DE69920487T2

DE69920487T2 - Tau als marker für frühe schäden des zentralen nervensystems

Info

Publication number: DE69920487T2
Application number: DE69920487T
Authority: DE
Inventors: Frank Hulstaert; Eugeen Vanmechelen; Hugo Vanderstichele; Andre Van De Voorde; Stefaan Van Gool
Original assignee: Innogenetics NV SA
Current assignee: Fujirebio Europe NV SA
Priority date: 1998-09-08
Filing date: 1999-09-07
Publication date: 2006-03-09
Anticipated expiration: 2019-09-08
Also published as: BR9913112A; HK1040429A1; AU5974699A; JP4624559B2; DE69920487D1; ES2229817T3; JP2002524740A; ATE277353T1; HK1040429B; WO2000014546A1; CN101046476B; CN1325491A; AU772151B2; EP1112500B1; CN101046476A; EP1112500A1; CA2340433A1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der ZNS-Schädigung. Die vorliegende Erfindung betrifft ein neues Verfahren zur frühen Diagnose von ZNS-Schädigung durch Erfassen und/oder Quantifizierung von tau.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Eine Schädigung des Zentralnervensystems (ZNS-Schädigung) wird durch verschiedene induzierende Mittel verursacht, zu denen verschiedene Erkrankungsprozesse, physikalische oder chemische Mittel, Anoxie und Ischämie gehören. Erkrankungsprozesse beinhalten raumeinnehmende Läsionen, Befall oder Metastase des Gehirns, die durch verschiedene Malignitäten verursacht werden und/oder Infektion durch eine Anzahl von Organismen.
Tumore des ZNS können vor Ort entstehen (primäre Tumore), oder sie können sich zum ZNS ausbreiten (Metastasen). Primäre Tumore entstehen aus Gliazellen (Astrocytom, Oligodendrogliom, Glioglastom), Ependymzellen (Ependymom) oder Stützgewebe (Meningiom, Schwannom, Papillom des Chorioidea-Plexus). In der Kindheit entstehen Tumore aus primitiveren Zellen (Medulloblastom, Neuroblastom, Chordom). Bösartiges Astrocytom oder Glioblastom ist der häufigste Primärtumortyp bei Erwachsenen über 20 Jahren. Sowohl gutartige als auch bösartige primäre ZNS-Tumore können eine neurologische Störung hervorbringen.
Leukämie ist der häufigste Krebstyp bei Kindern. Während der letzten zwanzig Jahre hat sich die Überlebenschance für Kinder aufgrund der routinemäßigen Verwendung einer intensiven Chemotherapie allein oder als Kombinationsbehandlung (Radiotherapie und Chemotherapie) erheblich verbessert. Derzeit beträgt die geschätzte 10-Jahres-Gesamtüberlebensrate etwa 75%.
Angesichts der gestiegenen Zahl von Überlebenden, die in der Kindheit an Leukämie litten, beschäftigte man sich mit den Langzeitwirkungen der Antikrebs-Chemotherapie und/oder -Radiotherapie, die zu möglichen Schädigungen des Zentralnervensystems führen, und der Bedarf an einer frühen quantitativen Erfassung dieser ZNS-Schädigung steigt.
Bakterielle Meningitis kann als Entzündung in Reaktion auf eine bakterielle Infektion der Pia mater und der Arachnoidea und der Flüssigkeit, die sich in dem Raum befindet, der sie einschließt und auch der Flüssigkeit in den Ventrikeln des Gehirns definiert werden. Die Inzidenz für eine bakterielle Meningitis liegt zwischen 4, 6 und 10 Fällen pro 100000 Personen pro Jahr. H. influenzae ist die häufigste Ursache,. gefolgt von N. meningitidis und S. pneumoniae. Sobald sie sich entwickelt hat, umfassen die charakteristischen Eigenschaften der bakteriellen Meningitis einen Anstieg des intrakranialen Drucks, die Zerstörung der Blut-Hirn-Schranke, zerebrales Ödem und Veränderungen im zerebralen Blutfluss. Je länger die Meningitis dauert und je weniger wirksam die Behandlung ist, desto größer sind die Wahrscheinlichkeiten, dass sich Komplikationen und neurologische Residuen entwickeln. Etwa 10% der Säuglinge und Kinder, die eine bakterielle Meningitis haben, behalten einen dauernden einseitigen oder doppelseitigen Hörverlust zurück. Bei etwa 30% der Kinder, die später eine bakterielle Meningitis hatten, werden sich subtile Lernschwächen einstellen (Wilson et al., 1991).
Viren können ebenfalls das Zentralnervensystem auf eine Vielzahl von Wegen beeinflussen, weshalb zwischen viraler Meningitis, viraler Enzephalitis, Myelitis und ZNS-Schädigung aufgrund von Slow-Virus-Infektion unterschieden wird. Andere Zustände, die eine ZNS-Schädigung verursachen können, sind chemische Mittel, wie Pharmazeutika, Chemotherapie oder die Einwirkung von chemischen Verbindungen und physikalischen Mitteln. Die in den Industrienationen häufigen Kopfverletzungen betreffen viele Patienten zu Beginn des Lebens. Zur Einschätzung der medizinischen und sozialen Größe dieses Problems muss man nur erkennen, dass jährlich fast 10 Millionen Amerikaner Kopfverletzungen erleiden, von denen etwa 20% so schwer sind, dass es zu einem Gehirnschaden kommt.
Ein weiterer Grund für ZNS-Schädigung kann Anoxie oder Ischämie sein. Anoxisch-ischämische Enzephalopathie ist ein häufiger und oft katastrophaler Zustand, der von einem Sauerstoffmangel des Gehirns verursacht wird, der von einer Hypotonie oder einem Lungenversagen herrührt. Ein akuter ischämischer Schlaganfall verursacht einen neuronalen Schaden und ist eine Hauptursache für eine neurologische Behinderung in der westlichen Gesellschaft. Perinatale Asphyxie kann ebenfalls mit einer ZNS-Schädigung in Zusammenhang stehen. Bisher sind elektroenzephalographische und neuroradiologische Bewertung zusammen mit Untersuchungen am cerebralen Blutfluss die am leichtesten verfügbaren Verfahren. Eine frühe und genaue Bewertung der Schwere der Gehirnschädigung nach einem hypoxisch-ischämischen Ereignis bleibt eines der schwierigsten Probleme bei der Behandlung von Neugeborenen.
Für den Nachweis von ZNS-Befall in leukämischen Kindern umfassen die gängigen Diagnoseverfahren Lumbalpunktur, Augenfundoskopie und Gehirn-Bildgebung (Raichle, 1998). Diese Diagnoseverfahren ermöglichen jedoch nur den Nachweis der ZNS-Schädigung in einem fortgeschritteneren Stadium, wohingegen eine bereits fortgeschrittene ZNS-Schädigung in den frühen Stadien durch diese Verfahren übersehen werden kann. Daher besteht ein Bedarf an zusätzlichen Diagnoseverfahren, die die frühe Erfassung der ZNS-Schädigung ermöglichen.
Eine Reihe von neurologischen Markern wurde vor kurzem verfügbar, die die Zustände des Zentralnervensystems wiederspiegeln, welche den Zelltod, Axonwachstum und Reinduktion, Entzündung und/oder Dysfunktion der Blut-Hirnschranke betreffen.
Das bei Mikrotubuli vorkommende Protein tau existiert in verschiedenen Isoformen, von denen 4 bis 6 im Gehirn von Erwachsenen gefunden werden, aber nur 1 Isoform wird in fötalem Gehirn nachgewiesen. Die Diversität der Isoformen wird von einem einzelnen Gen auf dem menschlichen Chromosom 17 durch alternatives mRNA-Splicing erzeugt (Himmler, 1989; Goedert et al., 1989; Andreadis et al., 1992). Die überraschendste Eigenschaft des tau-Proteins, wie es durch molekulares Klonieren hergeleitet ist, ist eine Kette von 31 oder 32 Aminosäuren, die in dem carboxyterminalen Teil des Moleküls vorkommt und die entweder 3- oder 4mal wiederholt sein kann. Zusätzliche Diversität wird durch Insertionen mit 29 oder 58 Aminosäuren Länge in dem NH₂-terminalen Teil der tau-Moleküle erzeugt (Goedert et al., 1989). In vivo fördert tau den Zusammenbau von Mikrotubuli und Stabilität in dem Axonkompartiment der Neurone durch Wechselwirkungen, an denen die Mikrotubulibindungsdomäne beteiligt ist, die sich in der wiederholten Region von tau befindet (255-381) (Lewis et al., 1988). Unter normalen Umständen enthält das Gehirn von Erwachsenen 2 – 3 Mol Phosphat pro mol tau (Selden und Pollard, 1983; Ksiezak-Reding et al., 1992). Die Phosphorylierung verschiedner Stellen in normalem tau, wie es bei Ratten und Menschen untersucht wurde, hängt vom Entwicklungszustand ab (Lee et al., 1991; Bramblett et al., 1993; Goedert et al., 1993). Tau-Varianten mit 60, 64 und 68 kDa, die als Folge der Phosphorylierung entstehen, wurden in Gehirnbereichen entdeckt, die neurofibrilläre Verwicklungen zeigen (Delacourte et al., 1990; Goedert et al., 1992; Flament und Delacourte, 1990, Greenberg und Davies, 1990). Diese Gehirne enthalten 6 – 8 Mol Phosphat pro Mol tau (Ksiezak-Reding et al., 1992). In tau, das aus gepaarten helikalen Filamenten isoliert wurde, kann die Phosphorylierung an verschiedenen Stellen stattfinden (Igbal et al., 1989; Lee et al., 1991; Hasegawa et al., 1992). Die Erfassung von normal und anormal phosphoryliertem tau in Gehirnextrakten erfolgt entweder durch Antikörper (Mab Alz50: Ghanbari et al., 1990; Mab Ab423: Harrington et al., 1991; Mab At120: Vandermeeren et al., 1993; Mab AT180; Mab AT270: Internationale Anmeldung, veröffentlicht unter WO 95/17429 und Mab AT8: Internationale Anmeldung, veröffentlicht unter WO 93/08302), oder über die Änderung des Molekulargewichts (Flament und Delacourte, 1990) oder sonst wie durch einen funktionellen Test (Bramblett et al., 1992). Es wurde eine Kombination von monoklonalen Antikörpern, die jeweils spezifische Tau-Epitope erkennen, verwendet, um das Vorhandensein von normal und anormal phosphoryliertem tau in CSF zu erfassen. (Van de Voorde et al., 1995). Tau wurde als Marker zur Unterscheidung der Demenz mit veränderten Cytoskelet-Eigenschaften, wie Alzheimer-Krankheit, von normalen gealterten Patienten oder von Patienten mit anderen Demenztypen verwendet.
AUFGABEN DER ERFINDUNG
Die Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung:
1. eines Verfahrens zur In-vitro-Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, bevor sich die ZNS-Schädigung durch Standard-Diagnoseverfahren, die auf Gehirn-Bildgebung, Lumbalpunktur oder Augenfundoskopie beruhen, nachweisen lässt, wobei die ZNS-Schädigung durch einen primären gutartigen oder bösartigen Gehirn-Tumor, Gehirn-Metastase, von Parasiten stammenden Cysten, Hydrocephalus und/oder subdurale Hämatome, durch Befall oder Metastase des ZNS, durch Organismen, durch Anoxie oder Ischämie, durch ein chemisches Mittel, bei dem es sich um ein Gentherapeutikum, Pharmazeutikum, Chemotherapeutikum handelt, oder durch Aussetzen gegenüber chemischen Verbindungen, durch physikalische Mittel oder durch eine Kombination dieser Mechanismen verursacht wird, wobei das Verfahren das Bestimmen des tau-Spiegels in einer CSF-Probe aus dem Individuum und das Vergleichen mit dem tau-Spiegel in einer CSF-Probe aus gesunden Kontrollindividuen umfasst, wobei ein tau-Spiegel oberhalb eines Ausschlusswertes, bestimmt auf der Basis des tau-Spiegels in einer CSF-Probe aus gesunden Kontroll-Individuen ein Anzeichen dafür ist, dass das Individuum eine Gehirnschädigung hat.
Eine spezifischere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahren zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch raumeinnehmende Läsionen des ZNS, durch Befall oder Metastase des ZNS, durch Organismen, durch Anoxie oder Ischämie, durch chemische Mittel, durch physikalische Mittel, oder durch eine Kombination dieser Mechanismen verursacht wird.
Eine spezifischere Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch einen primären gutartigen oder bösartigen Gehirntumor, Gehirnmetastase oder ein subdurales Hämatom verursacht wird.
Eine weitere spezifischere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch Befall des ZNS durch Leukämie, Lymphom oder Brustkrebs verursacht wird.
Eine weitere spezifischere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch Bakterien oder Viren verursacht wird, die eine Enzephalitis oder Meningitis verursachen.
Eine weitere spezifischere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch Schlaganfall, Hirninfarkt, cerebrale Hämorrhagie, Thrombose, perinatale Asphyxie, durch Binswanger-Krankheit oder durch Vaskulitis verursacht wird.
Eine weitere spezifischere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch Chemotherapie verursacht wird.
Eine weitere spezifischere Aufgabe ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung der ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch Trauma, Schlaganfall, intrakranialen Druck oder Strahlung verursacht wird.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung der ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS-Schädigung durch raumeinnehmende Läsionen des ZNS, durch Befall oder Metastase des ZNS, durch Organismen, Anoxie oder Ischämie, chemische Mittel, physikalische Mittel oder eine Kombination dieser Mechanismen verursacht wird, womit man die Wirkung der Behandlung auf die ZNS-Schädigung bewertet.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zum Durchmustern oder Überwachen der Wirkung von Verbindungen, die eine ZNS-Schädigung verhindern oder behandeln.
Sämtliche Aufgaben der vorliegenden Erfindung sollen die nachstehend aufgeführten Ausführungsformen erfüllen.
EINGEHENDE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, wobei die ZNS- Schädigung durch raumeinnehmende Läsionen des ZNS, durch Befall des ZNS, Organismen, Anoxie oder Ischämie, durch chemische Mittel, physikalische Mittel oder durch eine Kombination dieser Mechanismen verursacht wird. Dieses Verfahren umfasst das Bestimmen und/oder Quantifizieren des tau-Spiegels in einem Individuum und das Vergleichen mit dem tau-Spiegel in gesunden Kontrollindividuen.
Die vorliegende Erfindung betrifft die überraschende Entdeckung, dass tau-Spiegel in CSF-Proben von Kindern mit Leukämie verglichen mit den oberen Grenz-Werten für gesunde Individuen erhöht sind. Diese erhöhten tau-Spiegel sind ein Anzeichen für einen latenten Befall des Zentralnervensystems und einer bereits fortschreitenden ZNS-Schädigung lange bevor diese ZNS-Schädigung durch die gängingen Diagnoseverfahren gemessen werden kann. In Individuen, die an raumeinnehmenden Läsionen des ZNS, Befall oder Metastase des ZNS, Ischämie, Schlaganfall oder Meningitis leiden, wurden auch erhöhte tau-Spiegel in einer frühen Stufe gemessen. Folglich kann tau als unspezifischer Marker für die frühe Erfassung der ZNS-Schädigung verwendet werden, die durch Befall des ZNS durch Leukämie verursacht wird, und gewöhnlich als unspezifischer Marker für die frühe Erfassung der ZNS-Schädigung, die durch ZNS-schädigende Mittel, wie raumeinnehmende Läsion des ZNS, Befall oder Metastase des ZNS, Organismen, Anoxie oder Ischämie, chemische Mittel, physikalische Mittel oder eine Kombination dieser Mechanismen verursacht werden.
Das Zentralnervensystem (ZNS) ist der Teil des Nervensystems, der bei Vertebraten aus dem Gehirn und dem Rückenmark besteht, auf das die sensorischen Impulse übertragen werden, und aus dem motorische Impulse nach außen übertragen werden, und das die Aktivität des gesamten Nervensystems überwacht und koordiniert.
Der Begriff "ZNS-Schädigung" betrifft einen Zustand des ZNS, der mit neuronalen Fehlfunktionen einhergeht und der durch ein spezifisches Induktionsmittel oder Schädigungsmittel verursacht wird. Die ZNS-Schädigung betrifft insbesondere Krankheitsprozesse, die raumeinnehmende Läsionen des ZNS, Invasion oder Metastase des ZNS und/oder Organismen umfassen, ist aber nicht darauf eingeschränkt. Raumeinnehmende Läsionen können beispielsweise primäre gutartige oder bösartige Gehirntumore, Gehirnmetastase, von Parasiten hergeleitete Zysten, wie Taenia solium oder Echinococcus granulosus, Hydrocephalus und/oder subdurales Hämatom sein. Befall oder Metastase des ZNS können durch Malignitäten, wie Leukämie, Lymphom, Brustkrebs, Lungenkrebs, Melanom und/oder gastrointestinale Malignitäten oder andere Krebstypen verursacht werden. Organismen, die das ZNS infizieren können und ZNS-Schädigungen verursachen können, umfassen, sind aber nicht eingeschränkt auf Prionen, Viren, Bakterien oder Parasiten. Bakterien und Viren, die das ZNS infizieren, können Meningitis, Encephalitis, Neuro-Aids oder Neuroborreliose verursachen.
Sie umfassen, sind aber nicht eingeschränkt auf Neisseria meningitidis, H. influenzae, S. pneumoniae, Herpes simplex meningoencephalitis und Herpes simplex gluteolis. ZNS-Schädigung kann ebenfalls durch Anoxie oder Ischämie während Anästhesie, perinataler Asphyxie, Ertrinken, Asthma, Schlaganfall, cerebralem Infarkt, Thrombose, cerebraler Hämorrhagie, CO-Vergiftung, Binswanger-Erkrankung und/oder Vasculitis verursacht werden. Chemische Mittel, die ZNS-Schaden verursachen, umfassen, sind aber nicht eingeschränkt auf Gentherapie, Pharmazeutika, Chemotherapie, und Einwirkung von chemischen Verbindungen. ZNS-Schädigung kann ebenfalls durch physikalische Mittel, wie Trauma, Strahlung, Hypothermie, Hyperthermie, intrakranialer Druck oder Schlaganfall, verursacht werden. Es ist ebenfalls möglich, dass mehr als eines der vorstehend genannten Mittel für ZNS-Schädigung verantwortlich ist.
Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur frühen Erfassung und/oder Quantifizierung der ZNS-Schädigung durch Bestimmen des tau-Spiegels bereit. "Frühe Erfassung und/oder Quantifizierung der ZNS-Schädigung" bedeutet, dass die ZNS-Schädigung durch ein Verfahren bestimmt wird, das die Erfassung ermöglicht, bevor es durch die gängigen Verfahren erfasst werden kann.
Der Begriff "tau" wie er in der vorliegenden Anmeldung verwendet wird, kann eine beliebige Form von tau sein, einschließlich eines beliebigen Phosphorylierungszustandes. Der tau-Spiegel wird qualitativ und/oder quantitativ als Maß für den Grad der ZNS-Schädigung bestimmt. Tau kann sowohl in vitro als auch in vivo bestimmt werden.
Das Verfahren zur frühen In-vitro-Erfassung der ZNS-Schädigung in einem Individuum umfasst das Gewinnen einer Probe aus dem Individuum, Bestimmen und/oder Quantifizieren des tau-Spiegels in der Probe und Vergleichen mit dem tau-Spiegel in einer Probe von gesunden Kontrollindividuen. Der Begriff "Probe" betrifft eine beliebige Quelle für biologisches Material, beispielsweise Körperflüssigkeiten, Haare, Epithelzellen, peripheres Blut oder eine andere Probe, die tau-Protein umfasst. In einer bevorzugten Ausführungsform kann tau in vitro durch Analyse des tau-Spiegels in einer Körperflüssigkeitsprobe des Patienten erfasst und/oder quantifiziert werden. Der Begriff "Körperflüssigkeit" betrifft sämtliche Flüssigkeiten, die im menschlichen Körper zugegen sind, einschließlich, aber nicht eingeschränkt auf Blut, Lymphe, Urin und Cerebrospinalflüssigkeit (CSF). In einer spezifischeren Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird tau in einer vom Patienten entnommenen Cerebrospinalflüssigkeitsprobe erfasst und/oder quantifiziert. In einer weiteren spezifischen Ausführungsform der Erfindung wird tau in einer Probe von Blutderivaten des Patienten erfasst und/oder quantifiziert. Die Blutprobe kann die vom Patienten entnommene Vollprobe umfassen. Die Blutprobe umfasst stärker bevorzugt eine Plasmaprobe oder eine Serumprobe.
Tau kann durch jedes bekannte Verfahren erfasst und/oder quantifiziert werden, einschließlich aber nicht eingeschränkt auf die Verwendung von Antikörpern, Molekulargewichtsänderung (Flament und Delacourte, 1990) oder sonst wie durch einen Funktionsassay (Bramblett et al., 1992). Bei einer bevorzugten Ausführungsform kann tau durch einen Immuntest erfasst werden, der mindestens die folgenden Schritte umfasst:

– Gewinnen einer Probe aus dem Patient; und
– Zusammenbringen der Probe mit einem monoklonalen Antikörper (primärer Antikörper oder Fang-Antikörper), der tau erkennt, unter Bedingungen, die sich zur Herstellung eines Antigen-Antikörper-Komplexes eignen, und
– Erfassen der immunologischen Bindung des Antikörpers an die Probe.

Vorteilhafterweise ist der erfindungsgemäß verwendete monoklonale Antikörper in einem immobilisierten Zustand auf einem geeigneten Träger. Alternativ kann das erfindungsgemäße Verfahren durch Verwendung eines anderen dem Fachmann bekannten Immuntestformates in die Praxis umgesetzt werden.
Das Verfahren zur Erfassung des Antigens kann dann durch Zusammenbringen des Antigen-Antikörper-Komplexes durchgeführt werden, der durch das primäre Antigen und den primären Antikörper gebildet wird, der Tau erkennt, und zwar mit:

a) einem sekundären Antikörper (oder Detektor-Antikörper), der: • ein monoklonaler Antikörper sein kann, welcher ein Epitop des Komplexes aus tau und primärem Antikörper erkennen kann, aber nicht den primären Antikörper allein erkennen kann, oder • ein polyklonaler Antikörper sein kann, der ein Epitop des Komplexes aus tau und primärem Antikörper erkennen kann, aber nicht den primären Antikörper allein erkennen kann, wobei der polyklonale Antikörper vorzugsweise durch Immunoaffinitätschromatographie mit immobilisiertem tau oder dem Komplex aus tau und primärem Antikörper gereinigt wird.
b) einem Marker, der entweder für spezifisches tagging oder Kuppeln mit dem sekundären Antikörper spezifisch ist, wobei der Marker jeder beliebige mögliche Marker ist, der dem Fachmann bekannt ist;
c) geeigneten Pufferlösungen zur Durchführung der immunologischen Reaktion zwischen dem primären Antikörper und der Probe, zwischen dem sekundären Antikörper und dem Komplex aus tau und dem primären Antikörper und/oder zwischen dem gebundenen sekundären Antikörper und dem Marker und
d) möglicherweise auch für Standardisierungszwecke einem gereinigten Protein oder synthetischem Peptid, das mit den Antikörpern reagiert, die tau erkennen.

Vorteilhafterweise trägt der sekundäre Antikörper selbst einen Marker oder eine Gruppe für die direkte oder indirekte Kupplung mit einem Marker.
Der Begriff "Epitop" betrifft denjenigen Teil des Antigen-Antikörper-Komplexes, der spezifisch an eine Antikörper-kombinierende Stelle gebunden ist. Epitope können durch eine beliebige Technik des Standes der Technik bestimmt werden oder können durch eine Vielzahl von Computer-Vorhersagemodellen vorherbestimmt werden.
Die Ausdrücke "erkennen", "reagieren mit", "immunologische Bindung" oder "Herstellung eines Antigen-Antikörperkomplexes", wie sie erfindungsgemäß verwendet werden, sind so zu interpretieren, dass die Bindung zwischen dem Antigen und dem Antikörper unter allen Bedingungen erfolgt, die die immunologischen Eigenschaften des Antikörpers und des Antigens betreffen.
Jeder monoklonale oder polyklonale Antikörper, der tau spezifisch erkennt, kann zur Erfassung von tau verwendet werden. Antikörper, die spezifisch normal und/oder anormal phosphoryliertes tau erkennen, umfassen Alz50 (Ghanbari et al., 1990), Ab423 (Harrington et al., 1991), AT8 (Internationale Anmeldung, veröffentlicht unter WO 93/08302), AT120 (Vandermeeren et al., 1993); AT180 und AT270 (Internationale Anmeldung, veröffentlicht unter WO 95/17429 und AT100 (Internationale Anmeldung, veröffentlicht unter WO 96/04309). Es können jedoch auch andere Antikörper des Standes der Technik verwendet werden, die tau spezifisch erkennen.
Das Verfahren zur frühen In-vitro-Erfassung und/oder Quantifizierung von ZNS-Schädigung in einem Individuum kann ebenfalls zur Bewertung der Auswirkung einer bestimmten Behandlung der ZNS-Schädigung in dem Individuum verwendet werden. Mögliche Behandlungen, die den Status des ZNS beeinflussen können, umfassen, sind aber nicht eingeschränkt auf, Medikamenten-Behandlungen, Chemotherapie, physikalische Therapie, einschließlich Radiotherapie und Gentherapie.
Das Verfahren zur frühen In-vivo-Erfassung und/oder Quantifizierung der ZNS-Schädigung in einem Individuum umfasst das Bestimmen und/oder Quantifizieren der tau-Spiegel in dem Individuum und das Vergleichen mit dem tau-Spiegel in gesunden Kontrollindividuen. In einer bevorzugten Ausführungsform kann tau in vivo durch In-vivo-Bildgebung erfasst werden. Tau kann in situ durch nicht-invasive Verfahren sichtbar gemacht. werden, einschließlich, aber nicht eingeschränkt auf Gehirn-Bildgebungsverfahren, die von Arbit et al (1995), Tamada et al., (1995), Wakabayashi et al., (1995), Huang et al. (1996); Sandrock et al. (1996), Mariani et al., (1997) beschrieben wurden. Diese In-vivo-Bildgebungesverfahren können die Lokalisierung und Visualisierung von tau, beispielsweise durch Verwendung markierter Antikörper, die tau erkennen, ermöglichen.
Tau kann ebenfalls als spezifischer Marker für die In-vivo-Bildgebung zur Bestimmung der Wirkung einer bestimmten Behandlung der ZNS-Schädigung in einem Individuum verwendet werden. Mögliche Behandlungen, die den Status des ZNS beeinflussen können, beinhalten, sind aber nicht eingeschränkt auf Medikamenten-Behandlungen, Chemotherapie, physikalische Therapie, einschließlich Radiotherapie und Gentherapie.
Jeder Kit, der ein Werkzeug zur Erfassung von tau bereitstellt, kann zur Diagnose der vorstehend genannten ZNS-Schädigung verwendet werden.
Ein bevorzugter Kit zur In-vitro-Diagnose in einem Individuum von einer ZNS-Schädigung, die durch raumeinnehmende Läsionen des ZNS, durch Befall oder Metastase des ZNS, durch Organismen, Anoxie oder Ischämie, chemische Mittel, physikalische Mittel oder durch Kombination dieser Mechanismen verursacht wird, beruht auf einem Immuntest und umfasst:

– mindestens einen monoklonalen Antikörper (primären Antikörper), der einen immunologischen Komplex mit einem Epitop des tau-Proteins bildet;
– einen sekundären Antikörper, der: • ein monoklonaler Antikörper sein kann, welcher ein Epitop des Komplexes aus tau und primärem Antikörper erkennen kann, aber nicht den primären Antikörper allein erkennen kann, oder • ein polyklonaler Antikörper sein kann, der ein Epitop des Komplexes aus tau und primärem Antikörper erkennen kann, aber nicht den primären Antikörper allein erkennen kann, wobei der polyklonale Antikörper vorzugsweise durch Immunoaffinitätschromatographie mit immobilisiertem tau Protein oder dem Komplex aus tau und dem immobilisierten primärem Antikörper gereinigt wird;
– einen Marker entweder für spezifisches tagging oder Kuppeln mit dem sekundären Antikörper;
– geeignete Pufferlösungen zur Durchführung der immunologischen Reaktion zwischen dem primären Antikörper und einer Testprobe, zwischen dem sekundären Antikörper und dem Komplex aus tau und dem primären Antikörper und/oder zwischen dem gebundenen sekundären Antikörper und dem Marker;
– möglicherweise für Standardisierungszwecke ein gereinigtes Protein oder synthetisches Peptid, das ein oder mehrere tau-Epitope enthält.

Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zum Durchmustern oder Überwachen der Wirkung der Verbindungen, die eine ZNS-Schädigung verhindern oder behandeln, umfassend das Bestimmen des tau-Spiegels und das Vergleichen mit dem tau-Spiegel in einer Kontrollprobe.
Die vorliegende Erfindung wird nachstehend anhand der folgenden Beispiele beschrieben, die besonders vorteilhafte Ausführungsformen offenbaren. Man beachte jedoch, dass diese Beispiele veranschaulichend sind, und die Erfindung auf irgend eine Weise keinesfalls einschränken sollen.

Tabelle 4
Tabelle 4 (Fortsetzung)
Tabelle 4 (Fortsetzung)
FIGURENLEGENDEN
1. Tau-Werte bei der Diagnose bevor überhaupt eine Behandlung erfolgte: 1. Kontroll-Kinder; 2. AML; AML-ZNS+; 4. CML; 5. MDS; 6. B-NHL; 7. Non-B-ALL; 8. Non-B-ALL ZNS+; 9. VHR Non-B-ALL.
2. CSF-Tau-Spiegel in sieben Patienten mit akutem ischämischem Schlaganfall. Die CSF-Proben wurden bei Eintreffen (Tag 0-1), Tag 2-3, Tag 7-8, Tag 21-22 (3 Wochen) und Tag 90-110 (3 Monate) gesammelt.
3. CSF-tau-Spiegel zum Zeitpunkt der maximalen Freisetzung in Bezug auf die Größe des Infarkts, gemessen durch CT-Scan.
BEISPIELE
Beispiel 1: Erhöhte tau-Spiegel in Kindern mit Leukämie
Zur Bewertung des Einflusses der Chemotherapie auf neuronale Schädigung wurde eine Längsstudie an 65 Kindern mit Leukämie (2 bis 16 Jahre alt) ohne messbare Beteiligung des Zentralnervensystems unter Behandlung gemäß Standardverfahren durchgeführt. Insgesamt wurden 377 CSF-Proben analysiert. Vor jeder Injektion wurde ein kleines Flüssigkeitsvolumen zur routinemäßigen Laboranalyse entnommen und der Rest wurden in unserer Untersuchung verwendet. Diese Kinder wurden diagnostiziert und dann auf ihre Leukämie am University Hospital Leuven, Belgien, behandelt. Das tau-Protein in Cerebrospinalflüssigkeit wurde mit dem INNOTEST hTAU-Antigen (Innogenetics, Gent Belgien) bestimmt.
Für sämtliche Kinder, die unter dem Verdacht standen, Leukämie zu haben, wurde vor dem Beginn der Behandlung zur Erfassung des möglichen Vorhandenseins von Leukämiezellen, die einen Befall des Zentralnervensystems anzeigen, eine Lumbalpunktur durchgeführt. Die tau-Mengen, die zu diesem Zeitpunkt, und somit vor der Behandlung gemessen wurden, dienten als Kontrollspiegel zum Vergleich der chemotherapieinduzierten Änderungen der tau-Spiegel.
Wir beobachteten, dass einige Kinder mit Leukämie bereits sehr hohe tau-Spiegel bei der Diagnose trotz der Tatsache aufwiesen, dass keine leukämischen Zellen im Zentralnervensystem erfasst wurden. Diese Kinder machen eine neue Risikogruppe mit Gehirn-Befall oder leukämie-induzierter ZNS-Schädigung aus, die nicht immer mit den gängigen Diagnose-Verfahren (Bildgebung des Gehirns, Lumbalpunktur, Augenfundoskopie) gefunden werden kann. Dies wurde zudem durch die erhöhten tau-Spiegel unterstützt, die in einem Patient mit Leukämie mit erwiesener Zellinvasion in das Gehirn (maligne Zellen in der Cerebrospinalflüssigkeit) beobachtet wurden.
Beispiel 2: Erhöhte tau-Spiegel in Patienten mit Leukämie vor der Behandlung
1. Individuen.
Zwischen August 1996 und Juni 1999 wurden 510 CSF-Proben von 82 Kindern entnommen, die am Pediatric Hemato-oncology Department of the Catholic University in Leuven, Belgien, wegen Krebs behandelt werden. Die CSF-Proben wurden nur im Verlauf von planmäßigen Lumbalpunktionen (LPs) zur Stadienermittlung oder Behandlung auf Malignität entnommen.
Es wurden drei Gruppen von Patienten mit hämatologischen Malignitäten untersucht. Die größte Gruppe bestand aus 48 Patienten mit Non-B-All, die gemäß dem EORTC-Protokoll 58881 behandelt wurden (Tabelle 1). Von diesen Kindern hatten 20 CD10(+)-Blasts oder (allgemeine ALL), von denen zwei Patienten auch das Down-Syndrom (DS) hatten und 1 Patient das Brachmann-de Lange Syndrom; 6 Patienten hatten allgemeine B-Zell-Blasts; 2 Patienten hatten allgemeine T-Zell-Blasts, 2 Patienten hatten Pro-B-Zell-Blasts, 9 Patienten hatten Prä-B-Zell-Blasts und 9 Patienten hatten T-Zell-Blasts. 42 Kinder hatten Leukämie, 6 Patienten hatten Non-Hodgkin-Lymphom-Stadium II (1 Patient), -Stadium III (4 Patienten) oder -Stadium IV (1 Patient). Ein Patient hatte eine offensichtliche ZNS-Beteiligung (ZNS+) gemäß der Definition des Untersuchungsprotokolls mit malignen Zellen im CSF. Fünf Patienten wurden als Patienten mit sehr hohem Risiko (VHR) gemäß den im Protokoll definierten Kriterien angesehen (2 Patienten mit t(9;22) und 3 Patienten mit Corticoid-Resistenz). Da der erste Teil der Induktionsbehandlung ähnlich wie bei den anderen Patienten war, wurden sie in den Analysen gemäß der Induktions-Chemotherapie aufgenommen. 28 Patienten mit Non-B-ALL konnten während ihres Behandlungszeitraum in einer Längsstudie untersucht werden.
Eine zweite Gruppe von Patienten umfasste 10 B-Zell Non-Hodgkin-Lymphom-Patienten, die gemäß dem NHL-Protokoll (Tabelle 2) der United Kingdom Children Cancers group (UKCCSG 9602) behandelt wurden. Fünf Patienten hatten B-Zell-Lymphomas, 3 Patienten hatten Burkitt-Lymphom, und 2 Patienten hatten anaplastisches Großzell-Lymphom (ALCL). Sämtliche Patienten wurden mit dem gleichen Protokoll behandelt, außer einem Patient mit B-Zell-Leukämie. Sechs dieser Patienten wurden in einer Längsstudie untersucht. Eine dritte Patientengruppe bestand aus 9 Kindern mit Akuter Myeloid-Leukämie-Myelodysplasie (AML-MDS), von denen 2 Patienten eine Beteiligung des ZNS hatten und 2 Patienten Down-Syndrom hatten. 3 Patienten hatten den M0- und jeweils 1 Patient hatte den M1-, M2, M5a oder M7-Phänotyp. Zwei Patienten hatten MDS, von denen einer AML entwickelte und mit Chemotherapie behandelt wurde. All diese Patienten außer einem MDS-Patient wurden mit dem EORTC58921-Protokoll behandelt (Tabelle 3) und 7 Patienten wurden in einer Längsstudie untersucht.
Die anderen Patienten bestanden aus einer heterogenen Gruppe von Kindern (n = 9), in denen aus klinischen Gründen eine LP durchgeführt wurde. Die Gruppe umfasst 3 Kinder mit Medulloblastom (Stadienermittlung), 2 Kinder mit Rhabdomyosarkom (Stadienermittlung), 1 Kind mit Histiocytose der Langerhans'schen-Zellen (LCH, Stadienermittlung), Gangliogliom (Stadienermittlung), Germinom (Stadienermittlung), und Retinoblastom mit ZNS-Metastase (Stadienermittlung und Follow-up). Die Kontrollgruppe bestand aus 4 Kindern, aus denen CSF als Teil der Routinekontrolle auf mögliche virale oder bakterielle Infektionen entnommen wurde, jedoch mit negativen Ergebnissen. Ein Patient mit einem lokalisierten Retinoblastom (Stadienermittlung) und einer, der auf familiäre hämophagocytotische Lymphohistiocytose (HLH) untersucht wurde, wurden ebenfalls in der Kontrollgruppe aufgenommen. Die nächsten Verwandten der Patienten gaben ihre mündliche Zustimmung zur Teilnahme an der Untersuchung.
2. Verfahren Liquor-Probennahme.
Lumbalpunktionen wurder unmittel vor der IT-Verabreichung von Therapeutika durchgeführt. Fünf ml CSF wurden in verschiedener Polypropylen-Röhrchen gesammelt. Eine Probe. wurde sofort bei 1500 U/min für 2 Minuten zentrifugiert, um die Zellen und anderes unlösliches Material. Dez Überstand wurde bei –70°C zur anschließenden Analyse aufbewahrt. Die Anzahl der Gefrier/Tau-Zyklen war auf ein Minimum eingeschränkt.
Messung von tau in CSF. Sämtliche biochemischen Analysen zur Erfassung von CSF-tau wurden ohne Wissen der klinischen Diagnose durchgeführt. Potentiell verwirrende Faktoren, wie die Anzahl der Gefrier/Tau-Zyklen, Empfänger-Typ und Probenvolumen pro Test wurder für das gesamte Untersuchungsprotokoll standardisiert. CSF-tau-Spiegel wurden mit einem Sandwich-ELISA (INNOTEST hTau-Antigen, Innogenetics, Gent, Belgien) bestimmt, der das gesamte tau (sowohl das normale als auch das hyperphosphorylierte tau) maß. Die Prober wurden zuerst allein analysiert, und zwar zum Zeitpunkt jeder LP. Anschließend wurden sämtliche Proben, die vor einem Patienten stammten, erneut auf einer Immunoplatte analysiert. Der Korrelationskoeffizient zwischen der Ergebnissen aus dem ersten und dem zweiten Ansatz für einen Satz von 104 Proben war 0,901 (95% CI: 0,856 – 0,933). Es wurde ausgeschlossen, dass die in der Veröffentlichung beschriebenen Anstiege von CSF generelle Anstiege von Proteinen im Liquor waren.
3. Ergebnisse
Die normalen oberen Grenzwerte für tau wurden zuerst an CSF-Proben von 6 Kontrollkindern bestimmt. Der mittlere CSF-tau-Wert betrug 106,2 pg/ml (95%CI = 34,3-178,0). Der willkürliche normale Ausschlusswert wurde als 312 pg/ml (Mittelwert + 3 SA) angesehen, welches im Bereich von Werten liegt, die man bei Erwachsenen beobachtet (Hulstaert et al., 1999).
Darüber hinaus beobachteten wir keine Korrelation zwischen den CSF-tau-Werten bei Diagnose und dem Alter der Kinder (Pearson, r = –0,161, CI95% = –0,3914 – 0,08836, n = 64), was nahe legt, dass das Alter keinen Einfluss auf die CSF-tau-Spiegel hat. Eindeutig pathologische CSF-tau-Werte können als größer als 500 pg/ml angesehen werden.
Tau-Spiegel bei der Diagnose wurden auf jede Subgruppe von Patienten analysiert (1). Es gab keinen offensichtlichen Unterschied in Bezug auf die tau-Werte in Patienten mit und ohne Down's Syndrom (nicht gezeigt). Die beiden Patienten mit offenkundigem ZNS-Befall (ZNS+) hatten bei der Diagnose CSF-tau-Spiegel von mehr als 312 pg/ml. Zwei Kinder mit MDS, 7/28 Kinder mit Non-B-ALL, 1/4 Non-B-ALL-Patienten mit sehr hohen Risikokriterien, 1/5 Patienten mit AML und 2/8 Patienten mit B-Zell-NHL hatten jedoch einen tau-Spiegel von mehr als 312 pg/ml, wohingegen bei der Verwendung von klassischen Diagnoseverfahren kein ZNS-Befall erfasst wurde. Drei Patienten mit erhöhtem Intrakranialdruck (Medulloblastom) und ein Patient mit Germinom, aus dem CSF zur Stadienermittlung entnommen wurde, hatten hohe CSF-tau-Konzentrationen (823, 1397, 1500 und 442 pg/ml), wohingegen ein Patient mit einem Astrocytom Grad I einen normalen CSF-tau-Spiegel aufwies (97 pg/ml). Ein Patient mit LCH hatte einen normalen CSF-tau-Spiegel von 112 pg/ml. Zwei Patienten mit Rhabdomyosarcom konnten bei Diagnose analysiert werden: ein Patient mit der Erkrankung des Stadiums I hatte einen CSF-tau-Spiegel von 279 pg/ml, der andere Patient mit der Erkrankung des Stadiums IV hatte einen Spiegel von 320 pg/ml. Ein Patient mit Retinoblastom und Beteiligung des ZNS hatte einen CSF-tau-Spiegel von 1800 pg/ml.
Für 33 Patienten mit Non-B-ALL korrelierten die CSF-tau-Spiegel bei der Diagnose nicht mit der Tumorlast, wie es durch die Zahl an weißen Blutzellen wiedergespiegelt wird (Pearson r = 0,04575, CD95%: –0,3024 – 0,3831) oder Serum-LDH (Pearson r = –0,03002, CI95%: –0,3696 – 0,3166). In Patienten mit B-NHL gab es keine signifikante Korrelation zwischen dem LDH-Spiegel und CSF-tau (Pearson r = –0,3723, CD95%: –0,8532 – 0,4507).
Beispiel 3: Verwendung von CSF-tau als Markar zur frühen Erfassung einer durch Schlaganfall verursachten möglichen ZNS-Schädigung.
1. Individuen
Sieben Patienten, 3 Männer und 4 Frauen, im Alter von 63-81 Jahren (Mittelwert und SA, 70,7 ± 7,2 Jahre) mit cerebralen Infarkten, eingeliefert in die Unit of Neurology, Sahlgren's University Hospital, Göteborg, Schweden, wurden in die Untersuchung aufgenommen. Sämtliche Patienten wurden innerhalb von 72 Std. nach Beginn des Schlaganfalls aufgenommen.
2. Verfahren
CSF-Proben wurden mittels Lumbalpunktur gesammelt. 12 ml wurden gesammelt und in 0,5 ml Aliquoten bei –80°C bis zur Analyse eingefroren. Die CSF-Proben wurden bei Eintreffen (Tag 0-1), Tag 2-3, Tag 7-8, Tag 21-22 (3 Wochen) und Tag 90-110 (3 Monate) gesammelt. Die CSF-tau-Spiegel wurden mit einem Sandwich-ELISA (INNOTEST hTAU-Antigen, Innogenetics, Gent, Belgien) bestimmt, der Gesamt-tau (und zwar normales und hyperphosphoryliertes tau) maß.
Das Ausmaß des Gehirnschadens wurde mit Computertomographie (CT) des Gehirns während des ersten Einlieferungstages untersucht. Die Patienten wurden ebenfalls klinisch mit dem modifizierten skandinavischen Skalenindex für Schlaganfall (SSI, Scandinavian Stroke Study Group, 1985) bei Beginn des Schlaganfalls und 3 Monate später auf den Grad der Behinderung mittels Bartel-Index (BI; Mohoney und Barthel, 1965) untersucht.
3. Ergebnisse
CSF-tau zeigte einen merklichen Anstieg nach akutem Schlaganfall mit einem Peak nach 1-3 Wochen und eine Rückkehr auf normale Werte nach 3 Monaten (2). Es gab ebenfalls eine Korrelation zwischen CSF-Tau-Spiegeln und dem Ausmaß des Infarkts, wie es durch CT-Scan gemessen wurde (3). Diese Ergebnisse zeigen, dass CSF-tau neuronale Schädigung und Degeneration wiederspiegelt, und der CSF-Spiegel hängt von der Menge der beschädigten Nervenzellen ab. In dieser Untersuchung wurde keine Korrelation zwischen den klinischen Daten (SSI oder BI) und CSF-tau, möglicherweise aufgrund einer kleineren Zahl von Patienten gefunden.
Beispiel 4: Verwendung von tau als Marker zur frühen Erfassung von möglicher ZNS-Schädigung, welche durch verschiedene Schädigungsmittel verursacht wird.
1. Individuen
An 8 europäischen und 2 amerikanischen Universitätszentren, welche an der CSF-Forschung beteiligt sind, wurde eine Multicenterstudie durchgeführt, und zwar auf der Basis von residualem CSF, das in den Zentren zu Forschungszwecken archiviert ist. CSF-Proben von Patienten mit einem breiten Bereich an verschiedenen neurologischen Zuständen wurden aufgenommen, damit man eine allgemeine Vorstellung über die Spezifität von tau-Markeränderungen bei einer Vielzahl von Pathologien erhält, die beim ZNS vorkommen. Die neurologischen Kontrollen bestanden aus Individuen ohne offensichtliche ZNS-Schädigung (Tabelle 4).
Die Untersuchung erfolgte entsprechend den Vorschriften der örtlichen klinischen Forschung. Erforderlichenfalls wurde die Genehmigung des örtlichen Ethikkomitees oder des Institutional Review Board vom Forschungsleiter vor dem Beginn der Untersuchung eingeholt.
2. Verfahren
CSF-Proben wurden mittels Lumbalpunktur (LP) gesammelt. Nur CSF-Proben mit weniger als 500 roten Blutkörperchen pro μl wurden in der Untersuchung aufgenommen. Die CSF-Proben wurden bei 2000 g für 10 min innerhalb von 4 Std. nach der LP zentrifugiert, und ohne Auftauen eingefroren. CSF-Proben von Zentrum 01 hatten vor der Analyse einen zusätzlichen Gefrier-Tau-Zyklus. Die Konzentration von Gesamt-Tau, das normales tau und gepaartes helikales filamentöses tau umfasste, wurde an den Zentren mittel Sandwich-ELISA-Technik (INNOTEST hTAU-Antigen, Innogenetics N.V.) gemessen.
3. CSF-tau-Spiegel in Patienten mit möglicher ZNS-Schädigung verglichen mit CSF-tau-Spiegeln bei neurologischen Kontrollindividuen.
Die tau-Spiegel in den CSF-Proben von Patienten mit möglicher ZNS-Schädigung, die durch raumeinnehmende Läsionen, Befall oder Metastase, Blutung, Infarkt oder Ischämie oder durch Organismen, verursacht wird, und die tau-Spiegel in den CSF-Proben von Kontrollindividuen sind in der Tabelle angegeben. Die Gruppe von Patienten, die sich möglicherweise eine ZNS-Schädigung durch raumeinnehmende Läsionen, Befall oder Metastase, Blutung, Infarkt oder Ischämie oder durch Organismen zuzog, zeigte einen höheren Gesamt-tau-Spiegel als die neurologischen Kontrollpatienten (p = 0,022, zweiseitiger Mann-Whitney-Test).
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Claims

Verfahren zur In-vitro-Erfassung und/oder -Quantifizierung einer ZNS-Schädigung in einem Individuum, bevor sich die ZNS-Schädigung durch Standard-Diagnoseverfahren, die auf Gehirn-Bildgebung, Lumbalpunktur oder Augenfundoskopie beruhen, nachweisen lässt, wobei die ZNS-Schädigung durch einen primären gutartigen oder bösartigen Gehirntumor, Gehirn-Metastase, von Parasiten stammenden Cysten, Hydrocephalus und/oder subdurale Hämatome, durch Befall oder Metastase des ZNS, durch Organismen, durch Anoxie oder Ischämie, durch ein chemisches Mittel, bei dem es sich um ein Gentherapeutikum, Pharmazeutikum, Chemotherapeutikum handelt, oder durch Aussetzen gegenüber chemischen Verbindungen, durch physikalische Mittel oder durch eine Kombination dieser Mechanismen verursacht wird, wobei das Verfahren das Bestimmen des tau-Spiegels in einer CSF-Probe aus dem Individuum und das Vergleichen mit dem tau-Spiegel in einer CSF-Probe aus gesunden Kontrollindividuen umfasst, wobei ein tau-Spiegel oberhalb eines Ausschlusswertes, bestimmt auf der Basis des tau-Spiegels in einer CSF-Probe aus gesunden Kontrollindividuen, ein Anzeichen dafür ist, dass das Individuum eine Gehirnschädigung hat.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei der Befall oder die Metastase des ZNS durch Leukämie, Lymphom oder Brustkrebs erfolgt.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Organismen Bakterien oder Viren sind, die Enzephalitis oder Meningitis verursachen.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Anoxie oder Ischämie durch einen Schlaganfall, Hirninfakt, cerebrale Hämorrhagie, Thrombose, durch perinatale Asphyxie, Binswanger-Erkrankung oder Vasculitis verursacht wird.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei das physikalische Mittel ein Trauma, Schlaganfall, Intrakranialdruck oder Strahlung ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die ZNS-Schädigung erfasst und/oder quantifiziert wird, damit die Wirkung einer bestimmten Behandlung auf die ZNS-Schädigung bewertet wird.
Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, weiterhin dadurch gekennzeichnet, dass der tau-Spiegel durch die Verwendung eines Antikörpers, der Gesamt-tau erkennt, bestimmt wird.