DK147912B - Fremgangsmaade til fremstilling af 1alfa-hydroxylerede vitamin d-forbindelser - Google Patents

Fremgangsmaade til fremstilling af 1alfa-hydroxylerede vitamin d-forbindelser Download PDF

Info

Publication number
DK147912B
DK147912B DK365079AA DK365079A DK147912B DK 147912 B DK147912 B DK 147912B DK 365079A A DK365079A A DK 365079AA DK 365079 A DK365079 A DK 365079A DK 147912 B DK147912 B DK 147912B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
vitamin
cyclovitamin
ether
acyl
compounds
Prior art date
Application number
DK365079AA
Other languages
English (en)
Other versions
DK365079A (da
DK147912C (da
Inventor
Hector F De Luca
Heinrich K Schnoes
David E Hamer
Herbert E Paaren
Original Assignee
Wisconsin Alumni Res Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wisconsin Alumni Res Found filed Critical Wisconsin Alumni Res Found
Publication of DK365079A publication Critical patent/DK365079A/da
Priority to DK436182A priority Critical patent/DK170437B1/da
Priority to DK374083A priority patent/DK169871B1/da
Publication of DK147912B publication Critical patent/DK147912B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK147912C publication Critical patent/DK147912C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C401/00—Irradiation products of cholesterol or its derivatives; Vitamin D derivatives, 9,10-seco cyclopenta[a]phenanthrene or analogues obtained by chemical preparation without irradiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A61P3/14—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis for calcium homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/18—All rings being cycloaliphatic the ring system containing six carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/24—All rings being cycloaliphatic the ring system containing nine carbon atoms, e.g. perhydroindane

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)

Description

i 147912
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af la-hydroxylerede vitamin D forbindelser gennem et cyclo-vitamin-D-syntesemellempro-dukt.
5 Det er velkendt, at D-vitaminerne udviser visse biologiske virkninger såsom stimulering af calcium-absorptionen i mave-tarmkanalen, stimulering af resorptionen af uorganiske bestanddele af knogler samt forebyggelse af rakitis. Det er ligeledes velkendt, at sådan biologisk virk-10 ning er afhængig af, at disse vitaminer ændres in vivo, d.v.s. metaboliseres til hydroxylerede derivater. Fornyligt fremført nyt materiale indikerer f.eks., at lcO , 25-dihydroxyvitamin-D^ er den in vivo aktive form for vitamin-D^, og at det er den forbindelse, der er ansvar-15 lig for de ovennævnte biologiske virkninger.
De syntetiske la-hydroxyvitamin-D-analoge såsom la-hydro-xyvitamin-D^ og la-hydroxyvitamin-D^ udviser ligeledes kraftig biologisk effekt, og sådanne forbindelser såvel som de naturlige metabolitter har vist sig meget lovende 20 som midler til behandling af et antal forskellige sygdomstilstande i forbindelse med calcium-metabolisme og knogler, såsom osteodystrofi, osteomalaci og osteoporose.
Eftersom la-hydroxylering er et essentielt element i bibringelsen af biologisk virkning til D-vitaminforbindel-25 seme og disses derivater, har der været stadig stigende interesse for fremgangsmåder til kemisk gennemførelse af sådan hydroxylering. Med undtagelse af en foreslået frem- 147912 2 gangsmåde til total syntese af la-hydroxyvitamin-D^ (Lyth-goe et al., J.Chem. Soc., Perkin Trans I, p. 2654 (1974)) har samtlige synteser af la-hydroxyleret vitamin-D-forbin-delser forud for den foreliggende opfindelse omfattet fremstillingen af et la-hydroxyleret steroid, fra hvilket 5 den ønskede D-vitaminforbindelse opnås ved velkendte fotokemiske omsætninger efter omdannelsen til det tilsvarende la-hydroxy-5 > 7-dien-sterolderivat. De tilgængelige synteser er således flertrins-fremgangsmåder, og de er i de fleste tilfælde lidet effektive samt arbejdskrævende.
10
Eksempler på andre synteser, der indbefatter la-hydroxy-lering af forbindelser beslægtet med vitamin D, kan findes i: Fremgangsmåde til fremstilling af steroid-derivater, Ishikawa et al., USA patentskrift nr. 3 929 770 15 udstedt 30. december 1957; fremgangsmåde til fremstilling af la, 25-dihydroxycholecalciferol, Matsunaga et al., USA patentskrift nr. 4 022 768 udstedt 10. maj 1977, IcC-hydroxycholecalciferol,DeLuca et al., USA patentskrift nr. 3 741 996 udstedt 26. juni 1973; loL-hydroxyergocalci-20 ferol samt fremgangsmåde til fremstilling deraf, DeLuca et al., USA patentskrift nr. 3 907 843 'Udstedt 23. september 1975; The Selenium Dioxide Oxidation of Cholecalcife-rol, Bohumil Pelc, Steroids, Bind 30, Nr. 2, august 1977.
25 Man har nu fundet en hidtil ukendt fremgangsmåde til indføring af en hydroxylgruppe ved carbon 1 (C-l) stillingen i vitamin D eller vitamin D derivaters molekyler, en fremgangsmåde der i sit princip og sin udførelse adskiller sig grundlæggende fra eksisterende synteser. Den-30 ne fremgangsmåde, som i det følgende vil blive grundigere beskrevet, .indebærer den direkte indførelse af en oxy-genholdig gruppe ved C-l gennem en allyl-oxidation.
3 147912
Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse omfatter generelt fremstillingen af la-hydroxylerede vitamin -D forbindelser med følgende formel: t m A/« og er ejendommelig ved at man udsætter forbindelser (der 5 i det følgende bliver betegnet med den almene betegnelse "cyclovitamin D") med formlen
R
eb for allyl-oxidation, at man om ønsket reducerer eventuelt dannet, tilsvarende 1-oxocyclovitamin-D-derivat med hydridreak-tanter, at man udvinder den således dannede 1«L -hydroxylere-10 de cyclovitamin-D-forbindelse fra allyl-oxidationens reaktionsblanding, at man acylerer den indvundne forbindelse og udvinder 147912 4 det således dannede 1<A. -O-acylderivat, at man underkaster •dette derivat syrekatalyseret solvolyse, udvinder den ønskede 1Λ. -O-acyl-vitamin-D-forbindelse og hydrolyserer (eller reducerer med hydrid-reaktanter) det 1Λ -O-acylerede 5 reaktionsprodukt til dannelsen af 1 e^,-hydroxyvitamin-D-for-bindelserne.
I den ovenfor beskrevne fremgangsmåde er R valgt blandt substituerede eller usubstituerede, mættede eller umættede, cholesterol sidekæde-grupper, eller R har samme opbygning som side-10 kæden i cholensyre, homocholensyre, pregnenolon, 27-nor-25-ketosterol eller 24-ketosterol, og Z betyder hydrogen eller en lavere alkyl- eller en lavere acylgruppe eller en aromatisk acylgruppe. R vil fortrinsvis være en cholesterol-eller ergosterolsidekædegruppe, kendetegnet ved tilstede-15 værelsen af hydrogen eller en hydroxylgruppe i den position, der vil blive carbon-25 (C-25) stillingen i det tilstræbte produkts molekyle.
Når som helst man her og i patentkravene anvender "lavere " som en beskrivelse for alkyl eller acyl, er det hen-20 sigten at betegne en carbonhydridkæde med fra 1 til 4 carbonatomer, som kan være enten ligekædet eller forgrenet. En aromatisk acylgruppe er en gruppe såsom benzoyl eller substitueret benzoyl. I de forskellige afbildede formler indikerer en bølgeformet linie til en hvil-25 kensomhelst substituent, at denne substituent befinder sig i enten α eller β stereoisomerformen.
Ved udførelsen af fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse er R i de foregående formler såvel som i de følgende og i patentkravene fortrinsvis en cholesterol-30 sidekædegruppe kendetegnet ved formlen 147912 5 12^ hvori hver af R , R , Fr er udvalgt fra en gruppe bestående af hydrogen, hydroxyl, lavere alkyl, substitueret lavere alkyl, O-lavere alkyl, substitueret O-lavere alkyl samt fluor. Den mest foretrukne sidekædegruppe med 1 ^ 5 ovennævnte konfiguration er en, hvori R og R betyder hydrogen, og R2 betyder hydroxyl. Andre, foretrukne side-kædegrupper er sådanne, hvori R·*", R^ og R^ er hydrogen, eller hvor R er hydroxyl, · og R og er hydrogen, eller 12 3 hvori R og R er hydroxyl, og r er hydrogen.
10 En anden foretrukken sidekædegruppe betegnet med R er ergosterolsidekædegruppen kendetegnet ved formlen R1 R4 r3 12 "5 hvori hver af R , R og R er udvalgt fra en gruppe bestående af hydrogen, hydroxyl, lavere alkyl, substitueret lavere alkyl, O-lavere alkyl, substitueret O-lavere 25 alkyl samt fluor, og R4 er hydrogen eller lavere alkyl.
De mest foretrukne sidekædegrupper med den anførte ergo- sterolsidekædekonfiguration er sådanne, hvori R^ og x 2 4 R er hydrogen, R er hydroxyl, og r er methyl, eller hvo- ri R , R og R·5 er hydrogen, og R4 er methyl, og hvor den 20 stereokemiske konfiguration af R4 er den samme som i ergosterol.
Det må forstås, at når som helst der forekommer hydro-xylgrupper i sidekædegruppen R i cyclovitamin D udgangsmaterialet, kan sådanne gruppe være acylerede, f. eks.
147912 6 lavere acyl såsom acetyl eller substitueret lavere acyl, benzoyl eller substitueret benzoyl, skønt sådan acyle-ring ikke kræves for den heldige gennemførelse af omsætningen.
# 5 Den i den foreliggende opfindelse beskrevne fremgangsmåde er en almen fremgangsmåde, der også kan anvendes i forbindelse med cyclovitamin D forbindelser, som besidder sidekæderne i pregnenolon, cholensyre eller homocholensyre. Der kan bekvemt fremstilles cyclo-10 vitamin D forbindelser, hvori sidekædegruppen R f.eks. kan have følgende strukturformler 0 JL ^ eller . ^ COOAlkyl il ellers. yv . .
COOAlkyl eller og disse er egnede udgangsmaterialer for fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse.
Det som udgangsmateriale for oxidations omsætningen an-15 vendte cyclovitamin fremstilles bekvemt fra en D-vita- 147912 7 minforbindelse ved en totrinsfremgangsmåde som omfatter omdannelsen af en D-vitaminforbindelse indeholdende en 3β~hy droxylgruppe til det tilsvarende 3P-tosylatderivat og derpå ved solvolysering af dette tosylat i en passende 5 pufferet opløsningsmiddelblanding såsom methanol/acetone indeholdende natriumacetat til dannelse af cyclovitamin-produktet. Detaljeret beskrivelse heraf findes i dansk patentansøgning nr. 4361/82.
Ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse 10 udføres allyl-oxidationen normalt i et passende opløsr-ningsmiddel såsom f. eks. CH2C12, CHCl^, dioxan eller tetrahydrofuran under anvendelse af seleniumdioxid som oxidationsmiddel. På grund af arten af denne oxidationsomsætning foretrækker man, at den udføres ved stuetempe-15 ratur eller ved lavere temperaturer. Oxidationsomsætningen udføres ligeledes mest fordelagtigt i nærvær af et hydroperoxid såsom tert-butyl-hydroperoxid. Oxidationsproduktet d.v.s. et la-hydroxycyclovitamin-D-for-bindelsen genvindes let fra reaktionsblandingen ved op-20 løsningsmiddelekstraktion (f. eks. ether), og det renses bekvemt yderligere ved chromatografering. Man kan anvende andre allyl-oxidanter om ønsket, idet det må forstås, at med sådanne andre oxidanter kan man støde på variationer i udbyttet af slutproduktet, og at det kan 25 være nødvendigt at foretage gusteringer af de betingelser, under hvilke oxidations-omsætningen udføres, således som det vil være klart for fagmanden. De ved allyl-oxidation af cyclovitamin-D-forbindelser med den ovenfor viste strukturformel, hvori Z betyder lavere alkyl (f. eks.
30 methyl) ,. fremstillede produkter kan let' belyses ved følgende formel:
R
8 147912 ςώ
zo\ J
H
hvori R betyder en hvilkensomhelst af de tidligere definerede sidekædestrukturer, og hvori Z betyder lavere alkyl (f. eks. methyl).
Oxidation af cyclovitaminerne ved fremgangsmåden ved den 5 foreliggende opfindelse fører til dannelsen af 1-hydro-xycyclovitaminer i besiddelse af den ønskede la-stereokemiske konfiguration, d.v.s den stereokemiske konfiguration for de biologisk aktive 1-hydroxylerede vitamin-D-metabolitter. Selektiviteten med hensyn til såvel stil-10 lingen som den stereokemiske konfiguration samt oxidations-omsætningens bemærkelsesværdige høje virkningsgrad er såvel hidtilukendt som uventet, og samtlige de anførte la-hydroxycyclovitaminer er hidtil ukendte forbindelser.
15 Produkter i mindre omfang, der fremkommer ved selenium-dioxid-oxidation af cyclovitamin-D-forbindelser, er 1-oxo-cyclovitamin-D-derivater med følgende strukturformel: 147912 9 ςώ ζ°. \ hvori Ζ betyder lavere alkyl og R betyder en hvilkensomhelst af de tidligere definerede sidekædegrupper. Disse 1-oxocyclovitamin-D-derivater reduceres let med hydrid-reaktanter (f. eks. LiAlH^ eller NaBH^ eller tilsvaren-5 de reaktanter) til dannelsen fortrinsvis af la-hy- droxycyclovitamin-D-derivater med den tidligere anførte formel. Den lette reduktion af 1-oxocyclovitamin-D-for-bindelseme, og særligt den overvejdende dannelse af 1-hydroxycyclovitamin-D-forbindelser med la-stereokemisk 10 konfiguration er et uventet resultat, eftersom mekanistiske betragtninger ville have ført til forudsigelse af en indtrængen af hydrid-reduktionsmidlet fra den mindre blokerede side af 1-oxocyclovitamin-D-molekylet, hvilket ville have ført til den overvejende dannelse af Ιβ-hydro-15 xycyclovitamin-epimeren.
Acyleringen af den indvundne la-hydroxycyclovitamin-D-forbindelse udføres bekvemt ved standardmetoder under anvendelse af velkendte acyleringsmidler, idet eddike-syreanhydrid er et eksempel, i et passende opløsnings-20 middel f. eks. pyridin, og den udføres normalt ved stuetemperatur i et tidsforløb på adskillige timer f. eks. natten over. Acyleringsproduktet er den tilsvarende la- O-acylcyclovitamin-D-forbindelse, der bekvemt indvindes i en tilstrækkelig høj renhedsgrad til yderligere omsæt-25 ninger ved opløsningsmiddelekstraktion ( f. eks. ether) 147912 10 fra reaktionsmilieuet og efterfølgende afdampning af opløsningsmidlerne.
Under disse betingelser kan man forvente ligeledes at acylere en hvilkensomhelst primær eller sekundær hydro-5 xylgruppe, der er til stede i sidekæden (R) af la-hydro-xycyclovitamin-D-forbindelsen. Dersom man ønsker fuldstændig acylering af tertiære hydroxyIgrupper (f. eks. 25-hydroxygruppeme), er det normalt nødvendigt at anvende kraftigere acyleringsbetingelser f. eks. forhøjede 10 temperaturer (75 - 100° C). I sådanne tilfælde er det tilrådeligt at udføre omsætningen under en nitrogenatmosfære for at undgå nedbrydning af labile forbindelser. Reaktionsprodukterne af sådanne acyleringer kan belyses med følgende formel
R
0
ZO^J
ΌΥ 15 hvori Y betyder en lavere acylgruppe eller en aromatisk acylgruppe, og Z betyder lavere alkyl, og hvori R kan betyde en hvilkensomhelst af de tidligere definerede sterol-sidekæder, idet det må forstås, at oprindeligt tilstedeværende sekundære eller primære hydroxylgrupper 20 nu vil forefindes som de tilsvarende 0-acylsubstituenter, og at en hvilkensomhelst oprindeligt tilstedeværende 147912 11 tertiær hydroxylgruppe kan foreligge som hydroxy eller O-acyl afhængig af de valgte reaktionsbetingelser.
Omdannelse Ια-0-acyl-cyclovitaminet til Ια-0-acyl-vita- . min-D-derivatet udføres ved syrekatalyseret solvolyse af 5 cyclovitaminet. Opvarmning af Ια-0-acyl-cyclovitamin- D med p-toluensulfonsyre i en passende opløsningsmiddelblanding ( f.eks. dioxan/E^O) fører således til la-O-acyl-vitamin-D-forbindelsen. Sheves og Mazur anvendte denne omsætning til omdannelse af cyclovitamin D^ til 10 vitamin (J. Am. Chem. Soc. ££, 6249 (1975)).
Et hidtil ukendt og uventet overraskende resultat, der ikke var klart ud fra den kendte teknik, bestod i, at Ια-0-acyl-cyclovitamin-D-forbindelseme omdannes præcist og med høje udbytter til de tilsvarende Ια-0-acyl-vita-15 miner ved <sur solvolyse, Dette resultat var fuldstændig umuligt at forudsige, eftersom den allyliske la-oxygengruppe i en la-hydroxycyclovitamin-D-forbindelse kunne forventes at være labil under solvolysens reaktionsbetingelser. Direkte solvolyse af la-hydroxycyclovitamin-20 D kan udføres i nærvær af organiske carboxylsyrer f. eks. eddikesyre, myresyre med efterfølgende indvinding af det tilsvarende 3-0-acyl-la-hydroxyvitamin-D-derivat samt omdannelse af et sådant derivat til den tilsvarende hydro-xyforbindelse, 25 Det er ligeledes vigtigt, at en hvilkensomhelst tertiær eller allylalkoholgruppe, der måtte befinde sig i sidekæden, beskyttes i form af de tilsvarende acylater eller andre egnede syrestabile beskyttelsesgrupper. Det fremstillede Ια-0-acyl-vitamin-D indvindes fra solvolyse-30 · blandingen ved opløsningsmiddelekstraktion, og det oprenses yderligere ved chromatografering. Solvolyse-omsæt-ningen fører såvel til Ια-0-acyl-vftamin-D, der er i besiddelse af den naturlige 5,6-cis-dobbeltbindingsgeome-tri, som til det tilsvarende lot-O-acyl-vitamin-D med 147912 12 en 5,6-trans-geometri i et indbyrdes mængdeforhold på ca; 5si. Disse produkter kan let adskilles ved opløsnings-middelekstraktion og chromatografering til dannelse i ren form af Ια-0-acyl-vitamin-D-produkt med den nedenfor 5 anførte almene strukturformel (såvel som om ønsket den tilsvarende 5,6-trans-isomere),
R
rli 6
HO OT
hvori Y betyder en lavere acylgruppe ( f.eks. acetyl) eller en aromatisk acylgruppe (f.eks. benzoyl), og hvori R betyder en hvilkensomhelst af de tidligere definerede 10 sterol-sidekæder, idet det må forstås, at alle hydroxyl- grupper foreligger som deres tilsvarende O-acyl-derivater.
la-O-acyl-vitamin-D-derivaterne omdannes let til de ønskede la-hydroxyvitamin-D-forbindelser ved hydrolytisk eller reducerende fjernelse af acyl-beskyttelsesgrupperae.
15 Den særlige metode, der vælges, vil afhænge af arten af forbindelser, og særligt ligeledes af arten af sidekæde-gruppen R og dennes substituenter. Det må f. eks. forstås, at man ikke vil anvende reduktionen med hydrid, hvis man skal undgå samtidig reduktion af en anden gruppe, 20 der er udsat for reduktion f. eks. en keton eller ester, idet man ellers på passende måde vil modificere sådanne 147912 13 grupper forud for fjernelsen ved reduktion af acyl-gruppeme. Behandling af den acylerede forbindelse med et passende hydrid-reduktionsmiddel (f. eks. lithium-aluminiumhydrid) fører således til den tilsvarende la-5 hydroxyvitamin-D-forbindelse. Tilsvarende omdanner en mild basisk hydrolyse (f. eks. KOH/MeOH) den acylerede forbindelse til det ønskede Ια-hydroxyderivat, idet man må forstå, at i de tilfælde, hvor sidekæden Indeholder sterisk hindrede (f.eks. tertiære) O-acylgrupper, vil • 10 det være påkrævet at anvende kraftigere reaktionsbetingelser (forhøjede temperaturer, forlænget reaktionstid).
De ved begge metoder fremstillede la-hydroxyvitamin-D-forbindelser indvindes let i ren form ved opløsningsmiddelekstraktion (f. eks. ether) og chromatografering 15 og/eller omkrystallisation ud fra et egnet opløsningsmiddel.
En alternativ og hidtil ukendt fremgangsmådevariant til omdannelse af let-O-acyl-cyclovitamin-D-f.orbindelserne til de tilsvarende vitamin-D-derivater består i syr ekatalys eret 20 solvolyse af cyclovitamin-D-forbindelsen i et reaktionsmilieu betående af en organisk syre (f. eks. eddikesyre, myresyre) eller af en organisk syre med et co-opløsningsmiddel såsom acetone eller dioxan, hvis dette er nødvendigt til solubilisering af cyclovitaminet. Det er en 25 særlig fordel ved denne fremgangsmåde, at dersom side- kædegruppen R indeholder en tertiær hydroxylgruppe (f.eks. 25-hydroxygruppen), er beskyttelsen af sådanne grupper f. eks. i form af deres acyl-derivater ikke nødvendig.' ·»·.
Som et eksempel vil således solvolyse af Ια-0-acétoxy-30 vitamin-D^ i iseddikesyre føre til la-acetoxy-vitamin-D^-3P-acetat, såvel som til noget af den tilsvarende 5,6-trans-forbindelse (indbyrdes produktforhold ca. 3si).
Disse reaktionsprodukter kan adskilles ved chromatogra-fering, eller blandingen kan hydrolyseres under basiske 35 betingelser (såsom KOH/MeOH) til dannelse af la-hydro-xyvitamin-D^ og det tilsvarende la-hydroxy-5,6-trans- 14 147912 vitamin-Dj, som derpå kan adskilles ved chromatografi.
Denne metode kan anvendes på en hvilkensomhelst la-O-acyl-cyclovitamin-D-£orbindelse, der har en hvilkensomhelst af de tidligere i denne fremstilling definerede 5 sidekædegrupper R.
Endnu mere fordelagtigt kan solvolysen af Ια-0-acyl-cyclovitaminerne udføres i myresyre eller myresyre plus et egnet co-opløsningsmiddel såsom dioxan. Denne omsætning fører til dannelsen af loc-0-acyl-vitamin-D-3P-£or-10 miat-derivateme, som er gengivet ved følgende formel:
R
ΓΙ hvori Y betyder en lavere acylgruppe (fortrinsvis ikke formyl) eller en aromatisk acylgruppe, og hvori R betyder en hvilkensomhelst af de tidligere definerede sidekædegrupper. Den tilsvarende 5,6-trans-forbindelse dannes igen her ligeledes i mindre omfang. Eftersom 3β-0-forny1-15 gruppen meget let hydrolyser es under betingelser, hvorved Ια-0-acylgruppen ikke påvirkes (f. eks. ved behandling med kaliumcarbonat i nogle få minutter, således som det vises ved specifikke eksempler), omdannes den 147912 15 ovenfor beskrevne blanding 3-0-formylreaktionsprodukter let til Ια-0-acyl-vitamin-D og dettes tilsvarende 5,6-trans-isomere. Denne blanding kan bekvemt adskilles på dette trin ved chromatografiske fremgangsmåder til 5 dannelsen af rent Ια-0-acyl-vitamin D og det tilsvarende 5,6-trans-la-0-acyl-vitamin D, som nu hver for sig kan underkastes basisk hydrolyse eller en reducerende spaltning af acylgruppen til dannelse la-hydroxyvitamin-D-forbindelse samt 5,6-trans-la-hydroxyvitamin-D-forbindeisen.
10 En anden hidtil ukendt fremgangsmådevariant til omdannelse af lck -O-acyl-cyclovitamin-derivater til l^-0-acyl-3^-for-myl-vitamin-D-forbindelser med den ovenfor anførte formel indebærer anvendelsen af såkaldte kroneeth'er--katalysatorer. F. eks. omdanner et tofasesystem bestå-15 ende af myresyre og et carbonhydrid (f. eks. hexan/ben-zen) som opløsningsmiddel for Ια-0-acyl-cyclovitamin-D, og som indeholder en passende kroneether (f. eks.
15-krone-5 ·, Aldrich Chemical Company, Milwaukee) samt formiat-ionen Ια-0-acyl-cyclovitaminet til Ια-0-acyl-20 3p-0-formyl-vitamin-D-derivatet med et godt udbytte.
Den tilsvarende 5,6-trans-isomere dannes i mindre mængde og kan bekvemt frasepareres ved chromatografering.
En yderligere variant af de ovenfor beskrevne fremgangsmåder består, i, at man omdanner en la-hydroxycyclovitamin-25 D-forbindelse til det tilsvarende Ια-0-formylderivat (f. eks. ved hjælp af eddikesyre-myresyreanhydrid i py-ridin), og denne forbindelse kan beskrives med følgende formel: 147912 16 rt.
hvori R betyder, en hvilkensomhelst af de tidligere definerede sidekædegrupper, og Z betyder lavere alkyl, og idet man underkaster dette mellemprodukt solvolyse i iseddikesyre som tidligere beskrevet til dannelse af 5 la-formyloxy-vitamin-D-3p-acetat og som et produkt i ringere omfang den tilsvarende 5,6-trans-isomere.
Fjernelse af formylgruppen fører som ovenfor beskrevet til la-hydroxyvitamin-D-3-acetat og dettes 5>6-trans-isomere,som bekvemt kan adskilles på dette trin ved chro-10 matografering og derpå hver for sig underkastes hydrolyse eller reducerende spaltning af acetaterne til dannelse af en ren Ια-hydroxyvitamin-D-forbindelse og dennes 5,6-trans-isomere.
Allyl-oxidationsfremgangsmåden ifølge den foreliggende 15 opfindelse kan ligeledes udføres på cyclovitamin-D-for-bindelser, der indeholder 6-hydroxyl eller 6-0-acyl-grupper. Cyclovitamin-D-forbindelser med følgende strukturformel: 1479 12 17 ςώ ί hvori 2 betyder hydrogen og R betyder en hvilkensomhelst af de tidligere definerede sidekædegrupper, kan således oxideres ved carbon 1 ved hjælp af ally1-oxidationsfremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse til dannel-5 se af la-hydroxy-6-hydroxycyclovitamin-D-forbindelser samt l-oxo-6-hydroxycyclovitamin-D-forbindelser.
147912 18
Under de ovenfor beskrevne oxydationsbetingelser kan også forekomme i nogen udstrækning cycloreversion af la-hydroxy- 6-hydroxycyclovitamin-D-forbindelsen til en blanding af 5.6- cis og 5 > 6-trans-la-hydroxyvitamin-D-forbindelserne.
5 Samtlige produkter indvindes let fra oxydationsblandingen ved chromatografering. De ved allyl-oxydation fremstillede la-hydroxy-6-hydroxycyclovitamin-D-forbindelser kan let acyleres (f.eks. acetyleres) ved hjælp af den tidligere beskrevne standardfremgangsmåde, og de således fremstillede 10 1,6-diacyl-cyclovitamin-D-syntesemellemprodukter omdannes let ved syresolvolyse, som ovenfor omtalt, til 5>6-cis og 5.6- trans-la-O-acyl-vitamin-D-forbindelser, der let adskilles ved chromatografering. Hydrolyse (ved kendte metoder) af 1-0-acyl-derivateme fører til de ønskede la-hydroxyvi- 15 tamin-D-produkter samt henholdsvis disses 5>6-trans-isomerer.
l-oxo-6-hydroxycyclovitamin-D-produkterne reduceres let ved hjælp af hydrid-reaktanter til la-hydroxycyclovitamin-deri-vater.
På tilsvarende måde kan man omdanne cyclovitamin-D-forbin-20 delser med den viste strukturformel, hvor Z betyder acyl (f.eks. acetyl, benzoyl), og R betyder en hvilken som helst af de tidligere nævnte sidekædegrupper, ved hjælp af på hinanden følgende allyl-oxydation, acylering, syresolvolyse og til sidst hydrolyse af acylgruppeme som beskrevet i forbin-25 delse med de 6-hydroxyanaloge til la-hydroxyvitamin-D-pro- dukter og disses tilsvarende 5,6-trans-isomerer.
En yderligere bemærkelsesværdig og uventet opdagelse, der blev gjort under udarbejdelsen af den foreliggende opfindelse, er det forhold, at Ια-hydroxyvitamin-D-forbindelser 30 let og med stort udbytte omdannes til la-hydroxycyclovita-min-D-forbindelser ved solvolyse af 3β-tosylaterne (eller mesylateme) af la-hydroxy- eller la-O-acyl-vitamin-D-deri-vateme. For eksempel fører la-acetoxyvitamin-D^-3-tosylat ved solvolyse under anvendelse af de tidligere beskrevne 35 reaktionsbetingelser, f. eks. opvarmning i methanol som 147912 19 opløsningsmiddel indeholdende NaHCO^ til la-hydroxy-6-methoxy- 3,5-cyclovitamin-D^. Oxydation af dette reaktionsprodukt (f. eks. med MnOg i CHgClg som opløsningsmiddel) fører til den tilsvarende l-oxo-6-methoxy-3,5-cyclovitamin-D^-analoge som 5 beskrevet i de særlige eksempler.
I de efterfølgende eksempler, som udelukkende er ment som belysende, svarer de tal, der identificerer enkelte produkter, f.eks. 3a for loc-hydroxycyclovitamin-D^ til de i de efterfølgende formelbilleder anbragte numre ved de til sådanne 10 produkter hørende forskellige strukturformler.
rfj φ : .ri l|. ch30 II ch3o|| ά i &.
HO
1 2 3 R R f aS/-* i? 9^ rt ά„, ex« hO‘‘^^°AC HO’ 4 ' . 5 6 147912 20 a: R =
/\y I
fc' r~> c: R =
OH
d: K =
I OH
[^ f^i^] rrS
cHgoZ0Nv3' HCk>3' 7 8 Z = H 10 9 Z = Ac 147912 21
R R
ςώ ø
CH3°vJ' J
k JLoCHO k/koCHO AcO* ^ 11 12 r^t
b: K = Y^^CTOH
Λ/
C
/v/
OH
d: R = 147912 22
Eksempel 1 la-Hydroxycyclovitamin-D^ (3a) og l-oxo-cyclovitamin-D^ (7a):
Til en under omrøring værende suspension af 1,4 mg (1,2 x 10” ^ mol) SeO£ i 1,0 ml tørt CI^Cl^ tilsættes 7 ul (5,1 x 10”"* mol) 5 af en 70% opløsning af tert-butyl-hydroperoxid (t-BuOOH). Ef ter omrøring i 25 minutter tilsættes dråbe for dråbe en opløs-ning af 9 mg (2,3 x 10“^ mol) 3,5-cyclovitamin-D^ (forbindelse 2a fremstillet ud fra vitamin-D^ (la) ved den af Sheves & Mazur i J. Am. Chem. Soc. 97, 6249 (1975) angivne metode) i 0,5 10 ml CH2CI2. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i yderligere 25 minutter. Derpå tilsættes 2,0 ml 10% NaOH, og den således fremstillede blanding fortyndes med 15 ml diethylether. Den organiske fase frasepareres og vaskes efter hinanden med 10% NaOH (2 x 10 ml), ^0 (2 x 10 ml), mættet FeSO^ (3 x 15 10 ml) og mættet NaCl (15 ml), hvorpå der tørres over MgSO^.
Fjernelse af opløsningsmidlet under vacuum fører til et olie-agtigt råprodukt, som efter chromatografering på en silicagel-tyndtlagsplade (10 x 20 cm, 750 /im) fremkaldes i 30% ethyl-acetat/Skellysolve B,' hvilket fører til 4,5 mg (43% udbytte) 20 af la-hydroxy-3,5-cyclovitamin-D·^ (3a): massespektrum: (m/e 414(30), 382(70), 341(35), 269(20), 247(45), 174(25), 165(30), 135(65); NMR, «5, 0,53(3H, s 18-¾) 0,61 (2H, m, 4-¾), 0,87 (6η, d, 26-¾ og 27-¾), 0,92 (3H, d, 21-¾), 3,26 (3H, s, 6-00¾), 4,18 (IH, d, J=9,0 Hz, 6-H), 4,22 (IH, m, 1-H), 4,95 25 IH, d, J=9 Hz, 7-H), 5,17 (IH, d, J=2,2 Hz, 19(Z)-H), 5,25 (IH, d, J=2,2 Hz, 19(E)-H).
Som en bestanddel i mindre mængde 2,0 mg (19% udbytte) 1-oxo-cyclovitamin-Dj (7a) isoleret fra reaktionsblandingen: massespektrum: (m/c 412(40), 380(50), 267(15), 247(23), 135(50), 30 133(100); NMR, i, 0,49 (3H, s, 18-¾), 0,58 (2H, m, 4-¾), 0,87 (6η, d, 26-¾), 0,93 (3H, d, 21-¾), 3,30 (3H, s, 6-00¾).
4,07 (IH, d, J=9,0 Hz, 6-H), 5,02 (IH, d, J=9,0 Hz, 7-H), 5,62 (IH, s, 19(Z)-H), 6,04 (IH, s, 19(E)-H); UV 248 (4000).
147912 23 Ια-Acetoxy-cyclovitamin-D^ (4a):
Forbindelsen 3a (1,5 mg) opløses i 200 jol tør pyridin og 50 jul eddikesyreanhydrid. Blandingen holdes ved stuetemperatur natten over.og fortyndes derpå med 5 ml mættet 5 NaHCO^ opløsning. Denne opløsning ekstraheres med tre 5 ml portioner ether, og de organiske ekstrakter vaskes med H20 (2 x 10 ml), tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum, hvilket fører til forbindelsen 4a: NMR, 6. 0,53 (3H, s, 18-H^), 0,69 (2H, m, 4-H2), 10 0,87 (6H, d, 26-¾ og 27-¾), 0,92 (3H, d, 21-¾), 2,10 (3H, s, l-0Ac), 3,26 (3H, s, 6-00¾), 4,18 (lH,d, J=9,2 Hz 6-H), 4,98 (IH, d, J=9,2 Hz, 7-H), 4,98 (IH, d, J=2, 1 Hz, 19(Z)-H), 5,23 (IH, m, 1-H), 5,25 (IH, d, J*2, 1 Hz,19(e)-H).
Ια-Hydroxyvitamin-D^ (6a): 15 En opløsning af 1,3 mg af forbindelsen (4a) i 0,5 ml af en blanding i forholdet 3ί1 af 1,4-dioxan og H20 opvarmes til 55°C, 0,2 mg ptoluensulfonsyre i 4^1 H20 tilsættes, og opvarmningen fortsættes i 0,5 timer. Omsætningen slukkes derpå med 2 ml mættet NaHCO^, og der ekstraheres med to 20 10 ml portioner ether. De organiske ekstrakter tørres over
MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Råproduktet tilføres derpå en 10 x 20 cm silicagelplade, der fremkaldes i 30% ethylacetat/'Skellysolve B til dannelse af 400 ^ug af produktet 5a: UV, λ max 264 nm; massespektrum, m/e 442 (M+, 75), 25 382(70), 269(15), 134(100); NMR, S , 0,52 (3H, s, 18-H'3), 0,86 (6H, d, J=5,5 Hz, 26-¾ og 27-¾), 0,91 (3H, d, J=5,9 Hz, 21-¾), 2,03 (3H, s, 1-0000¾), 4,19 (IH, m, 3-H), 5,04 (IH, d, J=l,5 Hz, 19(Z)-H), 5,31 (IH, m(skarp), 19 (E)-H), 5,49 (IH, m, 1-H), 5,93 (IH, d, J=ll,4 Hz, 7-H), 6,37 (IH, 30 d, J=ll,4 Hz, 6-11).
147912 24
Produktet 5a opløses i 0,5 ml ether og behandles med overskud af LiAlH^. Omsætningen slukkes med mættet NaCl opløsning, og produktet isoleres ved filtrering og afdampning af opløsningsmidlet under vacuum. Det eneste produkt (6a) co-chro-5 matograferes sammen med en standardprøve af la-hydroxyvitamin- i 97:3 CHC1^:CH^0H (ΐα-hydroxyvitamin-D^ ^=0,10, 1β-hydroxyvitamin-D^ = 0,15, reaktionsprodukt (6a), = 0,10).
Dette produkt har X max = 264 nm og et massespektrum og NMR spektrum identisk med de for autentisk la-hydroxyvitamin-D^ 10 fundne.
Eksempel 2 25-Hydroxycyclovitamin-D^ (2b):
En opløsning af 100 mg 25-hydroxyvitamin-D^ (lb) og 150 mg p-toluensulfonylchlorid i 0,5 ml tør pyridin får lov til at o 15 omsætte sig i 24 timer ved 3 C, hvorpå der slukkes med 5 ml mættet NaHCO^. Den vandige fase ekstraheres med ether ( 2 x 10 ml), og etherekstrakten vaskes med mættet NaHCO^ (3 x 10 ml), 3% HC1 (2 x 10 ml) og H^O (2 x 10 ml) og tørres derpå over MgSO^. Opløsningsmidlet fjernes under vacuum, 20 og den rå inddampningsrest (25-hydroxyvitamin-D^-3-tosylat) optages i 1,5 ml vandfri methanol og 0,3 ml vandfri acetone; der tilsættes 170 mg (8 ækvivalenter) NaOAc, og opløsningen opvarmes til 55°C i 20 timer. Blandingen køles, fortyndes med 10 ml H20 og ekstraheres med 3 x 10 ml ether.
25 De organiske ekstrakter vaskes med tre 10 ml portioner H20, tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum.
Denne rå inddampningsrest påføres en 20 cm x 20 cm silicagel TLC-plade (750jum tyk), som fremkaldes en gang i et system af Skellysolve B:ethylacetat (8:2), hvilket fører til 48 mg 30 (45% totaludbytte beregnet ud fra lb) af (2b): massespektrum, m/e: 414 (M*, 40), 399(10), 382(80), 253(50), 59(100); NMR, é, 0,53 (3H, s, 18-H3), 0,74 (2H, m, 4-H2), 0,94 (3H, 147912 25 d, J=6,2 Hz, 21-H3), 1,21 (6H, s, 26-H3 og 27-H^), 3,25 (3H, s, 6-OCH3), 4,16 (IH, d, J=9,2 Hz, 6-H), 4,89 (1H, m(skarp), 19(Z)-H), 4,99 (IH, d, J=9,3 Hz, 7-H), 5,04 (lH, m(skarp), 19(E)-H).
5 la,25-Dihydroxycyclovitamin-D^ (3b) og 1-oxo-hydroxycyclovi-tamin-D^ (7b):
En blanding af 2,45 mg (0,5 ækv.) Se02, l4jul (2 aekv.) t-BuOOH og 1,2 ml tør får lov til at omsætte sig ved stuetem peratur i 30 minutter. En opløsning af cyclovitamin (2b) i 10 0,5 ml CH2Cl2 tilsættes dråbe for dråbe til dette oxyderende miljø, og omsætningen fortsættes i 15 minutter. Omsætningen slukkes derpå med 2,0 ml 10% NaOH og fortyndes med 20 ml diethyl-ether. Den organiske fase frasepareres og vaskes på hinanden følgende med 10% NaOH, H20, mættet FeSO^ opløsning, mættet 15 NaHCO^ og igen med ^0, og derpå tørres den over MgSO^. Opløsningsmidlet fjernes under vacuum, og den rå inddampnings-rest sættes på en silicagel tyndtlagsplade (20 cm x 20 cm, 750xm. tyk), som fremkaldes i et system Skellysolv B:ethyl-acetat (6:4), hvilket fører til 11 mg (53% udbytte) af pro-20 duktet (3b): massespektrum: m/e 430(M+, 15), 412(12), 380(35), 269(10), 59(100); NMR, 0,53 (3H, s, 18-H3), 0,61 (2H, m, 4-H2), 0,93 (3H, d, J=6,2 Hz, 21-H3), 1,21 (6H, s, 26-H3 og 27-H3), 3,25 (3H, s, 6-OCHj), 4,17 (lH, d, J=9,2 Hz, 6-H), 4,20 (IH, m, 1-H), 4,95 (IH, d, J=9,2 Hz, 7-H), 5,19 25 (IH, d, J=l,9 Hz, 19(Z)-H), 5,22 (IH, d, J=l,9 Hz, 19(E)-H).
Som komponent i mindre mængde blev l-oxo-25-hydroxycyclovita-min-D3 (7b) isoleret (15%) fra reaktionsblandingen. Massespektrum: m/e 428 (M+).
26 147912 la,25-Dihydroxycyclovitamin-D^-l,25-diacetat (4b-25-0Ac) ·.
En opløsning af 7 mg (3b) i 200 ni tør pyridin behandles med 10 jol eddikesyreanhydrid. Reaktions systemet gennem-bobles med N2 og opvarmes til 97°C i 16,0 timer. Efter 5 køling fortyndes blandingen med 5 ml mættet NaHCO^. Den vandige blanding ekstraheres med to 10 ml portioner ether, og den organiske fase vaskes på hinanden følgende med to 10 ml portioner mættet NaHCO^ og derpå med 10 ml H^O.
Efter tørring over MgSO^ faernes opløsningsmidlet og til-10 bageværende pyridin ved azeotrop destillation med ben zen under vacuum. Råproduktet sættes derpå til en silica-gel tyndtlagsplade (10 cm x 20 cm, 750 ;um tyk), der fremkaldes i Skellysolve B:ethylacetat (8:2) til dannelse af 6 mg (72%) af diacetatet (4b, 25-0Ac) og 1,2 mg af det 15 tilsvarende 3-acetoxy-25-hydroxy-derivat.
