DK144949B - Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter - Google Patents
Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter Download PDFInfo
- Publication number
- DK144949B DK144949B DK202677AA DK202677A DK144949B DK 144949 B DK144949 B DK 144949B DK 202677A A DK202677A A DK 202677AA DK 202677 A DK202677 A DK 202677A DK 144949 B DK144949 B DK 144949B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- ascorbate
- oxidase
- ascorbic acid
- cuvette
- ascorbate oxidase
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title description 15
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 97
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 50
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 49
- 108010024957 Ascorbate Oxidase Proteins 0.000 claims description 39
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 30
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 22
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 claims description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 14
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 claims description 6
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 15
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 14
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 13
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 13
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 8
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 8
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 8
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 5
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 4
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 4
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 4
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 4
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 4
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 4
- HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethoxybenzidine Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 3- (4-fluorophenyl) -2- (4-nitrophenyl) -5-phenyl-2H-tetrazolium chloride Chemical compound 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 3
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 3
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 2
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N Dehydro-L-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- SBJKKFFYIZUCET-UHFFFAOYSA-N Dehydroascorbic acid Natural products OCC(O)C1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 2
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 235000020960 dehydroascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011615 dehydroascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 150000002432 hydroperoxides Chemical class 0.000 description 2
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N urobilinogen Chemical compound CCC1=C(C)C(=O)NC1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(CC3C(=C(CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MNCHAXQEWRVZRB-UHFFFAOYSA-N 1-sulfonyl-1,3-benzothiazole 1-oxide Chemical compound S(=O)(=O)=S1(C=NC2=C1C=CC=C2)=O MNCHAXQEWRVZRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroperoxy-2,5-dimethylhexane Chemical compound OOC(C)(C)CCC(C)(C)OO JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-n-[(prop-2-enoylamino)methyl]propanamide Chemical compound BrCCC(=O)NCNC(=O)C=C CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 4-dimorpholin-4-ylphosphorylmorpholine Chemical compound C1COCCN1P(N1CCOCC1)(=O)N1CCOCC1 WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PPMGNFFGNNRYQC-UHFFFAOYSA-N 9h-carbazole;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 PPMGNFFGNNRYQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 101000950981 Bacillus subtilis (strain 168) Catabolic NAD-specific glutamate dehydrogenase RocG Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 description 1
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 description 1
- 241000219130 Cucurbita pepo subsp. pepo Species 0.000 description 1
- 235000003954 Cucurbita pepo var melopepo Nutrition 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000016901 Glutamate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920006267 polyester film Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
(19) DANMARK (^)
Ép (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT od 141+949 B
DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET
(21) Ansøgning nr. 2026/77 (51) IntCI.3 C 12 Q 1/26 (22) Indleveringsdag 9· maj 1977 (24) Løbedag 9. maj 1977 (41) Aim. tilgængelig 10. dec. 1977 (44) Fremlagt 12. Jul. 1982 (86) International ansøgning nr. - (86) International indleveringsdag (85) Videreførelsesdag - (62) Stamansøgning nr. - (30) Prioritet g. jun. 1976, 26258¾ de (71) Ansøger BOEHRINGER MANNHEIM GMBH, 6800 Mannhelm-Waldhof, DE.
(72) Opfinder Josef Danninger, DE: Ulfert Deneke, DE: Gunter
Lang, DE: Gerhard Michal, DE: Peter Roeschlau, DE.
(74) Fuldmægtig pirmaet Chas. Hude.
(54) Fremgangsmåde og reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter.
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter under anvendelse af en redox-reaktion som målereaktion i nærværelse af askorbinsyre, I den kliniske og farmaceutiske kemi, biokemien og levnedsmiddelkemien er redox-reaktioner til bestemmelse af enzym- eller substratkoncentrationer af stor interesse. Vurderingen af disse reaktioner B kan ske via fotometriske målinger. Såfremt der 1 testsystemet for- J) _j. uden de redox-komponenter, der er af interesse, findes yderligere reducerende stoffer må man regne med forstyrrelser. I prøvematerialet træffer man særlig hyppigt på askorbinsyre. Som et stærkt reduktionsmiddel giver den anledning til forstyrrelser, ^ når farmaka eller fysiologiske væsker som serum eller urin, askor- ® binholdige plantesafter eller andre levnedsmidler, som inde- 2 144949 holder askorbinsyre, eller hvortil der er sat askorbinsyre, kommer til undersøgelse. Det er således kendt, at følgende reaktioner forstyrres af askorbinsyre: A. Reaktioner, hvor og en hydrogendonator omsættes med peroxi= dase (POD) forstyrres af reaktionen
Askorbinsyre + ——> dehydroaskorbinsyre + Η20 B. Reaktioner, hvor tetrazoliumsalte bliver reduceret med reduktionsmidler til formasaner forstyrres af reaktionen,
Askorbinsyre + tetrazoliumsalt -ψ formasan + dehydro= askorbinsyre.
C. Reaktioner, hvor phenoler oxidativt kobles med nucleofile reagenser forstyrres ved, at askorbinsyre på endnu ikke klarlagt måde fører til bireaktioner, således at der opstår inhomogene koblingsprodukter, som med hensyn til absorptionsforhold i normalt og ultraviolet lys afviger fra de på normal måde dannede koblingsprodukter.
Til fjernelse af askorbinsyren fra prøvematerialet er de sædvanlige oxidationsmetoder i reglen uegnede. Oxidationsmidler angriber også substrater og enzymer og nedbryder dem. Deres reduktionsprodukter, for det meste di- eller trivalente metalioner, hæmmer hyppigt enzy= merne, som anvendes til indikatorreaktionen. Nedbrydningen af askor= binsyre med oxygen kræver kraftigt alkalisk miljø, f.eks. 25% NaOH. Dette fører ligeledes til nedbrydning af substrater og enzymer.
Formålet med opfindelsen er derfor at tilvejebringe en fremgangsmåde til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter lander anvendelse af en redox-reaktion som målereaktion, og som ikke længere forstyrres af askorbinsyre.
Dette opnås ifølge opfindelsen ved, at askorbatoxidase sættes til reaktionsmassen.
Askorbatoxidase katalyserer reaktionen:
Askorbinsyre + i 02 ^--ase > dehydroaskorbinsyre + H20 3 144949
Ifølge oplysningerne i litteraturen vedrørende askorbinsyreoxidase var det forventet, at dette enzym ikke kunne anvendes til opfyldelse af formålet ifølge opfindelsen. Alle hidtil udvundne enzympræparater producerer nemlig H202 i en bireaktion. Samtidig er askorbat= oxidasen genstand for en meget hurtig inaktivering, som tilskrives det samtidigt dannede H202 (Biochemical Copper Proceedings Symposium Harriman, New York 1965, side 305-337). Dette gælder også for meget rensede præparater som i ultracentrifugen og ved elektroforesen ikke længere viser forureninger (Biochem. 4, 1362 - 1370 (1965))· Reaktionsinaktiveringen føres tilbage til H202~dannelsen (Biochem. Biophys. Acta 56, 427 - 439 (1962)). Ifølge de sidste forfatteres beregninger kan 1 U askorbatoxidase i 1 mmol/1 askorbinsyreopløs-ning producere 0,7 x 10“ mmol/l H202· Sådanne askorbatkoncentra-tioner findes hyppigt i prøveopløsninger. D£dannede H202 er uden videre til rådighed for enzymatiske reaktioner, hvor f.eks. katalase blev påvist.
I systemet hydrogendonator + H202 ——» farvestof + 2 H20 til fotometrisk påvisning af H202 bevirker det ved en molær ekstinktionskoefficient på ca. 20 cm^/μΐηοΐ en ekstinktionsdifferens på 0,14. Da måleområdet for normale fotometriske reaktioner ligger fra ca. 0,01 - 1,00, fremkaldes der her en fejl, som ikke kan accepteres. På samme måde forstyrres reaktioner, hvor der i stedet for H202 anvendes organiske hydroperoxider og i stedet for POD anvendes hæmoglobin eller andre oxidationskatalysatorer.
Men bortset fra denne af H202 fremkaldte fejl var det også fra det sidste af de ovennævnte litteratursteder kendt, at omsætningen af askorbinsyre allerede gik i stå lang tid før den fuldstændige fjernelse heraf.
Særligt graverende måtte dette være ved alle sådanne redox-reak= tioner, hvor der dannes H202, da dette H202 jo på den ene side måtte accelerere enzyminaktiveringen og på den anden side nydannelsen af H^02 via askorbatoxidasen selv fører til fuldstændig uoverskuelige forhold. Det er derfor højst overraskende, at det mod forventningerne er mulig fuldstændigt at fjerne de af tilstedeværende as-korbat fremkaldte forstyrrelser ved hjælp af askorbatoxidasetilsæt- 4 144949 ningen, uden at der optræder andre forstyrrelser, som igen tilintetgør fordelen ved askorbatfjernelsen.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis ved enzyma= tiske reaktioner, specielt sådanne, hvor der bliver dannet HgOg» altså ved reaktioner, som bliver katalyserede ved hjælp af oxidaser, som glucoseoxidase, urikase, kolesterinoxidase og lignende, desuden ved reaktioner, ved hvilke tetrazoliumsalte bliver reducerede og ved reaktioner, ved hvilke phenoler oxidativt bliver koblet med nucleofile reagenser. Den tilsatte askorbatoxidasemængde retter sig efter størrelsen af askorbinsyremængden, som forventes i prøven.
I reglen anvendes 0,002 - 100 U-askorbatoxidase/ml, fortrinsvis 0,01 - 30 U/ml prøvemateriale. Reaktionens pH-værdi retter sig først og fremmest efter den pH-værdi, som kræves for den eller de andre deltagende enzymer. pH-værdier mellem 4,0 og 8,5 viser sig derved som egnede for fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Inden for den foreliggende opfindelses rammer foretrækkes specielt anvendelsen af en askorbatoxidase af Zucchini (Cucurbita pepo medullosa). Men også askorbatoxidase af anden oprindelse er egnet.
Opfindelsen angår desuden et reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter indeholdende et system til bestemmelse af et substrat eller enzym med en redox-reaktion som irålereaktion i nærværelse af askorbinsyre, kendetegnet v.ed, at .det indeholder askorbatoxidase.
Foretrukne reagenser af denne art indeholder, såfremt glucose er det substrat, der skal bestemmes, peroxidase, glucoseoxidase, o-di-anisidin eller azino-di-3-ethylbenzylthiazolinsulfonat (6) sammen med puffer eller hexokinase, glucose-6-phosphatdehydrogenase, di= aphorase, NADP, et tetrazoliumsalt som INT: 3-(4-j odpheny1)-2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-2H-tetrazoliumchlorid og puffer. Ved urin= syre som det substrat, der skal bestemmes, består systemet fortrinsvis af peroxidase, uricase, en phenol, som f.eks. 2,4-dichlorphenol, aminoantipyrin og puffer. I tilfældet med glutamatbestemmelse består systemet fortrinsvis af glutamatdehydrogenase, diaphorase, NÅD, INT og puffer. Til tyrosin foretrækkes tyrosinase, 3-methyl- 6-kaliumsulfonylbenzthiazolonhydrazon (2), for pyrokatechinbestem-melse diphenoloxidase, 3-methyl-6-kaliumsulfonylbenzthiazolonhydra= zon (2), i hvert tilfælde sammen med puffer. Alle disse systemer til bestemmelse af substrater kendes imidlertid. I stedet herfor kan der imidlertid også anvendes andre kendte systemer til bestem 5 U4949 melse af substrater eller enzymer inden for rammerne af reagenset ifølge opfindelsen.
Af særlig betydning er opfindelsen også til anvendelse på området hurtigdiagnostika. Sådanne hurtigdiagnostika indeholder i reglen de forskellige for fremgangsmådens gennemførelse nødvendige reagenser enten imprægneret i en sugedygtig bærer eller med et egnet bindemiddel anbragt som overtræk på en bærefolie. Den foretrukne udførelsesform er herved tilsætningen af askorbatoxidase til blandingen af de øvrige reagenser med efterfølgende imprægnering på en sugedygtig bærer. På denne måde fås f.eks. af askorbinsyre praktisk taget ikke forstyrret testpapir til påvisning af glucose i urin (f.eks. ifølge DOS 23 38 932) af blod i urin (f.eks. ifølge P 24 60 903-8 eller DBP 22 35 152) og af blod i afføringen. At askor-batoxidasen forbliver funktionsdygtig og lagringsstabil i testpapir for blod i urin må anses for højst overraskende. Disse testpapir indeholder nemlig overskudsmængder af organiske hydroperoxider, af hvilke man/ ligesom af ^^tte forvente inaktivering af as— korbatoxidasen.
