DK154144B

DK154144B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 3ae-acylerede macrolidantibiotika

Info

Publication number: DK154144B
Application number: DK076386A
Authority: DK
Inventors: Tatsuro Fujiwara; Tetsuo Matsuda; Toshiyuki Watanabe; Osamu Okegawa; Satoshi Omura; Hideo Sakakibara; Susumu Watanabe
Original assignee: Toyo Jozo Kk
Priority date: 1978-05-10
Filing date: 1986-02-19
Publication date: 1988-10-17
Also published as: DK76386D0; DK154565C; DK76486D0; DK154144C; DK76486A; DK154565B; DK76386A

Description

i

DK 154144 B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 3"-acylerede macrolidantibio-tika med formlen lc pv/r-æq 0H 0Ej HO-V y—0 —0_ \h3co-/ °~L·, / \ CHj - CH3

/ O-OH

Λ /=° C 1 c] - V/ V _ . : · hvor R^ betegner alkanoyl med 2-4 carbonatomer, og betegner alkanoyl med 4-5 carbonatomer, eller syreadditionssalte deraf .

De omhandlede salte er fysiologisk acceptable salte.

5 Foretrukne eksempler på .sådanne salte er uorganiske salte såsom hydrochlorid," sulfat og phosphat eller organiske salte 'såsem acetat, propionat, tartrat, citrat, succinat, malat, aspartat og glutamat.

De hidtil ukendte forbindelser lc har forøget antibak-teriel aktivitet mod følsomme og resistente stammer i sam-10 menligning med kendte 16-leddede macrolidantibiotika såsom antibiotika af leucomycingruppen indbefattet josamycin, antibiotika af SF-837-gruppen, antibiotika af YL-704-grup-pen og antibiotika af espinomycingruppen. Især er de hidtil ukendte forbindelser effektive mod de stammer, som er 15 resistente over for andre macrolidantibiotika såsom olean domycin, erythromycin, carbomycin og spiramycin. Desuden kan en deacylering i 4"-stillingen, som er en af grundene til inaktivering af 16-leddede macrolidantibiotika, ikke let forekomme, og derfor bevares et højt blodniveau. Til-20 lige er den stærke og vedvarende bitre smag, som normalt optræder hos macrolidantibiotika, reduceret, og det er derfor muligt at give det virksomme stof i form af sirup til børn, som ikke kan indtage tabletter eller kapsler.

De omhandlede antibiotika lc forventes at blive et udmærket 2

DK 154144 B

middel til bekæmpelse af infektioner.

Nomenklaturen for forbindelserne le bestemmes af nomenklaturen på udgangsmaterialerne, der kendes som antibiotika med formlen 2 r: ; ' 4¾ . QH. N(CH3i '' Oil ~ 3 ¾ 1 Cii*ch3 hvor R^ har samme betydning som ovenfor, og de omfatter følgende antibiotika:

Antibiotika

Leucomycin A^ COCi^CH (CH^) 2

Ac C0CELCHoCHo 5 5 2 2 3

Det nævnte antibiotika med formlen 2 har 4 hydroxyl-grupper i stillingerne 3,9,2' og 3”. Af disse grupper acy-leres hydroxylgrupperne i stillingerne 3,9 og 2' let, og der er derfor blevet rapporteret mange acylerede derivater 10 deraf. Imidlertid er hydroxylgruppen i stillingen 3" ble vet angivet som inaktiv.

Det har vist sig i forbindelse med opfindelsen, at hydroxylgruppen i andre stillinger end i 3"-sti11ingen, nemlig hydroxylgruppen i stillingen 3 og/eller 9 kan be-15 skyttes ved hjælp af beskyttelsesgrupper, som let kan fjer nes uden frembringelse af en 3"-deacylering efter forudgående acylering af hydroxylgruppen i stillingen 3".

3

DK 154144 B

Gennem den foreliggende opfindelse fremstilles de hidtil ukendte antibiotika med formlen lc.

De omhandlede antibiotika har højere blodniveau ved indgift og har højere aktivitet mod følsomme og resistente 5 stammer end de tilsvarende stamantibiotika.

De omhandlede forbindelser har en mindre bitter smag end de tilsvarende stamantibiotika.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af forbindelsen lc eller syreadditionssalte deraf er ejendom-10 melig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

Den i kravet nævnte forbindelse 4 svarer til det 2'-acylerede antibiotikum med formlen 3, hvori 3- og 9-hydroxygrupperne er beskyttede:

CH- r-CHO OR?1®’)’ OH

: H0 V//~ 0 0 “λ i^>0R< \h3C0-< °~\ °-( / \ ch3 ch3

3>—OH

y ch3 \

\A/0 c ^D

i X0X

hvor Rg betegner alkanoyl med 2-4 carbonatomer, og har 15 samme betydning som ovenfor.

Beskyttelsesgruppen er en gruppe, som selektivt let kan fjernes uden ødelæggelse af den kemiske struktur efter 3"-acylering, nemlig halogeneret acetyl såsom chloracetyl, dichloracetyl, trichloracetyl eller trifluoracetyl eller 20 en silylgruppe. Blandt disse beskyttelsesgrupper er indføringen af den chlorerede acetylgruppe anført i fremlagt japansk patentansøgning nr. 50-96584.

Indføring af silylgruppen kan ske ved silylering af et antibiotikum med formlen 2 eller dets 2'-acylderivat 25 med formlen 3 ved passende silyleringsreagenser såsom tri- substitueret halogensilan eller hexasubstitueret silazan.

Et eksempel på trisubstitueret halogensilan er lavmoleky-

DK 154144B

4 lært trialkylhalogensilan såsom trimethylchlorsilan. Et eksempel på hexasubstitueret silazan er lavmolekylært hexaalkylsilazan såsom hexamethylsilazan- Ethvert silyle-ringsreagens kan benyttes, hvis den indførte silylgruppe 5 ikke kan fjernes ved hjælp af vand.

Ovenstående silyleringsreaktion udføres normalt i et indifferent organisk opløsningsmiddel såsom dichlormethan, chloroform eller methylisobutylketon ved stuetemperatur eller lavere. Mængden af silyleringsreagens kan være 1-1,8 10 mol ækvivalenter. Ved silyleringsreaktionen ved hjælp af trisubstitueret halogensilan benytter man fortrinsvis en tertiær organisk amin som dehydrohalogeneringsreagens.

Nævnes kan f.eks. pyridin, quinolin, N-metylmorpholin eller dimethylanilin.

15 Den silylerede forbindelse kan isoleres ved, at man hælder reaktionsblandingen i vand og ekstraherer med et passende organisk opløsningsmiddel, som ikke er blandbart med vand. Sily1gruppen i forbindelsen er stabil over for vand og kan ikke fjernes i nærværelse af vand.

20 Som forklaret ovenfor anvendes ved beskyttelsen af hydroxylgruppen i 2'-stillingen i et antibiotikum 2, såsan leucomycin A^ eller Ag, en aIkanoylgruppe med 2-4 carbonatomer såsom fortrinsvis acetyl. 2'-acetyleringen kan udføres ved den fremgangsmå-25 de, som er beskrevet i japansk patentpublikation nr.

53-7434.

Ovenstående forbindelse 4 3"-acyleres ved hjælp af et aliphatisk carboxylsyrehalogenid med 2-4 carbonatomer. Reaktionen udføres i nærværelse af en tertiær organisk 30 amin i et indifferent organisk opløsningsmiddel ved opvarmning. Eksempler på indifferente organiske opløsningsmidler er acetone, methylethylketon, ethylacetat, dime-thoxyethan, tetrahydrofuran, dioxan, benzen og toluen. Eksempler på tertiære organiske aminer er pyridin, pico-35 lin og collidin. En anden organisk amin såsom triethyla-min, dimethylanilin, tribenzylamin, N-methylpiperidin, N-methylmorpholin, quinolin eller isoquinolin kan også benyttes. Eksempler på aliphatiske carboxylsyrehalogeni- 5

DK 154144 B

der er acetylchlorid, propionylchlorid, butyryIchlorid eller isobutyryIchlorid. Temperaturen kan være 50-120°C. Reaktionstiden varierer i afhængighed af reaktionstemperaturen, og da reaktionens fremadskriden kan kontrolleres 5 ved tyndtlagschromatografi på silicagel, kan afslutningen bestemmes i området 1-150 timer.

I ovenstående acyleringsreaktion acyleres 3"-hydroxy1-gruppen, og såfremt er silyl, fremstilles der som biprodukt en. forbindelse med 17 18 17 18 10 (-CH=CH0R3) i stillingerne 17 og 18 i stedet for (-CH2-CHO).

Den således opnåede blanding af forbindelsen svarende til forbindelsen 5 nævnt i kravet og forbindelsen 6 nævnt i kravet kan isoleres på den måde, at reaktionsblandingen indstilles ved hjælp af alkali til en pH-værdi på 8-10 i vand til udfældning efterfulgt af filtrering, og 15 når reaktionsopløsningsmidlet er et med vand ikke bland bart organisk opløsningsmiddel, hældes reaktionsblandingen i vand, hvorpå man indstiller pH-værdien til 8-10 og eks-traherer med et med vand ikke blandbart organisk opløsningsmiddel. Yderligere rensning kan ske ved chromatografi un-20 der anvendelse af silicagel, aktivt aluminiumoxid eller adsorptionsharpiks og eluering med f.eks. en blanding af benzen og acetone.

Fjernelsen af beskyttelsesgrupperne i stillingerne 3,9 og 2" i forbindelsen 5 og 3,9,18 og 2" i blandingen 25 af forbindelsen svarende til forbindelsen 5'og forbindelsen 6 afhænger af beskyttelsesgruppen i stillingerne 3 og 9.

I det tilfælde, hvor R^ er en chloreret acetylgruppe, fjernes beskyttelsesgruppen i stillingen 3 og 9 ved behandling med ammoniak i methanol. Reaktionens fremadskriden 30 kan kontrolleres ved tyndtlagschromatografi på silicagel, og reaktionen kan afsluttes, når en plet af forbindelsen 5 ikke detekteres.

En forbindelse med formlen 7 6

DK 154144 B

fnR_ N(CH,)2 ORa 0 \ 0 \ CH, CH3

H

C '7V ) hvor R^, R^ og Rg har samme betydning som ovenfor, og som fås ved afdestillation -af ammoniak og alkohol fra reaktionsblandingen, opvarmes i methanol, som kan indeholde vand, til fjernelse af 2'-acetylgruppen. Opvarmningen kan 5 foretages ved tilbagesvaling i methanol. Det stof, som fås ved af destillation af methanolet, kan renses til fremstilling af forbindelsen lc.

I metode- (a) og (b) i kravet kan som base nævnes tertiær organisk amin, alkalimetalcarbonat eller basisk 10 harpiks, opvarmning kan ske ved tilbagesvaling af det or ganiske opløsningsmiddel, og afslutningen af reaktionen kan kontrolleres ved tyndtlagschromatografi på silicagel.

Isolation af forbindelserne lc fra reaktionsblandingen udføres ved kendte adskillelses- og rensningsmetoder 15 i forbindelse med macrolidantibiotika såsom inddampning, ekstraktion, vaskning, overført ekstraktion og rekrystal-lisation samt chromatografi under anvendelse af silicagel, aktivt aluminiumoxid, adsorptionsharpiks eller ionbytter-harpiks.

20 Antimikrobielle spektre for forbindelserne lc frem går af tabellen nedenfor. Disse data viser, at forbindelserne lc udviser forøget antimikrobiel aktivitet ikke blot mod følsomme stammer men også mod resistente stammer, set i sammenligning med kendte antibiotika.

25 Da leucomycin-Ag-derivateme er bedre end leucomycin-A^_ -stamanti- biotikumet, må man antage, at dette også gælder for leucomycin-A^-de- 7 DK 1ί)4144Β ω Π3 ' α) . ' Ό --1 . q-j

LO VO ΙΟ VO VO I I (H

pH pH pH pH O O O O I ^

2 o O O O VO · (U

ι-j pH pH pH pH H S

^ Λ * Λ ο,Ι --Q _,j ' (0 rH Cd) >, ' ·Η ίϋ +-> I O Qj 0 VO 00 00 LO 00 ^ 3*

0 . · I · · I · g1 V

cd rH o o o cs o 5« 1 rH O rH i O O'

O <J rH <T3 I

j ae - 2 nj n J <d (D ·

rH rH 4J C

g__o a d) \ , 0) Ό

bo ' v+) O

3- a ω +) C -Η -H d) X oo vo ^ oo ootUtng /—V +J .... · >1 d) U) u a O rH O O O O O O '.gSHtn -Q m 2 1/1 2 t o ό a H Λ ! U -ri -ri S 2 < A X! rH ^ o r s · -μ o a LO 1-4 i >1 a >1 u υ 4->

------ · <U (ti U

£ -so

C a H — HH

§ o Od) ^ ·Η ΜΗ Λ! •ή (¾ oo o oo oo io ^'Mtn

Id ° o r-3 o O o 2 °' ' m 5 > tjCo O rH O 51 r

Jj I IO rH rH r* (ti fiOe /V /v Or-H-

1 A A O rH

O E, § a> w S

υ LO rJ +> -r) \ n ' a vo u--d) a> o

+J M rH

(1) W 01

Irt rH ·ιΗ ·ιΗ tr> ς. x vovort-oo to rt-

' m +J .... · . d) -Η -H

r 0 rH rH O 0-0 vo O O β 1 ® ^ >-* M a^oa s 4? A , er ΐ S s *2 S mh >,

5 lo 3 ! o » <d S

’H -__-----—- i tø M O

, / 1 did o

^ / rH o <M “O w D

2 / O e N : H-HH d)

Hi UJ / cl, LO tO vO IO to O ; i d) rH d) H

‘Ή n / 00 LO LO tO rH LO O O rH igOM

a X / to to LOU to rH rH iluUll . -H +J / LO CO CO «1 CO rH rH W . 5 pi ri g w/dlSs 2 -H2 O O S ' UMU'S'

Λ /g rH CJ+Jtd-PS

/OTOTOT OT Cd OT OT OT 0 UJ β W α /.pH 33 3 U3 3 3 W> /cJøø 0 00 0 0 Ol

·/ cå h h M cd M fn H

/ tm 3 3 3 ^3 3 3 PH

/ H d d ej rtrtw *2 /O · ! * / X! X! X! ρ,ΛΛΛΡη / / cd cd cd fn cd cd cd h / CO co co co co co co co * * * *

DK 154144 B

8

Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Rf-værdierne i eksemplerne måles, hvis ikke andet angives, ved følgende tyndtlagschromatografi: 5 Bærer: silicagel 60 (varenummer 5721, Merck Co.)

Fremkalder: A: N-hexan - benzen - acetone - ethylacetat - methanol (90: 80: 25: 60:30) 10 B: benzen - acetone (3:1)

Eksempel 1 3"-O-butyrylleucomycin A,.:

Til 2'-O-acetylleucomycin A,. (5 g) opløst i tørt dichlor-methan (25 ml) sættes tørt pyridin (1,64 ml), og man tilsætter 15 dråbevis dichloracetylchlorid (1,77 ml) under isafkøling og omrører i løbet af 1 time. Der sættes koldt vand til reaktionsblandingen, og man ekstraherer med dichlormethan (25 ml).

Efter tørring af dichlormethanlaget ved hjælp af vandfrit magnesiumsulfat tørrer man i vakuum og får kvantitativt 2'-0-20 acetyl-3, 9-di-(0-dichloracetyl)-leucomycin A^.

Til ovenstående forbindelse (5 g) opløst i tørt di-oxan (50 ml) sættes ^-collidin (7,87 ml), og man tilsætter dråbevis butyrylchlorid (6,62 ml) under afkøling, hvorefter man omrører ved 90°C i 80 timer. Reaktionsblandingen hældes 25 i koldt vand (500 ml) og ekstraheres to gange med benzen (400 ml). Benzenlaget tørres ved tilsætning af vandfrit magnesiumsulfat, og man tørrer derefter i vakuum. Resten opløses i methanol (20 ml), og der tilsættes en ammoniakmættet metha-nolopløsning (20 ml), og man omrører ved stuetemperatur i 30 30 minutter. Reaktionsblandingen hældes i koldt vand (500 ml), og man ekstraherer to gange med benzen (400 ml), tørrer ved hjælp af vandfrit magnesiumsulfat og foretager en tørring i vakuum. Resten chromatograferes på silicagelsøjle ved gradient eluering med en blanding af benzen og acetone (15: 1, 35 7; 1 og 5:1). Hovedfraktionerne samles og tørres i vakuum, 9

DK 154144 B

hvorved man .får råt 2'-0-acetyl-3"-0-butyrylleucomycin Aj.

(1,25 g). Dette stof opløses i methanol (2.0 ml), tilbagesvales ved opvarmning i 20 timer og tørres i vakuum. Resten chromatograferes igen på silicagelsøjle under eluering med 5 en blanding af benzen og acetone (6:1). Fraktioner, som udviser Rf = 0,48 tørres til opnåelse af produktet (870 mg).

fi

Rf* - 0,48, Rf_ =0,15

" - 4- _L

Masse (m/e): .841 (M ), 754 (M -87) NMR (CDC13), 100MHz): 1,42 (3"-CH3 ), 2,57 (3'-N(CH3)2), 10 3,55 (-4-OCH3), 9,84 (CHO) ppm.

Eksempel 2 3"-0-acetylleucomycin A^:

Til 2'-O-acetylleucomycin A^ (5 g) opløst i tørt di-chlormethan (25 ml) sættes tørt pyridin (L,64 ml), og man 15 tilsætter dråbevis dichloracetylchlorid (1.,,77 ml) under isafkøling og omrører i 1 time. Til reaktionsblandingen sættes koldt vand (25 ml), og man ekstraherer med dichlormethan (25 ml). Dichlormethanlaget tørres ved hjælp af vandfrit magnesiumsulfat, hvorefter man tørrer i vakuum til opnåelse af 20 en kvantitativ mængde af 2'-0-acetyl-3,9-di-(0-dichloracetyl) -leucomycin-A^.

Til ovenstående forbindelse (5 g) opløst i tørt ethyl-acetat (50 ml) sættes J'-collidin (9,4 ml) under isafkøling, og man tilsætter acetylchlorid (4,6 ml) og omrører 72 timer 25 ved 70°C.

Reaktionsblandingen hældes i koldt vand (250 ml) og ekstraheres to gange med chloroform (150 ml). Chloroformlaget vaskes med fortyndet saltsyre (pH 2), vand og mættet vandig natriumbicarbonatopløsning i den nævnte rækkefølge, og man 30 tørrer ved hjælp af vandfrit natriumsulfat og foretager derefter en tørring i vakuum. Resten opløses i methanol (10 ml), og man tilsætter ammoniakmættet methanolopløsning (10 ml) og omrører derefter ved stuetemperatur i 3.0 minutter. Reaktionsblandingen hældes i koldt vand (250 ml) og ekstraheres 35 to gange med chloroform. Chloroformlaget afvandes med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum. Resten chromatogra- 10

DK 154144B

feres på silicagelsøjle under fortynding med benzen og acetone (8:1), og eluatet inddampes til opnåelse af det rå pulver (1,4 g) af 2', 3"-di-0-acetylleucomycin A^. Dette rå pulver opløses i methanol (20 ml), tilbagesvales 20 5 timer og tørres i vakuum. Resten chromatograferes igen på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (6:1). Eluatet med RfA = 0,46 tørres i vakuum til opnåelse af forbindelsen (716 mg).

RfA =0,46 10 Masse (m/e): 827 (M+), 768 (M+-59), 726 (M+-101).

NMR (CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-CH3), 2,00 (3"-OAc), 9,89 (CHO) ppm.

Eksempel 3 3"-0-propionylleucomycin A^ 15 I eksempel 1 erstattes butyrylchlorid (6,62 ml) med propionylchlorid (4,72 ml) til opnåelse åf 2'-0-acetyl-3"-0-propionylleucomycin A,. (1,30 g).

Denne forbindelse opløses i methanol (20 ml), tilbagesvales i 16 timer og tørres derpå i vakuum. Resten op-20 løses i en lille mængde benzen og chromatograferes på silicagelsø jle under eluering med benzen og acetone (6:1). Fraktioner med Rf^ = 0,47 tørres til opnåelse af forbindelsen (850 mg).

RfA = 0,47, Rfg =0,14 25 Masse (m/e):827 (M+), 754 (M+-73), 740 (M+-87) NMR (CDC13, 100 MHz):1,44 (3"-CH3), 2,57 (3'-N(CH3)2), 3,56(4-OCH3), 9,86 (CHO) ppm.

Eksempel 4 3"-0-acetylleucomycin A^ 30 I eksempel 2 erstattes 2'-O-acetylleucomycin A^ med 2'-O-acetylleucomycin A^ til opnåelse af 2',3"-di-0-acetyl-leucomycin A,- (1,4 g).

Denne forbindelse opløses i methanol (50 ml), tilbagesvales i 15 timer og tørres derpå i vakuum. Den således 11

DK 154144 B

opnåede rest chromatograferes på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (3:1). Fraktioner med Rf^ = 0,45 inddampes i vakuum til opnåelse af forbindelsen (710 mg).

Rf. = 0,45, Rf„ = 0,10

** " _L _1_ I

5 Masse (m/e):813 (M ), 754 (M -59), 726 (M -87 NMR (CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-CH3), 2,02 (3"-0Ac), 9,,88 (CHO) ppm.

Eksempel 5 3"-0-.aeetylleuconiycin A,- 10 Til 2a-0-acetylleucomycin A,. (65 g) opløst i tørt di- chlormethan ((300 ml) sættes tørt pyridin (44 ml) og trime-thylchlorsilan (39 ml), og derpå omrører man 1 time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen hældes i vand (2 1) og ekstra-heres med chloroform (500 ml). Ekstrakten vaskes med 0,1 N HC1, 15 vand og 3% vandig ammoniak i den nævnte rækkefølge, afvandes med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af det rå 2,-'D-acetyl-3,9-di-(0-trimethylsilyl)-leucomycin A5 (69 g).·

Ovenstående stof opløses i tørt ethylacetat (200 ml), 20 og man tilsætter tribenzylamin (227 g) og derpå acetylchlorid (51 ml) under isafkøling, hvorefter man omrører ved 70°C i 40 timer. Reåktionsblandingen hældes i vand (2 1), indstilles •til en pH-værdi på 9,5 ved tilsætning af vandig ammoniak og ekstraheres med chloroform (1 1). Ekstrakten vaskes med vand, 25 afvandes ved tilsætning af vandfrit magnesiumsulfat og inddampes i vakuum til opnåelse af 2', 3"-di-0-acetyl-3,9-di-(O-trimethylsilyl)-leucomycin A^, hvori der indeholdes en lille mængde 18, 2', 3"-triacetyl-3,9-di-(0-trimethylsilyl) -17-dehydroleucomycin A,. og en stor mængde tribenzylamin.

30 Der tilsættes ammoniakmættet methanolopløsning (250 ml) under isafkøling, og man omrører i 1,5 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen hældes i vand (2 J.) og ekstraheres med chloroform (1 1). Ekstrakten vaskes med vand, afvandes med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum. Resten

DK 154144 B

12 opløses i koldt methanol (600 ml), og man frafiltrerer . den uopløselige tribenzylamin. Filtratet tilbagesvales ved opvarmning i 20 timer og tørres derpå i vakuum til opnåelse af det rå 3"-0-acetyl-3,9-di-(0-trimethylsilyl)-leucomycin 5 A5 (69 g).

Stoffet opløses i en blanding af eddikesyre, tetra-hydrofuran og vand (3:1:1) (250 ml) og omrøres 1 time ved stuetemperatur. Til reaktionsblandingen sættes chloroform (1 1), og man vasker med 3% vandig ammoniak. Chloroformlaget 10 afvandes med vandigt magnesiumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af det rå 3"-O-acetylleucomycin (64 g), som opløses i en lille mæhgde benzen og hældes på en silicagelsøjle. Der udføres gradvis eluering ved hjælp af benzen og acetone (10:1 - 8:1 - 6:1). Hver fraktion kontrolleres med tyndtlags-15 chromatografi på silicagel, og fraktionerne med Rf^ = 0,45 samles og tørres i vakuum til opnåelse af det rensede stof (45,5 g, udbytte: 70,0%).

RfA = 0,45, RfB = 0,10

Masse (m/e): 813 (M+), 754 (M+-59), 726 (M+-87) 20 Styrke: 2850 ^/mg (sammenlignet med standardleuco- mycin).

Eksempel 6 3"-O-propionylleucomycin A^:

Til 2'-O-acetylleucomycin A^ (65 g) opløst i tørt 25 dichlormethan (300 ml isættes tørt pyridin (44 ml) og trime-thylchlorsilan (39 ml), og man omrører 1 time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen hældes i vand (2 1) og ekstra-heres med chloroform (500 ml). Ekstrakten vaskes med 0,1 N HC1, med vand og med 3% vandig ammoniak i den nævnte rækkefølge, 30 afvandes med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af det rå 2'-O-acetyl-3,9-di-(0-trimethylsilyl)-leucomycin A,- (70 g).

Til ovennævnte rå stof opløst i tørt dioxan (200 ml) sættes tribenzylamin (230 g), og man tilsætter propionylchlo-35 rid (65 ml) under isafkøling og omrører derpå ved 90°C i 24 timer. Reaktionsblandingen hældes i vand (2 1), 13

DK 154144 B

og man indstiller til en pH-værdi på 9,5 ved tilsætning af vandig ammoniak og ekstraherer med chloroform (1 1). Ekstrakten afvandes med vandfrit magnesiumsulfat og tørres til opnåelse af 2'-0-acetyl-3,9-di-(O-trimethylsilyl)-3"-5 O-propionylleucomycin A,_, hvori der findes en lille mængde 2'-0-acetyl-3,9-di-(O-trimethylsilyl)-18, 3'-di-O-propionyl- 17-dehydroleucomycin A,- og en stor mængde tribenzylamin.

Der tilsættes ammoniakmættet methanolopløsning (250 ml) og omrøres ved stuetemperatur i 1,5 timer. Reaktionsblandin-10 gen hældes i vand (2 1) og ekstraheres med chloroform (1 1). Ekstrakten vaskes med vand, afvandes med vandfrit magnesiumsulfat og tørres i vakuum. Resten opløses i koldt methanol, og den uopløselige tribenzylamin filtreres fra. Filtratet tilbagesvales 20 timer og tørres i vakuum til opnåelse af 15 råt 3,9-di-(O-trimethylsilyl)-3"-O-propionylleucomycin A^.

Dette stof opløses i en blanding af eddikesyre, tetrahydro-furan og vand (3:1:1) (250 ml) og omrøres 1 time ved stuetemperatur. Til reaktionsblandingen sættes chloroform (1 1), og man vasker med 3% vandig ammoniak. Chloroformlaget af-20 vandes med vandigt magnesiumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af det rå 3"-O-propionylleucomycin A,. (60 g), som opløses i en lille mængde benzen og hældes på en silicagel-søjle. Eluering udføres ved blandinger af benzen og acetone (15:1 - 10::1 - 8:1). Hver fraktion'kontrolleres ved tyndt-25 lagschromatografi på silicagel, og fraktionerne med Rf = Ά 0,57 samles og tørres i vakuum til opnåelse af det rensede stof (52,5 g, udbytte: 79,4%).

Rf, = 0,57, Rf_ =0,14 . . . ^ -f -f 4- Mærke (m/e): 827 (M ), 754 (M -73), 740 (M -87) 30 Styrke: 2850 ^'/mg (sammenlignet med standardleucomycin).

Claims

DK 154144B Analogifremgangsmåde til fremstilling af et 3”-acyleret macrolidantibiotikum med formlen lc χ3 ræo OH /N<CH3,! 0R3 H0'H\v//"0 0R< \h3co-< ' 0—( o—\ y \ CH3 CH3 ‘\ , 3 /—OH 3 .... hvor R^ betegner alkanoyl med 2-4 carbonatomer, og R^ betegner alkanoyl med 4-5 carbonatomer, eller syreadditiens-salte deraf,'- kendetegnet ved, at man acyle- rer en forbindelse med formlen 4 CH, j-CHO 0R? N(ch3)2 OH /\/\ )H fcL· bs0-6. v /~°~\ . )-° “V )70¾ >h3co-v 0 \ 0 \ /7 N. 0¾ ρττ X CH3V \Λ07° <*> DK 154144 B hvor Rg betegner chloreret acetyl eller silyl, Rg betegner alkanoyl med 2-4 carbonatomer, og R^ har .samme betydning som ovenfor, med et aliphatisk carboxylsyrehalogenid med 2-4 carbonatomer under opvarmning i nærværelse af en tertiær organisk amin i et indifferent organisk opløsningsmiddel til fremstilling af A) når Rg = chloreret -acetyl, forbindelsen med formlen 5, CHj H310 N(CH3)3 II oil,, / 0¾ Rs!y— o o -/¾¾0B( \u3co-\ ( X°-<4 >f \ CH3 CH3 \ y~ oiv \ / \ / ° C i- 3 V 0 hvor Ry R4 og Rg har samme betydning som ovenfor, og Rg' er chloreret acetyl eller B) når Rg - silyl, en blanding af en forbindelse svarende til formlen 5, hvor Ry R^ og Rg har samme betydning scm ovenfor, men hvor Rg, er silyl, og en forbindelse med formlen 6 CH3 f=CH0R. N(CH3)2 ϊ Γ 3 0¾ / OR3 R g — 0 — 0 —0¾ XhjCO-Q °~Λ 0_\ /f V CH3 ch3 € y— ORs" < Λ >° (o v o DK 154144 B hvor Rg, R4 og Rg har samme betydning som ovenfor, og R,.,, er silyl, hvorefter, når R^ betegner en chloreret acetylgruppe, forbindelsen med formlen 5 behandles med ammoniak i methanol til fjernelse af den chlorerede acetylgruppe, 5 hvorefter man fjerner 2'-acyl ved behandling med methanol under opvarmning, og når R^ betegner silyl, blandingen behandles som følger: (a) man fjerner silylgrupperne og acylgrupperne i stillingerne 18 og 2' ved opvarmning i vandig lavmoleky- 10 lær alkanol, som kan indeholde en base, (b) man fjerner silylgrupperne og acylgruppen i stillingen 18 ved behandling ved stuetemperatur i vandig lavmolekylær alkanol i nærværelse af en base og fjerner 2'-acylgruppen ved opvarmning i methanol, som kan inde- 15 holde vand, (c) man fjerner acylgruppen i 18-stillingen ved behandling med methanol indeholdende ammoniak, hvorefter man fjerner silylgrupperne og 2'-acylgruppen ved opvarmning med vandig lavmolekylær alkohol, eller 20 (d) man fjerner acylgruppen i 18-stillingen ved be handling med methanol indeholdende ammoniak, hvorefter man fjerner 21-acylgruppen ved opvamning med methanol og fjerner silylgrupperne ved behandling med vandig syre.