DK149632B - Fremgangsmaade til fremstilling af sekretin - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af sekretin Download PDFInfo
- Publication number
- DK149632B DK149632B DK401983A DK401983A DK149632B DK 149632 B DK149632 B DK 149632B DK 401983 A DK401983 A DK 401983A DK 401983 A DK401983 A DK 401983A DK 149632 B DK149632 B DK 149632B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- leu
- arg
- ser
- gln
- obu
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 claims description 17
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 claims description 16
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 claims description 16
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 claims description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 7
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 7
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 claims description 6
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 5
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 4
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- BBFCIBZLAVOLCF-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;bromide Chemical compound Br.C1=CC=NC=C1 BBFCIBZLAVOLCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004203 pancreatic function Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=[NH+]C=C1 AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000623895 Bos taurus Mucin-15 Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
i 149632 o
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af sekretin.
Sekretin, et hormon af duodenum, er et heptacosapep-tidamid med formlen 5 H-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg- -Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln- -Gly-Leu-Val-NH2.
10 Det stimulerer bugspytkirtlens hydrogencarbonat- produktion og anvendes klinisk til undersøgelse af pankreasfunk-tionen.
Det er kendt at fremstille sekretin ved forskellige metoder {jfr. J. Amer.Chem. Soc. 89 (1967) , side 6753?i 15 J. Amer. Chem. Soc. 90, (1968) , side 4711; Chem. Ber.
105, (1972), side 2508 og Chem. Ber. 107 (1974), side 215). Disse kendte metoder er imidlertid ikke velegnet til fremstilling af større mængder sekretin, da f.eks. en utilstrækkelig opløselighed af fragmenter forhaler reaktions-20 hastigheden ved peptidkoblingen.
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af sekretin med den ovenfor anførte formel ved kondensation af 25 Z-Thr (Bu*") -Ser (Bu^) -Glu (OBu*") -Leu-Ser (Bu*") -Arg-Leu-OH (I) med H-Arg-Asp (OBut) -Ser (Bu1") -Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu--Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH2/ (II) 30 katalytisk hydrogenering af det fremstillede peptid Z-Thr (Bu*") -Ser (Bufc) -Glu (OBu^) -Leu-Ser (Bu1*) -Arg-Leu- -Arg-Asp(OBu1)-Ser(Bufc)-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-35 -Gln-Gly-Leu-Val-NH2 (III)
O
2 149632 med en palladiumkatalysator og efterfølgende kondensation af det fremstillede peptid H-Thr (Bu*") -Ser (Bu^) -Glu (OB^) -Leu-Ser (But) -Arg-5 -Leu-Arg-Asp(OBu )-Ser(Bu )-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg- -Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH2 (IV) med
Boc-His-Ser (Bu1") -Asp (OBu1") -Gly-Thr (But) -Phe-OH (V) 10 og fraspaltning af beskyttelsesgrupperne med trifluoreddike-syre, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man ved kondensationerne foraktiverer peptidfragmenterne I hhv. V i dimethylacetamid eller en blanding af dimethyl-15 formamid og dimethylacetamid med 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro--1,2,3-benzotriazin og dicyclohexylcarbodiimid, hvorved tilstedeværelsen af pyridinhydrobromid er nødvendig ved for aktiver ingen af fragment I, renser det ud fra I og II fremstillede peptid III ved behandling i methanol, 20 gennemfører den katalytiske hydrogenering af III i 80-90 vol.-%'s vandig 2,2,2-trifluorethanol, eventuelt renser det fremkomne peptid IV med methanol, ved kondensationen af IV med V forud opløser peptidet IV i en di-methylformamid/dimethylacetamid-blanding, og gennemfører 25 fraspaltningen af beskyttelsesgrupperne i nærværelse af 5-20 vol.-%'s 2-6 N HC1 eller HBr og/eller indtil 190 mg/ml cysteinhydrochlorid.
Ved sammenknytningen af I med II har man hidtil anvendt dicyclohexylcarbodiimid/l-hydroxybenzotriazol 30 (DCC/HOBt)-metoden (jfr. Chem. Ber. 107, (1974), side 215). Carboxylkomponentens ekstremt tunge opløselighed frembyder imidlertid betydelige vanskeligheder. Til en 7,7 mmol--blanding anvendes der 400 ml dimethylformaraid (DMF) som opløsningsmiddel. Ved den stærke fortynding aftager 35 reaktionshastigheden stærkt, qg der kræves en lang reaktionstid (2 dage).
3 149632
O
Det har nu overraskende vist sig, at den tungt opløselige carboxylkomponent I let kan opløses i dimethyl-acetamid eller en blanding af DMF og dimethylacetamid (DMA) i nærværelse af pyridin-hydrobromid og 3-hydroxy-4-oxo- 5 -3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazin (HOOBt). Udelader man en af komponenterne, nedsættes opløseligheden. Dette forhold er ideelt til en foraktivering af det tungt opløselige heptapeptid ved hjælp af DCC/HOOBt. Pyridin-hydrobromidet tjener til protonering af argininets frie 10 guanidinogruppe. Til opløsning af 10 mmol carboxylkomponent I er således allerede 50 ml DMF og 50 ml DMA tilstrækkeligt. Foraktiveringen varer 2 timer. Aminokomponent II (10 mmol) opløses ligeledes i f.eks. en blanding af 50 ml DMF og 50 ml DMA. Efter to timers sammenkoblingstid oparbej-15 des blandingen. Det totale forbrug af opløsningsmiddel er altså 200 ml/10 mmol og den samlede reaktionstid 4 timer.
Også ved den sidste sammenkobling, nemlig sammen- t t knytningen af V med IV til Boc-His-Ser(Bu )-Asp(OBu )-Gly--Thr (But) -Phe-Thr (Bu^ -Ser (But) -Glu (0But) -Leu-Ser (But) -Arg-20 -Leu-Arg-Asp (OBufc) -Ser- (Bu*") -Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu- -Gln-Gly-Leu-Val-NH2» er foraktiveringen af carboxylkompo-nenten med DCC/HOOBt enkeltbeholderfremgangsmåden med DCC/HOBt overlegen (jfr. Chem. Ber. 107, (1974) side 215), hvorved der igen anvendes DMA eller en blanding af DMF 25 og DMA som opløsningsmiddel for carboxylkomponenten og en blanding af DMF og DMA for aminokomponenten. Reaktionstiden forkortes her fra 36 til 6 timer.
Det ved kondensation af I med II fremstillede peptid III er hidtil blevet renset ved udkogning med 30 ethylacetat (jfr. Chem. Ber. 107, (1974), side 215) eller ved omfældning fra methanol/ethylacetat (jfr. Chem. Ber.
105 (1972) side 2508). Disse rensningsprocesser har ved de tungt opløselige udgangsstoffer tydeligvis ingen større rensningseffekt. Det har overraskende vist sig, 35 at materialet kan udkoges med methanol, hvorved der opnås en stærkere rensningseffekt, hvilket står i
O
4 149632 modsætning til sidstnævnte kendte teknik (Chem. Ber.
105, (1972) 2508), ifølge hvilken peptidet er opløseligt i methanol.
Den katalytiske hydrogenering af III til IV har hid-5 til været foretaget i en blanding af methanol og DMA (143 ml/g^ jfr. Chem. Ber. 107, 215) eller i 80%'s eddikesyre (269 ml/g, jfr. Chem. Ber. 105, 250¾). Til den katalytiske hydrogenering har det nu vist sig, at 80-90 vol.-%'s 2,2,2-trifluorethanol (mindst 11 ml/q peptid) 10 er særlig egnet som opløsningsmiddel. Dette opløsningsmiddel har i forhold til eddikesyre den fordel, at der ikke kan finde acetylering sted. I blandingen af methanol/DMA var det med methanol rensede produkt III praktisk talt uopløseligt.
15 Efter den katalytiske hydrogenering kan det frem stillede 5HBr *H-Thr (Bu^) -Ser (Bu*") -Glu (OBu^) -Leu-Ser (Bu^) --Arg-Leu-Arg-Asp (OBu*") -Ser (Bu*") -Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu--Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH2 (IV) igen renses godt ved udkogning med methanol, skønt produktet ifølge Chem. Ber. 105, (1972), 20 side 2508 beskrives som opløseligt i methanol.
Det således fremstillede beskyttede sekretin behandles til fraspaltning af beskyttelsesgrupperne i trifluoreddikesyre, til hvilken der er sat 5-20%'s 2-6 N vandig saltsyre eller hydrogenbromidsyre og/eller indtil 190 mg/ml cystein-25 hvdrochlorid. Ved denne fremaanosniåde fås der et råt sekretin med højere aktivitet end ved fraspaltning af beskyttelsesgrupperne på gængs måde med trifluoreddikesvre.
Sekretin anvendes som diagnostikum ved kontrollering af de ekskretoriske pankreasfunktioner og som terapeutikum 30 ved Ulcus duodeni.
Eksempel Z-Thr(Bu^)-Ser(But)-Glu(OBufc)-Leu-Ser(But)-Arg-Leu-Arg-Asp(OBut)-35 Ser (But) -Ala-Arg-Leu-Gln- Arq-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH,.
—- — e— _____
Til en opløsning af 12 g Z-Thr(Bu )-Ser (Bu )-Glu(OBu )--Leu-Ser(But)-Arg-Leu-OH.2 H20, 1,6 g pyridin-hydrobromid og 149632 5
O
1,63 g 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazin i en blanding af 50 ml dimethylformamid og 50 ml dimethylacetamid sættes der 8,4 g dicyclohexylcarbodi-imid, og der omrøres i to timer ved stuetemperatur. I
4* 4· 5 mellemtiden opløses 18,8 g H-Arg-Asp(OBu )-Ser(Bu )-Åla--Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH2.4 HBr og 5,2 ml N-ethylmorpholin i en blanding af 50 ml dimethyl-formamid og 50 ml dimethylacetamid, og den foraktiverede blanding filtreres ind i denne opløsning. Der efterrøres 10 nu yderligere to timer ved stuetemperatur, og blandingen røres i 3 liter ethylacetat. Det udfældede bundfald fraskilles ved sugning, koges op en gang med ethylacetat og fraskilles igen ved sugning;,· Til yderligere rensning koges remanensen nu en gang op med 200 ml methanol, og der fraskilles 15 ved sugning. Derefter irøres der endnu en gang ethylacetat, koges op, afkøles, fraskilles ved sugning og tørres.
Udbytte: 23,1 g, smp. 262-265°C [a]£° = -22,4° (c = 1, i 80% eddikesyre).
20 H-Thr (Bu1*) -Ser (But) -Glu (OBut) -Leu-Ser (But) -Arg-Leu-Arg--Asp (OBu*") -Ser (But) -Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly--Leu-Val-NHo * 5 HBr_ 6 g Z-Thr (Bu*") -Ser (Bu^") -Glu (OBu*") -Leu-Ser (Bu*") -Arg-t t -Leu-Arg-Asp(OBu )-Ser(Bu )-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-25 -Gln-Gly-Leu-Val-NH2 og 300 mg pyridinhydrochlorid opløses i 70 ml 80%'s 2,2,2-trifluorethanol. Der tilsættes en smule Pd/carbon-katalysator, qg hydrogen ledes igennem.
Efter afsluttet hydrogenering (ingen C02 i afgangsgassen) fraskilles katalysatoren ved sugning, og trifluorethanolet 30 afdestilleres. Remanensen udrives med ethylacetat og fraskilles ved sugning. Til yderligere rensning koges der op med methanol. Remanensen får lov at antage stuetemperatur, og der fraskilles ved sugning. Dernæst koges der endnu en gang op med ethylacetat, afkøles og fraskilles 35 ved sugning. Udbytte: 4,58 g, [<x]p° = -26,1° (c = 1, i 80% eddikesyre).
O
6 149632
Boc-His-Ser (But) -Asp (OBu*1) -Gly-Thr (But) -Phe-Thr (Bu*1) -Ser (Bu*1) --Glu (OBu*j -Leu-Ser (Bu*1) -Arg-Leu-Arg-Asp (OBu*1) -Ser (Bu*1) -Ala--Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NHo._ ^ f f
Til en opløsning af 4,24 g Boc-His-Ser(Bu )-Asp(OBu )-5 -Gly-Thr(Bu^J-Phe-OH og 709 mg 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro- -1,2,3-benzotriazin i 17 ml dimethylacetamid sættes der ved 0°C 2,87 g DCCI. Der omrøres i en time ved 0°C og en time ved stuetemperatur. I mellemtiden opløses 13,7 g H-Thr (Bu*1) -Ser (Bu*1) -Glu (OBu*1) -Leu-Ser (Bu*1) -Arg-Leu-Arg-10 -Asp (OBu*1) -Ser (Bu*1) -Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly- -Leu-Val-NH2*5HBr i en blanding af 87 ml dimethylformamid og 87 ml dimethylacetamid til en géléagtig masse. Til denne géléagtige opløsning sættes der 1,13 ml N-ethylmorpho-lin, der fortyndes med 22 ml dimethylacetamid, og den for-15 aktiverede blanding suges dertil. Der omrøres nu i to timer ved stuetemperatur. I mellemtiden tilberedes der som ovenfor yderligere en foraktiveret blanding, der derpå atter filtreres ind i reaktionsblandingen. Der omrøres derefter igen i to timer ved stuetemperatur, og i den 20 géléagtige opløsning røres der 1740 ml varm ethylacetat.
Der afkøles til stuetemperatur, og bundfaldet fraskilles ved sugning. Bundfaldet koges endnu en gang op med ethyl acetat, fraskilles ved sugning og tørres. Udbytte: 17 g.
25 Råt sekretin 1,5 g af det ovenfor fremstillede beskyttede sekretin og 150 mg cysteinhydrochlorid opløses i en blanding af 15 ml trifluoreddikesyre og 1,5 ml 4 N HCl.
Blandingen henstår i 30 minutter ved stuetemperatur, ind-30 dampes og opløses i vand, og opløsningen frysetørres.
Udbytte: 1,69 g.
Det fremkomne rå sekretin renses på følgende måde: 1,69 g råt sekretin opløses i ca. 10 ml 0,001 N cysteinhydrochlorid-opløsning og chromatograferes på en 35 "Sephadex ®LH-20"-søjle (200 x 4 cm). Der elueres med 0,001 N cysteinhydrochlorid-opløsning, og der opfanges
O
7 U3632 fraktioner på 300 dråber. De gode sekretinfraktioner er i den nedadgående gren af den første top (ca. 32.-37. fraktion). De sekretinholdige fraktioner forenes og frysetørres, og der fås et udbytte på ca. 400 mg. I de efter-5 følgende fraktioner kan der yderligere udvindes ca. 80 mg let forurenet sekretin. Hovedfraktionen på 400 mg har ifølge aminosyreanalyse et peptidindhold på 65% og en biologisk aktivitet på 2600 enheder pr. mg. Dette svarer til en aktivitet på 4000 enheder pr. mg peptidbase.
10 Udbytte henført til beskyttet' sekretin: 22%. Foruden salte og vand indeholder det således isolerede sekretin yderligere ca. 5% cysteinhydrochlorid.
Aminosyreanalyse: Asp (2,0), Thr (1,9), Ser (3,1),
Glu (3,0), Gly (2,0), Ala (1,1), Cys (0,7), Val (1,1), Leu (6,0), 15 Phe (1,0), His (1,0) og Arg (3,9).
Claims (2)
- ο 149832 δ PATENTKRAV. Fremgangsmåde til fremstilling af sekretin med formlen H-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-5 -Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu- -Gln-Gly-Leu-Val-NH2 ved kondensation af Z-Thr (Bu*1) -Ser (Bu*1) -Glu (OBu*1) -Leu-Ser (But) -Arg-Leu-OH (I) 10 med H-Arg-Asp (OBu*1) -Ser (Bu*1)-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu- -Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH2f (li) 15 katalytisk hydrogenering af det fremstillede peptid Z-Thr (Bu*1) -Ser (Bu*1) -Glu (OBu*1) -Leu-Ser (Bu*1) -Arg-Leu-t fc -Arg-Asp(OBu )-Ser(Bu )-Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu--Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH2 (III) 20 med en palladium-katalysator, efterfølgende kondensation af det fremstillede peptid H-Thr (Bu*1) -Ser (Bu*1) -Glu (OBu*1) -Leu-Ser (Bu*1) -Arg-Leu-25 -Arg-Asp (OBu*") -Ser (Bu*1) -Ala-Arg-Leu-Gln-Arg-Leu-Leu- -Gin-Gly-Leu-Val-NH
- 2 (IV) med t t t Boc-His-Ser(Bu )-Asp(OBu )-Gly-Thr(Bu )-Phe-OH (V) 30 og fraspaltning af beskyttelsesgrupperne, Z, Boc og Bu*1 med trifluoreddikesyre, kendetegnet ved, at man ved kondensationerne foraktiverer peptidfragmenterne I hhv. V i dimethylacetatamid eller en blanding af dime-35 thylformamid og dimethylacetamid med 3-hydroxy-4-oxo-3,4- -dihydro-l,2,3-benzotriazin og dicyclohexylcarbodiimid,
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2615229A DE2615229C2 (de) | 1976-04-08 | 1976-04-08 | Verfahren zur Herstellung und Reinigung von Sekretin |
| DE2615229 | 1976-04-08 | ||
| DK154077 | 1977-04-06 | ||
| DK154077A DK149045C (da) | 1976-04-08 | 1977-04-06 | Fremgangsmaade til rensning af sekretin |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK401983D0 DK401983D0 (da) | 1983-09-02 |
| DK401983A DK401983A (da) | 1983-09-02 |
| DK149632B true DK149632B (da) | 1986-08-18 |
| DK149632C DK149632C (da) | 1987-01-26 |
Family
ID=25770319
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK401983A DK149632C (da) | 1976-04-08 | 1983-09-02 | Fremgangsmaade til fremstilling af sekretin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DK (1) | DK149632C (da) |
-
1983
- 1983-09-02 DK DK401983A patent/DK149632C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK401983D0 (da) | 1983-09-02 |
| DK401983A (da) | 1983-09-02 |
| DK149632C (da) | 1987-01-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3398960B1 (en) | Method for preparing semaglutide | |
| CN108059666B (zh) | 一种固液结合制备索玛鲁肽的方法 | |
| CN112592387B (zh) | 一种Tirzepatide的制备方法 | |
| EP1773870B1 (en) | Methods for the production of peptide having a c-terminal amide | |
| US20190211073A1 (en) | Synthesis method for liraglutide with low racemate impurity | |
| CN112010961B (zh) | 一种索玛鲁肽的固液合成方法 | |
| CN113135991B (zh) | 一种制备索玛鲁肽的方法 | |
| CN114031680B (zh) | 一种索玛鲁肽钠盐及其制备方法与应用 | |
| DK147733B (da) | Gastrin-analoge heptapeptidderivater til anvendelse som diagnostika | |
| CN106589069B (zh) | 一种缩宫素的制备方法 | |
| CN107880111A (zh) | 一种制备利拉鲁肽的方法 | |
| CN113045641B (zh) | 一种索马鲁肽的制备方法 | |
| CN107022021A (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成法 | |
| WO2020199461A1 (zh) | 一种多肽衍生化合物的合成方法 | |
| CN113402598A (zh) | 一种索马鲁肽的固相合成方法 | |
| CN110028573A (zh) | 一种固液结合制备利拉鲁肽的方法 | |
| US4098779A (en) | Process for the purification and manufacture of secretin | |
| CN111153983A (zh) | 一种索玛鲁肽的半合成制备法 | |
| CN119350469B (zh) | 大片段SPPS-LPPS混合法合成Cagrilintide的方法 | |
| CN113637064B (zh) | 一种索玛鲁肽的合成方法 | |
| CN109021087A (zh) | 一种固液相结合制备齐考诺肽的方法 | |
| CN119661685A (zh) | 一种卡格列肽的合成方法 | |
| DK149632B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af sekretin | |
| CN113121673A (zh) | 一种固液结合法制备依降钙素的方法 | |
| WO2021103458A1 (zh) | 一种地加瑞克的固相合成方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |