DK149611B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af trh-analoge tripeptidamider eller terapeutisk acceptable komplexer eller salte deraf - Google Patents

Analogifremgangsmaade til fremstilling af trh-analoge tripeptidamider eller terapeutisk acceptable komplexer eller salte deraf Download PDF

Info

Publication number
DK149611B
DK149611B DK274680AA DK274680A DK149611B DK 149611 B DK149611 B DK 149611B DK 274680A A DK274680A A DK 274680AA DK 274680 A DK274680 A DK 274680A DK 149611 B DK149611 B DK 149611B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
pro
solution
mmol
evaporated
dissolved
Prior art date
Application number
DK274680AA
Other languages
English (en)
Other versions
DK149611C (da
DK274680A (da
Inventor
Lajos Kisfaludy
Tamas Szirtes
Lajos Balaspiri
Eva Palosi
Laszlo Szporny
Adam Sarkadi
Original Assignee
Richter Gedeon Vegyeszet
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Richter Gedeon Vegyeszet filed Critical Richter Gedeon Vegyeszet
Publication of DK274680A publication Critical patent/DK274680A/da
Publication of DK149611B publication Critical patent/DK149611B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK149611C publication Critical patent/DK149611C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06043—Leu-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C07K5/0825—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp and Glp-amino acid; Derivatives thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

i 149611
Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte TRH-analoge tripeptidamider som virker på det centrale nervesystem og som har den i indledningen til krav 1 viste almene for-5 mel I, hvor X og A har de sammesteds angivne betydninger, eller terapeutisk acceptable komplexer eller salte deraf. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det 1 krav 1’s kendetegnende del angivne.
Disse nye tripeptidamider med den almene formel 10 i er analoger til det såkaldte tyrotropinfrigivende hormon (TRH), der er L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-prolinamid (Glp-His-Pro-NE^), idet en aminosyre, nemlig den i stilling 2 stående L-histidylgruppe er udskiftet med en anden aminosyre svarende til foranstående definitioner.
15 Eksistensen af TRH kendtes allerede i 1960erne, men hor monets struktur blev først opklaret i årene 1969 og 1970, nemlig næsten samtidig af to forskergrupper omkring henholdsvis R. Guillemin og A Schally, se C.Y. Bowers et al. Endocrinology 86, 1143 (1970) og R. Burgus et al., C.R. Acad. Sci. (Paris) 20 269, 1870 (1969).
Tripeptidet TRH blev oprindelig beskrevet som en faktor der regulerer frigørelsen af TSH (det tyreotrope hormon) i hypofysen hos pattedyr; den forskning der beskæftigede sig med dette hormon blev imidlertid drejet i en ny retning da det er-25 kendtes at dette tripeptids biologiske funktion ikke var begrænset til regulering af frigørelsen af det tyreotrope hormon, men også har en virkning på det centrale nervesystem, se N.P. Plotnikoff et al.,Science 178, 417 (1972) og A.J. Prange et al., Lancet 2, 999 (1972) . Det blev da fastslået at TRH foruden den 30 nævnte hormonfunktion også nedsætter varigheden af den af barbiturater eller alkohol forårsagede søvn væsentligt og desuden nedsætter den af forskellige lægemidler bevirkede hypotermi og øger den lokomotoriske aktivitet. En yderligere vigtig faktor blandt de virkninger der udøves på det centrale nervesystem af 35 TRH er hæmning af katalepsi forårsaget af haloperidol. Det forekom herefter ønskværdigt til brug i terapeutisk praksis at fremstille TRH-analoger som kun virker svagt på hypofysen, men som derimod udviser virkninger på det centrale nervesystem som 2 149611 står på højde med eller endog overstiger virkningen derpå af TRH. Til dette fomål er der fremstillet en række sådanne forbindelser som er beskrevet i de tyske offentliggørelsesskrifter nr. 2 343 035, 2 343 037, 2 449 167, 2 514 381, 2 609 154 5 og 2 639 393 samt belgisk patentskrift nr. 819 198. Den forskning på disse områder, hvis resultater og erfaringer er sammenfattet af A.J. Pranne et al. ("The Role of Hormones in Depression", Life Sciences 2J3, 1305, 1977) og af A.V. Schally et al. ("Hypothalamic Regulatory Hormones", Ann. Rev. Biochem.
10 4J, 89, 1978) har imidlertid ikke hidtil kunnet tilfredsstille de af den terapeutiske praksis stillede behov i alle henseender.
Som særligt eksempel på den kendte teknik skal nævnes at der fra tysk offentliggørelsesskrift nr. 26 39 393 ken-15 des TRH-analoge hvor den midterste aminosyregruppe His er udskiftet med Ser eller Bz-Ser. Det fremgår af skriftet at disse forbindelser udmærker sig ved betydelig antidepres-siv virkning, mens hormonvirkningen - dvs. TSH-virkning, der er en uønsket bivirkning - er nedsat i forhold til 20 TRH. I forhold til de fra dette tyske skrift kendte forbindelser udmærker de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser sig ved at hormonvirkningen er elimineret eller praktisk taget elimineret, hvilket fremgår af omstående tabeller 1-3.
25 Fra dansk patentansøgning nr. 1195/77 kendes der forbindelser der måske kan anses for TRH-analoger.
Disse kendte forbindelser differentierer ifølge skriftets tabel 1 i mindre grad mellem hormonvirkningen og CNS-virkningen end de ved den foreliggende opfindelse fremstil-30 lede forbindelser. Blandt virkningerne på det centrale nervesystem synes blot den dopaminpotentierende virkning at være betydelig.
Fra dansk patentansøgning nr. 4522/74 kendes derivater af TRH der er substitueret på aminogruppen i C-terminal 35 stilling. Derved adskiller de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser sig fra de kendte 149611 3 ved at TRHs arainosyresekvens er ændret. De fra DK 4522/74 kendte forbindelser har praktisk taget samme prolaktinud-skillende og antidepressiv virkning som TRH og adskiller sig herved fra de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen 5 fremstillede.
Det skal endelig nævnes at der fra svensk patentskrift nr. 425 659, som svarer til bl.a. dansk patentansøgning nr. 994/75, kendes nogle tilsvarende TRH-analoge tri-peptider, der dog også udviser væsentlige afvigelser fra 10 de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede forbindelser, således er i de kendte forbindelser N-terminalen Kic, Kpc eller Pca (om betydningen af disse forkortelser, i det omfang de ikke fremgår af IUPAC-reglerne, se senere i beskrivelsen), mens den midter-15 ste aminosyrerest er His som i TRH og C-terminalen er Pip,
Pro eller Tea. Det menes at denne strukturforskel betinger den bedre virkning af de ved den foreliggende fremgangsmåde fremstillede forbindelser end af de kendte i henseende til undertrykkelse af hormonvirkningen. Disse forskelle 20 er anskueliggjorte i omstående tabeller 1 og 2.
Det skal i øvrigt bemærkes at de i tabel 2 fra SE 425659 gengivne data vedrørende de derfra kendte forbindelser synes at bevise den fra faglitteraturen [Acta Pharm.
Suec. 16, 95 (1979] stammende urigtige oplysning, ifølge 25 hvilken hormonvirkningen og CNS-virkningen af TRH-analoger ikke kan skille fra hinanden. De i tabel 2 og i tabel 3 gengivne data vedrørende de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser viser i modsætning hertil tydeligt den værdifulde og overraskende egenskab ved disse 30 forbindelser, at man ved hensigtsmæssigt valg af aminosyre-enheder kan fremstille TRH-analoger der i sammenligning med "grundmolekylet" har væsentlig stærkere virkning på nervesystemet, mens deres hormonvirkning er lav.
Det har nu vist sig at man ved udskiftning af hi-35 stidylgruppen i 2-stilling i det af tre aminosyrer opbyggede TRH-molekyle kan opnå at tripeptidets hormonvirkning nedsættes væsentligt samtidig med at virkningen på det centrale nervesystem bibeholdes eller endog forhøjes betydeligt. Særlig fordelagtige har i disse 149611 4 henseender sådanne TRH-analoger vist sig, som i 2-stillingen i stedet for L-histidyIgruppen indeholder en alifatisk amino-syregruppe med lige eller grenet kulstofkæde. Sådanne TRH-ana-loger udviser ved næsten fuldstændigt fravær af hormonvirknin-5 gen en virkning på det centrale nervesystem som overstiger TRHs flere gange.
Til fremstilling af de omhandlede tripeptidamider med den almene formel I kan man ifølge opfindelsen hensigtsmæssigt gå frem som angivet i krav 2.
10 De på den foran beskrevne måde fremstillede tripeptid amider med den almene formel I kan isoleres fra reaktionsblandingen ved krystallisation eller lyofilisering; om ønsket kan de vundne produkter på sædvanlig måde omdannes til komplexer.
Ved den trinvise opbygning af tripeptidmolekylet omsæt-15 tes udgangsforbindelsen med den almene formel Pro-NH-A, der fordelagtigt bruges i overskud, med et aktiveret derivat, fortrinsvis med pentafluorfenylesteren eller eventuelt med et blandet anhydrid af en et beskyttet L-aminosyre med den almene formel Boc-X-OH. Ved anvendelse af pentafluorfenylesteren vindes det 20 tilsvarende beskyttede dipeptidderivat med den almene formel Boc-X-Pro-NH-Apå yderst kort reaktionstid, i løbet af nogle minutter, hvorved produktet let kan isoleres, i de fleste tilfælde i en form som ikke kræver yderligere rensning. Fra det på denne måde vundne beskyttede dipeptidderivat kan man derpå ved 25 acidolyse vinde de tilsvarende dipeptider, hvor endegruppen er fri og som har den almene formel H-X-Pro-A; dette dipeptid omsættes derefter med en pentafluorfenylester af den beskyttede L-pyroglutaminsyre med den almene formel Z-Glp-OPFP, hvorved man vinder det beskyttede tripeptid med den almene formel 30 Z-Glp-X-£ro"NH“A, hvorfra beskyttelsesgruppen Z med fordel kan fjernes ved katalytisk hydrogenering.
Rensning af det dannede slutprodukt kan ske ved simpel krystallisation eller omfældning, om nødvendigt eventuelt også ved søjlekromatografi. I nogle tilfælde kan slutproduktet 35 udpræparareres ved simpel lyofilisering efter fjernelse af biprodukter.
149611 5
Dej ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede tripeptidderivater med den almene formel I er afprøvet for farmakologiske virkninger ved de i det følgende beskrevne biologiske metoder.
5 1) Hæmning af haloperidol-katalepsi hos rotter (se J.
Delay og P. Deniker: Compt. Rend. Cong. Med. Alenistes Neurologistes, 19, 497, Luxemburg 1952) 40 mg/kg haloperidol, dvs. 4-(p-klorfenyl)-l-[3-(p-fluorbenzoyl)-propyl]-piperidin-4-ol blev indgivet subkutant 10 til dyrene og efter 120 minutter blev katalepsiens indtræden kontrolleret; derefter inddeltes rotterne i grupper på hver 10 dyr og de behandledes med intravenøst indgivne doser af TRH eller af de til afprøvning værende TRH-analoge tripeptider. Kontrolgruppernes dyr behandledes med fysiologisk kogsaltopløs-15 ning. 15, 30, 90 og 120 Minutter efter behandlingen undersøgtes de enkelte forbindelsers katalepsiophævende virkning. De dyr blev anset for kataleptiske, som efter at være blevet anbragt med forfødderne på en 7 cm høj søjle ikke har korrigeret deres position i løbet af 30 sekunder.
20 Ud fra antallet af dyr der ikke udviste katalepsi fandt man ved probit-analyse frem til ED^q-værdierne for de enkelte virksomme stoffer.
Disse forsøg gennemførtes med hanrotter af stammen Wistar og med en vægt på hver 160 til 180 g.
25 2) Potentiering af den af L-Dopa forårsagede lokomoto- riske aktivitet hos mus &se The Thyroid Axis, Drugs and Behavior, side 116, af A. J. Prage Jr., Raven Press, New York 1974).
Dyrene fik først interperitonealt indgivet 40 mg/kg 30 N-metyl-N-propargylbenzylamin (pargyline) og derefter på samme måde 20 mg/kg enten TRH eller det til undersøgelse værende tripeptid, og til slut ligeledes intraperitonealt 100 mg/kg L-dopa. 30, 60 og 90 Minutter efter denne behandling måltes dyrenes lokomotoriske aktivitet; de fundne værdier er i om-35 stående tabel angivet i procent af de værdier der opnåedes hos de med TRH behandlede dyr. Til hvert af disse forsøg brugtes der 15 hanmus med en vægt på hver 18 til 22 g.
6 149811 3) Reserpin-hypoterxni-reverserende virkning hos mus Cse B.M. Askew, Life Sci., 2, 725-730, 1963).
Der anvendtes hanmus med en vægt på hver 18 til 22 g og inddelt i grupper på hver 10 dyr. Hvert dyr fik intraperi-5 tonealt indgivet 5 mg/kg reserpin, og efter 16 timer behandledes dyrene med doser på 20 mg/kg TRH eller det til undersøgelse værende tripeptid.
Dyrenes rektale temperatur måltes før behandlingen med reserpin (i omstående tabel betegnet "norm.") og 16 timer 10 efter behandlingen med reserpin (i tabellen betegnet "res.") og yderligere 1 eller 2 timer efter indgiften af det til undersøgelse værende tripeptid (i tabellen betegnet "efter behandl."). I tabellen er der angivet gennemsnitsværdier for rektaltempera-turerne hos de 10 mus i gruppen.
15 4) Påvirkning af varigheden af den af hexobarbitalfrem kaldte søvn.
Der anvendtes hanmus inddelt i grupper på hver 10 mus, og hver mus fik intravenøst indgivet 60 mg/kg hexobarbital-natrium (natrium-enhexymal; natriumsaltet af 5-(1-cyklohexen-20 l-yl)-l,5-dimetylbarbitursyre). Efter 10 minutter blev dyrene behandlet intraperitonealt med en dosis på 20 mg/kg TRH eller det til undersøgelse værende tripeptid. Søvntiderne angives i omstående tabel i værdier der udtrykkes i procent af søvntiden for dyrene i kontrolgruppen (idet der er tale om gennem-25 snitsværdier for 10 dyr).
5) Ætanolnarkose (se J. M. Cott et al., J. Pharmacol.
Exp. Ther. 196, 594, 1976).
Der anvendtes grupper på 20 mus af begge køn, hver med en vægt på 18 til 22 g. Til hvert dyr .
30 blev der intraperitonealt indgivet 4,5 g ætanBi/og^e^lrmTSægt minutter behandledes derpå dyrene intraperitonealt med doser på 20 mg/kg af det til undersøgelse værende tripeptid. Søvntiderne er i omstående tabel angivet i procent af søvntiden for dyrene i kontrolgruppen (gennemsnitsværdier for 20 dyr).
35 6) Hormonaktivitet (TSH-virkning) hos rotter.
Wistar-hanrotter med hver en vægt på ca. 200 g inddeltes i grupper på 7 til 8 dyr og behandledes intravenøst med en dosis på 20 mg/kg TRH eller det til undersøgelse værende 7 1436!1 tripeptid. Dyrenes TSH-reaktion blev fastslået 15 minutter efter behandlingen med TRH eller med den TRH-analoge forbind-plasma delse/ idet dyrets/underkastedes radioimmun-undersøgelse. De relative virkningsgrader blev beregnet ved firpunktsmetoden 5 ved hjælp af en TPA 101-computer, hvorved virkningshøjden af TRH arbitrært sattes til 100.
De på de foran beskrevne farmakologiske måder fundne data for de biologiske virkninger er sammenfattet i nedenstående tabel 1 for en del af de omhandlede forbindelser med den 10 almene formel I.
8 149611 •Η Μ I c οο ο Ο Π3 * *» ^ .¾ ΟΠΟ ο > Η Ό ΙΌ Η Η ·Η 0 η iliH ϋ c C «ί 1) Γ^«3*σ> m ro> β β r^r^ro ro -μ ·©. ctP 0 Φ
63 tn .¾ P
λ a)
« S
•H 2
Jq & p Ό ,-ι -¾1 r-' vo
HJ Η Ο H r~ 00 LO
Λ +> Ή Η Η ο c to -y χ > § (U Ό. ο¥> a μ______.
.3 d · Ο Ν a CM
aoe-p - - - CTo ίο cm η οι in o a) a co co cm co tn * Φ PJ μ ·° 'a* vo cm in β p · - - - n_i jj a) -p vo cm in ctJ (0 -P H rorocM ro P M-t
Ui Φ Φ CD, . σι η η» σν •η -η g in ' - ' ρ g tu α) inr-'cri m
Q) H +) p CMCMH CM
tn Φ H
M 4-> rd CDO-P g cm ro ro cm > OtA! P “ *· > 0)>ι<1) o ^ vo vo vo . .
a a P c ro ro ro ro CC
-.---- -M *M
H q.) o - 6 S
t0 4-> 4-> O vr Ol CO O .nr-,
H OD σι Η Η H O S -J
0) CHg-P CM rH H
Λ β O -H i fsj Π3 Η M > ^ ™ E*t Ρ O Η β i, i i O H 4-1 Η +1+1 •w i Λ! λ» g o voin^ o __ _ +Jt0(fl vDinoH o ·ο·σ\ β Pi 5-1 HH H oovo d) oy o) g i2 +J Q tn 4-1 ro >+ O I Η Ή ^ σι [" o CL.jp φ o m m1 cm o
___g.· " 04_d—, Η H
Η M ™ 4-1 O · φόη C O o m m +!+i Η tn -d ^ -1 H ly; |y;
Cji p D, g -l H I·*· IX* β Φ Φ -- -H DiH O1 COlOO^^C» “ g H 4-1 in \ ^ æuieo & ° Ti a a a w g hhoo oo -p __> *ØL ·· <1 w Ό i <j a a a i a h 4-> s β β i -p > 0 -PS.
p j tn a a p i 1 3 Φ Η x gi a o i β o β O, to Φ β X to Η V! > Η Λ Φ 4-> o ^_ s s <c a 63 149611 9
Af de i foranstående viste data ses det at man ved udskiftning af His med en alifatisk aminosyre med lige eller grenet kulstofkæde i TRH-molekylet opnår ophør eller i det mindste væsentlig nedsættelse af udskillelsen af TSH, hvorved 5 fx hæmningen af den af haloperidol bevirkede katalepsi bliver 2 til 7 gange stærkere. Nogle nye TRH-analoger udviser også væsentlig potentiering af den lokomotoriske aktivitet eller nedsættelse af hexobarbital- eller ætanol-søvntiden.
Som nævnt foran er der foretaget sammenligningsforsøg 10 med forbindelser kendt fra SE 425659. De fremgår af nedenstående tabel 2, der er omtalt foran. I tabel 3 er CNS-virknin-gerne nærmere specificeret på fire af de virkningskategorier der er nærmere belyst foran, og for hvis vedkommende forsøgsteknikken ligeledes er beskrevet foran. I både tabel 2 15 og 3 er virkningen af TRH arbitrært ansat til værdien 1.
Tabel 2
Stof_Hormonvirkning CNS-virkning
Naturligt TRH 1 1 K§ndt_fra_SE_425_659 20 Kpc-His-Tca-NH2 1 8
Kpc-His-Pro-NH2 1 4 DL-Kpc-His-Pro-NH2 0,2 3
Kic-His-Pro-NH2 0,1 1
Kic-His-Pro-OCH3 0,001 0 25 fremstillet_ifølge_ogfindelsen
Glp-Nva-Pro-NH2 0 7
Glp-Nle-Pro-NH2 0,038 5
Glp-Abu-Pro-NH2 0 1 149611 ίο
Tabel 3
Stof Hormonvirkning CNS-virkning
_A B C D
TRH 1 1111 5 Fremstillet ifølge opfindelsen_______
Glp-Nva-Pro-NH^ 0 7 2,5 svag 0,35
Glp-Nle-Pro-NH2 0,038 5 2,5 0,5 0,4 A = Hæmning af haloperidol-katalepsi 10 B = Potentiering af den lokomotoriske aktivitet af DOPA . C = Antagonisering af hexobarbitalnarkose D — Antagonisering af ætanolnarkose
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede tripeptider såvel som deres farmaceutisk acceptable salte el-15 ler komplexer kan anvendes i terapien i form af sædvanlige lægemiddelpræparater. Disse lægemiddelpræparater indeholder et af de omhandlede virksomme stoffer sammen med uorganiske eller organiske bærestoffer som egner sig til enteral eller parenteral indgift. Lægemiddelpræparaterne kan fx fremstilles i form af 20 faste lyofilisater, sammen med hvilke der kan bruges bærestoffer, fx kulhydrater, der ikke reagérer med med peptiderne; de kan imidlertid også foreligge i form af koncentrerede eller fortyndede suspensioner eller emulsioner eller tabletter eller inj ektionspræparater.
25 Den praktiske udførelse af fremgangsmåden ifølge opfin delsen belyses nærmere ved de efterfølgende eksempler. De i disse eksempler anvendte forkortelser svarer til de i peptidkemien sædvanligt anvendte, se J. Biol. Chem. 247, 977 (1972). Herudover er der anvendt følgende forkortelser; 30 Ada L-2-aminodekansyre
Abu L-2-aminosmørsyre Cha L-cyklohexylalanin DAE 2-dimetylaminoætyl DCC dicyklohexylkarbodiimid 35 PFPOH pentafluorfenol DCU dicyklohexylurinstof DMFA dimetylformamid 11 143611
De i eksemplerne angivne smeltepunkter for forbindelserne bestemtes med et smeltepunkt-måleapparat efter Dr.
Tottoli (Buehi). De optiske rotationer måltes ved hjælp åf et polarimeter af typen Perkin-Elmer 141. I de tyndlagskromato-5 grafiske undersøgelser eller adskillelser anvendtes der silika-plader af "Kieselgel G efter Stahl" fra E. Merck i Darmstadt.
Til fremkaldelse af kromatogrammerne anvendtes følgende opløsningsmiddelblandinger : (1) kloroform/metanol 9:1 10 (2) ætylacetat/(pyridin/eddikesyre/vand 20:6:11) 9:1 (3) ætylacetat/(pyrddin/eddikesyre/vand 20:6:11) 8:2 (4) ætylacetat/(pyridin/eddikesyre/vand 20:6:11) 3:2
Til fremkaldelse af pletterne anvendtes en ninhydrinop-løsning; efter sprøjtningen tørredes pladerne ca. 5 minutter 15 ved 105°C. Derefter anbragtes kromatogrammet i klorgas og efter luftning med o-tolidin-kaliumjodidopløsning fremkaldtes der.
Til søjlekromatografisk rensning af produkterne anvendtes "Kieselgel G" fra E. Merck, nemlig silikagel med patikel-20 størrelsen 0,062 til 0,2 mm.
Til inddampning af opløsningen i vakuum anvendtes der en "Rotavapor R" (Biichi) vakuum-evaporator og inddampningen gennemførtes ved temperaturer der ikke overskred 50°c.
Pentafluorfenylestrene af BOC-beskyttede aminosyrer frem-25 stilledes efter den af Kisfaludy et al. (Ann. 1973, 1421) angivne metode.
De nærmere enkeltheder ved fremstillingen af TRH-analo-gerne fremgår af efterfølgende eksempler.
Eksempel 1 30 L-Pyroglutamyl-L-norleucyl-Ii-prolinamid
Trin 1: L-norleucyl-L-prolinamid-hydroklorid 2,28 g (20 mmol) H-Pro-NH^ og 3,97 g (10 mmol) BOC-Nle-OPPP (se Kisfaludy et al, Hoppe-Sayler's Z. Physiol. Chemie 359, 887, 1978) opløses i 40 ml DMFA og efter 5 minutters hen-35 ståen inddampes opløsningen i vakuum. Den som remanens vundne olie opløses i 50 ml kloroform og opløsningen udrystes med 3 x 10 ml 149611 12 N saltsyreopløsning, 3 x 10 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning og til sidst 10 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Fordampningsremanensen opløses i 5 ml ætylacetat og til opløsningen sættes der 10 ml 5N saltsyreopløs-5 ning i ætylacetat. Efter 30 minutter fortyndes reaktionsblandingen med æter og det dannede bundfald frafiltreres og tørres i vakuum over vandfrit natriumhydroxyd. Der vindes på denne måde 2,48 g H-Nle-Pro-NH2,HCl svarende til 94% af det teoretiske udbytte beregnet på BOC-Nle-OPFP. (4) = 0,20.
10 Trin 2: Benzyloxykarbonyl-L-pyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolin- amid_' _;_; _ 1,05 g (4 mmol) H-Nle-Pro-NH2,HCl opløses i 10 ml DMFA og til opløsningen sættes under isafkøling og omrøring 0,56 ml (4 mmol) triætylamin og 1,89 g (4,4 mmol) Z-Glp-OPFP. Efter 5 15 minutters omrøring tilsættes yderligere 0,56 ml (4 mmol) triætylamin; blandingen omrøres i 20 minutter og derefter inddampes den i vakuum til tørhed. Fordampningsremanensen opløses i 40 ml kloroform og opløsningen udrystes med 2 x 10 ml N saltsyre, 3 x 10 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning og til sidst 20 10 ml vand, tørres derpå med vandfrit natriumsulfat og inddam pes i vakuum. Den som remanens vundne olie bringes til krystallisation under æter og det på denne måde vundne råprodukt (1,52 g) omkrystalliseres fra 8 ml ætylacetat. Der vindes 1,36 g (72%) Z-Glp-Nle-Pro-NH2 med smp. 146-148°C. Rf(3) = 25 0,32. [a]^ = -79,8° (c = 1 i eddikesyre).
Beregnet for C24H320gN4 (472,55): C 61,00 H 6,83 N 11,86 Fundet: C 60,90 H 7,04 N 11,87%.
Trin 3: L-pyroglutaitiyl-L-norleucyl-L-prolinamid 1,16 g (2,46 mmol) Z-Glp-Nle-Pro-NH2 opløses i 25 ml 30 metanol, der sættes 0,2 g katalysator af 10%s palladium på aktive kul til opløsningen og der ledes i 30 minutter hydrogengas igennem den. Katalysatoren frafiltreres derefter og filtratet inddampes. Den faste, amorfe remanens rives med æter og frafiltreres. Det på denne måde vundne råprodukt (0,72 g) 35 opløses i vand, opløsningen klares med aktivt kul og den vandklare opløsning frysetørres. Der vindes 0,66 g (79,5%) 149611 13
Glp-Nle-Pro-NH2. Rf(4) = 0,43. [α]ρ5 = -77,1° (c = 1 i eddikesyre) .
Aminosyreanalyse: Glu 0,96 (1,0), Nle 1,00 (1,0), Pro 1,00 (1,0).
5 Eksempel 2 L-Pyroglutamyl-L-norvalyl-L-prolinaatid Trin 1: L-Norvalyl-L-prolinamid-hydroklorid 2,2 g (20 mmol) H-Pro-NH2 og 3,83 g (10 mmol) BOC-Nva-OPFP (se L. Kisfaludy et al, Hoppe-Seyler's. Z. Physiol. Chemie 10 395, 887, 1978) opløses i 40 ml DMFA og opløsningen henstår i 5 minutter og inddampes derefter i vakuum. Den som remanens vundne olie opløses i 50 ml kloroform og opløsningen udrystes med 3 x 10 ml N saltsyre, 3 x 10 ml N natriumhydrogenkarbonat-opløsning og til sidst 10 ml vand, tørres over vandfrit natri-15 umsulfat og inddampes. Fordampningsremanensen opløses i 5 ml ætylacetat og der tilsættes 10 ml 5N saltsyreopløsning i ætylacetat. Efter 30 minutter fortyndes reaktionsblandingen med æter og det dannede bundfald frafiltreres og tørres i vakuum over vandfrit natriumhydroxyd. På denne måde vindes der 1,83 g 20 H-Nva-Pro-NH2,HCl, svarende til 73% af det på BOC-Nva-OPFP beregnede teoretiske udbytte. R^(4) = 0,10.
Trin 2: Benzyloxykarbonyl-L·-pyroglutamyi-L-norvalyl-l·-prolinamid 1,25 g (5 mmol) H-Nva-Pro-NH2,HC1 opslæmmes i 15 ml DMFA og under isafkøling og omrøring tilsættes der 0,7 ml 25 (5 mmol) triætylamin og 2,15 g (5 mmol) Z-Glp-OPFP. Efter 5 mi nutter tilsættes der yderligere 0,7 ml (5 mmol) triætylamin, blandingen omrøres i yderligere 20 minutter og inddampes derefter i vakuum. Fordampningsremanensen opløses i 50 ml kloroform og opløsningen udrystes med 3 x 10 ml N saltsyre, 3 x 10 ml N 30 natriumhydrogenkarbonatopløsning og til sidst 10 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den som remanens vundne olie bringes til krystallisation under æter og det på denne måde vundne råprodukt (1,80 g) omkrystalliseres fra en blanding af ætanol og æter. Der vindes 1,66 g (72%) Z-Glp-Nva-35 Pro-NH2 med smp. 166-167°C (Rf(3) = 0,29. [a]£5 = -87,5° (c = 14 T49611 1 i eddikesyre).
Beregnet for C23H30OgN4 ( 458,52): C 60,25 H 6,59 N 12,22 Fundet: C 60,08 H 6,70 N 12,15%.
Trin 3: Ii-Pyroglutarnyl-Ii-norvalyl-L-prolinamid 5 1,42 g (3,1 mmol) Z-Glp-Nva-Pro-NH2 opløses i 30 ml metanol, der sættes 0,2 g 10%s palladium-på-kul-katalysator til opløsningen og der ledes hydrogengas igennem den i 30 minutter. Derefter frafiltreres katalysatoren og filtratet inddampes. Den faste, amorfe remanens rives med æter og fraskil-10 les. Det på denne måde vundne råprodukt opløses i vand. Opløsningen klares med aktive kul og den vandklare opløsning frysetørres. Der vindes 0,95 g (94%) Glp-Nva-Pro-NI^· (4) = 0,36.
[a]^ = -87,0° (c = 1 i eddikesyre).
Aminosyreanalyse: Glu 0,97 (1,0), Nva 1,09 (1,0), Pro 15 1,00 (1,0).
Eksempel 3 L-Pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamid Trin 1: L-Prolyl-L-prolinamid-hydroklorid 2,28 g (20 mmol) H-Pro-NH2 og 3,81 g (10 mmol) BOC-Pro-20 OPFP opløses i 40 ml DMFA og opløsningen udrystes med 3 x 10 ml N saltsyre, 3 x 10 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning og 10 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Fordampningsremanensen opløses i 5 ml ætylacetat og der tilsættes 10 ml 5N saltsyreopløsning i ætylacetat. Efter 30 minutter 25 fortyndes reaktionsblandingen med æter og det dannede bundfald frafiltreres og tørres i vakuum over vandfrit natriumhydroxyd.
Der vindes på denne måde 2,06 g H-Pro-Pro-NH2,HCl (83% af det på BOC-Pro-OPFP beregnede teoretiske udbytte). Rf(4) = 0,05.
Trin 2: Benzyloxykarbonyl-l·-pyroglutamyl-l·-prolyl-L-prolinamid 30 0,75 g (3 mmol) H-Pro-Pro-NH2,HC1 opslæmmes i 10 ml DMFA
og under isafkøling og omrøring tilsættes der 0,42 ml (3 mmol) triætylamin og 1,35 g (3,15 mmol) Z-Glp-OPFP. Efter 5 minutter tilsættes der yderligere 0,42 ml (3 mmol) triætylamin og efter yderligere 10 minutters omrøring inddampes den dannede tykke 149611 15 suspension i vakuum. Den krystallinske fordampningsremanens rives med 8 ml ætanol og henstår 3 timer i køleskab. Det dannede bundfald filtreres derefter og tørres. Der vindes på denne måde 1,0 g (73%) Z-Glp-Pro-Pro-NH2 med smp. 247-248°C (sønder-5 deling). Rf(3) = 0,19. [a]^ = -82,8° (c = 1 i eddikesyre). Beregnet for C23®28®6^4 (456,50): C 60,52 H 6,18 N 12,27 Pundet: C 60,03 H 6,20 N 12,20%.
Trin 3: L-Pyroglutamyl-L-prolyi-L-prolinamid 1,0 g (2,2 mmol) Z-Glp-Pro-Pro-NH2 opløses i 50 ml eddi-10 kesyre, der tilsættes 0,2 g 10%s palladium-på-kul-katalysator og der ledes hydrogengas gennem blandingen i 1 time. Katalysatoren frafiltreres derefter og filtratet inddampes hvorefter remanensen rives med æter. Det på denne måde vundne amorfe råprodukt (0,60 g) opløses i vand, opløsningen klares med aktive 15 kul og den vandklare opløsning frysetørres. Der vindes herved 0,50 g (70%) Glp-Pro-Pro-NH2. Rf(4) = 0,10. [a]^5 = -223,1° (c = 1 i eddikesyre).
Eksempel 4 L-Pyroglutarnyl-L-valyl-L-prolinamid 20 Trin 1: L-Valyl-L-prolinamid-hydroklorid 0,49 g (4,2 mmol) H-Pro-NH2 og 0,82 g (2,14 mmol) BOC-Val-OPFP opløses i 10 ml DMFA og efter 30 minutters henstand inddampes opløsningen i vakuum. Den som fordampningsremanens vundne olie opløses i 10 ml kloroform og opløsningen udrystes 25 med 2 x 3 ml N saltsyre, 3 x 3 ml N natriumhydrogenkarbonatop-løsning og til sidst 3 ml vand, hvorpå den tørres ved hjælp af vandfrit natriumsulfat og inddampes. Fordampningsremanensen opløses i 3 ml ætylacetat og der tilsættes 3 ml 5N saltsyreopløsning i ætylacetat. Efter 1 times henstand fortyndes reakti-30 onsblandingen med æter, bundfaldet frafiltreres og det tør^eg^a^uum over vandfrit natriumhydroxyd. Der vindes på denne måde 0,51 g H-Val-Pro-NH2,HCl (95% af det på BOC-Val-OPFP beregnede teoretiske udbytte). R^(4) = 0,10.
149611 16
Trin 2: Benzyloxykarbonyl-L-pyroglutamyl-L-valyl-L-prolinamid 0,38 g (1,52 mmol) H-Val-Pro-NH2,HCl opslæmmes i 10 ml DMFA og under isafkøling og omrøring tilsættes der 0,22 ml (1,52 mmol) triætylamin og 0,69 g (1,6 mmol) Z-Glp-OPFP. Efter 5 10 minutter tilsættes der yderligere 0,22 ml (1,52 mmol) tri ætylamin og efter yderligere 30 minutters omrøring inddampes reaktionsblandingen i vakuum. Fordampningsremanensen opløses i 15 ml kloroform og opløsningen udrystes med 2 x 5 ml N saltsyre, 3 x 5 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning og 5 ml 10 vand, tørres ved hjælp af vandfrit natriumsulfat og inddampes i vakuum. Den olieagtige remanens bringes -til krystallisation med æter; der vindes på denne måde 0,54 g (77%) Z-Glp-Val-Pro-NH2 med smp. 116-118°C. Rf(3) = 0,30. [a]^ = -100,5° (c = 1 i eddikesyre).
15 Trin 3: Ii-Pyroglutarnyl-L-valyl-L-prolinamid 9,65 g (21,2 mmol) Z-Glp-Val-Pro-NH2 opløses i 300 ml vand og efter tilsætning af 2 g 10%s palladium-på-aktive-kul-katalysator ledes der hydrogengas gennem opløsningen i 5 timer. Katalysatoren frafiltreres derefter og filtratet inddampes.
20 Den som remanens vundne olie opløses i ætanol, opløsningen inddampes og denne operation gentages yderligere to gange. Den til sidst vundne amorfe, faste remanens rives med æter; der vindes på denne måde 4,47 g (65%) Glp-Val-Pro-NH2. R^ (4) = 0,34. [a]^ = -104,9° (c = 1 i eddikesyre).
25 Aminosyreanalyse: Glu 1,03 (1,01), Val 1,00 (1,0), Pro 0,94 (1,0).
Eksempel 5 L-Pyroqlutamyl-Ir-isoleucyl-L-prolinamid Trin 1: Benzyloxykarbonyl-L-isoleucyl-L-prolinamid 30 51,4 g (0,1 mol) Z-Ile-OPFP og 12,5 g (0,11 mol) H-Pro- NH2 opløses i 250 ml DMFA og til opløsningen sættes 14,0 ml (0,1 mol) triætylamin. Reaktionsblandingen henstår natten over og inddampes næste dag i vakuum. Den som remanens vundne olie opløses i 500 ml kloroform og opløsningen udrystes successivt 35 med 2 x 100 ml N saltsyre, 2 x 100 ml N natriumhydrogenkarbo- 17 natopløsning og 1 x 100 ml vand, tørres ved hjælp af vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den olieagtige remanens bringes til krystallisation med en blanding af 100 ml æter og 100 ml n-hexan. Det på denne måde vundne råprodukt (31,7 g) omkrystal-5 liseres fra en blanding af 60 ml ætylacetat og 60 ml n-hexan. Der vindes 30,32 g (84%) Z-Ile-Pro-NH2 med smp. 127-128°C.
Rf(2) = 0,54.
Trin 2: L-Isoleucyl-L-prolinamid-hydroklorid 24,0 g (66,5 mmol) Z-Ile-Pro-NH2 opløses i 470 ml meta-10 nol, der tilsættes 30 ml 2,4N metanolisk saltsyreopløsning og 4 g 10%s palladium-på-aktiv-kul-katalysator og der ledes hydrogengas gennem blandingen i 1 time. Derefter frafiltreres katalysatoren og filtratet inddampes. Fordampningsremanensen rives med æter og det på denne måde vundne råprodukt (20 g) omkrystal- 15 liseres fra en blanding af metanol og æter. Der vindes 16,05 g (81%) H-Ile-Pro-NH2,HCl med smp. 135-140°C. Rf(4) = 0,15.
Trin 3: Benzyloxykarbonyl-L-pyroglutamyl-L-isoleucyl-L-prolin-amid_' 0,90 g (3,5 mmol) H-Ile-Pro-NH2,HC1 opslæmmes i 20 ml 20 DMFA og der tilsættes under isafkøling og omrøring 0,49 ml (3,5 mmol) triætylamin og 1,57 g (3,7 mmol) Z-Glp-OPFP. Efter 5 minutter tilsættes der yderligere 0,49 ml (3,5 mmol) triætylamin og efter yderligere 20 minutters omrøring inddampes reaktionsblandingen i vakuum. Fordampningsremanensen opløses i 30 25 ml kloroform og opløsningen udrystes successivt med 3 x 7 ml N saltsyre, 3 x 7 ml N natriumhydrogenkarbonat og 1 x 7 ml vand, hvorpå den tørres roed vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den som remanens vundne olie behandles flere gange med æter og æteren dekanteres; til sidst bringes råproduktet til krystal-30 lisation under æter, fraskilles, opløses i ætylacetat og udfældes på ny ved tilsætning af æter. Der vindes på denne måde 1,18 g (71,5%) Z-Glp-Ile-Pro-NH2 med smp. 87-89°C. Rf(3) = 0,36. [«]« = -91,4° (c = 1 i eddikesyre) .
Beregnet for (427,55): C 61,00 H 6,83 N 11,6 35 Fundet: C 59,19 H 6,88 N 11,16%.
149611 18
Trin 4: L-Pyroglutamyl-L-isoleucyl-L-prolinamid 4,72 g (10 mmol) Z-Glp-Ile-Pro-NH2 opløses i 100 ml metanol, der tilsættes 1 g 10%s palladium-på-aktivt-kul-katalysator og der føres hydrogengas gennem blandingen i 1 time. Der-5 efter frafiltreres katalysatoren, filtratet inddampes og remanensen rives med æter. Det på denne måde vundne råprodukt (3,22 g) opløses i vand og opløsningen klares med aktivt kul.
Den vandklare opløsning frysetørres og der vindes 3,03 g (98%) Glp-Ile-Pro-NH2. Rf(4) = 0,45. [a]^5 = -100,7° (c = 1 i 10 eddikesyre).
Aminosyreanalyse: Glu 0,95 (1,0), Ile 1,00 (1,0), Pro 1,02 (1,0).
Eksempel 6 L-Pyroglutamyl-L-g-aminobutyryl-L-prolinamid 15 Trin 1: t-Buty loxykarbony l-L-r-α- amino smør sy re-pentaf luor feny 1- ester _ ' __ 7,7 g (20 mmol) BOC-Abu-OH,DCHA opslæmmes i 60 ml æter, der tilsættes 20 ml 2N svovlsyre og rystes indtil der er indtrådt opløsning af den suspenderede substans. Derefter fra-20 skilles æterfasen, udrystes med 20 ml 2N svovlsyre og derefter 20 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes.
Den som remanens vundne olie (4,14 g) og 3,7 g (20 mmol)
PFPOH opløses i 25 ml ætylacetat, opløsningen afkøles til under o DCC
5 C og der tilsættes 3,92 g (19 mmol)/under omrøring. Reaktions- 25 blandingen omrøres i 1 time i isbad og derefter frafiltreres DCU og filtratet inddampes. Den som remanens vundne olie opløses i n-hexan og opløsningen henstår i 1 time i køleskab. Det herefter yderligere udskilte DCU frafiltreres og filtratet inddampes til et rumfang på 20 ml. Efter begyndelsen af krystal-30 udskillelsen anbringes suspensionen i køleskab og henstår der natten over; næste dag fraskilles krystallerne ved filtrering.
Der vindes på denne måde 5,57 g (76%) BOC-Abu-OPFP med smp.
83-84°C. Rf(l) = 0,86. [a]*5 = -32,8° (c = 1 i ætylacetat).
. Beregnet for C15H1604NF5 (369,29): C 48,79 H 4,37 N 3,79 F 25,72 35 Fundet: C 48,55 H 4,28 N 3,70 F 25,44%.
19 149611
Trin 2: L-α-Aminobutyry1-L-prolinamid-hydrokiorid 3,2 g (28 iranol) H-Pro-NH2 og. 5,16 g (14 mmol) BOC-Abu-OPFP opløses i 60 ml DMFA og efter 5' minutters henståen inddampes opløsningen i vakuum. Den som remanens vundne olie op-5 løses i 100 ml kloroform og opløsningen udrystes med 2 x 20 ml N saltsyre og med 2 x 20 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den som remanens vundne olie opløses i 20 ml ætylacetat og. der tilsættes 20 ml 6N saltsyreopløsning i ætylacetat. Efter 1 time fortyn-10 des reaktionsblandingen med æter og det dannede bundfald fra-filtreres og tørres i vakuum over vandfrit natriumhydroxyd.
Det på denne måde vundne råprodukt (3,86 g) rives med 20 ml kold DMFA. Der vindes 2,40 g H-Abu-Pro-NE^,HC1 svarende til 73% af det på BOC-Abu-OPFP beregnede teoretiske udbytte. R^(4) = 15 0,10.
Trin 3: Benzyloxykarbonyl-L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L- prolinamid ' ...........
2,13 g (9 mmol) H-Abu-Pro-NH2,HCl opslæmmes i 30 ml DMFA og under isafkøling og omrøring tilsættes der 1,26 ml 20 (9 mmol) triætylamin og 3,95 g (9,2 mmol) Z-Glp-OPFP. Efter 5 minutter tilsættes der yderligere 1,26 ml (9 mmol) triætylamin og efter 20 minutters yderligere omrøring inddampes reaktionsblandingen i vakuum. Den krystallinske remanens rives med 20 ml ætanol, henstår natten over i køleskab og frafiltreres 25 derefter. På denne måde vindes der 3,30 g (82%) Z-Glp-Abu-Pro-NH2 med smp. 175-176°C. Rf(3) = 0,28. [a]^5 = -99,6° (c = 1 i eddikesyre).
Trin 4: L-Pyroglutamyl-l·-ot -aminobu tyry 1-L-prolinamid 2,67 g (6 mmol) Z-Glp-Abu-Pro-NH2 opløses i 100 ml eddi-30 kesyre, til opløsningen sættes der 0,5 g 10%s palladium-på-kul-katalysator og derefter ledes der hydrogengas gennem blandingen i 1 time. Efter frafiltrering af katalysatoren inddampes filtratet og remanensen rives med æter. Det på denne måde vundne amorfe råprodukt (1,82 g) opløses i vand og opløsningen kla- 35 res med aktive kul hvorpå den vandklare opløsning frysetørres.
25
Der vindes 1,70 g (91%) Glp-Abu-Pro-NH2. R^(4): 0,24. [a]* = 149611 20 -102,5° (c = 1 i eddikesyre).
Eksempel 7 D-Pyroglutarny1-L- a-aminodekanoyl-L-pro linamid Trin 1: L-a-Aminodekanoyl-L-prolinamid-hydroklorid 5 1,37 g (12 mmol) H-Pro-NI^ °9 2,72 g (6 mmol) BOC-Ada- OPFP opløses i 20 ml DMFA og efter 5 minutters henstand inddampes opløsningen i vakuum. Den som remanens vundne olie opløses i 50 ml kloroform og opløsningen udrystes med 3 x 10 ml N saltsyre, 3 x 20 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning og 10 til sidst 2 x 10 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den som remanens vundne olie opløses i 3 ml ætylacetat og til opløsningen sættes 5 ml 6N saltsyreopløsning.
Efter 1 times henstand fortyndes reaktionsblandingen med æter og det dannede bundfald frafiltreres og tørres i vakuum over 15 vandfrit natriumhydroxyd. Der vindes på denne måde 1,75 g H-Ada-Pro-N^iHCl, svarende til 91% af det på BOC-Ada-OPFP beregnede teoretiske udbytte. R^(3) = 0,11.
Trin 2: Benzyloxykarbonyl-L-pyroglutamyl-L-a-aminodekanoyl-L- pro linamid __ ' ' ' '_ 20 1,75 g (5,5 mmol) H-Ada-Pro-NH2,HCl og 2,58 g (6 mmol) Z-Glp-OPFP opløses i 30 ml DMFA og til opløsningen sættes der 0,77 ml (5,5 mmol) triætylamin. Efter 5 minutter tilsættes der yderligere 0,77 g (5,5 mmol) triætylamin og efter 20 minutters yderligere omrøring inddampes reaktionsblandingen i vakuum.
25 Fordampningsremanensen opløses i 50 ml kloroform og opløsningen udrystes med 3 x 20 ml N saltsyre, 3 x 20 ml N natriumhy-drogenkarbonatopløsning og til sidst 2 x 20 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes.
Den som remanens vundne opskummende olie rives med æter, 30 den dannede gelagtige suspension henstår i ca. 2 timer i køleskab og derefter frafiltreres bundfaldet og tørres. Det på denne måde vundne råprodukt (2,61 g) omkrystalliseres fra 20 ml ætylacetat. Der vindes 2,45 g (84%) Z-Glp-Ada-Pro-NI^ med smp. 103-105°C. Rf(2) = 0,19. [a]^5 = -63,7° (c = 1 i eddikesyre).
149611 21
Beregnet for C28H40°6N4 (52i*/65): c 63,62 Η 7,63 N 10,60 Fundet: C 63,24 H 7,81 N 10,57%.
Trin 3: L-Pyroglutamyl-L-g-aminodekanoyi-L-prolinamid 1,9 g (3,6 mmol) Z-Glp-Ada-Pro-NI^ opløses i 40 ml eddi-5 kesyre og til opløsningen sættes der 0,2 g 10%s palladium-på-kul-katalysator hvorpå der i 1 1/2 time ledes hydrogengas gennem blandingen. Katalysatoren frafiltreres derefter, filtratet inddampes og fordampningsremanensen opløses i vand. Den vandige opløsning klares med aktivt kul og inddampes. Den som rema-10 nens vundne olie opløses i 30 ml kloroform og opløsningen tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den opskummende, amorfe faste remanens rives med æter, frafiltreres og tørres.
Der vindes på denne måde 1,20 g (82%) Glp-Ada-Pro-NE^· Rf(4) = 0,55. = -66,2° (c = 1 i eddikesyre).
15 Eksempel 8 L-Pyroglutamyl-L-cyklohexylalanyi-L-pro:linamid
Trin 1: t-Butyloxykarbonyl-L-cyklohexylalanin-pentafluorfenyl- ester ' ' · __' 9,04 g (20 mmol) BOC-Cha-OH,DCHA opslæmmes i 80 ml æter 20 og til suspensionen sættes der 20 ml 2N svovlsyre. Blandingen rystes til opløsning af den faste substans og derefter fraskilles æterfasen og vaskes med 20 ml 2N svovlsyre og derefter 20 ml vand, hvorpå den tørres med natriumsulfat og inddampes. Den som remanens vundne olie (5,7 g) opløses i 30 ml ætylacetat og 25 der tilsættes 3,7 g (20 mmol) PFPOH hvorpå blandingen afkøles til en temperatur på højst 5°C og der tilsættes 4,12 g (20 mmol) DCC. Reaktionsblandingen omrøres ved denne temperatur i 1 time og derefter frafiltreres det udskilte DCU, filtratet inddampes og den som remanens vundne olie opløses i 30 ml n-he-30 xan. Opløsningen henstår 1 time i køleskab og derefter frafiltreres det yderligere udskilte DCU og filtratet fortyndes med 70 ml n-hexan. Den fortyndede opløsning udrys.tes med 5 x 40 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning og derefter 2 x 40 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den som rema-35 nens vundne olie krystalliserer ved henståen. Der vindes på denne måde 8,48 g (97%) BOC-Cha-OPFP med smp. 75-77°C. R^(l) = 0,88.
22 143611
Beregnet for C2QH2404NF5 (437,41): C 54,92 H 5,53 N 3,20 F 21,72 Fundet: C 54,67 H 5,66 N 3,11 F 21,43%.
5 Trin 2: L-Cyklohexylalanyl-L-prolinamid-hydroklorid 2,28 g (20 mmol) H-Pro-NH2 og 4,37 g (10 mmol) BOC-Cha-OPFP opløses i 40 ml DMFA og efter 5 minutters henståen inddampes opløsningen i vakuum. Den som remanens vundne olie opløses i 80 ml kloroform og opløsningen udrystes med 3 x 20 ml N salt-10 syre, 3 x 20 ml N natriumhydrogenkarbonatopløsning og til sidst 1 x 20 ml vand, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes.
Den som remanens vundne olie opløses i 8 ml ætylacetat og der tilsættes 10 ml 5N saltsyre i ætylacetat, hvorpå reaktionsblandingen efter 1 times forløb fortyndes med æter. Det udskilte 15 bundfald frafiltreres og tørres i vakuum over vandfrit natrium-hydroxyd. Der vindes på denne måde 2,98 g H-Cha-Pro-NH2,HCl svarende til 97% udbytte beregnet på BOC-Cha-OPFP. R^(4). = 0,33.
Trin 3: Benzyloxykarbonyl-L-pyroglutamyl-L-cyklohexylalanyl- prolinamid _ '_ 20 2,43 g (8 mmol) H-Cha-Pro-NH2,HCl og 3,60 g (8,4 mmol) Z-Glp-OPFP opløses i 25 ml DMFA og der tilsættes 1,12 ml (8 mmol) triætylamin. Efter 5 minutters forløb tilsættes der yderligere 1,12 ml (8 mmol) triætylamin og efter yderligere 20 minutters omrøring inddampes reaktionsblandingen i vakuum. For-25 dampningsremanensen opløses i 80 ml kloroform og opløsningen udrystes med 3 x 20 ml N saltsyre, 3 x 20 ml N natriumhydrogen-karbonatopløsning og til sidst 1 x 20 ml vand hvorpå den tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den som remanens vundne olie bringes til krystallisation med æter; det vundne 30 råprodukt (3,88 g) omkrystalliseres fra 30 ml ætylacetat. Der vindes 3,32 g (81%) Z-Glp-Cha-Pro-NH2 med smp. 165-166°C.
Rf(2) = 0,17. [a]p5 = -67,3° (c = 1 i eddikesyre).
Beregnet for C27H36°6N4 c 62,26 H 7,08 N 10,93
Fundet: C 63,15 H 7,04 N 10,91%.
149611 23
Trin 4: L-Pyroglutamyl-L-cyklohexylalanyl-L-prolinamid 3,07 g (6 mmol) Z-Glp-Cha-Pro-NH2 opløses i 60 ml ætanol og til opløsningen sættes der 0,6 g 10%s palladium-på-ak-tive-kul-katalysator hvorpå der i 2 timer ledes hydrogengas 5 gennem opløsningen. Efter frafiltrering af katalysatoren ind dampes filtratet og remanensen rives med æter. Der vindes på denne måde 2,15 g (95%) amorft, fast Glp-Cha-Pro-NH2. R^(4) = 0,50. [a]^ = “70,9° (c = 1 i eddikesyre).
Eksempel 9 10 L-Pyroglutarnyl-Ii-treonyl-L-prolinamid
Trin 1: O-Benzyl-L-treonyl-L-prolinamid-hydroklorid 1,43 g (12,5 mmol) H-Pro-NH2 og 2,98 g (6,27 mmol) BOC-Thr(Bzl)-OPFP opløses i 20 ml DMFA og efter 5 minutters henstå-en inddampes opløsningen i vakuum. Den som remanens vundne olie 15 opløses i 30 ml kloroform og opløsningen udrystes med 2 x 10 ml N saltsyre og derefter 3 x 10 ml N natriumhydrogenkarbonatop-løsning, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes. Den som fordampningsremanens vundne olie opløses i 4 ml ætylacetat og der tilsættes 5 ml 5N saltsyreopløsning i ætylacetat. Efter 20 1 times henståen fortyndes reaktionsblandingen med æter og det dannede bundfald frafiltreres og tørres i vakuum over vandfrit natriumhydroxyd. Der vindes på denne måde 2,05 g (95%) H-Thr(Bzl)-Pro-NH2,HCl. Rf(4) = 0,40.
Trin 2: Benzyloxykarbonyl-L-pyroglutamyl-L-O-benzyltreonyl-L- 25 pro linamid _;_' ___ 2,05 g (6 mmol) H-Thr(Bzl)-Pro-NH2,HCl og 2,69 g (6,27 mmol) Z-Glp-OPFP opløses i 21 ml DMFA og til opløsningen sættes dråbevis 0,84 ml (6 mmol) triætylamin og efter 5 minutters henstående yderligere 0,84 ml (6 mmol) triætylamin. Efter 20 minut-30 ters omrøring inddampes reaktionsblandingen i vakuum og remanensen opløses i 50 ml kloroform, hvorpå opløsningen udrystes med 2 x 10 ml N saltsyre og 3 x 10 ml N natriumhydrogenkarbo-natopløsning, tørres med vandfrit natriumsulfat og inddampes.
Den som remanens vundne olie behandles med æter og afkøles 35 hvorved produktet størkner i amorf tilstand. Det på denne måde vundne råprodukt (2,76 g) opløses i ætylacetat og klares med 149611 24 aktive kul. Efter filtrering inddampes filtratet og den faste, amorfe, opskummende remanens rives med æter. Der vindes 2,47 g (75%) Z-Glp-Thr(Bzl)-Pro-NH2.
Trin 3: L-Pyroglutamyl-L-treonyl-L-prolinamid 5 2,04 g (3,7 mmol) Z-Glp-Thr(Bzl)-Pro-NH2 opløses i 40 ml eddikesyre, der sættes 0,4 g 10%s palladium-på-kul-katalysator til opløsningen og der ledes hydrogengas gennem blandingen i 4 timer. Efter frafiltrering af katalysatoren inddampes filtratet og remanensen rives med æter. Det på denne måde vundne 10 amorfe råprodukt (1,31 g) overføres på en kolonne indeholdende 30 g silikagel (partikelstørrelse 0,063 til 0,2 mm) og elueres med opløsningsmiddel (3). De eluatfraktioner som indeholder det rene produkt forenes og inddampes, og det som remanens vundne råprodukt behandles med æter. Der vindes 0,72 g (59,5%) Glp-15 Thr-Pro-NH2· Rf(4) = 0,16. [a]^5 = -90,0° (c = 1 i eddikesyre).
Aminosyreanalyse: Glu 1,00 (1,0), Thr 0,99 (1,0), Pro 1,03 (1,0).
DK274680A 1979-06-28 1980-06-26 Analogifremgangsmaade til fremstilling af trh-analoge tripeptidamider eller terapeutisk acceptable komplexer eller salte deraf DK149611C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HURI000717 1979-06-28
HU79RI717A HU180925B (en) 1979-06-28 1979-06-28 Process for producing tripeptide-amides trh-analogues,effectives on the central nerve systhem

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK274680A DK274680A (da) 1980-12-29
DK149611B true DK149611B (da) 1986-08-11
DK149611C DK149611C (da) 1987-01-26

Family

ID=11001100

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK274680A DK149611C (da) 1979-06-28 1980-06-26 Analogifremgangsmaade til fremstilling af trh-analoge tripeptidamider eller terapeutisk acceptable komplexer eller salte deraf

Country Status (21)

Country Link
US (1) US4299821A (da)
JP (1) JPS5636442A (da)
AT (1) AT373578B (da)
AU (1) AU538100B2 (da)
BE (1) BE884014A (da)
CA (1) CA1151154A (da)
CH (1) CH650518A5 (da)
CS (1) CS239907B2 (da)
DD (1) DD151746A5 (da)
DE (1) DE3024313A1 (da)
DK (1) DK149611C (da)
FI (1) FI74473C (da)
FR (1) FR2460292A1 (da)
GB (1) GB2058080B (da)
HU (1) HU180925B (da)
IL (1) IL60407A (da)
IT (1) IT1150023B (da)
NL (1) NL8003767A (da)
PL (1) PL127100B1 (da)
SE (1) SE447261B (da)
SU (1) SU963463A3 (da)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2533209B1 (fr) * 1982-09-22 1985-11-08 Centre Nat Rech Scient Lipopeptides, leur obtention et leur application comme emulsifiants
AU583578B2 (en) * 1984-12-14 1989-05-04 Australian Commercial Research & Development Limited Amino acid and peptide inhibitors of human leucocytic elastase
IT1186733B (it) * 1985-06-05 1987-12-16 Eniricerche Spa Composti tripeptidici ad azione ipotensiva
FR2597100A1 (fr) * 1986-01-21 1987-10-16 Nippon Shinyaku Co Ltd Derives du pyroglutamide
KR960705808A (ko) * 1993-11-09 1996-11-08 조셉 에프. 디프리마 성장 호르몬의 방출을 촉진시키는 피페리딘, 피롤리딘 및 헥사하이드로-1H-아제핀(Piperidines, pyrrolidines and hexahydro-1H-azepines promote release of growth hormone)
US5494919A (en) * 1993-11-09 1996-02-27 Merck & Co., Inc. 2-substituted piperidines, pyrrolidines and hexahydro-1H-azepines promote release of growth hormone
FR2733995B1 (fr) * 1995-05-09 1997-07-25 Inst Nat Sante Rech Med Inhibiteurs de l'inactivation de neuropeptides endogenes notamment la cholecystokinine, leurs procedes de preparation leur utilisation comme medicaments et procede de criblage de medicaments
DE19527575A1 (de) * 1995-07-28 1997-01-30 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von peptidischer Wirkstoffe
US20020151502A1 (en) * 1997-10-09 2002-10-17 Albert Sattin Tri-peptides for neurological and neurobehavior applications
US20050233973A1 (en) * 1997-10-09 2005-10-20 Albert Sattin Tri-peptides for antidepressant applications
US7462595B2 (en) * 2004-09-17 2008-12-09 Prange Jr Arthur Jergen Methods for treating cancer-related fatigue

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3959248A (en) * 1974-04-03 1976-05-25 Merck & Co., Inc. Analogs of thyrotropin-releasing hormone
LU73294A1 (da) * 1975-09-02 1977-05-11

Also Published As

Publication number Publication date
DK149611C (da) 1987-01-26
ATA334680A (de) 1983-06-15
IL60407A0 (en) 1980-09-16
HU180925B (en) 1983-05-30
GB2058080A (en) 1981-04-08
PL127100B1 (en) 1983-09-30
DE3024313A1 (de) 1981-01-29
SE8004744L (sv) 1980-12-29
AU538100B2 (en) 1984-07-26
CH650518A5 (de) 1985-07-31
DK274680A (da) 1980-12-29
DE3024313C2 (da) 1991-05-29
DD151746A5 (de) 1981-11-04
AU5971980A (en) 1981-01-08
CS239907B2 (en) 1986-01-16
CA1151154A (en) 1983-08-02
FI74473B (fi) 1987-10-30
SU963463A3 (ru) 1982-09-30
BE884014A (fr) 1980-12-29
PL225268A1 (da) 1981-10-16
SE447261B (sv) 1986-11-03
FI74473C (fi) 1988-02-08
IL60407A (en) 1984-11-30
FR2460292A1 (fr) 1981-01-23
GB2058080B (en) 1983-02-23
IT1150023B (it) 1986-12-10
CS458480A2 (en) 1985-05-15
JPS5636442A (en) 1981-04-09
IT8023096A0 (it) 1980-06-26
FI802057A7 (fi) 1980-12-29
US4299821A (en) 1981-11-10
FR2460292B1 (da) 1983-11-18
AT373578B (de) 1984-02-10
NL8003767A (nl) 1980-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU1085505A3 (ru) Способ получени трипептидов
DK149611B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af trh-analoge tripeptidamider eller terapeutisk acceptable komplexer eller salte deraf
US4623715A (en) Novel peptides which are active on the central nervous system and have an action on the cholinergic system
Li et al. The Synthesis of L-Histidyl-L-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and L-Histidyl-D-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and their Melanocyte-stimulating Activity
DK149077B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af encephalin-analoge pentapeptidamidderivater eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf
SE461042B (sv) Peptider med tillvaextbefraemjande aktivitet jaemte veterinaera kompositioner innehaallande naemnda peptider
FR2595705A1 (fr) Derives de gonadoliberine contenant un acide aminocarboxylique aromatique en position 6, compositions pharmaceutiques et veterinaires les contenant et procede pour les preparer
GB2109796A (en) Anorexigenic tripeptides, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
US4247543A (en) Organic compounds
EP0080283A1 (en) N-carboxyalkylproline-containing tripeptides
EP0015036B1 (en) Psycho-pharmacological peptides, process for their preparation and therapeutical compositions containing them
USRE30496E (en) Tripeptide derivatives with central nervous system activity and preparation thereof
CH444178A (de) Verfahren zur Herstellung von B-MSH
SU1048702A1 (ru) Циклический аналог энкефалина, обладающий пролонгированной анальгетической активностью
SU1182796A1 (ru) Аналог энкефалина, обладающий анальгетической активностью
Shvachkin et al. Synthesis of structural analogs of the 16-19 somatoliberin sequence.
IE66529B1 (en) Novel CNS-active hexapeptides with an antiamnesic effect
JPH0322398B2 (da)
JPS6257639B2 (da)
JPS5934176B2 (ja) 生理活性ペプチドの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed