DK149094B - Fremgangsmaade til fremstilling af thymosin alfa1 eller fysiologisk acceptable salte deraf med syrer eller baser ud fra thymosinfraktion 5 - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af thymosin alfa1 eller fysiologisk acceptable salte deraf med syrer eller baser ud fra thymosinfraktion 5 Download PDFInfo
- Publication number
- DK149094B DK149094B DK478277AA DK478277A DK149094B DK 149094 B DK149094 B DK 149094B DK 478277A A DK478277A A DK 478277AA DK 478277 A DK478277 A DK 478277A DK 149094 B DK149094 B DK 149094B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- thymosin
- glu
- buffer
- lys
- thr
- Prior art date
Links
- 108700016958 thymosin fraction 5 Proteins 0.000 title claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 3
- 108010046075 Thymosin Proteins 0.000 claims description 12
- 102000007501 Thymosin Human genes 0.000 claims description 12
- LCJVIYPJPCBWKS-NXPQJCNCSA-N thymosin Chemical compound SC[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H]([C@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(O)=O LCJVIYPJPCBWKS-NXPQJCNCSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 11
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 5
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- VJMAITQRABEEKP-UHFFFAOYSA-N [6-(phenylmethoxymethyl)-1,4-dioxan-2-yl]methyl acetate Chemical compound O1C(COC(=O)C)COCC1COCC1=CC=CC=C1 VJMAITQRABEEKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 2-diethylaminoethyl Chemical group 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000034655 MIF Human genes 0.000 description 1
- 108010048043 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100037791 Macrophage migration inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 1
- 108010078233 Thymalfasin Proteins 0.000 description 1
- 101800001530 Thymosin alpha Proteins 0.000 description 1
- 102400000800 Thymosin alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- 239000008062 guanidine hydrochloride buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N thymalfasin Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N 0.000 description 1
- 229960004231 thymalfasin Drugs 0.000 description 1
- 239000000724 thymus hormone Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57581—Thymosin; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
149094
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af det hidtil ukendte thymosin eller fysiologisk acceptable salte deraf med syrer eller baser ud fra thymosin fraktion 5.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i kravets 5 kendetegnende del angivne.
Det er i vore dage en alment anerkendt kendsgerning, at thymus har én central betydning for udviklingen og ældningen af immunsystemet hos mennesker og dyr. Selv om der endnu kun eksisterer ringe viden om den molekylære mekanisme, hvorved thymus styrer T-cellernes 10 udvikling, tyder det på, at en væsentlig del af denne mekanisme styres hormonalt. Thymus producerer en gruppe af polypeptider, som kaldes thymosin, og måske et antal andre thymushormoner og/eller thymusfaktorer, som spiller en vigtig rolle for T-cellernes modning, differentiering og funktion. Det har vist sig, at thymosinet inducerer 15 T-cellernes differentiering og forstærker immunologiske funktioner hos genetisk athymiske mus, hos fuldvoksne thymektomerede mus, hos NZB-mus med stærke autoimmunreaktioner, hos mus med tumorer og hos mus med en casein-induceret amyloidose.
Det er kendt, at thymusfraktion 5 er et virksomt immunpotenserende 20 præparat, som kan virke ligesom thymus ved genoprettelsen af immunfunktioner hos individer uden thymus og/eller uden immunsystem. Vedvarende kliniske forsøg med thymusfraktion 5 synes at begrunde . formodningen om, at thymosinet forhøjer T-cellernes antal både hos børn, som lider af en thymus-afhængig primær immundefekt, og ved 25 kræftsygdomme med indskrænket immunforsvar.
Ved analytiske metoder kan det vises, at thymusfraktion 5 består af 10-15 hoved- og 20 eller flere bibestanddele med en molekylvægt på mellem 1000 og 15000.
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af 30 et i thymosinfraktion 5 forekommende surt polypeptid, som kaldes thymosin a^, og hvis aminosyresekvens har kunnet opklares, ved isolering og renfremstilling ud fra denne thymusfraktion 5. Thymosin 2 149094 a.j viser ved forskellige in-vitro- og /n-wVo-tests, som giver et mål for T-celledifferentieringen og -funktionen, i sammenligning med thymosinfraktion 5 en 10 - 1000 gange så stor aktivitet.
Thymosin har en molekylvægt på 3108, en pl-værdi i området 5 4,0-4,3 (bestemt ved isoelektrisk fokusering i en gel ved en pH-værdi i området 3-5) og den følgende aminosyresekvens: (N-Acetyl)-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-lle-Thr-Thr-
Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH.
Isoleringen og renfremstillingen af thymosin ud fra thymosinfrakti-10 on 5 sker ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen ved en kombination af ionbytterchromatografi og gelfiltrering på følgende måde: a) Den lyofiliserede thymosinfraktion 5 chromatograferes på en kolonne med carboxymethylcellulose i en natriumacetat/2-mercaptoethanol-puffer, som er 10 millimolær med hensyn til natriumacetat og 1,0 15 millimolær med hensyn til 2-mercaptoethanol, og som har en pH-værdi på 5,0, hvorhos kolonnen først vaskes med denne pufferopløsning og derefter elueres med en lineær gradient af denne puffer og en 1:1 (vol/vol) blanding af denne puffer og pufferen med et indhold på 1,0M natriumchlorid.
20 b) Den første i trin a) vundne "proteintop" fraktioneres på en dex-trangelkolonne (Sephadex G-25) under anvendelse af sterilt vand.
c) Den anden i trin b) vundne "proteintop" chromatograferes på en kolonne med 2-diethylaminoethyl-cellulose (DE-32), i tris(hydroxyme-thyl)aminomethan(tris)/2-mercaptoethanol-pufferopløsning, der er 50 25 mM med hensyn til tris og 1,0 mM med hensyn til 2-mercaptoethanol og med pH-værdi 8,0. Der elueres først med denne puffer og derpå med en lineær gradient af denne puffer og denne puffer med et indhold på 0,8M natriumchlorid.
d) De fraktioner, som indeholder den første sjettedel af de i trin c) 30 vundne "proteintoppe", forenes og renses yderligere på en dextran- 3 149094 / gelkolonne (Sephadex G-75) i en guanidinhydrochlorid/tris-puffer, der er 6,OM med hensyn til guanidinhydrochlorid og 10 milliM med hensyn til tris og med en pH-værdi på 7,5.
e) Til slut afsaltes de midterste fraktioner af de i trin d) vundne 5 "proteintoppe" på en dextrangelkolonne (Sephadex G-10) under anvendelse af sterilt vand.
Det fremkomne thymosin kan derefter om ønsket omdannes til et fysiologisk acceptabelt salt deraf med en syre eller base.
Eksempler på sådanne salte er natrium- eller kaliumsaltet, salte med 10 stærke organiske baser såsom guanidin eller syreadditionssalte såsom hydrochlorid, hydrobromid, sulfat, phosphat, malat, maleat, acetat, citrat, succinat, benzoat og ascorbat.
Den således fremstillede, rensede proteinfraktion (udbytte 0,6%) identificeres som thymosin med den ovenfor angivne aminosyresek-15 vens. Præparatet er frit for carbonhydrater og nucleotider, Strukturopklaringen og bestemmelsen af aminosyresekvensen sker ved de almindelige sædvanlige metoder, dvs. ved enzymatisk nedbrydning med trypsin, chymotrypsin, thermolysin eller subtilisin, opspaltning af fragmenterne ved papirelektroforese og/eller chromatografi og 20 Edman-nedbrydning af de enkelte peptidfragmenter.
Af den nedenstående tabel fremgår den med faktoren 10-1000 gange større biologiske aktivitet af thymosin α^, sammenlignet med aktiviteten af thymusfraktion 5 ved tre kendte bioforsøg, nemlig mitogentes-ten på mus, lymphokin-testen (en in-vitro-test, hvorved produktionen 25 af makrophagmigrationshæmningsfaktoren, MIF, måles) og E-rosette-testen med menneskelige lymfocyter.
Claims (1)
10 Thymosin α-j kan til mennesker og pattedyr administreres parenteralt, nemlig intravenøst, subcutant eller intramuskulært. Ved intravenøs administration ligger den daglige dosis sædvanligvis i området 1-100 lig/kg legemsvægt. Det er selvfølgeligt, at den varierer fra tilfælde til tilfælde og afhænger af sygdommens art, dens styrke og varighed. En 15 hensigtsmæssig farmaceutisk dosisenhed er 1 mg lyofiliseret thymosin ct.|, som kort før anvendelsen kan opløses i sterilt vand eller en kogsaltopløsning. Fremgangsmåde til fremstilling af thymosin med aminosyresekvensen 20 (N-Acetyl)-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-lle-Thr- Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH eller fysiologisk acceptable salte deraf med syrer eller baser ud fra thymosinfraktion 5, kendetegnet ved, 25 a) at den lyofiliserede thymosinfraktion 5 chromatograferes på en kolonne med carboxymethylcelluJose i en natri umacetat/2-mercapto-ethanol-puffer, der er 10 milliM med hensyn til natriumacetat og 1,0 milliM med hensyn til 2-mercaptoethanol og med pH-vaerdi 5,0, hvorhos kolonnen først vaskes med denne puffer og derpå elueres med en 30 lineær gradient af denne puffer og en 1:1 (vol/vol) blanding af denne puffer og pufferen med et indhold på 1,0M natriumchlorid,
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73663876A | 1976-10-28 | 1976-10-28 | |
| US73663876 | 1976-10-28 | ||
| US76663877 | 1977-02-08 | ||
| US05/766,638 US4079127A (en) | 1976-10-28 | 1977-02-08 | Thymosin alpha 1 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK478277A DK478277A (da) | 1978-04-29 |
| DK149094B true DK149094B (da) | 1986-01-20 |
| DK149094C DK149094C (da) | 1986-06-16 |
Family
ID=27113070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK478277A DK149094C (da) | 1976-10-28 | 1977-10-27 | Fremgangsmaade til fremstilling af thymosin alfa1 eller fysiologisk acceptable salte deraf med syrer eller baser ud fra thymosinfraktion 5 |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5411220A (da) |
| AR (1) | AR214903A1 (da) |
| AT (1) | AT362493B (da) |
| AU (1) | AU514996B2 (da) |
| CA (1) | CA1101842A (da) |
| CH (1) | CH633258A5 (da) |
| DE (1) | DE2748213A1 (da) |
| DK (1) | DK149094C (da) |
| ES (1) | ES463588A1 (da) |
| FI (1) | FI56317C (da) |
| FR (1) | FR2369248A1 (da) |
| GB (1) | GB1590457A (da) |
| IL (1) | IL53218A (da) |
| IT (1) | IT1195254B (da) |
| LU (1) | LU78395A1 (da) |
| MC (1) | MC1167A1 (da) |
| NL (1) | NL188699C (da) |
| NO (1) | NO143346C (da) |
| NZ (1) | NZ185519A (da) |
| PT (1) | PT67204B (da) |
| SE (1) | SE442479B (da) |
| YU (1) | YU40314B (da) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2919592A1 (de) * | 1979-05-15 | 1981-01-15 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur herstellung von thymosin- alpha 1 und derivaten davon |
| US4339427A (en) * | 1980-04-14 | 1982-07-13 | Hoffmann-La Roche Inc. | Radioimmunoassay of thymosinα |
| FR2492663B1 (fr) * | 1980-10-24 | 1985-11-08 | Vtoroi Mo G | Produit medicamenteux regulateur du t-systeme de l'immunite et son procede de preparation |
| DE3137231A1 (de) * | 1981-09-18 | 1983-04-14 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen | Bis-thymosin(alpha)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)-verbindungen |
| JPH01250018A (ja) * | 1988-03-30 | 1989-10-05 | Noble Sangyo Kk | 電子計測器用変位検知器 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1195980A (en) * | 1966-08-24 | 1970-06-24 | Univ Yeshiva | Hormone-Like Preparations Derived from Thymus Gland and Methods of Producing the Same. |
-
1977
- 1977-10-05 CH CH1216177A patent/CH633258A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-10-14 AU AU29699/77A patent/AU514996B2/en not_active Expired
- 1977-10-25 IL IL53218A patent/IL53218A/xx unknown
- 1977-10-26 JP JP12766677A patent/JPS5411220A/ja active Granted
- 1977-10-26 FR FR7732259A patent/FR2369248A1/fr active Granted
- 1977-10-26 NZ NZ185519A patent/NZ185519A/xx unknown
- 1977-10-26 IT IT29020/77A patent/IT1195254B/it active
- 1977-10-26 MC MC771268A patent/MC1167A1/fr unknown
- 1977-10-26 SE SE7712071A patent/SE442479B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-10-26 CA CA289,510A patent/CA1101842A/en not_active Expired
- 1977-10-27 ES ES463588A patent/ES463588A1/es not_active Expired
- 1977-10-27 NO NO773681A patent/NO143346C/no unknown
- 1977-10-27 NL NLAANVRAGE7711814,A patent/NL188699C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-10-27 PT PT67204A patent/PT67204B/pt unknown
- 1977-10-27 AT AT765877A patent/AT362493B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-10-27 DK DK478277A patent/DK149094C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-10-27 YU YU2578/77A patent/YU40314B/xx unknown
- 1977-10-27 AR AR269752A patent/AR214903A1/es active
- 1977-10-27 DE DE19772748213 patent/DE2748213A1/de active Granted
- 1977-10-27 LU LU7778395A patent/LU78395A1/xx unknown
- 1977-10-28 GB GB45001/77A patent/GB1590457A/en not_active Expired
- 1977-10-28 FI FI773221A patent/FI56317C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Meilman et al. | Urinary hydroxyproline peptides | |
| Thomas et al. | Pure brain-derived acidic fibroblast growth factor is a potent angiogenic vascular endothelial cell mitogen with sequence homology to interleukin 1. | |
| Miller et al. | Identification of three genetically distinct collagens by cyanogen bromide cleavage of insoluble human skin and cartilage collagen | |
| US4785079A (en) | Isolation of fibroblast growth factor | |
| IE45819B1 (en) | Shuttle type livestock feeder | |
| US6852700B1 (en) | Colostrinin, and uses thereof | |
| Curtiss et al. | In vivo suppression of the primary immune response by a species of low density serum lipoprotein | |
| JP3285862B2 (ja) | 活性依存性神経栄養因子 | |
| US4614731A (en) | Peptide having immunopotentiating activity similar to thymosin alpha1 | |
| FI120308B (fi) | Peptidi, joka pystyy neutraloimaan tai muuntamaan myeliinin emäksisen proteiinin vasta-aineen tuoton | |
| EP0159289B1 (en) | Immunosuppressant factor | |
| Welte et al. | Human interleukin 2: biochemistry, physiology, and possible pathogenetic role in immunodeficiency syndromes | |
| US4902782A (en) | Isolation of fibroblast growth factor | |
| DK149094B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af thymosin alfa1 eller fysiologisk acceptable salte deraf med syrer eller baser ud fra thymosinfraktion 5 | |
| Lotzová et al. | Analysis of Natural Killer Cell Cytotoxicity of Cancer Patients Treated With Recombinant lnterferon | |
| US4046877A (en) | Method of increasing immunologic competence | |
| US5358707A (en) | Oxidized variants of GM-CSF | |
| Acher et al. | Phylogeny of the neurohypophysial hormones | |
| Meinardi et al. | Studies of substance P | |
| Low et al. | Thymosins: Isolation, structural studies, and biological activities | |
| Kato et al. | Suppression of acute experimental allergic encephalomyelitis by synthetic serum thymic factor: clinical, histopathological, and immunohistochemical studies | |
| US5962331A (en) | Cell growth regulator | |
| Ponder | Effect of basic proteins on the adhesiveness of red cells | |
| EP0326067A2 (en) | Use of cyclophilin as an anti-inflammatory and immunomodulatory agent | |
| CA1056305A (en) | Protein having thymus hormone-like activity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |