DK145893B - Fortimiciner til anvendelse som desinfektionsmidler og fremgangsmaade til fremstilling af disse fortimiciner kaldet fortimicin ke og d - Google Patents

Fortimiciner til anvendelse som desinfektionsmidler og fremgangsmaade til fremstilling af disse fortimiciner kaldet fortimicin ke og d Download PDF

Info

Publication number: DK145893B
Authority: DK; Denmark
Prior art keywords: fortimicin; water; column; fractions; activity
Prior art date: 1976-10-28

Application number

DK478077AA

Other languages

English (en)

Other versions

DK145893C (da

DK478077A (da

Inventor

T Lida

K Shirahata

I Matsubara

M Sugimoto

S Ishii

R Okachi

T Nara

Original Assignee

Kyowa Hakko Kogyo Kk

Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)

1976-10-28

Filing date

1977-10-27

Publication date

1983-04-05

1976-10-28 Priority claimed from JP51128837A external-priority patent/JPS5834119B2/ja

1977-01-14 Priority claimed from JP233877A external-priority patent/JPS5390241A/ja

1977-10-27 Application filed by Kyowa Hakko Kogyo Kk filed Critical Kyowa Hakko Kogyo Kk

1978-04-29 Publication of DK478077A publication Critical patent/DK478077A/da

1983-04-05 Publication of DK145893B publication Critical patent/DK145893B/da

1983-10-31 Application granted granted Critical

1983-10-31 Publication of DK145893C publication Critical patent/DK145893C/da

Links

SPZPNNYPYCPIPT-SDOPNMJFSA-N CN[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2O[C@H](CN)CC[C@H]2N)[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H]1OC Chemical compound CN[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2O[C@H](CN)CC[C@H]2N)[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H]1OC SPZPNNYPYCPIPT-SDOPNMJFSA-N 0.000 title description 63
SPZPNNYPYCPIPT-UHFFFAOYSA-N Fortimicin KE Natural products NC1C(O)C(OC)C(NC)C(O)C1OC1C(N)CCC(CN)O1 SPZPNNYPYCPIPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 63
238000000034 method Methods 0.000 title description 25
238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
VYLDQCCRMFPJHA-FXJXLBQDSA-N CO[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N)[C@@H](O[C@H]2O[C@H](CN)CC[C@H]2N)[C@H](O)[C@@H]1N(C)C(=O)CN Chemical compound CO[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N)[C@@H](O[C@H]2O[C@H](CN)CC[C@H]2N)[C@H](O)[C@@H]1N(C)C(=O)CN VYLDQCCRMFPJHA-FXJXLBQDSA-N 0.000 description 69
VYLDQCCRMFPJHA-UHFFFAOYSA-N Fortimicin D Natural products OC1C(N(C)C(=O)CN)C(OC)C(O)C(N)C1OC1C(N)CCC(CN)O1 VYLDQCCRMFPJHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 69
BIDUPMYXGFNAEJ-APGVDKLISA-N astromicin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](N(C)C(=O)CN)[C@@H](OC)[C@@H](O)[C@H](N)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](N)CC[C@@H]([C@H](C)N)O1 BIDUPMYXGFNAEJ-APGVDKLISA-N 0.000 description 37
XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
230000000694 effects Effects 0.000 description 27
229930195503 Fortimicin Natural products 0.000 description 25
239000000843 powder Substances 0.000 description 25
239000002609 medium Substances 0.000 description 21
HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
239000000243 solution Substances 0.000 description 19
238000010828 elution Methods 0.000 description 18
239000012458 free base Substances 0.000 description 18
241000187708 Micromonospora Species 0.000 description 17
239000002904 solvent Substances 0.000 description 17
BIDUPMYXGFNAEJ-UHFFFAOYSA-N Fortimicin A Natural products OC1C(N(C)C(=O)CN)C(OC)C(O)C(N)C1OC1C(N)CCC(C(C)N)O1 BIDUPMYXGFNAEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
WFMQYKIRAVMXSU-UHFFFAOYSA-N Fortimicin AE Natural products NC1C(O)C(OC)C(NC)C(O)C1OC1C(N)CCC(C(C)N)O1 WFMQYKIRAVMXSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
WFMQYKIRAVMXSU-LCVFDZPESA-N Fortimicin B Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)[C@H](OC)[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](N)CC[C@@H]([C@H](C)N)O1 WFMQYKIRAVMXSU-LCVFDZPESA-N 0.000 description 14
LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 14
239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 14
238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
DLVFJQXRKNWSCB-CPLRHSGFSA-N Fortimicin C Natural products CO[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N)[C@H](O[C@H]2O[C@@H](CN)CC[C@@H]2N)[C@@H](O)[C@H]1N(C)C(=O)CNC(=O)N DLVFJQXRKNWSCB-CPLRHSGFSA-N 0.000 description 13
VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 13
VKGIGFQBOYWLHV-APGVDKLISA-N n-[(1s,2r,3r,4s,5s,6r)-4-amino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-[(1s)-1-aminoethyl]oxan-2-yl]oxy-2,5-dihydroxy-6-methoxycyclohexyl]-2-(carbamoylamino)-n-methylacetamide Chemical compound O[C@@H]1[C@H](N(C)C(=O)CNC(N)=O)[C@@H](OC)[C@@H](O)[C@H](N)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](N)CC[C@@H]([C@H](C)N)O1 VKGIGFQBOYWLHV-APGVDKLISA-N 0.000 description 13
239000000741 silica gel Substances 0.000 description 13
229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 13
229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 13
239000000126 substance Substances 0.000 description 13
QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
238000011161 development Methods 0.000 description 12
238000000855 fermentation Methods 0.000 description 11
230000004151 fermentation Effects 0.000 description 11
RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 10
229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 10
239000012141 concentrate Substances 0.000 description 10
229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 10
238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 10
239000000047 product Substances 0.000 description 9
XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 8
WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
URWAJWIAIPFPJE-UHFFFAOYSA-N Rickamicin Natural products O1CC(O)(C)C(NC)C(O)C1OC1C(O)C(OC2C(CC=C(CN)O2)N)C(N)CC1N URWAJWIAIPFPJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
229930192786 Sisomicin Natural products 0.000 description 8
238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 8
230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 8
239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
238000000746 purification Methods 0.000 description 8
239000011347 resin Substances 0.000 description 8
229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
229960005456 sisomicin Drugs 0.000 description 8
URWAJWIAIPFPJE-YFMIWBNJSA-N sisomycin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC=C(CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N URWAJWIAIPFPJE-YFMIWBNJSA-N 0.000 description 8
238000001228 spectrum Methods 0.000 description 8
NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 8
QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 7
244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 7
235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 7
XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 7
238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 7
235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 7
CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 6
239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 6
238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
LKKVGKXCMYHKSL-LLZRLKDCSA-N gentamycin A Chemical compound O[C@H]1[C@H](NC)[C@@H](O)CO[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N LKKVGKXCMYHKSL-LLZRLKDCSA-N 0.000 description 6
150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
239000002253 acid Substances 0.000 description 5
239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 5
150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 5
VEGXETMJINRLTH-BOZYPMBZSA-N gentamycin C1a Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N VEGXETMJINRLTH-BOZYPMBZSA-N 0.000 description 5
239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 5
229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 5
NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
AYJRCSIUFZENHW-UHFFFAOYSA-L barium carbonate Chemical compound [Ba+2].[O-]C([O-])=O AYJRCSIUFZENHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 4
238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 4
239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
239000011521 glass Substances 0.000 description 4
150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
SYJXFKPQNSDJLI-HKEUSBCWSA-N neamine Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](N)C[C@@H]1N SYJXFKPQNSDJLI-HKEUSBCWSA-N 0.000 description 4
229950011272 nebramycin Drugs 0.000 description 4
229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 4
235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 4
238000011218 seed culture Methods 0.000 description 4
239000008107 starch Substances 0.000 description 4
235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
229960000707 tobramycin Drugs 0.000 description 4
238000005406 washing Methods 0.000 description 4
XXJGBENTLXFVFI-UHFFFAOYSA-N 1-amino-methylene Chemical compound N[CH2] XXJGBENTLXFVFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 3
230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 3
229960001192 bekanamycin Drugs 0.000 description 3
239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
-1 forticin B Chemical compound 0.000 description 3
229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
229930182824 kanamycin B Natural products 0.000 description 3
SKKLOUVUUNMCJE-FQSMHNGLSA-N kanamycin B Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SKKLOUVUUNMCJE-FQSMHNGLSA-N 0.000 description 3
229950003076 lividomycin Drugs 0.000 description 3
DBLVDAUGBTYDFR-SWMBIRFSSA-N lividomycin A Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@H]1O)O[C@H]1O[C@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1N)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)CN)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C[C@H]1N DBLVDAUGBTYDFR-SWMBIRFSSA-N 0.000 description 3
PGBHMTALBVVCIT-VZXHOKRSSA-N neomycin C Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VZXHOKRSSA-N 0.000 description 3
UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
229960003485 ribostamycin Drugs 0.000 description 3
229930190553 ribostamycin Natural products 0.000 description 3
NSKGQURZWSPSBC-NLZFXWNVSA-N ribostamycin Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](N)C[C@H]1N NSKGQURZWSPSBC-NLZFXWNVSA-N 0.000 description 3
NSKGQURZWSPSBC-UHFFFAOYSA-N ribostamycin A Natural products NC1C(O)C(O)C(CN)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(CO)O2)O)C(O)C(N)CC1N NSKGQURZWSPSBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
239000000523 sample Substances 0.000 description 3
230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
XEQLFNPSYWZPOW-NUOYRARPSA-N (2r)-4-amino-n-[(1r,2s,3r,4r,5s)-5-amino-4-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-amino-6-(aminomethyl)-4,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]-2-hydroxybutanamide Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)NC(=O)[C@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1N XEQLFNPSYWZPOW-NUOYRARPSA-N 0.000 description 2
CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
DNYGXMICFMACRA-XHEDQWPISA-N Gentamicin C2b Chemical compound O1[C@H](CNC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N DNYGXMICFMACRA-XHEDQWPISA-N 0.000 description 2
WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
229930182825 Kanamycin C Natural products 0.000 description 2
NAELDCSKUHFKCC-UHFFFAOYSA-N Lividomycin A Natural products NCC1OC(OC2C(O)C(OC3C(O)C(N)CC(N)C3OC4OC(CO)C(O)CC4N)OC2CO)C(N)C(O)C1OC5C(O)C(O)C(O)OC5CO NAELDCSKUHFKCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
BRSBFYLXCMGALM-UHFFFAOYSA-N Lividomycin B Natural products NC1C(O)C(O)C(CN)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(N)CC(N)C2O)OC2C(CC(O)C(CO)O2)N)OC1CO BRSBFYLXCMGALM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N Paromomycin II Natural products NC1C(O)C(O)C(CN)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(N)CC(N)C2O)OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)N)OC1CO UOZODPSAJZTQNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
HQXKELRFXWJXNP-ABOIPUQESA-N Streptomycin B Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H]([C@@H](O[C@H]1CO)O[C@@H]1[C@@]([C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O)N=C(N)N)(O)C=O)NC)[C@H]1O[C@@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HQXKELRFXWJXNP-ABOIPUQESA-N 0.000 description 2
XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 2
239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
238000001035 drying Methods 0.000 description 2
239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 2
239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
WZDRWYJKESFZMB-FQSMHNGLSA-N kanamycin C Chemical compound O([C@H]1[C@H](N)C[C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)N)N)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](N)[C@H]1O WZDRWYJKESFZMB-FQSMHNGLSA-N 0.000 description 2
BRSBFYLXCMGALM-CDEWKRIDSA-N lividomycin B Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H](C[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO BRSBFYLXCMGALM-CDEWKRIDSA-N 0.000 description 2
238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
238000002844 melting Methods 0.000 description 2
230000008018 melting Effects 0.000 description 2
230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
229960001914 paromomycin Drugs 0.000 description 2
UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N paromomycin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N 0.000 description 2
235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 2
239000012521 purified sample Substances 0.000 description 2
230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
HQXKELRFXWJXNP-UHFFFAOYSA-N (1R)-N,N'-dicarbamimidoyl-O4-[3-formyl-O2-(O4-alpha-D-mannopyranosyl-2-methylamino-2-deoxy-alpha-L-glucopyranosyl)-5-deoxy-alpha-L-lyxofuranosyl]-streptamine Natural products OCC1OC(OC2C(C(C)OC2OC2C(C(O)C(N=C(N)N)C(O)C2O)N=C(N)N)(O)C=O)C(NC)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HQXKELRFXWJXNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
XUFIWSHGXVLULG-BSBKYKEKSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-[(1s)-1-aminoethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)[C@H](C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N XUFIWSHGXVLULG-BSBKYKEKSA-N 0.000 description 1
PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
VOMOHGCJIZYJCE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-n-[4-amino-3-[3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]oxy-2,5-dihydroxy-6-methoxycyclohexyl]-n-methylacetamide;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1C(N(C)C(=O)CN)C(OC)C(O)C(N)C1OC1C(N)CCC(CN)O1 VOMOHGCJIZYJCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
229930183998 Lividomycin Natural products 0.000 description 1
241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
229930192296 Myomycin Natural products 0.000 description 1
XCSTZNJIQFIVPE-FQSMHNGLSA-N Nebramycin IV Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](COC(N)=O)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N XCSTZNJIQFIVPE-FQSMHNGLSA-N 0.000 description 1
MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
RQLDKUSQKQMFCN-DOOXDOMHSA-N [(1s,2s,3s,4s,5r,6r)-3-(diaminomethylideneamino)-4-[(2r,3r,4r,5s)-3-[(2s,3s,4s,5r,6s)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-4-(hydroxymethyl)-5-methyloxolan-2-yl]oxy-2,5,6-trihydroxycyclohexyl] carbamate Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](CO)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@H]1O RQLDKUSQKQMFCN-DOOXDOMHSA-N 0.000 description 1
239000008272 agar Substances 0.000 description 1
238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
XZNUGFQTQHRASN-XQENGBIVSA-N apramycin Chemical compound O([C@H]1O[C@@H]2[C@H](O)[C@@H]([C@H](O[C@H]2C[C@H]1N)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](N)[C@@H](CO)O1)O)NC)[C@@H]1[C@@H](N)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O XZNUGFQTQHRASN-XQENGBIVSA-N 0.000 description 1
229950006334 apramycin Drugs 0.000 description 1
229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
239000002585 base Substances 0.000 description 1
WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
RHRAMPXHWHSKQB-GGEUKFTFSA-N betamicin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)O)[C@@H](N)C[C@H]1N RHRAMPXHWHSKQB-GGEUKFTFSA-N 0.000 description 1
230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
229950004374 bluensomycin Drugs 0.000 description 1
235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
239000005018 casein Substances 0.000 description 1
BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
239000000284 extract Substances 0.000 description 1
235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
229960003704 framycetin Drugs 0.000 description 1
238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
239000000499 gel Substances 0.000 description 1
RHRAMPXHWHSKQB-UHFFFAOYSA-N gentamicin B Natural products O1CC(O)(C)C(NC)C(O)C1OC1C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(CN)O2)O)C(N)CC1N RHRAMPXHWHSKQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
DNYGXMICFMACRA-UHFFFAOYSA-N gentamicin C1A Natural products O1C(CNC)CCC(N)C1OC1C(O)C(OC2C(C(NC)C(C)(O)CO2)O)C(N)CC1N DNYGXMICFMACRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
XUFIWSHGXVLULG-JYDJLPLMSA-N gentamycin C2 Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)[C@@H](C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N XUFIWSHGXVLULG-JYDJLPLMSA-N 0.000 description 1
238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
229910001867 inorganic solvent Inorganic materials 0.000 description 1
239000003049 inorganic solvent Substances 0.000 description 1
238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M mandelate Chemical compound [O-]C(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
FWIWJTXEUZDJRI-WVLIOWMCSA-N myomycin Chemical compound NC(=O)O[C@H]1[C@@H](OC(=O)CC(N)CCCNC(=O)CC(N)CCCN)[C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 FWIWJTXEUZDJRI-WVLIOWMCSA-N 0.000 description 1
230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
238000010926 purge Methods 0.000 description 1
238000011160 research Methods 0.000 description 1
239000000344 soap Substances 0.000 description 1
239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
241000894007 species Species 0.000 description 1
229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
229950005244 streptomycin b Drugs 0.000 description 1
KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M sulfamate Chemical compound NS([O-])(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
238000005303 weighing Methods 0.000 description 1

Classifications

- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/22—Cyclohexane rings, substituted by nitrogen atoms
- C07H15/222—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms
- C07H15/224—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms with only one saccharide radical directly attached to the cyclohexyl radical, e.g. destomycin, fortimicin, neamine
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/863—Mycobacterium

Landscapes

Chemical & Material Sciences (AREA)
Organic Chemistry (AREA)
Engineering & Computer Science (AREA)
Health & Medical Sciences (AREA)
Biochemistry (AREA)
Biotechnology (AREA)
General Health & Medical Sciences (AREA)
Genetics & Genomics (AREA)
Molecular Biology (AREA)
Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Saccharide Compounds (AREA)
Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

(19) DANMARK (J&)

8 (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT ου 145893 B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 4780/77 (51) IntCI.3 C 07 Η 15/22 (22) Indleveringsdag 27- okt. 1977 A 01 N 43/16 (24) Løbedag 27. okt. 1977 C 12 P 19/48 (41) Aim. tilgængelig 29. apr. 1978 (44) Fremlagt 5« apr. 19¾ (86) International ansøgning nr. -(86) International indleveringsdag (85) Videreføreisesdag -(62) Sta mansøgning nr. -

(30) Prioritet 28. okt. 1976, 128837/76, JP 14. jan. 1977, 2338/77, JP

(71) Ansøger KYOWA HAKKO KOGYO CO. LTD., Tokyo, JP.

(72) Opfinder Takao _Iida, JP: Kunikatsu Shirahata, JP: Isao Matsubara, JP: Masahiro Sugimoto, JP: Shinzo _Ishii, JP: m. fl.

(74) Fuldmægtig Ingeniørfirmaet Hofman-Bang & Bout ard.

(54) Fortimiciner til anvendelse som desinfektionsmidler og fremgangs= måde til fremstilling af disse fortimiciner, kaldet fortimicin KE og D.

Opfindelsen angår hidtil ukendte fortimiciner til anvendelse som desinfektionsmidler, som er ejendommelige ved, at de er fortimiciner kaldet fortimicin KE og D med den almene formel: “ ch2nh2 nh2 oh S /\ -) / \- o -( )—0CH3 i t nh ho n-ch, 1 2 I 5

* R

2 145893 hvori R betyder H (fortimicin KE) eller -IcH^NHg (fortimicin D).

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af disse fortimiciner, som er ejendommelig ved, at en mikroorganisme tilhørende arten Micromonosnora olivoasterospora dyrkes i et næringsmedium, hvorefter mindst en af de aktive forbindelser isoleres fra dyrkningsvæsken, om ønsket i form af et salt, og om ønsket vundet fortimicin D omdannes til fortimicin KE ved opvarmning i alkalisk vandig opløsning.

*

Det er kendt, se US patentskrifterne nr. 3 931 400, 3 976 768 og 4 048 015 og de tilsvarende danske fremlæggelsesskrifter nr.

137 864, 137 960 og 140 152, at visse stammer af arten Micro-monospora olivoasterospora ved dyrkning danner antibiotiske stoffer kaldet fortimicin A, B og C, som har de følgende strukturformler:

Fortimicin A CH^ ch-nh2 nh2 oh Q-' MT"” nh2 ho n-c-ch2nh2 ch3

Fortimicin. B

CH3

®-m2 “»2 OH

Q- 0-y^y>-0CH 3

HH, HO NH

2 I

CH-, 5 3 U5893

Fortimicin C

NH0 i 2 CH-CH,

V 3 NH2 OH

O—°—0-°°¾ M2 HO |-CH3 G=0 CH^NHG-NH« 2 j, 2

O

Det har nu vist sig, at stammer af Micromonospora olivoastero-spora når de dyrkes, frigiver to yderligere aktive stoffer ud over fortimicin A, fortimicin B og fortimicin C. Et studium af disse aktive stoffers kemiske, fysiske og biologiske egenskaber viser, at stofferne er hidtil ukendte antibiotiske forbindelser, som nu er blevet navngivet fortimicin D og fortimicin KE.

Fortimicin D og KE udviser bred antibakteriel aktivitet og er derfor bl.a. nyttige til at rense og sterilisere laboratorie-glasudstyr og kirurgiske instrumenter og kan også anvendes i kombination med sæber, detergenser og vaskeopløsninger til rengøringsformål. Mod Staphylococcus aureus ATCC 6538P har fortimicin D i forhold til det nærbeslægtede fortimicin A, og fortimicin KE i forhold til det hermed nærbeslægtede fortimicin B overraskende bedre aktivitet. Endvidere forventes fortimicin D at kunne anvendes som terapeutisk forbindelse over for forskellige infektioner (hos mennesker og dyr) fremkaldt af forskellige bakterier.

De farmaceutisk acceptable ikke-toxiske syreadditionssalte af fortimicin D og fortimicin KE er f.eks. mineralsyreadditionssaltene, såsom hydrochloridet, hydrobromidet, hydroiodidet, sulfatet, sulfamatet og phosphatet, og de organiske syreadditionssalte, såsom maleatet, acetatet, citratet, oxalatet, succinatet, benzoatet, tartratet, fumaratet, malatet, mandela-tet og ascorbatet.

4 145893

De fysiske-kemiske egenskaber af den frie base af fortimicin D er som følger: (1) Et basisk hvidt pulver (2) Elementanalyse: C= 44,15#, H= 8,77%, H= 15,86%

(3) Smeltepunkt: 109-ll4°C

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum:

Det ultraviolette absorptionsspektrum af en vandig opløsning af stoffet viser ikke noget karakteristisk maximum mellem 220 nm og 360 nm, men viser kun terminal absorption.

(5) Specifik drejning: [aj^p = +121° (C= 0,5, H20).

(6) Infrarødt absorptionsspektrum:

Det infrarøde absorptionsspektrum måles i KBr-tablet. Den frie base af fortimicin D viser maxima ved følgende bølgetal (cm“^*): 3400, 2900, 1625, 1570, 1470, 1350, 1315, 1020.

(7) Farvereaktioner:

Nirihydrin-reaktion: positiv Kaliumpermanganat-reaktion: positiv Elson-Morganfs reaktion: negativ Biuret-reaktion: negativ (8) PMR-spektret af fortimicin D måles i en deuteriumoxid-opløsning (pD= 10,1) ved anvendelse af JEOL JNM-PS-100.

Resultaterne er som følger: 1,10-1,90 (4H, m), 2,50-3,06 (4H, m), 3,07 (3H, s), 3,45 (3H, s), 3,53 (2H, s), 3,70-4,25 (4H,.m), 4,36 (IH, t, J= 3,0), 4,88 (IH, d, J= 4,0), 4,92 (IH, d,d, J= 3,0, 9,0).

145893 5 (9) CMR-spektret af fortimicin D måles 1 en deuteriumoxid-opløs-ning (pD= 11,1) ved anvendelse af JE0L-PFT-100A.

Resultaterne er som følger: . <f 176,5, 100,1, 78,5, 75,6, 73,0, 71,3, 71,1, 56,4, 55,5, 52,5, 50,2, 45,7, 43,4, 32,2, 32,2, 28,3, 26,8.

(10) Massespektret af stoffet afslører den følgende M + 1 ion og fragmentioner. Formlerne i parenteser betyder sammensætningsformlerne opnået ved højopløsningsmassespektrometri.

m/e 392 M + 1 (C-^H^Og) 374 (C16H30N4°6) 292 ^1^22¾¾5 274 (CnH20N305) 264 ((½¾]^) 246 (C10H20N304) 235 (CgHigN205) 207 (C8HigN204) 129 (CgH^O)

Ud fra resultatet af massespektrometrien bestemmes stoffets molekylvægt til at være 391, og molekylformlen bestemmes til at være Cl6H33N5°6* Elementanalysen for stoffet (hydratiseret med 2,5 mol H20) beregnet ud fra molekylformlen er C= 44,01%, H= 8,79% og N= 16,04%.

(11) Baseret på de ovenstående fysisk-kemiske data antages strukturformlen af fortimicin D at være som følger: 6 145893 *· < >' -

CHpNHp H?N °H

“*2 HO N-CH,

I J

r CH2NH2 (12) Den frie base af fortimicin D er let opløselig i vand, opløselig i methanol og tungt opløselig i ethanol og acetone, men er uopløselig i organiske opløsningsmidler, såsom chloroform, benzen, ethylacetat, butylacetat, diethylether, butanol, petroleumsether og n-hexan.

De fysisk-kemiske egenskaber af den frie base af fortimicin KE er som følger: (1) Et basisk hvidt pulver (2) Elementanalyse fundet: C= 48,18%, H= 9,29%, N= 15,84%.

(3) Smeltepunkt: 72-77°C

(4) Ultraviolet absorptionsspektrum: .

Det ultraviolette absorptionsspektrum af en vandig opløsning af stoffet viser ikke noget karakteristisk maximum mellem 220 nm og 360 nm, men viser kun terminal absorption.

(5) Specifik drejning: '[afjjp = + 28,5° (C= 0,5, H20) (6) Infrarødt absorptionsspektrum:

Det infrarøde absorptionsspektrum måles i KBr-tablet. Den frie base af fortimicin KE viser maxima ved de følgende bølgetal (cm”1): 3350, 2920, 1580, 1470, 1370, 1330, 1090, 1035 (7) Farvereaktioner:

Ninhydrin-reaktion: positiv 7 145893

Kaiiump ermanganat-reaktion: positiv Elson-Morgan's reaktion: negativ Biuret-reaktion: negativ (8) PMR-spektret af fortimicin KE måles i deuteriumoxid-opløs-ning (pD= 11,1) ved anvendelse af JEOL JNM-PS-100.

Resultaterne er som følger: S 1,10-1,90 (4H, m), 2,40 (3H, s), 2,66 (2H, d, J= 6,0), 2,69-3,20 (3H, m), 3,48 (3H, s), 3,49 (IH, t, J= 9,5), 3,59-4,10 (3H, m), 3,92 (IH, d, d, J= 4,5, 9,5), 5,04 (IH, d, J= 4,0).

(9) CMR-spektret af fortimicin KE måles i en deuteriumoxid-opløs-ning (pD= 11,0) ved anvendelse af JEOL PFT-100A.

Resultaterne er som følger: S 102,3, 83,7, 79,9, 71,3, 71,3, 60,9, 59,3, 53,8, 50,4, 45,8 35,4, 28,3, 27,0.

(10) Stoffets massespektrum afslører den følgende M + 1 ion og fragmentioner. Formlerne i parenteser betyder sammensætningsformlerne opnået ved højopløsningsspektrometri.

m/e 335 M + 1 (Cl4H31N405) 317 (Cl4H27N305) 235 (¾¾¾) 207 (C8HigN204) 189 (CgH^O,,) 129 (C6H13N20)

Ud fra resultatet af massespektrometrien bestemmes stoffets molekylvægt til at være 334, og molekylformlen bestemmes til at være ^14H30^4^5* Stoffets element analyse (hydrat iseret med 1 mol HgO) beregnet ud fra molekylformlen er C= 47,7190, H= 9,15%, og N= 15,89%.

(11) Baseret på de ovenstående fysisk-kemiske data antages strukturformlen af fortimicin KE at være som følger: 8 146893

CH2NH2 HaN OH

NH2 ho NHCH3 (12) Den frie base af fortimicin KB er let opløselig i vand, opløselig i methanol og tungt opløselig i ethanol og acetone, men er uopløselig i uorganiske opløsningsmidler, såsom chlo-forform, benzen, ethylacetat, butylacetat, diethylether, butanol, petroleumsether og n-hexan.

Rf-værdierne for fortimicin D og fortimicin KE ved papirchromato-grafi og tyndtlagschromatografi tinder anvendelse af forskellige udviklingsmidler er vist i de følgende tabeller 1-3· Til sammenligning er også anført Rf-værdierne for antibiotics, der minder om fortimicin D og KE.

Tabel 1

Rf-værdier af fortimicin D og fortimicin KE ved stigende papirchromatografi (ved 28°C) Udviklings periode _Udviklingsmiddel_Rf-værdi D_Rf-værdi KE (timer) 20% ammoniumchlorid 0,96 0,96 3 vandmættet n-butanol 0,00 0,00 15 n-butanol/eddikesyre/vand 0,06 0,06 15 (volumenforhold 3:1:1) vandmættet ethylacetat 0,00 0,00 4 vandmættet n-butanol 0,04 0,04 15 indeholdende 2% (vægt/vol) p-toluensulfonsyre og 2% (vægt/vol) piperidin

Tabel 2 9 145893

Rf-værdier ved silicagel-tyndtlagschromatografi (ved stuetemperatur, efter 3 timers udvikling)

Udviklingsmiddel3*·_Antibioticum_RF-værdi I Fortimicin D 0,74 " Fortimicin KE 0,78 " Fortimicin A 0,74 " Fortimicin B 0,80 " Fortimicin C 0,75 " Gentamicin-komplex 0,71 " Gentamicin Cla 0,71 " Sisomicin 0,71 II Fortimicin D 0,37 " Fortimicin KE 0,58 " Fortimicin A 0,37 " Fortimicin B 0,62 " Fortimicin C 0,40 " Gentamicin-komplex 0,06-0,16 M Gentamicin Cla 0,16 ” Sisomicin 0,18 x Udviklingsmiddel I: Det øvre lag af chloroform/methanol/17 vaegtpct.

ammoniakvand (volumenforhold 2:1:1) Udviklingsmiddel II: 10% ammoniumacetat/methanol (volumenforhold 1:1)

Tabel 3 10 US893 . Rf-værdierne for forskellige antibiotica ved stigende papir-chromatografi under anvendelse af det nedre lag af chloro-form/methanol/17 vægtpct. ammoniakvand (volumenforhold 2:1:1) som udviklingsmiddel ved stuetemperatur efter 12 timers udvikling

Antibioticum_Rf-værdi

Streptomycin A 0,02

Streptomycin B 0,00

Bluensomycin 0,01

Ribostamycin 0,00

Lividomycin A 0,00

Lividomycin B 0,03

Bygromycin B 0,02

Lividomycin D 0,02

Sp ectinomycin 0,45

Kasugamyc in 0,01

Butirosine A 0,00

Butirosine B 0,01

Gentamicin A 0,00

Gentamicin B 0,00

Gentamicin C-^ 0,18

Gentamicin C-^ 0,59

Gentamicin C£ 0,38

Sisomicin 0,18

Neomycin A 0,00

Neomycin B 0,03

Antibioticum nr. 460 0,01

Neomycin C 0,00

Kanamycin A 0,02

Kanamycin B 0,01

Kanamycin C 0,02

Paromomycin 0,00

Nebramycin-komplex 0,01

Tobramycin 0,02

Apramycin 0,02 11 145893

Antibioticum_Rf- værdi

Nebramycin-faktor 4 0,01

Nebramycin-faktor 5 0,00

Myomycin 0,00 XK-62-2x 1 0,49

Fortimicln B 0,65

Fortimicin A 0,37

Fortimicln C 0,18

Fortimicin D 0,18

Fortimicin KE 0,59 x et antibioticum angivet i USA patentskrift nr. 4 045 298.

Tabel 4 illustrerer de antibakterielle spektre af fortimicin D og fortimicin KE over for forskellige mikroorganismer.

Tabel 4 (Minimal inhiberende koncentration, /Ug/ml målt ved agarfortyndingsmetoden ved pH 8,0)

Fortimicin D Fortimicin KE

Mikroorganisme_ /ug/ml_ /Ug/ml

Bacillus subtilis nr. 10707 0,02 104,2 »lococcus aureus 0,02 1,65

538P

Klebsiella pneumoniae 0,08 26,1 ATCC 10031

Escherichia coli ATCC 26 0,32 26,1

Escherichia coli KY 8315 0,13 26,1

Escherichia coli KY 8327 0,13 26,1 (resistent over for kanamycin, gentamicin og tobramycin)

Pseudomonas aeruginosa BMH nr.l 5 208,3 12 US$93

Tabel 4 (fortsat)

Fortimicin D Fortimicin KE Mikroorganisme _ /ug/ml_/ug/ml

Pseudomonas aeruginosa 5 KY 8510 (resistent over for kanamycin, kanamycin B, tobramycin, gentamicin C^a og ribostamycin)

Shigella sonnei ATCC 9290 0,3 26,1

Salmonella typhosa ATCC 9992 0,08 13,1

Som det fremgår af det ovenstående, har fortimicin D en stærk antimikrobiel aktivitet over for et bredt område af Gram-positive og Gram-negative bakterier. Især er det karakteristisk, at anti-bioticumet er effektivt over for visse stammer af Escherichia coli, som er resistente over for kanamycin, gentamicin og tobramycin. Endvidere forventes fortimicin D at have en terapeutisk virkning på forskellige infektioner (hos mennesker og dyr) fremkaldt af de ovennævnte forskellige bakterier. I denne henseende er LD^q af fortimicin D sulfat for dd-mus, som vejede 20 - 1 g, bestemt til at være 159 mg/kg. Med sådanne antibakterielle egenskaber er fortimicin D anvendeligt til medicinske formål. Som det også fremgår af det ovenstående, udviser fortimicin KE et bredt antibakterielt spektrum. Endvidere udmærker fortimicin KE sig ved at være stabilt i alkalisk opløsning.

En sammenligning af fortimicin-faktorerne D og KE med kendte antibiotica belyser yderligere deres nyhed. Som vandopløselige basiske antibiotica, produceret af mikroorganismer tilhørende slægten Micromonospora og med brede antibakterielle spektre, kendes gentamicin-komplekset (M.J. Weinstein et al.: Antimicrobial Agenst and Chemotherapy,1963> 1; D.J. Cooper et al.: J.

Infect. Dis. 119, 342, 1969; og J.A. Waitz et al.: Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2, 464 1972), 13 145893 antibioticum nr. 460 (japansk fremlæggelsesskrift nr. 46-16153)» sisomicin (M. J. Weinstein et al.: J. Antibiotics, 2]5, 551, 555, 559, 1970), XK-62-2 (U.S.A. patentskrift nr. 4 045 298), forti-micin B, fortimicin A og fortimicin C. Som vist i den ovenstående tabel 3, udviser gentamicin A, B, Cg og komponenter Rf-værdier på henholdsvis 0,00, 0,00, 0,38 og 0,59 ved papir-chromatografi. På den anden side er Rf-værdien ved den samme papir-chromatografi af fortimicin D 0,18 og af fortimicin KE 0,59. Således er fortimicin D klart forskellig- fra gentamiciii-komponenterne, og fortimicin KE er forskellig fra allé undtagen gentamicin C^. Ved papir-chromatografien i tabel 3 viser fortimicin D den samme Rf-værdi (0,18) som gentamicin Cla (0,18), og derfor kan fortimicin D og gentamicin C-^a ikke skelnes fra hinanden i denne henseende. Ved silicagel-tyndtlagschromatografien i tabel 2 under anvendelse af udviklingsmidlet II skelnes fortimicin D (Rf-værdi: 0,37) imidlertid klart fra gentamicin C-^a(Rf-værdi: 0,16). På samme måde viser gentamicin C^, Cg og C^a i tabel 2 Rf-værdier på 0,06 - 0,16, medens fortimicin KE viser en Rf-værdi på 0,58. Ved sammenligning af fortimicin-faktorerne D og KE med antibioticum nr. 460, sisomicin, XK-62-6, fortimicin B, fortimicin A og fortimicin C i tabel 3 udviser antibioticum nr. 460, sisomicin, XK-62-2, fortimicin D, fortimicin A og fortimicin C Rf-værdier på henholdsvis 0,01, 0,18, 0,49, 0,65, 0,37 og 0,18. Rf-værdi en for fortimicin D er 0,18 og for fortimicin KEO,59. Fortimicin KE er således klart forskellig. Selv om Rf-værdien for fortimicin D er den samme (i tabel 3) som for sisomicin og fortimicin C, skelnes fortimicin C (Rf-værdi: 0,40) og sisomicin (Rf-værdi: 0,18) klart fra fortimicin D (Rf-værdi: 0,37) ved silicagel-tyndtlagschromatografien i tabel 2.

Desuden kan som vandopløselige basiske antibiotics, produceret af andre Actinomyceter end dem tilhørende slægten Micromonospora og med brede antibakterielle spektre, nævnes streptomycin A og B, ribostamycin, lividomycin A, B og D, spectinomycin, kasuga-micin, neomycin A, B og C, kanamycin A, B og C, nebramycin-komplex, nebramycin-faktorer 4 og 5 og paromomycin. Fortimicin-faktoreme D og KE har vist sig at være stærkt forskellige fra hvert af disse antibiotica med hensyn til fysisk-kemiske egenskaber. Endvidere er fortimicin-faktorerne D og KE, som det fremgår af tabel 3, helt forskellige fra disse antibiotica med hensyn 145893 14 til Rf-værdierne ved papir-chromatografien.

Ud fra det ovenstående antages fortimicin-faktorerne D og KE at være hidtil ukendte antibiotica.

Eksempler på foretrukne stammer til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er Micromonospora olivoasterospora MK-70 (FERM-P Nr. 1560) (ATCC 21819), Micromonospora olivoasterospora MK-80 {FERM-P Nr. 2192) (ATCC 31010) og Micromonospora olivoasterospora Mm 744 (FERM-P Nr. 2193) (ATCC 31009). Disse stammer er blevet déponeret i the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, U.S.A. og i the Fermentation Research Institute Agency of Industrial Science and Technology, Tokyo,

Japan og er blevet tildelt de ovenfor angivne accessionsnumre.

Disse stammers mikrobiologiske egenskaber er beskrevet i U.S.A. patentskrift nr. 3 931 400. Som det er tilfældet med andre stammer af Actinomyceter kan de ovennævnte mikroorganismer, som er anvendelige ved udførelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, muteres ved kunstige midler, såsom ultraviolet bestråling, røntgenbestråling og anvendelse af forskellige mutationsinducerende kemikalier på kendt måde til forhøjelse af produktionen af metaboliske produkter, og et eksempel på en sådan mutantstamme er Micromonospora olivoasterospora GS-26 (FERM-P Nr. 3567, NRRL 8178). Denne sidstnævnte mutantstamme er deponeret i the United States Department of Agriculture, Peoria, Illinois og er frit tilgængelig for offentligheden.-

Alment kan konventionelle metoder til dyrkning af Actinomyceter anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Således kan anvendes forskellige næringskilder i dyrkningsmediet. Passende carbonkilder inkluderer f.eks./glucose, stivelse, mannose, fructose, saccharose og melasse enten alene eller i kombination. Carbonhydrider, alkoholer, organiske syrer o.s.v. kan også anvendes, afhængigt af den anvendte mikroorganismes evne til at assimilere disse. Som uorganiske og organiske nitrogenkilder kan 15 145893 f.eks. anvendes ammoniumchlorid, ammoniumsulfat, urinstof, ammo-niumnitrat og natriumnitrat, enten alene eller i kombination, eller naturlige nitrogenkilder, såsom pepton, kødextrakt, gær-extrakt, tørgær, majsstøbevand, sojabønnepulver, "Casaminosyre" og opløseligt vegetabilsk protein. Om nødvendigt kan der tilsættes uorganiske salte, såsom natriumchlorid, kaliumchlorid, calciumcarbonat ogjphosphater, til mediet. Endvidere kan der tilsættes organiske og uorganiske materialer, som fremmer væksten af den bestemte stamme og produktionen af fortimicin-faktorer D og/eller KE.

En væskedyrkningsmetode, især en submers omrørt dyrkningsmetode, er mest egnet. Dyrkningstemperaturen er mest ønskeligt 25 - 40°C, og det foretrækkes at udføre dyrkningen ved omkring neutral pH. Sædvanligvis er der efter 2-15 dages væskedyrkning dannet forti-micin D og fortimicin KE i dyrkningsvæsken. Når udbyttet af antibioticaeme i dyrkning s væsken når et maximum, standses dyrkningen, og det ønskede produkt isoleres og renses fra dyrkningsvæsken, efter at mikroorganismecellerne er blevet fjernet, f.eks. ved filtrering.

Isolering og rensning af fortimicin D og fortimicin KE udføres ved metoder, som sædvanligvis anvendes til isolering og rensning af mikrobielle metaboliske produkter fra en dyrkningsvæske.

Eftersom de antibiotiske forbindelser fortimicin D og fortimicin KE er basiske stoffer og er let opløselige i vand, men tungt opløselige i de almindelige organiske opløsningsmidler, kan forbindelserne renses ved de metoder, der sædvanligvis anvendes til rensning af såkaldte vandopløselige basiske antibiotica. Nærmere bestemt kan D- og KE-faktorerne renses ved passende kombination af adsorption og desorption fra kationbytterharpiks, cellulosesø jlechromatograf i, adsorption og desorption under anvendelse af en søjle af "Sephadex'-'LH-20", silicagel-søjlecromatografi osv. Som eksempel er en egnet metode til rensning af fortimicin D fra dyrkningsvæsken, når der anvendes en stamme, som er i stand til at producere fortimicin-komplexet (en blanding indeholdende fortimicin A, B, C, D og KE og biprodukter med antimikrobiel 145893 16 aktivitet), som følger: Det cellefrie kulturfiltrat indstilles til pH 7,5 og sendes derpå igennem en kationbytterharpiks, såsom "Amber1ite ^ IRC-50" (ammonium form). Efter at harpiksen er vasket med vand, gennemføres eluering med 0,5N ammoniakvand. De aktive fraktioner kombineres og koncentreres under formindsket tryk. Koncentratet behandles derpå med en anionbytterharpiks, "Dowex ® 1x2" (OH form). De aktive fraktioner, som opnås ved elueringen, kombineres og koncentreres under formindsket tryk til opnåelse af et råt pulver af fortimicin-komplex. Det rå pulver opløses i vand, og opløsningen indstilles derpå til en pH-værdi på 5,0 med 2N svovlsyre og sendes derpå igennem"ien kolonne pakket med aktivkul for at adsorbere de aktive principper. Søjlen af aktivkul vaskes derpå med vand for at fjerne urenheder.

Derefter gennemføres eluering med 0,2N svovlsyre for at eluere de aktive principper. De aktive fraktioner kombineres, og efter neutralisering med en anionbytterharpiks, såsom "Dowex ® 44" (OH form) frysetørres blandingen til opnåelse af fri base af fortimicin-komplexet.

I tilfælde af at fortimi cin-konrpleks et indeholder fortimicin D, underkastes det ovenfor opnåede rå pulver af fortimicin-kompleks si-licagel-søjlechromatografi under anvendelse af et blandet opløsningsmiddel af isopropanol, chloroform og koncentreret ammoniakvand (volumenforhold 4:2:1:) som udviklingsmiddel. Det rå pulver suspenderes i opløsningsmidlet og indføres i kolonnen. Udviklingen gennemføres med det samme opløsningsmiddel ved en strømningshastighed på omkring 30 ml/time. Først elueres fortimicin B, og efter at flere sporkomponenter er elueret, elueres fortimicin A i store aktive fraktioner. Derpå fortsættes elueringen, og efter at fortimicin C er elueret, elueres fortimicin D i de næste store aktive fraktioner.. De aktive fraktioner indeholdende fortimicin D opsamles og koncentreres under formindsket tryk. Koncentratet frysetørres til opnåelse af et hvidt stof bestående af fri base af fortimicin D.

På denne måde kan en betydeligt renset prøve af fortimicin D opnås ved silicagel-søjlechromatografi. Imidlertid er der somme tider nogle urenheder til stede i prøven. I dette tilfælde underkastes prøven yderligere cellulose-søjlechromatografi. Som udviklingsmiddel anvendes et blandet opløsningsmiddel af n-butanol, pyridin, 145893 17 eddikesyre og vand (volumenforhold 6:4:2:4). De ved elueringen opnåede aktive fraktioner kombineres og koncentreres under formindsket tryk til opnåelse af et renset præparat af fortimicin D. Til fjernelse af urenheder, der udviser positiv reaktion med nihhydrin, er søjle chromato grafi under anvendelse af carboxymethylcellulose også effektiv. Nærmere betegnet sattes i dette tilfælde en opløsning af det rå pulver igennem en kolonne pakket med carboxymethylcellulose (ammoniumform ). De aktive principper adsorberes på carboxymethylcellulose. Derpå vaskes søjlen grundigt med vand til-eluering af de fleste pigmenter og uorganiske salte. Derefter elueres de aktive principper med 0,2N ammoniumhydrogencarbonatopløsning. Fraktioner indeholdende fortimicin D kombineres og frysetørres.til opnåelse af renset fortimicin D.

Under de ovenfor beskrevne rensningsprocedurer kontrolleres fraktionerne ved silicagel-tyndtlagschromatografi. Som udviklingsmiddel anvendes et blandet opløsningsmiddel af isopropanol, chloro·— form og koncentreret ammoniakvand (volumenforhold 2:1:1),og udviklingen gennemføres ved stuetemperatur i to timer. Fortimicin D viser en Rf-værdi på omkring 0,43 på silicagel-tyndtlagschromato-grammet.

I tilfælde af at fortimicin-komplekset indeholder fortimicin KE og fortimicin D opløses det ved frysetørringen opnåede rå pulver i vand. Efter at være indstillet til pH 7,5 med 2N svovlsyre, sendes opløsningen gennem en kolonne pakket med en katioribytterharpiks, "Amberlite -50" type I (ammonium form), til adsorption af fortimicin-komplekset på denne. Søjlen vaskes derpå med vand. Derefter gennemføres eluering med 0,2N ammoniakvand. Efter at flere sporkomponenter er elueret, elueres en blanding af fortimicin B og fortimicin KE i store aktive fraktioner. Derpå fortsættes elueringen, og efter eluering af flere sporkomponenter elueres fortimicin A og fortimicin D. Aktive fraktioner indeholdende fortimicin KE og for-ticin B kombineres og tørres til opnåelse af et pulver af baser af fortimicin KE og fortimicin B. Derefter underkastes pulveret si-licagel-søjlechromatografi under anvendelse af et blandet opløsningsmiddel af isopropanol, chloroform og koncentreret ammoniakvand (volumenforhold 4:2:1) som udviklingsmiddel. Det ovennævnte 145893 18 pulver suspenderes i det blandede opløsningsmiddel, og suspensionen indføres i en kolonne pakket med silicagel. Udviklingen gennemføres med det samme opløsningsmiddel ved en strømningshastighed på omkring 30 ml/time. De først eluerede aktive fraktioner er fortimi-cin B. Derefter elueres fortimicin KE. Fraktionerae indeholdende fortimicin KE kombineres og koncentreres rader formindsket tryk. Koncentratet opløses i en lille mængde vand og frysetørres til opnåelse af den frie base af fortimicin KE. På denne måde kan en betydeligt renset prøve af fortimicin KE opnås ved silicagel-søjle-chromatografi. Imidlertid er der somme tider nogle urenheder til stede i prøven. Om ønsket kan der til opnåelse af fortimicin D ud fra de aktive fraktioner indeholdende fortimicin D og fortimicin A anvendes den ovennævnte lignende procedure rader anvendelse af sili cagel-chromatografi.

Under de ovenfor beskrevne rensningsprocedurer kontrolleres fraktionerne ved silicagel-tyndtlagschromatografi. Som udviklingsmiddel anvendes et blandet opløsningsmiddel af isopropanol, chloroform og koncentreret ammoniakvand (volumenforhold 2:1:1), og udviklingen gennemføres ved stuetemperatur i to timer. Fortimicin KE viser en Rf-værdi på omkring 0,58 på silicagel-chromatogrammet.

Fortimicin KE kan også opnås ved opvarmning af fortimicin D i en alkalisk vandig opløsning, såsom natriumhydroxid og bariumhydroxid. Specielt opvarmes fortimicin D i en mættet vandig opløsning af bariumhydroxid ved en temperatur på 100°C i tre timer. Derpå neutraliseres reaktionsopløsningen med tør is, og det resulterende bundfald af bariumcarbonat fjernes ved filtrering. Filtratet koncentreres og sendes igennem en kolonne pakket med "Amberlite -50" (ammoniumform). Efter vaskning af søjlen med vand gennemføres elu-ering med 0,2N ammoniakvand. Først elueres en lille mængde reaktionsbiprodukter, og derpå elueres fortimicin KE. Fraktionerne indeholdende fortimicin KE kombineres og koncentreres rader formindsket tryk. Koncentratet frysetørres derpå til opnåelse af den frie base af fortimicin KE.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved de følgende repræsentative eksempler på bestemte udførelsesformer af fremgangsmåden .

EKSEMPEL 1 19 145893 A. Dyrkning af CS-26 stammen.

Som podestamme anvendes Micromonospora. olivoasterospora CS-26 (NR-RL. 8178) (FERM-P No. 3567). Podestammen er en mutantstamme, afledt fra Micromonospora. olivoasterospora MK-70 (ATCC 21819) (FERM-P No.

1560) ved hjælp af behandling med nitrosoguanidin, ultraviolet bestråling og Y-bestråling. Et medium indeholdende 2 g/dl glucose, 0,5 g/dl pepton, 0,5 g/dl gærekstrakt og 0,1 g/dl calciumcarbonat (pH

7,5 før sterilisering) anvendes som et første podemedium. Et øje af podestammen indpodes i 10 ml portioner af det første podemedium i 50 ml store reagensglas og dyrkes ved 30°C i fem dage. Derpå indpodes 10 ml af den således fremstillede første podekultur i 30 ml portioner af et andet podemedium i 250 ml Erlenmeyerkolber. Det andet podemedium har den samme sammensætning som det første pode-medium. Den anden podedyrkning udføres ved rystning ved 30 °C i to dage, og derefter indpodes 30 ml af den anden podekultur i 300 ml portioner af et tredie podemedium i 2 1 Erlenmeyerkolber forsynet med skovle. Det tredie podemedium er af samme sammensætning som det første podemedium. Den tredie podedyrkning gennemføres ved rystning ved 30°C i to dage. Derpå indpodes 1,5 1 af den tredie podekultur (svarende til 5 kolber) i 15 1 af et fjerde podemedium i en 30 1 krukkefermentor af rustfrit stål« Det fjerde podemedium har den samme sammensætning som det første podemedium. Den fjerde podedyrkning i krukkef ermentor en gennemføres med luftning og omrøring (15 1/min; 350 omdr./min.) ved 37°C i to dage. Derpå indpodes 15 1 af det fjerde podemedium i 150 1 af et færingsmedium i en 300 1 fermentor. Gæringsmediet har den følgende sammensætning:

Opløselig stivelse 4 g/dl K^HPO^ 0,05 g/dl CaCO^ 0,1 g/dl

Sojabønnemel 2 g/dl MgSO^'THgO 0,05 g/dl

Majsstøbevand 1 g/dl KC1 0,03 g/dl (pH 7,5 før sterilisering) Gæringen i fermentoren gennemføres med luftning og omrøring (80 1/ min: 150 omdr./min.) ved 27°C i fire dage.

20 1Λ5Β93 B. Isolering af råt fortimicin-kompleks.

Efter fuldførelsen af gæringen indstilles dyrkningsvæsken til· pH 2,5 med koncentreret svovlsyre og omrores i 30 min. Derefter tilsættes omkring 7 kg af et filterhjælpemiddel, "Radiolite No'. .600" '(pro- · dukt fra Showa Kagaku Kogyo Co., Ltd.), til dyrkningsmediet, og mikroorganismeceller fjernes ved filtrering. Filtratet indstilles til pH 7,5 ved tilsætning af 6N natriumhydroxidopløsning og sendes derpå igennem en kolonne pakket med omkring 20 1 af en katioribyt-terharpiks, "Amberlite <%RC -50” (ammoniumf orm). De aktive principper adsorberes på harpiksen, og gennemløbet smides væk. Efter at harpiksen er vasket med vand, gennemføres eluering af de aktive principper med 0,5N ammoniakvand. Eluatet underkastes bestemmelse af aktivitet ved en papirskivemetode under anvendelse af en agarplade af Bacillus subtilis Nr. 10707. Fraktioner, som viser aktivitet, kombineres og koncentreres under formindsket tryk til omkring 1 liter. Koncentratet sendes derpå igennem en kolonne pakket med 500 ml af en anionbytterharpiks, "Dowej^ 1 x 2" (OH form), og derpå sendes omkring 2 liter vand gennem søjlen. På denne måde fjernes urenheder, og de aktive principper elueres med vand. De aktive fraktioner kombineres og koncentreres under formindsket tryk til omkring 100 ml. Koncentratet sendes igennem en kolonne pakket med omkring 50 ml aktivkulpulver, hvorved de aktive principper adsorberes. Søjlen vaskes med vand, og gennemløbet og vaskevandet smides væk. Der gennemføres eluering med 0,2N svovlsyre. Eluatet underkastes bestemmelse af aktivitet ved en papirskivemetode under anvendelse af Bacillus subtilis nr. 10707. De aktive fraktioner kombineres og sendes igennem en søjle af en harpiks, "Dowe^ 44" (OH form), og eluering af det aktive princip gennemføres med vand.

De aktive fraktioner kombineres og koncentreres til omkring 50 ml. Koncentratet frysetørres til opnåelse af et råt pulver af forti-micin-kompléks. Udbyttet af det rå pulver omkring 35 g, og aktiviteten er 580 enh./mg (aktiviteten af 1 mg af det rene præparat svarer til 1 000 enheder).

21 145893

C. Isolering og rensning af fortimicin D

Omkring 500 ml silicagel suspenderes i et opløsningsmiddel bestående af isopropanol, chloroform og koncentreret ammoniakvand (volumenforhold 4:2:1) og pakkes i en glaskolonne som et tæt ensartet lag. Derefter vaskes søjlen grundigt med det samme opløsningsmiddel. Derpå fyldes 10 g af det i det ovenstående trin B opnåede rå pulver over silicagelen i et ensartet tyndt lag. Efter påfyldning af det rå pulver hældes det samme opløsningsmiddel gradvist ind i søjlen fra toppen, og derefter gennemføres eluering kontinuert med en strømningshastighed på omkring 50 ml/time. Eluatet udvindes i 20 ml fraktioner, og hver af fraktionerne underkastes bestemmelse af aktivitet ved papir-skivemetoden under anvendelse af Bacillus subtilis nr. 10707.

Først elueres fortimicin B efterfulgt af fortimicin A. Derpå fortsættes elueringen, og efter at fortimicin C er elueret, elueres fortimicin D. De aktive fraktioner underkastes tyndt-lagschromatografi, og fraktionerne indeholdende fortimicin D kombineres og koncentreres under formindsket tryk til tilstrækkelig fjernelse af opløsningsmidlet. Remanensen opløses i en lille mængde vand, og opløsningen frysetørres til opnåelse af omkring 1,5 g renset præparat af den frie base af fortimicin D. Produktet udviser en aktivitet på omkring 980 enh./mg.

D. Isolering og rensning af fortimicin KE

Til opnåelse af fortimicin KE opløses 20 g af det i det ovenstående trin B opnåede rå pulver i 30 ml vand. Opløsningen indstilles til pH 7,5 med koncentreret svovlsyre og sendes igennem en. kolonne pakket med 1 liter kationbytterharpiks, "Amberlite ® CG-50" (ammoniumform). Gennemløbet smides væk. Det aktive stof adsorberes på harpiksen. Efter vaskning af harpiksen med vand . gennemføres eluering med 0,2N ammoniakvand. Eluatet udvindes i 50 ml fraktioner, og hver af fraktionerne underkastes bestemmelse af aktivitet ved papirskivemetoden og tyndtlagschromatografi.

Først elueres flere sporkomponenter. Derefter elueres fraktioner indeholdende fortimicin KE og fortimicin B. Fraktionerne kombineres og koncentreres til 20 ml. Koncentratet frysetørres til opnåelse af 8 g af et råt pulver.

22 145893

Omkring 500 ml silicagel, suspenderet i et opløsningsmiddel bestående af isopropanol, chloroform og koncentreret ammoniakvand (volumenforhold 4:2:1), pakkes i en glaskolonne som et tæt ensartet lag. Derefter vaskes søjlen grundigt med det samme opløsningsmiddel. Derpå fyldes det ovenfor opnåede rå pulver over silicagelen i et ensartet tyndt iag, og det samme opløsningsmiddel hældes gradvist ind i kolonnen fra oven, og derefter gennemføres elueringen kontinuert med en strømningshastighed på omkring 50 ml/time. Eluatet udvindes i 20 ml fraktioner, og hver af fraktionerne underkastes bestemmelse af aktivitet ved papirskivemetoden under anvendelse af Bacillus subtilis nr. 10707. Først elueres fortimicin B efterfulgt af for-timicin KE. De aktive fraktioner underkastes tyndtlagschromato-grafi, og fraktionerne indeholdende fortimicin KE kombineres og koncentreres under formindsket tryk til fjernelse af opløsningsmidlet. Remanensen opløses i en lille mængde vand, og opløsningen frysetørres til opnåelse af omkring 2g renset præparat af den frie base af fortimicin KE. Produktet udviser en aktivitet på omkring 970 enh./mg.

EKSEMPEL 2 I dette eksempel anvendes den stamme, som anvendtes i det ovenstående eksempel 1, som podestamme, og de i eksempel 1 anvendte podemedier (første til fjerde podemedium) anvendes også som podemedier. Det anvendte gæringsmedium har den følgende sammensætning:

Opløselig stivelse 4 g/dl "Ebios" (tørgær-pulver) 5 g/dl K2HP04 0,05 g/dl

MgS04.7H20 0,05 g/dl KC1 0,03 g/dl

CaC03 0,1 g/dl Gæringen gennemføres under de samme betingelser som beskrevet i trin A af eksempel 1, og der isoleres et råt pulver af fortimi-cin-kompleks på samme måde som beskrevet i trin B af eksempel 1.

Der opnås omkring 71 g af det rå pulver af fortimicin-kompleks, 23 145893 som udviser en aktivitet på omkring 670 enh./mg. Derpå under- ' kastes 50 g af det rå pulver rensning ifølge den metode, der er beskrevet i trin C af eksempel 1. Der opnås omkring 15 g fortimicin D, som udviser en aktivitet på omkring 840 enh./mg.

Til yderligere rensning underkastes præparatet cellulosesøjle-.-chromatografi. Omkring 500 ml af et cellulosepulver ("AVICEL", et produkt fra Funakoshi Seiyaku, K.K.) suspenderes i et blandet opløsningsmiddel af n-butanol, eddikesyre, pyridin og vand (volumenforhold 6:2:4:4) og pakkes i en glaskolonne til dannelse af et tæt ensartet lag. Søjlen vaskes derpå grundigt med det samme opløsningsmiddel. Præparatet fyldes over cellulosepulveret til dannelse af et ensartet tyndt lag. Efter at præparatet er fyldt på, hældes det samme opløsningsmiddel gradvist ind i søjlen fra oven, og derefter gennemføres elueringen kontinuert ved en strømningshastighed på omkring 1 ml/min. Eluatet udvindes i 10 ml fraktioner, og hver af fraktionerne tinderkastes bestemmelse af aktivitet ved hjælp af papirskivemetoden under anvendelse af Bacillus subtilis nr. 10707. De aktive fraktioner kombineres og koncentreres under formindsket tryk for at fjerne opløsningsmidlet tilstrækkeligt. Remanensen opløses i en lille mængde vand og frysetørres. På denne måde opnås omkring 8 g af et renset præparat af den frie base af fortimicin D,. som udviser en aktivitet på 970 enh./mg.

EKSEMPEL 5 I dette eksempel gentages proceduren fra eksempel 2 til opnåelse af omkring 68 g af et råt pulver af fortimicin-kompleks.

Derpå underkastes 40 g af det rå pulver rensning ifølge den metode, som er beskrevet i trin D af eksempel 1. Der opnås 7 g fortimicn KE, som udviser en aktivitet på omkring 860 enh./mg.

Til yderligere rensning underkastes præparatet cellulosesøjle-chromatografi. Omkring 300 ml af et cellulosepulver ("AVICEL", et produkt fra Funakoshi Seiyaku K.K.) suspenderes i et opløsningsmiddel bestående af n-butanol, eddikesyre, pyridin og vand (volumenforhold 6:2:4:4) og pakkes i en glaskolonne til dannelse af et tæt ensartet lag. Søjlen vaskes derpå med det samme opløsningsmiddel. Præparatet fyldes oven på cellulosepulveret til 24 145893 dannelse af et ensartet tyndt lag. Efter at præparatet er påfyldt, hældes det samme opløsningsmiddel gradvist ind i søjlen fra oven, og herefter gennemføres eluering kontinuert med en strømningshastighed på omkring 1 ml/min. Eluatet udvindes i 7 ml fraktioner, og hver af fraktionerne underkastes bestemmelse af aktivitet ved papir ski vemetoden under anvendelse af Bacillus subtilis nr. 10707. De aktive fraktioner kombineres og koncentreres under formindsket tryk til fjernelse af opløsningsmidlet. Remanensen opløses i en lille mængde vand og frysetørres. På denne måde opnås omkring 5 g af et renset præparat af den frie base af fortimicin KE, som udviser en aktivitet på 980 enh./mg.

EKSEMPEL 4 I dette eksempel anvendes den i det ovenstående eksempel 1 anvendte stamme som podestammen, og de i eksempel 1 anvendte pode-medier (første til fjerde podemedium) anvendes også som podemedier. Imidlertid anvendes et gæringsmedium med den følgende sammensætning:

Opløselig stivelse 4 g/dl "Casaminosyre" (et syrehydrolysat 3 g/dl af casein, produkt fra Difco Laboratories, U.S.A.) K2HP04 0,05 g/dl

MgS04.7H20 0,05 g/dl KC1 0,03 g/dl

CaC03 0,1 g/dl Gæringen gennemføres under de samme betingelser som beskrevet i trin A af eksempel 1, og fortimicin D isoleres og renses på samme måde som beskrevet i trin B og C af eksempel 1. Der opnås omkring 15 g renset præparat af fortimicin D, som udviser en aktivitet på omkring 975 enh./mg.

EKSEMPEL 5 I dette eksempel gentages proceduren fra eksempel 4, undtagen at fortimicin KE isoleres og renses på samme måde som beskrevet i trin B og D af eksempel 1. Der opnås omkring 7 g renset præparat af fortimicin KE, som udviser en aktivitet på omkring 985 enh./mg.

25 145893 EKSEMPEL 6 I dette eksempel anvendes Mieromonospora olivoasterospora MK-70 (ATCC 21819), Mieromonospora olivoasterospora MK-80 (ATCC 31010) og Micromonospora olivoasterospora Mm 744 (ATCC 31009) som podestammerne. Podemedierne (første til fjerde podemedium) og gæringsmediet er de samme som i eksempel 1. Gæringen gennemføres under de samme betingelser som beskrevet i trin A af eksempel 1, og fortimicin D isoleres og renses på samme måde som beskrevet i trin B og C af eksempel 1. På lignende måde isoleres og renses fortimicin KE på samme måde som beskrevet i trin B og D af eksempel 1. Udbytterne og aktiviteterne af de rensede præparater af fortimicin D og fortimicin KE er anført i tabel 5.

TABEL 5 Fortimicin D

Udbytte Aktivitet

Stamme (mg) (enh„7mg)

Micromonospora olivoasterospora MK-70 450 985

Micromonospora olivoasterospora MK-80 980 975

Micromonospora olivoasterospora Mm 744 620 990

Fortimicin KE

Udbytte Aktivitet

Stamme (mg) (enh./mg)

Micromonospora olivoasterospora MK-70 300 985

Micromonospora olivoasterospora MK-80 820 980

Micromonospora olivoasterospora Mm 744 650 990 EKSEMPEL 7 I dette eksempel opløses 10 g af den frie base af fortimicin D i 500 ml af en mættet vandig opløsning af bariumhydroxid. Opløsningen opvarmes til en temperatur på 100°C i 3 timer og får derpå lov at stå, indtil den er afkølet til stuetemperatur. Opløsningen neutraliseres med tør is til udfældning af barium-carbonatet. Bundfaldet fjernes ved filtrering og vaskes med en lille mængde vand. Filtratet og vaskeopløsningerne kombineres og koncentreres til omkring 20 ml. Koncentratet sendes igennem 26 14589 3 en kolonne pakket med 500 ml af en kationbytterharpiks, "Amber-lite ® CG-50" (ammoniumform). Efter at harpiksen er vasket med vand, gennemføres eluering med 0,2N ammoniakvand. Eluatet udvindes i 20 ml fraktioner, og hver af fraktionerne underkastes bestemmelse af aktivitet ved papirskivemetoden. Først elueres en lille mængde reaktionsbiprodukter. Derefter elueres fortimicin KE. Aktive fraktioner underkastes tyndtlagschroma-tografi, og fraktionerne indeholdende fortimicin KE kombineres og koncentreres under formindsket tryk til 20 ml. Koncentratet frysetørres, hvorved der opnås 7,8 g renset præparat af den frie base af fortimicin KE, hvis aktivitet er omkring 970 enh./mg.

EKSEMPEL 8

I dette eksempel opløses 1 g af den frie base af fortimicin D

i 5 ml vand. Til opløsningen sættes 1,7 ml 6N svovlsyre. Derpå sættes 100 ml methanol til blandingen til dannelse af et hvidt bundfald. Bundfaldet udvindes ved filtrering og vaskes med methanol. Efter tørring af bundfaldet under formindsket tryk opnås 1,2 g af sulfatet af fortimicin D, som udviser en aktivitet på omkring 650 enh./mg.

EKSEMPEL 9

I dette eksempel opløses 1 g af den frie base af fortimicin KE

i 5 ml vand. Til opløsningen sættes 2,0 ml 6N svovlsyre. Derpå sættes 100 ml methanol til blandingen til dannelse af et hvidt bundfald. Bundfaldet udvindes ved filtrering og vaskes med methanol. Efter tørring af bundfaldet under formindsket tryk opnås 1,3 g af sulfatet af fortimicin KE, som udviser en aktivitet på omkring 610 enh./mg.

DK478077A 1976-10-28 1977-10-27 Fortimiciner til anvendelse som desinfektionsmidler og fremgangsmaade til fremstilling af disse fortimiciner, kaldet fortimicin ke og d DK145893C (da)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number	Priority Date	Filing Date	Title
JP51128837A JPS5834119B2 (ja)	1976-10-28	1976-10-28	新抗生物質ホ−テイマイシンｄおよびその製造法
JP12883776		1976-10-28
JP233877A JPS5390241A (en)	1977-01-14	1977-01-14	Novel antibiotics fortemycin
JP233877		1977-01-14

Publications (3)

Publication Number	Publication Date
DK478077A DK478077A (da)	1978-04-29
DK145893B true DK145893B (da)	1983-04-05
DK145893C DK145893C (da)	1983-10-31

Family

ID=26335697

Family Applications (1)

Application Number	Title	Priority Date	Filing Date
DK478077A DK145893C (da)	1976-10-28	1977-10-27	Fortimiciner til anvendelse som desinfektionsmidler og fremgangsmaade til fremstilling af disse fortimiciner, kaldet fortimicin ke og d

Country Status (13)

Country	Link
US (2)	US4145253A (da)
AR (1)	AR219305A1 (da)
AU (1)	AU516309B2 (da)
CA (1)	CA1108074A (da)
DE (1)	DE2748530C3 (da)
DK (1)	DK145893C (da)
ES (1)	ES463697A1 (da)
FR (1)	FR2369294A1 (da)
GB (1)	GB1572530A (da)
GR (1)	GR66054B (da)
NO (1)	NO149040C (da)
NZ (1)	NZ185515A (da)
PH (1)	PH14319A (da)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number	Priority date	Publication date	Assignee	Title
JPS6030320B2 (ja) *	1978-01-13	1985-07-16	山之内製薬株式会社	新規抗生物質およびその製造法
US4312858A (en) *	1978-07-13	1982-01-26	Kowa Company, Ltd.	Antibiotic KA-7038 and compositions containing same
DE3012014C2 (de) *	1979-05-01	1986-11-13	Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai, Tokio/Tokyo	Istamycine, Verfahren zu deren Herstellung sowie Verwendung derselben als antibakterielle Mittel
US4380581A (en) *	1979-05-01	1983-04-19	Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai	Istamycins and streptomyces culture for the production thereof
US4382926A (en) *	1980-04-01	1983-05-10	Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai	Formimidoyl A and B useful as semi-synthetic aminoglycosidic antibiotics
US4338309A (en) *	1980-11-10	1982-07-06	Abbott Laboratories	4',5'-Dihydro-antibiotic AX-127B-1; 2'-N-des-β-lysyl-4',5'-dihydro-antibiotic AX-127B-1; and 4-N-derivatives thereof
US5508315A (en) *	1992-10-15	1996-04-16	Ecomat, Inc.	Cured unsaturated polyester-polyurethane hybrid highly filled resin foams
US5604266A (en) *	1992-10-15	1997-02-18	Ecomat, Inc.	Cured unsaturated polyest-polyurethane highly filled resin materials and process for preparing them

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number	Priority date	Publication date	Assignee	Title
US3976748A (en) *	1972-10-09	1976-08-24	Alkem Gmbh	Process for the production of 238 Pu 16 O2
US3931400A (en) *	1973-04-17	1976-01-06	Abbott Laboratories	Fortimicin B and process for production thereof
US3878193A (en) *	1973-06-26	1975-04-15	Schering Corp	Process for the preparation of garamine derivatives
US3963695A (en) *	1974-12-19	1976-06-15	Smithkline Corporation	Tetradeoxyneamine and derivatives thereof
US4091032A (en) *	1976-09-23	1978-05-23	Abbott Laboratories	4-N-acylfortimicin B derivatives and the chemical conversion of fortimicin B to fortimicin A
US4124756A (en) *	1976-12-27	1978-11-07	Abbott Laboratories	3-DE-O-Methylfortimicins

1977
- 1977-10-25 GR GR54643A patent/GR66054B/el unknown
- 1977-10-25 NZ NZ185515A patent/NZ185515A/xx unknown
- 1977-10-27 PH PH20370A patent/PH14319A/en unknown
- 1977-10-27 CA CA289,631A patent/CA1108074A/en not_active Expired
- 1977-10-27 GB GB44833/77A patent/GB1572530A/en not_active Expired
- 1977-10-27 US US05/845,970 patent/US4145253A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-10-27 NO NO773674A patent/NO149040C/no unknown
- 1977-10-27 DK DK478077A patent/DK145893C/da active
- 1977-10-27 FR FR7732525A patent/FR2369294A1/fr active Granted
- 1977-10-28 ES ES463697A patent/ES463697A1/es not_active Expired
- 1977-10-28 AU AU30158/77A patent/AU516309B2/en not_active Expired
- 1977-10-28 DE DE2748530A patent/DE2748530C3/de not_active Expired
- 1977-10-28 AR AR269767A patent/AR219305A1/es active
1978
- 1978-12-29 US US05/974,434 patent/US4216308A/en not_active Expired - Lifetime

Also Published As

Publication number	Publication date
DE2748530A1 (de)	1978-05-18
AU516309B2 (en)	1981-05-28
NO149040C (no)	1984-02-01
FR2369294B1 (da)	1980-04-11
FR2369294A1 (fr)	1978-05-26
PH14319A (en)	1981-05-27
GB1572530A (en)	1980-07-30
NZ185515A (en)	1980-08-26
NO149040B (no)	1983-10-24
CA1108074A (en)	1981-09-01
US4145253A (en)	1979-03-20
NO773674L (no)	1978-05-02
DK145893C (da)	1983-10-31
DE2748530B2 (de)	1980-02-07
GR66054B (da)	1981-01-14
AR219305A1 (es)	1980-08-15
DE2748530C3 (de)	1980-10-09
DK478077A (da)	1978-04-29
AU3015877A (en)	1979-05-03
US4216308A (en)	1980-08-05
ES463697A1 (es)	1979-07-16

Publication	Publication Date	Title
US3976768A (en)	1976-08-24	Fortimicin A
US3931400A (en)	1976-01-06	Fortimicin B and process for production thereof
Okuhara et al.	1980	Studies on new phosphonic acid antibiotics. I. FR-900098, isolation and characterization.
DK145893B (da)	1983-04-05	Fortimiciner til anvendelse som desinfektionsmidler og fremgangsmaade til fremstilling af disse fortimiciner kaldet fortimicin ke og d
US4515942A (en)	1985-05-07	Antibiotics KA-6606 XII, XIII, XV, XVI and XVII
US4296106A (en)	1981-10-20	Istamycins and production thereof
US4048015A (en)	1977-09-13	Fortimicin C and process for production thereof
US4279997A (en)	1981-07-21	Process for production of aminoglycoside antibiotics
KAWAGUCHI et al.	1974	AMINOGLYCOSIDE ANTIBIOTICS. V THE 4'-DEOXYBUTIROSINS (BU-1975C 1 AND C 2), NEW AMINOGLYCOSIDE ANTIBIOTICS OF BACTERIAL ORIGIN
US4209612A (en)	1980-06-24	Fortimicin factors KF and KG and process for production thereof
US3939043A (en)	1976-02-17	Antibiotics designated XK-88 series and process for production thereof
US4097428A (en)	1978-06-27	Fortimicin C and process for production thereof
US4045610A (en)	1977-08-30	Antibiotics designated xk-88 series
DE2346243A1 (de)	1974-03-21	Antibiotischer komplex und komponenten davon
US4241182A (en)	1980-12-23	Fortimicin factors KG1, KG2 and KG3 and processes for production thereof
US4298690A (en)	1981-11-03	Antibiotics XK-62-3 and XK-62-4 and process for production thereof
KR790001476B1 (ko)	1979-10-23	포티마이신 c의 제조방법
NARA	1977	Aminoglycoside antibiotics
JP3192723B2 (ja)	2001-07-30	新規マクロライド抗生物質ｓｆ２７４８ｂ物質、ｓｆ２７４８ｃ１物質、ｓｆ２７４８ｄ物質およびｓｆ２７４８ｅ物質ならびにその製造法
JPS5834119B2 (ja)	1983-07-25	新抗生物質ホ−テイマイシンｄおよびその製造法
Wu et al.	1983	STUDIES ON THE STREPTOMYCES SC4
US3657418A (en)	1972-04-18	Antibiotic histidomycin
JPS5914039B2 (ja)	1984-04-02	ホ−テイマイシンｋｏおよびその製造法
OKUHARA et al.	1980	Studies on new phosphonic acid antibiotics studies on new phosphonic acid antibiotics
JPS6045640B2 (ja)	1985-10-11	ホ−テイマイシンｋｏ↓１およびその製造法