DK145318B - Farvet objektbaerer til blodundersoegelse og middel til brug ved fremstilling heraf - Google Patents
Farvet objektbaerer til blodundersoegelse og middel til brug ved fremstilling heraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK145318B DK145318B DK149876AA DK149876A DK145318B DK 145318 B DK145318 B DK 145318B DK 149876A A DK149876A A DK 149876AA DK 149876 A DK149876 A DK 149876A DK 145318 B DK145318 B DK 145318B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- dyes
- blood
- publication
- approx
- manufacturing
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 title description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 26
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 12
- VHGXRGXCDVQIKS-KRWDZBQOSA-N methyl (2s)-3-(4-methylphenyl)sulfonyloxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoate Chemical compound C([C@@H](C(=O)OC)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)OS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 VHGXRGXCDVQIKS-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 9
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical group [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- SQHOAFZGYFNDQX-UHFFFAOYSA-N ethyl-[7-(ethylamino)-2,8-dimethylphenothiazin-3-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].S1C2=CC(=[NH+]CC)C(C)=CC2=NC2=C1C=C(NCC)C(C)=C2 SQHOAFZGYFNDQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 125000000853 cresyl group Chemical group C1(=CC=C(C=C1)C)* 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-DYCDLGHISA-N Deuterium chloride Chemical compound [2H]Cl VEXZGXHMUGYJMC-DYCDLGHISA-N 0.000 description 1
- 101100082060 Xenopus laevis pou5f1.1 gene Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M nile blue A Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4[O+]=C3C=C(N)C2=C1 XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
/dtp (19) DANMARK \R^
|j| (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT od 145318 B
DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET
(21) Ansøgning nr. 1498/76 (51) tnt.CI.3 6 01 H 33/52 (22) Indleveringsdag 31. mar. 1976 6 01 N 1/30 (24) Løbedag 31 . mar. 1976 (41) Aim. tilgængelig 12. 0kt. 1976 (44) Fremlagt 25. okt. 1982 (86) International ansøgning nr. _ (86) International indleveringsdag _ (85) Videreførelsesdag _ (62) Stamansøgning nr. _
(30) Prioritet n. apr. 1975, 2515966, DE
(71) Ansøger BOEHRINGER MANNHEIM GMBH., Mannheira-Waldhof, DE.
(72) Opfinder Bieter Berger, DE: Werner Guethlein, DE: Wolfgang
Werner, DE: Peter Rieckmann, DE.
(74) Fuldmægtig Firraaet chas. Hude.
Farvet objekt "bær er til blod= undersøgelse og middel til brug ved fremstilling heraf.
Det såkaldte differentialblodbillede hører til de hyppigst udførte mikroskopiske metoder. Hertil bliver de enkelte blodpartikler (erytrocyter, leukocyter og thrombocyter o.s.v.) selektivt farvet med farvestoffer, hvorved muliggøres mikroskopisk diffentiering og qj erkendelse af patologiske forandringer. De hidtil sædvanlige farve- 00 fremgangsmåder (f. eks. ifølge Wright, May-Griinwald eller Pappenheim) ^ indbefatter flere arbejdstrin, f. eks. udstrygning af blod, fikse- jd ring, for tiden flere farvninger, vask og tørring og er derfor ret ^ omstændelige. Desuden er kvaliteten af farvningen stærkt afhængig af kvaliteten af farvestofferne samt af dét pågældende personales ^ træning og erfaring.
2 145318
Det har derfor ikke manglet på forsøg på at forenkle disse fremgangsmåder. I den senere tid er der i DE-offentliggørelsesskrift 2.153.673 beskrevet en fremgangsmåde, der betjener sig af såkaldte forud farvede objektbærere, der er overtrukket med metylenblåt N og kresylvioletacetat. Hvis der på disse objektbærere anbringes en dråbe blod og overdækkes med et dækglas, så kan der mikroskoperes efter ca. 3 minutter. Herved muliggøres ved siden af diffentieringen. af de forskellige leukocyt-former og thrombocyterne endvidere erkendelsen af unge erytrocyter, de såkaldte retikulocyter. Dette er ved siden af den enkle og sikre håndtering et yderligere fremskridt sammenlignet med det sædvanlige differentialblodbillede.
På trods af det ubestridte fremskridt, som denne fremgangsmåde gav, har den imidlertid også nogle alvorlige ulemper. Således er farvningerne i almindelighed forholdsvis matte, diffuse og kontrastfattige, og endvidere kan de tre forskellige former for granulerede leukocyter (eosinofiler, neutrofiler og basofiler) kun vanskeligt differentieres.
Det har overraskende vist sig, at man får forud farvede objektbærere, som giver kontrastrige og lysende farvninger, og som muliggør en sikker differentiering af granulocyterne, hvis man anvender farvestofferne metylenblåt N^hydroklorid og kresylvioletacetat i -kromatografisk ren form i et vægtforhold på 1;1,5 til 1:5,
Af DE-offentliggørelsesskrift 2.153.673 fremgår ikke, af hvilken kvalitet de anvendte farvestoffer var. Den anstændighed, at der ved fremstillingen af farvestof-opløsningerne måtte filtreres fra uopløste ronanenser, tillader at slutte, at det drejer sig cm handelskyaliteter. Faktisk blev der ved anvendelse af i handelen værende farvestoffer ved den i nævnte DE-offentliggørelsesskrift omhandlede fremgangsmåde fremstillet forud farvede objektbærere, san svarede i deres farveegenskaber til de i DE-offentliggørelsesskrift (side 5-6) nævnte.
Rensning af mikroskoperingsfarvestoffer er i almindelighed ikke sædvanlig. Således benyttes der som oftest gennem årtier farvestoffer med tvivlsom renhed, der ellers benyttes til tekstilfarvning. For mange farvestoffers vedkommende er det desuden ikke kendt, om og hvilke forureninger der påvirker farveresultatet. Derfor kan det 3 145318 f. eks. ikke undre, at den amerikanske Biological Stain Commission anser brugbarheden i bestemte farverecepter for det vigtigste kriterium ved specifikationen af et farvestof og til indholdsbestemmelsen kun foreskriver fotometriske og reduktometriske, men ikke kromatografiske metoder (jfr. f. eks. R.D. Lillie "Conn's Biological Stains", 8. oplag, Williams and Wilkins Comp. Baltimore 1969, side 10-14 og 416-417).
Disse fotometriske og reduktometriske metoder giver imidlertid højst oplysninger om det samlede farvestofindhold og ikke om eventuelle farvende forureninger.
Metylenblåt N (nymetylenblåt C.I. Basic Blue 24, 3,7-bis-(N-ætyl= amino)-2,8-dimetylfenotiazoniumklorid) kan fås i handelen som en ca. 50-70%’s vare og udviser ved tyndtlagskromatografisk analyse 3-4 bipletter i vekslende mængde. Resten er zinkklorid og natriumklorid.
Det har ifølge opfindelsen vist sig, at en udmærket rensning kan ske ved opløsning i vand og udfældning af hydrokloridet med saltsyre. Man får derved et kromatografisk rent produkt, der kun indeholder ca. 0,5% zinkklorid, og scm foreligger i form af monohydrokloridet.
Kresylvioletacetat (kresylægteviolet, Cresyl Fast Violett Acetate, 5,9-diaminobenzo(a)fenoksazoniumacetat) kan fås i handelen forurenet med større eller mindre mængder natriumacetat Også her viser tyndtlagskromatografisk analyse tre bipletter i vekslende mængde. Rensningen foretages som følger: Først fjernes natriumacetatet ved forsigtig digerering i vand. Derefter opløses i metanol og udfældes med æter. Gentagelse af denne fremgangsmåde giver et kromatografisk rent produkt.
De således rensede farvestoffer opløses i modsætning til handelsprodukterne I metanol uden at give nogen rester og kan på den i DE-offentliggørelsesskrift 2.153.673 (side 4) beskrevne måde uds tryges på ob jektbærere. De kan også ifølge DE-offentliggørelsesskrift 2.424.955 opløses i vand og påføres sammen med polyoksyætylensorbitanmonopalmitat ("Tween 80")®.
Det er endvidere meget overraskende, at man kun får brugbare objektbærere med de overraskende forbedrede egenskaber, hvis man vælger 4 145318 forholdet mellem de to farvestoffer mellem 1:1,5 og 1:5. I DE-offent-liggørelsesskrift 2.153.673 hævdes nemlig omvendt, at forholdet skal være 3:1 eller ifølge DE-offentliggørelsesskrift 2.424.955 2,5:1, og at kendelige afvigelser skal undgås om muligt.
Ved en foretrukken udførelsesform for den foreliggende opfindelsen sprøjter man farvestofopløsningen på objektbæreren efter den i ansøgning nr. 1484/76 angivne fremgangsmåde.
De rensede farvestoffer påføres i samlede mængder på ca. 0,5 til 2 o 10 yg/cm på objektbæreren. Forholdet mellem metylenblåt N og kresyl= violetacetat kan herunder variere mellem værdierne 1:1,5 til 1:5.
De ifølge opfindelsen forud overtrukne objektbærere bliver som beskrevet i DE-offentliggørelsesskrift 2.153.673 (side 4-5) forsynet med en bloddråbe og derefter med et dækglas og efter ca. 3-5 minutter mikroskoperet med.et olieimmersionsobjektiv.
Farvningerne er overordentligt klare, kontrastrige og godt reproducerbare. Sammenlignet mad de i DE-offentliggørelsesskrift 2.153.673 (side 5-6) beskrevne farvekarakteristika optræder der følgende ejendcratieligheder: a) Eosinofliernes granula er lysende gult farvet til forskel fra den beskrevne orangefarvning.
b) Basofilernes granula er orangerødt farvet i modsætning til den beskrevne purpurfarvning. Orangefarvningen, der i det nævnte skrift betegnes som det virksomme identificerende kendetegn, optræder kun ved randen af cellen ved passende fokusering.
c) Kernens konturer er overordentligt klart erkendelige, hvilket i høj grad letter differentieringen af lymfocyter, monocyter og de forskellige modningsstadier af granulocyterne.
En yderligere fordel ved det diagnostiske middel ifølge opfindelsen består i, at farvningerne ikke mere afhænger af kvalitetssvingningerne hos de i handelen værende farvestoffer. Ved den tekniske fremstilling af større antal er reproducerbarheden med hensyn til farvestofpåføring og farvestofsammensætning af største betydning.
5 145318
Som materiale til objektbærerne kan anvendes glas. Hvis farvestofferne sprøjtes på som angivet i ansøgning nr. 1484/76, kan der også anvendes kunststoffer, idet farvestofferne naturligvis også kan være påført på dækglas af glas eller kunststof.
Opfindelsen angår ligeledes et middel til brug ved fremstilling af objektbærere ifølge krav 1, hvilket middel er ejendommeligt ved, at det består af en blanding af kromatografisk rent metylenblåt N-hy= droklorid og kresylvioletacetat i forholdet 1:1,5 til 1:5.
Opfindelsen belyses nærmere i følgende eksempler.
Eksempel 1.
Rensning af kresylvioletacetat 50 g kresylvioletacetat (Matheson Coleman & Bell) suspenderes i 100 ml vand og omrøres kraftigt i 15 minutter. Derpå frasuges farvestoffet og vaskes to gange med hver 100 ml iskoldt vand. Filterremanensen opløses i 1,6 liter metanol under opvarmning og suges ved ca. 30°C fra de uopløste bestanddele. Til filtratet sættes langsomt under omrøring 3,5 liter æter, og der omrøres i 30 minutter under isafkøling. De dannede krystaller frasuges, opløses i 620 ml metanol under opvarmning, opløsningen afkøles til 30°C, og farvestoffer udskilles ved tilsætning af 1,85 liter æter under omrøring og isafkøling. Efter frasugning og vask med 3 x 120 ml ætermetanol (3:1) får man efter tørring over difosforpentoksyd 22 g kresylvioletacetat i form af mørkegrønne krystaller. Sammensætning: ca. 82% kresylvioletacetat, 8% kresylvioletklorid og 10# vand. Ved opvarmning til 150°C sker der dekomponering. Stoffet er ifølge kromatografisk undersøgelse (DC færdigplade kiselgel 60 F 254 Merck, løbemiddelsystem butanol-iseddike-vand 4:1:5) praktisk taget rent. Rp-værdi: 0,6.
Eksempel 2
Rensning af metylenblåt N
I en 4 liter trehalset kolbe opløses 100 g metylenblåt N (New Methylene Blue - Matheson Coleman & Bell) i 1 liter vand under om 6 145318 røring, og der tilsættes 1 liter koncentreret saltsyre d = 1,18. Efter 4 timers omrøring under isafkøling og 8 timers henstand i køleskab ved +5°C frasuger man de dannede krystaller, vasker med 400 ml isafkølet 6 N saltsyre og 500 ml æter. Man får 36,5 g sorte metallisk glinsende krystaller, dekomponering fra 253°C. Det rensede farvestof består af 95-97% metylenblåt N klorid hydroklorid og indeholder 3-5% vand. Zink findes kun i spor. Farvestoffet er praktisk taget rent ifølge kromatografisk undersøgelse (DC færdigplade kiselgel 60 F 254 Merck, løbemiddelsystem n-butanol-iseddikevand 4:1:5)- Rp-værdi: 0,5·
Eksempel 3
Forud farvet objektbærer
Der fremstilles en opløsning af følgende sammensætning under anven-'delse af de ifølge eksempel 1 og 2 rensede farvestoffer:
Metylenblåt N-hydroklorid 130 mg
Kresylvioletacetat 270 mg
Metanol til 100 ml
Denne opløsning udstryges som en film på objektbærere med en vattot og tørres eller sprøjtes på objektbærere fra en 0,5 mm bred-stråledyse (SS 60 67228-45 fra Firmaet Spraying Systems) med en sprøjtevinkel på ca. 25° i en afstand på 20 cm gennem en maske i en.bredde på 3 cm, idet objektbærerne føres forbi dysen med en ha-• .stighed på 1,5 m/minut.
Sprøjtetryk: 1,2 ato. Væskeydelse fra dysen: 10 ml/min.
Med en gennemsnitlig dråbestørrelse på ca. 20 u er den påførte far-vestofmængde ca. 3 pg/cm , På de således fremstillede forud farvede objektbærere anbringes en bloddråbe på ca. 5-10 pi og dækkes med et dækglas. Efter ca.
3-5 minutter bedømmes farvningen under mikroskopet ved en forstørrelse på ca. 800 gange under anvendelse af et olieimmersionsobjek-tiv.
Blodets enkelte partikler viser sig med følgende farvning:
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2515966 | 1975-04-11 | ||
| DE2515966A DE2515966C3 (de) | 1975-04-11 | 1975-04-11 | Vorgefärbte Objektträger für die Blutunte rsuchung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK149876A DK149876A (da) | 1976-10-12 |
| DK145318B true DK145318B (da) | 1982-10-25 |
| DK145318C DK145318C (da) | 1983-04-05 |
Family
ID=5943661
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK149876A DK145318C (da) | 1975-04-11 | 1976-03-31 | Farvet objektbaerer til blodundersoegelse og middel til brug ved fremstilling heraf |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4070495A (da) |
| JP (1) | JPS51126893A (da) |
| AR (1) | AR210757A1 (da) |
| AT (1) | AT350190B (da) |
| BE (1) | BE840454A (da) |
| CA (1) | CA1052675A (da) |
| CH (1) | CH621629A5 (da) |
| CS (1) | CS205019B2 (da) |
| DD (1) | DD123628A5 (da) |
| DE (1) | DE2515966C3 (da) |
| DK (1) | DK145318C (da) |
| ES (1) | ES446836A1 (da) |
| FI (1) | FI59677C (da) |
| FR (1) | FR2307271A1 (da) |
| GB (1) | GB1480576A (da) |
| HU (1) | HU176928B (da) |
| IE (1) | IE42552B1 (da) |
| IT (1) | IT1059617B (da) |
| LU (1) | LU74738A1 (da) |
| NL (1) | NL7603628A (da) |
| PL (1) | PL107576B1 (da) |
| SE (1) | SE420355B (da) |
| SU (1) | SU904536A3 (da) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2651060C3 (de) * | 1976-11-09 | 1980-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Differential-diagnostische Spermauntersuchung |
| US4193980A (en) * | 1978-01-05 | 1980-03-18 | Corning Glass Works | Dry preparation for reticulocyte staining |
| US4248821A (en) * | 1979-07-25 | 1981-02-03 | Dellen Adrian F Van | Method and device for embedding a specimen for microscopic examination |
| US4581223A (en) * | 1980-03-12 | 1986-04-08 | Lawrence Kass | Individual leukocyte determination by means of differential metachromatic dye sorption |
| US4400370A (en) * | 1980-03-12 | 1983-08-23 | Lawrence Kass | Metachromatic dye sorption means for differential determination of leukocytes |
| CA1155041A (en) * | 1980-04-21 | 1983-10-11 | Michael E. Jolley | Fluorescent nucleic acid stains |
| US4500509A (en) * | 1981-03-11 | 1985-02-19 | Lawrence Kass | Metachromatic dye sorption and fluorescent light emmisive means for differential determination of developmental stages of neutrophilic granulocytic cells and other leukocytes |
| US4606950A (en) * | 1984-08-31 | 1986-08-19 | Ellen M. Corbet | Method for assembling a floral arrangement |
| US5106744A (en) * | 1990-11-01 | 1992-04-21 | Cytocolor Inc. | Method of staining monocytes and compositions thereof |
| AU2005286235C1 (en) | 2004-09-23 | 2013-08-22 | TauRx Therapeutics Management Ltd | Methods of chemical synthesis and purification of diaminophenothiazinium compounds including Methylthioninium Chloride (MTC) |
| DK3121169T3 (da) | 2006-07-11 | 2022-02-28 | Wista Lab Ltd | Fremgangsmåder til syntese og/eller oprensning af diaminophenothiaziniumforbindelser |
| US20210181085A1 (en) * | 2017-10-26 | 2021-06-17 | Essenlix Corporation | Rapid measurement of platelets |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT966513B (it) * | 1970-10-30 | 1974-02-20 | Gen Electric | Vetrini precolorati per esami del sangue |
| US3906120A (en) * | 1970-10-30 | 1975-09-16 | Gen Electric | Method for preparing slides for blood evaluation |
| US3796594A (en) * | 1970-10-30 | 1974-03-12 | Gen Electric | Stain coated slides for differentially staining blood |
| GB1473945A (en) * | 1973-05-24 | 1977-05-18 | Gen Electric | Method for preparing slides for blood evaluation |
-
1975
- 1975-04-11 DE DE2515966A patent/DE2515966C3/de not_active Expired
-
1976
- 1976-02-27 SE SE7602728A patent/SE420355B/xx unknown
- 1976-03-31 US US05/672,572 patent/US4070495A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-03-31 DK DK149876A patent/DK145318C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-04-01 CA CA249,401A patent/CA1052675A/en not_active Expired
- 1976-04-05 FI FI760911A patent/FI59677C/fi not_active IP Right Cessation
- 1976-04-05 AR AR262783A patent/AR210757A1/es active
- 1976-04-05 HU HU76BO1607A patent/HU176928B/hu unknown
- 1976-04-06 DD DD192223A patent/DD123628A5/xx unknown
- 1976-04-06 GB GB13853/76A patent/GB1480576A/en not_active Expired
- 1976-04-07 BE BE165900A patent/BE840454A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-04-07 CS CS762302A patent/CS205019B2/cs unknown
- 1976-04-07 IT IT22060/76A patent/IT1059617B/it active
- 1976-04-07 NL NL7603628A patent/NL7603628A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-04-07 CH CH439376A patent/CH621629A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-04-08 SU SU762346753A patent/SU904536A3/ru active
- 1976-04-09 AT AT262076A patent/AT350190B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-04-09 IE IE752/76A patent/IE42552B1/en unknown
- 1976-04-09 LU LU74738A patent/LU74738A1/xx unknown
- 1976-04-09 FR FR7610487A patent/FR2307271A1/fr active Granted
- 1976-04-09 ES ES446836A patent/ES446836A1/es not_active Expired
- 1976-04-10 PL PL1976188674A patent/PL107576B1/pl unknown
- 1976-04-12 JP JP51041173A patent/JPS51126893A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL7603628A (nl) | 1976-10-13 |
| BE840454A (fr) | 1976-10-07 |
| JPS51126893A (en) | 1976-11-05 |
| PL107576B1 (pl) | 1980-02-29 |
| DE2515966A1 (de) | 1976-10-21 |
| AT350190B (de) | 1979-05-10 |
| IE42552L (en) | 1976-10-11 |
| SE420355B (sv) | 1981-09-28 |
| DK149876A (da) | 1976-10-12 |
| CS205019B2 (en) | 1981-04-30 |
| SU904536A3 (ru) | 1982-02-07 |
| IT1059617B (it) | 1982-06-21 |
| DE2515966C3 (de) | 1979-11-22 |
| ES446836A1 (es) | 1977-06-01 |
| CA1052675A (en) | 1979-04-17 |
| DD123628A5 (da) | 1977-01-05 |
| AU1267776A (en) | 1977-10-13 |
| IE42552B1 (en) | 1980-08-27 |
| FI59677B (fi) | 1981-05-29 |
| FI59677C (fi) | 1981-09-10 |
| HU176928B (hu) | 1981-06-28 |
| DE2515966B2 (de) | 1979-03-22 |
| DK145318C (da) | 1983-04-05 |
| SE7602728L (sv) | 1976-10-12 |
| AR210757A1 (es) | 1977-09-15 |
| FR2307271B1 (da) | 1980-03-28 |
| GB1480576A (en) | 1977-07-20 |
| FI760911A7 (da) | 1976-10-12 |
| LU74738A1 (da) | 1976-11-11 |
| ATA262076A (de) | 1978-10-15 |
| CH621629A5 (da) | 1981-02-13 |
| US4070495A (en) | 1978-01-24 |
| FR2307271A1 (fr) | 1976-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK145318B (da) | Farvet objektbaerer til blodundersoegelse og middel til brug ved fremstilling heraf | |
| EP0014929B1 (de) | Diagnostisches Mittel, Verfahren zu dessen Herstellung sowie dessen Verwendung zum Nachweis von Leukozyten in Körperflüssigkeiten | |
| CA1191079A (en) | Metachromatic dye sorption means for differential determination of developmental stages of neutrophilic granulocytic cells and other leukocytes | |
| DE3109252C2 (de) | Verfahren und Zusammensetzung zur Bestimmung einzelner Leukozyten durch metachromatische Farbstoffdifferentialabsorption | |
| Majone et al. | Persistence of micronuclei in the marine mussel, Mytilus galloprovincialis, after treatment with mitomycin C | |
| CA1205365A (en) | Metachromatic dye sorption and fluorescent light emissive means for determination of developmental stages of neutrophilic granulocytic cells and other leukocytes | |
| EP0183717B1 (en) | Single dye replacement for romanowsky plural dye variable compositions in human biopsy specimen constituent identifications | |
| EP0008428B1 (de) | Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Leukozyten in Körperflüssigkeiten sowie als Chromogene hierfür geeignete Azofarbstoff-Ester, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zur Herstellung diagnostischer Mittel zum Nachweis von Leukozyten in Körperflüssigkeiten | |
| CA1194766A (en) | Use of pyrylium and thiapyrylium compounds as biological stains | |
| US5106744A (en) | Method of staining monocytes and compositions thereof | |
| US4810487A (en) | Method of identifying polymethine stained lymphocyte subpopulations and compositions thereof | |
| Moser et al. | Fluorimetric measurements and chromatin condensation patterns of nuclei from 3T3 cells throughout G1 | |
| US4840784A (en) | Use of pyrylium and thiapyrylium compounds as biological stains | |
| JPS6259264B2 (da) | ||
| EP0191850A1 (en) | Differentiation, identification and enumeration of neuthrophils, erythroblast and sub-populations of lymphopcytes with basic blue 141 | |
| Kass | Identification of normal and leukemic granulocytic cells with merocyanine 540 | |
| Thomson et al. | Evaluation of excitation light sources for incident immunofluorescence microscopy | |
| Kass | Basic blue 54: a new colorant for monocytes | |
| KASS | Staining of basic nucleoproteins by an extract of the black raspberry | |
| Kass | Rapid identification of T helper and T cytotoxic/suppressor lymphocytes with an oxazine dye | |
| SU1157052A1 (ru) | Способ обработки пленочных фильтровальных материалов | |
| KR19980042627A (ko) | 유약백혈구의 분류계수법 | |
| Dougherty et al. | Sodium nitroprusside reagent II-A solvent modification | |
| Aslani | A New and Reproducible Modified Papanicolaou Staining Procedure | |
| De Tomasi | Laboratory Hints from the Literature |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |