DK150856B

DK150856B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 6-(alfa-(imidoylaminoalkanoylamino)phenylacetamido)penicillansyreforbindelser eller farmaceutisk acceptable salte deraf

Info

Publication number: DK150856B
Application number: DK045574AA
Authority: DK
Inventors: Ernest Seeichi Hamanaka; John Gerritt Stam
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1973-12-14
Filing date: 1974-01-29
Publication date: 1987-07-06
Also published as: HU167158B; DD113008A6; FR2254310A2; DK45574A; AU6463674A; FI740226A0; ES422732A2; KR780000354B1; CS194205B2; JPS5874688A; FR2254310B2; AT326821B; YU22674A; JPS5089393A; NO145794B; LU69290A1; ZA74509B; US4073783A; DE2403512A1; BG24955A3

Description

150856

Opfindelsen angår en analogi fremgangsmåde til fremstilling'' af 6-[a-(imidoylaminoalkanoyland.no)phenylacetamido]penicil-lansyreforbindelser af den art, som er omhandlet i dansk patent nr. 137 047, og med den i kravets indledning angivne 5 almene formel I eller farmaceutisk acceptable salte deraf, hvilke forbindelser har høj antibakteriel aktivitet, især over for Gram-negative mikroorganismer.

Dansk patent nr. 137 047 angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af racemiske eller optisk aktive 6-[a-(amidi-10 no- eller imidoylamino-acylamino)phenylacetamido]penicillan-syrer med den almene formel: / \ CH3 / CHC0NH. _ \=J NH I I f\CH.

z \

C02H

hvori Z betyder .

r1-n o r2-n=c o % π \ ii C-A-C- eller N-A-C- R^N^ R' ά2 hvor A betyder 1,4-phenylen eller alkylen med 1-3 carbon-1 2 atomer, R og R hver for sig betyder hydrogen eller alkyl 4 15 med 1-3 carbonatomer, R og R hver for sig betyder hydrogen, alkyl med 1-3 carbonatomer, thienyl, furyl, pyridyl, phenyl, benzyl, substitueret phenyl eller substitueret benzyl, hvor substituenten er chlor, brom, fluor, methyl, meth-oxy, trifluormethyl, 3,4-dichlor eller 3,5-dichlor, eller R1" 20 og R tilsammen betyder alkylen med 2-6 carbonatomer, eller 2 *3 R og R tilsammen betyder alkylen med 2-4 carbonatomer, 2 150856 eller R3 og R^ tilsammen betyder alkylen med 3-5 carbon-atomer, eller farmaceutisk acceptable salte deraf med baser, hvilken analogifremgangsmåde er ejendommelig ved, at en racemisk eller optisk aktiv forbindelse med formlen: O o .CEL· — CHCONH^ 3 NH2 I I ^CH3 ^-N-k O ^°°2Η 5 eller et salt deraf omsættes med en forbindelse med formlen:

Z - X

hvori Z har den ovennævnte betydning, og X betyder -OH eller -Cl, i nærvær af et henholdsvis vand- eller syrebindende middel, hvorpå den dannede forbindelse om ønsket overfø-10 res i et farmaceutisk acceptabelt salt med en base.

Det har nu vist sig, at 6-[a-(imidoylaminoalkanoylamino)-phenylacetamidojpenicillansyre-forbindelserne med den i kravets indledning angivne almene formel I og farmaceutisk acceptable salte deraf har en udmærket aktivitet over for 15 et bredt spektrum af mikroorganismer, især Gram-negative mikroorganismer. Over for visse mikroorganismer udviser disse forbindelser en bedre aktivitet end den, der udvises af de nært beslægtede penicilliner, som kendes fra dansk fremlæggelsesskrift nr. 137 046.

20 Disse forbindelser med formlen I fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

Som fagfolk let vil indse, er det α-carbonatom i penicillinsidekæden, hvortil imidoylaminoalkanoylamino-delen er knyt-25 tet, et asymmetrisk carbonatom, som muliggør eksistensen 3 150856 af to optisk aktive isomere, de D- og L-diastereoisomer4, såvel som racematet, DL-formen. I overensstemmelse med hidtidige erkendelser vedrørende aktiviteten af sådanne penicilliner, som har asymmetriske α-carbonatomer, er de af de 5 her omhandlede forbindelser, som har D-konfigurationen, mere aktive end de, der har L-konfigurationen, og er derfor de foretrukne forbindelser, selv om L- og DL-formerne også omfattes af opfindelsen.

Forbindelser, hvori A er alkyliden, afledt af en a-amino-10 syre, har et asymmetrisk carbonatom, som muliggør eksistensen af D-, L- og DL-formerne. Selv om den unaturlige form af udgangs-aminosyren, nemlig D-formen, er den foretrukne, betragtes også DL- og L-isomererne som omfattet af opfindelsen.

15 Endvidere er det værd at nævne med hensyn til asymmetriske centre, at der er flere i 6-aminopenicillansyrekærnen, den grundliggende byggesten, fra hvilken de omhandlede forbindelser afledes. Disse potentielle yderligere isomere er ikke af betydning i denne henseende, da den anvendte 6-ami-20 nopenicillansyre, som fører til de her omhandlede produkter, er den, som fremstilles ved gæring og altid har en bestemt konfiguration.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan illustreres ved følgende reaktionsskema: // \ s ch3

R-Γ 'VCHCONIR _/ 6 NH

NH ^CH, + Y-X-C-R' -^ I

c=0

A C02H

nh2 25 hvori R, A, R', X og Y har den i kravet, angivne betydning.

4 150856

Eksperimentelt udføres den ovenfor beskrevne reaktion mellem en iminoether og en 6-[a-(aminoalkanoylamino)phenyl-acetamidojpenicillansyre, som fører til forbindelser med formlen I, mellem ækvimolære mængder af de nævnte reaktan-5 ter plus så meget som et 5 - 20 procent overskud af imino-etheren. Endvidere er det ønskeligt, selv om det ikke er absolut nødvendigt, at udføre kondensationen i et reaktionsinert opløsningsmiddel. De foretrukne opløsningsmidler er vandfri, aprotiske, polære opløsningsmidler, såsom di-10 methylformamid og hexamethylphosphoramid.

Rækkefølgen af tilsætningen er ikke kritisk, og reaktanterne kan bringes sammen i det samme opløsningsmiddel, eller de i forvejen opløste reaktanter kan hældes sammen. Det foretrækkes at afkøle opløsningsmidlet eller opløsningerne af 15 de individuelle reaktanter før sammenføringen for at formindske forekomsten af eventuelle sidereaktioner, som kan foregå, når en reaktant er til stede i stort overskud under den første fase af sammenføringen, Når først reaktanterne er blandet sammen, fjernes kølebadet, og reaktionsblandingen 20 får derefter lov at opvarmes til stuetemperatur.

Reaktionstiden er ikke kritisk og påvirkes af reaktionstemperaturen, koncentrationen og udgangsreagensernes iboende reaktivitet. Når der anvendes stuetemperatur, er reaktionstiden almindeligvis 1-8 timer.

25 Efter fuldførelsen af reaktionen hældes blandingen eller opløsningen i et dermed blandbart opløsningsmiddel, såsom diethylether, hvori det ønskede produkt I er uopløseligt.

Det udfældede produkt skilles fra ved filtrering, vaskes successivt med ether, acetone eller methylenchlorid og tør-30 res i vakuum.

Fagfolk vil indse, at imidoylamino-delene i de her omhandlede forbindelser kan eksistere i flere forskellige tauto-mere former, der alle betragtes som omfattet af opfindelsen.

150856 5

Som tidligere anført er et karakteristisk træk ved de sure forbindelser, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, deres evne til at danne salte med baser. De sure forbindelser omdannes til salte ved omsætning af syren med 5 en passende base i et vandigt eller ikke-vandigt medium. De basiske reagenser, som er velegnede til fremstilling af sådanne salte, kan være af forskellig art og skal omfatte sådanne baser som organiske aminer, ammoniak og alkalimetal-hydroxider, -carbonater, -hydrogencarbonater, -hydrider og 10 -alkoxider såvel som jordalkalimetalhydroxider, -hydrider, -alkoxider og -carbonater. Repræsentative for sådanne baser er ammoniak, primære aminer, såsom n-propylamin, n-butyl-~ amin, anilin, cyclohexylamin, benzylamin, p-toluidin, ethylamin og octylamin, sekundære aminer, såsom dicyclo-15 hexylamin, og tertiære aminer, såsom diethylanilin, N-meth-ylpyrrolidin, N-methylmorpholin og 1,5-diazabicyclo-[4,3,0]- 5-nonen; natriumhydroxid, kaliumhydroxid, ammoniumhydroxid, natriumethoxid, kaliummethoxid, magnesiumhydroxid, calcium-hydrid og bariumhydroxid.

20 Som det let vil indses af fagfolk, er de her omhandlede forbindelser tilstrækkeligt basiske på grund af imidoylamino-delen til at danne syreadditionssalte. Sådanne salte,der er farmaceutisk acceptable, betragtes også som omfattet af opfindelsen.

25 Ved udnyttelsen af den kemoterapeutiske aktivitet hos de forbindelser, som danner salte med baser, foretrækkes det selvfølgelig at anvende farmaceutisk acceptable salte. Selv om uopløselighed i vand, høj toxicitet eller mangel på kry-stallinitet kan gøre nogle arter salte uegnede eller mindre 30 ønskelige som sådanne til en given farmaceutisk anvendelse, kan de vanduopløselige eller toxiske salte omdannes til de tilsvarende syrer ved dekomponering af saltene, eller de kan alternativt omdannes til ethvert ønsket farmaceutisk acceptabelt salt. De foretrukne farmaceutisk acceptable 35 salte inkluderer natrium-, aluminium-, kalium-, calcium-, 6 150856 magnesium-, ammonium- og substitueret ammonium-saltene, f.eks. procain, dibenzylamin, N,N-bis(dehydroabietyl)-ethylendiamin, 1-ephenamin, N-ethylpiperidin, N-benzyl,3~ phenethylamin, N,N*-dibenzylethylendiamin og triethyl-5 amin, såvel som salte med andre aminer, som er blevet anvendt til at danne salte med benzylpenicillin.

De hidtil ukendte penicilliner, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, udviser in vitro aktivitet over for en lang række mikroorganismer, herunder både Gram-10 positive og Gram-negative bakterier. Deres nyttige aktivitet kan let påvises ved in vitro prøvninger over for forskellige organismer i et hjerne-hjerte-infusionsmedium ved den sædvanlige dobbeltfortyndingsrække. In vitro aktiviteten af de her omhandlede forbindelser gør dem nyttige til 15 topisk påføring i form af salver, cremer og lignende.

De omhandlede hidtil ukendte penicilliner er også effektive antibakterielle midler in vivo hos dyr, herunder mennesket, ikke kun ad den parenterale indgivningsvej, men også ad den orale indgivningsvej.

20 Selvfølgelig vil lægen i sidste ende bestemme den dosering, som vil være mest egnet for et bestemt individ, og den vil variere med den bestemte patients alder, vægt og modtagelighed såvel som med symptomernes art og grad, arten af den baktierieinfektion, som behandles, og de farmaco-25 dynamiske egenskaber af det bestemte middel, som indgives.

Det vil ofte findes, at når midlet indgives oralt, vil der kræves større mængder af den aktive ingrediens til at frembringe det samme niveau, som frembringes af en lille mængde , indgivet parenteralt.

30 Under fuld hensyntagen til de ovenstående faktorer antages det, at en effektiv daglig oral dosis af de her omhandlede forbindelser til mennesker på tilnærmelsesvis 10 - 100 mg/kg 150856 7 pr. dag med et foretrukket område på 50 - 75 mg/kg pr. dag i enkelte eller opdelte doser og en parenteral dosis på 25 - 100 mg/kg pr. dag med et foretrukket område 20-75 mg/kg pr. dag effektivt vil afhjælpe infektionens symp-5 tomer. Disse værdier er belysende, og der kan selvfølgelig være individuelle tilfælde, hvor højere eller lavere dosisområder kan betale sig.

Som tidligere nævnt er de her omhandlede penicilliner bredspektrede antibiotica, som til forskel fra mange penicil-10 lin-analoge er stærkt antagonistiske over for Gram-negative mikroorganismer, især Escherichia coli, Pseudomonas og Klebsiella. Endvidere viser de sig at være mere modstandsdygtige end de fleste penicilliner over for nedbrydning med penicillinase, et enzym produceret af visse bakterier, 15 som nedbryder penicillin til en inaktiv penicillansyre.

Forbindelsernes antibiotiske aktivitet in vitro bestemtes ved den procedure, der er anbefalet af the International Collaborative Study on Antibiotic Sensitivity Testing (Ericsson and Sherris, Acta Pathologica et Microbiologia Scandi-20 nav. Supp. 217, Sections A and B: 1-90 (1971), og hvorved der anvendes hjerne-hjerte-infusions-agar og en podemate-riale-reproduceringsindretning. Vækstglas, dyrket natten over, fortyndes 100 gange til brug som standard-podemate-riale (20 000 - 10 000 celler i omkring 0,002 ml anbringes 25 på agaroverfladen; 20 ml hjerne-hjerte-infusions-agar pr. plade). Der anvendes en række dobbelt-op-fortyndinger af prøveforbindelsen. Man ser bort fra enkelte kolonier, når pladerne aflæses efter 18 timer ved 37°C. Prøveorganismens modtagelighed accepteres at være den mindste koncentration 30 af forbindelsen, som er i stand til fuldstændigt at inhibe-re vækst bedømt med det blotte øje.

Tabel I angiver in vitro data for tre nært beslægtede forbindelser, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

8 150856 TABEL I - ------- Q- έ-o <Τ~*-k 3 i co9h CH0 ^

I z NH

HN=cY Vx MIC (ug/ml)

Organisme X = H X = C1 X = Br S. aureus 0IA005 0,78 0,39 0,39

Ps. aeruginosa 52A104 25 25 25

Ps. aeruginosa 52A490 12,5 12,5 6,25

Kléb. pneumoniae 53A009 100 12,5 12,5 A. aerogenes 25 3,12 3,12 P. mirabilis 57C105 12,5 3,12 3,12

Ser. marcescens 63A001 12,5 6,25 6,25 E. coli 51A266 12,5 0,78 0,39

Tabel II viser in vivo sammenligningsdata for de tre i tabel I angivne forbindelser over for Escherichia coli infektioner hos mus.

Værdierne, der angives som procent overlevende, er opnået 5 under standardbetingelser, som er velkendte for fagfolk. Prøveforbindelsen indgives den inficerede mus efter et flergangsdoseringsskema, hvor den første dosis gives 0,5 time efter indpodning, og den gentages 4 og 24 timer senere.

9 150856

TABEL II

% overlevende

Dosis -

Organisme Vej (mg/kg) X=H X = Cl X = Br E. coli 51A266 PO 200 10 0 0 50 0 0 0 25 0 0 10 E. coli 51A266 SC 200 90 70 90 50 70 60 90 25 10 50 50

Tabel III angiver yderligere in vitro data for en række forbindelser, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

10 150856

i—I O

/ _I"\ σ vo σ σι oo oo oo / \ H mm m m i" r* Γ" (\ r Γ O s s s »» H N ^ V_J onmooooo

V ™ V V

σι CM CM VO CM σι / _1ΓΛ m h m h m H m / \ ^ V V S S V s —L , r~ omcMomHmo \ V V H ° Λ ffi 00 / σ m σ σ σ σ /— Λ mm cm m m m ο

/ \ k k k V K ·» V

“Λν / / OOIOVDOOOO

\_J v Η m v V V

--pq--

CO

/_"i mm m m Γ'

„ —/ ,) CMCMmomCMCMO

w V // Η H CM O CM Η H

mm cm \-/ (\j a a o

Vr ~T\--~

/ I il CM CM H

tn L Ί h h m m o

\ K S

\—£; “ T mmmomcMCMo

H I (¾ M A. CM CM O HH

k K H fl j a a a s a--- ,-- m o i ri 9 U O cm ,υ σ ph a a II a . ( σ CM σ ο ο η U~S5—U-U / \ mn m mmo 0—/ 2 k k k k k k V // O 00 o O I o o o V o V w CM m CM CM VO 00 rz=r a H CM rn Η H m t~~ / \ S k s k k k k

—<. ) ro^DfMororoHO

V // Η O

_A_ oo Ονο σ σ oo σ m m m t'- o 7 k k k k k

Hoooimoo

V V ° M

CM

/ cm m

/ OH

/ o o -/ <J u m ptj / oh m H t~~ o / σ o oo o m o

/ h o m o C

/ rfIi<Hco<!tnH

^ / vocMmotDmHo

/ vo m m <| £ vo H

g / q) cm ma) Hen \ / g · · m &> id ,Q 3

tri / CO H g g Ο H (d CD

3 / HH00-H-PMH

Ov / £ OOOtntDidHpJ

/ (d UGGXifd^gnj

n / O' (1) 0) Q) G

i—{ / £ · M 10 rl «CD · · 150856 11

CM

IS ,-v σι oo σ ο MU / “ \ ro Γ^ΟΊΗ Ο / \ — (. 12 *· I I I " - ' V // ο 10 ο (Ο ο II II '-' ™ « c γΗ ηΓ1 σ σ ο Η 9 Λ^ι ^ " ι ^

^-ν η ffi -/,1 ο ο ο ο CMLOO

• I οσ Η cm ra g ^ / \ μ cn

-Ρ Μ II II

ο En Ρί C __________— «Η I«---—- Η Η \ / m in σσο η V—-/ ro cm ro η ο / \ - I «,·*».

ο W Ο Ο M3 Ο Ο ο ο ο m \ / ο ο

PQ VJZLV CM CM

C —L--

EH

IH

PQ

/ σοΜ σσσσοο / I roH ΓΟΓΟΓΟΟισ \\ I *. >.

orooooooo EH m

PQ

rf, L£> LO CM LD CM σ

/ ·*^>. LO LO i—I CM iH rH

/i ·. ·. » >· * “

-L r-Hr—1LOOCOLOCOO

V I CM O

V"-'1 CM

/ CM LO

/ O H

- / o o

Pi / fit! O in / o ^ m rH o / σ o oo o lo o / ^ o lo o <]

/ ii <] H Bl <| w H

^ / LO CM CO O CDOO-rHO

_, / io in o ri| P ri

C / (DOO ro <D -H W

<* / S . . in cn id ,3 3 σ / « ·Η g g P -πI fd Q)

3 / -Η H 0 0 · Μ -P P P

3. / C! o Ό tu <D' <β ·Η 3 ' / (d 0Ed3,QldSHg<d

n / tr> (D (D <D M

X / Μ · ω m h · (D

□ / η M Qj Qj !*i ri! m Qi co 12 150856

Tabel IV angiver in vitro data for nogle forbindelser, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, i sammenligning med ampicillin.

TABEL IV

O·™.—

c=0 C02H

CH„ i Å

NH

i C=NH Mikroorganisme (MIC, |ig/ml) E.ooli Pseudom. Pseudcm. Klebs. Serratia P.vulgaris S.aureus 51A002 52Δ104 52A173 53A015K 63A001 57A060 01A400

Anpicillin >200 >200 >200 >200 25 >200 >200 R*

O >200 25 12,5 200 12,5 12,5 SS

Cl-<p>- 25 25 12,5 <0,39 0,78 1,56 12,5

Cl C^=^- 100 50 50 12,5 0,20 1,56 50 12,5 200 25 <0,39 <0,39 <0,39 100 b/ 100 6,25 6,25 100 6,25 12,5 25 \N y 200 0,78 0,39 100 1,56 200 100 _1____ s stammer resistente over for ampicillin as 150856 13

Der udførtes en besteinmelse og sammenligning af in vitro aktiviteten af 6-[D-α-(3-benzimidoylureido)phenylacetami-do]peniciliansyre (A) og 6-{p-a-[3-(2'-thenimidoyl)-ureidojphenylacetamidoj penicillansyre (B) , forbindelser-5 ne fra henholdsvis eksempel 2 og 4 i US patentskrift nr.

3 634 405, og de nærmest beslægtede forbindelser, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, nemlig 6-[D-2-phenyl-2-(phenylacetimidoylaminoacetamido)acet-amidoJpenicillansyre (C) og 6-[D-2-phenyl-2-(thenoimi-10 doylaminoacetamido)acetamidoJpenicillansyre (D), over for et antal mikroorganismestammer. Resultaterne er sammenfattet i tabel V.

TABEL V

_MIC (ug/ml)_

15 Organisme og stamme nr. j A | B__C__D

Staphylococcus aureus 01A005 0,78 0,39 1,56 0,39 01A400 (amp.resistent) 25 50 3,13 6,25 01A090 0,39 0,39 1,56 0,78 20 Streptococcus faecalis 02A006 3,12 25 6,25 6,25

Escherichia ooli 53ΑΓ72 12,5 50 6,25 6,25 51A002 (amp.resistent) 100 100 100 100 25 51A266 6,25 25 6,25 6,25

Pseudomonas aeruginosa 52A074 6,25 12,5 6,25 6,25 52AL73 12,5 12,5 6,25 6,25 52A399 50 25 12,5 12,5 30 Pseudomonas outida 52B005 100 50 12,5 50

Klebsiella pneumoniae 53AQ09 12,5 12,5 6,25 6,25 53A079 50 100 50 25 35 Proteus morgani 57G001 25 25 6,25 12,5

Salmonella typhimurium 58D013 25 25 3,13 3,13

Pasteurella multocida 40 59A001 0,20 0,78 <0,10 0,20

Serratia marcescens 63A001 50 50 6,25 3,13 14 150856 TABEL V (forts.) _ MIC (uq/ml)_

Organisme og stamme nr. A B C D

Enterobacter aerogenes 5 67A026 25 25 6,25 12,5 67A040 25 25 6,25 12,5 !

Citrobacter freundii j 70B007 25 25 3,13 | 3,13 t

Providencia species i ! 10 77A009 I 50 50 50 b>200 i i

I I

-!- i-

Selv om forbindelserne A og B fra US patentskrift nr.

3 634 405 udviser in vitro aktivitet over for en række forskellige mikroorganismer, er de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser C og D væsentligt bedre end 15 henholdsvis A og B over for de fleste af de undersøgte organismer.

Der udførtes også en bestemmelse og sammenligning af in vivo aktiviteten af de ovennævnte forbindelser A og C og B og D over for Escherichia coli 266 infektioner, hvor-20 ved andelen af overlevende og PD^g-værdierne blev udregnet på følgende måde:

Akutte eksperimentelle infektioner frembringes hos mus ved intraperitoneal indpodning af musene med en standardiseret (10 kultur af Escherichia coli 266 suspenderet i 25 5 % svinemavemucin. Infektionens alvorlighed standardise res således, at musene modtager 1-10 gange LD^gg-dosen af organismen (LD^qq: nok af organismen til i alle til fælde at dræbe 100 % af de inficerede ubehandlede kontrolmus. LD^gg af E. coli 266 er en 10 fortynding af en 30 standardiseret kultur. Kontroldyr modtager podemængder på 10 , 10 og 10 som kontrol for variation i virulens, der kan forekomme). Prøveforbindelser indgives de infice- 150856 15 rede mus (10) subcutant efter et flergangs-doseringsske-ma, hvor den første dosis gives 0,5 time efter indpodningen og gentages 4 og 24 timer senere. Andelen af overlevende mus i forhold til det totale antal inficerede 5 bestemmes derpå 96 timer efter indpodningen, og disse værdier omsættes derpå til sandsynligheder, og der udregnes en PD^Q-værdi i mg/kg (PD^q er den dosis, der kræves for at beskytte 50 % af de behandlede mus mod en ellers dødelig infektion). Resultaterne er sammenfattet i tabel 10 VI.

Resultater af tilsvarende in vivo prøvninger af forbindelserne B og D over for Pseudomonas aeruginosa infektioner hos mus er sammenfattet i tabel VII.

TABEL VI

15 Prøvning^^fgrbindelsern^A^Bj^^og^ 2y§£-i2£-5^22ii-2§f-iii£§liii2S§£-h-os_mus

Antal overlevende/totale antal inficerede Dosis, mg/kg ABC D

100 2/10 0/10 -- 10/10 20 50 1/10 0/10 9/10 9/10 25 1/10 1/10 5/10 8/10 12,5 0/10 — 1/10 2/10 PD50 = 100 200 25 23

TABEL VII

25 E£^YS±ii2_§f_i2E^ii)^§i§§£S2-§-22_5-.2Y®E_l2i E§i_å§£29i22§§_i24_i2is3Sti22®£_il2s_5ius

Antal overlevende/ totale antal inficerede

Dosis, mg/kg B D

30 400 1/10 9/10, 8/10 200 0/10 100 0/10 50 0/10 16 150856

Det ses, at de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser C og D udviser signifikant aktivitet over for systemiske E. coli infektioner hos mus via den subcutane ind-givningsvej. Forbindelserne A og B er betydeligt mindre 5 aktive over for en sådan infektion under lignende omstændigheder og har et aktivitetsniveau, som gør dem praktisk uanvendelige som midler mod E. coli infektion.

Det ses også, at den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse D udviser signifikant aktivitet over for systemi-10 ske Ps. aeruginosa infektioner hos mus via den subcutane indgivningsvej, medens den kendte forbindelse B viser betydeligt mindre aktivitet over for en sådan infektion under lignende omstændigheder og har et aktivitetsniveau, som gør den praktisk uanvendelig som middel mod Ps. aeruginosa 15 infektion.

De ovenstående resultater med hensyn til de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser C og D kunne ikke forudses ud fra opførslen af de kendte forbindelser A og B, hvormed de sammenlignes.

20 I den følgende tabel VIII sammenlignes in vitro aktiviteten over for forskellige mikroorganismer for en række ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser og den kendte forbindelse, der fremstilles ifølge eksempel 1 i DK-patent-skrift nr. 137 046.

25 17 150856 M <η m cm cm in O cm Z t-> ml cm in η h cm ^V_ (¾ ο ! m cd cm m m co

rH

u S* / σι co oo σι oo oo O cm 2 mi mr-mc-r·'· II ffi Ζ II / ' \ h *“ > ? * * ' * U-U-Z-U-T ,y~ U ο I in Η ο q ο o

\\ // CM V

CTl

Hj n (N σι σι O CM Z /-nZ ο i cn Η Η I m m II Hi Hi II / \ - 1 - - - ! ' J· υ-α-Ζ-υ-ΛΛ ο I CM m m i o ^ ----rn---------------------------- mm^cM S3 ? o c* cn cn a W Ο O CM Z rzr( ο I m i m m U U Ο II Hi Η! II / \ - I " * * \fj °"u~a‘u\y 9 1 g S 9 ' 9 9 \--1— ------- \ m cm V-g Hi / hH σι σ\ σι σι σι . O cm Ζ /-—/ ο ο m m m m m ii a a ii / \ - - i n— r)~ z- c) -/ > ooooooq.q

y*-Λ \\ // V ldVVVVV

a o '—( z \ o ^ h --i a a H HI U— Z —N a

Hgli Hi /u σι in oo σ σι σι > <ι Vlv Ο cm Ζ /—τ\ mi cm r- m m m hi h V ii a a n /* \ - i - *· - - g 3 0 J ο-ο-Β-υ-ς Λ 0,000000 m i N—( <C ui Vi B HI Q-.1--,-

Si cm

Hi H 00 <Tl <Ti ID

O cm Z /-v o i r- m l m m n a a n / \ ^ i ' ^ i * _r

0-U-Z-U~<. ,Z Q i ο o in i ο H

\V V cm V

o Ol H CM Ol 00 00 VO

Hi HOt-im r~ r-~ in t-OCM O Z cm ‘ ^

m II a a II a II a oomomooH H U-U-Z-O-Z-O-Z v CM

a

Q II

N

H

o o σ, rtj

mom o ^ o o CD

in cm ο σι <! ooH^mcMin co H ocMrtJf^moHCi g rf] O CM CM Ο Ο φ hi H in in Φ d! U o η o co iti m r-~ to 2 Φ Φ Φ h m m Φ rti to H co co Π ϋ C5 ΗΦΟΟΟΦίοΜ

2 OJtnGHgCD-HcO

O Μ Ο Ή -Η Π G H g 0 >i Hi tn Ο) 0) Ή φ&ΗΗΗΗι,ΏΦ Μ Μ Οι Ο Φ -H • · 0) 0) MS-14-1

Hi & (¾ rd · φ -Η Φ Οι Φ rQ Φ S Μ nS U · · Φ S4 4-> 44 CO CO Η · · Φ 150856 18

Det ses, at alle de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser har en lavere MIC (højere aktivitet) end referenceforbindelsen over for en eller flere af de prøvede mikroorganismer.

5 De hidtil ukendte forbindelser, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er af værdi som antibakte-rielle midler og er bemærkelsesværdigt effektive til behandling af et antal infektioner forårsaget af modtagelige Gramnegative og Gram-positive bakterier hos fjerkræ og dyr, her-10 under mennesket. Til sådanne formål kan anvendes de rene materialer eller blandinger deraf med andre antibiotica. De kan indgives alene eller i kombination med en farmaceutisk bærer på basis af den valgte indgivningsvej og farmaceutisk standardpraksis.

> 15 De følgende eksempler tjener til nærmere at belyse fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

EKSEMPEL 1

Til en opløsning af 2,03 g (5 millimol) 6-£2-phenyl-2-(ami-noacetamido)acetamidojpeniciliansyre i 10 ml dimethylform-20 amid sættes 1,85 g (6 millimol) ethyl-3,4-dibrombenzimidat i 5 ml af det samme opløsningsmiddel. Reaktionsblandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer, og sættes derpå til 300 ml chloroform. Bundfaldet frafiltreres, og filtratet sættes til 500 ml hexan. Det resulterende faste materiale 25 frafiltreres, tørres og sættes til 15 ml methylenchlorid, hvortil der sættes 1,5 ml triethylamin. Blandingen koncentreres til tørhed, opløses i 8 ml dimethylformamid og behandles derpå med 150 ml chloroform og 200 ml hexan. Det dannede bundfald frafiltreres, vaskes med ether og udrives 30 derefter med methylenchlorid. Filtrering og tørring gav 660 mg (20 % udbytte) 6-[D-2-phenyl-2-(3,4-dibrombenzimido-ylaminoacetamido)acetamidoj penici1lansyre.

150856 19

Magnetisk kerneresonansspektrum maksima (ppm; DMSO-Dg): 1,5 (d, 6H) 4.0 (s, IH) 4.1 (s, 2H) 5.4 (m, 2H) 5,8 (d, IH) 6,0-7,4 (s, 8H) 7.4 (s, 5H) 7,7-8,3 (m, 3H) 9,15 (t, 2H)

Ved den ovenfor beskrevne procedure ud fra den krævede imino-ether og den passende D-6-Jj2-phenyl-2-(aminoalkanoylamino )-acetamidtø penicillansyre fremstilles de følgende forbindelser omfattet af den almene formel I: CHCONHsy Xs s/ 0 NH i 1 ^^CH, i J-N-L 3

C=0 0^^ ^>C0,H

CH„ Z

I *

N-H

i

C=NH

R'

Udbytte

R’ % NMR

P-CÆC H - 9,2 1,5 (d, 6H), 4,0 (s, IH), 4,3 (s. 2H), 5.3 (m, 2H), 5,8 (d, IH), 6,0-8,0 (m, 17H, 9,0 (d, 2H) o-CICJEL·- 11 1,4 (d, 6H), 3,9 (s, IH), 4,1 (s, 2H), 5.3 (m, 2H), 5,7 (d, IH), 6,9-8,0 (m, 12H), 9,0 (s, 2H) 3.5- Cl„CfiH - 13 1,5 (d, 6H), 3,9 (s, 3H), 4,8-5,9 (m, 9H), 7,4 (s, 5H), 7,65 (s, IH), 7,9 (s, 2H), 8,8 (d, IH), 9,0 (d, IH) 3.5- Br^C-H,- 24 1,5 (d, 6H), 4,1 (s, 3H), 5,4 (m, 2H), b 5,8 (d, IH), 7,4 (s, 5H), 8,0 (s, 3H), 8,0-9,1 (s, 5H), 9,15 (t, 2H) 150856 20

Ε· ““f*68 NMR+ K

_%_____ nKT3CgH4- 40 1,5 (d, 6H), 4,0 (s, 1H), 4,25 (s, 2H), 5.4 (m, 2H), 5,8 (d, 2H), 7,4 (s, 5H), 5 7,7-8,3 (m, 4H), 8,0-9,7 (s, 4H), 9,1 (t, 2H) p-(3\a.H4- 6,8 1,5 (d, 6H), 4 (s, 1H), 4,2 (s, 2H), 5.4 (m, 2H), 6,4-8,2 (m, 16H), 9,0 (q, 2H) 10 3,5-(CF-) 40 1,5 (d, 6H), 4,0 (s, 3H), 5,35 (m, 2H), J b J 5,8 (d, 1H), 7,4 (s, 5H), 8,0-9,35 (m, 8H), 8,85-9,35 (q, 2H) 4.

Magnetisk kemeresonansspektrum maxima - ppm; EMSO-Dg.

^kke undersøgt udover 500 Hz.

15 EKSEMPEL ,2

Proceduren fra eksempel 1 gentages med de krævede reagenser til fremstilling af de følgende analoge forbindelser: 4~Vchconh._ NH I Nh, ' oA-K--k, 3

7 C00H

ch-chq å I -3

NH

C=NH

i R'

R' NMR+ X

20 3,5-BrXÆ- 1,6 (m, 9H), 4,0 (s, IH), 4,2 (m, IH), 5,6 (m, 3H), 7,4 (s, 6H), 8,0 (s, 2H), 9,1 (m, 2H) 3,5-(^)2^- 1,5 (m, 9H), 5,3 (m, 3H), 7,4 (s, 6H), 8,4 (s, 2H) 25 3,5-Cl9CÆ- 1,5 (m, 9H), 5,4 (m, 3H), 7,4 (s, 6H), 7,9 (s, 2H) "^Magnetisk kemeresonansspektrum maxima-ppm; DMSO-Dg.

s? EKSEMPEL 3 150856 21 ^ll2l2-]ohen;£l-2-^,3^ thenoimidOYlaminoacetamido^acetamido^- (R = H; A = -CH2-; R' = 3-C4H3S).

5 Til 740 mg (4,8 millimol) ethyl-3-thenimidat i 7 ml dimethyl-formamid sættes 1,6 g (3,8 millimol) 6-[D-2-phenyl-2-(amino-acetamido)acetamidojpenicillansyre-natriumsalt, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Der tilsættes yderligere 214 mg af penicillansyresaltet, og omrøringen fort-10 sættes i yderligere 2-3 timer. Reaktionsblandingen filtreres, og filtratet sættes dråbevis til 75 ml diethylether under omrøring. Produktet frafiltreres og tørres i vakuum, 2,1 g.

Magnetisk kerneresonansspektrum maxima (ppm; DMSO-Dg): 15 1,48 (d, 6H) , 3,84 (m, 3H) , 5,35 (m, 2H) , 7,33 (m, 8H) .

Den frie syre frigøres ved forsigtig tilsætning af fortyndet saltsyre til en afkølet vandig opløsning af det ovenstående natriumsalt til pH 6. Bundfaldet, en zwitterion-form af produktet, frafiltreres og tørres i vakuum.

20 EKSEMPEL 4

Ud fra de passende udgangsmaterialer og ved anvendelse af proceduren fra eksempel 3 syntetiseres følgende penicillinfor-bindelser eller natriumsalte deraf; /=^ CHn

^ ^-CH-CONH^_J

I® JZ1_I^h3

i”0 0 CO,H

ch2

NH

HN=C-R' 150856 22

_%______________ fYX] H 16 1,5 (d, 6H), 3,8 (s, 2H), 4,1 (s, IH), 5,0-6,0 (m, 14H), 6,9-8,2 (m, 12H).

BrV

5 /X- H 32 1,5 (d, 6H), 3,7 (s, 2H), 4,1 (s,

Br/V& IH), 5,8 (m, 3H), 7,4 (m, 5H), 7,7 (s, IH).

+Magnetisk kemeresonansspektrum maxima - ppm, DMSO-Dg; ikke undersøgt udover 500 Hz.

3£ 10 Opløsningsmiddel CD^OD.

EKSEMPEL 5 §llSl2iEh§nYl-2-j2-^2-thenoimidoY^aminopropionamido^- acetamidgXpenicillansYre (R = Hf A = CH3CH-; R' = 2-C4H3S).

15 En blanding af 4,2 g (0,01 mol) 6-[D-2-phenyl-2-(2-aminopro-pionamido)acetamido]penicillansyre og 1,41 g (0,01 mol) methyl-2-thenimidat i 15 ml dimethylformamid omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Der tilsættes 2,4 ml triethyl-amin, og blandingen sættes langsomt til 150 ml chloroform 20 under hurtig omrøring. Det faste materiale frafiltreres, og filtratet fortyndes med et lige så stort volumen hexan. Produktet frafiltreres, vaskes successivt med methylenchlorid/ hexan, methylenchlorid og ether og tørres i vakuum, 1,62 g.

Magnetisk kemeresonansspektrum maxima 25 (ppm; DMSO-D og D30): 1,5 (m, 9H), 5,5 (m, 3H), 7,4 (s, 7H), 8,0 (s, IH).

EKSEMPEL 6 150856 23 6rlDr.2rghenyl-2- (2-{3-pyridoimidoyl~\ aminopropipnamido)_- acetamido^penicillansyre (R = H; A = CH3CH“·; R' = 3-C5H4N}.

5 Til en opløsning af 4,20 g (0,01 mol) 6-[D-2-phenyl-2-(2- aminopropionamido)acetamidolpenicillansyre i 15 ral dimethyl-formamid sættes 2,2 g methyl-3-pyridoimidat, og reaktionsblandingen omrøres i 2,5 timer. Der tilsættes 2,4 ml tri-ethylamin, og opløsningen sættes til 150 ml chloroform under 10 hurtig omrøring. Blandingen filtreres, og filtratet vaskes med methylenchlorid/hexan, methylenchlorid og di-ethylether og tørres til sidst i vakuum.

Magnetisk kerneresonansspektrum maxima (ppm; DMSO-Dg og D20): 15 1,55 (d, 6H), 1,6 (d, 3H), 5,5 (m, 3H), 7,4 (s, 6H), 8,1 (m, IH, 8,9 (m, 2H).

EKSEMPEL 7 §zlDl2-phenYl-2=^2-{4-gyridomidoyl}_amino2ropionamido)_-acetamido]_penici liansyre 20 (R = H; A = CH3CH-; R' = 4-C5H4N).

På samme måde som i eksempel 6 fremstilles det ønskede produkt ud fra de nødvendige udgangsreagenser.

Magnetisk kerneresonansspektrum maxima (ppm; DMSO-Dg og 020): 25 1,45 (d, 6H) , 1,63 (d, 3H) , 4,0 (m, IH), 4,2 (s, IH), 5,5 (m, 3H), 7,4 (s, 5H), 7,7 (d, 2H), 8,8 (d, 2H).

EKSEMPEL· 8 150856 24 6 11 2l 2 ΐΕίϊΕΕΥίΐ 21! iiE^r idoimidOYlami noacet amidoj^cet amido J[ ^- (A = H; A = -CH2-; R' = 4-C^N) 5 Til en afkølet blanding af 114,3 g (0,281 mol) 6-[D-2-phen-yl-2-(aminoacetamido)acetamido]penicillansyre i 200 ml di-methylfomamid sættes 42,16 g (0,31 mol) methyl-4-pyri-doimidat, og blandingen omrøres i kulden i 15 minutter.

Den resulterende opløsning får lov at opvarmes til stue-10 temperatur og omrøres i 1 time og 45 minutter. Der tilsættes 48,5 g triethylamin, og efter omrøring i 10 minutter sættes opløsningen dråbevis til 4 liter chloroform.

Det udfældede faste materiale fjernes, og filtratet sættes til 6 liter hexan. Det dannede faste materiale frafiltre-15 res, vaskes successivt med chloroform og ether og tørres under formindsket tryk, hvorved der opnås 61 g af det ønskede produkt.

Til yderligere rensning af produktet opløses det i 200 ml dimethylformamid indeholdende 12,1 g triethylamin, hvilken 20 opløsning derpå filtreres og sættes dråbevis til 2 liter chloroform. En lille mængde fast materiale fjernes, og chloroform/dimethylformamid-filtratet sættes til 6 liter hexan. Produktet frafiltreres og tørres (41,3 g) og opløses derpå i 200 ml dimethylformamid. Den resulterende 25 opløsning sættes til 2,5 liter chloroform, og det udfældede produkt frafiltreres, udrives med 3 x 500 ml methyl-enchlorid og tørres, 36,2 g.

Magnetisk kerneresonansspektrum maxima (ppm; DMSO-Dg: 1,5 (d, 6H), 4,2 (s, 3H), 5,2 - 5,6 (m, 2H), 5,85 (d, IH), 30 7,4 (s, 2H), 8,35 (s, 4H), 8,9 (d, 2H), 9,15 (t, 2H).

EKSEMPEL 9 150856 25

Proceduren fra eksempel 8 gentages ud fra de passende udgangsreagenser til fremstilling af de følgende forbindelser: {^Ychconh^-yS-v/ 3 - NH CH- ! J--L 3

i 0 o COpH

A

NH

HN=C-R'

R' A NMR

-CH«- 1/5 (d, 6H) , 3,9 (s, 3H) , 4,0-6,0 5 I ff (s, 6H), 5,35 (m, 2H), 5,8 (d, IH), 7,35 (s, 6H), 7,7-8,4 (m, 2H), 8,65 (d, IH), 8,9 (d, IH), 9,15 (d, IH) 0-CS.y- 1,5 (d, 6H), 3,95 (s, IH), 4,2 (s, r 2H), 5,35 (m, 2H), 5,75 (d, IH), jlu 7T7,6 (m, 6H), 8-8,2 (m, IH) , 8,65-9,3 (m, 7H) -CH2- 1,5 (d, 6H), 3,9 (s, 2H), 4,1 (s, ρίΛμ/Vi IH), 5'4 (m' 2H>' 5'8 (d' lH>' 7'°" C1 N 7,9 (s, 13H), 7,95 (s 2H), 8,85 15 (d, IH), 9,25 (d, IH)

+Magnetisk kerneresonansspektrum maxima-ppm; DMSO-Dg K

Ikke undersøgt udover 500 Hz.

EKSEMPEL 10

Til en omrørt suspension af 42,2 g (0,1 mol) 6-[D-2-(4-hydroxyphenyl)-2-(aminoacetamido)acetamido]penicillansyre i 250 ml dimethylformamid sættes 14,96 g (0,11 mol) methyl- 150856 ' .26 4-pyridylimidat, og reaktionsblandingen omrøres i 1 3/4 timer. Blandingen filtreres, og filtratet sættes til 3 liter chloroform under hurtig omrøring. Det udfældede faste stof frafiltreres, vaskes successivt med chloroform (600 ml) 5 og ether (2 x 500 ml) og tørres under nitrogen natten over.

Det rå produkt (40 g) udkrystalliserer ved forsøg på at opløse det i 150 ml methanol. Den krystalliserede suspension filtreres, vaskes med methanol (2 x 25 ml) og tørres, hvorved der opnås 24,1 g 6-[D-2-(4-hydroxyphenyl)-2-(4-pyri-10 doimidoylaminoacetamido)acetamido]penicillansyre [(Formel I; R = OH) A = -CH2-j R' = 4-C^N] .

NMR-maxima (ppm: DMSO-Dg): 1,4 (d, 6H), 4,0-4,2 (m, 3H), 4,4-5,9 (m, 17-18H), 6,7 (d, 2H), 7,3 (d, 2H), 7,8 (d, 2H) 15 8,6 - 9,3 (m, 4H).

Ud fra 6-{D-2-[4-hydroxyphenyl]-2-(aminoacetamido)acetamido} -penicillansyre og den passende iminoether og under anvendelse af den ovenstående procedure fremstilledes de følgende forbindelser:

0=c 0 - cO-H

i

CH0 1 Δ NH

C=NH

t R1 20 R· Udbytte ,mr+ _% Γ=\ 9,5 1,45 (s, 3H) , 1,55 (s, 3H) , 4,05 (s, L IH), 4,05-4,25 (bs, 2H) , 5,15-5,8 >-' (m, 6H), 6,75 (d, 2H), 7,3 (d, 2H), 7,7 (bs, 5H), 8.6-9,1 (m, 2H).

150856 27 R' Udbytte NMR+ *6 ___________

Cl·-/ V 31 1,45 (s, 3H), 1,55 (s, 3H), 4,0 (s, IH), 4,0-4,5 (bs, 2H), 4,8-6,2 (m, 9H), 6,7 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,7 5 (s, 4H), 8,65-9,2 (m, 2H).

Brv

Cj- 64,4 1,45 (S, 3H), 1,55 (s, 3H), 3,8-4,4 \_y (m, 3H) , 5,2-6,6 (m, 11-12H) , / 6,75 (d, 2H) , 7,3 (d, 2H) , 7,8-8,3 (m, 3H), 8,9-9,4 (m, 2H).

10 C ,V 53,5 1,4 (s, 3H), 1,55 (s, 3H), 4,0 (s, y-f (IH), 4,0-4,3 (bs, 2H), 4,2-6,2

Cl (m, 13H), 6,75 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,5-7,95 (m, 3H), 8,7-9,15 (m, 2H) +Magnetisk kerneresonansspektrum-maxima, ppm; DMSO-Dg; 15 ikke skanderet udover 500 Hz.

Claims

150856 Patentkrav : Analogifremgangsmåde til fremstilling af 6- [<&- (imidoylami-noalkanoylamino)phenylacetamido]penicillansyre-forbindelser af den art, som er omhandlet i dansk patent nr. 137 047 og 5 med den almene formel /-\ CHs r\JHh-co‘nhyYs'y1h 'H J- ά—V 3 co 0 co2h ϊ A NH C=NH R· hvori R betyder hydrogen eller hydroxy, A betyder -C^- eHer CH, I *5 -CH-, og R1 betyder phenyl, som eventuelt er substitueret med 1 eller 2 chlor- eller bromatomer eller trifluormethylgrupper, eller R’ betyder pyridyl,2,6-dichlorpyridyl, thienyl, dibrom-10 thienyl, oxo-benzopyranyl eller bisphenyl, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at en forbindelse med formlen: R-é ''VcH-CO-NHv, 3 w 4e Ynf h-CH3 co aS-* ^co2h I ^ A m2 hvori R og A har den ovenstående betydning, omsættes med en forbindelse med formlen NH Y - X - C - R1 150856 hvori R1 har den ovenstående betydning, X betyder -O- eller -S-, og Y betyder lavere-alkyl, hvorpå, om ønsket, den dannede forbindelse overføres i et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.