DK154565B

DK154565B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 3ae-acylerede macrolid antibiotika

Info

Publication number: DK154565B
Application number: DK076486A
Authority: DK
Inventors: Tatsuro Fujiwara; Tetsuo Matsuda; Toshiyuki Watanabe; Osamu Okegawa; Satoshi Omura; Hideo Sakakibara; Susumu Watanabe
Original assignee: Toyo Jozo Kk
Priority date: 1978-05-10
Filing date: 1986-02-19
Publication date: 1988-11-28
Also published as: DK76386D0; DK154565C; DK76486D0; DK154144C; DK76486A; DK76386A; DK154144B

Description

i

DK 154565 B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 3"-acylerede macrolidantibiotika med formlen 1 CH ' Γ*0 ?(CH3’2 OB' 1 λ V-/ r~<* /\ / \ n J1' Vn -/H3CV0B·' H0_\ y w vc \h3CO-< xCHj CHj

/ V-OH

> Cft, \ , · / l )=0 \y N/ hvor et af symbolerne R' og R" betegner R^r medens det andet .betegner R^, idet R^ betegner alkanoyl med 2-4 car-bonatomer, og R^ betegner alkanoyl med 4-5 car-bonatomer, eller syreadditionsalte deraf.

5 De omhandlede salte er fysiologisk acceptable salte.

Foretrukne eksempler på disse salte er uorganiske salte såsom hydrochlorid, sulfat eller phosphat eller organiske salte såsom acetat, propionat, tartrat, citrat, succinat, malat, aspartat eller glutamat.

10 De hidtil ukendte forbindelser 1 har forøget antibak- teriel virkning over for følsomme og resistente stammer i sammenligning med kendte 16-leddede macrolidantibiotika såsom antibiotika af leucomycingruppen indbefattet josa-mycin, antibiotika af SF-837-gruppen, antibiotika af YL-15 704-gruppen og antibiotika af espinomycingruppen. Især er de hidtil ukendte forbindelser effektive mod stammer, som er resistente over for andre macrolidantibiotika såsom oleandomycin, erythromycin, carbomycin og spiramycin.

Desuden vil deacylering i 4"-stillingen, som er en hyppig

DK 154565 B

2 grund til inaktivering af 16-leddede macrolidantibiotika, ikke let optræde, og derfor fås et højt blodniveau. Endvidere er den stærke og vedvarende bitre smag, som normalt er karakteristisk for macrolidantibiotika, reduceret, og 5 man kan derfor benytte forbindelserne i siruppræparater til børn, som ikke kan indtage tabletter eller kapsler.

De omhandlede antibiotika 1 forventes at vise udmærket terapeutisk virkning ved klinisk behandling af infektioner. Nomenklaturen for forbindelsen 1 påvirkes af substi-10 tuenten i stillingerne 3" og 4" i formlen 1. Idet 3"- stillingen er acyleret, og den oprindelige acylgruppe i 4"-stillingen er omarrangeret til 3"-stillingen som acyl-omgruppering, er nomenklaturen baseret på leucomycin V, et antibiotikum med formlen 2 nedenfor, hvor beteg-15 ner hydrogen.

Det nævnte antibiotikum udtrykkes med formlen 2 CH3 i-CHO oh N(CH3)2 oh ^h3co-< CH3 CH3

0H

y ch3\ vV° hvor R4' er hydrogen eller R4, hvor R4 har samme betydning som ovenfor, og følgende antibiotika med denne formel kan nævnes:

Antibiotika R„' - -4__

Leucomycin A1 COCH2CH(CH3) " a5 coch2ch2ch3 " A? COCH2CH3 " Ag C0CH3

DK 154565B

3

Det omhandlede antibiotikum med formlen 2 har 4 hydro-xylgrupper i stillingerne 3, 9, 2' og 3". Af disse grupper acyleres hydroxylgrupperne i stillingerne 3, 9 og 2' let, og der er derfor blevet rapporteret mange acyle-5 rede derivater deraf. Imidlertid angives hydroxylgrup-pen i 3"-stillingen at være inaktiv.

I forbindelse med opfindelsen har 'det vist sig, at hydroxylgrupperne i de andre’ stillinger end 3"-stillingen, især hydroxylgruppen i stillingen 3 og/eller 9, kan 10 beskyttes ved hjælp åf·. en beskyttelsesgruppe, som .let kan fjernes, uden at der sker en 3"-deacylering efter den forudgående acylering af hydroxylgruppen i 3"-stilling- ΘΙ1 * Gennem den foreliggende opfindelse tilvejebringes de hid-15 til ukendte antibiotika med formlen 1.

De hidtil ukendte antibiotika har højere blodniveau ved indgift og har højere aktivitet mod følsomme og resistente stammer end de tilsvarende stamantibiotika.

De omhandlede antibiotika har ingen bitter smag 20 sammenlignet med de kendte tilsvarende stamantibiotika.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af forbindelsen 1 eller salte deraf er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

Den i kravet nævnte forbindelse 3 kan fremstilles ud fra 25 et antibiotikum 2, hvori R41 har samme betydning som R4, i hvilket man først indfører en beskyttelsesgruppe for hydroxylgruppen i 9-stillingen til forebyggelse af acylering af hydroxylgruppen i stilling 9 i den efterfølgende 3"-acyleringsreaktion. Beskyttelsesgruppen er 30 en gruppe, som let kan fjernes uden ødelæggelse af den kemiske struktur efter 3"-acyleringen, nemlig en chlore-ret acetylgruppe såsom chloracetyl, dichloracetyl eller trichloracetyl.

Denne 9-beskyttede forbindelse kan om ønsket i 35 forvejen eller derpå få beskyttet hydroxylgruppen i

DK 154565 B

4 2'-stillingen ved hjælp af en alkanoylgruppe med 2-4 car-bonatomer såsom acetyl.

Derpå beskyttes hydroxylgruppen i 3-sti11ingen i forbindelsen 3 ved omsætning med et carboxylsyreanhydrid med 5 2-4 carbonatomerf fortrinsvis eddikesyreanhydrid, i nær værelse af en uorganisk base til beskyttelse af stillingerne 3 og 18.

Eksempler på uorganiske baser er alkalimetalhydroxid såsom kaliumhydroxid eller natriumhydroxid, alkalimetal-carbonat såsom kaliumcarbonat eller natriumcarbonat og al-kalimetalhydrogencarbonat såsom natriumbicarbonat. Foretrukne eksempler er alkalimetalcarbonat eller alkalimetal-hydrogencarbonat. Carboxylsyreanhydrider med 2-4 carbon-atomer er f.eks. eddikesyreanhydrid, propionsyreanhydrid 15 eller mælkesyreanhydrid. Temperaturen ved indføring af beskyttelsesgruppen er f.eks. 30-100°C, fortrinsvis 30-60°C.

Ved ovennævnte reaktion acyleres aldehydgruppen i 18-stillingen, og hydroxylgruppen i 3-stillingen beskyttes ved ringslutning mellem carbonatomet i 18-stillingen 20 og oxygenatomet i 3-stillingen. I det tilfælde, hvor hy-droxylgruppen i 2'-stillingen ikke er acyleret i forvejen af en acylgruppe, som fortrinsvis er en acetylgruppe, acyleres denne hydroxylgruppe samtidig.

Den således opnåede forbindelse 4 kan isoleres ved, 25 at reaktionsblandingen indstilles med alkali til en pH- værdi på 8-10 i vand til udfældning efterfulgt af filtrering, og når reaktionsopløsningsmidlet er et organisk opløsningsmiddel, som ikke er blandbart med vand, hældes reaktionsblandingen i vand, og man indstiller pH-værdien 30 på 8-10, hvorefter man ekstraherer med et organisk opløs ningsmiddel, som ikke er blandbart med vand. Yderligere rensning kan foretages ved chromatografi under anvendelse af silicagel, aktivt aluminiumoxid eller adsorptionsharpiks under eluering med f.eks. en blanding af benzen 35 og acetone.

DK 154565 B

5

Ovenstående forbindelse 4 kan 3"-acyleres ved hjælp af aliphatisk carboxylsyrehalogenid. Reaktionen udføres i nærværelse af en tertiær organisk amin i et indifferent organisk opløsningsmiddel ved opvarmning. Eks-5 empier på indifferente organiske opløsningsmidler er acetone, methylethylketon, ethylacetat, dimethoxyethan, tetrahydrofuran, dioxan, benzen og toluen. Eksempler på tertiære organiske aminer er pyridin, picolin og collidin.

Andre organiske aminer såsom triethylamin, dimethylanilin, 10 tribenzylamin, N-methylpiperidin, N-methylmorpholin, qui- nolin og isoquinolin kan benyttes. Carboxylsyrehalogeni-der er sådanne med 2-4 carbonatomer, nemlig acetylchlo-rid, propionylchlorid, butyrylchlorid og isobutyrylchlo-rid. Temperaturen kan være 50-100°C. Reaktionstiden kan 15 variere i afhængighed af reaktionstemperaturen, og da reaktionens fremadskriden kontrolleres ved tyndtlagschro-matografi på silicagel, kan afslutningen bestemmes i området 1-150 timer.

Endvidere kan 3"-acyleringen af forbindelsen 4 fore-20 tages med aliphatiske carboxylsyreanhydrider ved opvarm ning i nærværelse af en base. De aliphatiske carboxyl-syreanhydrider er eddikesyreanhydrid, propionsyreanhydrid, smørsyreanhydrid eller isosmørsyreanhydrid. Basen er al-kalimetalcarbonat såsom kaliumcarbonat eller natriumcar-25 bonat eller tertiære organiske aminer såsom pyridin, pi colin og collidin. Kendte tertiære organiske aminer, som ikke tilhører pyridingruppen, kan benyttes. Reaktionstemperaturen er normalt 50-120°C, fortrinsvis 80-100°. Reaktionstiden kan variere i afhængighed af reaktionstempe-30 raturen, idet reaktionens fremadskriden kan kontrolleres ved tyndtlagschromatografi på silicagel, hvoraf reaktionens afslutning fremgår, normalt 1-100 timer.

Som et resultat af ovennævnte reaktion omlejres den oprindelige 4"-acylgruppe til 3"-stillingen, og alkano-35 ylgruppen med 2-4 carbonatomer, især acetyl, propionyl og butyryl, indføres i 4"-stillingen.

DK 154565 B

6

De således opnåede forbindelser 5' og 5" kan isoleres, ved at reaktionsblandingen indstilles med alkali til en pH-værdi på 8-10 i vand til udfældning efterfulgt af filtrering, og når reaktionsopløsningsmidlet er et med 5 vand ublandbart organisk opløsningsmiddel, hældes reak tionsblandingen i vand, hvorefter man indstiller pH-vær-dien på 8-10 og ekstraherer med et med vand ikke blandbart organisk opløsningsmiddel. Yderligere rensning kan ske ved chromatografi under anvendelse af silicagel, aklø tivt aluminiumoxid eller adsorptionsharpiks under elu-ering med f.eks. en blanding af benzen og acetone.

Fjernelse af beskyttelsesgruppen i 9-stillingen og 18-stillingen sker ved behandling af forbindelserne 5' el. 5" med ammoniak i methanol. Reaktionen kan foregå 15 ved stuetemperatur.Afslutning af reaktionen kan kontrolleres ved forsvinden af forbindelserne 5' og 5" ved tyndtlagschromatografi på silicagel. Ved denne reaktion fjernes acylgruppen i 18-stillingen, og den oprindelige aldehydruppe genindføres.

20 Forbindelsen 6 kan fås ved afdestillation af ammo niak og alkohol fra reaktionsblandingen. Forbindelsen 6 opvarmes i methanol, som kan indeholde vand, til fjernelse af acylgruppen i 2'-stillingen. Opvarmningen kan foretages under tilbagesvaling med methanol. Reaktionen kan 25 kontrolleres ved tyndtlagschromatografi på silicagel.

Det produkt, som fås ved afdestillation af methanol, kan renses til fremstilling af forbindelsen 1.

Isolation af forbindelsen 1 fra reaktionsblandingen foretages ved kendte separations- og rensningsmetoder for 30 macrolidantibiotika såsom inddampning, ekstraktion, vask, overført ekstraktion og omkrystallisation og chromatografi under anvendelse af silicagel, aktivt aluminiumoxid, adsorptionsharpiks eller ionbytterharpiks.

Antimikrobielle spektre for forbindelsen 1 fremgår 35 af nedenstående tabel. Disse data viser, at forbindelsen 1 udviser forøget antimikrobiel aktivitet ikke blot mod følsomme stammer, men også mod resistente stammer, set i sammenligning med kendte antibiotika.

/ DK 154565B

7

Sh tu π3 U) ~ “ ~ ~ ~ — <* \0 vO vO vO O *

• · · . O O O O MH

2 rH rH rH i—I O O O O Og ___rL___ A Λ A As g\ ' o <U .—i T3 I—I i—I Ό \D 00 00 fd τϋ +j u r—t r—t o d m oovo 'ό'Η

<u x cm m o (DC

υ +-> >H rH Tf «I 3 Λ I 0

ό ΐ > A

r to S

>* i cj tn n3 __o

<D 3 W

•H i—I

Ο <D

>i p vO oo id m oo g ».

<H ..1 . . · n R

^ Γ-ΙΟ rHOCSOO^Ci

r—t +-> O rH O 'O -P

g (D rH p-l 3 W

O rH K (0 M0i < A /x Q) - 3- J - P) j o 3

,-, (D

u--- a T1 3 Qi - b -H 3

S i—i o U C

^*rt e*

p io oo vo io 6 I

o · · i · ·, o /¾ +J H rH O ι-H Ο Ο O rH J_|

3ft O in o ?LJ

g ·? ά --5¾

.° o ° > A

Π I : w 3 u

Z r rt- S (D (D

Λ m i .j g t! M 0 3 p co \D rf oo oo ^ to 3 4-1 O rH Ο* Ο Ο Ο Ο O nj m - 0 3 o in o £ ft ^ I in , . o 3 m O < A 0)

j"- i (D -P

^ r S +) u)

£ 3-H

o —^--Q) ω

ft 3 ω P

Λ ο · ·ΗΆ P , ·η oo io oo oo in ** to -η CO O rH Ο Ο O CM Ο O ft — h P O rH O in 0

ft (H rH P

. · y\' a A p u » '. g .

§ tn § 6-3

-__O (D

h 0) P Tf d Φ 0

S - +j _P

IO VO -* 00 in 'f OHfi

+J rH rH Ο Ο Ο ιΟΟΟ E Ο M

tt) o o g (i) tn β

0 .. rH rH (tj -H 3 -H

J° A +> -H 0 1 * c g - 0) ω >h o tn □ -P -H 4-> u y cu m mm tn _ m -S O m /oo in in tn ιηΟΌ σι m Jj uL 5 / tn tn mu m< rH rH ,+J — ^ — ... t in cn cn w ih cn «η rH w cm Βΐϋ (b

•y /¾. Ό S 2 -rH O s Ο O «) CM -Η X II

o /0 rH in 3p ω nj tn +i / tn in tn tn rtrH tn tn tn tDrn

w/-3 3 3 υ 3 3 3 W

. / es o n) <D a) o tu <u o P5HHi>iJ| / tA u fn fn oi fn P fnX' • /bOC33 Mh 3 33ft* * /MnJrirt · ciJ ri rt · *

/ O P> · . . 4J

/ * r£S rCi ft Λ X ^ ft '.

/ (¾ ft ft <U ft ft ft C)

/ doled MrtojcdfH

DK 154565B

8

Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden iflg. opfindelsen.

Rf-værdierne i eksemplerne måles, hvis ikke andet angives, ved følgende tyndtlagschromatografi: Bærer: silicagel 60 (varenummer 5721, Merck Co.) 5 Fremkalder: A: n-hexan-benzen - acetone - ethylacetat - methanol (90: 80: 25: 60: 30) B: benzen - acetone (3: 1) C: benzen - acetone (5: 1) 10 Eksempél 1 3"-O-acetylleucomycin A,-

Til 9-O-dichloracetylleucomycin A^(RfA) = 0,55, Rfg = 0,11)(20 g) opløst i eddikesyreanhydrid (40 ml) sættes natriumhydrogencarbonat(17,4 g), og man omrører ved stuetem-15 peratur i 1 time og ved 60°C i 5 timer. Reaktionsblandingen hældes i isvand (400 ml) og indstilles til en pH-værdi på 9,5 ved tilsætning af vandig ammoniak. Udfældningen frafil-treres, vaskes med vand og tørres til opnåelse af et pulver (21,8 g). Dette behandles ved søjlechromatografi med silica-20 gel under eluering med benzen og acetone (9:1). De eluerede fraktioner med Rf = 0,79 samles og tørres i vakuum, hvorved Ά man får 18,2'-di-0-acetyl-9-0-dichloracetyl-3,18-0-cyclo-leucomycin A^ (14,7 g).

RFa = 0,79, RfB = 0,51, Rfc= 0,22 25 NMR (CDC13, 100 MHz): 2,06 (2*-0Ac), 2,11 (18-OAc), 6,38 (9-COCHCl2) ppm.

Til ovenstående forbindelse (1 g) opløst i tørt ethylacetat (10 ml) sættes ^-collidin (1,5 ml), og man tilsætter dråbevis acetylchlorid (0,72 ml) under omrøring og isafkøling.

30 Derefter fortsættes omrøringen ved 60°C i 20 timer og ved 70°C i 24 timer. Reaktionsproduktet opløses i chloroform (60 ml) og vaskes med 0,1 N HCl, vand, mættet natriumbicarbonat-opløsning og med vand i den nævnte rækkefølge. Opløsningen tørres ved tilsætning af vandfrit magnesiumsulfat og ind-35 dampes under formindsket tryk. Resten chromatograferes på en silicagelsøjle (20 g) under eluering med benzen og acetone

DK 154565 B

9 (15:1). De eluerede fraktioner med Rfg = 0,74 tørres, hvorved man får 18, 2', 3"-tri-0-acetyl-3, 18-0-cyclo-9-0-dichloracetylleucomycin Aj. (Rf^ = 0,74, Rf^, = 0,51) (604 mg).

Denne forbindelse opløses i ammoniakmættet methanol 5 (10 ml) og henstår i 20 timer og tørres i vakuum. Resten opløses i methanol (20 ml), tilbagesvales i 15 timer og tørres derpå i vakuum. Den således opnåede rest chromatogra-feres på en silicagelsøjle (10 g) under eluering med benzen og acetone (3:1). Fraktioner med Rf^ = 0,45 inddampes i 10 vakuum, hvorved man får den forventede forbindelse (450 mg).

Rf= 0,45, Rf_ = 0,10 “ ·“ J_ -L -f

Masse (m/e): 813 (M ), 754 (M -59), 726 (M -87) NMR (CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-CH3), 2,02 (3"-OAc), 9,88 (CHO) ppm.

15 Ovenstående 9-0-dichloracetylleucomycin fremstil les ved den fremgangsmåde, som er beskrevet i fremlagt japansk patentansøgning nr. 50-96584.

Eksempel 2 3"-O-propiony1leucomycin A^: 20 18,2'-di-0-acetyl-9-0-dichloracetyl-3,18-O-cycloleuco- mycin Ag (5 g) fra eksempel 1 opløses i tørt dioxan (50 ml), og man tilsætter tørt ^-collidin (7,5 ml), og dråbevis propionylchlorid (4,5 ml) under isafkøling og omrører ved 90°C i 20 timer. Der tilsættes benzen (500 ml), og man 25 vasker to gange med vand (50 ml) og én gang med fortyndet vandig ammoniak (500 ml). Benzenlaget afvandes ved tilsætning af vandfrit natriumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af et pulver (5,1 g). Dette pulver chromatograferes på en silicagelsøjle under eluering med en blanding af benzen 30 og acetone (18:1). Fraktioner med Κίβ = 0,78 tørres, hvorved man får 18,2'-di-0-acetyl-9-0-dichloracetyl-3,18-0-cyclo-3" -O-propionylleucomycin A3 (2,8 g).

Omkrystallisation med benzen og N-hexan giver farveløse krystaller med smp. 177-179‘C.

35 Disse krystaller opløses i ammoniakmættet methanol- opløsning (50 ml) og henstår 4 timet ved stuetemperatur og tørres i vakuum.

.. DK 154565 B

10

Resten opløses i methanol (50 ml), tilbagesvales i 16 timer og tørres derpå i vakuum. Resten opløses i en lille mængde benzen og chromatograferes på en silicagelsøjle under eluering med en blanding af benzen og acetone (6:1).

5 Fraktioner med Rf^ = 0,47 tørres til opnåelse af den forventede forbindelse (2,1 g).

RfA = 0,47, RfB = 0,14

Masse (m/e): 827 (M+), 754 (M+-73), 740 (M+-87) NMR (CDC13, 100 MHz): 1,44 (3"-CH3), 2,57(3’-N(CH3)2) 10 3,56 (4-OCH3), 9,86 (CHO) ppm.

Eksempel 3 3"-0-butyrylleucomycin Aj. :

Til 18, 21-di-O-acetyl-3,18-0-cyclo-9-0-dichloracetyl-leucomycin (5 g) fra eksempel 1 opløst i tørt dioxan (50 15 ml) sættes tørt ^-collidin (7,51 ml) og man tilsætter buty-rylchlorid (5,57 ml) under isafkøling og omrører ved 90°C i 16 timer. Man sætter benzen (500 ml) til reaktionsblandingen, man vasker to gange med vand og én gang med fortyndet vandig ammoniak (500 ml). Benzenlaget afvandes ved tilsætning af 20 vandfrit natriumsulfat og tørres. Resten chromatograferes på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (20:1). Fraktioner med Rf^ = 0,65 tørres i vakuum til opnåelse af 18,2'-di-O-acetyl-3, l8-0-cyclo-9-0-dichloracetyl-3"-0-butyryl-leucomycin A,_ (2,72 g).

25 RfB = 0,80, Rfc = 0,65 NMR (CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-CH3), 2,06 (2'-Ac), 2,11 (18-Ac), 2,48 (3'-N{CH3)2), 3,46 (4-OCH3), 6,36 (9-COCHCl2) smp. 196-198°C (farveløse krystaller ved omkrystal-30 lisation af en blanding af benzen og n-hexan).

Ovenstående stof opløses i ammoniakmættet methanol-opløsning (20 ml) og henstår 16 timer og tørres i vakuum.

Resten opløses i methanol (50 ml), tilbagesvales i 16 timer og tørres. Resten chromatograferes på silicagelsøjle under 35 eluering med benzen og acetone (6:1). Fraktioner med Rf^ = 0,48. tørres til opnåelse af den forventede forbindelse (1,7 g).

DK 154565 B

11

Rf. = 0,48, Rf_ =0,15 ^ ^ +

Masse (m/e): 841 (M ), 754(M -87) NMR (CDC13, 100 MHz):1,42(3"-CH3), 2,57(3'-N(CH3)2, 3,55 (4-0 CH3), 9,84 (CHO) ppm.

5 Eksempel 4 3"-0-acetylleucomycin A^ I eksempel 1 erstattes 9-O-dichloracetylleucomycin A5 med 9-O-dichloracetylleucomycin A^ til opnåelse af 18,2',3"-tri-0-acetyl-9-0-dichloracetyl-3,18-O-cycloleucomycin A-^ 10 (605) mg).

Denne forbindelse opløses i ammoniakmættet methanol (10 ml), henstår i 20 timer og tørres i vakuum. Resten opløses i methanol (20 ml), tilbagesvales i 16 timer og tørres i vakuum. Den således opnåede rest chromatograferes på en si-15 licagelsøjle (10 g) under eluering med benzen og acetone (6:1).

Fraktioner med Rf = 0,46 tørres i vakuum til opnåelse af den forventede forbindelse (460 mg). Rf = 0,46 Masse (m/e): 827 (M+), 768 (M+-59), 726 (M+-101) NMR(CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-CH3), 2,00 (3"-0Ac), 9,89 (CHO) 20 ppm.

i

Ovenstående 9-O-dichloracetylleucomycin A^ fremstilles ved den fremgangsmåde, som er beskrevet i fremlagt japansk patentansøgning nr. 5096584.

Eksempel 5 25 4"-0-acetyl-3"-0-butyrylleucomycin V.

Til 9-O-chloracetylleucomycin A,.(20 g) opløst i eddi-kesyreanhydrid (40 ml) sættes natriumhydrogencarbonat(17,4 g), og man omrører ved stuetemperatur i én time og ved 60°C i 5 timer. Reaktionsblandingen hældes i isvand (400 ml) og ind-30 stilles til en pH-værdi på 9,5 ved tilsætning af vandig ammoniak. Udfældningen filtreres, vaskes med vand og tørres til opnåelse af et pulver. Dette behandles ved chromatografi på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (9:1).

De eluerede fraktioner med Rf^ = 0,78 samles og tørres i va-35 kuum til opnåelse af 18,2'-di-0-acetyl-9-0-chloracetyl-3,18-O-cycloleucomycin Ar .

DK 154565 B

12

Udbytte: 74%

Rf = 0,78, Rf = 0,50, Rf = 0,22 ABC

NMR (CDC13, 100 MHz): 2,07 (3H, 2'-OAc), 2,12 (3H, 18-OAc), 4,31 (2H, 9-COCH2Cl) ppm.

5 Til ovenstående stof (5 g) opløst i eddikesyreanhy- drid (15 ml) sættes kaliumcarbonat (3,5 g), og man lader reagere ved 90°C i 26 timer og ved 100°C i 6 timer. Reaktionsblandingen hældes i vand (200 ml), indstilles til en pH-værdi på 9,5 ved tilsætning af vandig ammoniak og ekstra- 10 heres to gange med chloroform (200 ml). Ekstrakten vaskes med vand, afvandes med vandfrit natriumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af et pulver (5,07 g). Pulveret chroma-tograferes på silicagel under eluering med benzen og acetone (16:1). Eluater med Rf_ = 0,72 samles og inddampes i vakuum b 15 til opnåelse af 18,2',4"-tri-0-acetyl-3"-0-butyryl-9-0-chlor-acetyl-3, 18-O-cycloleucomycin V (Rfe = 0,72, Rf„ = 0,47) (2,47 g) som opløses i ammoniakmættet methanolopløsning (60 ml), henstår i stuetemperatur i 17 timer og tørres i vakuum.

Resten opløses i methanol (60 ml) og tilbagesvales 20 timer.

20 Reaktionsblandingen tørres i vakuum og chromatograferes på silicagelsøjle under fremkaldelse med benzen og acetone (4:1). Eluerede fraktioner med Rf^ = 0,45 samles og tørres til opnåelse af den forventede forbindelse. Udbytte 1,72 g.

RfA = 0,45, RfB =0,10 25 Masse <m/e), 813 (M+-59), 726 (M+-87) NMR (CDC13, 100 MHz): 1,44 (3"-CH3), 2,16 (4"-OAc), 9,93 (CHO) ppm.

30 Eksempel 6

3"-0-butyryl-4',-0-propionylleucomycin V

Til 9-O-dichloracetylleucomycin A^(RfA = 0,55, Rfg = 0,11)(20 g) opløst i eddikesyreanhydrid (40 ml) sættes natriumhydrogencarbonat (17,4 g), og man omrører ved stuetem- 35 peratur i 1 time og ved 60°C i 5 timer. Reaktionsblandingen hældes i isvand (400 ml) og indstilles til en pH-værdi på

DK 154565 B

13 9,5 ved tilsætning af vandig ammoniak. Udfældningen frafil-treres, vaskes med vand og tørres, hvorved man får et pulver (21,8 g). Dette chromatograferes på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (9:1). De eluerede fraktioner 5 med Rf A = 0,79 samles og tørres i vakuum til opnåelse af 18,2'-di-0-acetyl-9-0-dichloracetyl-3,18-0-cycloleucomycin A5 (14,7 g).

RfA = 0,79, RfB = 0,51, Rfc = 0,22 NMR (CDC13, 100 MHz): 2,06 (2'-OAc), 2,11 (18-OAc), 10 6,38 (9-COCHCl2) ppm.

Ovenstående stof (5 g) opløses i tørt pyridin (30 ml), og man tilsætter propionsyreanhydrid (15 ml) og lader reagere ved 100°C i 40 timer. Reaktionsblandingen hældes i isvand (500 ml), indstilles til en pH-værdi på 9,5 ved tilsætning 15 af vandig ammoniak og ekstraheres to gange med chloroform (300 ml). Chloroformlaget vaskes med vand, afvandes ved tilsætning af vandigt natriumsulfat og tørres i vakuum til opnåelse af et pulver (5,13 g). Dette pulver chromatograferes på silicagelsøjle under eluering med benzen og acetone (18:1).

20 Eluatet med Rfc = 0,63 tørres, hvorved man får 18,2'-di-0- acetyl-3M-0-butyryl-3,18-0-cyclo-9-0-dichloracetyl-4"-0-pro-pionylleucomycin V (1,5 g).

Dette stof opløses i ammoniakmættet methanolopløsning (30 ml), henstår 16 timer og tørres .i vakuum. Resten opløses 25 i methanol (50 ml), tilbagesvales i 20 timer og tørres derpå i vakuum. Den således dannede rest chromatograferes på silicagelsø jle under eluering med benzen og acetone (6:1). Eluatet med Rf^ = 0,46 tørres i vakuum, hvorved man får den forventede forbindelse (1,2 g).

30 R£a = Rfg = 0,11

Masse (m/e): 827 (M+), 754 (M+-73), 740 (M+-87).

NMR (CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-CH3), 2,57 (3'-N(CH3)2), 3,54 (4-OCH3), 9,87 (CHO) ppm.

DK 154565 B

14

Eksempel 7 3 " - O -buty ry 1- 4J' - O -buty ry 1-1 eucomy c in V I eksempel 6 erstattes propionsyreanhydrid (15ml) med smørsyreanhydrid (19ml) til opnåelse af 18,2-di-0-5 acetyl-3"-0-butyryl-3, 18-0-cyclo-9-0-dichloracetyl-4"-0- butyryl-leucomycin V (i; 6g)

RfB = 0,80, Rfc = 0,65 NMR (CDC13, 100 MHz): 1,43 (3"-CH3), 2,06 (2'-Αο),2,11 (18-Ac), 10 2,48 (3'-N(CH3)2), 3,46 (4-OCH3), 6,36 (9-COCHCl2) smp. : 196 - 198°C (farveløse krystaller ved omkrystallisation af en blanding af benzen og n-hexan).

Produktet opløses i ammoniakmættet methanolopløsning 15 (20ml), henstår i 16 timer og. tørres i vakuum. Resten op løses i methanol (50ml), tilbagesvales i 16 timer og tørres. Resten chromatograferes på silicagelsøjle under eluering med en blanding af benzen og acetone (6:1). Fraktioner med Rf = 0,.48 tørres til opnåelse af produktet (1, 7g).

20 RfA = 0,48, RfB = 0,15

Claims

DK 154565 B Analogifremgangsmåde til fremstilling af 3"-ac-yle-rede macrolidantibiotika med formlen 1 j* Γ™ OH /N(CH3)3 OR H0-<^ 0 -\S- 0 -(^3¾ OR"" / /J>-OH -^3 ®> / ch, \ \A0/-° π ) hvor et af symbolerne R' og R" betegner R^/ medens det andet betegner R4, idet R^ betegner alkanoyl med 2-4 car-5 bonatomer, og R^ betegner alkanoyl med 4-5 carbonatomer, eller syreadditionssalte deraf, kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse med formlen 3 17 18 ' (®· Γ® OR/— OH R^VVo Æ^.0R( yHjeo-^ °~( o-( / VoH ®3 CI1’ / Μ\ \/ \ /°° (-3) V 0 hvor R,-^ betegner chloreret acetyl, R^ betegner hydrogen eller alkanoyl med 2-4 carbonatomer, og R^ har samme be-10 tydning som ovenfor, med et aliphatisk carboxylsyreanhy- drid med 2-4 carbonatomer i nærværelse af en uorganisk base til opnåelse af en forbindelse med formlen 4 DK 154565 B j* [T7 OR, /N(CH3h OH RnO-^^'^-O-^’' Vo-^AjOR, /H3C°Vo ^ ° ^ W=o c« hvor og Rg betegner alkanoyl med 2-4 carbonatomer og R^ og Rg^ har samme betydning som ovenfor, hvorpå man A) acylerer forbindelsen (4) i 3"-stillingen med et ali- phatisk carboxylsyrehalogenid med 2-4 carbonatomer i 5 nærværelse af en tertiær organisk amin under opvarmning i et indifferent organisk opløsningsmiddel til opnåelse af en forbindelse- med formlen 5' Cft pCHOR, N(CH»)a 0R, I I \ QR3 / _J n „ AAkoi1' V_o YftC\_rOR+ λ yt η "V \h,CO-^ \ CHs CHa / γ-0 <λ> DK 154565 B hvor R^f R^r ^7 °9 Rg h&r samme betydning som-oven for, eller man B) acylerer forbindelsen (4) i 3"-stillingen med et ali-phatisk carboxylsyreanhydrid med 2-4 carbonatomer i nær-5 værelse af et alkalimetalcarbonat eller en tertiær or ganisk amin under opvarmning Eventuelt i nærværelse af et indifferent organisk opløsningsmiddel til opnåelse af en forbindelse med formlen 5" 17 18 CH3 r-CHOR/ N(CH3)2 1 1 \ OR3 / / Ϊ A /\\ hr\ r-K RsiO-o /Y°“\ / °^H3C/70Ri >H3CO-\ \ 0 ' °\ / \ \ CHa CHa \ 7 ° W~ . , ί'ι hvor R^r RR^, R7 og Rg har samme betydning som ovenfor, hvorefter man behandler forbindelsen (5') eller (5") med 10 ammoniak i methanol til opnåelse af en forbindelse med formlen 6 ch3 p010 0R< n(ch3)2 or ho -A'X'V- 0 -\)~ 0 )>νΛ f 3^)—OH A>\=0 C6D DK 154565B hvor R', R” og R0 har samme betydning som ovenfor, hvor-efter man opvarmer forbindelsen (6) i methanol, som eventuelt indeholder vand, til fjernelse af acylgruppen i 2'-stillingen.