DK158678B - Fremgangsmaade til fremstilling af et hepatitis b kerneantigen og anvendelse af dette antigen til fremstilling af diagnostiske praeparater og vacciner. - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af et hepatitis b kerneantigen og anvendelse af dette antigen til fremstilling af diagnostiske praeparater og vacciner. Download PDFInfo
- Publication number
- DK158678B DK158678B DK171178A DK171178A DK158678B DK 158678 B DK158678 B DK 158678B DK 171178 A DK171178 A DK 171178A DK 171178 A DK171178 A DK 171178A DK 158678 B DK158678 B DK 158678B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- polyoxyethylene
- antigen
- preparation
- hepatitis
- rotor
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 title claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 7
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 title description 2
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 18
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 16
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 15
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical group OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 7
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 claims description 7
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 6
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N EtOH Substances CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 4
- CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 1-dodecoxydodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCC CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 7
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- FFJCNSLCJOQHKM-CLFAGFIQSA-N (z)-1-[(z)-octadec-9-enoxy]octadec-9-ene Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC FFJCNSLCJOQHKM-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 1-hexadecoxyhexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCCCCCC FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBXWUCXDUUJDRB-UHFFFAOYSA-N 1-octadecoxyoctadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCCCCCCCC HBXWUCXDUUJDRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical group CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100070137 Seriola quinqueradiata hbab gene Proteins 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 description 1
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- AVTYONGGKAJVTE-OLXYHTOASA-L potassium L-tartrate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O AVTYONGGKAJVTE-OLXYHTOASA-L 0.000 description 1
- 239000001472 potassium tartrate Substances 0.000 description 1
- 229940111695 potassium tartrate Drugs 0.000 description 1
- 235000011005 potassium tartrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 239000001587 sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000011076 sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035048 sorbitan monostearate Drugs 0.000 description 1
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5762—Hepatitis B core antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
x DK 158678B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et hepatitis B antigen og anvendelse deraf til fremstilling af diagnostiske præparater og vacciner.
Fra Lancet (1971), s. 1225-1227 er det kendt ved 5 udvindingen af hepatitis-kerneantigen (HB Ag) at anvende en detergent, f.eks. det i handelen tilgængelige produkt med varemærket "Tween 80", et ikke-ionogent overfladeaktivt middel med ca. 20 oxyethylenenheder. Anvendelsen af et mercaptan-reduktionsmiddel er ikke nævnt i denne artikel.
I J. Immunology, 115 (1975), s. 834-838 og 114 (1975), s. 1792-1798 er udvindingen af HBcAg under anvendelse af det i handelen tilgængelige produkt med varemærket "Nonidet 15 NP-40" (detergent med 9 oxyethylenenheder) beskrevet, idet man ifølge førstnævnte artikel foretager en forudgående og ifølge sidstnævnte artikel en samtidig behandling med mercaptoethanol. Anvendelsen af deter-genten med ca. 15 til ca. 35 oxyethy lenenheder er ikke 20 nævnt der.
Det tilsigtes med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe en fremgangsmåde til fremstilling af HB Ag, som i sammenligning med hidtil kendte fremgangsmåder 25 forløber med højere udbytte.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 1 anførte.
30 Som udgangsmateriale for renset hepatitis-kerneantigen anvendes plasma, der stammer fra donorer, som er positive over for HB Ag. Plasmaet opnås på sædvanlig måde, f.eks.
S
ved plasmoforese. Indholdet af HB Ag kan måles på kendt
S
måde, f.eks. ved omvendt passiv hæmagglutination eller 35 komplimentfiksering. I stedet kan plasmaet afkøles og det
, DK 158678B
dannede kryopræcipat fjernes ved skånsom centrifugering. Dane-partiklerne i det opnåede plasma isoleres ved isopyknisk opdeling. Fraktionen med højt indhold af Dane-partikler behandles til fjernelse af Dane-kerneantistof, 5 fortrinsvis ved pelletering, og behandles derefter til fjernelse af overfladeantigen og frigivelse af kerneantigenet. Fjernelse af overfladeantigenet udføres ved behandling af Dane-partiklerne med et ikke-ionisk overfladeaktivt stof, der har ca. 15 til ca. 35, fortrinsvis 10 ca. 18 til ca. 33, oxyethylenenheder i molekylet, i nærvær af et mercaptan-reduktionsmiddel, f.eks. mercapto-ethanol, dithiothreitol, dithioerythritol eller dithio-octansyre. Egnede ikke-ioniske overfladeaktive stoffer er oxyethylerede alkylphenoler, polyoxyethylensorbitanfedt-15 syreestere, polyoxyethylensyrer, polyoxyethylenalkoholer, polyoxyethylenolier og polyoxyethylenoxypropylenfedt-syrer. Nogle specifikke eksempler herpå er følgende: alkylphenoxypolyethoxy-(30)-ethanol 20 polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonolaurat polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonopalmitat polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonostearat polyoxyethylen-(20)-sorbitantristearat polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonooleat 25 polyoxyethylen-(20)-sorbitantrioleat polyoxyethylen-(20)-palmitat polyoxyethylen-(20)-laurylether polyoxyethylen-(20)-cetylether polyoxyethylen-(20)-stearylether 30 polyoxyethylen-(20)-oleylether polyoxyethylen-(25)-hydrogeneret ricinusolie og polyoxyethylen-(25)-oxypropylenmonostearat.
Ved isopyknisk opdeling bringes det delvist rensede kon-35 centrat i kontakt med et væskeformigt medium, der har en vægtfyldegradient, som omfatter vægtfylden af det specifikke antigen, der skal isoleres. Det væskeformige
DK 158678B
3 medium underkastes derefter ultracentrifugering for at opnå en ligevægtsfordeling af serumkomponenterne gennem vægtfyldegradienten i overensstemmelse med deres individuelle vægtfylder. Successive fraktioner af mediet iso-5 leres, og fraktionerne indeholdende det ønskede antigen, dvs. fraktioner med en vægtfylde fra ca. 1,26 til ca.
1,30 g/ml, opsamles. Koncentrationerne af opløsningerne, som danner gradienten, opsamles således, at der omfattes vægtfyldeområdet fra ca. 1,0 til ca. 1,41 g/ml. Det fly-10 dende medium kan anvendes i form af en lineær gradient eller trinformet gradient. Fortrinsvis anvendes trinformet gradient som følge af dens højere evne til fraktionering .
15 De flydende medier, der anvendes til isopyknisk opdeling, kan have en vilkårlig vægtfyldegradient i det ønskede område, og eksempler herpå er saccharose, kaliumbromid, calciumchlorid, kaliumtartrat og natriumbromid. Natrium-bromid foretrækkes.
20
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen skal i det efterfølgende illustreres nærmere ved hjælp af nogle eksempler, hvor trin A) og trin B) i eksempel 1 vedrører fremstillingen af udgangsmateriale.
25 EKSEMPEL 1 A) Fremstilling af Dane-partikler (HBV) 30 Rotoren til en centrifuge (Elektronucleonics K) fyldes med 8400 ml phosphatpuffer. Rotoren bringes til at rotere med en hastighed på indtil 10000 omdr./min for at afgasse systemet, og derefter pumpes følgende tringradienter ind i bunden af den stationære rotor: 35 1. 2400 ml 10 % NaBr, p = 10,8 2. 1000 ml 20 % NaBr, p - 1,17
DK 158678 B
4 3. 1500 ml 30 % NaBr, p = 1,28 4. 3500 ml 40 % NaBr, p = 1,41 1750 ml plasma Indeholdende HB Ag pumpes ind i toppen af 5 den stationære rotor, hvorved fortrænges 1750 ml 40 % natriumbromidopløsning fra rotorens bund. Rotoren accelereres til 30000 omdr./min og løber med denne hastighed i 4 timer. Derefter stoppes rotoren, og 1750 ml 40 % natriumbromidopløsning pumpes ind i bunden af rotoren, 10 hvorved plasmaet tvinges ud foroven. Yderligere 1750 ml frisk plasma indeholdende HB Ag pumpes ind i toppen af rotoren, mens samme rumfang 40 % natriumbromidopløsning fortrænges i bunden af rotoren. Rotoren drives derefter med en hastighed på 3000 omdr./min i 18 timer. Efter 15 standsning af rotoren opsamles 1000 ml materiale med indhold af Dane-partikler i vægtfyldeområdet 1,26-1,30.
Dane-partiklerne (HBV) skilles fra NaBr-zonefrektionen ved den efterfølgende procedure. Zonefraktionen (1000 ml) 20 fortyndes til 3000 ml med phosphatpufret opløsning.
Dette materiale anbringes herefter i 12 rotorplastrør af typen 19 (ca. 250 ml pr. rør). Materialet centrifugeres med en type 19 rotor (Beckman). Rotoren drives ved 17000 omdr./min (45000 x g) i 24 timer, hvorved Dane-par-25 tiklerne klumper sammen. Derefter stoppes rotoren, og den ovenstående væske fra hvert rør dekanteres fra. Det sammenklumpede materiale fra alle 12 flasker udvindes i et totalt rumfang på 5-7 ml Tris-kogsaltpuffer og opbevares ved -70 °C. Dette stof udgør et koncentrat af Dane-30 partikler.
B) Rensning af Dane-partikler 1 ml koncentrat af Dane-partikler fra trin A overlejres 35 med 4 ml 20 % saccharose - 1 % okseserumalbumin (BSA) i Tris-puffer (pH = 7,6) i en SW 65 rotor med 13 x 50 mm (1/2 x 2”) centrifugerør af cellulosenitrat. Partiklerne
DK 158678B
5 centrifugeres ved 35000 omdr./min i 4 timer. Efter centrifugering fradekanteres den ovenstående væske, og det faste stof gensuspenderes forsigtigt i 0,5 ml Tris-puffer med 1 % BSA ved hjælp af en med puffer forud fugtet 5 vatpind. Vatpinden skylles derefter med 5 ml puffer. Slutrumfanget af Dane-partikelmateriale er 1 ml. Dane-partiklerne opbevares ved -70 °C.
C) Fremstilling af HBcAg (kerneantigen) 10
Stoffet fra trin B, 1 ml, sættes til 1 ml 1 volumen-% opløsning af 2-mercaptoethanol i afioniseret vand og 1 ml 1 volumen-% opløsning af polyoxyethylen-(20)-sorbitan-monooleat i afioniseret vand. Den dannede blanding omrø-15 res forsigtigt og anbringes i et vandbad ved 37 eC. Efter en time fortyndes blandingen med TMN-1 % BSA (en opløsning indeholdende 0,08 M Tris, 0,008 M magnesiumchlorid 0,14 M natriumchlorid og 1 % BSA) under anvendelse af en forud beregnet mængde fortyndingsmiddel, indtil den 20 indeholder 32 IAHA-enheder pr. ml. Opløsningen disper-geres derefter i 2 ml serumrør af plast med skruelåg (0,5 ml rør) og opbevares i en fryser med flydende nitrogen.
EKSEMPEL 2 25
Til hver af 12 6 ml glasampuller sættes 1 ml rensede Dane-partikler, fremstillet som beskrevet i eksempel 1, 1 ml 1 volumen-% opløsning af 2-mercaptoethanol i afioniseret vand og 1 ml 1 volumen-% opløsning af det nedennævnte 30 materiale i afioniseret vand. Blandingerne omrøres forsigtigt og anbringes i et vandbad ved 37 °C. Efter 1 times prøves de dannede blandinger for HB Ag ved en immunadhærenshæmagglutineringsprøve.
35 6
DK 158678 B
Ikke-ionisk overfladeaktivt stof IAHA-enh.
Polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonooleat 1000
Polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonolaurat 1000 5 Polyoxyethylen-(23)-laurylether 1000
Polyoxyethylen-(20)-cetylether 1000
Alkylphenoxypolyethoxy-(30)-ethanol 1000
Alkylphenoxypolyethoxy-(9)-ethanol 240
Alkylphenoxypolyethoxy-(40)-ethanol 240 1 o Polyoxyethylen-(9)-octaphenol 60
Sorbitanmonolaurat 30
Sorbitanmonostearat 30
Natriumdodecylsulfat 30
Polyalkarylsulfonsyre 30 15
De ovennævnte resultater viser, at ikke-ioniske overfladeaktive stoffer indeholdende 9 eller 40 oxyethylen-enheder er væsentlig ringere end sådanne indeholdende 20 til 30 oxyethylenenheder, medens stoffer uden oxyethylen-20 enheder er næsten totalt ineffektive.
EKSEMPEL 3
Til en første 1 ml prøve af rensede Dane-partikler fra 25 samme portion som anvendt i eksempel 2 sættes 1 ml polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonooleat og 1 ml 2-mercap-toethanol. En anden 1 ml prøve behandles på lignende måde, idet der dog anvendes 1 ml afioniseret vand i stedet for 2-mercaptoethanol. Hver prøve blandes, inku-30 beres 1 time ved 37 “C og prøves for HB Ag ved immun-adhærens-hæmagglutineringsprøven. Den anden prøve uden 2-mercaptoethanol viste sig at indeholde mindre end halvdelen af mængden af HB Ag i første prøve.
C
35
DK 158678 B
7 EKSEMPEL 4 HB AG som fremstillet i eksempel 1 adsorberes på alun på følgende måde. 10 ml HB Ag (type Ad) indeholdende 16 - 32 5 IA-enheder/ml blandes med 0,85 ml 10 % alunopløsning (KAI(SO^)2/ 12H20). Under omrøring tilsættes langsomt 0,1 N natriumhydroxid til indstilling af pH-værdien på 6,8. Blandingen tilsættes i løbet af en time ved stuetemperatur. Opløsningen centrifugeres derefter ved 10 1500 x g i 10 minutter. Den ovenstående væske fradekanteres, og pellet resuspenderes i kogsaltopløsning til det oprindelige rumfang (10 ml). Opløsningen blandes derefter i 5 - 10 minutter forud for anvendelsen som antigen.
15 EKSEMPEL 5
Fremgangsmåden ifølge eksempel 4 gentages med den ændring, at der benyttes 10 ml HB Ag (type Ay).
C
20 EKSEMPEL 6
Alun-antigener fremstillet i eksempel 4 og 5 anvendes til fremstilling af HB Ag-serum med høj titer. Et antal mar-25 svin opdelt i to grupper anvendes til at producere HB AO-antiserum. Den første gruppe får med månedlige intervaller 3 intramuskulære injektioner med 0,5 ml af produktet ifølge eksempel 4. Den anden gruppe behandles på tilsvarende måde med produktet fra eksempel 5.
30 Hepatitis B antistof-serum med høj titer dannes i hver gruppe.
EKSEMPEL 7 35 Enzymbundet immunosorbantprøve (ELISA)
DK 158678 B
8
Det i eksempel 1 opnåede HBcAg renses ved centrifugering på en 20-60 % saccharosegradient ved 200000 x g i 2 1/2 time. HBcAg prøves derefter til bestemmelse af proteinindholdet. HB Ag fortyndes til 1 jig/ml med 0,1 M 5 carbonatpuffer pH 0,7 til anvendelse ved ELISA-prøven.
Den ved prøven anvendte faste fase er en Cooke-mikro-titerplade af polystyren med U-formet bund og 96 brønde.
10 Enzymkonjugatet er alkaliphosphatase-konjugeret gede-an- ti-humant immunoglobulin (Engvall et al., The Journal of Immunology, 109, 129 (1972). Anvendelseskoncentrationen bestemmes ved titrering.
15 Enzymsubstratet er 0,01 % p-nitrophenylphosphat i 0,1 M carbonatpuffer pH = 9,8, indeholdende 0,001 M magne-siumchlorid.
Prøvemetoden er beskrevet af E. Nassau et al., i 20 Tubercle, 57, 67-70 (1976). Denne metode anvendes til at påvise HB Ag i plasma og serumprøver.
C
EKSEMPEL 8 25 Slutproduktet fra eksempel 1 behandles under aseptiske betingelser med 1:4000 formalin ved 37 °C i 72 timer. Overskud af formalin neutraliseres derefter med natrium-bisulfit. Kerneantigenet adsorberes derefter på alun ved den i eksempel 4 beskrevne procedure.
30 På personer, der var positive over for HB Ab og havde en
C
HBAb-antistoftiter (som målt ved immun-vedhængnings-hæmagglutineringsprøven, IAHA) på 32 IAHA-enheder pr. ml eller derover blev der indgivet 1 ml (40 Mg) doser vac-35 cine intramuskulært. Yderligere injektioner blev givet en måned og tre måneder efter den første injektion. En uge efter den tredie injektion bliver personerne plasma-
DK 158678B
9 pherede, og HB Ab titere udføres på de enkelte plasma-portioner ved hjælp af immunadhærenshæmagglutinerings-prøven. De fleste af forsøgspersonerne fik en forøgelse af deres HB Ab-titere i sammenligning med deres oprin-5 delige titere. Plasma med en antistoftiter på 2000 eller derover behandledes til opnåelse af gammaglobulin med en høj HB Ab-titer.
c EKSEMPEL 9 10
Produktet fra trin B fra eksempel 1, 1 ml, sættes til 1 ml af en 1 volumen-% opløsning af 2-mercaptoethanol i afioniseret vand og 1 ml 1 volumen-% opløsning af polyoxyethylene 20)-sorbitanmonooleat i afioniseret vand. Den 15 dannede blanding omrøres forsigtigt og indføres i et vandbad på 37 °C. Efter 1 time fortyndes blandingen med SPGA under anvendelse af en forud beregnet mængde fortyndingsmiddel, indtil den indeholder 32 IAHA-enheder pr. ml. Opløsningen fordeles herefter i 2 ml serumrør af 20 plast med skruelåg (0,5 ml/rør) og opbevares i en fryser med flydende nitrogen.
25 30 35
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af hepatitis B kerne-5 antigen, kendetegnet ved, at Dane-partikler behandles med et ikke-ionisk overfladeaktivt stof, der har 15 til 35 oxyethylenenheder, i nærværelse af et mercaptan-reduktionsmiddel .
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at reduktionsmidlet er mercaptoethanol.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det ikke-ioniske overfladeaktive stof er polyoxy-15 ethylen-(20)-sorbitanmonooleat, polyoxyethylen-(20)-sor- bitanmonolaurat, polyoxyethylen-(23)-laurylether, poly-oxyethylen-(20)-cetylether eller alkylphenoxypolyethoxy-(30)-ethanol.
4. Anvendelse af hepatitis B kerne-antigen opnået ifølge krav 1 til fremstilling af diagnostiske præparater og vacciner. 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US78903377 | 1977-04-20 | ||
| US05/789,033 US4102996A (en) | 1977-04-20 | 1977-04-20 | Method of preparing hepatitis B core antigen |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK171178A DK171178A (da) | 1978-10-21 |
| DK158678B true DK158678B (da) | 1990-07-02 |
| DK158678C DK158678C (da) | 1990-12-31 |
Family
ID=25146371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK171178A DK158678C (da) | 1977-04-20 | 1978-04-19 | Fremgangsmaade til fremstilling af et hepatitis b kerneantigen og anvendelse af dette antigen til fremstilling af diagnostiske praeparater og vacciner. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4102996A (da) |
| JP (4) | JPS53133628A (da) |
| BE (1) | BE866096A (da) |
| CA (1) | CA1106279A (da) |
| DE (1) | DE2816864C2 (da) |
| DK (1) | DK158678C (da) |
| FR (1) | FR2387656A1 (da) |
| GB (3) | GB1596592A (da) |
| HK (3) | HK67684A (da) |
| IE (1) | IE46793B1 (da) |
| IT (1) | IT1102573B (da) |
| LU (1) | LU79477A1 (da) |
| NL (1) | NL7803625A (da) |
| SG (1) | SG41884G (da) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2750045A1 (de) * | 1977-11-09 | 1979-05-10 | Behringwerke Ag | Verfahren zur entfernung von detergentien aus virusantigensuspensionen |
| US4204989A (en) * | 1978-12-13 | 1980-05-27 | Merck & Co., Inc. | Isolation of hepatitis B e antigen |
| US4241175A (en) * | 1978-12-18 | 1980-12-23 | Merck & Co., Inc. | Assay for hepatitis B core antibody |
| IL59007A (en) * | 1978-12-22 | 1983-11-30 | Biogen Nv | Recombinant dna molecules coding for polypeptides displaying hepatitis b virus antigenicity,method of their production and compositions containing the same |
| US6297355B1 (en) | 1978-12-22 | 2001-10-02 | Biogen, Inc. | Polypeptides displaying HBV antigenicity or hbv antigen specificity |
| US4395395A (en) * | 1979-05-21 | 1983-07-26 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Detection of non-A, non-B hepatitis associated antigen |
| CA1148859A (en) * | 1979-06-14 | 1983-06-28 | Lacy R. Overby | Simultaneous assay of two hepatitis viruses using a solid phase |
| FR2470795A1 (fr) * | 1979-12-07 | 1981-06-12 | Pasteur Institut | Procede de purification de particules d'origine biologique, notamment de l'antigene de surface du virus de l'hepatite b (aghbs) et les produits obtenus |
| JPH0625069B2 (ja) * | 1981-01-29 | 1994-04-06 | ブリティッシュ・テクノロジー・グループ・リミテッド | Ｂ型肝炎ワクチン製造方法 |
| AU8746582A (en) * | 1981-09-02 | 1983-03-10 | Biogen N.V. | Hepatitis b virus e type antigen |
| US4721675A (en) * | 1982-02-01 | 1988-01-26 | Abbott Laboratories | Production of hepatitis A virus in vitro utilizing a persistently virus infected cell culture system |
| DE3479158D1 (en) * | 1983-03-04 | 1989-08-31 | Noctech Ltd | Diagnostic agent, a process for its preparation and its use in diagnostic methods |
| US4547367A (en) * | 1983-12-20 | 1985-10-15 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Hepatitis B core antigen vaccine |
| US4547368A (en) * | 1983-12-20 | 1985-10-15 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Hepatitis B core antigen vaccine made by recombinant DNA |
| JPS60197629A (ja) * | 1984-03-16 | 1985-10-07 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | ＨＢｓ抗原の精製方法 |
| JPS60258127A (ja) * | 1984-06-04 | 1985-12-20 | Green Cross Corp:The | Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法 |
| US4683294A (en) * | 1985-04-03 | 1987-07-28 | Smith Kline Rit, S.A. | Process for the extraction and purification of proteins from culture media producing them |
| US4649192A (en) * | 1985-05-30 | 1987-03-10 | Smith Kline-Rit | Method for the isolation and purification of hepatitis B surface antigen using polysorbate |
| DE3604947A1 (de) * | 1986-02-17 | 1987-08-20 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur herstellung eines immunglobulinhaltigen praeparates und dessen verwendung zur prophylaxe und therapie von aids |
| EP0341439B1 (en) * | 1988-05-11 | 1993-08-04 | Abbott Laboratories | Method for increasing specificity in competitive immunoassays |
| BR0205774A (pt) * | 2002-02-27 | 2004-04-20 | Fundacao De Amparo A Pesquisa | Sistema adjuvante para produção de anticorpos, vacina e uso |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3636191A (en) * | 1969-10-08 | 1972-01-18 | Cancer Res Inst | Vaccine against viral hepatitis and process |
| SE437329B (sv) * | 1975-03-14 | 1985-02-25 | Community Blood Council | Sett att ur blodserum framstella vaccin mot virushepatit |
| GB1518582A (en) * | 1975-11-17 | 1978-07-19 | Community Blood Council | Viral hepatitis vaccine |
| DE2611723C3 (de) * | 1976-03-19 | 1978-09-21 | The Green Cross Corp., Osaka (Japan) | Verfahren zur Herstellung von einheitlichen kugelförmigen HBsAg-Teilchen |
| NL7711378A (nl) * | 1976-11-02 | 1978-05-05 | Merck & Co Inc | Werkwijze voor het bereiden van preparaten die dane-deeltjes bevatten. |
-
1977
- 1977-04-20 US US05/789,033 patent/US4102996A/en not_active Expired - Lifetime
-
1978
- 1978-02-24 CA CA297,711A patent/CA1106279A/en not_active Expired
- 1978-04-05 NL NL7803625A patent/NL7803625A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-04-12 IE IE716/78A patent/IE46793B1/en not_active IP Right Cessation
- 1978-04-12 IT IT48873/78A patent/IT1102573B/it active
- 1978-04-18 GB GB23093/79A patent/GB1596592A/en not_active Expired
- 1978-04-18 GB GB44611/79A patent/GB1596593A/en not_active Expired
- 1978-04-18 FR FR7811390A patent/FR2387656A1/fr active Granted
- 1978-04-18 BE BE186878A patent/BE866096A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-04-18 GB GB15228/78A patent/GB1596591A/en not_active Expired
- 1978-04-18 DE DE2816864A patent/DE2816864C2/de not_active Expired
- 1978-04-19 DK DK171178A patent/DK158678C/da active IP Right Grant
- 1978-04-20 LU LU79477A patent/LU79477A1/xx unknown
- 1978-04-20 JP JP4600278A patent/JPS53133628A/ja active Granted
-
1982
- 1982-05-19 JP JP57083346A patent/JPS57203016A/ja active Pending
- 1982-05-19 JP JP57083347A patent/JPS57201854A/ja active Pending
-
1983
- 1983-01-13 JP JP58002940A patent/JPS58180430A/ja active Pending
-
1984
- 1984-06-05 SG SG418/84A patent/SG41884G/en unknown
- 1984-08-30 HK HK676/84A patent/HK67684A/xx unknown
- 1984-08-30 HK HK677/84A patent/HK67784A/xx unknown
- 1984-08-30 HK HK675/84A patent/HK67584A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HK67784A (en) | 1984-09-07 |
| FR2387656A1 (fr) | 1978-11-17 |
| IE46793B1 (en) | 1983-09-21 |
| JPS58180430A (ja) | 1983-10-21 |
| DK158678C (da) | 1990-12-31 |
| GB1596593A (en) | 1981-08-26 |
| JPS57201854A (en) | 1982-12-10 |
| US4102996A (en) | 1978-07-25 |
| BE866096A (fr) | 1978-10-18 |
| DE2816864C2 (de) | 1985-08-14 |
| IT1102573B (it) | 1985-10-07 |
| GB1596592A (en) | 1981-08-26 |
| JPS57203016A (en) | 1982-12-13 |
| GB1596591A (en) | 1981-08-26 |
| IE780716L (en) | 1978-10-20 |
| JPS53133628A (en) | 1978-11-21 |
| JPS6141897B2 (da) | 1986-09-18 |
| CA1106279A (en) | 1981-08-04 |
| NL7803625A (nl) | 1978-10-24 |
| FR2387656B1 (da) | 1982-02-19 |
| LU79477A1 (fr) | 1978-11-28 |
| DK171178A (da) | 1978-10-21 |
| DE2816864A1 (de) | 1978-10-26 |
| HK67684A (en) | 1984-09-07 |
| IT7848873A0 (it) | 1978-04-12 |
| SG41884G (en) | 1985-03-08 |
| HK67584A (en) | 1984-09-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK158678B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et hepatitis b kerneantigen og anvendelse af dette antigen til fremstilling af diagnostiske praeparater og vacciner. | |
| Unanue et al. | Experimental glomerulonephritis: V. Studies on the interaction of nephrotoxic antibodies with tissues of the rat | |
| D'amelio et al. | The distribution of soluble antigens in cellular structures of rat liver | |
| Laurell et al. | Electrophoretic studies of the conversion products of serum β1C-globulin | |
| Kirber et al. | A comparison of influenza complement fixation antigens derived from allantoic fluids and membranes | |
| Craigie et al. | Studies on the soluble precipitable substances of vaccinia: I. The dissociation in vitro of soluble precipitable substances from elementary bodies of vaccinia | |
| Pollack et al. | Isolation, characterization, and immunogenicity of Mycoplasma pneumoniae membranes | |
| Lawrence Jr et al. | Studies of human anti-γ-globulin factors reacting with pepsin-digested γ-globulins | |
| NO850025L (no) | Virusantigener, fremgangsmaate for erholdelse av disse og anvendelse av disse ved diagnose og terapi (podevaksine) | |
| Haughton | EXTRACTION OF H-2 ANTIGEN FROM MOUSE: TUMOUR CELLS | |
| US4234564A (en) | Hepatitis B core antigen composition | |
| Hinz Jr et al. | Studies on Immune Human Hemolysis: I. The Kinetics of the Donath-Landsteiner Reaction and the Requirement for Complement in the Reaction | |
| Löffler et al. | Attempts to influence the incomplete reproductive cycle of influenza virus in HeLa cells by antibodies | |
| EP0012686B1 (en) | Isolation of hepatitis be antigen | |
| Gard et al. | Hemagglutination by Col-MM-virus | |
| EP0005864B1 (en) | Antigenic composition useful as a vaccine or vaccine intermediate, and process for preparing same | |
| Kaplan | Rheumatic fever, rheumatic heart disease, and the streptococcal connection: the role of streptococcal antigens cross-reactive with heart tissue | |
| Isaacs et al. | INTERFERENCE BETWEEN INACTVE AND ACTIVE INFLUENZA VIRUSES IN THE CHICK EMBRYO IV. THE EARLY STAGES OF VIRUS MULTIPLICATION AND INTERFERENCE. | |
| Wachter et al. | Changes in buoyant density relationships of two cell types of Coxiella burneti phase I | |
| US4118477A (en) | Hepatitis B antigen | |
| Gottlieb et al. | Replication of deoxyribonucleic acid in lymphoid cells. Unusual effect of bromodeoxyuridine | |
| Hobson | The strain-specific serological activity of a non-haemagglutinating fraction of influenza viruses | |
| Czekalowski et al. | Studies on influenza virus: I. Antigenic variation in influenza virus type C | |
| KR820001148B1 (ko) | 간염 b핵 항원의 제조방법 | |
| Haukenes | A rubella haemagglutination inhibitor simulating antibody |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) |