Askorbatoxidasen kan imidlertid også anbringes på en særskilt bærer, som forenes med bæreren for de øvrige reagenser, f.eks. lægges oven på, klæbes sammen med eller pakkes sammen. Som bærer for askorbatoxidase foretrækkes i dette tilfælde specielt et såkaldt vandopløseligt papir (f.eks. ifølge DOS 24 36 598), som lader farvereaktionen fremtræde særligt godt på bærepapiret for de andre reagenser. Denne udførelsesform er særlig fordelagtig, når der i reagenskombinationen findes stoffer, som er uforligelige med askorbatoxidase, f.eks. stærkt sure reagenser som de, der anvendes ved fremgangsmåderne til bestemmelse af urobilinogen, bilirubin og nitrit.
Ved de ovennævnte udførelsesformer anvendes der indtil 5000 U as= korbatoxidase pr. ml imprægneringsopløsning, fortrinsvis indtil 2000 U/ml imprægneringsopløsning,til reagensfremstillingen. Mindre end 1 U/ml vil i almindelighed ikke sikre den tilstræbte virkning.
Desuden kan også adskilte bærematerialezoner imprægneres med askor= batoxidase eller de andre testreagenser. I dette tilfælde bringes bæreren hensigtsmæssig således i berøring med opløsningen, der skal undersøges, at opløsningen først kommer i berøring med den askor= 6 144949 batoxidaseh.old.ige zone, og herfra suges ind i zonen, som indeholder de øvrige testreagenser.
Ifølge en yderligere udførelsesform bindes askorbatoxidasen ifølge de kendte metoder for enzymfiksering på uopløselige bærere til bærematerialet. Egnede metoder kendes fra de tyske offentliggørelsesskrifter 17 68 512, 21 28 745, 22 60 185, 22 60 184, 24 26 988, 26 03 158 og 19 15 970.
Foretrukne metoder for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er glu= cosebestemmelsen med peroxidase og glucoseoxidase og o-dianisider eller 2,2,-azino-di-3-ethylbenzthiazolinsulfonat- (6) (ABTS), glu= cosebestemmelsen ifølge hexokinase/glucose-6-phosphatdehydrogenase= metoden, påvisningen af urinsyre ved hjælp af phenol, aminoantipyrin, peroxidase og uricase, bestemmelsen af thyrosin eller pyrokatechin ved hjælp af SMBTH (4-methyl-6-kaliumsulfonylbenzthiazolorihydrazon (2) og thyrosinase eller diphenoloxidase.
De følgende eksempler belyser opfindelsen yderligere.
Eksempel 1.
Bestemmelse af glucose med o-dianisidin, peroxidase (POD) og glu= coseoxidase (GOD), målt i fotometer, bølgelængde 432 nm, måletemperatur: 25°C.
Kuvette nr. 1 2 3 4 5
Pho sphatpuff er pH 7,01 M 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 o-dianisidin 5 mg/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 POD, 180 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Glucoseopløsning 1 mg/ml 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03
Askorbinsyreop- løsning 10 mM - 0,1 0,01 0,1 0,01 7 144949
Kuvette nr. 1 2 3 4 5
Vand 0,12 0,02 0,11 - 0,09
Askorbat-oxidase 500 U/ml - - - 0,02 0,02
Inkubation i 1 minut ved 25°C, E^ aflæsning, derpå start med GOD 70 U/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 inkubation i 30 minutter ved 25°C, Ep aflæsning, ΔΕ beregnet af VE1___ ΔΕ 0,541 0,010 0,316 0,540 0,543
Kuvette 1 repræsenterer en uforstyrret måling (ingen askorbinsyre).
Kuvette 2 og 3 viser, at 1 henholdsvis 0,1 ymol askorbat praktisk taget fuldstændig henholdsvis med 41,5% hæmmer testen; kuvette 4 og 5 viser den fuldstændige eliminering af disse askorbatkoncentra-tioner ved tilsætning af 10 U askorbatoxidase i hvert tilfælde.
Eksempel 2.
Påvisning af glucose med 2,2,-azino-di-[3-ethylbenzthiazolinsulfo= nat(6)] (ABTS), POD og GOD i fotometer, bølgelængde; 432 nm, måletemperatur: 25°C.
8 U4949
Kuve tte nr. 1 2 3 4 5
Pho sphatpuf f er pH 5,6 0,1 M 2,75 2,75 2,75 2,75 2,75 ABTS 50 mM 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 POD 250 U/ml 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02
Gluc ose oplø sning 0,1 mg/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Askorbinsyreop- løsning 1 mM - 0,1 0,01 0,1 0,01
Vand 0,12 0,02 0,11 - 0,09
Askorbatoxldase 500 U/ml - - - 0,02 0,02 inkubation i 1 minut ved 25°C, aflæsning, start med GOD 70 U/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 inkubation i 30 minutter ved 25°C, EP~aflæsning, beregning af ΔΕ af E^-E-^ ΔΕ 0,505 0,000 0,40 0,502 0,504
Kuvette 1 svarer til en uforstyrret måling (intet askorbat). Ku-vette 2 og 3 viser, at 0,1 henholdsvis 0,01 μΐηοΐ askorbat fuldstændigt eller med 21% hæmmer testen,
Kuvette 4 og 5 viser den fuldstændige eliminering af disse askor-batkoncentrationer ved hjælp af 10 U askorbatoxidase i hvert tilfælde .
Eksempel 3.
Påvisning af urinsyre ved hjælp af phenol, aminoantipyrin, POD og uricase på analyseautomater (AutoAnalyzer).
Forsøgsprincfp
Urinsyre + + H^O —^c-se> allantoin + H2O2 2 Η2θ2 + 2,4-dichlorphenol + 4-aminoantipyrin ——> quinoid farvestof + 2 H20 g 144949
Fremstilling af opløsninger.
1 Askorbatoxidasereagens I 600 ml bidestilleret vand opløses indholdet af en kolbe 1. Tilsætning af 0,3 ml Brij®-35. (Brij®-35 = polyethylenglycollauryl= ether). Holdbar i 4 uger i en mørk kolbe ved ca. 4°C og i 1 uge ved ca. 25°C.
2 Uricasereagens I 800 ml bidestilleret vand opløses indholdet af en kolbe 2. Tilsætning af 2,0 ml Brij®-35. (Brij®-35 = p«lyethylenglycollauryl= ether). I mørk kolbe holdbar i 4 uger ved ca. 4°C og i 1 uge ved ca. 25°C.
Koncentrationer af opløsninger.
1 50 mM phosphatpuffer, pH 5*6 askorbatoxidase større end eller lig med i den mængde, som fremgår af tegningens fig. 2.
2 31 mM tris/citronsyre, pH 8,9 uricase større end eller lig med 0,08 U/ml POD større end eller lig med 0,015 U/ml 3j0 mM 2,4-dichlorph.enol, 4,0 mM 4-aminoantipyrin.
Til bestemmelsens gennemførelse sammenstilles automatens slangesystem ifølge det i fig. 1 viste skema. Pig. 1 vedrører anvendelsen af analyseautomaten og viser tilførslen af stofferne til automaten.
I fig. 2 findes en grafisk afbildning af forsøgsresultaterne.
Eksempel 4.
Påvisning af glucose med HK/G6P-DH, NADP, INT og diaforase i foto-meteret. Målebølgelængde: 492 nm, inkubationstemperatur: 25°C.
Kuvette nr. 1 2 3 10 U4949
Phosphatpuffer, pH 7,5 0,1 M 1,7 1,7 1,7 NADP/INT pr. 1 mg/ml 0,1 0,1 0,1
Diaforase 5 U/ml 0,1 0,1 0,1
Glucoseopløsning 0,05 mg/ml 0,1 0,1 0,1
Askorbatopløsning 10 mM - 0,01 0,01
Askorbat-oxidase 35 U/ml - - 0,03
Vand 0,04 0,03 inkubation i 3 minutter ved 25°C, E-^-af læsning, start med HK/G6P-DH-opløsning pr. 56 U/ml 0,05 0,05 0,05 inkubation i 15 minutter, E2~aflæsning, beregning af ΔΕ af E2-E1 ΔΕ 0,234 0,307 0,230
Kuvette 1 svarer til en uforstyrret måling.
Kuvette 2 viser, at 0,01 μΐηοΐ askorbat lader testen forløbe omkring 34% for højt, kuvette 3 viser, at 1 U askorbatoxidase fuldstændig eliminerer denne forstyrrelse.
Eksempel 5.
Bestemmelse af glutamat ved hjælp af G1DH, NAD/INT/diaforase i fotometeret. Målebølgelængde 492 nm, temperatur 25°C.
Kuvette nr. 12345
Phosphatpuffer pH 5,6, 0,01 mM 1,30 1,20 1,29 1,18 1,27
Glutamatopløsning 0,2 mg/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Askorbatopløsning 5 mM 0,1 0,01 0,1 0,01
Askorbat-oxidase 100 U/ml - - 0,02 0,02 inkubation i 3 minutter ved 25°C, derpå pipettering i de enkelte kuvetter___________ n U4949
Kuvette nr. 1 2 3 4 5 0,2 M triethanolamin, 0,05 M kaliumphosphatpuff er, pH 8,6 med 1,5% "TritoiP-X-lOO" ^^oSSer?1·76^1611' 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 NAD-opløsning, 5 mg/ml 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Diaforas eoplø sning 10 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 G1DH 1000 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 E-^-af læsning, reaktion start med INT-opløsning, 2 mg/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 inkubation i 15 minutter ved 25°C, Eg-aflæsning, beregning af ΔΕ af Eg-E^ ΔΕ 0,184 1,560 0,380 0,186 0,182
Kuvette 1 svarer til en uforstyrret måling.
Kuvette 2 og 3 viser, at 0,5 henholdsvis 0,05 pmol askorbat lader testen udvise omkring 70Q% henholdsvis omkring 100# for højt Kuvette 4 og 5 viser den fuldstændige eliminering af denne forstyrrelse ved hjælp af 2 U askorbat-oxidase.
Eksempel 6.
Bestemmelse af tyrosin med 3-methyl-6-kaliumsulfonyl-benzthiazolon= hydrazon-(2) (SMBTH) og tyrosinase i fotometeret, målebølgelængde 492 nm, måletemperatur 25°C.
Kuvette nr. 123
Phosphatpuffer, pH 5,2, 0,25 M 2,77 2,77 2,77 SMBTH 0,1 M 0,05 0,05 0,05
Askorbinsyreopløsning 10 mM - 0,1 0,1
Vand 0,12 0,02
Askorbat-oxidase 500 U/ml - - 0,02
Tyrosinase 60 U/ml 0,05 0,05 0,05 inkubation i 1 minut ved 25°C, E-^-aflæsning, start med
Kuvette nr. 123 12 144949
Tyrosin 2 mM 0,05 0,05 0,05 inkubation i 1 time ved 25°C, E2-aflæsning, beregning af ΔΕ af E2~E-l ΔΕ 1,113 0,728 1,100
Kuvette 1 svarer til en uforstyrret måling. I kuvette 2 sænker 1 μΐηοΐ askorbat den teoretiske værdi omkring 35%, i kuvette 3 er denne påvirkning fuldstændig elimineret ved hjælp af 10 U askorbat-oxidase.
Eksempel 7-
Bestemmelse af pyrokatechin med SMBTH og diphenol-oxidase
Kuvette nr. 123
Phosphatpuffer, 0,25 M 2,80 2,70 2,68 pH 5,2 SMBTH 0,1 0,05 0,05 0,05 pyrokatechin 0,5 M 0,10 0,10 0,10
Askorbatopløsning 20 mM - 0,1 0,1
Askorbat-oxidase 500 U/ml - - 0,02
Inkubation i 1 minut ved 25°C, E-^-aflæsning, start med
Diphenol-oxidase 200 U/ml 0,05 0,05 0,05
Inkubation i 17 minutter ved 25°C, E2-aflæsning, beregning af ΔΕ af E2-E^ ΔΕ 0,890 0,485 0,896
Kuvette 1 svarer til en uforstyrret måling.
I kuvette 2 sænker 2 μΐηοΐ askorbat den teoretiske værdi omkring 47%, denne indvirkning er fuldstændigt elimineret i kuvette 3 ved hjælp af 10 U askorbat-oxidase.
Eksempel 8.
Testpapir til påvisning af glucose i urin.
U4949 13
Filtrerpapir gennemvædes med en opløsning af følgende sammensætning og tørres ved 50°C: 1.2 m citratpuffer pH 5 50,0 ml 9-(Y-dimethylaminopropyl)-6-chlor-3-amino= carbazol-dihydrochlorid 0,75 g
Glucoseoxidase (104 U/mg) 0,25 g
Peroxidase (63 U/mg) 0,05 g
Askorbatoxidase (100 U/mg) 1,00 g
Vand 100,0 ml.
Testpapiret reagerer med glucoseholdig urin med rødorange til sortrøde farvetoner. Efter en reaktionstid på 2 minutter giver urin med ens glucoseindhold med askorbinsyreindhold på indtil 150 mg/dl praktisk taget ens reaktionsfarver.
Med testpapir af analog sammensætning, men uden askorbatoxidase, er reaktionsfarverne, alt efter glucoseindhold, ved askorbinsyre-koncentrationer fra 50 mg/dl afsvækket eller fuldstændig undertrykt.
Eksempel 9·
Testpapir til påvisning af blod i urin.
Filterpapir imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og tørres ved 40°C.
Opløsning 1 1.2 m citratpuffer pH 5,25 35,0 ml
Ethylendiamintetraeddikesyre, dinatriumsalt 0,1 g
Dioctylnatriumsulfosuccinat 0,5 g 2,5-dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid (ca. 70%'ig) 1,6 g
Phosphorsyretrimorpholid 12,7 g
Askorbatoxidase (100 U/mg) - 0,3 g
Methanol 30,0 ml
Vand til 100,0 ml !4 144949 0pløsning_2 3,3% 5,5'-tetrameth.ylbenzid.in 0,3 g
Phenanthridin 0,2 g
Toluen/petroleumsether (30:70) til 100,0 ml
Med dette testpapir kan nærværelsen af 5 erythroeyter/mm^ i urinstof også påvises i nærværelse af 30 - 50 mg askorbinsyre/100 ml.
Med et testpapir af samme sammensætning, men uden askorbatoxidase mislykkedes denne påvisning allerede i nærværelse af fra 10 - 20 mg askorbinsyre/100 ml.
Eksempel 10.
Testgapir_A
Testpapir som i eksempel 9 uden askorbatoxidase.
Testgapir_B
2
Vandopløseligt papir af carboxymethylcellulose (fladevægt 60 g/m ) gennemvædes med en opløsning s£20% iseddike i methanol til neutralisation og tørres. Derpå sprøjtes med en vandig opløsning af askor= batoxidase (10^ U/ml) og tørres straks.
Testpapir B anbringes på testpapir A, og begge fastholdes sammen mellem en polyesterfolie og et nylonnet. Urinet, der skal undersøges, dryppes på de således fremstillede prøvestrimler.
Der blev opnået tilsvarende resultater som angivet i eksempel 9·
Eksempel 11.
Testpa£ir_til_2åyisning_af_blod_i_afføring.
Filterpapir imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og tørres ved 40°C.
ΊΚ 144949 15 OBløsnlng_l 1,2 i citratpuffer, pH 5,25 10 ml
Askorbatoxidase 100 U/mg 0,3 g
Vand til 100,0 ml 0pl||ping=g
Gua j akharp ik s 3 g
Toluen til 100,0 ml
Opløsningen filtreres, og kun filtratet anvendes til imprægneringen.
Der fås et testpapir, som..bestryges med afføring. Såfremt der på bagsiden dryppes en 3%’ig vandig opløsning af hydrogenperoxid, fås en blåfarvning, når afføringen indeholder ca. 2% blod. Denne farvning optræder også ved askorbinsyreholdig afføring (ca. 15 mg/100 g), medens den i dette tilfælde udebliver ved et testpapir uden askorbatoxidase.
Eksempel 12 Måling af enzymaktivifcet ved hjælp af askorbat-oxidase (AAO) Påvisning af POD ved hjælp af ABTS i fotometer, bølgelængde 432 run, måletemperatur 25°C.
Claims (2)
1. Fremgangsmåde til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter under anvendelse af en redox-reaktion som målereaktion i nærværelse af askorbinsyre, kendetegnet ved,at der arbejdes i nærværelse af askorbatoxidase.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der anvendes 0,002-100 U askorbatoxidase/ml testpræparat. 1 Fremgangsmåde ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at den gennemføres ved pH-værdier mellem 4,0 og 8,5.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2625834 | 1976-06-09 | ||
| DE2625834A DE2625834B2 (de) | 1976-06-09 | 1976-06-09 | Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK202677A DK202677A (da) | 1977-12-10 |
| DK144949B true DK144949B (da) | 1982-07-12 |
| DK144949C DK144949C (da) | 1982-11-29 |
Family
ID=5980154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK202677A DK144949C (da) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4168205A (da) |
| JP (1) | JPS52150692A (da) |
| AR (1) | AR212763A1 (da) |
| AT (1) | AT354640B (da) |
| AU (1) | AU500988B2 (da) |
| BE (1) | BE854407A (da) |
| BR (1) | BR7703008A (da) |
| CA (1) | CA1084393A (da) |
| CH (1) | CH633887A5 (da) |
| CS (2) | CS235068B2 (da) |
| DD (1) | DD130178A5 (da) |
| DE (1) | DE2625834B2 (da) |
| DK (1) | DK144949C (da) |
| ES (1) | ES458544A1 (da) |
| FI (1) | FI60719C (da) |
| FR (1) | FR2354561A1 (da) |
| GB (1) | GB1519134A (da) |
| HU (1) | HU172931B (da) |
| IE (1) | IE45546B1 (da) |
| IL (1) | IL52047A (da) |
| IT (1) | IT1075527B (da) |
| LU (1) | LU77290A1 (da) |
| NL (1) | NL169503C (da) |
| NO (1) | NO148340C (da) |
| PL (2) | PL109224B1 (da) |
| SE (1) | SE426601B (da) |
| SU (1) | SU797592A3 (da) |
| YU (1) | YU114477A (da) |
| ZA (1) | ZA772716B (da) |
Families Citing this family (119)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2834705B1 (de) * | 1978-08-08 | 1980-01-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Durchfuehrung enzymatischer Bestimmungen |
| DE2907628C2 (de) * | 1979-02-27 | 1981-02-05 | C.A. Greiner Und Soehne Gmbh & Co Kg, 7440 Nuertingen | Proberöhrchen für die Untersuchung von Proben im klinischen Bereich, insbesondere von Urinproben |
| DE2914487A1 (de) * | 1979-04-10 | 1980-10-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und mittel zur entfernung von ascorbinsaeure aus waessrigen fluessigkeiten |
| JPS56109595A (en) * | 1980-02-01 | 1981-08-31 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Removal of reductive inhibitor |
| DE3012368C2 (de) * | 1980-03-29 | 1982-04-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und diagnostische Mittel zum Nachweis von Redox-Reaktionen |
| DE3012314A1 (de) * | 1980-03-29 | 1981-10-15 | W. Schlafhorst & Co, 4050 Mönchengladbach | Offenend-spinnvorrichtung |
| US4310626A (en) * | 1980-06-02 | 1982-01-12 | Miles Laboratories, Inc. | Interference-resistant composition, device and method for determining a peroxidatively active substance in a test sample |
| DE3046741A1 (de) * | 1980-12-11 | 1982-07-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Nachweis von nad(p)h oder salicylat |
| DE3249743C2 (da) * | 1982-02-18 | 1990-10-04 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd., Nagoya, Aichi, Jp | |
| US4587220A (en) * | 1983-03-28 | 1986-05-06 | Miles Laboratories, Inc. | Ascorbate interference-resistant composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances |
| DE3313178A1 (de) * | 1983-04-12 | 1984-10-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur enzymatischen bestimmung von sulfit |
| JPS59230161A (ja) * | 1983-06-13 | 1984-12-24 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 還元性物質の分解方法及び分解用試薬 |
| US5002893A (en) * | 1985-09-19 | 1991-03-26 | Isolab, Inc. | Single color reading method for determining fructosamine |
| US5196314A (en) * | 1986-04-04 | 1993-03-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for the determination of substrates or enzyme activities |
| DE3611227A1 (de) * | 1986-04-04 | 1987-10-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten |
| DE3620817A1 (de) * | 1986-06-21 | 1987-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch |
| US4885240A (en) * | 1986-09-04 | 1989-12-05 | Eastman Kodak Company | Use of organic buffers to reduce dehydroascorbic acid interference in analytical methods |
| US5387431A (en) * | 1991-10-25 | 1995-02-07 | Fuisz Technologies Ltd. | Saccharide-based matrix |
| US5456932A (en) * | 1987-04-20 | 1995-10-10 | Fuisz Technologies Ltd. | Method of converting a feedstock to a shearform product and product thereof |
| US5320725A (en) * | 1989-08-02 | 1994-06-14 | E. Heller & Company | Electrode and method for the detection of hydrogen peroxide |
| US5264104A (en) * | 1989-08-02 | 1993-11-23 | Gregg Brian A | Enzyme electrodes |
| US5264105A (en) * | 1989-08-02 | 1993-11-23 | Gregg Brian A | Enzyme electrodes |
| CA2028625A1 (en) * | 1990-07-05 | 1992-01-06 | Daniel S. Daniel | Ethanol analytical element |
| US5593852A (en) | 1993-12-02 | 1997-01-14 | Heller; Adam | Subcutaneous glucose electrode |
| US5262305A (en) * | 1991-03-04 | 1993-11-16 | E. Heller & Company | Interferant eliminating biosensors |
| JPH04278450A (ja) * | 1991-03-04 | 1992-10-05 | Adam Heller | バイオセンサー及び分析物を分析する方法 |
| CA2109622A1 (en) * | 1991-05-17 | 1992-11-26 | Richard C. Fuisz | New thermoplastic polymeric material and process for making same |
| US5576042A (en) * | 1991-10-25 | 1996-11-19 | Fuisz Technologies Ltd. | High intensity particulate polysaccharide based liquids |
| PL170554B1 (pl) * | 1991-12-17 | 1996-12-31 | Fuisz Technologies Ltd | Sposób wytwarzania kompozycji przeciwwrzodowej PL PL PL |
| US5346377A (en) * | 1993-10-07 | 1994-09-13 | Fuisz Technologies Ltd. | Apparatus for flash flow processing having feed rate control |
| US5445769A (en) * | 1994-06-27 | 1995-08-29 | Fuisz Technologies Ltd. | Spinner head for flash flow processing |
| US5582855A (en) * | 1994-07-01 | 1996-12-10 | Fuisz Technologies Ltd. | Flash flow formed solloid delivery systems |
| US5556652A (en) * | 1994-08-05 | 1996-09-17 | Fuisz Technologies Ltd. | Comestibles containing stabilized highly odorous flavor component delivery systems |
| JP2838866B2 (ja) * | 1995-05-10 | 1998-12-16 | 株式会社同仁化学研究所 | 酸化発色分析における還元物質の活性抑制方法 |
| US5587198A (en) * | 1995-05-31 | 1996-12-24 | Fuisz Technologies Ltd. | Positive hydration method of preparing confectionery and product therefrom |
| US5989845A (en) * | 1996-04-05 | 1999-11-23 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US6040151A (en) | 1998-03-10 | 2000-03-21 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5776719A (en) * | 1997-07-07 | 1998-07-07 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5824491A (en) * | 1996-05-17 | 1998-10-20 | Mercury Diagnostics, Inc. | Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound |
| JP3394262B2 (ja) | 1997-02-06 | 2003-04-07 | セラセンス、インク． | 小体積インビトロ被検体センサー |
| US6134461A (en) * | 1998-03-04 | 2000-10-17 | E. Heller & Company | Electrochemical analyte |
| US6103033A (en) | 1998-03-04 | 2000-08-15 | Therasense, Inc. | Process for producing an electrochemical biosensor |
| US8346337B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-01-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6175752B1 (en) | 1998-04-30 | 2001-01-16 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US9066695B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-06-30 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6949816B2 (en) | 2003-04-21 | 2005-09-27 | Motorola, Inc. | Semiconductor component having first surface area for electrically coupling to a semiconductor chip and second surface area for electrically coupling to a substrate, and method of manufacturing same |
| US8465425B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-06-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8974386B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-03-10 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8688188B2 (en) | 1998-04-30 | 2014-04-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8480580B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-07-09 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6251260B1 (en) | 1998-08-24 | 2001-06-26 | Therasense, Inc. | Potentiometric sensors for analytic determination |
| US6338790B1 (en) | 1998-10-08 | 2002-01-15 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
| US6591125B1 (en) | 2000-06-27 | 2003-07-08 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
| EP1192269A2 (en) | 1999-06-18 | 2002-04-03 | Therasense, Inc. | MASS TRANSPORT LIMITED i IN VIVO /i ANALYTE SENSOR |
| US6616819B1 (en) | 1999-11-04 | 2003-09-09 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor and methods |
| US6560471B1 (en) | 2001-01-02 | 2003-05-06 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| EP1397068A2 (en) | 2001-04-02 | 2004-03-17 | Therasense, Inc. | Blood glucose tracking apparatus and methods |
| US7381184B2 (en) | 2002-11-05 | 2008-06-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Sensor inserter assembly |
| EP2305812A3 (en) * | 2002-11-14 | 2012-06-06 | Dharmacon, Inc. | Fuctional and hyperfunctional sirna |
| US7811231B2 (en) | 2002-12-31 | 2010-10-12 | Abbott Diabetes Care Inc. | Continuous glucose monitoring system and methods of use |
| US8066639B2 (en) | 2003-06-10 | 2011-11-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Glucose measuring device for use in personal area network |
| USD902408S1 (en) | 2003-11-05 | 2020-11-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor control unit |
| WO2005089103A2 (en) | 2004-02-17 | 2005-09-29 | Therasense, Inc. | Method and system for providing data communication in continuous glucose monitoring and management system |
| US8333714B2 (en) | 2006-09-10 | 2012-12-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing an integrated analyte sensor insertion device and data processing unit |
| US20090105569A1 (en) | 2006-04-28 | 2009-04-23 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Introducer Assembly and Methods of Use |
| US10226207B2 (en) | 2004-12-29 | 2019-03-12 | Abbott Diabetes Care Inc. | Sensor inserter having introducer |
| US8571624B2 (en) | 2004-12-29 | 2013-10-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for mounting a data transmission device in a communication system |
| US9572534B2 (en) | 2010-06-29 | 2017-02-21 | Abbott Diabetes Care Inc. | Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices |
| US7697967B2 (en) | 2005-12-28 | 2010-04-13 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor insertion |
| US9259175B2 (en) | 2006-10-23 | 2016-02-16 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Flexible patch for fluid delivery and monitoring body analytes |
| US7731657B2 (en) | 2005-08-30 | 2010-06-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor introducer and methods of use |
| US9398882B2 (en) | 2005-09-30 | 2016-07-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor and data processing device |
| US8512243B2 (en) | 2005-09-30 | 2013-08-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Integrated introducer and transmitter assembly and methods of use |
| US9788771B2 (en) | 2006-10-23 | 2017-10-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Variable speed sensor insertion devices and methods of use |
| US7883464B2 (en) | 2005-09-30 | 2011-02-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Integrated transmitter unit and sensor introducer mechanism and methods of use |
| US8613703B2 (en) | 2007-05-31 | 2013-12-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Insertion devices and methods |
| US9743862B2 (en) | 2011-03-31 | 2017-08-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems and methods for transcutaneously implanting medical devices |
| US8112240B2 (en) | 2005-04-29 | 2012-02-07 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing leak detection in data monitoring and management systems |
| US9521968B2 (en) | 2005-09-30 | 2016-12-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor retention mechanism and methods of use |
| US7766829B2 (en) | 2005-11-04 | 2010-08-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing basal profile modification in analyte monitoring and management systems |
| US11298058B2 (en) | 2005-12-28 | 2022-04-12 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor insertion |
| CA2636034A1 (en) | 2005-12-28 | 2007-10-25 | Abbott Diabetes Care Inc. | Medical device insertion |
| US7885698B2 (en) | 2006-02-28 | 2011-02-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing continuous calibration of implantable analyte sensors |
| US8226891B2 (en) | 2006-03-31 | 2012-07-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring devices and methods therefor |
| US7620438B2 (en) | 2006-03-31 | 2009-11-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for powering an electronic device |
| US7920907B2 (en) | 2006-06-07 | 2011-04-05 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and method |
| US8930203B2 (en) | 2007-02-18 | 2015-01-06 | Abbott Diabetes Care Inc. | Multi-function analyte test device and methods therefor |
| US8732188B2 (en) | 2007-02-18 | 2014-05-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing contextual based medication dosage determination |
| US8123686B2 (en) | 2007-03-01 | 2012-02-28 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing rolling data in communication systems |
| US8456301B2 (en) | 2007-05-08 | 2013-06-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
| US8461985B2 (en) | 2007-05-08 | 2013-06-11 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
| US7928850B2 (en) | 2007-05-08 | 2011-04-19 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
| US8665091B2 (en) | 2007-05-08 | 2014-03-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and device for determining elapsed sensor life |
| JP5216968B2 (ja) * | 2007-08-07 | 2013-06-19 | 株式会社シノテスト | テトラゾリウム化合物を色原体として用いる試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、非特異的発色を抑制する方法、並びに非特異的発色抑制剤 |
| US8103456B2 (en) | 2009-01-29 | 2012-01-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and device for early signal attenuation detection using blood glucose measurements |
| US20100198034A1 (en) | 2009-02-03 | 2010-08-05 | Abbott Diabetes Care Inc. | Compact On-Body Physiological Monitoring Devices and Methods Thereof |
| US20100213057A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-08-26 | Benjamin Feldman | Self-Powered Analyte Sensor |
| US9226701B2 (en) | 2009-04-28 | 2016-01-05 | Abbott Diabetes Care Inc. | Error detection in critical repeating data in a wireless sensor system |
| US8993331B2 (en) | 2009-08-31 | 2015-03-31 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods for managing power and noise |
| EP2473098A4 (en) | 2009-08-31 | 2014-04-09 | Abbott Diabetes Care Inc | ANALYTICAL SIGNAL PROCESSING APPARATUS AND METHOD |
| US9320461B2 (en) | 2009-09-29 | 2016-04-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing notification function in analyte monitoring systems |
| WO2011041531A1 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Abbott Diabetes Care Inc. | Interconnect for on-body analyte monitoring device |
| USD924406S1 (en) | 2010-02-01 | 2021-07-06 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor inserter |
| DK3622883T3 (da) | 2010-03-24 | 2021-07-19 | Abbott Diabetes Care Inc | Indførerer til medicinsk indretning og fremgangsmåder til at indføre og anvende medicinske indretninger |
| US11064921B2 (en) | 2010-06-29 | 2021-07-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices |
| EP3677182B1 (en) | 2011-11-07 | 2022-05-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods |
| FI3300658T3 (fi) | 2011-12-11 | 2024-03-01 | Abbott Diabetes Care Inc | Analyyttianturimenetelmiä |
| CN104131765A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-05 | 哈尔滨盛世华林科技有限公司 | 一种门底自动密封条 |
| AU2016260547B2 (en) | 2015-05-14 | 2020-09-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Compact medical device inserters and related systems and methods |
| US10213139B2 (en) | 2015-05-14 | 2019-02-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems, devices, and methods for assembling an applicator and sensor control device |
| CA3050721A1 (en) | 2017-01-23 | 2018-07-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems, devices and methods for analyte sensor insertion |
| CN108872220B (zh) * | 2018-07-11 | 2020-03-24 | 深圳华创生物医药科技有限公司 | 一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用 |
| CN113195022A (zh) | 2018-12-21 | 2021-07-30 | 雅培糖尿病护理公司 | 用于分析物传感器插入的系统、装置和方法 |
| JP6703722B1 (ja) * | 2019-10-16 | 2020-06-03 | 株式会社エンザイム・センサ | Ｌ−グルタミンの測定方法、及びそのためのキット |
| WO2022032148A1 (en) | 2020-08-06 | 2022-02-10 | Mate Precision Technologies Inc. | Tooling base assembly |
| US11759914B2 (en) | 2020-08-06 | 2023-09-19 | Mate Precision Technologies Inc. | Vise assembly |
| CA3188510A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Vivek S. RAO | Systems, devices, and methods for analyte sensor insertion |
| US12569168B2 (en) | 2020-09-15 | 2026-03-10 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems, devices, and methods for analyte monitoring |
| CN116183588A (zh) * | 2022-12-06 | 2023-05-30 | 吉林基蛋生物科技有限公司 | 尿液分析校准品以及抗坏血酸氧化酶在尿液分析校准品中的应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3411887A (en) * | 1964-06-15 | 1968-11-19 | Miles Lab | Diagnostic composition |
| AT308049B (de) * | 1970-08-28 | 1973-06-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagens zur Glucosebestimmung |
| JPS5033795B1 (da) * | 1970-11-25 | 1975-11-04 | ||
| US3791988A (en) * | 1972-03-23 | 1974-02-12 | Hoffmann La Roche | Diagnostic test for glucose |
| US3992158A (en) * | 1973-08-16 | 1976-11-16 | Eastman Kodak Company | Integral analytical element |
| FR2280081A1 (fr) * | 1974-07-23 | 1976-02-20 | Kodak Pathe | Produit composite unitaire pour l'analyse chimique ou biologique |
-
1976
- 1976-06-09 DE DE2625834A patent/DE2625834B2/de active Granted
-
1977
- 1977-04-04 AT AT234077A patent/AT354640B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-04-13 IE IE764/77A patent/IE45546B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-04-13 CA CA276,113A patent/CA1084393A/en not_active Expired
- 1977-04-25 AR AR267337A patent/AR212763A1/es active
- 1977-04-27 NL NLAANVRAGE7704591,A patent/NL169503C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-04-28 US US05/792,073 patent/US4168205A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-04-28 FI FI771356A patent/FI60719C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-04-29 GB GB17993/77A patent/GB1519134A/en not_active Expired
- 1977-05-03 IT IT77@@A patent/IT1075527B/it active
- 1977-05-05 YU YU01144/77A patent/YU114477A/xx unknown
- 1977-05-06 ZA ZA00772716A patent/ZA772716B/xx unknown
- 1977-05-06 PL PL1977197927A patent/PL109224B1/pl unknown
- 1977-05-06 SU SU772481956A patent/SU797592A3/ru active
- 1977-05-06 HU HU77BO00001667A patent/HU172931B/hu unknown
- 1977-05-06 ES ES458544A patent/ES458544A1/es not_active Expired
- 1977-05-06 CS CS781874A patent/CS235068B2/cs unknown
- 1977-05-06 SE SE7705303A patent/SE426601B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-06 CS CS773018A patent/CS207453B2/cs unknown
- 1977-05-06 NO NO771599A patent/NO148340C/no unknown
- 1977-05-06 IL IL52047A patent/IL52047A/xx unknown
- 1977-05-06 JP JP5195377A patent/JPS52150692A/ja active Granted
- 1977-05-06 CH CH571277A patent/CH633887A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-06 PL PL1977217830A patent/PL114343B1/pl unknown
- 1977-05-09 DD DD7700198825A patent/DD130178A5/xx unknown
- 1977-05-09 FR FR7714090A patent/FR2354561A1/fr active Granted
- 1977-05-09 BE BE177392A patent/BE854407A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-09 LU LU77290A patent/LU77290A1/xx unknown
- 1977-05-09 AU AU25021/77A patent/AU500988B2/en not_active Expired
- 1977-05-09 BR BR7703008A patent/BR7703008A/pt unknown
- 1977-05-09 DK DK202677A patent/DK144949C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK144949B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter | |
| CA1339058C (en) | Process and agent for the colorimetric determination of an analyte by means of enzymatic oxidation | |
| Fossati et al. | Enzymic creatinine assay: a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement. | |
| US5094943A (en) | Process and reagent for the improved quantitative colorimetic determination of hydrogen peroxide | |
| Castillo et al. | Determination of manganese peroxidase activity with 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone and 3-(dimethylamino) benzoic acid | |
| US5126247A (en) | Method, system and devices for the assay and detection of biochemical molecules | |
| US4743559A (en) | Method for the determination of redox reactions using iodate to eliminate ascorbic acid interference | |
| US2981606A (en) | Glucose indicator and method | |
| CAPEILLÈRE-BLANDIN | Oxidation of guaiacol by myeloperoxidase: a two-electron-oxidized guaiacol transient species as a mediator of NADPH oxidation | |
| Walsh et al. | [45] Suicide substrates for flavoprotein enzymes | |
| WO1996034977A1 (en) | Determination of glycated proteins | |
| EP0116307B1 (en) | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase | |
| US5610025A (en) | Inhibition of interfering endogenous enzyme activity in assays of biological fluids | |
| White-Stevens et al. | Interference by ascorbic acid in test systems involving peroxidase. II. Redox-coupled indicator systems. | |
| Van Lente et al. | Coupled-enzyme determination of catalase activity in erythrocytes | |
| JP2796150B2 (ja) | フルクトサミンの測定方法 | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| US4409328A (en) | Method and reagent for the determination of glycerol | |
| JPS6012040B2 (ja) | トリグリセリドの検出用組成物及び検出方法 | |
| US5474908A (en) | Method of enzymatically measuring hydrogen peroxide and reagent therefor | |
| JP2665673B2 (ja) | グルコースを含有する試料中の１，５−アンヒドログルシトールの測定法 | |
| JPS58165799A (ja) | グリセリンの測定試薬 | |
| JPS6123998B2 (da) | ||
| JPH0329400B2 (da) | ||
| WO1989007653A1 (en) | Enzymatic determination of theophylline |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |