DK157771B - Fremgangsmaade, middel og anvendelse af dette middel til hurtig og fuldstaendig fjernelse af en uklarhed i en biologisk vaeske - Google Patents
Fremgangsmaade, middel og anvendelse af dette middel til hurtig og fuldstaendig fjernelse af en uklarhed i en biologisk vaeske Download PDFInfo
- Publication number
- DK157771B DK157771B DK324384A DK324384A DK157771B DK 157771 B DK157771 B DK 157771B DK 324384 A DK324384 A DK 324384A DK 324384 A DK324384 A DK 324384A DK 157771 B DK157771 B DK 157771B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- serum
- reagent
- buffer
- agent
- optionally
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 5
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 150000003626 triacylglycerols Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 76
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 31
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 13
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 claims description 12
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 11
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims description 7
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 claims description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 claims description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 46
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 230000001000 lipidemic effect Effects 0.000 description 10
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 6
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 description 5
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 description 5
- 102000009081 Apolipoprotein A-II Human genes 0.000 description 5
- 108010087614 Apolipoprotein A-II Proteins 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- -1 aliphatic alcohols Chemical class 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 102000018616 Apolipoproteins B Human genes 0.000 description 4
- 108010027006 Apolipoproteins B Proteins 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 4
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 4
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 4
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 125000005526 alkyl sulfate group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Polymers CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000008055 alkyl aryl sulfonates Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005227 alkyl sulfonate group Chemical group 0.000 description 2
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 2
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Polymers CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 2
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- NFAOATPOYUWEHM-UHFFFAOYSA-N 2-(6-methylheptyl)phenol Chemical compound CC(C)CCCCCC1=CC=CC=C1O NFAOATPOYUWEHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHDHJYNTEFLIHY-UHFFFAOYSA-N 4,7-diphenyl-1,10-phenanthroline Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=NC2=C1C=CC1=C(C=3C=CC=CC=3)C=CN=C21 DHDHJYNTEFLIHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLLBRTOLHQQAQQ-UHFFFAOYSA-N 8-methylnonan-1-ol Chemical compound CC(C)CCCCCCCO PLLBRTOLHQQAQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710095342 Apolipoprotein B Proteins 0.000 description 1
- 102100040202 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004103 Chylomicrons Proteins 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000766307 Gallus gallus Ovotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- 240000007313 Tilia cordata Species 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940071161 dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000001125 hyperlipoproteinemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000012749 thinning agent Substances 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/104165—Lipid, cholesterol, or triglyceride standard or control
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
- Separation Of Suspended Particles By Flocculating Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
DK 157771 B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde, et middel og anvendelse af dette middel til hurtig og fuldstændig fjernelse af en uklarhed i en biologisk væske især i humant blodserum eller -plasma under anvendelse af overfladeaktive midler.
5 Uklarheder i humant blodserum fremkaldes af et for stort indhold af triglyceridrige - lipoproteinpartikler såsom chy-lomikroner og VLDL ("Very Low Density Lipoproteins”). Der tales i sådanne tilfælde om "lipæmisk" eller "hyperlipo-proteinæmisk” serum. Sådanne uklarheder udgør et væsent-10 ligt problem for gennemførelsen af fotometriske analyser af serumbestanddele i den klinisk-kemiske diagnostik. Dette gælder især, når koncentrationen af den serumbestanddel, der skal bestemmes, er meget ringe såsom f.eks. koncentrationen af sporelementer, og der må, for at opnå en tilstræk-15 kelig målenøjagtighed, tilsættes forholdsvis store serummængder til analysereagenset (volumenforhold serum: analysereagens 0,15) . Her kan den af serumet i reagenset forårsagede uklarhed også allerede ved ringe lipæmigrad føre til overskridelse af fotometrets linearitetsområde og derved pa-2 g virke målingen væsentligt eller gøre den umulig.
Det har dog også vist sig, at forskellige immunologiske forsøgsmetoder især de, ved hvilke de via immuntjpræeipi-tationsreaktioner opståede uklarheder måles nefelometrisk eller turbidimetrisk, og ved hvilke forholdsvis ringe se-25 rummængder er nødvendige i forsøgsopstillingen,kan forstyr res føleligt af særlige uklarheder i prøvematerialet. Som eksempel kan her nævnes den immunonefelometriske bestemmelse af serum-apolipoproteiner (Clin. Chem. 28, 1153-1158 (1982), Clin. Chem. 29, 120-125 (1983)) samt den radioimmunologiske 30 bestemmelse af (3-choriogonadotropin og prostatas tir -phos phatase (Clin.Chem. 28, 2325 (1982)).
2
DK 157771 B
Den fuldstændige fjernelse af uklarheder ("klaring") i lipæmisk serum er derfor af overordentlig betydning for den kliniske analyse.
Fra litteraturen kendes allerede forskellige fremgangsmå-5 der og midler til fjernelse af uklarheder i biologiske væsker.
Således er der f.eks. i Clin. Chem. 29, 120-125 (1983) beskrevet en fremgangsmåde, ved hvilken serumuklarheder fjernes ved udrystning med en blanding af organiske opløsnings-10 midler. Denne metode nødvendiggør et yderligere trin i fremgangsmåden. Desuden kan den især ved stærk lipæmiske sera føre til ukontrollérbare volumenændringer af prøvematerialet og dermed til en forfalskning af måleresultaterne. Endelig er bestemmelsen af de serumbestanddele, der fjernes 15 helt eller delvis ved ekstraktionen, ikke længere mulig ved anvendelse af denne fremgangsmåde.
Det samme gælder for en fremgangsmåde, ved hvilken de uklarhedsforårsagende lipoproteinpartikler udfældes fra serumet og fracentrifugeres ved tilsætning af polyanioner såsom phos-20 phorwolframsyre/magnesiumchlorid (Clin. Chem. 28, 1153-1158 (1983)) .
Af hensyn til målenøjagtigheden og lønsomheden af fotometriske serumanalyser er det hensigtsmæssigt at gennemføre klaringen direkte i det til bestemmelse af den forelig-25 gende serumbestanddel anvendte analysereagens, og nærmere bestemt fuldstændigt og indenfor få minutter (< 10 min.) og sædvanligvis i temperaturområdet mellem 15 og 40°C.
En sådan fremgangsmåde, der dog delvis kun fører til formindskelse af uklarheden i en serum-eller plasmaprøve, kendes 30 f.eks. fra DE-OS 23 27 894. Herved tilføres analysereagenset en polyoxyethyleret laurinsyreforbindelse i høje're koncentrationer .
3
DK 157771B
I DE-AS 27 24 757 er der beskrevet et middel til fjernelse af uklarheder i serum, der består af en vandig pufret opløsning af fedtsyrepolyethylengly.Qolestere samt kortkædede alifatiske alkoholer, glyQoler eller polyethylenglyi.o-5 ler eller en fedtalkoholpolygly'Qolether. Dette middel er egnet til at klare uklare måleopløsninger ved et volumenhold serum: reagens _< o,linden for få minutter. F.eks. opnås ved en opløsning med et volumenforhold af serum: reagens = 0,1 ved 20 til 25°C en fuldstændig klaring inden 10 for 5 minutter efter gennemblanding. Ved et volumenforhold af serum: reagens ^0,15 kræves dog en væsentlig længere tid til klaring af måleopløsningen. Til fjernelse af uklarheden i en opløsning med et volumenforhold af serum: reagens = 0,16 kræves allerede 30 minutter.
15 Fra Z..Klin. Chem. Klin. Biochem. 3, 96-99 (1965) kendes en fremgangsmåde til transferrin-jernbestemmelse i serum, hvorved analysereagenset tilsættes et sekundært alkylsulfat ("Teepol 610 S", Shell AG) i høj koncentration. Ved sammenblanding af 0,5 ml serum og 1,4 ml reagens opnås en fuld-20 stændig uklarhedsfjernelse efter 15 minutter ved stuetemperatur.
I EP-OS 0041704 foreslås endelig at opløse cbylomikroner i vandigt medium ved hjælp af en blanding af en polyethylen-gly.colether af en alkanol eller en alkylarylalkohol med 25 forgrenet alkankæde og en HLB-værdi på 12 til 14, et sekundært alkylsulfonat med 10 til 20 C-atomer i molekylet samt eventuelt et alkali-p-toluensulfonat. Efterprøvningen af et i EP-OS 0041704 som særligt egnet beskrevet middel (middel ifølge eksempel 2) gav som resultat, at det ikke dermed er 30 muligt ved et stærkt lipæmisk serum og et volumenforhold af serum: reagens ^0,2 ved 25°C at opnå en fuldstændig klaring Inden for 30 minutter.
DK 157771B
4
De hidtil kendte metoder til fjernelse af uklarheder i biologiske væsker udviser således alle til dels betragtelige ulemper, der i det væsentlige beror på: a) nødvendigheden af en serumforbehandling i et yderli- 5 gere trin i fremgangsmåden eller^ såfremt klaringen foregår direkte i analysereagenset, b) en begrænset klaringsformåen af det anvendte middel, c) en utilstrækkelig klaringshastighed (> 10 min.) samt d) et indskrænket pH-og temperaturområde,i hvilket den 10 anvendte fremgangsmåde eller det anvendte middel er virksomt, f.eks. når der til understøttelse af den klarende virkning desuden tilsættes lipolytisk aktive enzymer (lipaser).
Yderligere findes der i de anførte litteratursteder ingen 15 henvisninger til, at der i det respektivt anvendte klaringsreagens også uden forstyrrelser kan gennemføres antigen-antistofreaktioner såsom ved immunopræcitipationsanalyser af serum-apolipoproteiner.
For at undgå forstyrrelser gennem serumuklarheder ved den 20 immunonefelometriske bestemmelse af et serumprotein, især et apolipoprotein^foreslås i DE-OS 28 29 531 en fremgangsmåde, ved hvilken immunreaktionen enten gennemføres i nærvæ- -3 relse af et meget lavkoncentreret kationisk tensid (10 til 10-^ vol.S) eller i nærværelse af et meget lavkoncen- -3 -1 25 treret non-ionisk tensid (10 til 10 vol.%) og et lipolytisk aktivt enzym. Da der derved kun skal tilføres meget ringe serummængder til forsøgsopstillingen, behøver man ikke at stille store krav til det anvendte middels klaringsformåen .
DK 157771 B
5
Ved analoge immunoturbidimetriske målinger er væsentligt højere serumkoncentrationer nødvendige i forsøgsopstillingen. I DE-OS 28 29 531 siges intet om tensidernes virkningved disse forøgede serumkoncentrationer. Det nævnes 5 dog, at ved tensidkoncentrationer over 0,1 vol.% hæmmes den immunologiske reaktion mellem antistof og antigen (i det foreliggende tilfælde apolipoproteinet).
Der er derfor behov for en fremgangsmåde og et middel, som også ved volumenforhold af serum: analysereagens _> 0,15 be-10 virker en fuldstændig og varig klaring af serumuklarheder. Klaringen bør derved foregå hurtigst muligt og fortrinsvis i løbet af mindre end 10 minutter. Virkningen bør være sikker over et størst muligt pH-(3£ pH<9) og temperaturcmråde(15£ T <_ 37°C) . Ved siden af den nøjagtige bestemmelse af spor-15 elementer skal fremgangsmåden og reagenset især også muliggøre den uforstyrrede analyse af proteiner såsom apolipo-proteiner med immunoturbidimetriske målemetoder, selv ved anvendelse af stærkt lipæmiske sera. Endelig bør det til grund for fremgangsmåden liggende middel være lagerstabilt 20 over et langt tidsrum, dvs. mindst et år ved stuetemperatur.
Grundlaget for opfindelsen var at tilfredsstille dette behov. Dette opnås ved en fremgangsmåde til fjernelse af u-klarheder i biologiske væsker under tilsætning af overfla-25 deaktive midler, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at der som overfladeaktivt middel anvendes: a) et polyethoxyleret triglycerid med en HLB-værdi fra 4 til 14, b) et sekundært n-alkansulfonat samt eventuelt 30 c) et yderligere non-eller anionisk tensid i vandig^eventuelt pufret opløsning.
DK 157771B
6
Som polyethoxyleret triglycerid kan der f.eks. anvendes polyethoxyleret triolein (f.eks. "Tagat TO, Fa. Goldschmidt AG, HLB-værdi 11,3) eller polyethoxyleret ricinusolie (f.eks. "Mulsifan'® RT 7 eller "Mulsifan'® RT 5 163, Fa. Zschimmer og Schwarz, HLB-værdi henholdsvis ca.
10 og 6). Der opnås særligt gode resultater, såfremt man anvender et polyethoxyleret triglycerid, der udvindes ved omsætning af ethylenoxid og ricinusolie i autoklaver under alkalisk katalyse. Det på denne måde fremstillede 10 produkt indeholder gennemsnitligt 10 oxyethylenenheder pr. molekyle og fås i handelen under benævnelsen "Mulsi-fan'®RT 163.
HLB-værdien (hydrophilic-lipophilic-balance), at de ifølge opfindelsen anvendelige polyethoxylerede triglycerider, kan 15 bestemmes efter kendte fremgangsmåder, se f.eks. Stache "Tensid-Taschenbuch," Carl-Hanser-Verlag, Munchen, Wien 1979, * side 70-72.
Koncentrationen af de polyethoxylerede triglycerider i den vandigef pufrede opløsning andrager 0,5 til 15, fortrinsvis 20 1/0 til 12, især 2 til 9 vægtprocent.
Som sekundære n-alkansulfonater anvendes fortrinsvis forbindelser med 12 til 19 carbonatomer i molekylet som rene stoffer eller som blandinger af forskellige n-alkansulfonater med overvejende 12 til 19 carbonatomer i molekylet. De se-25 kundære n-alkansulfonater anvendes fortrinsvis som natriumsalte. Som særligt gunstig ifølge opfindelsen har vist sig et sekundært n-alkansulfonat (Na-salt), der fremstilles ved sulfoxidering af n-paraffiner og udviser en carbonkædefordeling på: 30 < C-^g-n-paraffin = max. 1% - Cjg-n-paraffin = ca. 58% C^g - C-^-n-paraffin = ca. 39% > C-j^-n-paraffin = max. 3% 7
DK 157771 B
Et sådant produkt findes i handelen som vandholdig pasta med en andel af virksomt stof på 60% under navnet "Hos-tapur® AT (Fa. Hoechst AG) .
Det sekundære n-alkansulfonat, der skal anvendes ifølge 5 opfindelsen, er indeholdt i den vandige, eventuelt pufrede opløsning i en koncentration på 0,5 til 10, fortrinsvis 1,0 til 7, især 1,2 til 4,8 vægtprocent i forhold til det rene virksomme stof.
Blandinger af de ifølge opfindelsen polyethoxylerede tri-10 glycerider og sekundære n-alkansulfonater i vandig, eventuelt pufret opløsning bevirker allerede som sådanne en tilstrækkelig hurtig klaring af uklare sera. Til yderligere forøgelse af klaringshastigheden har det dog vist sig gunstigt at tilføre disse blandinger et yderligere non-15 eller anionisk tensid.
Som eventuelt tilsatteyderligere non-ioniske tensider kommer ligekædede eller forgrenede alkyl-eller alkylarylpoly-glycolethere med lav oxyethyleringsgrad (gennemsnitligt 3 til 7 oxyethylenenheder pr. molekyle) på tale. Der fore-20 trækkes en iso-decanolpolyglycolether med gennemsnitligt 5 oxyethy lenenheder pr. molekyle ("Liitensol® ON 50, BASF).
Som anioniske tensider egner sig alkylarylsulfonater, sekundære alkylsulfater eller blandinger af alkansulfo-nater med 13 til 15 carbonatomer i molekylet og 40 til 25 50% sekundær andel ("Mersolat®, Bayer AG). Særligt fore trækkes natriumdodecylbenzensulfonat (omsættes i handelen f.eks. som "Elfan'®WA 50 med et indhold af virksomt stof på 50% af Fa. Akzo).
Herved har koncentrationer i den vandige, eventuelt pufre-3ø de opløsning på 0,2 til 5, fortrinsvis 0,5 til 3, især 1 til 2 vægtprocent med hensyn til det rene virksomme stof i alle tilfælde vist sig gunstige.
8
DK 157771 B
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen lader sig gennemføre ved, at man blander de enkelte bestanddele, dvs. vand eller eventuelt vandig pufferopløsning, overfladeaktive midler og biologisk væske efter hinanden.
5 Hensigtsmæssigt anvendes dog en i forvejen færdig blanding af det overfladeaktive middel i en vandig, eventuelt puf ret opløsning, der tilsættes den biologiske væske i en mængde, der fører til en hurtig og fuldstændig fjernelse af u-klarheden. Sædvanligvis er det til fuldstændig fjernelse 10 af uklarheden tilstrækkeligt med mængder på 0,5 til 2 ml af midlet ifølge opfindelsen i 0,2 ml serum.
pH-værdien af blandingen kan vælges inden for vide grænser. Uklarheder ved pH-værdier fra 3 til 9 kan uden videre fjernes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Til indstilling 15 af pH-værdien kan anvendes alle gængse pufferforbindelser, hvis pK-værdi ligger mellem 2,0 og 10,0. Især foretrækkes succinat-, acetat-, phosphat- eller trispuffer. Pufferkoncentrationen andrager hensigtsmæssigt 5 til 250 mM, især 10 til 170 mM.
20 Klaringshastigheden lader sig indtil en vis grænse påvirke gunstigt gennem en forøgelse af ionstyrken i det vandige, e-ventuelt pufrede medium. Det har dér vist sig fordelagtigt at tilsætte den biologiske væske eller detergentblandingen et salt^f.eks. natriumchlorid, eller flere salte ved fravær af pufferforbindelse eller ved lave pufferkoncentratio-25 ner (5 til 20 mM). Koncentrationen af tilsat salt andrager fortrinsvis 50 til 200 mM, især 50 til 150 mM.
Uklarhedsfjernelsen kan ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen gennemføres i et bredt temperaturinterval (15°C _< T _< 40°C) . Fortrinsvis arbejdes ved temperaturer mel-30 lem 20 og 37°C.
9
DK 157771 B
En yderligere genstand for opfindelsen er et middel til hurtig og fuldstændig fjernelse af en uklarhed i en biologisk væske, især humant blodserum eller-plasma, der er ejendommeligt ved, at det indeholder: 5 a) e.t polyethoxyleret triglycerid med en HLB-værdi fra 4 til 14, b) et sekundært n-alkansulfonat samt eventuelt c) et yderligere non-eller anionisk tensid 10 i vandig,eventuelt pufret opløsning.
Midlet ifølge opfindelsen indeholder hensigtsmæssigt i van-dig^ puf ret opløsning: a) 0,5 til 15, fortrinsvis 1,0 til 12 vægtprocent polyethoxyleret triglycerid med en HLB-værdi fra 4 til 14, 15 b) 0,5 til 10, fortrinsvis 1,0 til 7 vægtprocent sekun dært n-alkansulfonat samt eventuelt c) 0,2 til 5, fortrinsvis 0,5 til 3 vægtprocent af et yderligere non-eller anionisk tensid.
Særligt foretrukket er et middel med følgende sammensætning: 20 a) 2 til 9 vægtprocent polyethoxyleret triolein eller ricinusolie, b) 1,2 til 4,8 vægtprocent af et sekundært n-alkansulfonat med 12 til 19 carbonatomer i molekylet eller en blanding af forskellige sekundære n-alkansulfo- 25 nater med overvejende 12 til 19 carbonatomer i mo lekylet samt eventuelt
DK 157771 B
10 c) 1 til 2 vægtprocent af en ligekædet eller forgrenet alkyl-eller alkylarylpolyglycolether med gennemsnitligt 3 til 7 oxyethylenenheder pr. molekyle, et alkyl-arylsulfonat, et sekundært alkylsulfonat eller en blan-5 ding af alkansulfonater med 13 til 15 carbonatomer i molekylet og 40 til 50% sekundær andel i vandig, eventuelt pufret opløsning.
Som puffer kan midlet ifølge opfindelsen indeholde alment kendte pufferstoffer, hvis pK-værdi ligger mellem 2,0 og 10 10,0. Særligt foretruk#· er succinat-, acetat-, phosphat- eller trispuffere. Pufferkoncentrationen andrager 5 til 250, fortrinsvis 10 til 170 mM.
Midlet ifølge opfindelsen kan endvidere indeholde et saltf f.eks. natriumchlorid, eller flere salte til forøgelse af 15 ionstyrken. Saltkoncentrationen andrager fortrinsvis 50 til 200 mM, især 50 til 150 mM.
Foruden de nævnte komponenter kan reagenset indeholde yderligere stoffer, der er nødvendige til den fotometriske analyse af en bestemt serumbestanddel. I tilfælde af sporele-20 mentanalyser såsom serum-transferrin-jern kan disse væ” re et reduktionsmiddel såsom ascorbinsyre samt farvekompleks-dannere såsom bathophenantrolindisulfonsyre,"?*errozin® eller andre forbindelser af ferroin-typen.
Til den immunoturbidimetriske eller -nefelometriske bestem-25 melse af serumbestanddele såsom f.eks. apolipoproteiner og underenheder deraf samt immunologisk aktive apolipoprotein-spaltningsstykker, kan reagenset som yderligere komponenter indeholde antistoffer f.eks. i form af et antiserum/ deii deraf udvundne γ-globulin- eller IgG-fraktion eller også
DK 157771 B
11 monoklone antistoffer samt et stof, der fremmer immunopræ-cipitationsreaktionen såsom polyethylenglycol med en molekylvægt mellem 1.000 til 10.000, fortrinsvis 6.000 i en koncentration på 1 til 6, fortrinsvis 3 til 4 vægtprocent.
5 Fremgangsmåden og midlet ifølge opfindelsen til hurtig og fuldstændig fjernelse af uklarheder i biologiske væsker er med hensyn til den opklarende virkning de kendte fremgangsmåder og tilgængelige midler tydeligt overlegen, især ved volumenforhold af serum: reagens^ 0,15. Overlegenheden vi-10 ser sig særligt tydeligt ved analyse af sporelementer i se-rum/f.eks. bestemmelsen af jern i serum. For at opnå en tilstrækkelig målenøjagtighed, må der herved anvendes store serummængder i forhold til analysereagenset, dvs. der må i måleopløsningen regnes med et højt lipidindhold og dermed en for-15 stærket uklarhedstilsynekomst. Gennem den høje klaringshastighed lader analyser af bestemte bestanddele også i stærkt lipæmiske sera sig gennemføre inden for maksimalt 10 minutter efter blanding af serum og reagens, hvad der er særligt vigtigt for den automatiserede analyse.
20 Derudover er det overraskende, at der til trods for den i sammenligning med midlet ifølge DE-OS 28 29 531 høje detergentkoncentration i det beskrevne reagens upåklageligt også kan gennemføres immunologiske bestemmelser af serumbe-standdele via antigen-antistof-præcipitationsreaktioner.
25 Fremgangsmåden og reagenset ifølge opfindelsen lader sig her også på fordelagtig måde anvende ved sådanne immuno-præcipitationsreaktioner, f.eks. ved den immunologiske bestemmelse af serum-apolipoproteiner eller underenheder deraf eller af immunologisk aktive apolipoproteinbrudstykker.
12
DK 15777 1 B
De vedlagte figurer fremstiller:
Fig. 1: Hastighed af uklarhedsfjernelsen i et stærkt lipæ-misk serum med forskellige klaringsmidler ifølge eksempel 1.
5 A: Reagens A = middel ifølge EP-OS 0 041 704.
B: Reagens B = midlet ifølge opfindelsen.
C: Reagensblindværdi.
Volumenforhold serum: Analysereagens = 0,2, -temperatur = 25°C, λ = 578 nm, lagtykkelse = 1 cm.
10 Fig. 2: Immunoturbidimetrisk bestemmelse af serum-apolipo-protein A-I (APO A-I)>Justeringskurve ud fra standardse-rumfortyndingsrække. Måling svarende til eksempel 3.
Fig. 3? Immunoturbidimetrisk bestemmelse af serum-apolipo-protein A-II (APO A-II). Justeringskurve ud fra standard-15 serumfortyndingsrække. Måling svarende til eksempel 3.
Fig. 4 s Immunoturbidimetrisk bestemmelse af serum-apolipoprotein B (APO B). Justeringskurve ud fra standardserum-fortyndingsrække. Måling svarende til eksempel 3.
De følgende eksempler belyser opfindelsen yderligere.
20 Eksempel 1
Klaringshastighed af et lipæmisk serum med forskellige reagenser^ der indeholder overfladeaktive midler._ 1. Reagenser
Reagens A (middel ifølge EP-OS 0 041 704)
DK 157771 B
13
Indholdsstof Koncentration "Mersolat"® H 30% i H_o 150 ml/1 "Triton" ^ X 151 30% i Η2<3 200 ml/1 p-toluensulfonsyre, Na-salt 258 mmol/1 5 "Mersolat1^ H= en i handelen værende blanding af sekundære alkansulfonater med 13 til 15 carbonatomer og 40 til 50% sekundær andel.
"Triton®^ 151 = isooctylphenolpolyethylenglycolether.
Reagens B (middel ifølge opfindelsen) 10 Indholdsstof Koncentration "Mulsifan® RT 163 90,00 g/1 (=9,0 vægtprocei "Hostapur1® AT 80,00 g/1 (=4,8 vægtprocei "Elfan'® WA 50 40,00 g/1 (=2,0 vægtprocer
Natriumacetatpuffer(pH 5,4) 170 mmol/1.
15 2. Forsøgsgennemførelse.
I en 1 cm1s kuvette blandes ved 25°C 0,2 ml stærkt lipæmisk serum med henholdsvis 1 ml reagens A eller reagens B. Ændringen af lysgennemtrængningen ved 578 nm bestemmes i afhængighed af tiden. De opnåede resultater er vist grafisk i fig. 1.
20 3. Vurdering.
Det i fig. 1 viste forløb af ændringen i lysgennemtraaigningen^ viser, at ved et forhold serum: analysereagens = 0,2 opnås med midlet ifølge opfindelsen (reagens B) allerede efter 2 minutter en fuldstændig fjernelse af uklarheden. Med reagen-25 set ifølge EP-OS 0 041 704 er uklarheden selv efter 30 minut ter ikke fuldstændigt fjernet.
DK 157771 B
14
Eksempel 2 (anvendelseseksempel):
Bestemmelse af jern i serum 1. Reagenser 1.1 Blindværdireagens 5 Indholdsstof Koncentration "Mulsifan® RT 163 90,00 g/1 (=9,0 vægtprocent) "Hostapur® AT 80,00 g/1 (=4,8 vægtprocent) "Elfan®WA 50 40,00 g/1 (=2,0 vægtprocent)
Natriumacetatpuffer (pH 5,4) 170 mmol/1 10 Ascorbinsyre 10 mmol/1 1.2 Farvereagens
Indholdsstof Koncentration "Mulsifan® RT 163 90,00 g/1 (=9,0 vægtprocent) "Hostapur® AT 80,00 g/1 (=4,8 vægtprocent) 15 "Elfan® WA 50 40,00 g/1 (=2,0 vægtprocent)
Natriumacetatpuffer (pH 5,4) 170 mmol/1
Ascorbinsyre 10 mmol/1 "Ferrozine® ^ 1,6 mmol/1 ^Indregistreret varemærke for Hach Chemical Co., Ames, Iowa, 20 U.S.A.
2 t Forsøgsopstilling
Temperatur: 37°C, bølgelængde: 578 nm., lagtykkelse: lo mm. Følgende opløsninger pipetteres over i jernfrie reaktionsbeholdere :
DK 157771 B
15
Prøve Prøveblindværdi
Parvereagens l,oo ml
Blindværdireagens - l,oo ml
Serum 0,20 ml 0,20 ml 5 Der blandes i hvert tilfælde, inkuberes 10 minutter, hvorefter der· måles absorption af prøven mod en blanding af 1,00 ml farvereagens og 0,20 ml H20 (Δ A·^) samt af prøveblindværdi-en mod en blanding af 1,00 ml blindværdireagens og 0,20 ml H20 (Δ a2) . Derudfra beregnes Δ A = Δ Α^-Δ A2.
10 3. Vurdering
Koncentrationen af jern i serum beregnes efter følgende ligning:
Koncentration af jern i serum (^ug/100 ml) = Δ A x 1330.
I stedet for "Mulsifan'® RT 163 kan der i reagenserne 1.1 15 og 1.2 anvendes "Mulsifan'® RT 7 i de samme mængder, uden at resultatet ændrer sig. Ligeledes kan "ElfanWA 50 (Na- dodecylbenzensulfonat, 50% virksomt stof i vandig opløsning) erstattes af samme koncentration (med hensyn til andel af
R
virksomt stof), sekundært alkylsulfat ("Teepol" 610 S, Fa.
20 Shell) (8 til 18 carbonatomer i molekylet). I alle tilfælde er klaringen ved anvendelsen af lipæmisk serum afsluttet og fuldstændig inden for inkubationsperioden.
Eksempel 3 (anvendelseseksempel)
Bestemmelse af apolipoproteiner (A-I, A-II og B) i serum.
25 1. Reagenser 1.1 Fåre-anti-human apo-A-I-antiserum (γ-globulinfrak-. . tion,.Boehringer Mannheim GmbH,. J<at.-nr. 726' 478) .
DK 157771 B
16 1.2 Fåre-anti-human apo-A-II-antiserum (γ-globulinfrak-tion, Boehringer Mannheim GmbH, Rat.-nr,-726 486).
1.3 Fåre-anti-human apo-B-antiserum (γ-globulinfraktion, Boehringer Mannheim GmbH, Rat.-nr. 726 494).
5 1.4 Antiserumfbrtyndingsmiddel
Sammensætning
Indholdsstof Koncentration "Mulsifan1® RT 163 20 g/1 (=2,0 vægtprocent) "Hostapur1® AT 20 g/1 (=1,2 vægtprocent) 10 "Lutensol1® ON 50 10 g/1 (=1,0 vægtprocent)
Kaliumphosphat- puffer (pH 7,4) 10 mmol/1
NaCl 150 mmol/1
Polyethylenglycol 6000 40 g/1 15 1.5 Prøvefortyndingsmiddel (til serum eller standard): kali- umphosphatpuffer (pH 7,4) 10 mmol/1, NaCl 150 mmol/1.
1.6 Standardserum ("Immunoneph'® referencestandard, Immuno GmbH, kat.-nr. 4380105).
2. Antiserum-y standardserum- og serumfortynding.
20 2.1 Antiserumfortynding
Antiserum (1.1, 1.2 eller 1.3) fortyndes hver 10 gange med serumfortyndingsmiddel 1.4. Før brug henstilles de 15 minutter ved 20-25°C.
DK 157771 B
17 2.2 Standardserumfortynding
Standardserum (1.6) fortyndes 5, 10, 20, 40 og 80 gange med prøvef ortyndingsmiddel. (1.5.).
2.3 Serumfortynding 5 Til apo A-I-bestemmelse fortyndes serum 20 gange.dg’til apo A-II- eller apo B-bestemmelse fortyndes serum 10 gange med prøvefortyndirigsin±d$el (1.5.) .
3. Forsøgsopstilling (til enten apo A-I, apo A-II eller apo-B).
10 Temperatur: 25°C, bølgelasngde: 366 nm, lagtykkelse: 10 mm.
I reaktionsbeholdere pipetteres:
Prøve Prøveblindværdi
Antiserumfortynding 2,00 ml AntiserumfortyndSagsmiddel - 2,00 ml 15 Serum- eller standard- 0,10 ml 0,10 ml serumfortynding
Der blandes, inkuberes 2,5 timer, omrystes kortvarigt og derefter måles absorptionen af prøven mod en blanding af 2,00 ml antiserumfortynding og 0,10 ml prøvefortyndingsmiddel (Δ A^ 20 samt af prøveblindværdien mod en blanding af 2,00 ml anti-serumfortyndingsmiddel og 0,lo ml serum- eller standardfortynding (Δ A2). Derudfra beregnes Δ A = Δ A^ - Δ A2.
4. Vurdering
Koncentrationen af enten apo A-I, apo A-II eller apo B
DK 157771 B
18 med Δ A fastsættes ud fra de med s tanda rd f o rtyndings rækken opstillede referencekurver.
Typiske referencekurver opnået med disse forsøgsfremgangsmåder er vist i fig. 2-4.
5 I stedet for "Mulsifan'® RT 163 kan der .i antiserurfortyrdlnqsmiddel 1.4 også anvendes "Mulsifan1® RT 7 eller polyethoxyleret triolein (f.eks. "TagatTO)i samme mængder, uden at resultaterne ændrer sig. Klaringen af lipæmiske sera er i alle tilfælde afsluttet fuldstændigt i løbet af kort tid 10 (ca. 1 minut), hvilket kan fastsættes ud fra prøveblind- værdiopstillingen.
Claims (10)
1. Fremgangsmåde til fjernelse af uklarheder i biologiske væsker gennem tilsætning af overfladeaktive midler, kendetegnet ved, at der som overfladeaktive midler an- 5 vendes: a) et polyethoxyleret triglycerid med en HLB-værdi fra 4 til 14, b) et sekundært n-alkansulfonat samt eventuelt c) et yderligere non- eller anionaktivt tensid 10. vandig, eventuelt pufret opløsning.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der anvendes en puffer med en pK-værdi mellem 2,0 og 10,0.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at der som puffer anvendes en succinat-, acetat-, phosphat- 15 eller trispuffer i en koncentration fra 5 til 250 mM.
4. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1-3, kendetegnet ved, at der til forøgelse af ionstyrken tilsættes ét mindst et salt.
5. Middel til fjernelse af en uklarhed i en biologisk væs-20 ke, kendetegnet ved, at det indeholder: a) etpolyethoxyleret triglycerid med en HLB-værdi fra 4 til 14, b) et sekundært n-alkansulfonat samt eventuelt c) et yderligere non- eller anionaktivt tensid DK 157771 B i vandig, eventuelt pufret opløsning.
6. Middel ifølge krav 5, kendetegnet ved, at det indeholder en puffer med en pK-værdi mellem 2,0 og 10,0.
7. Middel ifølge krav 6, kendetegnet ved, at 5 det som puffer indeholder en succinat-, acetat-, phosphat- eller trispuffer i en koncentration fra 5 til 250 mM.
8. Middel ifølge et af kravene 5-7, kendetegnet ved, at det til forøgelse af ionstyrken indeholder mindst ét salt.
9. Anvendelse af et middel ifølge et af kravene 5-8 til immunologisk bestemmelse af serum-apolipoproteiner.
10. Anvendelse af et middel ifølge krav 9, kendetegnet ved, at den immunologiske bestemmelse foregår ved tur-bidimetrisk eller nefelometrisk måling af uklarheden, der 15 opstår under immunopræcipitationsreaktionen mellem apolipo-protein og dettes antistof.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3323949 | 1983-07-02 | ||
| DE19833323949 DE3323949A1 (de) | 1983-07-02 | 1983-07-02 | Verfahren und mittel zur raschen und vollstaendigen beseitigung einer truebung in einer biologischen fluessigkeit |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK324384D0 DK324384D0 (da) | 1984-07-02 |
| DK324384A DK324384A (da) | 1985-01-03 |
| DK157771B true DK157771B (da) | 1990-02-12 |
| DK157771C DK157771C (da) | 1990-07-09 |
Family
ID=6203031
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK324384A DK157771C (da) | 1983-07-02 | 1984-07-02 | Fremgangsmaade, middel og anvendelse af dette middel til hurtig og fuldstaendig fjernelse af en uklarhed i en biologisk vaeske |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4579825A (da) |
| EP (1) | EP0130537B1 (da) |
| JP (1) | JPS6036959A (da) |
| AT (1) | ATE40478T1 (da) |
| CA (1) | CA1229772A (da) |
| DE (2) | DE3323949A1 (da) |
| DK (1) | DK157771C (da) |
| ES (1) | ES8603993A1 (da) |
| IE (1) | IE55448B1 (da) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3329952A1 (de) * | 1983-08-19 | 1985-02-28 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur verringerung einer truebung in kontrollseren |
| SE448324B (sv) * | 1985-09-27 | 1987-02-09 | Pharmacia Ab | Sett vid immunkemisk bestemning av lipoproteiner och apolipoproteiner |
| DE3729502A1 (de) * | 1987-09-03 | 1989-03-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von eisen |
| IT1216698B (it) * | 1988-04-01 | 1990-03-08 | New Scient Co Spa | Metodo per la determinazione della presenza di catene leggere libere in campioni di urina, complesso di preparati per l'esecuzione del metodo, e relativo reagente. |
| US5219760A (en) * | 1988-05-26 | 1993-06-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of iron |
| DE3817907A1 (de) * | 1988-05-26 | 1989-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von eisen |
| DE4018502A1 (de) * | 1990-06-09 | 1991-12-12 | Merck Patent Gmbh | Verfahren und mittel zur beseitigung von truebungen in biologischen fluessigkeiten |
| ES2083152T3 (es) * | 1990-11-30 | 1996-04-01 | Monoclonetics Int | Metodos para el diagnostico de dolores cronicos lumbares y cervicales. |
| US5844097A (en) * | 1990-11-30 | 1998-12-01 | Monoclonetics International, Inc. | Methods for the diagnosis of peripheral nerve damage |
| EP0531933B1 (en) * | 1991-09-09 | 1997-07-09 | Canon Kabushiki Kaisha | Quantitative determination of lipids |
| US5286626A (en) * | 1991-12-13 | 1994-02-15 | Actimed Laboratories, Inc. | Process and apparatus for direct determination of low density lipoprotein |
| DE4218555A1 (de) * | 1992-06-05 | 1993-12-09 | Elemer Dipl Chem Dr Faltusz | Verfahren zur Solubilisierung der Milch für Untersuchungszwecke |
| DE4401754A1 (de) * | 1994-01-21 | 1995-07-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Eisen |
| US5962340A (en) * | 1994-11-02 | 1999-10-05 | Wako Pure Chemical Industries Ltd. | Homogeneous immunoassay method utilizing 5-300 mM magnesium |
| US5770451A (en) * | 1995-03-30 | 1998-06-23 | Streck Laboratories, Inc. | Liquid lipoprotein control |
| US5614414A (en) * | 1995-03-30 | 1997-03-25 | Streck Laboratories, Inc. | Liquid lipoprotein control |
| DE19850074A1 (de) * | 1998-10-30 | 2000-05-04 | Dade Behring Marburg Gmbh | Stabilisierung von biologischen Flüssigkeiten durch Zusatz von Sterinestern |
| ATE254767T1 (de) * | 2001-02-19 | 2003-12-15 | Olympus Diagnostica Gmbh | Mittel zur beseitigung von eintrübungen in biologischen proben |
| US7781171B2 (en) * | 2003-10-15 | 2010-08-24 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Mehod of pretreating sample and immunological assay method using the same |
| JP4876060B2 (ja) * | 2006-12-01 | 2012-02-15 | 積水メディカル株式会社 | 被検試料の非特異的混濁の判別方法及び試薬 |
| EP2847570B1 (en) | 2012-05-08 | 2020-01-08 | Bentley Instruments S.a.r.l. | Reagent for clarifying emulsions and method of clarification |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3062623A (en) * | 1958-10-13 | 1962-11-06 | Schain Philip | Reagent for the determination of fat in blood serum |
| US3853465A (en) * | 1972-06-09 | 1974-12-10 | Technicon Instr | Turbidity reduction in serum and plasma samples using polyoxyethylated lauric acid compounds |
| US3955925A (en) * | 1973-11-12 | 1976-05-11 | Proksch Gary J | Preparation of optically clear serum |
| US4011045A (en) * | 1975-02-14 | 1977-03-08 | Bonderman Dean P | Turbidity reduction in triglyceride standards |
| DE2724757C2 (de) * | 1977-06-01 | 1979-08-23 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel zur Beseitigung von Trübungen in Serum und Verfahren zu seiner Herstellung |
| DE2816229C2 (de) * | 1978-04-14 | 1983-11-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Beseitigung von Trübungen |
| DE2829531A1 (de) * | 1978-07-05 | 1980-01-24 | Heuck Claus Christian Dr Rer N | Verfahren zur quantitativen bestimmung eines serumproteins in getruebten serum- und plasma-proben |
| US4289469A (en) * | 1980-05-16 | 1981-09-15 | Gloucester Engineering Co., Inc. | Apparatus for forming and trimming articles from a web |
| DE3021457A1 (de) * | 1980-06-06 | 1982-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und mittel zur aufloesung von chylomikronen in waessrigem mediums |
| US4503146A (en) * | 1980-10-01 | 1985-03-05 | Technicon Instruments Corporation | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor |
| US4400201A (en) * | 1980-12-15 | 1983-08-23 | Sandoz Ltd. | Novel pyrimidinyl ethers, their use as herbicides, herbicidal compositions comprising said pyrimidinyl ethers and processes for the preparation thereof |
| FR2513766B1 (fr) * | 1981-09-28 | 1985-09-13 | Biomerieux Sa | Procedes et reactifs de separation selective des lipoproteines de faible densite ldl et de quantification de leurs composants |
| DE3303098A1 (de) * | 1983-01-31 | 1984-08-02 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagenz zur glucosebestimmung im haemolysierten blut |
-
1983
- 1983-07-02 DE DE19833323949 patent/DE3323949A1/de not_active Withdrawn
-
1984
- 1984-06-26 DE DE8484107339T patent/DE3476461D1/de not_active Expired
- 1984-06-26 AT AT84107339T patent/ATE40478T1/de active
- 1984-06-26 EP EP84107339A patent/EP0130537B1/de not_active Expired
- 1984-06-28 CA CA000457743A patent/CA1229772A/en not_active Expired
- 1984-06-29 IE IE1666/84A patent/IE55448B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-06-29 ES ES533881A patent/ES8603993A1/es not_active Expired
- 1984-07-02 US US06/626,633 patent/US4579825A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-07-02 DK DK324384A patent/DK157771C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-07-02 JP JP59135366A patent/JPS6036959A/ja active Granted
-
1985
- 1985-12-02 US US06/803,496 patent/US4708939A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8603993A1 (es) | 1986-01-16 |
| JPS6036959A (ja) | 1985-02-26 |
| DK324384D0 (da) | 1984-07-02 |
| EP0130537A3 (en) | 1986-02-05 |
| ES533881A0 (es) | 1986-01-16 |
| DE3476461D1 (en) | 1989-03-02 |
| US4708939A (en) | 1987-11-24 |
| CA1229772A (en) | 1987-12-01 |
| JPH0316620B2 (da) | 1991-03-06 |
| ATE40478T1 (de) | 1989-02-15 |
| DE3323949A1 (de) | 1985-01-03 |
| DK324384A (da) | 1985-01-03 |
| IE841666L (en) | 1985-01-02 |
| IE55448B1 (en) | 1990-09-12 |
| EP0130537A2 (de) | 1985-01-09 |
| DK157771C (da) | 1990-07-09 |
| US4579825A (en) | 1986-04-01 |
| EP0130537B1 (de) | 1989-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK157771B (da) | Fremgangsmaade, middel og anvendelse af dette middel til hurtig og fuldstaendig fjernelse af en uklarhed i en biologisk vaeske | |
| EP0073554B1 (en) | Treatment of whole blood for determination of red blood cell volumes | |
| SU1296019A3 (ru) | Способ определени липопротеинов низкой плотности в сыворотке крови | |
| EP0214613A2 (en) | Method for determination of a differential white blood cell count | |
| US4311788A (en) | Process for the quantitative determination of a serum protein in turbid serum and plasma samples | |
| US4521519A (en) | Reagent for the precipitation of apo-B-containing lipoproteins | |
| JP2003149244A (ja) | 免疫反応におけるプロゾーン現象抑制方法及び免疫反応測定用試薬 | |
| US4608347A (en) | Compositions, uses and methods creating reverse micelles for the clarification of biological fluids to obtain undistorted assay of analytes following clarification | |
| US6248545B1 (en) | Assay of denatured lipoproteins | |
| JP2603452B2 (ja) | 鉄を測定する方法及びその試薬 | |
| US6680201B2 (en) | Agent for the removal of turbidity in biological samples | |
| US4474887A (en) | Method for the determination of low density lipoprotein | |
| Sharma et al. | The turbid specimen as an analytical medium: hemoglobin determination as a model | |
| EP0141879A1 (en) | Surfactant compositions and methods for clarifying and partitioning aqueous lipid-containing specimens | |
| JPH10213582A (ja) | 生体試料の濁りの除去方法 | |
| JP2020034492A (ja) | 生体試料中の測定対象物質を免疫学的に測定する方法 | |
| JPH0580056A (ja) | 高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液及び分析方法 | |
| US5045472A (en) | Reagent mixture and composition for treating red blood cells to effect sphering | |
| JPH0682450A (ja) | 免疫学的測定試薬 | |
| JP2006071574A (ja) | 免疫比濁法及びそのための試薬 | |
| JP2006194746A (ja) | 被測定物質測定方法及び免疫測定用試薬 | |
| CA1237966A (en) | Surfactant compositions and methods for clarifying and partitioning aqueous lipid-containing specimens | |
| JPH07181182A (ja) | リポタンパク質含有試料の処理法 | |
| JPH0274865A (ja) | 体液中のリンの定量方法 | |
| US5714333A (en) | Process for preparing clear sera which are stable over a long period |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |