur geeigneten Fingerbetätigung ausgestatteten Behälter verpackt werden. Wenn die Zusammensetzung eine Creme darstellt, kann sie einfach in einer nicht verformbaren Flasche oder einem Quetschbehälter, wie eine Tube, oder einer mit Deckel versehenen Dose, aufbewahrt werden.
Die Zusammensetzung kann auch in Kapseln, wie jene, beschrieben in US-Patent 5 063 057, eingeschlossen sein.
Die Erfindung stellt folglich auch einen verschlossenen Behälter, der eine hierin definierte kosmetisch verträgliche Zusammensetzung enthält, bereit.
Die nachstehenden speziellen Beispiele erläutern weiterhin die Erfindung.

MATERIALIEN UND VERFAHREN

Zellkultur:

Humankeratinozyten, isoliert aus neonataler Vorhaut durch Trypsinbehandlung, wurden in Dulbecco's modifiziertem Eagle-(DME) plus Hams F12-(1 : 1)-Medium/10%igem fötalem Kalbsserum in Gegenwart von bestrahlten 3T3-Maus-Fibroblasten zur Herstellung einer Teilung von Keratinozytenkolonien wachsen lassen. Die Zellen wurden unter der vorstehenden Bedingung wachsen lassen bis zu ihrer zweiten Passage und bis zur zukünftigen Verwendung gefroren gehalten. Gefrorene Keratinozyten der zweiten Passage wurden aufgetaut und in dem vorstehenden Medium angeordnet und für fünf Tage wachsen lassen, bevor sie zu einem serumfreien MCDB-153-Basenmedium Keratinozytenwachstumsmedium (KGM) von Clonetics Corporation, San Diego, CA, enthaltend 0,15 mM Ca, oder Keratinozyten serumfreiem Medium (KSFM) von GIBCO, enthaltend 0,09 mM Ca), umgestellt wurden. Am Tag 7, als die Zellen 80-90% zusammengeflossen waren, wurden sie trypsinisiert und für verschiedene Versuche in serumfreiem Medium angeordnet.

Thymidinassay

³H-Thymidineinbau und Keratinozytenproliferation

Der Einbau von ³H-Thymidin durch gezüchtete Keratinozyten wurde als Assay zur Keratinozytenproliferation verwendet. Thymidin ist eines der vier Desoxynucleoside, die monomere Einheiten von DNA sind, die Universalbibliothek der genetischen Information im Tierreich. Vor der Zellteilung einer somatischen Zelle, wie eines Keratinozyten, wird das vollständige Genom der Zelle, das Zellteilung unterliegt, repliziert. Dies beinhaltet DNA-Synthese in großem Maßstab durch die Zelle und ermöglicht beiden Tochterzellen, identische Kopien des genetischen Materials zu empfangen. Wenn ³H- Thymidin in die Kulturmedien der Keratinozyten eingeschlossen ist, welche DNA bei der Herstellung von Zellteilung synthetisieren, dann wird das markierte Nucleosid in neu synthetisierte DNA eingebaut. Das Ausmaß des Einbaus von ³H- Thymidin in eine Zellpopulation ist proportional zur Geschwindigkeit der DNA-Synthese durch diese Zellpopulation und deshalb ein Hinweis für deren Zellproliferation.
Keratinozyten (die wie vorstehend beschrieben gezüchtet wurden) wurden in 24 Vertiefungsplatten bei einer Dichte von 20000 Zellen pro Vertiefung in 1-ml-Medien angeordnet. Nach Inkubation für 4 Tage oder bis die Zellen 60- 70% zusammengeflossen waren, wurden die Medien gewechselt. Die Testverbindungen wurden zu den Vertiefungen 24 Stunden nach der Medienänderung zugegeben (dreifach) und vier Stunden später wurde 1 uCi ³H-Thymidin in 50 ul Medien pro Vertiefung zugegeben. Die Zellen wurden für weitere 24 Stunden inkubiert. Die Medien wurden aus den Zellen entfernt, 10% eiskalte Trichloressigsäure (TCA) zugegeben und die Platten wurden 30 Minuten auf Eis inkubiert. Die Zellen wurden fünfmal mit 5%iger TCA gewaschen und in 500 ul 0,1 M NaOH für mindestens eine Stunde (gewöhnlich über Nacht) auflösen lassen. Die Zubereitungen wurden mit 0,1 M HCl neutralisiert, wobei 50 ul der Zellzubereitung verwendet wurden, um den gesamten Proteingehalt zu bestimmen. Der Zerfall pro Minute (DPM) aus der ³H-Markierung von DNA wurde durch Flüssigszintillationszählen von 900 ul der Zellzubereitung bestimmt. Thymidineinbauergebnisse wurden als DPM/ug Protein ausgedrückt.

TRANSGLUTAMINASE-ASSAY

Transglutaminase-Assay und Keratinozyten-Differenziation

Während des Vorgangs der terminalen Differenziation in der Epidermis wird eine 15 nm dicke Schicht Protein, bekannt als verhornter Umhüllung (CE), auf der inneren Oberfläche der Zellperipherie gebildet. Der CE ist aus zahlreichen verschiedenen Proteinen zusammengesetzt, die miteinander durch die Bildung von N&epsi;-(γ-Glutamyl)lysinisodipeptidbindungen, katalysiert durch die Wirkung von mindestens zwei verschiedenen in der Epidermis exprimierten Transglutaminasen (TGasen), vernetzt sind. Transglutaminase T (TGase I) wird im Überschuss in den differenzierten Schichten der Epidermis, insbesondere der granulären Schicht, exprimiert und liegt in der undifferenzierten Basalepidermis nicht vor. Somit ist TGase I ein verwendbarer Marker von epidermaler Keratinozytendifferentiation bei hohen TGase-I-Spiegeln, was eineh differenzierteren Zustand ausweist. Ein auf ELISA basierendes TGase-I-Assay unter Verwendung eines TGase-I- Antikörpers wurde zum Bewerten des Zustands der Differentiation von gezüchteten Keratinozyten in den folgenden Beispielen verwendet.
Für Beispiel 1 wurde das nachstehende Verfahren verwendet:
Keratinozyten (gezüchtet wie vorstehend beschrieben) wurden in 96-Vertiefungs-Platten bei einer Dichte von 3 000 Zellen pro Vertiefung in 200 ul Medien plattiert. Nach Inkubation für vier Tage wurden die Medien zu Medien, die Testverbindungen enthalten (sechs Wiederholungen pro Test), geändert. Die Zellen wurden für weitere 72 Stunden gezüchtet, wonach die Medien belüftet wurden und die Platten bei -70ºC gelagert wurden. Die Platten wurden aus dem Gefrierschrank entfernt und die Zellen mit PBS gewaschen. 100 ul steriles Wasser wurden zugesetzt und die Zellen wurden gefriergebrochen durch Gefrieren bei -70ºC, dann Auftauen. Die Zellen wurden eine Stunde bei Raumtemperatur (R/T) mit PBS/3% BSA (Waschpuffer, Rinderserumalbumin) inkubiert, dann mit einer frischen aliquoten Menge Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden mit 50 ul von primärem Antikörper monoklonalen Anti-Human-Transglutaminase-Maus-Antikörper (IgG), erhalten von Biomedical Industries, verdünnt 1 : 2 000 in Waschpuffer für eine Stunde bei 37ºC inkubiert, dann zweimal mit Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden dann mit 50 ul sekundärem Antikörper (Fab Fragment, Peroxidase, konjugiertem Anti- Maus-IgG, erhalten von Amersham), verdünnt 1 : 4 000 in Waschpuffer für eine Stunde bei 37ºC inkubiert, dann zweimal mit Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden mit Substratlösung (4 mg o-Phenylenäiamin und 3,3 ul 30%igem H&sub2;O&sub2; in 10 ml 0,1 M Citratpuffer, pH 5,0) für fünf Minuten R/T in der Dunkelheit (unter Aluminiumfolie) inkubiert. Die Reaktion wurde durch die Zugabe von 50 ul 4N H&sub2;SO&sub4; gestoppt. Die Absorption der Proben wurde bei 492 nm in einem Plattenleser gelesen. Außer den sechs Wiederholungen wurden vier mit beiden Antikörpern behandelt, wobei zwei nur mit dem sekundären Antikörper (das heißt zum Bestimmen des Hintergrundbindens des Enzymkonjugierten Ab) behandelt würden. IGase-Spiegel wurden durch Subtrahieren des Hintergrunds von den Lesungen von jeder Behandlung und Bestimmen der mittleren ± Standardabweichung für die für beide Antikörper ausgedrückten Wiederholungen bestimmt.
Für andere Beispiele, in denen der Tgase I-Spiegel gemessen wurde, wurde das nachstehende Verfahren verwendet:
Keratinozyten (gezüchtet wie vorstehend beschrieben) wurden in 96-Vertiefungs-Platten bei einer Dichte von 3 000 Zellen pro Vertiefung in 200 ul Zellkulturmedien angeordnet. Nach Inkubation für 4 Tage wurden die Medien zu Medien, die Testverbindungen enthalten (sechs Wiederholungen pro Test) geändert. Die Zellen wurden für weitere 72 Stunden gezüchtet, wonach die Medien belüftet wurden und die Platten bei -70ºC gelagert wurden. Anschließend wurden die Platten aus dem Gefrierschrank entfernt, die Zellen wurden weiter gefriergebrochen durch Gefrieren und Auftauen und dann 3x mit PBS gewaschen. Die Zellen wurden eine Stunde bei Raumtemperatur (R/T) mit TBS/5% BSA Puffer inkubiert. Die Zellen wurden dann mit 100 ul monoklonaler Anti-Human-Transglutaminase-(IgG)-Maus-Antikörper (primärer Antikörper), erhalten von Biomedical Technologies Inc., verdünnt 1 : 2 000 in TBS/1% BSA Puffer, für zwei Stunden bei 37ºC inkubiert und dann sechsmal mit Waschpuffer (TBS/1% BSA/0,05% Tween-20) gespült. Die Zellen wurden dann mit 100 ul Fab-Fragment, Peroxidase-konjugiertem Anti-Maus-IgG-Antikörper. (sekundärer Antikörper) von Amersham, verdünnt 1 : 4 000 in Waschpuffer, für zwei Stunden bei 37ºC inkubiert und dann dreimal mit Waschpuffer und dreimal mit PBS gespült. Die Zellen wurden mit Substratlösung (4 mg o-Phenylendiamin und 3,3 ul 30% H&sub2;O&sub2; in 10 ml 0,1 M Citratpuffer, pH 5,0) für fünf Minuten bei R/T und in der Dunkelheit (unter Aluminiumfolie) inkubiert. Die Reaktion wurde durch die Zugabe von 50 ul 4 N H&sub2;SO&sub4; gestoppt. Die Absorption der Proben wurde bei 492 nm in dem Plattenleser gelesen. Außerhalb der sechs Wiederholungen wurden vier mit beiden Antikörpern behandelt, wobei zwei nur mit dem sekundären Antikörper behandelt wurden (das heißt, um das Hintergrundbinden des Enzymkonjugierten Antikörpers zu bestimmen). Transglutaminase-I-(TGase-I)-Spiegel wurden durch Subtrahieren des Hintergrunds von den Lesungen von jeder Behandlung und Bestimmen der mittleren ± Standardabweichung für die beiden Antikörper exponierten Wiederholungen bestimmt.

DNA-Assay

Der Spiegel von TGase I, detektiert nach Behandlung der Zellen, könnte durch die Zellzahl beeinflusst werden; das heißt, je größer die Anzahl von Zellen, umso größer ist der detektierte TGase-I-Spiegel. Der TGase-I-Spiegel wurde auf DNA-Gehalt der Zellen in der gleichen Vertiefung normalisiert, wodurch somit die Variation aufgrund der Unterschiede in der Zellzahl beseitigt wird. Die DNA-Zahlenangabe ist ein besonders verwendbarer Indikator der Zellzahl, einschließlich der Keratinozytenzellzahl, weil jede Zelle für alle Absichten und Zwecke ein identisches Genom aufweist und deshalb eine gleiche Menge an DNA. Der Gesamt-DNA-Gehalt einer Vertiefung von Zellen ist deshalb direkt proportional der Zellzahl in der Vertiefung. Die Mengenangabe der DNA wurde verwendet, um die TGase-Daten der Zellzahl zu normalisieren.
Keratinozyten wurden in 96-Vertiefungs-Platten bei einer Dichte von 3 000 Zellen pro Vertiefung in 200 ul Medien plattiert. Nach Inkubation für vier Tage wurden die Medien auf Medien-enthaltende Testverbindungen (6 Wiederholungen pro Test) verändert. Die Zellen wurden für weitere 72 Stunden gezüchtet, wonach die Medien belüftet wurden und die Platten für mindestens 1,5 Stunden bei -70ºC gelagert wurden. Die Platten wurden aus dem Gefrierschrank entfernt und 30 Minuten aufgetaut. 100 ul/Vertiefung Hoechst Farbstoff (1 ug/ml Endkonzentration) wurden zugegeben und dies wurde 15 Minuten inkubiert, bedeckt und dann in einem Fluorimeter (Ex. 360 nm und Em. 460 nm) gelesen. Die Farbstofflösung wurde entfernt und die Vertiefungen wurden mit PBS in der Zubereitung für das TGase-Assay gespült.

BEISPIEL 1

Retinsäure ist wirksamer als Retinol beim Verändern des Keratinozyten-Differentiationszustands

Die Wirkung von Transglutaminasespiegeln, normalisiert auf DNA-Gehalt der Zellen nach Zugabe von Retinsäure (RA) und Retinol (ROH), wurde geprüft und die Ergebnisse werden in Tabelle 1 gezeigt. TABELLE 1
n = 3
Alle Konzentrationen von getesteter Retinsäure; das heißt 2,5 · 10&supmin;&sup7; M, 2,5 · 10&supmin;&sup8; M und 2,5 · 10&supmin;&sup9; M, senkten die Keratinozytendifferentiation zu einem wesentlich größeren Ausmaß als jede der entsprechenden 2,5 · 10&supmin;&sup7; M, 2,5 · 10&supmin;&sup8; M und 2,5 · 1&supmin;&sup9; M Retinolbehandlung. Die Senkung des Transglutaminasespiegels war für sowohl Retinsäure als auch Retinol dosisabhängig. Dies stimmt mit der Retinsäure mit einer größeren inhibitorischen Wirkung auf epitheliale Differentiation als Retinol überein.

Beispiel 2

Verfahren der mikrosomalen in-vitro-Veresterung von Retinol: Mikrosomen werden erhalten wie beschrieben in: J. C. Saari und D. L. Bredberg, "CoA and Non-CoA Dependent Retinol Esterification in Retinal Pigment Epithelium" J. Biol. Chem. 23, 8084-90 (1988).
Eine Lösung, enthaltend 0,1 M Natriumphosphat-Puffer pH 7, 5 mM Dithiothreitol, 2 mg/ml Rinderserumalbumin, 40 Mikromolar Palmitoyl-CoA, 40 Mikromolar Dilauroylphosphatidylcholin, 10 Mikromolar Retinol und eine Testverbindung oder Blindlösungsmittel, wurde eine Stunde bei 37ºC mit einer Mikrosomalfraktion, isoliert aus Rindernierenpigmentepithelialzellen, inkubiert. Nach Inkubation wurde die Reaktion durch Zugabe eines gleichen Volumens Ethanol gestoppt und die gebildeten Retinylester (Palmitinsäureretinylester aus der ARAT katalysierten Reaktion und Laurinsäureretinylester aus der LRAT katalysierten Reaktion) wurden mit Hexan extrahiert. Die Hexanschicht wurde entfernt und der Stickstoff eingedampft und der Rückstand durch HPLC an einer 3,9 · 300 mm C18 Umkehrphasensäule, unter Verwendung einer 80% Methanol in Tetrahydrofuran mobilen Phase und Fluoreszenzdetektion (325 nm Anregung, 480 nm Emission) zum Quantifizieren der Retinylester analysiert. Die Menge an in Gegenwart des Blindlösungsmittels gebildetem Ester wurde als 100% genommen und dies wurde zum Berechnen der Prozent Inhibierung der Esterbildung für die getesteten Verbindungen berechnet. Als eine Kontrolle wurde eine aliquote Menge von Mikrosomen durch Sieden für 5 Minuten inaktiviert, was mindestens 95% Inhibierung der Esterbildung ergab.
Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 2 zusammengefasst. Tabelle 2
Es ist ersichtlich, dass das Hydroxyethylimidazolin- Tensid ein starker Veresterungsinhibitor ist, während andere Tenside und andere heterocyclische Verbindungen im Wesentlichen inaktiv waren. Caprylsäurehydroxyethylimidazolin (R=CH&sub3;(CH&sub2;)&sub6;) inhibierte LRAT nicht ausreichend.

Beispiel 3

Beispiel 2 wurde wiederholt mit verschiedenen Hydroxyethylimidazolin-Tensiden, mit wie in Tabelle 3 ausgewiesenen R Gruppen. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 3 zusammengefasst. Tabelle 3
Die Ergebnisse in Tabelle 3 zeigen relative Aktivität Oleyl > Coco > Lauryl. Coco ist besser geeignet, weil es nicht reines C&sub1;&sub2; ist, sondern ebenfalls etwas längerkettige Alkylgruppen aufweist.
Die Daten in Tabelle 2 an Caprylhydroxyethylimidazolin zeigen nur 8% Inhibierung bei 100 Mikromolar. Zusammengenommen zeigen die Daten eine deutliche relative Aktivität Oleyl > Coco > Lauryl > > Capryl.