la,25-Dihydroxyvitamin-Dj-l,25-diacetat (5b,25-0Ac):
Til 3»8 mg af (4b,25-0Ac), der er opløst i 400 ni dioxan:
HgO (3:1), og som er opvarmet til 55°C, tilsættes 8 Jul af en opløsning af p-toluensulfonsyre i H20, og opvarmningen 20 fortsættes i 10 minutter. Omsætningen slukkes med mættet NaHCO^, og der ekstraheres med to 10 ml ether. Etheropløs-ningen vaskes med to 10 ml portioner H20 og tørres over MgSO^. Opløsningsmidlet fjernes under vacuum, og inddamp-ningsresten sættes til en silicagel tyndtlagsplade (5 x 20 25 cm, 250 jum tyk), som fremkaldes i Skellysolve B:ethylacetat (8:2) til dannelse af 1,8 mg (45%) af produktet (5b,25-0Ac): UV; λ max 265 nm; massespektrum: m/e 500(M+, 25), 440(55), 422(15), 398(10), 380(45), 134(100); NMR, 5, 0,52 (3H, s, 18-H3), 0,92 (3H, d, J=6,2 Hz, 21-H3), 1,42 (6H, s, 26-H3 og 27-H3), 1,97 27 1479-12 (3H, s,25-0C0CH3), 2,03 (3H,s,l-0C0CH3), 4,18(lH, m, 3-H), 5,03(lH,d,J=l,l Hz, 19(Z)-H), 5,3l(lH,m(skarp),19(E)-H),5,49 (lH,m,l-H),5,93(lH,d,J=ll,4 Hz,7-H), 6,37(lH,d,j_ll,4 Hz,6-H).
5 la,25-Dihvdroxyvitamin-D^ (6b):
Til en under omrøring værende opløsning af 1,0 mg af diacetatet (5b, 25-OAc) i 1,5 ml ether sættes 0,5 ml af en etheropløsning mættet med LiAlH^. Efter 10 minutter ved stuetemperatur slukkes omsætningen med mættet NaCl opløβίο ning, og saltene opløses ved tilsætning af 3% HC1. Den vandige fase ekstraheres med ether, og etherekstrakteme vaskes med H20 og tørres derpå over MgSO^. Tyndtlagchroma-tografi (5 x 20 cm silicagelplader, 250 jum tyk) under anvendelse af 5% MeOH: CHC13 fører til 0,6 mg (70%) la,25-dihy-15 droxyvitamin-D3 (6b), der udviser et UV-spektrum med % mfly 265 nm. Identiteten af 6b som værende la,25-dihydroxyvita-min-D3 fastslås ved direkte sammenligning af masse og NMR spektre med sådanne, som opnås fra autentisk materiale, såvel som ved co-chromatografering af produktet 6b sammen 20 med autentisk la,25-dihydroxyvitamin-D3.
Eksempel 3
Cyclovitamin (2c):
En opløsning af 100 mg vitamin D2 (lc) og 100 mg p-toluensul-fonylchlorid i 0,3 ml pyridin får lov til at omsætte sig i 25 24 timer ved 3°C, og omsætningen slukkes derpå med 10 ml mæt tet NaHC03> Den vandige blanding ekstraheres med to 10 ml portioner ether, og etherekstraktet vaskes på hinanden følgende med mættet NaHC03 (3 x 10 ml), 3% HC1 (2 x 10 ml), og H20 (2 x 10 ml), hvorpå det tørres over MgSO^. Opløsnings-30 midlet fjernes under vacuum, og det rå vitamin-D2-3-tosylat 147912 28 opløses i 1,5 ml vandfri - methanol og 0,3 ml vandfri acetone.
Efter tilsætning af 170 mg natriumacetat opvarmes opløsningen til 55°C i 20 timer. Efter nedkøling fortyndes opløsningen med 10 ml HgO og ekstraheres med tre 10 ml portioner ether.
5 De organiske ekstrakter vaskes med tre 10 ml portioner E^O, tørres med MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Inddampningsresten chromatograferes på en silicagel tyndt-lagsplade (20 x 20 cm, 750 jum) i Skellysolve B:ethylacetat (8:2), hvilket fører til 60 mg (5990 af (2c): massespektrum: 10 m/e 410(M+, 15), 378(40), 253(40), 119(60); NMR, 6 , 0,55 (3H, s, 18-H3), 0,74 (2H, m, 4-H2), 0,82 og 0,84 (6H, dd, J=4,l Hz, 26-H5 og 27-H3), 0,91 (3H, d, J=7,0 Hz, 21-Hj), 1,02 (3H, d, J=6,6 Hz, 28-H3), 3,26 (3H, s, 6-0CH3), 4,13 (IH, d, J=9,6 Hz, 6-H), 4,89 (IH, m, 19(Z)-H), 5,00 (IH, d, 15 J=9,4 Hz, 7-H), 5,04 (IH, m(skarp), 19(E)-H), 5,20 (2H, m, 22-H og 23-H).
la-Hydroxycyclovitamin-D2 (3c) og l-oxo-cyclovitamin-^ (7c):
En blanding af 2,7 mg Se02 og 13,4/il 70% t-BuOOH i 1,5 ml tør 20 CHgC^ får lov til at omsætte sig i 30 minutter. Forbindelsen 2c (30 mg) i 0,5 ml CH2CI2 tilsættes derpå dråbe for dråbe, og omsætningen fortsættes igennem 15 minutter og slukkes 'derpå med 2,0 ml 10% NaOH. Opløsningen fortyndes med 15 ml ether, etherfasen frasepareres og vaskes på hinanden følgende med 10% 25 NaOH, H2O, mættet FeSO^ opløsning, mættet NaHG(^ og atter med H2O. Efter tørring over MgSO^ fjernes opløsningsmidlet under vacuum, og inddampningsresten påføres en silicagel tyndtlags-plade (20 x 20 cm, 750 jum), som fremkaldes en gang i et system Skellysolve B:ethylacetat (8:2), hvilket fører til 9,5 3q mg (45%) af forbindelsen (3c): massespektinam: m/e 426 (M+, 55), 394(75), 353(30), 269(40), 135(95); NMR,S , 0,53 (3H, s, 18-Hj), 0,63 (2H, m, 4-H2), 0,82 og 0,84 (6H, dd, 26-Hj og 27-H3), 0,92 (3H, d, J=6,0 Hz, 21-H3), 1,02 (3H, d, J=6,4 Hz, 28-H3), 147912 29 3,26 (3H, s, 6-OCH^), 4,18 (IH, d, J=9,6 Hz, 6-H), 4,21 (IH, m, 1-H), 4,94 (IH, d, J=9,6 Hz, 7-H), 5,17 (IH, m(skarp), 19(Z)-H), 5,19 (2H, m, 22-H og 23-H), 5,24 (IH, m(skarp), 19(E)-H). Endnu en komponent i mindre mængde isoleret fra 5 reaktionsblandingen viste sig at være l-oxo-cyclovitamin-D2 (7c): massespektrum: m/e 424 (M+).
la-Hydroxycyclovitamin-D2-l-acetat (4c):
Til 6,5 mg af forbindelsen (3c) i 300 /il tørt pyridin tilsættes 150/il eddikesyr eahhydrid. Denne opløsning opvarmes til 10 55°C i 1,5 timer og fortyndes derpå · med 5 ml mættet NaHCO^ samt ekstraheres med to 10 ml portioner ether. De organiske ekstrakter vaskes med mættet NaHCO^ og med H20, tørres over MgSO^, og den resterende pyridin samt opløsningsmidlet faernes ved azeotrop. destillation med benzen linder vacuum, 15 hvilket fører til forbindelsen 4c: massespektrum: m/e 468 (M+, 40), 408(20), 376(65), 251(60), 135(100).
la-Hydroxyvitamin-D2-l-acetat (5c):
En opløsning af 5,0 mg af forbindelsen (4c) i 400/il dioxan: H20 (3:1) opvarmes til 55°C; 12 /il af en vandig opløsning af 20 p-toluensulfonsyre (50 jug/jul) tilsættes, og opvarmningen fortsættes i 10 minutter. Omsætningen slukkes derpå med mættet NaHCOy og der ekstraheres med to 10 ml portioner ether. Den fraseparerede etherfase vaskes med 10 ml mættet NaHCO^ og to 10 ml portioner H20, tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet 25 fjernes under vacuum. Præparativ tyndtlagschroma tograf i på silicagel (Skellysolve B:ethylacetat, 8:2) fører til 1,6 mg af forbindelsen 5c (32% udbytte): UV;^ mgy 265 nm; masse- 1Λ 7912 30 spektrum: m/e 454(M+, 80), 39^-(60), 376(20), 269(40), 135(100)» NMR, s , 0,53 (3H, s, 18-H3), 0,81 og 0,84 (6H, d, J=4,4 Hz, 26-H^ og 27-Hj), 0,91 (3H, d, J=7»0 Hz, 21-H^), 1,01 (3H, d, J=6,7 Hz, 28-H3), 2,03 (3H, s, 3-0C0CH3), 4,18 (IH, m, 3-H), 5 5,03 (IH, d, J=l,5 Hz, 19(Z)-H), 5,19 (2H, m, 22-H og 23-H), 5,3 (IH, m(skarp), 19(E)-H), 5,^ (IH, m, 1-H), 5,92 (IH, d, J=11,0 Hz, 7-H), 6,37 (IH, d, J-11,0 Hz, 6-H).
la-Hydroxyvitamin-D2 (6c): 10 ’ En opløsning af 1,1 mg af forbindelsen (5c) i 1,5 ml ether behandles med 0,5 dlL af en etheropløsning, der er mættet med LiAlH^. Efter 10 minutter ved stuetemperatur slukkes omsætningen med mættet NaCl, og saltene opløses i 3$ HC1. Denne vandige opløsning ekstraheres med ether, og de organiske eks-15 trakter vaskes med vand og tørres over MgSO^. TLC på 250 /m tykke plader, 5 x 20 cm, i 5$ methanol:chloroform fører til 0,8 mg (75$ udbytte) af la-hydroxyvitamin-D«: UV: ’λ i ^ Π18Χ 265 nm; massespektrum: m/e 412(M ), 394, 376, 287, 269, 251, 152, 134 (basetop); NMR: <5 , 0,56 (3H, s, 18-H^), 0,82 og 0,84 20 (6H, dd, J=4,4 Hz, 26-H3 og 27-¾). 0,92 (3H, d, J=6,6 Hz, 21-¾), 1,02 (3H, d, J=6,6 Hz, 28-¾). 4,23 (IH, m, 3-H), 4,42 (IH, m, 1-H), 5,00 (IH, m(skarp), 19(Z)-H), 5,20 (2H, m, 22-H og 23-H), 5,32 (IH, dd, J=l,4 Hz, 19(E)-H), 6,02 (IH, d, J-11,1 Hz, 7-H), 6,38 (lH, d, J=ll,6 Hz, 6-H). Disse spektraldata er 25 i fuld overensstemmelse med data, der er opnået for la-hydroxy- vitamin-D2, som er fremstillet på en fuldstændig forskellig måde (Lam et al. Science, 186, 1038-1040 (1974)).
U7912 31
Eksempel 4
Solvolyse af la-Acetoxycyclovitamin-D i eddikesyre:
En opløsning af 3,0 mg la-hydroxycyclovitamin-D^-l-acetat (4a) i 200 ;ul iseddikesyre opvarmes 55°C i 15 minutter og slukkes 5 derpå med iskold mættet NaHCO^. Den vandige blanding ekstrahe-res med diethylether, og den organiske fase vaskes med mættet NaHCO^ og vand, tørres over MgSO^ og filtreres til dannelse af en opløsning af 5,6-cis- og 5,6-trans-la-acetoxy-vitamin-D^-3-acetateme (UV: \ 2&Ϊ-269 nm). Den tørrede ether opløsning be- 10 handles med en lille mængde (1,0 mg) lithiumaluminiumhydrid, slukkes med mættet NaCl, filtreres, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Den rå olie påføres en 5 x 20 cm silicagel TLC plade (250 yUm tyk .), som fremkaldes i 5% methanol:chloroform til dannelse af 1,6 mg af en blanding (UV, Xmr267-269 nm) af la-15 hydroxyvitamin-D^ (6a) samt den tilsvarende 5,6-trans-isomere (5,6-trans-la-hydroxyvitamin-D^) i et indbyrdes forhold på 3:1, som fastlagt ved NMR-analyse: karakteristiske resonanser for cis-isomeren (6a): S , 6,38 og 6,01 (d, J=ll,4 Hz, 6-H og 7-H), 5,35 (dd, J-1,5 Hz, 19(E)-H), 5,01 (skarp m, 19(Z)-H), 20 0,54 (s, 18-H^),* for 5,6-trans-isomer en: 6,58 og 5,88 (d, J= 11,4 Hz, 6-H og 7-H), 5,13 (d, J=l,4 Hz, 19 (E)-H), 4,98 (skarp m, 19(Z)-H), 0,56 (s, 18-H^).
Den samme fremgangsmåde kan anvendes til at gennemføre spaltningen af cyclopropanringen (cycloreversionen) af andre cyclo-25 vitaminer eller deres C-l-oxygenerede analoge. Opvarmning som oven for beskrevet i iseddikesyre af la-acetoxy-25-hydroxyvita-min-D^ (forbindelse 4b, der kræves ikke beskyttelsesgruppe for 25-rOH-gruppen) fører således til la-acetoxy-25-hydroxyvitamin-D^-3*-acetat som hovedproduktet (plus noget af den tilsvarende 30 5,6-trans-isomere som et mindre produkt), og denne blanding kan direkte hydrolyseres(MeOH/KOH) eller underkastes hydrid-reduktion som ovenfor beskrevet, hvilket fører til la,25-di-hydroxyvitamin-D^ som hovedproduktet samt 5,6-trans-la,25-di-hydroxyvitamin-D^ som biproduktet.
147912 32 EKSEMPEL 5
Myresyre-katalyseret solvolvse af Ια-acetoxycvclovitamin-D^;
En opløsning af loc-acetoxycyclovitamin-D^ (4a) i tør dioxan opvarmes til 55°C og behandles med en opløsning i forholdet 5 1:1 af 989é’ s- myresyre og dioxan (50 μΐ/mg cyclovitamin) i 15 minutter. Reaktionen slukkes derpå med isvand, og der extraheres med ether. Etherextrakteme vaskes med vand, mættet NaHCO^, mættet NaCl, tørret over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Råproduktet (loc-acetoxy-3P-10 formylvitamin-D^ og dettes 5,6-trans-isomere) opløses i en opløsning i forholdet 1:1 af dioxan og methanol, og en ækvivalent mængde vandig K2C0^ (10 mg/100 μΐ) tilsættes. Efter 5 minutter ved stuetemperatur fortyndes opløsningen med vand, og den extraheres gentagne gange med ether. Etherextrakteme 15 vaskes med vand, tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Den rå cis- og trans-blanding af 1-acetoxy- 3-hydroxyvitaminerne chromatograferes derpå på en 10 x 20 cm, 750 ^m tyk silicagel plade i 1:3 ethylacetat:Skellysolve B, hvilket fører til det rene cis-la-acetoxyvitamin-D^. Basisk 20 hydrolyse (NaOH i methanol) fører til et produkt, som chroma-tografisk og spektralt er identisk med en autentisk prøve af Ια-hydroxyvitamin-Dj.
EKSEMPEL S
6-Hydroxv-cyclovitamin-D^ (8a): 25 En opløsning af 100 mg vitamin-D^, 100 mg TsCl og 500 μΐ tør pyridin holdes ved 5°C i 24 timer og fortyndes derpå med ether og vaskes adskillige gange med mættet NaHCO^.
Det organiske lag tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Det rå D^-tosylat bringes i suspension 30 i 4,0 ml acetonerH^O (9:1) sammen med 175 mg (8 ækv.)
NaHCOy Den således fremkomne blanding opvarmes til 55°C natten over, fortyndes med mættet NaCl og extraheres to 147912 33 gange med ether. Etherextrakten vaskes en gang med vand, tørrres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Præparativ TLC (20 x 20 cm, 750 jam, 8:2 Skellysolve B: ethylacetat) fører til 55 mg af 6-hydroxy-3,5-cyclovitamin-5 (8a); massespektrum: m/e 384 (M+), 366, 253» 247.
SeOo/t-BuOOH-oxidation af 6-hydroxv-cyclovitamin-D·^ (8a):
Til en under omrøring værende suspension af 2,0 mg Se02 i 1.5 ml tør CH2CI2 tilsættes 10 jul 70%’s t-BuOOH (tertiært butylhydroperoxid). Når homogenitet er opnået, tilsættes 10 dråbe for dråbe en opløsning af 14 mg 6-hydroxy-cyclovitamin-D^ (8a) i 500 μΐ tør C^C^, og omsætningen fortsættes i 1.5 time ved stuetemperatur. Omsætningen slukkes med 10%’ s-NaOH, reaktionsblandingen fortyndes med ether, vaskes med 10%’ s· NaOH og vand, tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet I5 fjernes under vacuum. Den rå, olieagtige inddampningsrest chromatograferes (10 x 20 cm, 750 jam, 1:1 ethylacetat:
Skellysolve B) til dannelse af 1,5 mg (10%) l-oxo-6-hydroxy-cyclovitamin-D^: massespektrum: (m/e), 398 (35, 380 (25), 247 ( 25), 135 (40), 133 (100); 2,0 mg (15%) la,6-dihydroxy-20 cyclovitamin-D^ (10a): massespektrum: (m/e), 400 (50), 382 (80), 269 (20), 247 (40), 135 (80), 133 (40); samt 2,0 mg (15%) 1 α-hydroxy-vitamin-D^ (6a) og den tilsvarende la-hydroxy- 5,6-trans-isomere.
EKSEMPEL 7 25 Omdannelse af la,6-dihydroxy-cyclovitamin-D^ (10a) til Ια-hvdroxwitamin-D·^ (6a):_
En opløsning af 400 μΐ tør pyridin, 200 μΐ eddikesyre-anhydrid og 2,0 mg la,6-dihydroxy-cyclovitamin-D^ (10a) opvarmes til 55°C i 2,0 time. Reaktionsblandingen for-30 tyndes derpå med toluen og inddampes til tørhed. Den således fremkomne olie (la,6-diacetoxy-cyclovitamin-D^) optages i 100 μΐ THF og behandles med 200 jul 97%’ s. HCOgH i 147912 34 15 minutter ved 55°C. Fortynding med mættet NaCl, extrak-tion med ether, vask med mættet NaHCO^, tørring over MgSO^, samt fjernelse af ether under vacuum fører til de rå 1-aoetoxy-3-formiat-cis- samt trans-vitaminderivater. Selektiv 5 formiat-hydrolyse med K^CO^ efterfulgt af chromatografering fører til ren la-acetoxyvitamin-D^ (5a), som omdannes til Ια-hydroxyvitamin-D^ (6a) ved simpel KOH/MeOH hydrolyse.
EKSEMPEL 8 24(R),25-Dihydroxy-cyclovitamin-D^ (2d):
Til 150 pi tør pyridin tilsættes 10,4 mg 24R,25-(0H)2D^ samt 10 7jl5 mg (1,5 ækv.) TsCl. Reaktionsblandingen holdes ved 0°C i 72 timer og fortyndes derpå med mættet NaHCO^ samt extra-heres med ether. Efter vask af etherextrakten med mættet NaHCO^, tørring over MgSO^ og fjernelse af opløsningsmidlet under vacuum bringer man det rå to sylat (~70$ ved TLC) i 15 suspension i 2 ml vandfrit MeOH sammen med 25 mg NaHCO^, og der opvarmes under N2 ved 58°C i 20 timer. Reaktionsblandingen fortyndes derpå med mættet NaCl og extraheres med ether. Etherextrakteme vaskes med vand, tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Præparativ TLC (10 x 20 20 '-cm, 750 pm silicagel, 6:4 Skelly solve B: ethylacetat) fører til 2,5 mg indvunden 24R,25-(0H)2D^ samt 4,4 mg 24R,25-di- hydroxy-cyclovitamin-D (2d): massespektrum: (m/e), 430 (15)» 398 (65), 253 (40), 159 (45), 119 (55), 59 (100); NMR, . S0,55 (3H, s, 18-¾), 0,74 (2H, m, 4-¾), 0,94 (3H, d, 25 J=6,2 Hz, 21-¾), 1,17 (3H, s, 26-¾), 1,22 (3H, s, 27-¾).
' 3,26 (3H, s, 6-00¾), 3,34 (IH, m, 24-H), 4,17 (IH, d, J=9,0 Hz, 6-H), 4,88 (IH, m(skarp), 19(Z)-H), 5,00 (l-H, J=9,0 Hz, 7-H), 5,04 (IH, m, (skarp), 19 (E)-H).
lg.24(R).25-Trihvdroxv-cvclovitamin-Dj (3d): 30 Til en i forvejen fremstillet opløsning af 1,12 mg Se02 og 12/il 70% t-BuOOH i 1,Q ml tør CH2Cl2 sættes 4,2 mg 24R,25-dihydroxy-cyclovitamin-D3 i 500/ul CHgCl^ Efter 147912 35 30 minutters forløb tilsættes en yderligere portion bestående af 1,12 mg Se02 og 12/ul 70%»s t-Bu00H i 500/il CH2CI2, og omsætningen fortsættes i yderligere 1 time. Omsætningen slukkes med 10%’ s NaOH, fortyndes med ether og 5 vaskes to gange med 10%*s NaOH efterfulgt af en vandvask. Den organiske opløsning tørres over MgS0^,~opløsningsmidlet fjernes under vacuum, og den således dannede olie chromato-graferes på en 5 x 20 cm, 250 /un silicagel-plade i ethyl-acetat:Skellysolve B (1:1) til dannelse af 1,6 mg la,24(R), 10 25-trihydroxy-cyclovitamin-D^ (3d): massespektrum: (m/e), 446 (30), 414 (50), 396 (40), 269 (30), 135 (80), 59 (100); »,£0,55 (3H, s, 18-¾), 0,65 (2H, m, 4-¾), 0,96 (3H, d, J=6,0 Hz, 21-¾), 1,19 (3H, s, 26-¾), 1,24 (3H, s, 27-¾), 3,28 (3H, s, 6-00¾), 3,35 (IH, m, 24-H), 4,20 (IH, d, 15 J=9,0 Hz, 6-H), 4,22 (IH, m, 1-H, 4,97 (IH, d, J=9,0 Hz, 7-H), 5,18 (IH, m (skarp), 19(Z)-H), 5,26 (IH, d, J=2,2 Hz, 19(E)-H), 1-oxo-24(R) ,25-dihydroxy-cyclovitamin-D^ (7d) isoleres ligeledes som en mindre bestanddel (·< 20%).
la,24(R).25-Trihydroxyvitamin-D, (6d); 20 TU 200 μΐ tør pyridin og 150 μΐ ACgO sættes 1,4 mg la, 24R, 25-trihydroxy-cy cl ovitamin-(3d). Det samlede system gennemskylles med N2 og opvarmes til 95°C i 20 timer. Reaktionsblandingen fortyndes derpå med tør toluen og „azeotropdestilleres til tørhed. Det olieagtige pro-25 dukt la,24(R),25-triacetoxy-cyclovitamin-D^ (4d,24,25-diacetat) opløses i 200 /ul THF, og det sættes til 500 μΐ af en opløsning i forholdet 1:1 af 97%' s HCOgH og THF, og det opvarmes til 55°C i 15 minutter. Den nedkølede reaktionsblanding fortyndes med ether, vaskes med H20, mættet 30 NaHCO^, mættet NaCl samt tørres over MgSO^. Efter fjernelse af opløsningsmidlet under vacuum opløses det rå la,24R,25-triacetoxy-3P-formiat-vitamin-D-mellemprodukt i 200 μΐ THF, og det behandles med 1,0 mg K2C0^ i 10/ul H20 og 90 μΐ MeOH i 5 minutter ved stuetemperatur. Fortynding med mættet 35 NaCl, extraktion med ether og chromatografering på en 5 x 20 147912 36 cm, 250 pm, silicagel-plade i ethylacetat:Skellysolve B (4:6) fører til la,24R,25-triacetoxy-vitamin-D^. Behandling af dette triacetat med LiAlH^ fører til Ια,24R,25-trihydroxy-vitamin-Dg (6d), som i alle måder er identisk med en auten-5 tisk prøve.
EKSEMPEL 9
Hydrid-reduktion af 1-oxo-cvclovitamin-D-, (7a) til 5a;
En opløsning af 2,0 mg l-oxo-cyclovitamin-D^ fremkommet ved allyl-oxidation af 3,5-cyclovitamin-D^ som beskrevet i eksem-10 pel 1, i 500 ul ether behandles med 300 ul ether, der er mættet med LiAlH^. Efter 30 minutter slukkes reaktionen omhyggeligt ved dråbevis tilsætning af mættet NaCl.De uopløselige salte fjernes ved filtrering, og filtratet tørres over MgSO^. Opløsningsmidlet fjernes under vacuum, hvilket fører til 1,7 mg af 15 en blanding i forholdet 95:5 af la-hydroxycyclovitamin-D^ (3a) og den tilsvarende Ιβ-hydroxycyclovitamin-D^-isomere, som adskilles ved chromatografi. Tilsvarende behandling af 1-oxo-cyclovitamin-D^ med 500 μ 1 look's ethanol, der er mættet med NaBH^fører til en blanding i forholdet 8:2 20 af ία-hydroxy- og Ιβ-hydroxycyclovitamin-D^-forbindelserne (3a samt dets Ιβ-epimere).
Omdannelse af 1-hydroxycyclovitamin-D^ (3a) til la-hydroxy-vitamin-D-^ (6a) gennem 1-formyl-mellemprodukt et (lla);
En 200 pi portion eddikesyreanhydrid køles til 0°C, og 100 pi 25 97%'s myresyre tilsættes langsomt. Opløsningen opvarmes kortvarigt (15 minutter) til 50°C og køles derpå til 0°C. En 100 pi portion af eddikesyre/myresyrearihydrid sættes derpå til en opløsning af 5 mg Ια-hydroxy-cyclovitamin-D^ (3a) i pyridin ved 0°C. Efter 2,0 timers forløb fortyndes reaktions- 147912 37 blandingen med mættet NaCl, extraheres med ether, vaskes med HgO og tørres over MgSO^. Det rå la-formyl-cyclovitamin-D^ (11a), der opnås efter fjernelse af opløsningsmidlet under vacuum, opløses i iseddikesyre og opvarmes til 55°C i 15 5 minutter. Fortynding med mættet NaCl, extraktion med ether og isolering af de organiske produkter fører til et råprodukt bestående af 1-formyloxyvitamin-D^-acetat (12a) og den tilsvarende 5»6-trans-isomere. Behandling af den rå blanding med K^CO^ i HgO/MeOH efterfulgt af chromatografering (5 x 20 cm, 10 250 pm, silicagel, 3:7 ethylacetat:Skellysolve B) fører til det rene la-hydroxyvitamin-D^-3-acetat og til 5,6-trans-la-hydroxyvitamin-D^-3-acetat, som omdannes hydrolytisk (KOH/MeOH) til henholdsvis det tilsvarende la-hydroxy-vitamin-D^ (6a) og dettes 5,6-trans-isomere.
15 EKSEMPEL 10
Kroneether-katalyseret cycloomdanneIse af loC -acetoxy-cvclovitamin-D-?:_
En 0,5 M hexan:benzen (1:1) opløsning af såkaldt 15-krone-5 (Aldrich Chemical Co., Milwaukee) mættes med fint fordelt 20 vandfrit natriumacetat. Til 300/il af denne opløsning sættes 11,0 mg la-acetoxy-cyclovitamin-D^ (4a) i 600 pi tør hexan efterfulgt af 200 μΐ 97%'s myresyre. Denne tofase blanding omrøres kraftigt med mellemrum i løbet af 30 minutter og fortyndes derpå med hexan, hvorefter syrelaget 25 fjernes. Den organiske fase vaskes med mættet NaHCO^,mættet NaCl, tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Råolien optages i 300 pi THF samt 300/il methanol og behandles med 10 mg ^CO^ i 100 pi HgO. Efter 5 minutter ved stuetemperatur fortyndes reaktionsbland i ngen med mættet 30 NaCl og extraheres med to portioner ether. Det organiske lag vaskes med H20, tørres over MgSO^, og opløsningsmidlet fjernes under vacuum. Den således fremkomne blanding underkastes præparativ TLC (750 pm, 10 x 20 cm, 75:25 Skellysolve B: ethylacetat) til dannelse af 5,7 mg (5b%) Ια-acetoxy-vitamin D^ 147912 38 (5a) samt 2,1 mg (20%) 5,6-trans-la-acetoxy-vitamin-D^.
EKSEMPEL 11
Direkte solvolvse af la-hvdroxycyclovitamin-D-forbindelser: 3,8 ml iseddikesyre sættes til 380 mg la-hydroxy-cyclovitamin-5 D^, og opløsningen opvarmes i 10 minutter ved 60°C. Efter ned køling sættes denne blanding til en under omrøring værende opløsning af is/NaHCO^. Den neutraliserede vandige opløsning extraheres med diethylether, de samlede organiske extrakter vaskes en gang med vand og tørres over MgSO^. Råproduktet 10 efter fjernelse af opløsningsmidlet chromatograferes på en 1,5 x 60 cm søjle af 50 g neutral silicagelj elueres med 100 ml 4%'s , 100 ml 8%’s , 100 ml 12%»s og 400 ml 16%1s EtOAc/Skellysolve B. Den ønskede la-hydroxyvitamin-D^-3-acetat-isomere elueres før lcc-hydroxy-5,6-trans-vitamin-D^-3-acetat; 15 der opnås 175 mg la-hydroxyvitamin-D,-3-acetat; UV264 nm; MS (m/e) 442 (M+, 8), 382 (70), 364 (15), 269 (20), 134 (100).
Hydrolyse af 1α-hydroxyvitamin-D^-3-acetat (10% NaOH/MeOH, 2 timer reaktionstid) fører til la-hydroxyvitamin-D^.

Claims (2)

147912
1. Fremgangsmåde til fremstilling af 1 oi-hydroxy-lerede vitamin D forbindelser med den almene formel R n Ησ* hvori R er valgt blandt substituerede eller usubstituere-de, mættede eller umættede cholesterol-sidekædegrupper, 5 eller hvor R kan have samme struktur som sidekæden i cholen-syre, homocholensyre, pregnenolon , 27-nor-25-ketochole-sterol eller i 24-ketocholesterol, kendetegnet ved, at man udsætter forbindelser med den almene formel R 0 zckJ U-
DK365079A 1978-01-16 1979-08-31 Fremgangsmaade til fremstilling af 1alfa-hydroxylerede vitamin d-forbindelser DK147912C (da)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK436182A DK170437B1 (da) 1978-01-16 1982-10-01 1alfa-hydroxy-3,5-cyclovitamin D forbindelser
DK374083A DK169871B1 (da) 1978-01-16 1983-08-16 3,5-cyclovitamin-D forbindelser

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US86944878A 1978-01-16 1978-01-16
US86944878 1978-01-16
US05/914,796 US4195027A (en) 1978-01-16 1978-06-12 Process for preparing 1α-hydroxylated compounds
US91479678 1978-06-12
US7900024 1979-01-15
PCT/US1979/000024 WO1979000513A1 (en) 1978-01-16 1979-01-15 Process for preparing 1a-hydroxylated compounds

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK365079A DK365079A (da) 1979-08-31
DK147912B true DK147912B (da) 1985-01-07
DK147912C DK147912C (da) 1985-06-17

Family

ID=27128114

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK365079A DK147912C (da) 1978-01-16 1979-08-31 Fremgangsmaade til fremstilling af 1alfa-hydroxylerede vitamin d-forbindelser
DK436182A DK170437B1 (da) 1978-01-16 1982-10-01 1alfa-hydroxy-3,5-cyclovitamin D forbindelser
DK374083A DK169871B1 (da) 1978-01-16 1983-08-16 3,5-cyclovitamin-D forbindelser

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK436182A DK170437B1 (da) 1978-01-16 1982-10-01 1alfa-hydroxy-3,5-cyclovitamin D forbindelser
DK374083A DK169871B1 (da) 1978-01-16 1983-08-16 3,5-cyclovitamin-D forbindelser

Country Status (15)

Country Link
US (1) US4195027A (da)
JP (1) JPS5828876B2 (da)
AU (1) AU525781B2 (da)
BE (1) BE873512A (da)
CA (1) CA1156251A (da)
CH (2) CH658050A5 (da)
DE (2) DE2933189T1 (da)
DK (3) DK147912C (da)
FR (4) FR2438035A1 (da)
GB (1) GB2013686B (da)
IE (1) IE48547B1 (da)
NL (1) NL188901C (da)
NZ (1) NZ189388A (da)
SE (1) SE429971B (da)
WO (1) WO1979000513A1 (da)

Families Citing this family (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH16989A (en) * 1978-11-07 1984-05-04 Res Inst Medicine Chem Process for the preparation of 1-hydroxylated vitamin d compounds
US4269777A (en) * 1979-05-21 1981-05-26 Wisconsin Alumni Research Foundation Isotopically labeled vitamin D derivatives and processes for preparing same
JPS5626820A (en) * 1979-08-10 1981-03-16 Chugai Pharmaceut Co Ltd Immunosuppressing agent
US4265822A (en) * 1979-09-10 1981-05-05 Wisconsin Alumni Research Foundation Process for preparing 1-hydroxylated vitamin D compounds from 5,6-trans-vitamin D compounds
US4297289A (en) * 1980-07-17 1981-10-27 Wisconsin Alumni Research Foundation Vitamin D compounds isotopically substituted at carbon 6 and process for their preparation
EP0070588B1 (en) * 1981-07-17 1986-05-07 Duphar International Research B.V Method of preparing 1-alpha-hydroxyvitamin d and 1-alpha-hydroxy-previtamin d compounds, and adduct of a previtamin d or tachysterol compound with a suitable dienophile
US4617297A (en) * 1982-02-12 1986-10-14 Hoffmann-La Roche Inc. Method of treating disease states by the administration of 1α,25,26-trihydroxycholecalciferol
FR2545824B1 (fr) * 1983-05-09 1987-11-20 Wisconsin Alumni Res Found Derive 1a, 25-dihydroxyles de la vitamine d2 et produits intermediaires pour leur preparation et compositions pharmaceutiques renfermant ces derives
DE3590080C2 (da) * 1984-03-05 1992-08-06 Wisconsin Alumni Research Foundation, Madison, Wis., Us
US4555364A (en) * 1984-11-01 1985-11-26 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for preparing 1-hydroxyvitamin D compounds
WO1987000834A1 (en) * 1985-08-02 1987-02-12 Leo Pharmaceutical Products Ltd. A/S Novel vitamin d analogues
US5602116A (en) * 1988-08-02 1997-02-11 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing secondary hyperparathyroidism
US5869473A (en) * 1988-08-02 1999-02-09 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing hyperparathyroidism
US5321018A (en) * 1989-03-09 1994-06-14 Wisconsin Alumni Research Foundation Use of 1α-hydroxylated-19-nor-vitamin D compounds to treat psoriasis
JP2645130B2 (ja) * 1989-03-31 1997-08-25 日清製粉株式会社 ステロイド誘導体
US5401731A (en) * 1989-06-29 1995-03-28 Leo Pharmaceutical Products Ltd. A/S (Lovens Kemiske Fabrik Productionsaktieselskab) Vitamin D analogues
US5532228A (en) * 1990-02-06 1996-07-02 Schering Aktiengesellschaft Side-chain homologous vitamin D derivatives, process for their production, pharmaceutical preparations containing these derivatives and their use as pharmaceutical agents
US5185150A (en) * 1990-08-24 1993-02-09 Wisconsin Alumni Research Fdn. Cosmetic compositions containing 19-nor-vitamin D compounds
US5801164A (en) * 1990-09-21 1998-09-01 Bone Care International, Inc. Methods of treating osteoporosis prophylactically or therapeutically
PL170447B1 (en) * 1990-09-21 1996-12-31 Lunar Corp Method of obtaining novel 1 alpha-hydroxyvitamin d4 and novel transition and analog compounds
US5798345A (en) * 1990-09-21 1998-08-25 Bone Care International, Inc. Method of inhibiting the hyperproliferation of malignant cells
US5763428A (en) * 1990-09-21 1998-06-09 Bone Care International, Inc. Methods of treating skin disorders with novel 1a-hydroxy vitamin D4 compounds and derivatives thereof
US6025346A (en) * 1990-09-21 2000-02-15 Bone Care International, Inc. 1α-hydroxy vitamin D4 and novel intermediates and analogues
DE69233074T2 (de) * 1991-01-08 2004-03-18 Bone Care International Inc., Madison Verfahren zur Herstellung von 1-alpha-24-dihydroxy-Vitamin D2
US20040009958A1 (en) * 1991-01-08 2004-01-15 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1alpha,24(S)-dihydroxyvitamin D2
US6166000A (en) * 1991-01-08 2000-12-26 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1α,24(S)-Dihydroxy vitamin . D.sub2
US6251883B1 (en) 1991-01-08 2001-06-26 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxy vitamin D2
US5789397A (en) * 1991-01-08 1998-08-04 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1A,24(S)-dihydroxy vitamin D2
US6538037B2 (en) 1991-01-08 2003-03-25 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxyvitamin D2
WO1994005630A1 (en) * 1992-08-28 1994-03-17 Lunar Corporation 1α,24(S)-DIHYDROXY VITAMIN D2, ITS FORMATION AND USE
US5763429A (en) * 1993-09-10 1998-06-09 Bone Care International, Inc. Method of treating prostatic diseases using active vitamin D analogues
US5869472A (en) * 1994-07-18 1999-02-09 Bone Care International, Inc. Synthesis of 1α-hydroxy vitamin D
US20020183288A1 (en) * 1995-04-03 2002-12-05 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing hyperparathyroidism
US6242434B1 (en) * 1997-08-08 2001-06-05 Bone Care International, Inc. 24-hydroxyvitamin D, analogs and uses thereof
US6376479B1 (en) 1995-04-03 2002-04-23 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing hyperparathyroidism
US20040043971A1 (en) * 1995-04-03 2004-03-04 Bone Care International, Inc. Method of treating and preventing hyperparathyroidism with active vitamin D analogs
EP1021401A1 (en) * 1995-09-21 2000-07-26 Wisconsin Alumni Research Foundation Calcitriol derivatives and their uses
US5952317A (en) * 1995-09-21 1999-09-14 Wisconsin Alumni Research Foundation Calcitriol derivatives and their uses
US5976784A (en) * 1996-09-20 1999-11-02 Wisconsin Alumni Research Foundation Calcitriol derivatives and their uses
US20020128240A1 (en) * 1996-12-30 2002-09-12 Bone Care International, Inc. Treatment of hyperproliferative diseases using active vitamin D analogues
US6503893B2 (en) 1996-12-30 2003-01-07 Bone Care International, Inc. Method of treating hyperproliferative diseases using active vitamin D analogues
US6566353B2 (en) 1996-12-30 2003-05-20 Bone Care International, Inc. Method of treating malignancy associated hypercalcemia using active vitamin D analogues
US6573256B2 (en) 1996-12-30 2003-06-03 Bone Care International, Inc. Method of inhibiting angiogenesis using active vitamin D analogues
NZ336924A (en) * 1997-02-13 2001-06-29 Bone Care Int Inc Targeted therapeutic delivery of vitamin D compounds via a Vitamin D conjugate
US20030129194A1 (en) * 1997-02-13 2003-07-10 Bone Care International, Inc. Targeted therapeutic delivery of vitamin D compounds
US6087350A (en) * 1997-08-29 2000-07-11 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Use of pretreatment chemicals to enhance efficacy of cytotoxic agents
JP2002509888A (ja) * 1998-03-27 2002-04-02 オレゴン ヘルス サイエンシーズ ユニバーシティー 腫瘍および他の過増殖性疾患の治療におけるビタミンｄおよびその類似体
US5972917A (en) * 1998-05-29 1999-10-26 Bone Care Int Inc 1 α-hydroxy-25-ene-vitamin D, analogs and uses thereof
JP2004504295A (ja) * 2000-07-18 2004-02-12 ボーン　ケア　インターナショナル　インコーポレイテッド 安定化１α−ヒドロキシビタミンＤ
US7148211B2 (en) * 2002-09-18 2006-12-12 Genzyme Corporation Formulation for lipophilic agents
WO2005102355A1 (en) * 2004-04-23 2005-11-03 Genzyme Corporation METHODS OF TREATING VARIOUS VITAMIN D METABOLISM CONDITIONS WITH 1α-HYDROXYVITAMIN D2
US20060003950A1 (en) * 2004-06-30 2006-01-05 Bone Care International, Inc. Method of treating prostatic diseases using a combination of vitamin D analogues and other agents
US7094775B2 (en) * 2004-06-30 2006-08-22 Bone Care International, Llc Method of treating breast cancer using a combination of vitamin D analogues and other agents
US7491712B1 (en) 2007-12-10 2009-02-17 Formosa Laboratories, Inc. Process for preparation of paricalcitol and intermediates thereof
US9212136B2 (en) * 2008-07-22 2015-12-15 Azad Pharmaceuticals Ingredients Ag Methods for producing paricalcitol
WO2011002756A2 (en) * 2009-07-01 2011-01-06 Vitamin Derivatives, Inc. Vitamin d compounds and methods for preparing same
CN114805158B (zh) * 2022-04-24 2023-11-14 浙江花园生物医药股份有限公司 一种制备骨化三醇的方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3901928A (en) * 1973-01-10 1975-08-26 Robert Henry Hesse 1' ,3' -dihydroxy steroid-5-enes method of preparing same and their use for preparing 1' -hydroxy-25-hydrogen vitamin d compounds
US3847955A (en) * 1973-07-16 1974-11-12 Wisconsin Alumni Res Found 1,24,25-trihydroxycholecalciferol
CA1034114A (en) * 1973-12-03 1978-07-04 Wisconsin Alumni Research Foundation Processes for preparation of steroid derivatives
US3907843A (en) * 1974-06-14 1975-09-23 Wisconsin Alumni Res Found 1{60 -Hydroxyergocalciferol and processes for preparing same
US3880894A (en) * 1974-05-24 1975-04-29 Wisconsin Alumni Res Found 1,25-Dihydroxyergocalciferol
US3976636A (en) * 1974-10-10 1976-08-24 The Upjohn Company Process and compounds

Also Published As

Publication number Publication date
NL7900331A (nl) 1979-07-18
CH658050A5 (de) 1986-10-15
AU525781B2 (en) 1982-12-02
DK374083A (da) 1983-08-16
DK170437B1 (da) 1995-09-04
DK436182A (da) 1982-10-01
DE2933189T1 (de) 1980-12-18
IE790055L (en) 1979-07-16
DK169871B1 (da) 1995-03-20
US4195027A (en) 1980-03-25
FR2436140A1 (fr) 1980-04-11
DK365079A (da) 1979-08-31
NZ189388A (en) 1981-02-11
WO1979000513A1 (en) 1979-08-09
BE873512A (fr) 1979-05-16
CA1156251A (en) 1983-11-01
CH653321A5 (de) 1985-12-31
NL188901B (nl) 1992-06-01
DE2933189C2 (da) 1991-05-29
GB2013686B (en) 1982-04-15
FR2478631A1 (fr) 1981-09-25
FR2529888B1 (fr) 1986-04-04
DE2954557C2 (da) 1991-07-11
GB2013686A (en) 1979-08-15
JPS54500080A (da) 1979-11-29
SE429971B (sv) 1983-10-10
JPS5828876B2 (ja) 1983-06-18
AU4339479A (en) 1979-07-26
DK147912C (da) 1985-06-17
NL188901C (nl) 1992-11-02
FR2438035A1 (fr) 1980-04-30
FR2529888A1 (fr) 1984-01-13
FR2438035B1 (da) 1984-02-24
SE7907631L (sv) 1979-09-13
FR2478631B1 (da) 1984-02-24
DK374083D0 (da) 1983-08-16
IE48547B1 (en) 1985-03-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK170437B1 (da) 1alfa-hydroxy-3,5-cyclovitamin D forbindelser
US5414098A (en) Homologated vitamin D2 compounds and the corresponding 1α-hydroxylated derivatives
DE102006047173B4 (de) Verfahren zur Herstellung eines Analogons von Vitamin D
US4202829A (en) Process for preparing 1α-hydroxylated compounds
EP3965773B1 (en) NEW PROCESS FOR THE SYNTHESIS OF 25-OH CHOLESTEROL/CALCIFEDIOL FROM PHYTOSTEROL
EP0078705B1 (en) Process for the preparation of 1-hydroxylated vitamin d compounds
DK147178B (da) Fremgangsmaade til 1-hydroxylering af 5,6-trans-vitamin d-forbindelser
US20220372065A1 (en) Synthesis of cholesterol and vitamin d3 from phytosterols
CA3136913A1 (en) Improved, cost effective process for synthesis of vitamin d3 and its analogue calcifediol from ergosterol
JP2550391B2 (ja) １β−ヒドロキシビタミンＤ▲下２▼およびＤ▲下３▼の製造方法
JPH05271182A (ja) １α，７，８−トリヒドロキシビタミンＤ化合物
SK292090A3 (en) Process for the preparation of vitamin d derivatives and aldehyde useble as an intermediate
DE69200980T2 (de) Synthese von 1-Alpha-hydroxy-secosterinverbindungen.
WO1985001291A1 (en) 1,23-dihydroxyvitamin d compounds
JPS5945674B2 (ja) １α−ヒドロキシシクロビタミンＤ誘導体
Byon et al. (20R)-and (20S)-Cholest-5-ene-3. beta., 21-diol
EP0468037B1 (en) Process for preparing vitamin d2 compounds and the corresponding 1 alpha-hydroxylated derivatives
JP2984406B2 (ja) ステロイド誘導体の製造法
CA1254225A (en) PROCESS FOR PREPARING 1.alpha.-HYDROXYLATED COMPOUNDS
JP2953665B2 (ja) ステロイド誘導体の製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
PUP Patent expired