DK155595B

DK155595B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af estere af acyl-carnitiner

Info

Publication number: DK155595B
Application number: DK170580AA
Authority: DK
Inventors: Claudio Cavazza
Original assignee: Sigma Tau Ind Farmaceuti
Priority date: 1979-04-23
Filing date: 1980-04-22
Publication date: 1989-04-24
Also published as: GR68052B; CH642619A5; JPH03236318A; ES8104191A1; AT376656B; IE49701B1; IE49700B1; CH642849A5; IL59914A; IE800800L; ES490765A0; DK170580A; AT375336B; GB2048268B; DE3015636A1; GR68051B; DK155595C; DE3015635A1; FR2455027B1; NL8002369A

Description

DK 155595B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af terapeutisk aktive estere af acyl-carni-tiner.

Mere specielt angår opfindelsen en analogifrem-5 gangsmåde til fremstilling af estere af acylcarnitiner med den almene formel I: (ch3)3^-ch2-ch-ch2-cor" hvori: ^ 10 R* betegner acetyl; halogen-substitueret acetyl (f.eks. chlor-acetyl, dichlor-acetyl, brom-acetyl og lignende)I propionyl; halogen-substitueret propionyl(f.eks. brom-propionyl); butyryl; halogen-substitueret butyry1 (f.eks. chlorbutyryl); isobutyryl; β-hydroxy-butyryl; aceto-15 acetyl, linoleyl eller pantothenyl; og R" betegner methoxy, ethoxy, propyloxy, butyloxy (forudsat at R' ikke betegner acetyl) isopropyloxy, isobutyl-oxy, trichlorethyloxy, trifluorethyloxy, 3-carbethoxy- 2-propyloxy, 3-pyridyl-methoxy, 2-diethylaminoethoxy, 20 2-acetamido-3-methyl-butyloxy, 2-acetamido-4-methyl-pen-tyloxy, 2-acetamido-3-methyl-pentyloxy eller 4-hydroxy-methy1-5-hydroxy-6-methyl-pyrid-3-y1-methoxy.

Det har vist sig, at forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen har interessante farmakologiske egen-25 skaber og derfor kan være egnede til terapeutiske anvendelser .

Specielt har esterne med formlen I vist sig at have en væsentlig inotropisk effekt på grund af virkningsforlængelse og på grund af de er fri for virkninger, 30 som kan hæmme myocardial excitabilitet. Det antages, og opfindelsen er ikke betrænset til nogen teoretisk forklaring, at dette skyldes esterbindingens evne til at beskytte acyl-carnitin mod hurtig metabolisk nedbrydning og hurtigt fald i blodkoncentration. Forbindelser-35 ne har cerebrale neurochemiske virkninger, der består i forandringer af central-serotoninerge aktiviteter.

DK 155595B

2

Forbindelserne kan derfor anvendes terapeutisk a) til behandling af myocardial hypocontrakti1 i te t, der ikke er ledsaget af rytmeforstyrrelser, som f.eks. ved cardiogenisk chok, primært forårsaget af fravær af 5 sammentrækningskraft; b) som antidepressiva i tilfælde af søvnforstyrrelser.

Analogifremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at den omfatter følgende trin: 10 a) tilsætning til en carnitinopløsning i et opløs- ningemiddel, der er udvalgt blandt organiske syrer og de tilsvarende anhydrider, af et acylchlorid med formlen R'Cl, hvori R' har den ovennævnte betydning, idet temperaturen af den således opnåede blanding holdes ved 15-60°C 15 i ca. 4-48 timer, hvorved der opnås det tilsvarende acyl-derivat af carnitin; b) isolering af acylderivatet af carnitin ved til sætning af et udfældningsmiddel til blandingen fra trin (a) og rensning ved gentagen krystallisation; 20 c) omsætning af acylderivatet af carnitin fra trin (b) med et overskud af halogeneringsmiddel ved ca. 25-60°C i ca. 0,3-24 timer og fjernelse af overskudet af halogeneringsmiddel, hvorved der opnås det tilsvarende syrehalogenid af acylderivatet af carnitin; 25 d) kondensering af syrehalogenidet af acylderivatet af carnitin fra trin (c) med en alkohol med formlen R"H, hvori R" har den ovennævnte betydning, idet den således opnåede blanding omrøres ved stuetemperatur i ca. 2-24 timer, hvorved esteren I opnåsi og 30 e) isolering af esteren I ved tørring af blandin gen fra trin (d) og gentagen krystallisation fra organiske opløsningsmidler, eller (a1) suspendering af carnitin i den ønskede alkohol R"H; 35 (b1) omsætning af suspensionen fra trin (a1) med en vandfri uorganisk syre til fuldstændig opløsning af den suspenderede carnitin, hvorved der opnås den tilsvarende ester; 3

DK 155595 B

(c1) omsætning af esteren fra trin (b1) med et overskud af acylchlorid med formlen R'Cl, hvori R' har den ovennævnte betydning, idet den således opnåede blanding holdes ved en temperatur på ca. 25-40°C i ca. 2-24 timer, 5 hvorved der opnås den tilsvarende ester af acylderivatet af carnitin med formlen I; (d') behandling af blandingen indeholdende esteren med formlen I med et organisk opløsningsmiddel, hvori overskuddet af acylchlorid er opløseligt, hvorved et sådant 10 overskud af acylchlorid skilles fra esteren; og (e') rensning af esteren med formlen I ved gentagen krystallisation.

Fremgangsmådetrinnene a)-e) kan illustreres ved følgende synteseskema: 15 CH CH.

v

CH.-N-CH.-CH-CH.COH acylering - CH,-N-CHo-CH-CHoC0H

/ _ I trin (a), ?b) / 2 | CH, Cl OH CH, Cl OR' 20 J 3 CH,· CH, \ + \ +

CHn-N-C^-CH-o^COOH halogenering CH^yN-C^-CH-C^COX

/ _ I trin (c) / I

25 CH3 Cl OR' CH3 Cl” OR' CH3 CH3 + kondensering \ +

CH,-N-CH,-CH-CH,COX og isoleringN Ch'-N-CH~CH-CH9C0R

/ . i / 21 30 CH3 Cl OR' CH3 Cl" OR' trin (a) er den organiske syre eller det tilsvarende anhydrid, hvori carnitin opløses, hensigtsmæssigt halogeneret. Specielt foretrukne opløsnings-35 midler er trifluoreddikesyre og trichloreddikesyre.

2 I trin (b) udvælges udfældningsmidlet blandt estere og ketoner, idet ethylether specielt foretrækkes.

4

DK 155595 B

I rensningstrinnet ved gentagen krystallisation af car-nitin-acyl-derivatet anvendes fortrinsvis ethanol, acetone, isopropanol og acetonitril.

I trin (c) er halogeneringen fortrinsvis en 5 chlorering. Chloreringen udføres fortrinsvis med thio-nylchlorid ved ca. 40-50°C i ca. 20-40 minutter, eller med oxalylchlorid ved stuetemperatur i ca. 3-5 timer, eller med phosphorpentachlorid i et organisk medium (f.eks. chloroform) ved stuetemperatur i ca. 22-26 timer.

10 I trin (d) udføres kondenseringen ved tilsæt ning til den valgte alkohol af halogeniderne af carnitin-acyl-derivaterne som sådan eller opløst i et organisk vandfrit indifferent opløsmingsmiddel (f.eks. chloroform eller methylenchlorid).

15 Premgangsmådetrinnene a1)—b1) kan illustreres ved følgende synteseskema: CH, CH-, CHt-N-CHo-CH-CHoC00H esterificering CH^-N-CHo-CH-CHoC0R" 20 3- 2 . 2 --ii. 3 2 i 2

/ _ I trin (a*), (b1) ' / I

ch3 Cl OH ch3 Cl OH

ch3 ch3 \ + acylering og \ + 25 Ch'-N-CH2-CH-CH2COR” isolering CHj-N-CH2-CH-CH2COR" / _ I trin (c1) (d1) (e') / _ | CH3 Cl OH CH3 Cl OR' trinnene (a1) og (b') udføres esterificeringen 30 fortrinsvis enten ved tilhobling af gasformig HC1 til car-nitinsuspensionen i alkohol, indtil den suspenderede fase forsvinder, eller ved tilsætning af koncentreret svovlsyre til carnitinsuspensionen i alkohol og opvarmning af den resulterende blanding til tilbagesvalingstempera-35 tur, indtil den suspenderede fase forsvinder.

I trin (c1) er acylchloridet f.eks. acetyl-, pro-pionyl- eller butyryl-chlorid. Overskuddet af acylchlorid 5

DK 155595 B

i forhold til carnitinesteren opnået i trin (b1) er således, at molforholdet mellem de to forbindelser varierer mellem 3:1 og 1,5:1, og foretrukket er 2:1.

Fremstillingen af nogle af esterne og amiderne 5 ifølge opfindelsen illustreres nærmere ved følgende eksempler.

Eksempel 1.

Fremstilling af isopropylesteren af acetylcarnitin 10 (fremgangsmåde A).

Fremstilling af acetylcarnitinchlorid.

2 g Carnitinchlorid blev opløst i 20 ml iseddikesyre, der blev tilsat 10 ml acetylchlorid. Reaktionsblandingen blev holdt ved stuetemperatur i 48 timer.

15 Overskudet af acetylchlorid og opløsningemidlet blev fjernet under vakuum ved opvarmning i vandbad på 50°C. Remanensen blev krystalliseret fra isopropanol-ethyl-ether, hvorved der opnåedes et rent produkt.

Smp. 188°C (under sønderdeling) 20 Udbytte 90% C Η N Cl

Analyse: beregnet for C^H-^gClNO^: 42,53 8,16 7,09 17,94 fundet: 42,39 8,18 7,20 17,63 NMR: δ 5,50 (M,1H,-CH-); 3,82 (d,2H,^S-CH9-); 3,20 (s,9H),

QCO

25 (CH3)3S-); 2,68 (d,2H,-CH2“CO); 2,02 (s,3H,COCH3); D20

Fremstilling af syrechloridet af acetylcarnitinchlorid.

2g (0,01 mol) acetylcarnitinchlorid, fremstillet som anført ovenfor, blev suspenderet i 5 ml oxalylchlorid.

30

Reaktionsblandingen blev holdt ved stuetemperatur i 4 timer. Overskudet af oxalylchlorid blev derefter afdampet under vakuum. Remanensen blev vasket 3 gange med små mængder (10 ml) vandfri ethylether og holdt under vakuum, indtil opløsningsmidlet var fjernet totalt. Remanensen blev anvendt som sådan til den næste reaktion.

Fremstilling af isopropylesteren af acetylcarnitin.

6

DK 155595 B

2 g af det som ovenfor beskrevet opnåede syre-chlorid blev omsat med et overskud (8 ml) isopropanol ved stuetemperatur under magnetomrøring i 3 timer. Derefter blev tilsat 400 ml ethylether til reaktionsbian-5 dingen. Derefter blev udskilt, en tyk olie. Moderluden blev dekanteret, og det udfældede blev optaget i vandfri CH^CN. Uomsat acetylcarnitin udskiltes fra den klare opløsning og blev frafiltreret. CH^CN blev afdampet. Remanensen, tørret over P203, sig at være det øn- 10 skede produkt.

Udbytte: 75% C Η N

Analyseiberegnet for C12H24^^04: 51,15 8,58 4,97 fundet:. 51,00 8,55 4,81 NMR: δ 5,6 (m,lH-CH-); 5,2 (m,lH, i 3,7 (d,2H, I - 15 0C0 ^N-CH2-); 3,2 (s, 9H, N (CH ) $·, 2,7 (d, 2H, -CH2-C0) ?

2,1 (s,3H,-COCH3) ; 1,3 (d, βΗ,ΟΚΓ ); CD3CN

^°-3

Eksempel 2.

Fremstilling af esteren af acetylcarnitinchlorid med ethyl-β-hydroxy-butyrat.

Fremstilling af ethylesteren af 3-hydroxysmørsyre.

9 S

En opløsning af 2 g (0,02 mol) 3-hydroxy-smør-syre i 50 ml absolut ethanol og 2 ml koncentreret svovlsyre blev holdt ved tilbagesvalingstemperatur i 15 timer. Etba.no-len blev afdampet, og remanensen blev optaget i vand og ethylether. Den organiske fase blev vasket med en for- 1(] tyndet NaHC03-opløsning, og derefter med vaoidig mættet NaCl-opløsning til neutralitet. Opløsningen blev derefter tørret over vandfrit Na2S0^, filtreret og inddampet, til der opnåedes en remanens, som viste sig at være ethylesteren af 3-hydroxysmørsyre. Denne forbindelse 35 blev anvendt som sådan til den følgende reaktion.

Fremstilling af esteren af acetylcarnitin med e thyl-β-hydroxy-butyrat: 7

DK 155595 B

Til en opløsning af 0/01 mol qf syiechloridet af acetylcarnitin fremstillet som beskrevet i eksempel 1 i 30 ml vandfri CH2C12 blev sat ethylesteren af β-hy-droxy-smørsyre, fremstillet som beskrevet ovenfor og 5 opløst i 20 ml vandfri CH2C12. Reaktionsblandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 5 timer. Derpå blev tilsat 100 ml ethylether. Derefter udfældedes en tyk olie. Opløsningen blev dekanteret, og remanensen blev vasket først med 50 ml ethylether og derefter optaget i vand-10 friCHgCN. Fra opløsningen blev udskilt krystaller af acetylcarnitin, og disse blev frafiltreret. Filtratet blev fældet med ethylether. Det udfældede stof blev optaget i vandfri CH^CN, hvorefter der blev filtreret og inddampet. Der opnåedes en tyk olie, som blev tørret i 15 nærværelse af P2°5*

Udbytte 60%

Analyse: C Η N

Beregnet for C-^gH2gClNOg 50,77 7,95 10,02 fundet 50,31 7,63 10,17 20 NMR: δ 5,6 (m, IH, ^N-CH,-CH) ; 5,2 (m,lH, -CH-0-C0-) }

* I I

O

4,1 (q,2H, 0-CH2-CH3); 3,8 (d, 2H,^N-CH2-) ; 3,2 (s,9H, N (CH3)3)j 2,7 (m,4H, -CH2COO-CH ); 2,1 (s,3H, ch2coo

25 CH3C0); 1,3 (m,6H,CH3, CH3"CH2); DMSO

CH

Eksempel 3.

Fremstilling af propionylcarnitin-isopropylester. 1 2 3 4 5 6

Fremstilling af carnitin-isopropylester: 2 1,98 g (0,01 mol) carnitin blev suspenderet i 3 10 ml isopropanol. Vandfri gasformig hydrcgenchlorid blev 4 boblet gennem suspensionen ved 5°C til mætning. Derefter 5 blev opløsningen holdt ved 60°C i 3 timer. Opløsningen 6 blev derefter koncentreret under vakuum, og remanensen krystalliseret med isopropanol-ethylether:

Smp. 145-150°C

Udbytte 65%

DK 155595B

8 -2^131756 C% H% N% Cl%

Beregnet for C^qH22C1NG3 50,10 9,25 5,84 14,79 fundet 49,65 9,21 5,46 14,49 5 NMR: δ 5,1 (m,lH, O-CH^ 3) ; 4,5 (dækket, CH) ; 3,5 (d,

^«3 OH

2H, ^S“CH2-); 3,2 (s,9H, N (CH3)3);. 2r7 (d,. 2HCH2CO) ? i

1,3 (d, 6H,CH )? D~0 XCH- Z

10 J

Fremstilling af propionylcarnitin-isopropyl- ester:

Til 1 g (0,005 mol) af carnitinisopropylesteren fremstillet som anført ovenfor blev sat 1 ml (0,01 mol) 15 propionylchlorid. Den resulterende blanding blev omrørt ved stuetemperatur, indtil carnitin-isopropylesteren var opløst fuldstændig i løbet af 24 timer. Til den således opnåede opløsning blev sat ethylether, hvorefter der udfældedes en tyk olie, som efter at den gentagne 20 gange var optaget i isopropanol-ethylester, blev en forbindelse med følgende kendetegn :

Udbytte 75%

Analyse·. C Η H Cl

Beregnet for C^E^gClNO^ 52, 78 8,86 4,74 11,98 25 fundet: 52,65 8,78 4,65 12,02 ch3 NMR: δ 5,7 (m, IH, CH) ; 4,9 (m, 1H,CH^ ); 3,8 (d, 2H, k XCH-3 O 3 5^-CH2); 3,2 (s, 9H, N (CH3)3); 2,7 (d,2H,CH-ra2CO) ; 30 2, 5 (q,2H,CH2CH3) ; 1,2 (m, 9H-,CH2-CH3, CH^C-3) ; D20 CH3

Eksempel 4.

Fremstilling af isobutyrylcarnitin-isobutylester. 1

Fremstilling af isobutyrylcarnitin.

DK 155595 B

9

Til en opløsning af 3 g (0,015 mol) carnitin i 5 ml trifluoreddikesyre blev dråbevis sat 10 ml (0,096 mol) isobutyrylchlorid. Den resulterende blanding blev holdt ved 45°C i 4 timer, der blev tilsat acetone, og 5 tilbageværende carnitin blev frafiltreret. Til opløsningen blev sat vandfri ethylether, og der blev udfældet 2 g af det ønskede produkt. Udbytte 66%.

Smp. 114-116°C.

TLC: elueringsmiddel CHC13,CH3OH,NH3 50:30:8 10 NMR: δ 5,7 (m,lH,-CH-); 3,8 (d, 2H, -&-CH,-) } 3,23 (s, I ^

0C0 CH

9H, (CH3)3É); 2,8 (d, 2H,-CH2COO-) } 2,6 (m,lH, -CH^ ”3).; C—3 d2°

Fremstilling af isobutyrylcarnitin-syrechlorid.

2,7 g (0,01 mol) isobutyrylcarnitin opnået som 15 beskrevet ovenfor blev suspenderet i 4,5 ml (0,05 mol) oxalylchlorid, og suspensionen blev omrørt ved stuetemperatur i 4 timer. Derefter blev suspensionen fortyndet med vandfri ethylether og koncentreret under vakuum. Remanensen blev behandlet to gange med vandfri ethyl-20 ether, og det således opnåede råprodukt (2,5 g? 0,009 mol) blev anvendt i den følgende reaktion.

Fremstilling af isobutyrylcarnitin-isobutyl- ester.

15 ml isobutanol blev ved 0°C under omrøring 25 sat til 2,5 g (0,009 mol) isobutyrylcarnitin-syrechlorid fremstillet som anføft ovenfor.

Reaktionsblandingen blev omrørt i en time, idet temperaturen blev holdt ved ca. 0°C. Blandingen blev derefter koncentreret, remanensen blev opløst i vandfri 30 acetone, og den resulterende opløsning blev neutraliseret med vandfri Na2C03. Blandingen blev filtreret og inddampet til tørhed. Remanensen (2,3 g; 0,007 mol) viste sig at være isobutyrylcarnitin-isobutylester.

Udbytte 70%.

10

DK 155595B

NMR δ 5,7 (m,ΙΗ,-CH-) ; 3,9 (m,4H/^S-CH2,-CH20) ; 2,9 (d, 0C0 CH- 2H,-CH9COO)? 2,6 (m, IH,COCH) ; 1,9 (m,lH,CH^ ); 1,1 2 XCH^

/¾ CH

5 (d,6H,COCH^ °) ; 0,9 (d,6H,CH9-CH' ); D90 xch3 2 xch3 2

Eksempel 5 10 Fremstilling af dichloracetyl-carnitin-ethylester 3 5,8 cm (0,06 mol) dichloracetylchlorid blev sat til 7 g (0,03 mol) carnitin-hydrochlorid-ethylester. Den resulterende blanding blev holdt ved 40°C i 18 timer. Ethylether blev sat til blandingen, og det resulterende 15 bundfald blev optaget i acetonitril og atter udfaeldet med ethylether. Slutproduktet blev opnået ved krystallisering fra vandfri acetone.

/Cl 20 N.M.R. DO 6 6.6 (1H, s, -CH v 5.7 (ih, m, -CH-);

2 ^C1 I

0C0 4.5 - 3.9 (4H, m, -CH2 - CH3 , 25 3.3 (9Hr s, CH, -r- 3.1 (2H, d,-CH -COO); 2 ch3^ 1.3 (3H, t, -CH -CH )

30 J

35 11

DK 155595 B

Eksempel 6

Fremstilling af butyryl-carnitin-hydrochlorid-methylester Fremstilling af butyryl-carnitin-hydrochlorid (BT) 3 26,5 cm (0,25 mol) butyrylchlorid blev sat til en 5 opløsning af 10 g (0,05 mol) carnitin-hydrochlorid i 15 3 cm trifluoreddikesyre. Den resulterende reaktionsblanding blev omrørt natten over. Til blandingen blev sat vandfri ethylether. Den i overskriften nævnte forbindelse (BT) blev opnået ved udfældning. Smp. 150-151°C.

10 NMR D_0 δ 5.6 (1H, m, -CH-); 3.8 (2H, m, ~S-CH -); 2 , ^ 2 0 3.3 (9H, s, (CH3)3S); 2.8 (2H, d, CHgCOOCH ); 2.4 (2H, t, 0C0CH2-); 1.7 (2H, m, -CHgC^); 15 0.9 (3H, t, CH2CH3).

Fremstilling af butyryl-carnitin-chlorid-hydrochlorid 2,67 g (0,01 mol) butyryl-carnitin-hydrochlorid, 20 fremstillet som beskrevet i ovenstående trin, blev su- 3 spenderet i 4,5 cm (0,05 mol) oxalylchlorid. Den resulterende blanding blev omrørt ved stuetemperatur i fire timer. Derefter blev blandingen fortyndet med vandfri ethylether og koncentreret under vakuum. Remanensen blev 25 vasket med vandfri ethylether. Det således opnåede urene produkt blev anvendt som sådant i den'efterfølgende reaktion.

Fremstilling af butyryl-carnitin-hydrochlorid-methylester 15 cm^ absolut methanol blev under omrøring ved 0°C 30 sat til det ovenfor fremstillede butyryl-carnitin-chlorid-hydrochlorid (0,01 mol). Den resulterende blanding blev omrørt ved 0°C i 30 minutter og blev derefter koncentreret under vakuum og tørret natten over ved 40°C. Der blev opnået 3 g af den i overskriften nævnte forbindelse.

35

DK 155595B

12 NMR D20 <5 5.6 (IH, m, -CH-); 4.0-3.6 (5H, m, ~$-CH2-; -0CH3); 0 3.3 (9H, s, (CH3)3^—); 2.8 (2H, d, -CH2COOCH3); 5 2.4 (2H. t, -0C0CH2); 1.6 (2H, m, -CH2CH2CH3); 0.8 (3H, t, -CH2CH3).

Eksempel 7 10 Fremstilling· af esteren af propionyl-carnitin-chlorid med ethyl-β-hydroxybutyrat.

Fremstilling af ethylesteren af 3-hydroxy-smørsyre.

Denne forbindelse blev fremstillet som illustreret i Eksempel 2.

15

Fremstilling af propionyl-carnitin-hydrochlorid.

1,98 g (0,01 mol) carnitin-hydrochlorid blev op- 3 løst i 5 cm trifluoreddikesyre, og til opløsningen blev 3 20 sat 1 cm (0,01 mol) propionylchlond. Den resulterende opløsning blev holdt ved 40-45°C natten over. Opløsningen 3 blev derpå afkølet til stuetemperatur og tilsat 50 cm acetone under omrøring i to timer. Det faste bundfald (carnitin), som blev dannet, blev filtreret fra, og til 3 25 filtratet blev sat 30 cm ethylether, og den resulterende blanding blev omrørt ved 0°C. Det faste bundfald, som blev dannet, blev filtreret fra og krystalliseret med ethanol-acetone-ethylether. Smp. 158-160°C. 1

Fremstilling af propionyl-carnitin-chlorid-syrechlorid 2,5 g (0,01 mol) propionyl-carnitin-hydrochlorid 3 blev suspenderet i 4 cm oxalylchlorid, og den resulte-rendesuspension omrørt i fire timer. Overskud af oxalylchlorid blev afdampet under vakuum. Remanensen blev va-sket med små volumenervandfri Et20 (3x10 cm ), hvorpå opløsningsmidlet blev fjernet fuldstændigt under vakuum.

Den således opnåede forbindelse blev anvendt i det følgende trin.

13

DK 155595 B

Den således opnåede forbindelse blev omsat under omrøring ved stuetemperatur og i fravær af opløsningsmiddel med ethylesteren af 3-hydroxy-smørsyre. Efter fire timer var reaktionen løbet til ende. Reaktionsblandingen 3 5 blev langsomt hældt over i 200 cm vandfri Et20. Der blev opnået en olieagtig remanens. Etheropløsningen blev dekanteret og remanensen optaget og opløst i vandfri CH^CN.

Den resulterende opløsning blev filtreret til fjernelse af ikke-omsat propionyl-carnitin. Der blev derpå sat ace-10 tone til filtratet, indtil opløsningen blev blakket, til fuldstændig fjernelse af ikke-omsat propionyl-carnitin.

Efter filtrering blev opløsningen inddampet under dannelse af en olieagtig remanens, som blev tørret i nærvær af Udbytte 65%.

15

CH

t * ^ NMR D,0 Si 5.7 (1H, m, -CH-); 5.2 (1H, m, -CH-0-);

1 I

0C0- 4.1 (2H. q, -CH 0-); 3.7 (2H, d, -CH -te ); 20 2 2 Χ 3.2 (9H, s. (CH3)38-J; 2.9-2.2 (6H, m, -CH--CO-, CH.-CH -CO-; -CH -CH.-C0-); 2 3 2 I 2 CK3 25 1.4-0.9 (9H,m, C^-CHg-CO-.CH^^O-, CH^CH-).

0-

Farmakologiske virkninger.

De farmakologiske virkninger af forbindelserne ifølge opfindelsen blev undersøgt på følgende måde: 30 a) Akut toxicitet (LD5Q)

Den anvendte metode var den, som er beskrevet af C.S.Weil i "Tables for convenient calculation of median-effect dose (LD,-0 or ED5Q) and instructions on their use", Biometrics, 249-263, 1952.

35 Toxiciteten af forbindelserne, som skulle under søges, blev undersøgt efter enten i.p. eller oral administrering til rotter. Resultaterne viser, at forbindelserne, som skulle undersøges, tåles udmærket (se tabel) .

DK 155595B

14 b) Inotropisk virkning.

Kaninhjerter isoleret ved den af Langendorff beskrevne fremgangsmåde blev perfuseret i en Ringeropløsning oxygeneret ved 38,2°C. De isometriske koncen-5 trationer, EkG og coronarstrømning blev fulgt ved anvendelse af en "Battaglia-Rangoni"-polygraf.

Metabolisk skade af hjertemusklen blev fremkaldt ved fjernelse af oxygenen fra perfusionsvæsken, indtil sammentrækningsstyrken var reduceret med 80%.

10 I disse tilstande af langvarig anoxi blev myo cardial aerobisk glycolyse nedsat ledsaget af akkumulering af cataboliske syrer som følge af ophobning af pyrqdruesyre og dennes omdannelse til mælkesyre, som ikke kunne foregå, som følge af undertrykkelsen af en-15 zymer, såsom lacticodehydrogenase. Dette påvirker anae-rob glycolyse,8* idet der involveres et stigende antal enzymer med en progressiv og tiltagense kritisk udmatning af myocardiet.

Således er der en hel serie hjertemuskel—træt-20 hedsniveauer, som genspejles af de parametre, der tages i betragtning, d.v.s. sammentrækningsstyrke, coronarydel-se, hjertefrekvens og hjerterytme. Så snart sammentrækningsstyrken var reduceret med 80% blev perfusionsvæsken igen oxygeneret uden tilsætning af andre forbindelser 25 (kontroller) eller med tilsætning af forbindelserne, som skulle prøves, i forskellige koncentrationer.

Hjertets sammentrækningsstyrke blev undersøgt og viste en positiv inotrop effekt 10 minutter efter afbrydelse af anoxi-perioden (myocardiegenopretning).

30 Resultaterne af Student's "t" test viste, at forbindelserne, som skulle prøves, fremkaldte en statistisk signifikant positiv inotropisk virkning i forhold til kontroller. Tabellen viser de procentvise forøgelser sammenholdt med kontroller.

35 c) Virkning på CNS (centralnervesystem)

Den anvendte metode var den, som er beskrevet af Irwin S., Nodin J.H., Siegler P.E., i "Animal and Clinical Pharmacologic techniques in Drug Evaluation", 15

DK 15559SB

Year Book Medical Publ., Chicago, 1964, 36.

Bestemmelsen af cerebral serotonin (5-HT) og 5-hydroxyindol-eddikesyre (5-HIAA) blev udført ved fremgangsmåden ifølge Anseil and Beeson, Anal. Biochem. 23, 5 196-206 (1968) Maickel and Cox Int. J. Neuropharmacol. 1_ - 275 - 281 (1968) ved anvendelse af rottehjernerne fjernet 1 time efter i.p. injektion af 50-100 mg af forbindelserne, som skulle prøves. Se tabel.

10 15 20 25 30 35

DK 155595 B

16 m · -5-8+1 in σ> o or- σ' ij iy , y g cm cm ro Mm m u * I I ' 11 1 0) η-j ft ^ ^

•π H K Ή H

"§ 9 in o\° -d S ^ s o * 3 4J g -5 g g 2 -9 r, 7 ^ in oo in r- vo co m 2 g -i ft t- r- CM ro T- r~ ,2 s τ 3 + + + ++ +

q u in#-P

w Ή

rS

«(O i H

ft &ι tn Ό

G ,Χ 1 H

•ri tø O O

c· -Η ϋν-τ-ι ,Ε! o o o in σ\ σι D ft C μ ·η ro o r- in vo I B3 + + + + + + : åi s" i

CO

•H · ft 0) o +>

U 4J

-μ o o μ • c (U-Hin r-ι o o o OO o 2H0 ti o o o oo o 3 . y T- μ o in ^ r- cm ro Η+ίω i o VM« CMr- r- (1) W G <C O' A <D g «

(0 G H

B Ή r-i JXJ

+J -Η I g> •H +) ro e S til h, o · o o o o o o £ §0 m ft o o o or- r- g .¾ u Q · inr-io ro r- cm U Eh · A * ^ φ ω ίΰ η μ i >ι

t n -P ro χ X

Ο 01 0 0 G ·Η M-i Η Η β 0 ίχ >1 H-I ·Η ft ft to g μ o o , 'O o s >i μ μ μ tf g « κ ft ft 4J H -H g Η ™ 7 > μ tf cm j? * S x * . * •Η Ο μ g +> ο ο 0 n ^ ^ •μ +> υ οη,§ηη9>.ο Μ & G I- Μ>ι:ρ>ι!>.:ΡμΗ (OOQ) tflOJ ο ft (D G ft 0) ϊχίχ , Ο Ο—Ο Η Η 0 Λ Ο Ο .Q -μ -μ .χ · g ι ^ΛμμΉμμβ^ ω ft Ο cm +} υ ft tf ft ft (0 Λ X)

•Η · ,Χ te O-rlOOOOOOO

toi-μ ο ο μ ω ι μ w ι ω οι Ο 0) ι (0+ι -Η ro ft-Hro ·ΗΉ η ΐ μ 4¾ Ο (D (0 m

•X > μ ^ I! II II li II li II 11 II

tf Λ η g o 0) tu μ in μ O -s -= - = (0 Q (D w DSPJ di Pi Pi Pi

ft μι O

DK 155595B

17 o .B +j oo in in ^ M g cvj ni * ' -å ^'h,3

« m dP -P

* 3¾

$ d|l H

Η -Η M

tr>4->

Lf> Tj ii

44 t' H ,U

to o o 7 d S'1”1-1 >f3 _, O' r~- 1 ft S P d vo vo O' JI3a| + + g οϊ ;ο·η g ^ fi-rt tJ Q ^ Η · > ·^ o’P 44 4J · <!

Π5 H

n W

-P I

u ^ o U_i ·» d O o 2 H T- U O S +1 0) 10 r- T- £ Ά tn Γ2 id tæ;

II

01 7

c I

B Oi o o in · in ft oo σι o>

DJ M

• PI &

W

m ·*

P

>1 d

S i—I

cd o o p

0 s, +J

1 -i it %

aT >i0 S

Γ > +1 H ^ I - Φ >i u

tfl Cd H O ft O

g S >t X Π5 O IH

V u o o p ^

fM >1 Λ -P ft H

hT -P -P Φ 0 S

g d Φ ο ω ·η Y Λ g β» ή ^ 42 Ρ II II II II > η a s ·~· Η cd cd cd a 5 <

DK 155595B

18

Forbindelserne ifølge opfindelsen administreres oralt eller parenteralt i en af de sædvanlige farmaceutiske fomuleringer, som fremstilles ved sædvanlige fremgangsmåder/ der er kendte for fagmanden. Disse formule-5 ringer omfatter faste og væskeformige oralenhedsdosis-formuleringer/ såsom tabletter/ kapsler, opløsninger, saft og lignende samt injicerbare formuleringer, såsom sterile opløsninger til ampuller og flasker.

Til disse formuleringer anvendes de sædvanlige 10 opløsningsmidler, fortyndingsmidler og tilsætningsstoffer. Eventuelt kan sødemidler, smagsstoffer og konserveringsmidler også være tilstede. Ikke-begrænsende eksempler på sådanne midler er natrium-carboxymethylcellulose, polysorbat, mannitol, sorbitol, stivelse, avicel, talcum 15 og andre midie?:, som vil være indlysende for fagmanden.

Den dosis, éom administreres, bestemmes af den behandlende læge under hensyn til patientens alder, vægt og almene tilstand ved anvendelse af almindelig faglig vurdering. Skønt der kan ses effektive resultater med 20 doser så lave som 5-8 mg/kg kropsvægt pr. dag, foretrækkes en dosis på fra 10-ca. 50 mg/kg kropsvægt. Når det er nødvendigt, kan større doser administreres uden risiko på grund af den lave toxicitet af forbindelserne ifølge opfindelsen.

25 1

Claims

DK 155595B Analogifremgangsmåde til fremstilling af estere af acyl-carnitiner med den almene formel I 5 (CH3)3&-CH2-CH-CH2-COR" X OR' hvori R' betegner acetyl: halogensubstitueret acetyl; 10 propionyl; halogensubstitueret propionyl; butyryl; halogensubstitueret butyryl; isobutyryl; β-hydroxy-butyryl; acetoacetyl; pantothenyl og linoleyl; og R" betegner methoxy, ethoxy, propyloxy, butyloxy,(forudsat at R* ikke betegner acetyl), isopropyloxy, isobutyl-15 oxy, trichlorethyloxy, trifluorethyloxy, 3-carbethoxy-2-propyloxy, 3-pyridyl-methoxy, 2-diethylaminoethoxy, 2-acetamido-3-methyl-butyroxy, 2-acetamido-4-methyl-pentyl-oxy, 2-acetamido-3-methyl-pentyloxy eller 4-hydroxy-me thy1-5-hydroxy-6-methy1-pyrid-3-y1-me thoxy, 20 kendetegnet ved, at den omfatter følgende trin: (a) tilsætning til en carnitinopløsning .i et opløsningsmiddel, udvalgt blandt organiske syrer og de tilsvarende anhydrider, af et acylchlorid med formlen R'Cl, 25 hvori R' har den ovennævnte betydning, hvorefter temperaturen af den således opnåede blanding holdes ved ca. 15-60°C i ca. 4-48 timer, hvorved der opnås det tilsvarende acylderivat af carnitin; (b) isolering af acylderivatet af carnitin ved til-30 sætning til blandingen fra trin (a) af et udfældningsmiddel og rensning ved gentagne krystallisationer; (c) omsætning af acylderivatet af carnitin fra trin (b) med et overskud af halogeneringsmiddel ved ca. 25-60°C i ca. 0,3-24 timer og fjernelse af overskudet 35 af halogeneringsmiddel, hvorved der opnås det tilsvarende syrehalogenid af acylderivatet af carnitin; (d) kondencering af syrehalogenidet af acylderivatet af carnitin fra trin (c) med en alkohol med formlen DK 155595 Β Λ 4 * r"H, hvori R" har den ovennævnte betydning, hvorefter den opnåede blanding omrøres ved stuetemperatur i ca.
2-24 timer, hvorved der opnås esteren Ij og (e) isolering af esteren I ved tørring af blandingen 5 fra trin (d) og gentagen krystallisation fra organiske opløsningsmidler, eller (a1) suspendering af carnitin i den ønskede alkohol R"H; (b1) omsætning af suspensionen fra trin (a') med en 10 vandfri uorganisk syre til fuldstændig opløsning af den suspenderede carnitin, hvorved den tilsvarende ester opnås; (c1) omsætning af esteren fra trin (b1) med et over skud af acylchlorid med formlen R'Cl, hvori R’ har den 15 ovennævnte betydning, hvorefter temperaturen af den således opnåede blanding holdes ved ca. 25-40°C i ca. 2-24 •timer, hvorved der opnås den tilsvarende ester af acylde-rivatet af carnitin med formlen I; (d') behandling af blandingen, som indeholder esteren 20 med formlen I, med et organisk opløsningsmiddel, hvori overskuddet af acylchlorid er opløseligt, til fjernelse af et sådant acylchlorid-overskud fra esteren; og (e') rensning af esteren med formlen I ved gentagne krystallisationer. 25 1 35