Beispiel 4

Transglutaminase-Assay wurde unter Verwendung von Oleylhydroxyethylimidazolin (OHI), Retinsäure (RA), Retinol (ROH) und Palmitinsäureretinylester (RP) durchgeführt.
Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 4 zusammengefasst: Tabelle 4
Es wird aus den Ergebnissen in Tabelle 4 ersichtlich, dass Retinsäure die Keratinocytendifferentiation wesentlich vermindert, wohingegen Retinol, Oleylhydroxyethylimidazolin und Palmitinsäureretinylester die Keratinocytendifferentiation, wenn einzeln verwendet nicht beeinflussen oder dies in einem viel kleineren Ausmaß als bei Retinsäure geschieht.
In Versuchen 1 und 2 war, wenn Retinol mit Oleylhydroxyethylimidazolin kombiniert wurde, das Ergebnis eine synergistische Senkung der Keratinocytendifferentiation auf Anteile, die sich der Wirkung von Retinsäure nähern.
In Versuch 3, wenn Oleylhydroxyethylimidazolin mit Palmitinsäureretinylester kombiniert wurde, war das Ergebnis nicht so dramatisch wie in Versuchen 1 und 2, trotzdem wurde jedoch eine synergistische Senkung beobachtet.
Dieses Beispiel bestätigt auch, dass eine Verbindung, die das hierin beschriebene mikrosomale in-vitro-Assay besteht, tatsächlich eine Wirkung auf Keratinocyten ausübt, wenn mit Retinol bei einem Anteil von kleiner als der Wirkung von Retinsäure kombiniert wurde.

Beispiel 5

Der mikrosomale in-vitro-Assaytest wurde an den in Tabellen 5 A und 5 B angeführten Verbindungen ausgeführt.
Die Verbindungen in Tabelle 5 A wurden bei einer 100 uM Konzentration getestet. Die Verbindungen in Tabelle 5 B wurden bei einer 10 uM Konzentration getestet, Tabelle 5 A Tabelle 5 B
Es wird aus den Ergebnissen in Tabellen 5 A und 5 B ersichtlich, dass bestimmte cyclische aliphatische ungesättigte Verbindungen starke Inhibitoren von LRAT und ARAT katalysierter Retionlveresterung sind.

Vergleichsbeispiel 6

Mikrosomaler in-vitro-Assaytest wurde mit zusätzlichen cyclischen aliphatischen ungesättigten Verbindungen durchgeführt. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 6 zusammengefasst.
Die Verbindungen in Tabelle 6 wurden bei einer 100 uM Konzentration getestet. Tabelle 6
Es wird aus den Ergebnissen in Tabelle 6 ersichtlich, dass nicht alle cyclischen aliphatischen ungesättigten Verbindungen LRAT und ARAT katalysierte Retinolveresterung inhibieren oder ausreichend inhibieren.

Beispiel 7

Die Wirkung von Keratinocytendifferentiation auf Verbindungen und Kombinationen, die in Tabelle 7 angeführt werden, wurden geprüft. Die Ergebnisse werden als % Kontrolle ausgedrückt. Der Transglutaminaseanteil wurde auf DNA normalisiert. Die Daten sind aus den zwei Versuchen, in denen die Retinolkonzentration verändert wurde. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 7 zusammengefasst. Tabelle 7
Die Ergebnisse in Tabelle 7 zeigen, dass während α- Damascon allein und Retinol allein nicht wirksam waren, die Kombination der zwei eine synergistische Verminderung bei der Transglutaminase im Nachahmen der Wirkung von Retinsäure auf Keratinocytendifferentiation erreichten. Dieses Beispiel setzt auch eine gute Korrelation zwischen den mikrosomalen Assay- und Zellkulturdaten fest.

Beispiel 8

Der mikrosomale in-vitro-Assaytest wurde mit einer Diterpenverbindung, Geranylgeraniol oder Farnesol durchgeführt.
Die Ergebnisse, die erhalten wurden, werden in Tabelle 8 zusammengefasst. Tabelle 8
¹ Erhalten von TCI America (Portland, Oregon). Auch erhältlich von Sigma und CTC Organics (Atlanta, Georgia).
² Erhältlich von Givaudan Co., Bedoukian Co. oder Dragoco Co.
Es wird aus den Ergebnissen in Tabelle 8 ersichtlich, dass sowohl Geranylgeraniol also auch Farnesol Retinolveresterung inhibieren. Geranylgeraniol ist ein wesentlich stärkerer Veresterungsinhibitor als Farnesol, die Struktur dafür ist wie nachstehend:

Beispiel 9

³H-Thymidin-Einbau wurde gemäß dem in vorstehendem Abschnitt "Materialien und Verfahren" beschriebenen Verfahren gemessen. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabellen 9 A und 9 B zusammengefasst. Tabelle 9 A Tabelle 9 B
Es wird aus den vorstehenden Ergebnissen ersichtlich, dass Geranylgeraniol in der Lage ist, die proliferationsverstärkende Wirkung von Retinol bei einem Anteil ähnlich zu jenem, der mit einer vergleichbaren Menge an Retinsäure erreicht wurde, wesentlich zu erhöhen. Wiederum zeigte sich eine gute Korrelation, die zwischen dem mikrosomalen Assaytest und der Wirkung einer Verbindung auf Zellkultur vorliegt.

Beispiel 10

Das mikrosomale in-vitro-Assay wurde an den in Tabelle 10 angeführten Verbindungen durchgeführt. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 10 zusammengefasst. Die Verbindungen in Tabelle 10 wurden bei 100 uM Konzentration getestet. Tabelle 10

Beispiel 11

Naringenin und Retinol synergistische Inhibierung der Keratinocytendifferentiation

Die Wirkung auf TGase I-Anteile normalisiert auf DNA-Gehalt der Zellen wurde in Reaktion auf eine 72 Stunden Behandlung mit den Testverbindungen geprüft. Die Ergebnisse werden in Tabelle 11 gezeigt. Naringenin wurde von Sigma erhalten. Tabelle 11 Wirkung von Retinol und Naringenin auf Keratinocyten-TGase/DNA
n = 3
Es wird aus den Ergebnissen in Tabelle 11 ersichtlich, dass 2,5 · 10&supmin;&sup7; M Retinsäure sehr wirksam war bei der Repression von Keratinocyten TGase I-Spiegeln (auf 42% Kontrollspiegel). 2,5 · 10&supmin;&sup9; M Retinol (91%) war unwirksam und 10&supmin;&sup7; Naringenin hatte keine Inhibitorwirkung auf den Keratinocyten-TGase I-Spiegel, wenn einzeln verwendet. Jedoch 2,5 · 10&supmin;&sup9; M Retinol+10&supmin;&sup7; M Naringenin reprimierte Keratinocyten TGase I auf 53% Kontrollspiegel. Naringenin und Retinol wirkten deshalb synergistisch zum Senken der Keratinocytendifferentiation in einer analogen Weise zu der Wirkung von Retinsäure.

Beispiel 12

Naringenin und Palmitinsäureretinylester synergistische Inhibierungs-Keratinocytendifferentiation

Die Wirkung auf TGase I-Spiegel normalisiert auf DNA-Gehalt der Zellen wurde in Reaktion auf eine 72 Stunden- Behandlung mit Testverbindungen geprüft. Die Ergebnisse werden in Tabelle 12 gezeigt.
Tabelle 12 Wirkung von Palmitinsäureretinylester und Naringenin auf Keratinocyten TGase/DNA
n = 3
Es wird aus den Ergebnissen in Tabelle 12 ersichtlich, dass 2,5 · 10&supmin;&sup7; M Retinsäure sehr wirksam bei der Repression von Keratinocyten-TGase I-Spiegeln war (32% Kontrollspiegel). 2,5 · 10&supmin;&sup8; M Palmitinsäureretinylester war unwirksam (93%) und 10&supmin;&sup8; M Naringenin hatte eine kleine inhibitorische Wirkung auf den Keratinocyten-TGase I-Spiegel, wenn einzeln verwendet. Jedoch 2,5 · 10&supmin;&sup8; M Retinol + 10&supmin;&sup9; M Naringenin reprimierte Keratinocyten-TGase I auf 85% Kontrollspiegel. Näringenin und Palmitinsäureretinylester wirken deshalb synergistisch zum Reprimieren von Keratinocytendifferentiation in analoger Weise zu der Wirkung von Retinsäure.

Beispiel 13

Quercetin und Retinol synergistische Inhibierungs- Keratinocytendifferentiation

Die Wirkung von TGase I-Spiegeln, normalisiert auf DNA Gehalt der Zellen, wurde in Reaktion auf eine 72 Stunden-Behandlung mit den Testverbindungen geprüft. Die Ergebnisse werden in Tabelle 13 gezeigt. Quercetin wurde von Sigma erhalten. Tabelle 13
n = 3
Es wird aus den Ergebnissen in Tabelle 13 ersichtlich, dass 2,5 · 10&supmin;&sup7; M Retinsäure bei der Repression von Keratinocyten-TGase I-Spiegeln wirksam war (auf 52% Kontrollspiegel). 2,5 · 10&supmin;&sup7; M Retinol war unwirksam (90%) und 10&supmin;&sup6; M Quercetin hatte nur eine geringe Inhibitorwirkung auf den Keratinocyten-TGase I-Spiegel, wenn einzeln verwendet. Jedoch 2,5 · 10&supmin;&sup7; M Retinol + 10&supmin;&sup6; M Quercetin reprimierte Keratinocyten TGase I auf 70% Kontrollspiegel. Quercetin und Retinol wirkten deshalb synergistisch beim Reprimieren von Keratinocytendifferentiation in einer analogen Weise zu der Wirkung von Retinsäure.
Während des Verlaufs dieser Studien wurde Retinsäure als positive Kontrolle und Bezugsverbindung, gegen die die anderen Verbindungen unter Analyse verglichen wurden, verwendet. Retinsäure in einer dosisabhängigen Weise senkte Transglutaminase I-Spiegel in Hautkeratinocyten. In anderen Worten senkte Retinsäure die Keratinocytendifferentiation. Retinol und Palmitinsäureretinylester waren wesentlich weniger wirksam als Retinsäure beim Inhibieren der Keratinocytendifferentiation.
Das unerwartete Ergebnis, das durch die vorstehenden Beispiele gezeigt wurde, bestand jedoch darin, dass die Wirkung von Retinol oder Retinylester auf kultivierte Keratinocyten verstärkt werden kann auf Spiegel, die sich jenem von Keratinsäure durch Kombinieren von Retinol oder den Estern mit einer Verbindung, die von 0,0001% bis 50% einer Verbindung ist, welche bei einer 100 uM Konzentration mindestens 20% LRAT oder ARAT katalysierte Retinolveresterung, wie durch das mikrosomale in-vitro-Assay gemessen, inhibiert, verstärkt. Diese Wirkung war nicht nur größer als die Wirkung von entweder Retinol oder dem Ester oder der Verbindung selbst, sondern die zwei Bestandteile wirkten in Synergie miteinander, zum Fördern der Retinsäure-Typreaktion auf die Keratinocyten.
Die vorstehend angeführten Ergebnisse zeigen, dass die Verbindungen, die das mikrosomale in-vitro-Assay bestehen, synergistisch mit Retinol und Retinylestern wirken, um Keratinocytendifferentiation zu senken und/oder Keratinocytenproliferation zu erhöhen unter Nachahmen der Wirkung auf Keratinocyten von Retinsäure.
Beispiele 14 bis 19 erläutern örtliche erfindungsgemäße Zusammensetzungen. Die Zusammensetzungen können in herkömmlicher Weise verarbeitet werden. Sie sind zur kosmetischen Verwendung geeignet, insbesondere sind die Zusammensetzungen zur Auftragung auf faltige, raue, trockene, schuppige, gealterte und/oder UV-geschädigte Haut geeignet, um das Aussehen und das Anfühlen davon zu verbessern, sowie zur Auftragung auf gesunde Haut, um Verschlechterung davon zu verhindern oder zu verzögern.

Beispiel 14

Dieses Beispiel erläutert Wasser-in-Öl-Emulsionen mit einer hohen inneren Phase und Einarbeiten der erfindungsgemäßen Zusammensetzung.
* Brij 92 ist Polyoxyethylen (2)-Oleylether.

Beispiel 15

Dieses Beispiel erläutert Öl-in-Wasser-Cremes gemäß der Erfindung.
* Brij 56 ist Cetylalkohol POE (10) Alfol 16 RD ist Cetylalkohol

Beispiel 16

Dieses Beispiel erläutert alkoholische Lotionen gemäß der Erfindung.

Beispiel 17

Diese Beispiel erläutert eine weitere alkoholische Lotion, die die erfindungsgemäße Zusammensetzung enthält.
%-Gewicht/Gewicht
Retinol 0,15
Oleylhydroxyethylimidazolin 0,1
Ethanol 40
Antioxidantien 0,1
Parfum qs
Wasser auf 100

Beispiel 18

Dieses Beispiel erläutert eine Sonnenschutzcreme unter Einarbeiten der erfindungsgemäßen Zusammensetzung.
%-Gewicht/Gewicht
Palmitinsäureretinylester 0,01
Cocoylhydroxyethylimidazolin 0,1
Silicone oil 200 cst 7,5
Glycerylmoriostearat 3
Cetosterylalkohol 1,6
Polyoxyethylen-(20)- Cetylalkohol 1,4
Xanthangummi 0,5
Parsol 1789 1,5
Methoxyzimtsäureoctylester (PARSOL MCX) 7
Parfum qs
Farbe qs
Wasser auf 100

Beispiel 19

Dieses Beispiel erläutert eine nicht wässrige Hautpflegezusammensetzung unter Einarbeitung der erfindungsgemäßen Kombination.
%-Gewicht/Gewicht
Palmitinsäureretinylester 0,15
Laurylhydroxyethylimidazolin 1
Silicone gum SE-30¹ 10
Silicone fluid 345² 20
Silicone fluid 344³ 55,79
Squalen 10
Linoleinsäure 0,01
Cholesterin 0,03
2-Hydroxy-n-octansäure 0,7
Vitamin E-Linoleat 0,5
Kräuteröl 0,5
Ethanol 2
¹ Ein Dimethylsilikonpolymer mit einem Molekulargewicht von mindestens 50 000 und einer Viskosität von mindestens 10 000 Centistokes bei 25ºC, erhältlich von GEC.
² Dimethylsiloxan cyclisches Pentamer, erhältlich von Dow Corning Corp.
³ Dimethylsiloxantetramer, erhältlich von Dow Corning Corp.
Falls nicht in den Beispielen erwähnt, werden die in der vorliegenden Erfindung angewendeten Materialien aus den nachstehenden Quellen erhalten: Palmitoyl CoA, BSA, Dilauroylphosphatidylcholin, Retinol, Retinsäurdithotreitol - von Sigma.
Cyclische aliphatische ungesättigte Verbindungen: Damascone von Firmenich; Jonone von IFF; andere Hersteller in "Flavor and Fragance Materials" 1991, von Allured Pub. Co.
Imidazolintenside: Das Oleylimidazolin war Schercozolin O von Scher Chemical Co., die anderen waren von Mcmtyre unter dem Mackazolinnamen wie nachstehend: Caprylic, Coco, Lauryl: Mackazoline CY, C beziehungsweise L.

Claims

1. Hautpflegezusammensetzung, umfassend:

a) 0,001% bis 10% einer Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Retinol, Retinylester und Gemischen davon;

b) 0,0001% bis 50% einer Verbindung, die bei einer Konzentration von 100 uM mindestens 20% einer LRAT oder ARAT katalysierten Retinolveresterung, wie durch ein hierin beschriebenes mikrosomales in-vitro-Assay gemessen, inhibiert; wobei die Verbindung kein Fettsäureamid oder Dimethylimidazolidinon darstellt und aus der Gruppe, bestehend aus cyclischen aliphatischen ungesättigten Kohlenwasserstoffen, Diterpenen und Fettsäurehydroxyethylimidazolintensiden der nachstehenden Struktur:

worin R eine aliphatische gesättigte oder ungesättigte gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette mit 8 bis 20 Kohlenstoffatomen darstellt und Gemischen, davon ausgewählt ist und

c) einen kosmetisch verträglichen Träger.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin die cyclische aliphatische ungesättigte Verbindung aus der Gruppe, bestehend aus α-Damascon, β-Damascon, δ-Damascon, Isodamascon, Damascenon, α-Jonon, β-Jonon, Allyl-α-jonon, Isobutyljonon, α-Methyljonon, γ-Methyljonon, Brahmanol, Sandanol, α- Terpineol, Lyral, Safransäureethylester und Gemischen davon ausgewählt ist.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin das Diterpen Geranylgeraniol darstellt.

4. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin der Retinylester aus der Gruppe, bestehend aus Palmitinsäureretinylester, Essigsäureretinylester, Propionsäureretinylester, Linolsäureretinylester und Gemischen davon, ausgewählt ist.

5. Kosmetisches Verfahren zum Konditionieren von Haut, wobei das Verfahren Auftragen einer kosmetischen Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 örtlich auf die Haut umfasst.

6. Kosmetisches Verfahren zum Konditionieren von Haut durch Nachahmen der Wirkung von Retinsäure, wobei das Verfahren Auftragen der kosmetischen Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 auf die Haut umfasst.