DK143344B

DK143344B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af cephalosporansyrederivater og estere og salte deraf

Info

Publication number: DK143344B
Application number: DK312677AA
Authority: DK
Inventors: T Naito; J Okumura; H Kamachi; S Iimura
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1976-07-13
Filing date: 1977-07-11
Publication date: 1981-08-10
Also published as: DK143344C; FI772179A7; SE8205482L; CH640239A5; JPS5328191A; BE856785A; LU77756A1; SE8205482D0; GR81280B; IE45548L; DE2731724A1; FR2358411A1; IE45548B1; YU171977A; CA1142918A; AU2698277A; SE7708053L; GB1561236A; DK312677A; NL7707820A

Description

|jf da; FREMLÆGGELSESSKRIFT <n> 1^3344 B

(19) DANMARK

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 3126/77 (51) lnt.CI.3 C 07 D 519/00 (22) Indleveringsdag 11. jul. 1977 (24) Løbedag 11. jul. 1977 (41) Aim. tilgængelig 14. jan. 1978 (44) Fremlagt 10. aug. 1981 (86) International ansøgning nr. -(86) International indleveringsdag -(85) Videreførelsesdag -(62) Stamansøgning nr. -

(30) Prioritet 13. jul. 1976, 705226, US 16. mar. 1977# 777986, US 24. feb. 1977, 771859# US 15- apr. 1977# 78805 6, US

(71) Ansøger BRISTOL-MYERS COMPANY, New York, US.

(72) Opfinder Takayuki Nal to, JP: Jun Okuraura, JP: Hajlme Kamachl, JP: Seijl Iimura# JP.

(74) Fuldmægtig Th. Ostenfeld Patentbureau A/S.

~ ' ~ ' · 1 ·' J 1 .......· : .........1 · "»' JP '· I I'M!· i 1.1 . . I )| 1 (54) Anal o gi f r emgangs tnåd e til frem= stilling af cephalosporansyre= derivater og estere og salte deraf.

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangamåde til fremstilling af hidtil ukendte cephalosppransyrederivater med den almene formel; - ANH-CH-CH CH2 II I '11

m Æ--N C - CH - S -K Ji N-A

“ / 2 ^'Y

-t- ' o

COOH

CO

-tf hvori A er *

O O r~ " \ O

CcH, - CH - C - eller ^ Λ Vc - C - 6 5 1 \ 0^ » O«1 2

U33U

hvori R^" er hydrogen eller formyl, 2 R er alkvi med 1-4 carbonatomer, og hvori A1 er methyl eller -(CH2)nCOOH og n er 1 eller 2, eller en let hydrolyserbar ester eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

De let hydrolyserbare estere af syrerne, som har formel I, omfatter de estre, som indeholder en gruppe med den almene formel:

-CH

hvori Z betegner (lavere)alkanoyl, benzoyl, naphthoyl, furoyl, thenoyl, nitrobenzoyl, methylbenzoyl, halogenbenzoyl, phenylbenzoyl, N-phthal-imido, N-succin imido, N-saccharino, N-(lavere)alkylcarbamoyl, (lavere)- . alkoxy, (lavere)alkylthio, phenoxy, carbalkoxy, carbobenzoxy, carbamoyl, benzyloxy, chlorbenzyloxy, carbophenoxy, carbo-tert.-butoxy eller (lavere)alkylsulfonyl, når W betegner hydrogen, Z betegner carbalkoxy, når W betegner carbalkoxy, og Z betegner benzoyl eller cyano, når W betegner phenyl, eller hvori W og Z tilsammen betegner 2-oxocycloalkyl indeholdende fra 4 til 8 carbonatomer. Blandt de let hydrolyserbare estere foretrækkes især pivaloyloxymethyl-, acetoxymethyl-, acetonyl-, phenacyl- og methoxymethylestrene, samt silylestrene, såsom trimethylsilylesteren.

Saltene af de omhandlede forbindelser omfatter de ikke-toxiske carboxylsyresalte deraf, herunder ikke-toxiske metalsalte, såsom natrium-, kalium-, calcium- og aluminiumsaltene, ammoniumsaltet og substituerede ammonium-salte, f.eks. salte af ikke-toxiske aminer, såsom trialkylaminer, omfattende triethylamin, procain, dibenzylamin, N-bénzyl-beta-phenethylamin, 1-ephenamin, Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin, dehydroabietylamin, Ν,Ν'-bis-dehydroabietylethylendiamin, og andre aminer, som har været anvendt til dannelse af salte med benzylpenicil-lin, samt L-lysin, arginin og histidin.

Den bicykliske kernes stereokemi er den, som findes i Cephalosporin C.

Blandt de omhandlede forbindelser foretrækkes især sådanne, som har D-konfiguration i 7-sidekæden.

Når de omhandlede forbindelser har den almene formel III

il il ° /s\ li ii-C-C-NH-CH-CH CH- (r ] '-N.

Nr " || i 2 I 1 η HI

V - *

COOH

3 143344 12 hvori A , n og R har de foran anført© betydninger, kan de vare enten syn-isomere eller blandinger af syn- og anti-isomere indeholdende i det mindste 75% af den syn-isomere. Fortrinsvis indeholder sådanne blandinger af isomere i det mindste 90% af den syn-isombre-og ikke mere end 10% af den anti-isomere. Især foretrækkes det, at forbindelserne med formel III er syn-ispmere, som i det væsentlige er fri for den tilsvarende anti-isomere. Henvisning til den syn-(cis)-isomere 2 form henviser til konfigurationen af gruppen OR i forhold til carbox-amidogruppen.

De omhandlede forbindelser med den almene formel I besidder bred-spektret antibakteriel aktivitet og er uventet mere aktive end Cefamandol, der er trivialnavnet for 7-(D-mandelamido)-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-oarboxylsyre, og Cefuroxim, der er trivialnavnet for natrium-6R,7R-3-carbamoyloxymethyl-7-(2Z)~ 2-methoxyimino-(fur-2-yl)acetamidoceph-3-em-4-carboxylat. Det har endvidere overraskende vist sig, at den mest aktive blandt de omhandlede forbindelser (BB-S510, se nedenfor), som har en 2-methylsubstituent på triazolopyridazinonen, udviser en in vitro antibakteriel styrke, som er betydeligt bedre end den tilsvarende styrke af den tilsvarende forbindelse, som mangler en sådan methylgruppe (BB-S515, se nedenfor). De omhandlede forbindelser kan derfor Brød fordel anvendes til bekæmpelse af bakterielle infektioner, herunder Shig. dysenteriae-infaktioner, Sal. enteritidis-infektioner, Haemophilus-infektioner og Neisseria-infektioner.

Ved behandling af bakterielle infektioner i mennesker administreres de omhandlede forbindelser parenteralt i en fra ca. 5-200, især ca. 10-90 mg/kg/dag, og fortrinsvis ca. 5-20, især ca. 14-20 mg/kg/dag i opdelt dosering, fx. 2-4 gange pr. dag. De administreres i doseringsenheder, som fx. indeholder 125, 250 eller 500 rag aktiv bestanddel sammen med velegnede fysiologisk acceptable bærere eller exeipienser. Doseringsenhederne er i form af flydende præparater, såsom opløsninger eller suspensioner, og er fortrinsvis vandige opløsninger af et natriumsalt eller et kaliumsalt, som injiceres intravenøst eller intra-muskulært eller ved kontinuert eller periodisk infusion i koncentrationer på ca. 125-500 mg/ml og fortrinsvis 250 mg/ml, således som det er sædvanligt i terapien med cephalosporin-antlbiotika.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man omsætter en forbindelse, som har den almene formel: 4 143344

A2M_c_^ O

i_CII20CCH3

// COOII

o 2 hvori A er H eller har den for A ovenfor definerede betydning, eller et salt eller let hydrolyserbar ester deraf med en forbindelse, som har den almene formel:

II

n-s-Wiyi'-A1

G

hvori A^" har den ovenfor anførte betydning, og, når A er H, behandler den resulterende forbindelse med et acyleringsmiddel, som har den almene formel:

A - X

hvori X er halogenid eller et funktionelt ækvivalent deraf, og A har den ovenfor anførte betydning, idet dog, når A-gruppen indeholder en fri hydroxylgruppe, denne.gruppe på forhånd blokeres ved hjælp af en konventionel beskyttende gruppe, som bagefter fjernes til tilvejebringelse af en forbindelse med formel I, og om ønsket omdanner den resulterende forbindelse med formel I i form af fri syre, salt eller let hydrolyserbar ester til den tilsvarende ester eller ikke-toxiske, farmaceutisk acceptable salt deraf, og om ønsket omdanner en forbindelse med formel I i form af et resulterende salt eller let hydrolyserbar ester til den tilsvarende frie syre med formlen I.

Ifølge en udførelsesform af denne fremgangsmåde omsætter man en forbindelse, §om har den almene formel:

H0N-CH-CH CH0 ri-N IV

' ' 2 I I I 2 I I ! /—\ V ^ 0 0

COOH

. 143344 5 hvori har den ovenfor anførte betydning, eller et salt eller let hydrolyserbar ester deraf eller en Schiff-base deraf, f.eks. med benz-aldehyd eller salicylaldehyd, (omfattende men ikke begrænset til de salte, estere eller Schiff-baser, som er omhandlet af U.S.A. patentskrift nr. 3.284.451 og britisk patentskrift nr. 1.229.453, samt en hvilken som helst af de silylestre, som er beskrevet i U.S.A. patentskrift nr. 3.249.622 til anvendelse sammen med 7-aminopeniciliansyre, og som beskrevet anvendt i britisk patentskrift nr. 1.073.530, og især omfattende pivaloyloxymethy1-, acetoxymethy1-, methoxymethyl-, ^cetonyl-, phenacyl-, p-nitrobenzyl-, f3,|3,fi-trichlorethyl-, 3-phthalidyl- og 5-indanylestrene) med et organisk monocarboxylsyrechlorid eller et funktionelt ækvivalent deraf som acyleringsmiddel* Sådanne funktionelle ækvivalenter omfatter de tilsvarende syrer og anhydrider, omfattende blandede anhydrider, og især de blandede anhydrider fremstillet fra stærkere syrer, såsom de lavere alifatiske monoestre af carbonsyre eller alkyl- og arylsulfonsyrer eller af mere hæmmede syrer, såsom diphenyleddikesyre. Tillige kan et syreazid eller en aktiv ester eller thioester (f.eks. med p-nitrophenol, 2,4-dinitrophenol, thiophenol, thioeddikesyre) anvendes, eller den frie syre i sig selv kan kobles med forbindelse IV efter en første omsætning af denne frie syre med N,N'-dimethylchlorformiminiumchlorid tse britisk patentskrift nr. 1.008.170 og Novak og Weichet, Experjentia XXI, 6, 360 (1965)] eller ved anvendelse af enzymer eller af en N,N'-carbo-nyl-diimidazol eller en Ν,Ν'-carbonylditriazol [se sydafrikansk patentskrift nr. 63/2684] eller et carbodiimod-reagens [især Ν,Ν'-dicyclo-hexylcarbodiimid, Ν,Ν'-diisopropylcarbodiimid eller N-cyclohejcyl-N'-(2-morpholinoethyl)carbodiimid, se Sheehan og Hess, J. Arner. Chem. Soc., 77, 1967 (1955)] eller af et alkylylarain-reagens [se R. Buijle og H.G, Viehe, Angew. Chem. International Edition 3, 582, .(1964)] eller af et isoxasoliumsalt-reagens [se R.B. Woodward, R.A. Olofson og H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc., 83, 1010 (1961)] eller af et ketenimin*-reagens [se C.L. Stevens og M.E. Munk, J. Amer. Chem. Soc., 80, 4065 (1958)] eller af hexachlorcyclotriphosphatriazln eller hexabromcyclotriphos-phatriazin (se U.S.A. patentskrift nr. 3.651.05Q) eller af dipheny1-phosphorylazid [DPPA] [se J. Amer. Chem. Soc., 94, 6203-6205 (1972)] eller af diethylphosphorylcyanid [DEPC] [se Tetrahedron Letters No. 18, pp. 1595-1598 (1973)] eller diphenylphosphit [se Tetrahedron Letters No. 49, pp. 5047-5050 (1972)]. Et andet ækvivalent af syrechloridet er et tilsvarende azolid, d.v.s. et amid af den tilsvarende syre, hvis amid-nitrogen er et element af en kvasi-aromatisk fem-leddet ring, 6 143344 som i det mindste indeholder to nitrogenatomer, d.v.s. imidazol, pyra-zol, triazolerne, benzimidazol, benzotriazol og deres substituerede derivater. Som et eksempel på den almene fremgangsmåde til fremstilling af et azolid omsættes Ν,Ν'-carbonyldiimidazol med en carboxylsyre i ækvimolære forhold ved stuetemperatur i tetrahydrofuran, chloroform, dimethylformamid eller et lignende inert opløsningsmiddel til dannelse af carboxylsyre-imidazolidet i praktisk taget kvantitativt udbytte under frigørelse af carbondioxid og et mol imidazol. Dicarboxylsyrer giver dimidazolid. Biproduktet, imidazol, fælder ud og kan adskilles, og imidazolidet kan isoleres, men dette er ikke væsentligt. Fremgangsmåderne til udførelse af disse omsætninger til fremstilling af cepha-losporiner og de til isolering af de således fremstillede cephalosporin er anvendte metoder er velkendte i teknikken.

Ovenfor omtaltes anvendelse af enzymer til kobling af den frie syre med forbindelse IV. Indenfor rammerne af sådanne processer er anvendelse af en ester, f.eks. methylesteren, af den frie syre sammen med enzymer tilvejebragt ved hjælp af forskellige mikroorganismer, f.eks. de, som er beskrevet af T. Takahashi et al., J. Amer. Chem.

Soc., 94(11), 4035-4037 (1972) og af T. Nara et al., J. Antibiotics (Japan) 24(5), 321-323 (1971) samt i U.S.A. patentskrift nr. 3.682.777.

Med henblik på kobling af den organiske carboxylsyre som ovenfor beskrevet med forbindelse IV (eller et salt eller fortrinsvis en let hydrolyserbår ester eller Schiff-base, som f.eks. med benzaldehyd, deraf) er det også bekvemt og virkningsfuldt som koblingsmiddel at anvende trimer phosphonitrilchlorid (se J. Org. Chem., 33(7), 2979-81, 1968) eller N-ethoxy-l,2-dihydroquinolin (EEDQ) som beskrevet i J.

Amer. Chem. Soc., 90_r 823-824 og 1652-1653 (1968) og i U.S.A. patentskrift nr. 3.455.929. Omsætningen udføres fortrinsvis ved 30-35°C i benzen, ethanol eller tetrahydrofuran under anvendelse af omtrent ækvimolære mængder af alle tre reagenser og efterfølges af konventionel isolering og fjernelse ved konventionelle metoder af eventuelt tilstedeværende blokerende grupper.

Et udførelseseksempel på fremstilling af de omhandlede forbindelser I, som har D-konfiguration i sidekæden og hvori A svarer til en mandelamido-gruppe og A1 betegner -(CH2)nCOOH, hvori n har den ovenfor anførte betydning, består i, at man: a) fremstiller et acylerende D-mandelsyrederivat, som har den almene formel:

7 U33U

—CH-COOH OR

hvori den hydroxy1-blokerende gruppe R betegner dichloracetyl/ silyl og fortrinsvis trimethylsilyl, tetrahydropyranyl eller fortrinsvis formyl, i et vandfrit organisk opløsningsmiddel, såsom benzen, ethanol ej-ler fortrinsvis tetrahydrofuran, ved stuetemperatur eller lavere og for~ trinsvis ved ca. 5°C, og derefter b) blander dermed, fortrinsvis langsomt, en opløsning ved omtrept samme temperatur i et opløsningsmiddel, fortrinsvis vandig tetrahydrofuran, indeholdende i det væsentlige samme antal mol af en tertiær arafn, fortrinsvis en tertiær alkylamin, såsom triethylamin, og i det væsentlige samme antal mol 7-amino-3- (2-carboxymethyl eller 2-carboxyethyl-'· 2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre eller et salt eller en let hydrolyserbar Schiff-base, som f.eks. med benzaldehyd, deraf til dannelse som mellemprodukt af en syre, som har den almene formel:

/"""\-CH-C0NH—[—fS

OR /-Νγ^ΟΙ125~^Ν>γΝ-(ΟΗ2)η€02Η COOH 0 hvori n er 1 eller 2, og R har den ovenfor anførte betydning, eller et salt deraf, og derefter c) fjerner den hydroxy1-blokerende gruppe R ved konventionelle kemiske metoder til dannelse af det ønskede produkt eller et salt deraf.

I foretrukne udførelseseksempler betegner R formyl, som fjernes i trin c ved behandling med vandig base, såsom vandig natriumhydrogencarbonat, eller R betegner dichloracetyl, som fjernes i trin c ved basisk hydrolyse, fortrinsvis ved ca. pH-værdi 9-10, eller R betegner trimethylsilyl, som fjernes i trin c ved udsættelse for vandig syre.

3 1A33AA

Andre mandelamido-derivater fremstilles på lignende måde.

Et yderligere udførelseseksempel på fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse består i udskiftning af 3-acetoxygruppen fra en cephalosporansyre, som har den almene formel: AIffl—i j-' ° Ί jj

I_i^^-CH.-O-C-CH, V

1' OOCH

hvori Å har den ovenfor anførte betydning, hvilken cephalosporansyre kan fremstilles ved erstatning af de 3-thiolerede 7-aminocephalosporansyrer med 7-aminocephalosporansyre ved de heri beskrevne og andetsteds anførte acyleringsfremgangsmåder, 3 med den passende thiol HSR , som har den almene formel: Η-β-Ογ'-<™2>ηεο(Η eller h-s-^XTLch, hvori n er 1 eller 2, og hvorefter man fjerner den eventuelt på carboxylgruppen tilstedeværende beskyttende gruppe,

Udskiftningen af en sådan 3-acetoxygruppe med en sådan thiol kan udføres i opløsning, såsom i vand eller vandig acetone, ved en temperatur på i det mindste stuetemperatur og fortrinsvis indenfor intervallet på ca. 50 - 100°C i nærværelse af en mild base, såsom natriumhydro-gencarbonat, f.eks. fortrinsvis i nærheden af neutralitet, såsom ved pH-værdi ca. 6. Et overskud af thiolen anvendes fortrinsvis. Reaktionsproduktet isoleres ved omhyggelig forsyring af reaktionsblandingen efterfulgt af ekstraktion med et med vand ublandbart organisk opløsningsmiddel .

De foretrukne estre af de omhandlede cephalosporiner er som nævnt pivaloyloxymethyl -,. acetoxymethyl-, methoxymethy 1-, acetonyl-og phenacylestrene, der hver for sig kan fremstilles ved kendte fremgangsmåder. Eh udmærket fremgangsmåde til fremstilling af estere af udgangs forbinde ls en er den i USA patentskrift nr.3.284.451 beskrevne, ved 9 143344 hvilken natriumcephalothin esterificeres ved omsætning med den tilsvarende aktive chlor- eller bromforbindelse (f.eks. phenaoylbromid, chloracetone, chlormethylether, pivaloyloxymethylchlorid [ocjså benævnt chlormethylpivalat] og acetoxymethylchlorid), og derefter fjernes thie-nyl-eddikesyre-sidekæden enzymatisk som beskrevet i ovennævnte patentskrift eller kemisk som beskrevet i U.S.A. patentskrift nr. 3.575.970 og i Journal of Antibiotics, KXIV (11), 767-773 (1971). Ved en anden god fremgangsmåde omsættes triethylaminsaltet af 7-aminocephalosporan-syre direkte med den aktive halogenforbindelse som beskrevet i britisk patentskrift nr. 1.229.453.

Disse estre af 7-aminocephalosporansyre omsættes derpå med den 3 nukleofile HSR på samme måde som heri tidligere belyst for 7-aminocephalosporansyre i sig selv. Den 3-thiolerede ester af 7-aminocephalosporansyre kobles derpå sammen med den organiske carboxylsyre som pven-for anført.

Den således opnåede ester af cephalosporinen omdannes, hvis den ikke anvendes som sådan, til den frie syre, og om ønsket til et vilkårligt salt ved fjernelse af den esterificerende gruppe/ såsom ved vandig eller enzymatisk hydrolyse (såsom med menneske- eller dyre-serum) eller ved sur eller basisk hydrolyse eller ved behandling med natriumthiophenoxid som omhandlet i U.S.A. patentskrift nr. 3.284,451 og, hvad angår penicillinrækken, af Sheehan et al., J. Org. Cftem.

29(7), 2006-2008 (1964).

I endnu en alternativ syntese fremstilles den 3-thiolerede 7-aminocephalosporansyre som heri beskrevet og acyleres derefter ved 7-33111^-gruppen og esterificeres til slut, f.eks. ved omsætning af den passende alkohol med det fremstillede syrechlorid, f.eks. ved omsætning af den slutteligt opnåede cephalosporin med thionylchlorid, eller ved andre i det væsentlige sure esterificeringsfremgangsmåder.

I det følgende belyses fremstilling af udgangsmaterialer. 2-furoylcyanid

Til en opslæmning af 26,1 g (0,4 mol) formalet kaliumcyanid i 300 ml acetonitril ved 5°C sattes 26,1 g (0,2 mol) o-furoyløhlorid under opretholdelse af temperaturen under 8°C. Blandingen omrørtes i kulden i 15 minutter og opvarmedes derefter under tilbagesvaling i 30 minutter. Reaktionsblandingen afkøledes og filtreredes, og apetgnitrilet fjernedes ved 15 mm Hg (dampbad) til efterladelse af 24,5 g af en mørk olie, som anvendtes uden yderligere rensning. Et infrarødt spektrum viste et nitril-bånd ved 2265 cm 10 U3344 2-furanqlyoxylsyre

De 24,5 g rå 2-furoylcyanid blandedes med 160 ml koncentreret saltsyre ved 25°C under periodisk omrøring. Reaktionsblandingen henstilledes i 24 timer ved 25°C og fortyndedes med 80 ml vand. Reaktionsblandingen omrørtes i 5 minutter og filtreredes. Filtratet mættedes med natriumchlorid og ekstraheredes med 5 x 120 ml 1:1 ether-ethylacetat-opløsning. Ekstrakterne kombineredes, tørredes over vandfri magnesiumsulfat og inddampedes ved 30°C (15 mm Hg) til dannelse af et brunligt-orange faststof. Faststoffet opløstes i methanol, behandledes med trækul og inddampedes under formindsket tryk (15 kviksølv) til tørhed til dannelse af 17 g af syren.

Produktet omkrystalliseredes fra toluen til dannelse af 11,5 g (smeltepunkt 76°C). IR- og NMR-spektrene var konsistente for strukturen.

2-methoxyimino-2-furyleddikesyre

Til en opløsning af 4,5 g (0,032 mol) 2-furanglyoxylsyre i 40 ml 50% alkohol og 3,1 g (0,037 mol) rnethoxyamin,hydrochlorid i 6 ml vand ved 20°C sattes fortyndet natriumhydroxidopløsning indtil pH-værdi 4-5. Opløsningen omrøres ved pH-værdi 4-5 ved 25°C i 24 timer. Alkoholen fjernedes under formindsket tryk (15 mm Hg), og opløsningen indstilledes til pH-værdi 7-8 med 50% natriumhydroxidopløsning. Reaktionsblandingen ekstraheredes med 3 x 50 ml ether, og det vandige lag indstilledes til pH-værdi 1,9 under anvendelse af koncentreret saltsyre. Blandingen ekstraheredes med 5 x 50 ml ethylacetat. De organiske fraktioner kombineredes, udvaskedes med saltvand,tørredes over vandfri magnesiumsulfat og inddampedes under f o irmindsket tryk (15 mm Hg) til en olie, som afkøledes i 1 time i et isbad. Produktet opslæmmedes med "Skellysolve B" og opsamledes til dannelse af 3,1 g gule krystaller, smeltepunkt 78°C. En analytisk prøve omkrystalliseredes fra toluen, tørredes i 16 timer i vakuum over ved 25°C. IR- og NMR-spektrene var konsistente for strukturen.

Analyse beregnet for C^H^NO: C: 49,65; H: 4,17; N: 8,28.

Fundet: C: 49,30; H: 4,21; N: 8,37.

2-ethoxyiminofuryleddikesyre 7,85 g (0,056 mol) furyl-2-glyoxylsyre opløstes i 100 ml vand og indstilledes til pH-værdi 7 med 50% natriumhydroxid. 6,83 g (0,070 mol) ethoxyamin,hydrochlorid i 10 ml vand tilsattes under opretholdelse af pH-værdien ved 4-5. Reaktionsblandingen fortyndedes med 25 ml alkohol, omrørtes i 3 timer ved stuetemperatur og filtreredes derefter.

n U 3344

Alkoholen fjernedes ved 35°C (15 mm Hg), og den vandige portion indstilledes med fortyndet natriumhydroxidopløsning til pH-værdi 7-8, og udvaskedes derefter med ether, idet vaskevæskerne bortkastedøs. Den vandige fraktion indstilledes med 6N saltsyre til pH-værdi 1,5 og eks-traheredes i 3 x 80 ml ethylacetat. Acetatfraktionerne kombineredesf ud-vaskedes ned saltvand og formindskedes i volumen ved 35°C (15 mm Hg) til en olie. Olien afkøledes i isbad, tritureredes med "Skellysolve B", opsamledes og tørredes over P2°5 va^uum ved 25°C.

Udbytte: 4,8 g, smeltepunkt 83-85°C. IR- og NMR-spektrene var konsistente for strukturen.

Analyse beregnet for CgHgNC^: C: 52,46; H: 4,95; N: 7,65.

Pundet: C: 52,22; H: 4,94; N: 7,60.

Natrium-a-ethoxyimino-et- (2-furyl) acetat

Til 50 ml methanol sattes 250 mg (0,0109 mol) metallisk natrium, og der omrørtes, indtil alt natriumet var opløst. Denne natriummethoxid-opløsning behandledes med 2,0 g (0,0109 mol) g-ethoxyimino-a-(2-furyl)-eddikesyre opløst i 10 ml methanol, og der omrørtes ved stuetemperatur i 1 time. Methanolen fjernedes ved 40°C (15 mm Hg), og produktet tørredes i vakuum over P2®s ve(^ 25°C til dannelse af 2,22 g hvidt faststof, smeltepunkt dekomponering >240°C. IR- og NMR-spektrene var konsistente for strukturen.

"Skellysolve B" er en petroleumsetherfraktion med kogepunkt 60-68°C og i det væsentlige bestående af n-hexan.

12 143344 rr-ηι ο _κ™-> π f

’ Jj—C-Cl acetonitril L y—C-CN

Λ i°^3 Δ H+ HC1 Ί f ch-.onh9.hci Π Π

J JJ—C-C-OH ^ 11 JJ— C-C-OH

II II '0^ " "

3 N 0 2 O O

och3

Na CH3OH

Π Π O (C0Cl)o Π Π 0

.11 _£_V II

Li JJ—C-C-ONa 7 li y— c-c-ci • · - \q/ II ^ 0^ " 4 N\ 5 N\ ^ OCH3 ~ OCH3 2-furoylcyanid (jL)

Til en opslæmning af 78,3 g pulveriseret kaliumcyanid i 900 ml acetonitril ved 5°C sattes 59,25 ml (68,5 g) α-furoylchlorid under kraftig omrøring og under opretholdelse af temperaturen ved 4-8°C. Blandingen omrørtes ved 4-8°C i 15 minutter, og opvarmedes derefter under tilbagesvaling i 30 minutter. Blandingen afkøledes til 23-25°C, filtreredes, udvaskedes med 50 ml acetonitril, som sattes til filtratet, og acetonitrilet fjernedes ved 60°C (15 mm Hg) til efterladelse af 51 g produkt 1 som en mørk olie. Et IR-spektrum viste et nitri1- t^i bånd ved 2265 cm , og et NMR-spektrum viste et forhold på ca. 70/30 af produkt ^/furansyre. Det rå produkt 1_ anvendtes uden yderligere rensning (49% udbytte af produkt).

Fury1-2-glyoxylsyre (2)

De 51 g rå 2-furoylcyanid 1 blandedes med 500 ml koncentreret saltsyre ved 25°C. Reaktionsblandingen omrørtes i 24 timer ved 25°C og fortyndedes derefter med 240 ml vand. Blandingen omrøres i 5 minutter og filtreredes. Det sorte filtrat mættedes med natriumchlorid og ekstraheredes med 6 x 500 ml 1:1 ether-ethylacetatopløsning. (Bemærk 13 U3344 ning: I begyndelsen var ekstraktionerne vanskelige på grund af, at man ikke kunne se adskillelsen mellem to sorte faser. Efterhånden som yderligere ether-ethylacetat-ekstraktioner udførtes, forenkledes opgaven) . Ekstrakterne kombineredes og inddampedes til tørhed ved 60¾ (15 mm Hg). Det resulterende faststof opløstes i 600 ml ether, (Bemærkning: Anvendelse af alkohol bør undgås på dette punkt, da der kan dannes estre), behandledes med 10 g trækul ("Darko-KB”), filtreredés efter omrøring i 0,5 time og inddampedes til tørhed ved 50°C (15 mm Hg) til dannelse af 46,6 g produkt_2 som en lys gylden farvet syre. Dette produkt^ viste sig at indeholde et forhold på ca. 56/44 af produkt ^2/furansyre. Dette svarede til et 63% udbytte af produkt 2.

Rensning udførtes ved opløsning af det ovennævnte rå produkt 2, i H20 (50 mg/ml), titrering til pH-værdi 2,8 med HC1 og ekstraktion med 2 x 200 ml ethylacetat. Inddampning af ethylacetatekstrakterne gav 35% furansyre og 15% produkt ^2. Den vandige fase med pH-Værdi 2,8 indstilledes til pH-værdi 0,8 (HC1) og ekstraheredes med 2 x 200 ml ethylacetat. De organiske ekstrakter kombineredes og udvaskedøs med 50 ml H20. Den organiske fase inddampedes ved 50°C (15 mm Hg) til dannelse af et faststof med forhold på ca. 86/14 af produkt j2/f uransyfe Dette faststof omkrystalliseredes derefter ved opløsning af produktet 2, i toluen ved 50 mg/ml ved 80°C, dekantering og henstilling til udkrystallisering ved stuetemperatur i 18 tiner til dannelse af 13,3 g ved NMR-spektrum påvist ren syre 2. Dette svarede til et 51% udbytte i rensnings- og omkrystallisationstrinet og et totaludbytte fra 2-furoylchlorid til den rene furyl-2-glyoxylsyre 2^på 16%.

Syn-ct-methoxyimlnofuryleddikesyre

En opløsning af 4,5 g furyl-2-glyoxylsyre £ i 40 ml 50% ethanol titreredes til pH-værdi 6 med IN natriumhydroxid, og derefter tilsattes 3,1 g methoxyamin, HC1 i 6 ml vand ved 20°C. Opløsningen titrepedes til en konstant pH-værdi på 4,9 og omrørtes ved pH-værdi 4,9 i 24 timer ved 20-23°C. Ethanolen fjernedes derefter ved 50°C (15 mm Hg) og den resterende vandige opløsning titreredes til pH-værdi 8 med 50% natriumhydroxid og udvaskedes med 3 x 50 ml ether (pH indstilledes til 8 efter hver udvaskning). Det vandige lag titreredes til pH-værdi 1,9 med koncentreret HC1 og ekstraheredes med 5 x 50 ml ethylacetat, idet pH-værdien geninstiHedes til 1,9 efter hver ekstraktion. Ethylacetateks trakterne kombineredes og inddampedes til faststof ^ ved 50°C (15 mm Hg). Dette faststof opslæmmedes med 75 ml "Skellysolve B". Opslæmningen filtreredes, og faststofferne genopløstes i 16 ml toluen ved 80°C. Den varme opløsning dekanteredes og henstilledes til krystallisering 14 143344 ved 20-23°c i 18 timer til dannelse af 1,17 g produkt^ (22% udbytte af produkt). NMR-spektret var rent og konsistent for strukturen 3^ med spor af anti-isomer til stede.

Natrium-syn-a-methoxyiminofurylacetat (4j

Til 40 ml methanol sattes 0,16 g natrium. Blandingen omrørtes, indtil alt natriumet var opløst og dekanteredes derefter. Den resulterende natriummethoxid-opløsning afkøledes til 3°C og 1,12 g syn-a-methoxyiminofuryleddikesyre ^3, i 7,8 ml methanol tilsattes. Opløsningen omrørtes i 10 minutter ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdampedes ved 40°C (15 mm Hg). Remanensen 4, tørredes ved azeotropisk destillation med 3 x 20 ml benzen ved 40°C (15 mm Hg). Produktet 4, tørredes i 18 timer ved 23°C under høj vakuum (0,7 mm Hg) over P2°5 efter-ladelse af 1,25 g (99% udbytte af produktet). NMR-spektret viste, at dette produkt 4, var rent og konsistent for strukturen med 0,15 mol methanol og et spor af anti-isomer.

Til 0,63 g natrium-syn-a-methoxyiminofurylacetat £ opslæmmet i 25 ml benzen sattes fire dråber tør dimethylformamid og 0,31 ml (1,1 ækvivalent) oxalylchlorid. Denne blanding omrørtes i 40 minutter ved 20-23°C. Benzenen fjernedes ved 35°C (15 mm Hg) til tilvejebringelse af syre-chloridet som en gummiagtig remanens.

6-chlor-2,3-dihydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on [P. Francavilla og F. Lauria, J. Het. Chem., 8, 415 (1971)] (1,00 g, 5,9 mmol) i tør DMF (30 ml) sattes natriumhydrid (50% i paraffin, 0,3 g, 6,3 mmol) under omrøring med dannelse af gule krystaller til følge. Til denne blanding sattes ethylchloracetat (1,4 ml, 13 mmol), og blandingen opvarmedes ved 90°C i 8 timer under omrøring. Efter afkøling hældtes reaktionsblandingen i vand (50 ml) og ekstraheredes med toluen (5 x 40 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over vandfri natriumsulfat og inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen udkrystalliseredes fra benzen-n-hexan til dannelse af gule nåle (1,16 g, 77%), smeltepunkt 114-115°C (litteratur 110°C).

IR: V KBr 1735, 1710 cnf1. max UV: λ Et0H 231 nm (ε , 26000) max 15 NMR: 7,58 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 6,98 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 4,80 (2H, s, -CH2CO), 4,27 (2H, q, J^7,5 Hz, CH2CH3), 1,29 (3H, t, J=7,5 Hz, CH2CH3).

143344

Analyse beregnet for CgH^N^C^Cl: C: 42,12; H: 3,53; H: 21,83; Cl: 13,81.

Fundet: C: 41,54, H: 3,22, N: 21,51, Cl: 13,88, 41,46; 3,49; 21,53; 13,99.

2- carboxymethyl-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]-pyrjdazin-S-on

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (30 g, 0,12 mol) i ethanol (900 ml) sattes NaSH,2H20 (70% ren, 45/9 g, 0,36 mol), og blandingen opvapnedes under tilbagesvaling i 0,5 time. Reaktionsblandingen inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen opløstes i vand (200 ml), og koncentreret HCl sattes til opløsningen til indstilling af pH-værdi 2. Bundfaldet af 2-carboxymethyl-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo [4,3-b]pyridazin-n 3- on opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte 18,3 g (69%).

IR: ^ max 2900' 2450, 1750, 1660 UV: 260 nm (£, 19500), 313 nm (£, 7000)

lUaX

NMR: 8°^°_d6 7,88 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,45 (IH, d, PP111 J=10 Hz, pyridazin-H), 4,72 (2H, s, CH2CO).

Analyse beregnet for CyHgN^C^S: C: 37,17; H: 2,67; N: 24,77; S: 14,17.

Fundet: C: 37,35, H: 2,26, N: 23,58, S: 14,32.

37,23; 2,28; 23,69; 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-trlazolo[4,3—b]— pyrldazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre

Til en opslæmning af 7-aminocephalosporansyre (8,79 g, 32,2 mmol) i 0,1 M Phosphatpuffer (pH-værdi 7, 149 ml) sattes NaHCC>3 (8,14 g, 97,0 mmol) og thiolen 2-carboxymethyl-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (7,30 g, 32,2 mmol) under omrøring. Blandingen opvarmedes ved 80°C i 0,5 time under N2~strøm. Blandingen behandledes med aktivt carbon og indstilledes til pH-værdi 3 med koncentreret HCl. Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering 16 143344 og udvaskedes med vand til dannelse af 7,59 g (54%) 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

IR: KBr 1800, 1720, 1600, 1540, 1470 cm"1, max UV: A.Puffér (PH 7) 252 nm U, 19500), 298 nm (t, 8400). max NMR: Sp2°+K2C03 7,56 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 7,05 (IH, d, J=9 Hz·, pyridazin-H), 5,45 (IH, d, J=5 Hz, 6H), 5,05 (IH, d, 5 Hz, 7-H), 4,43 (IH, d, J=14 Hz, 3-CH2), 4,04 (IH, d, J=14 Hz, 3-CH2), 3,88 (IH, d, J=18 Hz, 2-H), 3,45 (IH, d, J=18 Hz, 2-H).

6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on·· [P.- Francabilla og F. Lauria, J. Het. Chem. 8, 415 (1971)] (17 g, 0,1. mol) i tør DMF (300 ml) sattes kalium-tert.-butoxid (0,5 g, 4,5-mmol) under omrøring. Acrylonitril (6,6 g, 0,12 mol) i tør DMF (10 ml) sattes til blandingen. Blandingen omrørtes ved 100-110°C i 24 timer, hældtes derefter i vand (700 ml) og ekstraheredes med ethyl-acetat (5 x 400 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over Na2SO^ og inddampedes. Remanensen udkrystalliseredes fra ethyl-acetat til dannelse af lysegule nåle af 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)- 2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on (2,5 g, 11%). Smeltepunkt 166 - 168°C.

IR: V KBr 2230, 1720, 1550, 1500 cm"1, max UV: X ^°Xan 373 nm (£., 2000).

. NMR: S>DMS°-d6 3,03 (2H, t, J=6,0 Hz, CH„) , 4,21 (2H, t, J=6,0 Hz, ppni 4 CH2), 7,23 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,93 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for CgHgNj-OCl: C: 42,97; H: 2,70; N: 31,32; Cl: 15,86.

Fundet: C: 42,73, H: 2,57, N: 31,36, Cl, 15,96, 42,56; 2,50; 31,68; 15,81.

2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on En opløsning af 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on (724 mg) i 6N-HC1 (15 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 6 timer. Reaktionsblandingen ekstraheredes med ethyl- 27 143344 acetat (10 x 20 ml). De kombinerede ekstrakter udvaskedes med mættet vandig natriumchlorid (50 ml), tørredes over Na2S04 og inddampedes til dannelse af lysegult, fast 2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (567 mg, 72%). Smeltepunkt 170°C (sublimation) .

IR: V KBr 3400-2400, 1730, 1710, 1540 cam"1, max UV: A dioxan 377 nm (£, 1500). max NMR: i D2°p^HC03 2,70 (2H, t, J=7,0 Hz, CHj) , 4,24 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2), 7,17 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,70 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyåe beregnet for CgH^N^O^Cl: C: 39,60» H: 2,91? N: 23,09? Cl: 14,61.

Fundet: C: 39,62, H: 2,97, N: 23,05, Cl: 13,93, 39,48? 2,67? 22,70; 14,12.

2- (2-carboxyethyl)-2,3-dlhydro-6-mercapto-3-triazolo[4,3-b]pyridazln- 3- on

En blanding af 2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on (567 mg, 2,34 mmol) og 70% natriumhydrogenaulfid, dihydrat (924 mg, 7,02 mmol) i vand (10 ml) omrørtes ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen indstilledes i rækkefølge til pH-vær-di 1 med koncentreret HC1, til pH-værdi 10 med NaOH og derefter til pH-værdi 1 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald af 2-^(2- carboxyethyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte: 418 mg (74%). Smeltepunkt 174-176°C.

IR: 3600-2600, 2440, 1730, 1720 (skulder) cm”1.

ulclX

UV: λΡΗ ZPUffer 262 11111 (€# 17000), 318 nm (e, 6600).

IUciA

NMR: 2,73 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2), 4,07 (2H, t, J=7,0 IJz, CH2), 7,30 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,74 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for CgHgN403S: C: 40,00? H: 3,36? N: 23,32; S: 13,35.

Fundet: C: 39,08, H: 3,12, N: 22,65, S: 14,23, 39,06; 3,20; 22,70? 14,29.

18 U3344 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-tria2olo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre

En blanding af 7-ACA (405 mg, 1,49 mmol), thiolen 2-(2-carboxy-ethyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (357 mg, 1,49 mmol) og NaHCO^ (375 mg, 4,47 mmol) i 0,1 M phosphatpuffer (pH-værdi 7, 8 ml) omrørtes ved 80°C i 30 minutter. Reaktionsblandingen afkøledes og filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer. Filtratet indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem~4-carboxylsyre opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte: 519 mg (77%).

IR: ^ max 3600-2200' 1800, 1725, 1620, 1550, 1480 cm"1.

UV: λ PHmaxPUffer 253 nItl 20000), 298 nm (6 10000).

NMR: é °2°^2<:03 2,20 (2H, t, J=7,0 Hz, CH,) , 3,40 (IH, d, J=17,5

Hz, 2-H), 3,85 (IH, d, J=17,5 Hz, 2-H), 4,00-4,50 (4H, m, 3-CH2 og N-CH2-), 5,01 (IH, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,40 (IH, d, J=4,0 Hz, 7-H), 6,94 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,44 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H) .

Analyse beregnet for C^gH^gNgOgS2,3/2H20: C: 40,09; H: 3,99; N: 17,52; S: 13,37.

Fundet: C: 40,06, H: 3,33, N: 16,96, S: 13,87.

40,12; 3,34; 16,98; 13,98.

7-ACA henviser til 7-aminocephalosporansyre og DMF til dimethyl-formamid.

19 U33U

Skema 1: Fremstilling af 7-amlno-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s- triazolo[4,3—b]pyridazln-3-on-6-ylthiomethyl)“3-cephein-4-carbo:H:ylsyre

/v. NaH/DMF

S' 1—— N ClCHoC00CoH, v η— " N

I I -2-2-5-Ϊ || cl—Cl —1j^oooCjHj.

1 2

NaSH I--Nj 7-ACA

* HS J<;n/h^.,,-ch2cooh 3 0 H2N-1-f^\=*\

\ N —CH2S—^jj/Nv^^N-CHjCOOH

° T T

co9h i 6-chlor-2,3-dlhydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolo[4,3—b]pyridazin-3-on (2)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on [P. Francavilla og F. Lauria, J. Het. Chem., 8, 415 (1971)1 (1, 1,00 g, 5,9 mmol) i tør DMF (30 ml) sattes natriumhydrid (50% i paraffin, 0,3 g, 6,3 mmol) under omrøring med dannelse af gule krystaller til følge. Til denne blanding sattes ethylchloracetat (1,4 ml, 13 mmol), og blandingen opvarmedes ved 90°C i 8 timer under omrøring. Efter afkøling hældtes reaktionsblandingen i vand (50 ml) og ekstrahéredes med toluen (5 x 40 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over vandfri natriumsulfat og inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen udkrystalliseredes fra benzen-n-hexan til dannelse af gule nåle af produkt 2 (1,16 g, 77%), smeltepunkt 114-115°C (litteratur 110°C).

20 U334i IEs V KBr 1735, 1710 om'1, max UV: Λ Et0H 231 nm (£ , 26000). max NMR: SCDC13 7,58 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 6,98 (IH, d, w ppm J=10 Hz, pyridazin-H), 4,80 (2H, s, -CH2CO), 4,27 (2H, q, J=7,5 Hz, CH2CH3), 1,29 (3H, t, J=7,5 Hz, CH2CH3).

Analyse beregnet for CgHgN^O-jCl: C: 42,12; H: 3,53; N: 21,83; Cl: 13,81.

„ , ^ „ »te» tt o -η N: 21,51, Cl: 13,88,

Fundets C: 41/54/ Hz 3/22/ «1 co. 70 qq 41,46; 3,49; I3,yy.

2- carboxymethyl-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3- on (3)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (2!, 30 g, 0,12 mol) i ethanol (900 ml) sattes NaSH,2H20 (70% ren, 45,9 g, 0,36 mol), og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 0,5 time. Reaktionsblandingen inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen opløstes i vand (200 ml), og koncentreret HC1 sattes til opløsningen til indstilling til pH-værdi 2. Bundfaldet (3_) opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte 18,3 g (69%).

IR: V KBr 2900, 2450, 1750, 1660 cm"1, max UV: λ 1%NaHC03acl· 260 nm (£, 19500), 313 nm (£, 7000). max NMR: έpp^°_d6 7,88 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,45 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 4,72 (2H, s, CH-jCO) .

Analyse beregnet for C^HgN^C^S: C: 37,17; H: 2,67; N: 24,77; S: 14,17.

Fundet: C: 37,35, H: 2,26, N: 23,58, S: 14,32.

37,23; 2,28; 23,69; 7-amino-3-(2-carboxymethvl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-

6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (4J

Til en opslæmning af 7-aminocephalsoporansyre (8,79 g, 32,2 mmol) i 0,1 M phosphatpuffer (pH-værdi 7, 149 ml) sattes NaHC03 (8,14 g, 97,0 mmol), og thiolen _3 (7,30 g, 32,2 mmol) under omrøring. Blandingen opvarmedes ved 80°C i 0,5 time under N2~strøm. Blandingen behandledes

21 U334A

med aktivt carbon og indstilledes til pH-værdi 3 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering og udvaekedes med vand til dannelse af 7,59 g (54%) af £.

IR: ^ 1800' 1720' 1600, 1540, 1470 cm”1.

IllaX

UV: * S=ifer (PH 252 nm (g, 19500), 298 nm (£, 8400).

IUciX

NMR: é°2°+K2C03 7,56 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 7,05(IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 5,45 (IH, d, J=5 Hz, 6-H), 5,05 (IH, d, 5 Hz, 7-H), 4,43 (IH, d, J=14 Hz, 3-CH2), 4,04 (IH, d, J=14 Hz, 3-CH2), 3,88 (IH, d, J=18 Hz, 2-H), 3,45 (IH, d, J=18 Hz, 2-H).

Pivaloyloxymethyl-7-amlno-3- (2-carboxymethyl-2,3-dihydroT’8-trlazolo~ [4,3—b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat

Fremgangsmåde A. - Titelforbindelsen fremstilles ved erstatning af den ved den umiddelbart ovenfor belyste fremgangsmåde anveftdte 7-aminocephalosporansyre med en ækvimolær vægtmængde pivaloyloxymethyl- 7-aminocephalosporanat,hydrochlorid fremstillet ifølge eksempel 2 i britisk patentskrift nr. 1.229.453 ud fra 7-aminocephalosppransyre.

Tysk patentskrift nr. 1.904.585 (Farmdoc 39.445) er ækvivalent med britisk patentskrift nr. 1.229.453.

Fremgangsmåde B. - Titelforbindelsen fremstilles ved erstatning af de i eksempel 2 af britisk patentskrift nr. 1.229.453 belyste frem-' gangsmåder anvendte 0,025 mol (6,8 g) 7-aminocephalosporansyré med en ækvimolær vægtmængde 7-amino-3- C2-carboxymethyl--2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (4) .

De respektive acetoxymethyl-, methoxymethyl-, acetonyl- og phenacyl-estre af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre fremstillet ved erstatning af det i fremgangsmåde B ovenfor anvendte chlormethylpiya-lat med en ækvimolær vægtmængde af henholdsvis chlormethylacetat, chlormethyl-methylether, chloracetone og phenacylbromid.

22 143344

Fremstilling af 7-amino-3-(2-methvl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre

-N -N

I i -> I l

Cl—Lo _N NH ' C]-Lo IS N-CH-, Y V 3 0 o o 1 2 HS-U. N N-CH-.

N Y

3 0 >l· J—'Y“'CH3 1 o C02H 4 6-chlor-2,3-dihydro-2-methyl-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (2)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-pn [P. Francavilla og F. Lauria, J. Het. Chem. _8, 415 (1971)] (1., 8,5 g, 50 mmol) i tør DMF (12 ml) sattes NaH (50% dispersion i paraffin, 2,64 g, 55 mmol), og blandingen omrørtes i 1 time ved stuetemperatur. Efter tilsætning af methyliodid (21,3 g, 150 mmol) omrørtes blandingen i 40 timer ved stuetemperatur, fortyndedes med vand (200 ml) og ekstra-heredes med CHC13 ( 4 x 100 ml). De kombinerede ekstrakter udvaskedes med vand (3 x 50 ml), behandledes med en lille mængde carbon og tørredes over vandfri Na-^SO^. Afdampning af opløsningsmidlet under formindsket tryk tilvejebragte bleggul remanens, som udkrystalliserede fra chloroform- n-hexan. Udbytte: 7,23 g (79%). Smeltepunkt 180-181°C.

IR: J jj* 1720 cm_1.

UV: λ 233 nm ( , 25200), 363 rim ( , 1600).

IltcLX ΡΠΡ1 NMR:S pp^X3 3,72 (3H, s, N-CH3), 6,88 (IH, d, J=10Hz, pyridazin-H), 7,48 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H).

23 143346

Analyse beregnet for CgH^ClN^O: C: 39,04; H; 2,73; N: 30,35; Cl: 19,21.

Fundet: C: 39,24, H: 2,54, N: 30,63, Cl: 19,59, 39,28; 2,61; 30,80; 19,26.

6- mercapto-2,3-dlhydro-2-methyl-s-triazolo [4,3-b] pyridazin-3~on (31)

En blanding af produkt 2 (6,50 g, 35,7 mmol) og NaSH,2H2Q (70% ren, 9,4 g) i vand (100 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 15 minutter. Blandingen afkøledes og gjordes sur til pH-værdi 1 mad kon~ centeret HC1 til udfældning af thiolen 3, som opsamledes ved filtre ring og opløstes i vandig mættet NaHCO^ (100 ml). Opløsningen behandh ledes med en lille mængde carbon og gjordes sur med fortyndet HC1 til udfældning af forbindelsen ^ som bleggule prismer. Udbytte 5,72 g (89%). Smeltepunkt >280°C.

IR: V 2450 (-SH), 1710 (C=0) cm"1.

UV: λ 1%NaHC03 261 nm 16300), 315 nm (i, 5800).

ItlaX

NMR:&D2°**0H 3,60 (3H, s, N-CH3) , 7,08 (2H, s, pyridazin-H),

Analyse beregnet for CgHgN4OS: C: 39,55; H: 3,32; N: 30,75; S: 17,60*

Fundet: C: 39,57, H: 3,14, N: 30,32, S: 17,80, 39,66; 3,22; 30,61; 17,89.

7- amino-3- (2-methyl-2,3-dihydro-s-trlazolo[4,3-b]pyridazin-3-QnT6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (_4)

En blanding af 7-aminocephalosporansyre (7-ACA, 5,44 g, 20 mmol), forbindelse 3 (3,64 g, 20 mmol) og NaHC03 (3,36 g, 40 mmol) i 0,1 M

phosphatpuffer (pH-værdi 7, 100 ml) opvarmedes under omrøring ved 80°C i 30 minutter. Den varme blanding behandledes med en lille mængd$ carbon og filtratet gjordes surt til pH-værdi 4 med fortyndet HC1 til udfældning af produktet 4, som opsamledes ved filtrering, udvaskenes med vand (50 ml) og tørredes. Udbytte: 5,73 g (73%). Smeltepunkt 240-245°C (dekomponering).

IR: V 1800 (β-lactam C=0), 1725 (C*0), 1610 og 1410 (£00 )

“ X IticiX

cm .

UV: λ 1%2!SC03 253 nm (ε, 20000), 305 (ε, 8400).

IUclX

143344 24 . NMR: δ D20+NaHC03 3,69 (3H, s, N-CH,), 5,08 (1H, d, J=4,5 Hz, ppm ~ «j 6-H), 5,48 (IH, d, J=4,5 Hz, 7-H), 7,00 (1H, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,52 (1H, d, J=10 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C^H.^NgO^S2 ^2*3: C: 40,76; H: 3,91; N: 20,39; S: 15,55.

Fundet: C: 40,84, H: 3,44, N: 20,50, S: 15,19, 40,63; 3,31; 20,36; 15,57.

Fremstilling af BB-S515 (Sammenligningsforbindelse) j' T 0^ΝΧί^-εΗ25Α^ΝγΚΗ

Ctyia <5 BB-S515 BB-S515;'7-[(2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-natriigmsalt

Til en opløsning af (2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)-eddikesyre (169 mg, 1 mmol) og triethylamin (0,14 ml, 1 mmol) i dichlormethan (2 ml) sattes oxalylchlorid (0,09 ml, 1 mmol) ved 0-5°C, og blandingen omrørtes i 30 minutter. Opløsningsmidlet afdampedes under formindsket tryk til tilvejebringelse af en olieagtig remanens. En opløsning af den olieagtige remanens i tør acetone (5 ml) sattes efter filtrering til en blanding af 7-amino-3-(2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (380 mg, 1 mmol) (se USA patentskrift nr. 3.907.786) og natriumhydrogencarbonat (336 mg, 4 mmol) i vand (10 ml) ved 0-5°C. Reaktionsblandingen omrørtes ved 0-5°C i 2 timer. Det meste af acetonen afdampedes ved formindsket tryk, hvorefter det vandige koncentrat udvaskedes med ether (2 x 30 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HCl. Det resulterende bundfald (338 mg) opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum.

En opslæmning af den frie syre (303 mg) i vand (10 ml) indstilledes til pH-værdi 6,5 med vandig NaOH (IN, 0,6 ml) og filtreredes til dannelse af en klar opløsning, som lyofiliseredes til dannelse af 7-[(2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3—b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-natrium-

25 1433U

salt som et lysebrunt pulver (222 mg, 46%), smeltepunkt > 2$0°C ((Se'* komponering).

IR: ^ 3410, 1760, 1720, 1600 cm"1.

IClaX

UV: λ pHmLpUffer 256 nm (£, 20600), 274 (E, 18800).

ulclX

Fremstilling af D-mandelsyre-carboxyanhydrld.

ΓΩΠ C6H5-CH-COOH ^uoj-2 ^ C6H5“|—-j=° * 1 2 0 D-mandelsyre-carboxyanhydrid (_2) .

Phosgen bobledes gennem en opløsning af 2,0 g (0,013 mol) D(-»)*-mandelsyre (1) i tør tetrahydrofuran i 30 minutter. Opløsninger) hen-stilledes natten over, hvorefter den opvarmedes under tilbagesvaling i 10 minutter. Afdampning af opløsningsmidlet under f ormindket· tryk tilvejebragte en olieagtig remanens, som størknedes ved triturejring med n-hexan (20 ml). Produktet opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum over KOH. Udbytte 2,3 g D-mandelsyre-carboxyanhydrid* IR: 1895, 1875, 1780 cm"1, max

De foretrukne og mest aktive af de omhandlede forbindelser er.de forbindelser, som har D-konfiguration ved o-carbonatomet i 7-sidekmden, d.v.s. de forbindelser, som er fremstillet ud fra D-mandelsyre eller en monosubstitueret D-mandelsyre, som belyst her. Tillige er konfigu-’-rationen i de to optisk aktive, asymmetriske positioner i fi-lactam--· kernen den konfiguration, som findes i ved fermentering fremstillet cephalosporin C og i den derfra afledte 7-aminocephalosporanøyre.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses i det følgende nær’-mere ved hjælp af eksempler.

26 U3344

Eksempel 1 / C6VCH-C „2N-p- ° V * Μ Y a 2 C02H o 1 2

-» °6« 5-CH-CONH-r-YS

C02H 0 3, BB-S488 BB-S488; 7- (D-mandelamido)-3- (2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo- [4,3-h] pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxvlsyre (3j D-(-}-mandelsyre-O-carboxyanhydrid (se OSA patentskrifterne nr. 3.167.549, 3.840.531 og 3.910.900), (1, 400 mg, 2,3 mmol) sattes portionsvis til en opløsning af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxyl-syre (2t 657 mg, 1,5 mmol) og natriumhydrogencarbonat (445 mg, 5,3 mmol) i 50% vandig acetone (30 ml) ved ca. 0°C under kraftig omrøring. Blandigen omrørtes i 1 time ved stuetemperatur og inddampedes under fomindsket tryk under 40°C til fjernelse af acetone. Den resulterende vandige opløsning udvaskedes med ether og gjordes sur til pH-værdi 1 med fortyndet HC1 til tilvejebringelse af et gummiagtigt bundfald, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og opløstes i tetrahydro-furan (THF) (100 ml). THF-opløsningen behandledes med en lille mængde aktiv carbon, tørredes over vandfri natriumsulfat og filtreredes. Filtratet inddampedes under formindsket tryk, og remanensen tritureredes med ether. Det bleggule bundfald opsamledes ved filtrering, og kromato-graferedes på en silicagel-søjle ("Wako-gel C-200", 10 g), idet der elueredes med en opløsning af chloroform-methanol (20:1). Fraktionerne, som indeholdt det ønskede produkt, kombineredes og koncentreredes under formindsket tryk. Koncentratet fortyndedes med ether (100 ml) til udfældning af produktet (3}, som opsamledes ved filtrering, udva- 27 163344 skedes med ether (30 ml) og tørredes. Udbytte: 279 mg (34%), gineltepunkt 173-176°C (dekomponering).

IR: ^ KBr 3600-2400, 1770, 1720, 1520, 1495, 1365, 1245 cuf1.

max UV: Λ Et°H 254 nm (£, 18000), 297 nm (C, 9000, skuldej?) , max NMR: I DMS0-d6 3,68 (2H, m, 2-H), 4,03 (IH, d, J»13 H?f 3“H), ppm — ~ 4,34 (IH, d, J=13 Hz, 3-H) , 4,64 (2H, s, NCH2CO) , 5,00 (IH, d, J=4 IfZ, 6-H), 5,02 (IH, s, PhCH), 5,63 (IH, d-d, J®4 & 9 Hz, an dublft med tilsætning af D20, J=4 Hz, 7-H), 6,97 (IH, d, J=10 Hz, pyridazi-n-H), 7,1-7,4 (5H, m, phenyl-H), 7,60 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H) # '8,60 (IH, d, J=9 Hz, forsvandt ved tilsætning af Dj0' C0NH)·

Analyse beregnet for C23H20N6°8S2,1//2H2O: C: 47,50» H: 3,64» N: 14,45» Si 3,1,03. Fundet: C: 47,34» H: 3,48» N: 13,90» S: 11,01.

In vitro-aktivitet (Tabel I) MIC-værdierne bestemtes ved Steers' agar-fortyndingsmetøde ved anvendelse af Mueller-Hinton agar mod 4 gram-positive og 28 gram-negative bakterier, og resultaterne er vist i tabel I.

In vitro-aktivitet (Tabel II og III) MIC“bestemmelser udførtes ved rækkevis dobbel tagar-forty^dingspie-tode under anvendelse af Steers' appéirat på Mueller-Hinton agarplade mod 51 gram-positive og 95 grain-negative bakterier. Resultaterne gr vist i tabel II og III.

Mediers virkning på MIC

MIC-værdierne bestemtes under anvendelse af tre slags agarjnedier [næringssubstrat-agar (NA), Mueller-Hinton agar (MHA) og hjsyneinfu-slons-agar (HIA)]. Resultaterne opnået med BB-S488 og cefaman^ol ar vist i tabel IV, som viser ringe virkning fra medier for disse eephalo-sporiners vedkommende.

Blodniveauer i mus

Til grupper af mus administreredes subkutant gradlerede doser på 40, 20 og 10 mg/kg. Blodprøver opsamlet fra orbitale sinusser testedes ved papirplade-agar-diffusionsmetoden på Sarcina lutea PCI

28 143344 1001-plader. Resultaterne er vist i tabel V.

In vivo-aktivitet

Komparativ in vivo evaluering udførtes ved standard undersøgelsesinfektionen i mus mod de følgende pathogene bakterier: S. aureus Smith E. coli Juhl K. pneumoniae A 9977 Resultaterne er vist i tabel vi.

Tabel I. In vitro-antibakteriel aktivitet af BB-S488 ved agarfortyndingsmetode (Mueller-Hlnton agar) 29 U3344 MIC (yug/ml)_

Testorganisme BB-S488 ' Cefamandol S. aureus Smith A9537 0,2 0,05 S. aureus A9497 0,1 0,05 S. aureus BX-1633 A9606 0,4 0,1

St. faecalis A9536 100 50 E. coli NIHJ 0,025 0,025 E. coli ATCC 8739 0,1 0,05 E. coli Juhl A15119 0,2 0,4 E. coli BX-1373 0,2 0,8 E. coli A15810 0,1 0,4 E. coli A9660 0,05 0,1 E. coli A15147 3,1 0,4

Kl. pneumoniae A9678 3,1 3,1

Kl. pneumoniae A9977 0,05 0,2

Kl. pneumoniae A15130 0,2 0,8

Kl. pneumoniae A9867 0,2 0,8

Pr. vulgaris A9436 0,1 0,4

Pr. vulgaris A9699 0.2 6,3

Pr. mirabilis A9554 0,05 0,4

Pr. mirabilis A9900 0,1 0,8

Pr. morganii A9553 >100 >100

Pr. morganii A20031 0,1 0,8

Pr. rettgeri A15167 0,05 0,2

Ps. aeruginosa A9930 >100 >100

Ps. aeruginosa A9843 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,025 0,1

Shig. flexneri A9684 12,5 6,3

Shig. sonnei A9516 0,025 0,05

Serr. marcescens A20019 100 100

Enterob. cloacae A9656 3,1 3,1

Sal. enteritidis A9531 0,05 0,1

Sal. typhosa A9498 0,05 0,1 B. anthracis A9504 0,1 0,1

Tabel II. In vitro-antibakteriel aktivitet i Mueller-Hinton agar (gram-positive) 30 1*3344 MIC ( ,ug/ml)_

Kode nr. Testorganisme BB-S488 ' Cefamandol

Sa-2 S. aureus Smith A9537 0,4 0,2

Sa-3 S. aureus nr. 193 0,8 0,2

Sa-8 S. aureus 0,4 0,2

Sa-9 S. aureus nr. 193 0,8 0,2

Sa-10 S. aureus A20239 1,6 0,4

Sa-11 S. aureus BX-1633 A9606 0,4 0,2

Sa-12 S. aureus A9497 0,2 0,1

Sa-29 S. aureus nr. 193 1,6 0,8

Sa-33 S. aureus Terajima 0,0125 0,0125

Sa-34 S, aureus A15092 0,8 0,2

Sa-35 S. aureus A15094 0,8 0,4

Sa-36 S. aureus Russell 0,8 0,4

Sa-37 S. aureus A9524 1,6 0,8

Sa-38 S. aureus A9534 0,4 0,2

Sa-39 S. aureus A9578 0,8 0,4

Sa-40 S. aureus A9601 0,8 0,4

Sa-41 S. aureus A9602 0,8 0,2

Sa-44 S. aureus A15097 25 25

Sa-56 S. aureus A9630 3,1 0,8

Sa-57 S. aureus A9748 25 3,1

Sa-58 S. aureus A15033 12,5 1,6

Sa-59 S. aureus A15096 100 6,3

Sa-60 S. aureus A20604 50 3,1

Sa-61 S. aureus A20605 100 6,3

Sa-62 S. aureus A20606 3,1 0,8

Sa-63 S. aureus A20607 >100 12,5

Sa-64 S. aureus A20608 100 6,3

Sa-65 S. aureus A20609 100 6,3

Sa-66 S. aureus A20610 100 6,3

Sa-67 S. aureus A20611 100 6,3

Sa-68 S. aureus A20612 1,6 0,4

Sa-69 S. aureus A20613 100 6,3

Sp-1 S. pyogenes S-23 0,4 0,1

Sp-2 S. pyogenes Dick 0,4 0,1

Sp-3 S. pyogenes A9604 0,4 0,1

Sp-4 S. pyogenes A20065 0,2 0,1

Sp-5 S. pyogenes A15040 0,4 0,1

Sp-6 S. pyogenes A20066 0,4 0,1

Sp-7 S. pyogenes Dig 7 0,4 0,1

Sp-8 S. pyogenes A15041 0,4 0,1

Sp-9 S. pyogenes A20201 0,4 0,1

Sp-10 S. pyogenes A20202 0,4 0,1

Dp-1 D. pneumoniae Type II 0,2 0,2

Dp-2 D. pneumoniae Type I Neufeld 0,2 0,2

Dp-3 D. pneumoniae Type III 0,2 0,2

Dp-4 D. pneumoniae A9585 0,2 0,2

Dp-5 D. pneumoniae A15069 0,2 0,2

Dp-6 D. pneumoniae A20167 0,2 0,2

Dp-7 D. pneumoniae A20759 0,2 0,2

Dp-8 D. pneumoniae A20769 0,2 0,2

Dp-9 D. pneumoniae A20770 0,2 0,2 31

Tabel III.In vitro-antlbakterlel aktivitet i Mueller-Hinton agar (gram-negative) 143344 MIC (,ug/ml)_

Kode nr. Testorganisme BB-S488 ' Cefamandol

Ec-1 E. coli NIHJ 0,2 0,1

Ec-3 E. coli Juhl A15119 0,2 0,8

Ec-4 E. coli A15169 12,5 6,3

Ec-5 E. coli K-12, ML-1630 A20363 0,2 0,8

Ec-11 E. coli A20366 50 25

Ec-15 E. coli ATCC 8739 0,2 0,1

Ec-34 E. coli A9660 0,1 0,1

Ec-35 E. coli A9435 0,4 0,8

Ec-36 E. coli A15147 3,1 1,6

Ec-40 E. coli A20361 0,2 0,8

Ec-44 E. coli A9535 0,1 0,1

Ec-45 E. coli A15148 3,1 1,6

Ec-46 E. coli A15164 25 12,5

Ec-47 E. coli A15170 100 50

Ec-49 E. coli A20107 0,4 0,2 :

Ec-50 E. coli A20109 0,2 0,8

Ec-51 E. coli A20343 50 12,5

Ec-56 E. coli A20365 25 12,5 i

Ec-58 E. coli A9675 0,4 1,6 :..-

Ec-59 E. coli A20766 0,2 0,8 .: .-

Ec-62 E. coli A20895 0,4 0,8

El-1 E. cloacae A9656 3,1 3,1

El-2 E. cloacae A20364 3,1 3,1

El-4 E. cloacae A20650 1,6 1,6

El-6 E. cloacae A9657 0,8 0,8

El-7 Ξ. cloacae A9659 1,6 0,8

El-8 E. cloacae A9655 1,6 1,6

El-9 E. cloacae A20021 >100 100

El-11 E. cloacae A20344 >100 >100

El-12 E. cloacae A21006 1,6 3,1

El-14 E. cloacae A20953 0,8 3,1

Pm-1 P. mirabilis A9554 0,1 0,8

Pm-2 P. mirabilis A9900 0,2 1,6

Pm-3 P. mirabilis A20119 0,4 3,1

Pm-4 P. mirabilis A20454 0,2 1,6

Pm-5 P. mirabilis A9702 0,1 0,8

Pm-6 P. mirabilis A21222 1,6 1,6

Pg-1 P. morganii A9553 >100 >100

Pg-2 P. morganii A20031 0,2 1,6

Pg-3 P. morganii A9636 0,8 1,6

Pg-5 P. morganii A15166 0,1 0,2

Pg-6 P. morganii A20455 0,4 1,6

Pg-7 P. morganii A20457 0,2 0,8

Pg-8 P. morganii A15153 0,1 0,8

Pg-9 P. morganii A15149 0,8 3,1

Pv-1 P. vulgaris A9436 0,2 0,8

Pv-2 P. vulgaris A9526 6,3 1,6

Pv-3 P. vulgaris A9699 6,3 50

Pv-4 P. vulgaris ATCC 9920 0,1 0,2

Pv-5 P. vulgaris A9539 25 >100

Pv-6 P. vulgaris A9716 0,1 0,8

Pv-7 P. vulgaris A21240 25 >100 32

U33U

TabelIII(fortsat) MIC (yUg/ml)_

Kode nr. Testorganisme BB-S488 ' Cefamandol

Pr-1 P. rettgeri A15167 0,1 0,2

Pr-2 P. rettgeri A9637 0,1 0,1

Pr-4 P. rettgeri A20645 0,1 0,1

Pr-5 P. rettgeri A20915 0,2 0,8

Pr-6 P. rettgeri A20920 0,1 0,2

Pn-1 P. inconstans A20615 0,1 0,8

Ps-1 P. stuartii A20745 0,4 0,8

Ps-2 P. stuartii A20894 0,2 0,8

Ps-3 P. stuartii A20911 0,8 0,8

Ps-4 P. stuartii A21051 50 25

Ps-5 P. stuartii A21057 0,2 0,8

Kp-1 K. pneumoniae Dll 0,1 0,8

Kp-2 K. pneumoniae A9678 3,1 1,6

Kp-3 K. pneumoniae A9977 0,1 0,8

Kp-4 K. pneumoniae A15130 0,2 0,8

Kp-7 K. pneumoniae A9867 0,4 0,8

Kp-8 K. pneumoniae A20680 25 12,5

Kp-9 K. pneumoniae A20636 12,5 12,5

Kp-10 K. pneumoniae A20328 6,3 3,1

Kp-11 K. pneumoniae A20330 1,6 12,5

Kp—12 K. pneumoniae A21228 6,3 6,3

Kx-2 Klebsiella sp. A9662 0,4 1,6

Kx-3 Klebsiella sp. A20346 0,2 0,8

Sm-1 S. marcescens A20019 25 25

Sm-2 S. marcescens A20335 3,1 12,5

Sm-3 S. marcescens A20336 6,3 12,5

Sm-4 S. marcescens A20442 6,3 12,5

Sm-5 S. marcescens A20222 3,1 12,5

Sm~6 S. marcescens A20460 6,3 12,5

Sm-9 S. marcescens A20333 6,3 50

Sm-10 S. marcescens A20334 6,3 50

Sm-11 S. marcescens A20459 6,3 25

Sm-12 S. marcescens A20461 6,3 50

Se-1 S. enteritidis A9531 0,1 0,2

St-1 S. typhosa 0,1 0,2

Sh-1 S. paratyphi 0,1 0,2

St-101 S. typhimurium 0,1 0,2

Sd-1 S. dysenteriae 0,1 0,2

Sr-1 S. flexneri A9684 12,5 3,1

Ss-1 S. sonnei Yale 0,1 0,1

Cx-1 Citrobacter sp. A20673 1,6 1,6

Cx-2 Citrobacter sp. A20694 1,6 1,6

Cx-3 Citrobacter sp. A20695 1,6 1,6 33 143344 in O rlrlLO H CO 00 ^ ^ CO CO 00 ID CN ID CN H ** jf] kkk V*» kkk k k k k k k V k k k k k k k 2 oocoooooococNjinmoooooooooooHOHOfooooo o m h cn in o m o ooo

i—I H H f—I i—I i—I

Λ Λ Λ* r—( o Ό

GrtJcN^riH h -ri* η h in h oooo·«^·^· ·«* >*ι· oo η H ro m (N

(Q { * * * ». * "» N *. «·. ^ ^ r. ··. *- » .* "» v .. h.

gtd oorooooinorocMLnnooooooooooorooioovooooo (0 O CN H CN Ο O oo lilino

l|-l i—I (—I (H lH I—I rH

φ -N ^ A

o cn ^ n ho*) hid in n ro ^ co ^ cn m cn Tf 10 cn n ^ ro ^ kkk k k k k kkk k k k k k k k k S k k k k k

U £ OO^DOOOOOHinCNVD^DOOOOOVDOOOOHOVDOVDOOOO

Φ 0 m cn h 0 0 in in 0

in H H H H

^ Ά» A. A A, 0)

G

•H

X) m m

U rij CO 00 O CM CN ΓΟ Η H CN ^ CN ri CO H CV] H O in CN in 00 <N

Q Jjj k k k S k k kk k k k k k k k kk.kk.kk k k

4-1 g OOOOOOOOlOOOCOfOOOOOOOOOOOOOlNOCNCTOOO

(D OOOOOO O H HO O

ΰ ^ ΙλΙ-^

OJ 00 U CO

φ ^ in 4h co < oo vd o^r cn ro com cn co cn cn h cm e\i co h ** cn (U { |—J k k k k k k kk kkkk kk kkk k k

u CQtrJ OHOOOOOO’DOOiD'DOOOOOOOOOOOOOOLOOOOO

(¾ OO O OO O O O mCNOOO

Η Η H i—It—I Η Η Η i—I i—I H

Q A A Λ A Ά 'N Λ /\ A A

00 00 oo η η ο; h cn m m ^ co oj o) co Η h cn ·ςτ ^ co n« «ςρ f^jkk kk kk kk kkkkkkk kkk k k

CO £ OCOOOOOOOUDOOCNCNOOOOOOOQOOOOOOOOOOO

1 oo o loiohho ο inmooo

PQ Η Η Η Η Η HHH

PQ Λ Λ Λ A λ, A, m ιΰ x u vo

HO X

S r> vo vo X

ro σ ο "d* σν vo •d in ri! σ X χ H ro o ρ σ η χ χ r·' η ο χ oX HinMiitfrionn^f i<n vo Η σ viMfijiifiiNvoijiifionPiinvDvfoirioooio

Ui ro t-·· ro in ro ιοιοη<σΗι<σσιησιηο·Ν,Ηη~οοσίΝθΝσιη G tu Λ vo σ in i—(X r"X χχ ιηηΐΊ<< *5ΐ<ιοσσιηοοιηοοο.<<!<;σ •η tn +> Η ο σ ¢¢1000^101000 ·σισι<<οΐΜΝΗΝΝΜ «;

C η -η i m <! vo -ivo^uiNNiDfDftijJ/i! <!ri!ri!ri;ri!ri;ri!tnmnJ

M (DfiXH brHnuHHmCCriltCiCcn enen G G tn en G Ό cnffXenKiloO'nino -h-h te en-ri-H-HH-ri-ri-Hi-i-ri o a) οή •G C ·ΗΗ3^ΒΗΗΝ(ί(Μ)β(;(Ι·Η·ΗΗΗτ|·Η·ΗΐΗ·ΗτΙ^ϋθηϋ > h tninnH2brt;i<<!<i<ii)ieid00HHMTiTiccc04J4J+J(ni(!-HBj

X! P P P (G OODiSHnJrt(X!X!(tJi0<0&’MMMa)(Pt7>M

tn Μ φφφϋΗΗΗΗ-Η-Η-ΗΐΰίΰιβρρΦσοιιΰίοσΟ'σ-ΡίΰίΰπίϋϋΡΛ

!-l O GGGO)HHHHiHi-li-tOOO<U<l)-<HHr-IGGGGM4JpPPMGS-l4J

0) Ή ppptdOOOOOOOHHHCCtnPP-HHOOOa+l-P+JiOajtUC + g +J njtanjiHoocjuuuooooft ΛΛ >>6fiBHfiMtatntnSS(tfit! b tn tu (i) CD .................H............... tn g E-< CO CO CO CO W W W Μ Μ Η Η H W W X X X ft ft ft ft ft ft ft ft ft ft ft CO CO ft ffl rt)

S

* P

· -p H G o

G (tJ

H ri ij H in IO VO Η H tH

0) tu Nri'ffirinHrin^inriNHfn^inrKOriMriMioHHiNreHmnn l

ΰ b I I I I I I I I I I I I I I I I I 1 I I I I I I I I I I I I I I GI

ιΰ 0 (tJ(tSnjmuuuuouuHHr-iaax>>SSCntntnMtncnagHiO(C

EH X CO cn cn CO Μ Μ H W Μ Η Η M W W W X X Λ 1¾ PH 1¾ ft (¾ A ft Ρμ P4 ft CO CO cu m X

34 U334i

Tabel V. Blodniveauer ( ,ug/ml) i subkutant behandlede mus

Dosis Tid BB-S488 Cefamandol 40 mg/kg 15 min. 19 18 30 min. 17 11 60 min. 12 3,9 120 min. 1,6 0,3 20 mg/kg 15 min. 7,4 9,5 30 min. 6 4,1 60 min. 4,3 1 120 min. 0,7 0,1 10 mg/kg 15 min. 5 3,8 30 min. 3 1,5 60 min. 0,8 0,3 120 min. — 0,1 35 143344

Tabel VI. In vivo-aktivitet

Testorganisme Dosis BB-S488 Cefamandol S. aureus Smith 25 mg/kg 5/5* 5/5 6.3 5/5 5/5 1.6 5/5 5/5 0,4 5/5 1/5 0,1 2/5 PD^q 0,12 mg/kg 0,6 mg/kg E. cpli Juhl 25 mg/kg 5/5 5/5 6.3 5/5 5/5 1/6 5/5 2/5 0,4 5/5 0/5 0,1 2/5 PD^q 0,12 mg/kg 1,8 mg/kg K. pneumoni ae 25 mg/kg 5/5 5/5 A"77 6,3 5/5 1/5 1.6 5/5 0/5 0,4 4/5 0/5 0,1 0/5 PD^0 0,26 mg/kg 6,25 mg/kg X Antal overlevende / Antal testede 36 143344

Yderligere PD^-data (enkelt sc.-behandling)

Forsøg Antal Dosis BB-S Cefam-

Testorganisme nr. LD50 (mg/kg) 488 andol K. pneumoniae C-805 3x10^ 25 5/5 5/5 A9977 (Kp-3) 6,3 5/5 1/5 1.6 5/5 0/5 0,4 4/5 0/5 0,1 0/5 PD50 (mg/kg) 0,26 9,4 P. vulgaris C-808 1x10 50 --- 3/5 A9436 (Pv-1 25 5/5 12.5 1/5 6.3 5/5 3.1 0/5 1.6 3/5 --- 0,8 0/5 0,4 1/5 PD50 (mg/kg) 1,1 36 P. mirabilis C-810 1x10^ 50 --- 2/5 A9900 (Pm-2) oc 25 5/5 --- 12.5 1/5 6.3 5/5 3.1 0/5 1.6 4/5 0,8 0/5 0,4 0/5 0,2 0/5 0,1 0/5 PD50 (mg/kg) 1,1 50 37 14 3 3 Λ Λ

Forsøg Antal Dosis BB-S Cefam-Testorganisme nr. LD50 (mg/kg) 488 andol E. cloacae C-811 1 x 10 100 5/5 5/5 A20464 (El-19) 25 5/5 5/5 6,3 5/5 5/5 1,6 4/5 4/5 0,4 2/5 1/5 PD50 (mg/kg) 0,54 0,8

Urinær genudvinding i rotter % genudvinding (0-24 timer)

Dosis (sc.) BB-S488 Cefamandol 10 mg/kg 38,8 58,3

Neprotoxicitetstest i kaniner

Intet neprotoxisk tegn observeredes i kaninerne, som var behandlet med 100 mg/kg (iv) BB-S488, mens cephaloridin viste alvorlig nepro-toxicitet i den komparative test.

Stabilitet af BB-S488

Stabilitet af BB-S488 bestemtes i både en 10% og en 0,2% opløsning. Stabiliteten er angivet som den i testopløsningen tilbageblevne relative aktivitet ved givne tidspunkter i forhold til den oprindelige opløsning. Aktiviteten efterprøvedes ved anvendelse af papirplader på B. subtilis PCI 219-plade (pH-værdi 6).

(1) Stabilitet i en 10% vandig opløsning ved stuetemperatur m Tilbageblivende aktivitet (%)

Forbindelse pH-værdiK j 0 2 3 7 dage BB-S488 6,1 100 128 90 116 (1) Uindstillet pH-værdi for 10% opløsningen.

(?) Tilbageblivende aktivitet (%)

Forbindelse pH-vardi( ; Q~~ T" 2 3 " 7 dage Γ4 100 93 78 102 BB-S488 Å 7 100 87 64 56 i 9 100 20 14 13 0 38 143344 ^ pH-værdi 4: 0,1 M AcOH - NaOAc-puffer.

pH-værdi 7: 0,1 M phosphat-puffer.

pH-værdi 9: 0,1 M NH4OH-NH4Cl-puffer.

Eksempel 2 Q-pOH CXgCHCOCI. ^ Q_,hcooh ' S0C12 ^ 1 OH 0C0CHClo D-(-) N.

CHCOC1 h~A0A-S-CMTP(2)^ CHCO-ACA-S-CMTP

OCOCHCl- 0C0CHClo 2 d * / Na,gCO^

CHCQ-ACA-S-CMTP

OH

4 BB-S488

Dichloracetylmandeloylchlorid {2)

En blanding af D(-)-mandelsyre (1, 1,52 g, 10 mmol) og dichlor-acetylchlorid (4,41 g, 30 mmol) opvarmedes ved 80-85°C i 1,5 time, og det overskydende dichloracetylchlorid fjernedes under formindsket tryk. Til remanensen sattes thionylchlorid (2,5 ml), og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 1,5 time. Overskydende thionylchlorid fjernedes ved destillation, og tør benzen tilsattes. Inddampning gentoges. Den resterende olie henstilledes over KOH ved 1 mm Hg natten over ved stuetemperatur til fjernelse af dichloracetylchlorid. Udbytte: 2,8 g (100%). Dette produkt anvendtes i det næste trin uden yderligere rensning.

39 143344 IR: V liq· 1780, 1160 cm"1, max NMR: <5 pp^4 591 (IH, s, PhCH eller C0CHC12) , 6,00 (IH, s, PhCH eller COCHC^)/ 7,32 (5H, s, phenyl-H).

BB-S488; 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo-

[4,3-b3pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (4J

En opløsning af dichloracetylmandeloylchlorid opnået som ovenfor (2, 2,8 g, 10 mmol) i tør acetone (30 ml) sattes dråbevis til en omrørt opløsning af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b] -pyridazin-3-on-6-y1thiomethy1)-3-cephem-4-carboxylsyre (H-ACA-S-CtCTP) (3, 3,94 g, 9 mmol) og triethylamin (3,54 g, 35 mmol) i 50% vandig acetone (120 ml) ved 0 - 5°C. Blandingen henstilledes til opnåelse af stuetemperatur i løbet af 1 time under omrøring og indstilledes til pH-værdi 11 med 5% vandig natriumcarbonat (ca. 12 ml krævedes). Blandingen henstilledes ved stuetemperatur i 30 minutter, gjordes sur til pH-værdi 1 med fortyndet HCl og inddampedes under formindsket tryk til fjernelse af acetone under 40°C. Bundfaldet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand (20 ml) og lufttørredes. Det tørrede materiale opløstes i THF (150 ml), omrørtes i 5 minutter ved 40-50^C og filtreredes til fjernelse af uopløselig uomsat forbindelse 3 (0,54 g, 14% genudvinding). Filtratet kromatograferedes på en silicagel-søjle ("Wako-gel, C-200", 30 g), idet der elueredes med chloroform-methanol (100:5). Eluaterne opsamledes i 50 ml fraktioner under overvågning ved TLC (silicagel, opløsningsmiddel CH3CN-vand = 4:1, påvist med I2)· Fraktionerne, som indeholdt det ønskede produkt, kombineredes, behandledes med en lille mængde carbon og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med chloroform (50 ml) til opnåelse af 2,36 g (46%) 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo [4, 3-b]pyridazin-3-on-6-y1thiomethy1)-3-cephem-4-carboxylsyre (4_) , smeltepunkt 165-170°C (dekomponering).

IR: λ) KBr 3600-2500, 1780, 1720, 1500, 1410, 1355, 1220, 1195 cm"1, max UV: λ Et0H 254 nm (f, 18300), 297 nm (skulder, £ , 9300). max NMR:$DMS0“d6 3,84 (2H, m, 2-H) , 4,17 (2H, d, 13 Hz, 3-H) , 4,50 ppm — — (IH, d, 13 Hz, 3-H), 4,82 (2H, s, NCH2COO), 5,20 (IH, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,25 (IH, s, PhCH), 5,87 (IH, d-d, 4,5 & 9 Hz, 7-H, en dublet (J=4,5 Hz) ved tilsætning af D20), 7,25 (IH, d, 11 Hz, pyridazin-H), 7,4-7,7 (5H, 143344 40 m, phenyl-H), 7,90 (IH, d, 11 Hz, pyridazin-H), 9,0 (IH, d, 9 Hz, 7-CONH, forsvandt ved tilsætning af D2O).

Analyse beregnet for C23H2gNgOgS2/3/4CHClg: C: 43,08; H: 3,16; N: 12,69; S: 9,69.

Fundet: C: 43,11, H: 2,97, N: 12,80, S: 9,64.

43,22; 3,06; 12,77;

Eksempel 3 (T^V CHCOOH "%HC00H ; O-CHC00H S0C12 ; v J oh V—y ocHo 1 ' 5

(\ 'VcHCOCl H-ACA-S-CMTP (_3) ^ ^ \-CHCO-ACA-S-CMTP

- X J OCHO * \J OCHO _ 6 7 BB-S494 O-formyl-D (-) -mandelsyre (5^)

En blanding af D(-)-mandelsyre (1, 5,0 g, 33 mmol) og 99% myresyre (80 ml) opvarmedes ved 80-90°C i 12 timer. Blandingen inddampedes, og toluen (100 ml) sattes til remanensen, hvorpå der inddampedes under formindsket tryk til fjernelse af myresyre azeotropisk. Remanensen opløstes i benzen (200 ml), og opløsningen udvaskedes med vand (2 x 50 ml). Det organiske lag fraskiltes, tørredes med vandfri natriumsulfat og inddampedes under formindsket tryk. Den resterende olie tritu-reredes med cyclohexan (50 ml) til udkrystallisering. Udbytte: 3,70 g (63%) O-formyl-D(-)-mandelsyre (_5) som farveløse prismer, smeltepunkt 56-59°C (litteratur smeltepunkt 55-58°C).

IR: 3400-2800, 1755, 1720, 1160, 990 cm"1.

IliclX

NMR: 5,98 (IH, s, PhCH) , 7,31 (5H, m, phenyl-H), 8,05 (IH, s, OCHO), 10,05 (IH, s, COOH, forsvandt ved tilsætning af D2O).

O-formyl-D (-) -mandeloylchlorid (j6)

En blanding af forbindelse jj (2,0 g, 11 mmol) og thionylchlorid (10 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 2 timer. Afdampning af det ,, 143344 41 overskydende thionylchlorid og destillation af remanensen under formind-sket tryk tilvejebragte syrechloridet 0-formyl-D(-)-mandeloylchlorld (. Udbytte: 1,53 g (70%), kogepunkt 120-122°C / 15 mm Hg.

IR: ^ llc2* 1805, 1740, 1160, 1140 cm"1, max BB-S494; 7-(D-O-formylmandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s- triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (2) En opløsning af 0-formyl-D(-)-mandeloylohlorid (¢5) (1,0 g, 5,1 ’ mmol) i tør acetone (10 ml) sattes dråbevis til en kold (0-5 C) opløsning af 7-amino-3- (2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo [4,3-b]1-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (3, 1,75 g, 4 mmol) i 50% vandig acetone (70 ml) indeholdende natriumhydrogen-carbonat (1,34 g, 16 mmol). Blandingen omrørtes i 30 minutter ved stuetemperatur og udvaskedes med ether. Det vandige lag gjordes surt til pH-værdi 1 med fortyndet HC1. Den fraskilte olieagtige gummi opsamledes og opløstes i THF (100 ml). Opløsningen behandledes med en lille mængde carbon og tørredes over vandfri natriumsulfat. Afdampning af opløsningsmidlet under formindsket tryk til 10 ml og fortynding med ether tilvejebragte titelforbindelsen (2) som et bleggult amorft pulver, 0,91 g (38%), smeltepunkt 172-176°C (dekomponering).

IR: V KBr 3600-2400, 1775, 1720, 1550, 1355, 1230, 1160 cm"1, max UV: λ 254 nm (£ , 20800), 297 nm (skulder, t, 10500).

NMR: ^ p^°“d6 3'4"4'5 (4H' m' 2'5 3-H) , 4,67 (2H, s, NCH2CCX>) , 4,97 (IH, d, 4 Hz, 6-H), 5,66 (IH, d-d, 4 & 8 Hz, 7-H), 7,2-7,5 (5H, m, phenyl-H), 7,64 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 8,29 (IH, s, CHO), 9,29 (IH, d, 8 Hz, 7-CONH, forsvandt ved tilsætning af D20).

Analyse beregnet for C2^H2QNg0gS2,lH20: C: 46,60; H: 3,58; N: 13,59; S: 10,37.

Fundet: C: 46,70, H: 3,25, N: 13,37, S: 10,84.

47,20; 3,34; 13,78;

Eksempel 4 BB-S488: 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,S-dihydro-s-trlazolo- [4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3~cephem-4-carboxylsyre (4)

En blanding af 7-(D-O-formylmandelamido-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4- 42 143344 carboxylsyre (7),opnået ifølge eksempel 3, (484 mg, 0,81 irmol) og natriumhydro-gencarbonat (748 mg, 8,9 nmol) i vand (4 ml) omrørtes i 4 timer ved stuetemperatur og gjordes sur til pH-værdi 1 ned fortyndet HCL.Bundfaldet (500 mg) cpsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand (2ml) og kromatograferedes på silicagelsøjle ("Wako-gel, C-200", 5 g). Søjlen elueredes med chloroform indeholdende voksende mængder methanol (3-5%) som elueringsmiddel, og fraktionerne, som indeholde produktet, kombineredes, blandedes med en lille mængde carbon og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med ether til dannelse af 277 mg 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethy1-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (BB-S488? 4J. NMR-estimering af dette produkt viste, at 10% af forbindelse T_ stadig var til stede.

IR: <»7 3600-2400, 1770, 1720, 1520, 1495, 1365, 1230 cm"1.

IUclX

UV: λ 254 nm (£ , 20000), 297 nm (skulder, S , 9600).

IuaX

Eksempel 5

Natriumsalt af BB-S488

Natrium-2-ethylhexanoat (SEH) (4,0 ml, 1 M opløsning i ethyl-acetat) sattes til en opløsning af 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxy-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (4), opnået ifølge eksempel 2, (2,25 g, 3,93 mmol) i THF (200 ml). Bundfaldet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med THF (50 ml) og tørredes ved 60° C / 1 mm Hg i 3 timer. Udbytte af natrium-7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, 1,96 g (bioudbytte 97%), smeltepunkt 230-240°C (dekomponering). pH-værdien af den vandige 10% opløsning var 3,6.

IR: VKBf 3600-3000, 1765, 1710, 1605, 1390, 1360, 1190, 1080, i max 1065 cm-1.

UV: λ vand nm (E1% ) 252 (357), 310 (skulder, 140).

max lem NMR:å °2° 3,43 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 3,87 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 4,15 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 4,53 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 5,16 (IH, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,36 (IH, s, PhCH), 5,73 (IH, d, 4,5 Hz, 7-H), 7,13 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 7,57 (5H, s, phenyl-H), 7,69 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H).

43 143344

Analyse beregnet for C23Hi9N6°8S2Na'5/4H20: C: 44,77? H: 3,51? N: 13,62? S: 10,39.

Fundet: C: 44,93, H: 3,31, N: 13,41, S; 10,19.

44,79? 3,15? 13,33?

Eksempel 6

Vandig IN natriumhydroxidopløsning sattes dråbevis til en opslæm*' ning af 7- (D-mandelamido)-3- (2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-onr6-ylthicnethyl)-3-cephem-4-cartaxylsyre (4) »opnået ifølge eksempel 2,(3,51 g) i vand(20ml)til indstilling af pH-værdien på 6,0. Opløsningen lyofiliseredes til dannelse af 3,4 g (bioudbytte, 97%) dinatrium- 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethy1-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, smeltepunkt >240°C (dekomponering). pH-værdien af den 5% vandige opløsning var 5»4.

3600-3000, 1760, 1710, 1605, 1390, 1360, 1190, 1080, 1060 cm-1.

UV: Amaxd ™ (Elcm} 252 (320)' 310 (124> · NMR: ^p3° 3,43 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 3,90 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 4,15 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 4,53 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 4,75 (2H, s, NGH2C0), 5,22 (IH, d, 4,5 Hz, 6-H) , 5,42 (IH, s, PhCH), 5,73 (IH, d, 4,5 Hz, 7-H), 7,22 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 7,65 (5H, s, phenyl-H), 7,77 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C23H^gNgOgS2Na2f3/2 H20; C: 42,92; H: 3,29; N: 13,06; S: 9,96.

Fundet: C: 42,90, H: 3,06, N: 13,04, S: 9,97.

43,19; 3,01? 13,03;

Eksempel 7 7-(D-g-hydroxy-a-phenylacetamldo)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dlhydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthlomethyl)-3-cephem-4-carboxyl-syre fremstillet ud fra 7-D-mandelamidocephalosporansyre.

0,27 mol natrium-7-D-mandelamidocephalosporanat opslæmmes i 1000 ml 0,1 M phosphatpuffer med pH-værdi 6,4,og der tilsættes 0,31 mol 2-carboxymethy1-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3-on. Opløsningen opvarmes ved 55°C under nitrogenatmosfære i 5 timer. Efter 1 times forløb indstilles pH-værdien til 6,4 ved tilsætning af en lille mængde 40% H3P04- Ved slutningen af den 5 timer lange opvarm- 44 163344 ningsperiode afkøles opløsningen til 23°C, og pH-værdien indstilles til 2 ved tilsætning af 3 N HC1 under et lag ethylacetat. Produktet ekstraheres over i ethylacetat, og der omrøres i 15 minutter ved 23°C med 2 g affarvende trækul ("Darco KB"). Blandingen filtreres derefter gennem et filterlag af diatoméjord ("Celite"), og ethylacetatet fjernes fra filtratet under vakuum. Remanensen tritureres til et faststof med diethylether, opsamles ved filtrering og tørres over P205 under vakuum til dannelse af fast 7-(D-a-hydroxy-a-phenylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

Eksempel 8

o CH2 s ^nx'Nx.N-CII2CH2COOH

co2H l C,Hr 0 6 5\—0 °~ί

V

co2h o BB-S527; 7-[D(-)-mandelamido]-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s- triazolo- [4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre Til en blanding af 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo [4 , 3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre (679 mg, 1,5 mmol) og NaHCO^ (445 mg, 5,3 mmol) i 50% vandig acetone sattes D-(-)—mandelsyre-O—carboxyanhydrid(400 mg, 2,3 mmol) ved 0°C. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 1 time og inddampedes til fjernelse af det organiske opløsningsmiddel. Den vandige opløsning udvaskedes med ether (3 x 10 ml), indstilledes til pH-værdi 1 med fortyndet HC1 og filtreredes til opsamling af det rå produkt, som opløstes 45 14334Λ i THF (10 ml), filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer og inddampedes under formindsket tryk. Den olieagtige remanens triturere-des med ether. Faststoffet (476 mg) kromatograferedes på en søjle af silicagel ("Wako-gel C-200", 10 g) og elueredes med MeOH-CHClg (MeOH: 0-3%). Fraktioner, som indeholdt det ønskede produkt, kombineredes og inddampedes til opnåelse af 287 mg (33%) BB-S527, smeltepunkt >155°C (dekomponer!ng).

IR: ^ KBr 3600 - 2400, 1780, 1720, 1550, 1520 cm"1, max ' UV: Λ puffer 253 nm (&, 20000), 298 nm (S, 9000).

ItlclX

Analyse beregnet for C24H22Ng0gS2,3/2H20: C: 46,98; H: 4,11; N: 13,70; S: 10,45.

Fundet: C: 47,25, H: 3,80, N: 12,87, S: 10,17.

47,39; 3,76; 12,77;

Natriumsaltet af BB-S 527

En opslæmning af den frie syre af BB-S 527 (240 mg, 0,4 m.mol) i vand (5 ml) indstilledes til pH-værdi 6,8 med 1 N-NaOH (0,7 ml) til dannelse af en klar opløsning, som frysetørredes til efterladelse af 234 mg (91% bioudbytte) af natriumsaltet af BB-S 527 som bleggult pulver. Smeltepunkt >210°C (dekomponering).

IR: vKBr 3600 - 2800, 1770, 1710, 1600 cm"1, max UV: λρΗ 7 Puffer 253 nm (ε 21000) 298 nm (ε 9300). max

Analyse beregnet for C24H20N6°8S2Na2'2H20: C: 43,24, H: 3,63, N: 12,61, S: 9,62

Fundet: C: 43,39, H: 3,20, N: 12,63, S: 9,42 43,43, 3,36, 12,68, 9,22

In vitro-antibakteriel aktivitet af BB-S 527 sammenlignet med BB-S 488 og cefamandol (bestemt ved Steers' agar-fortyndingsmetode på

Mueller-Hinton agar-plade).

46 143344 _MIC (mcg/ml)_

Organisme BB-S 527 BB-S 488 cefamandol S. aureus Smith 1,6 0,8 0,2 S. aureus 0,4 0,4 0,1 S. aureus BX-1633 3,1 3,1 0,4

St. faecalis >100 >100 >100 E. coli NIHJ 0,4 0,2 0,05 E. coli ATCC 8739 12,5 6,3 3,1 E. coli Juhl 0,4 0,2 0,8 E. coli BX-1373 6,3 3,1 3,1 E. coli 0,1 0,1 0,1 E. coli 0,1 0,05 0,1 E. coli 6,3 3,1 1,6

Kl. pneumoniae 6,3 3,1 3,1

Kl. pneumoniae 0,2 0,1 0,8

Kl. pneumoniae 0,8 0,4 0,8

Kl. pneumoniae 0,4 0,2 0,8

Pr. vulgaris 0,1 0,1 0,2

Pr. vulgaris 12,5 0,8 50

Pr. mirabilis 0,2 0,05 0,8

Pr. mirabilis 0,1 0,05 0,2

Pr. morganii >100 >100 >100

Pr. morganii 0,4 0,2 0,8

Pr. rettgeri 0,2 0,2 0,4

Ps. aeruginosa >100 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,025 0,025 0,1

Shig. flexneri 50 25 6,3

Shig. sonnei 0,1 0,05 0,2

Serr. marcescens >100 >100 >100

Enterob. cloacae 6,3 3,1 3,1

Sal. enteritidis 0,05 0,025 0,05

Sal. typhosa 0,1 0,05 0,1 B. anthracis 0,4 0,2 0,4 47 1*3344

Eksempel 9

^O^Y'OO-N-pY'S N

LcH PY^^-^^NxJ-CHgCOONa

5 C02Na O

BB-S 511: ?~[(2Z)-2-methoxylmlno(fur-2-yl)acetamido]-3-(2-carboxy-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)--3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt

Til en opløsning af (2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)eddikesyre (507 mg, 3 mmol) og triethylamin (0,42 ml, 3 mmol) i dichlormethan (6 ml) sattes oxalylchlorid (0,26 ml, 3 mmol) ved 0-5°C, og blandingen omrør-tes i 30 minutter. Blandingen inddampedes ved formindsket tryk til dannelse af en olieagtig remanens af syrechloridet, som opløstes i tør acetone (10 ml). Efter filtrering sattes acetone-opløsningen til en blanding af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (1,31 g, 3 mmol) og NaHCOg (504 mg, 6 mmol) i vand (20 ml) ved 0-5°C. Blandingen omrør-tes ved 0-5°C i 2 timer, idet acetonen fjernedes under formindsket tryk. Den vandige opløsning udvaskedes ether (2 x 50 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1 til tilvejebringelse af et bundfald, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes i vakuum. Faststoffet opløstes i THF (tetrahydrofuran) (40 ml) og filtreredes. Til filtratet sattes 1 M-SEH (natriumethylhexanoat) i ethylacetat (3 ml), og det resulterede bundfald opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum. Udbytte af 7-[(2Z)-2-methoxyimino(fur--2-yl)acetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt var 1,0 g (54%), smeltepunkt >210°C (dekomponering).

IR: 1770, 1710, 1680, 1610, 1550 cm"1 UV: xjj®'7 Puffer 257 nm (ε 25000) , 277 nm (ε 24000)

IuaX

NMR: 6pp^°”d6 7,70 (IH, br, furan-Ha), 7,52 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H), 6,87 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H), 6,5-6,6 (2H, m, furan-Ηβ), 5,58 (IH, m, 7-H), 5,00 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 3,84 (3H, s, OCH3).

Analyse beregnet for £22^7^^^2^2^2^1 C: 40,55, H: 2,94, N: 15,05, S: 9,84

Fundet: C: 40,81, H: 3,08, N: 14,69, S: 9,70 41,02 3,22 14,86 9,62.

48 U33U

Eksempel 10 10ΛγΒΟ-·_^Κ

’'OCH r“YfLcH2-S-l^KXBVJ-CH20H2“OH

3 0 co2h 5 BB-S526: 7-[(2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-[2-(2-carboxy-ethyl) -2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b] pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl] --3-c ephem-4-carboxylsyre-natriumsalt

Syrechloridet, som fremstilledes ud fra (2Z)-2-methoxyimino(fur--2-yl)eddikesyre (169 mg, 1 mmol), opløstes i tør acetone (5 ml) og filtreredes til fjernelse af de uopløselige stoffer. Filtratet sattes til en opløsning af 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-tri-azolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre (452 mg, 1 mmol) og NaHC03 (336 mg, 4 mmol) i vand (10 ml). Reaktions-blandingen omrørtes i 2 timer i et isvandbad. Acetone fjernedes ved formindsket tryk. Den vandige opløsning udvaskedes med ether (2 x 10 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes under formindsket tryk. En opløsning af bundfaldet i THF (10- ml) behandledes med aktivt carbon. En SEH-opløsning i ethylacetat (1 m, 0,8 ml) sattes til THF-opløsningen til dannelse af 7-[(2Z)-2--methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro--s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre- natriums alt, som opsamledes ved filtrering. Udbytte 410 mg (66% søm mono-Na-salt). Smeltepunkt >205°C (dekomponering).

IR: vKBr 3600-2800, 1770, 1710, 1600, 1550 cm-1

fflclX

λρΗ 7 puffer 257 (ε 27000), 276 (ε 26100) max ' NMR: 5DMSO-d6+D20 2/70 (2H^ J=6 RZf qj i 3,3-4,5 (9H, m, 2-H, ppm ^ 3-CH2, CH2 og OCH3), 4,96 (IH, d, J=5,5 Hz, 6-H), 5,53 (IH, d, J=5,5 Hz, 7-H), 6,55 (2H, m, furan-H), 6,92 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,53 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,68 (IH, Br, furan-H).

Analyse beregnet for C23H20N7°9S2Na,H2O: C: 42,92, H: 3,45, N: 15,23, S: 9,96

Fundet: C: 43,08, H: 3,20, N: 14,96, S: 9,96 42,77, 3,03, 14,76 49 143344

Tabel VII

In vitro aktivitet bestemt ved rækkefortyndings- metoden under anvendelse af Mueller-Hinton agar

Geometrisk middelværdi af MIC (ycf/ml)

Organisme BB-S511 BB-S526 Cefuroxim (antal stammer) (Eks. 9 ,) (Eks. 10) ____ S. aureus (3) 1,97 1,6 1,24 E. coli (7) 0,58 0,78 1,28

Kl. pneumoniae (4) 0,47 0,93 3,1

Proteus (6) 0,021 0,061 0,88

Shig. (3), Serr. (1)

Enterob. (1), Sal. (2) 1,11 2,41 4,06 B- anthracis (1) S. pyogenes (5) 0,032 0,032 0,025 S. viridans (5) 0,15 0,4 0,1 D. pneumoniae (5) 0,037 0,056 0,0125 N. meningitidis (5) 2,37 3,60 1,6 N. gonorrhoeae (5) 1,36 1,6 0,4 H. influenzae (7) 0,64 0,71 1,16

Cefuroxim er natrium-6R,7R-3-carbamoyloxymethyl-7-(2Z)-2-methoxyimino-(fur-2-yl)acetamidoceph-3-em-4-carboxylat.

Tabel VIII

Geometriske middelværdier af MIC-vasrdier mod 3 stammer af S. aureus og 27 stammer af gram-negative bakterier (yg/ml), Mueller-Hinton agar)

Antal stammer BB-S511 BL-S786 S. aureus 1 1,6 1,6 S. aureus, Penicillin-R 2 0,6 1,6 E, coli 6 0,2 0,2 E. coli, Cephalosporin-R 1 6,3 12,5 K. pneumoniae 4 0,7 0,3

Indole (-) Proteus 2 0,1 0,2

Indole (+) Proteus 3 0,05 0,3

Indole (+) Proteus, Cephalo- sporin-R 2 6,3 50,1 S. marcescens 1 25 >100 E. cloacae 1 3,1 1,6

Shigella, Salmonella 5 0,3 0,5 P. aeruginosa 2 >100 >100 14334Λ 50 BL-S786 er 7-[a-(2-aminomethylphenyl)acetamido]-3-[(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthio)methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre.

Tabel IX

Geometriske middelværdier af MIC-værdier mod 18 stammer af S. marcescens BB-S511 BL-S786 5,4 85,9

Eksempel 11 IL· jL/CO-n—.—(^Ssvi I— i* I o^IO-ch2S' ^00¾ cOgKa 0 BB-S510 i 7 —[(2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2-methyl-2,3--dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem--4-carboxylsyre-natriumsalt

Til en opløsning af (2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)eddikesyre (253 mg, 1,5 mmol) og triethylamin (0,2 ml, 1,5 mmol) i dichlormethan (3 ml) sattes oxalylchlorid (0,13 ml, 1,5 mmol) ved 0-5°C, og blandingen omrørtes i 30 minutter og inddampedes ved formindsket tryk til dannelse af syrechloridet som en olie, der opløstes i tør acetone (5 ml) og filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer. Acetone--opløsningen sattes til en blanding af 7-amino-3-(2-methyl-2,3-di-hydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (591 mg, 1,5 mmol) og NaHC03 (504 mg, 6 mmol) i vand (10 ml) ved 0-5°C. Reaktionsblandingen omrørtes ved 0-5°C i 3 timer. Acetone fjernedes ved formindsket tryk, og den resterende vandige opløsning udvaskedes med ether (2 x 30 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1. Bundfaldet, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes i vakuum, opløstes i THF (30 ml) og filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer. Til THF-op-løsningen sattes en opløsning af natrium-2-ethylhexanoat (SEH, 1 M, 1,5 ml) i ethylacetat, og det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum. Udbytte 492 mg 7-[(2Z)-2-methoxy-imino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt (58%). Smeltepunkt >180°C (dekomponering).

51 1433 44 IR: 1770, 1720, 1670, 1600, 1550 cm"1 UV: X^J puffer 257 nm (ε 22600), 277 nm (ε 22300)

luciX

NMR: δρ2° 7f53 (ih, d, J=l,5 Hz, furan-Ηα), 7,35 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H), 6,90 (IH, d, J=9,5 Hz, pyrldazin-H), 6,72 (IH, d, J=3,0 Hz, furan-Ηβ), 6,48 (IH, q, J=l,5 og 3,0 Hz, furan-Ηβ), 5,72 (IH, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,14 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 2,94 (3H, s, 0-CH3), 3,61 (3H, s, N-CH3).

Analyse beregnet for £21Η18Ν7®2Ν3'·^ΤΗΪ,'Η20: C: 44,44, H: 3,89, S: 10,32 Fundet: C: 44,89, H: 3,92, S: 9,67.

Tabel X

In vitro aktivitet bestemt ved rækkefortyndinqs- metoden under anvendelse af Mueller-Hinton agar

Geometrisk middelværdi af MIC (pg/ml)

Organisme BB-S510 BB-S515 Cefuroxim (antal stammer) (Eks. 11) _ _ S. aureus (3) 0,62 2,48 1,24 E. coli (7) 2,11 2,33 1,28

Kl. pneumoniae (4) 6,3 3,1 3,1

Proteus (6) 1,39 1,11 0,88

Shig. (3), Serr. (1)

Enterob. (1), Sal. (2) 6,26 5,26 4,06 B. anthracis (1) S. pyogenes (5) 0,0125 0,032 0,025 S. viridans (5) 0,13 0,59 0,1 D. pneumoniae (5) 0,021 0,1 0,0125 N. meningitidis (5) 1,03 5,45 1,6 N. gonorrhoeae (5) 0,26 2,07 0,4 H. influenzae (7) 0,35 2,11 1,16

Cefuroxim er natrium-6R,7R-3-carbamoyloxymethyl-7~(2Z)-2-methoxy-imino(fur-2-yl)acetamidoceph-3-em-4-carboxylat.

Tabel XI

Geometriske middelværdier af MIC-vasrdler mod 3 stammer af S. aureus og 27 stammer af gram-negative bakterier (ug/ml), Mueller-Hinton agar) 52 143344

Antal stammer BB-S510 BIi-S786 S. aureus 1 0,1 1,6 S. aureus, Penicillin-R 2 0,1 1,6 E. coli 6 0,1 0,2 E. coli, Cephalosporin-R 1 3,1 12,5 K. pneumoniae 4 2,6 0,3

Indole (-) Proteus 2 1,1 0,2

Indole (+) Proteus 3 0,2 0,3

Indole (+) Proteus, Cephalo- sporin-R 2 6,3 50,1 S. marcescens 1 6,3 >100 E. cloacae 1 3,1 1,6

Shigella, Salmonella 5 0,5 0,5 P. aeruginosa 2 >100 >100 BL-S786 er 7-[a-(2-aminomethylphenyl)acetamido]-3-[(1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthio)methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre.

Tabel XII

Geometriske middelværdier af MIC-værdier mod 18 stammer af S. marcescens BB-S510 BL-S786 7,9 85,9

Claims

53 143344

1. Analogifremgangsnåde til fremstilling af cephalosporansyre-derivater med den almene formel: ANH-CII'-ClI CH, ^ N~ I I I 2 !=-) ,C+-N C - CH~ - S -<N N ^ N-A 2 " Y ' o COOH hvori A er

0. C6H5 " ™ - C - eller ‘ C - 0r1 \ 2 XOR hvori R1 er hydrogen eller formyl,

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man ud fra de passende udgangsforbindelser fremstiller en forbindelse med formlen 1, hvori A har D-konfiguration.

2. R er alkyl med 1-4 carbonatomer, og hvori A"*· er methyl eller -(CH2)nC00H, og n er 1 eller 2, eller en let hydrolyserbar ester eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse, som har den almene formel: A2N1I-c--I -OCCIIo // Toa, 2 hvori A er H eller har den for A ovenfor definerede betydning, eller et salt eller let hydrolyserbar ester deraf med en forbindelse, som har den almene formel: II hvori A1 har den ovenfor anførte betydning, 9 og, når A er H, behandler den resulterende forbindelse med et acyleringsmiddel, som har den almene formel: 54 14334Å A - X hvori X er halogenid eller et funktionelt ækvivalent deraf, og A har den ovenfor anførte betydning, idet dog, når A-gruppen indeholder en fri hydroxylgruppe, denne gruppe på forhånd blokeres ved hjælp af en konventionel beskyttende gruppe, som bagefter fjernes til tilvejebringelse af en forbindelse med formel I, og om ønsket omdanner den resulterende forbindelse med formel I i form af fri syre, salt eller let hydrolyserbar ester til den tilsvarende ester eller ikke-toxiske, farmaceutisk acceptable salt deraf, og om ønsket omdanner en forbindelse med formel I i form af et resulterende salt eller let hydrolyserbar ester til den tilsvarende frie syre med formlen I.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-(D-mandel- amido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on- 6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, kendetegnet ved, 2 at man omsætter de tilsvarende udgangsmaterialer, hvori A betegner hydrogen eller CgHg-CHOH-CO- og A1, betegner -CH2COOH.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-(D-O-formyl- mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyrida- zin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, kendetegnet 2 ved, at man omsætter de tilsvarende udgangsmaterialer, hvori A betegner hydrogen eller CgH^-CH(OCHO)-CO- og A1 betegner -CH2COOH.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-[D(-)-mandel amido ]-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b] pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre, kendetegnet ved, at man omsætter de tilsvarende udgangsmaterialer, 2. hvori A betegner hydrogen eller CgHg-CHOH-CO- og A betegner -CH2CH2COOH.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 7-[(2Z)- 2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro- s-triazolo [4 , 3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxyl- syre-dinatriumsalt, kendetegnet ved, at man omsætter de 2 tilsvarende udgangsmaterialer, hvori A betegner hydrogen eller || IL C-CO- og A"*" betegner-CH2COOH. n-och3