DK159855B - N6-substituerede adenosiner samt farmaceutiske praeparater indeholdende disse - Google Patents

Description

6 i

DK 159855 B

Opfindelsen angår hidtil ukendte N -substituerede adenosiner med den almene formel I, som defineret i krav 1's kendetegnende del, eller farmaceutisk acceptable additionssalte deraf. Endvidere angår opfindelsen farmaceu-5 tiske præparater indeholdende en terapeutisk effektiv mængde af de omhandlede forbindelser sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer.

US patentskrift nr. 3.590.029 omtaler en række g 2-amino-N -adenosiner, blandt hvilke der i den forelig- g 10 gende sammenhæng kan fremhæves forbindelsen N -benzhy- g dryl-2-amino-adenosin, også betegnet N -diphenylmethyl-adenosin.

g

Tysk patentskrift nr. 2.406.587 omtaler N -diphe-nylalkyl-adenosiner som hypolipæmiske midler, blandt 15 hvilke forbindelser der i den foreliggende sammenhæng g navnlig kan fremhæves forbindelserne N-[1,1'-(diphenyl)- g isopropyl]-adenosin og N -diphenylmethyladenosin.

Endvidere er det kendt, jvf. Arzneim.-Porsch.

(Drug Res.), 25, nr. 3 (1975), side 407-409, og Journal 20 of Medicinal Chemistry, 25, nr. 3 (1982), side 197-207, g at visse monophenyl-alkylsubstituerede N -adenosiner, g såsom N -phenylisopropyl-adenosin, har et gunstigt affinitetsforhold ved A^- og A2~receptorer og har cardiova-sculære aktiviteter og ønskede indvirkninger på central-25 nervesystemet.

g

De hidtil ukendte N -substituerede adenosiner ifølge den foreliggende opfindelse er ejendommelige ved, at de har den almene formel I

A Ar 30 HN^ I X^Ar1

35 I

R5 '°“V°N

r3 10* or2 ' t 2

DK 159855 B

eller er farmaceutisk acceptable additionssalte deraf, hvor i

Ar og Ar hver uafhængigt er phenyl, som eventuelt er substitueret med halogen, lavere alkoxy, lavere alkyl 5 eller nitro, A er ligekædet alkylen med 1-8 C-atomer, X er hydrogen, hydroxy, lavere alkyl eller lavere car-balkoxy, Y er hydrogen, halogen eller amino, og 10 r^', R31 og R^' hver uafhængigt er hydrogen, alkanoyl med 2-12 C-atomer i lige eller forgrenet alkylkæde eller benzoyl, hvorhos og R^1 også kan være indbyrdes forbundet til dannelse af en fem-leddet ring med ialt op til 20 C-atomer, og R^' også kan være (PO^ )1/3.

15 Sammenlignet med de ovenfor omtalte kendte N^-sub- stituerede adenosiner udmærker forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse sig ved en gunstigere kombination af lave IC^g-værdier for A^- og A2~receptoraffinitet med et ønsket lavt A2/A.J-forhold for disse værdier. Endvidere 20 har forbindelserne ønskelige indvirkninger på centralnervesystemet og cardiovasculære aktiviteter, såsom anal-getiske, antipsykotiske, sedative, antihypertensive og antianginale aktiviteter.

Til illustration af de omhandlede, forbindelsers 25 gunstige kombination af lave IC^Q-værdier for A^- og A2~receptoraffinitet med lavt A2/A1-forhold for disse værdier kan anføres følgende IC^Q-værdier og forhold for en række homologe N^-aralkyl-adenosiner:

DK 159855 B

3

Homologe N -Aralkyl-adenosiner N*

tÉP

5 HOOH

Receptorbinding β IC50 ^ Forhold 1 ft1 a2« a2</ai 10 j* MN^ 211 422 1,99

Ph HN ^CH5 9,67 676 69,9 15 η ΗμΆοι* 333 9403 28 ^Ph J 22 238 10,6 20 S** L 2,07 184 89,1

HN^>CHS

i * S* 25 HN^UCH« 86,9 2692 30,8

Ph^Ph T 12,1 36,6 3,0

Hip'' (CI-936) 30 rtY"* 66 44,5 0,68 HN^CHs 35 28 480 16

Ph 846 5650 6,7 HN Ph 4

DK 159855 B

Den ovenstående tabel viser klart, at den bedste kombination af lave IC^Q-værdier og lavt “forhold opnås med forbindelsen ifølge den foreliggende opfin- C.

delse (CI-936), der ved N udviser to phenylsubstituenter 5 og en uforgrenet alkylenkæde mellem disse og NH-gruppen.

I forbindelserne med formlen I skal der ved angivelsen "lavere alkyl" forstås en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-6 C-atomer, såsom methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sek.butyl, isobutyl, tert.bu-10 tyl, amyl, isoamyl, neopentyl eller hexyl.

Halogen omfatter navnlig fluor, chlor eller brom.

Lavere alkoxy er 0-alkyl med 1-6 C-atomer som ovenfor defineret for "lavere alkyl".

0 Lavere carbalkoxy er en ligekædet eller forgrenet 15 C-O-alkylgruppe med 1-6 C-atomer i alkylkæden, som ovenfor defineret.

Forbindelserne med formlen I er anvendelige både i fri baseform og i form af syreadditionssalte.

Begge former ligger inden for opfindelsens område. I 2Q praksis svarer anvendelse af saltformen til anvendelse af baseformen. Egnede farmaceutisk acceptable salte inden for opfindelsens område er dem, der er afledt af mineralsyrer, såsom saltsyre og svovlsyre, og organiske syrer, såsom ethansulfonsyre, benzensulfonsyre eller 25 p-toluensulfonsyre, hvorved dannes henholdsvis hydro-chloridet, sulfamatet, ethansulfonatet, benzensulfonatet eller p-toluensulfonatet.

Syreadditionssaltene af nævnte basiske forbindelser fremstilles enten ved at opløse den frie base i vandig 2Q eller vandig-alkoholisk opløsning eller andre egnede opløsningsmidler indeholdende den ønskede syre og isolere saltet ved inddampning af opløsningen, eller ved at omsætte den frie base og syre i et organisk opløsningsmiddel, i hvilket tilfælde saltet udskiller direkte eller kan vindes ved koncentrering af opløsningen.

35

DK 159855 B

5

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indeholde et asymmetrisk carbonatom ved det carbonatom, der forbinder grupper A, Ar, Ar1 og X, når Ar og Ar1 er forskellige. Opfindelsen opfatter de individuelle enantiomere, den 5 rene S-, den rene R-isomere og blandinger deraf. De individuelle enantiomere kan fremstilles eller isoleres ved i og for sig kendte metoder.

En foretrukket udførelsesform for den foreliggende opfindelse omfatter en forbindelse med formlen I, hvor 10 X er hydrogen eller methyl, R21 og R^' er hydrogen, acetyl, benzoyl eller tilsammen danner isopropyliden, og Rg' er hydrogen eller (PO^ ) °9 Ar °9 er som ovenfor defineret.

En anden foretrukket udførelsesform for den fore-15 liggende opfindelse er en forbindelse med formlen I, hvor i R2', ', R5' og X er hydrogen, og A, Y, Ar og Ar er som ovenfor defineret, idet A fortrinsvis er ligekædet alky- len med 1-4 C-atomer, navnlig methylen, og Ar og Ar fortrinsvis er phenyl.

20 Særlige udførelsesformer omfatter N -(2,2-diphe- 6 nylethyDadenosin, N -(2,2-diphenylethyl)-2-chloradeno- 6 6 sin, N -(2,2-diphenylethyl)-2-aminoadenosin, N -(2,2-di- g phenylpropyl)adenosin og N -(3,3-diphenylpropyl)adenosin. Forbindelserne med formlen I kan hensigtsmæssigt 25 syntetiseres ved at omsætte et 6-halogenpurin-ribosid med formlen II med den pågældende diarylalkylamin med formlen III i‘et indifferent opløsningsmiddel, såsom alkohol, eller et aprotisk opløsningsmiddel, såsom dimethyl formamid, mellem ca. 25 og ca. 130°C i 1-48 timer.

30 Det er hensigtsmæssigt at tilsætte en base, såsom triethylamin eller calciumcarbonat, for at neutralisere det som biprodukt ved reaktionen dannede hydrogenhaloge-nid, men dette kan også ske ved at anvende et ekstra

DK 159855 B

6 ækvivalent af arylalkylaminen. Det er også hensigtsmæssigt, men ikke nødvendigt, at beskytte ribofuranosehydro-xylgrupperne som acetat- eller benzoat-estre, der kan fjernes med ammoniumhydroxid eller natriummethoxid efter g 5 syntesen af den N -substituerede adenosin. Reaktionen er illustreret nedenfor:

Hal Y N N Ar + —* 1 β°ΊκΝ

15 H

BO OB

II

hvor B er H, acetyl eller benzoyl, Hal er halogen, for-20 trinsvis chlor eller brom, og Y, Ar, Ar^, X og A er som defineret for formlen I.

Endvidere kan forbindelser med formlen I, hvor Y er amino, også fremstilles ud fra 2,6-dichlorpurin-ribo-sid-triacetat med formlen IV ved en trinvis metode, ved 25 først at omsætte en forbindelse med formlen IV med den pågældende diphenylalkylamin med formlen III til dannelse af en forbindelse med formlen V, hvorefter chlor-atomet ved C2 erstattes med Y-aminogruppen ved anvendelse af nucleofile deplaceringsbetingelser, og acetat-beskyt-30 telsesgrupperne fjernes, som nedenfor illustreret:

DK 159855 B

7

Cl

-N

s . „!>[—*·"! --

Λ X

AcO-L^°\

Ni_i?* IH

AcO OAc 10

IV

Ar h^A— I Ar1 j071

ClASAs Y-H NH4OH

--^ -1 —^ I

•λ ^ Base AC°

20 |W

AcO OAc

V

25 Forbindelserne med formlen I har scan nævnt vist sig at have afvigende affiniteter for adenosin-receptorer (betegnet A·^- og A2-receptorer) . Forbindelserne er aktive ved dyreforsøg, der forudsiger neuroleptisk aktivitet til behandling af alvorligere psykoser, såsom schizofreni, 30 Forbindelserne ifølge opfindelsen har også sedative/hyp-notiske egenskaber og er derfor anvendelige til behandling af søvnforstyrrelser. De omhandlede forbindelser har også analgetiske egenskaber og er på dette grundlag anvendelige til behandling af smerte.

35 Endvidere er forbindelserne ifølge opfindelsen an vendelige som antihypertensive midler til behandling af højt blodtryk. De forøger også coronarblodstrøm og er derfor anvendelige ved behandling af angina og myocardial ischaemi*

DK 159855B

8

Farmakologisk vurdering

Adenosin-receptorbinding - ΑΊ-receptoraffinitet (RBAl)

Fremstilling af membraner

Hel hjerne minus cerebellum og hjernestamme fra 5 Long Evans hanrotter (150-200 g) blev homogeniseret i 30 volumen iskold 0,05M Tris-HCl-puffer pH 7,7 under anvendelse af en Brinkman Polytron PT-10 (indstillingsnummer 6 for 20 sekunder) og centrifugeret i 10 minutter ved 20.000 x g (Sorvall RC-2), 4°C. Overstanden blev bortka-10 stet, og den vundne pellet blev gensuspenderet og centrifugeret som ovenfor. Den vundne pellet blev gensuspenderet i 20 ml Tris-HCl-puffer indeholdende to Internationale Enheder /ml af adenosin-deaminase (Sigma type III fra kalvetarm-mucosa), inkuberet ved 37°C i 30 minutter 15 og derefter ved 0°C i 10 minutter. Homogenatet blev igen centrifugeret, og den endelige pellet blev gensuspenderet i iskold 0,05M Tris-HCl-puffer pH 7,7 til en koncentration på 20 mg/ml oprindelig våd vævsvægt og straks anvendt.

20 Prøvebetingelser Vævshomogenat (10 mg/ml) blev inkuberet i 0,05M Tris-HCl-puffer pH 7,7 indeholdende 1,0 nM [^H]-N^-cyclo-hexyladenosin ([ H]-CHA) med eller uden testmidler in triplo i én time ved 25°C. Inkubationsvolumen var 2 ml.

3 25 Ikke-bundet [ H]-CHA blev fraskilt ved hurtig filtrering ved reduceret tryk gennem Whatman-glasfiber(GF/B)-filtre. Filtrene blev skyllet tre gange med 5 ml iskold 0,05M Tris-HCl-puffer pH 7,7. Den på filtret tilbageholdte radio-mærkede ligand måltes ved væske-scintillations-30 spektrofotometri efter rystning af filtrene i én time eller længere på en mekanisk ryster i 10 ml Beckman Ready -Solv HP-scintillationscocktail.

DK 159855 B

9

Beregninger

Ikke-specifik binding blev defineret som den binding, der forekom i nærværelse af 1 mM theophyllin. Den koncentration af testmidlet, der inhiberede 50% af den 5 specifikke binding (ICj-q)r blev bestemt ved ikke-lineær computerkurvetilpasning. Scatchard-plottet blev beregnet ved lineær regression af den linie, der blev opnået ved at optegne mængden af bundet radioligand (pmol/g væv) 10 versus ‘^irfradloliglnd31' Da ***!*<** af bundet radio- ligand var en lille fraktion af den totale tilsatte mængde, blev fri radioligand defineret som koncentrationen (nM) af radioligand tilsat til inkubationsblandingen. Hill-koefficienten blev beregnet ved lineær regression af den linie, der blev opnået ved at optegne log af bun- dat radioligand versus log af max 3

Det maksimale antal bindingssteder (B_a„) blev be-

XtlciX

regnet ud fra Scatchard-plottet.

20

Adenosin-receptorbinding - A0-Receptoraffinitet (RBA2) Vævs-fremstilling

Hjerner fra Sprague-Dawley-rotter af begge køn og med en vægt på 200-500 g blev indkøbt fra Pel-Freez 25 (Rogers, Arkansas). Friske hjerner fra Long Evans hanrotter, hvide med sort hoved (Blue Spruce Farms, Alta-mont, NY) gav i det væsentlige identiske resultater.

Hjerner blev optøet og derefter holdt på is, mens striata blev uddissekeret. Striata blev opsplittet i 10 vol is-30 kold 50 nM Tris-HCl (pH 7,7 ved 25°C, pH 8,26 ved 5°C) (Tris) i 30 sekunder i en Polytron PT-10 (Brinkmann) ved indstilling 5. Suspensionen blev centrifugeret ved 50.000 x g i ti minutter, overstanden blev bortkastet, den vundne pellet blev gensuspenderet i 10 vol iskold 35 Tris som ovenfor, gencentrifugeret, gensuspenderet ved 1 g/5 ml og lagret i formstof-medicinflasker ved -70°C (stabilt i mindst seks måneder). Efter behov blev væv

DK 159855 B

10 optøet ved stuetemperatur, opsplittet i en Polytron og holdt på is indtil anvendelse.

Inkubationsbetingelser 5 Alle inkubationer foregik i 60 minutter ved 25°C i 12 x 75 mm glasrør indeholdende 1 ml Tris med 5 mg oprin- 3 delig vævsvægt af rotte-striatalmembraner, 4 nM [ H]-N- ethyladenosin-51-carboxamid ([^H]NECA), 50 nM N^-cyclo- pentyladenosin (for at eliminere A^-receptorbinding), 10 10 mM MgCl9, 0,1 enheder/ml af adenosin-deaminase og 1% di-^ 6 methylsulfoxid. N -Cyclopentyladenosin blev opløst ved 10 mM i 0,02N HCl og fortyndet i Tris. Lageropløsninger g og fortyndinger af N -cyclopentyladenosin kunne lagres ved -20°C i flere måneder. Testforbindelser blev opløst 15 ved 10 mM i dimethylsulfoxid på samme dag som forsøget og fortyndet i dimethylsulfoxid til 100 x den endelige inkubations-koncentration. Kontrol-inkubationer fik samme volumen (10 μΐ) dimethylsulfoxid. Den resulterende koncentration af dimethylsulfoxid havde ingen indvirkning på 20 binding. [^H]NECA blev fortyndet til 40 nM i Tris. Membransuspensionen (5 mg/0,79 ml) indeholdt tilstrækkeligt MgCl2 og adenosin-deaminase til at give henholdsvis 10 mM og 0,1 enhed/ml slutkoncentration i inkubationen. For testforbindelser med ICg^-værdier mindre end 1 μΜ var 25 tilsætningsrækkefølgen testforbindelse (10 μΐ), N^-cyclo- 3 pentyladenosin (100 μΐ), [ H]NECA (100 μΐ) og membraner (0,79 ml). For testforbindelser med IC^Q-værdier større end 1 μΜ og begrænset vandopløselighed var tilsætningsrækkefølgen (samme voluminer) testforbindelse, membraner, 6 3 30 N -cyclopentyladenosin og [ H]NECA. Efter alle tilsætninger blev rørstativet udsat for en hvirvlende bevægelse, og rørene blev derefter inkuberet i 60 minutter ved 25°C i et vandrystebad. Rørstativet blev udsat for en hvirvlende bevægelse endnu en gang halvvejs gennem inkubatio-35 nen.

Inkubationer blev afsluttet ved filtrering gennem 2,4 cm GF/B-filtre ved reduceret tryk. Hvert rør blev i 11

DK 159855 B

filtreret son følger: Rørets indhold blev hældt på filtret, 4 ml iskold Tris blev tilsat til røret, og indholdet blev hældt på filtret, og filtret blev vasket to gange med 4 ml iskold Tris. Filtreringen var færdig i 5 løbet af ca. 12 sekunder. Filtre blev indført i scintil-lations-medicinflasker, 8 ml Formula 947 scintillations-væske blev tilsat, og flaskerne blev henstillet natten over, rystet og talt i en væskescintillationstæller ved 40% effektivitet.

10

Data-analyse

Ikke-specifik binding blev defineret som binding i g nærværelse af 100 yM N -cyclopentyladenosin, og specifik binding blev defineret som total binding minus ikke-spe-15 cifik binding. IC^q blev beregnet ved vægtet ikke-lineær kurvetilpasning efter mindste-kvadrater til massevirkningsligningen .

Y “ T - s' rHhc 20 hvor: Y er cpm bundet T er cpm total binding uden lægemiddel S er cpm specifik binding uden lægemiddel D er koncentrationen af lægemiddel 25 K er IC^q for lægemidlet.

Vægtede faktorer blev beregnet under den forudsætning, at standardafvigelsen var proportional med forvenfc-ningsværdien af Y. Ikke-specifik binding blev behandlet 30 som en meget stor (uendelig) koncentration af lægemiddel i computer-analysen.

IC50“Værdierne (nM) for adenosin A·^ og A2~recep-toraffinitet er anført i tabellen.

35

DK 159855 B

12

Antipsykotisk vurdering

Forbindelserne ifølge opfindelsen er hidtil ukendte kemiske forbindelser, der er anvendelige som farmaceutiske midler ved behandling af psykoser. Den antipsy-5 kotiske aktivitet af repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen blev påvist ved Muse-aktivitets- og Screen-test-metoden (MAST) beskrevet nedenfor.

Dyr 10 Ni ikke-fastede Swiss-Webster hanmus med en vægt på 20-30 g blev opdelt i tre lige store grupper for hver lægemiddeldosis, der skulle testes. Det vil sige, at data for hvert dosisniveau blev produceret af tre separate grupper hver på tre mus.

15 Lægemidler

Et minimum på tre dosisniveauer (10, 30 og 100 mg/ kg) blev testet for hvert lægemiddel. Behandlinger foregik intraperitonealt én time før testning. Alle doser 20 blev beregnet som stamforbindelse og givet i voluminer på 10 ml/kg. Forbindelser blev opløst eller suspenderet i 0,2% Methocel. Kontroldyr fik injektion med Methocel.

Testning 25 En testnings-metode i to dele blev startet én time postinjektion. Først udførtes screentesten (ST) (se Pharmac.Biochem.Behav. 6^ 351-353, 1977) . Denne test består kort i at anbringe mus på individuelle trådgitre, der derefter roteres 180 grader ved starten af en 60 se-30 kunders observationsperiode. Antallet af mus, der falder af det omvendte gitter, registreres.

Straks efter screentesten indledes testningens slutfase ved at anbringe hver gruppe på tre mus i ét actofotometer (Life Sciences, 22, 1067-1076, 1978). Acto-35 fotometeret består af et cylindrisk kammer, hvis midte er optaget af en anden cylinder, der indeholder belysnin-

DK 159855 B

13 gen for seks fotoceller anbragt på kammerets perimeter.

Seks lysstråle-afbrydelser svarer til én tælling. Loco-motorisk aktivitet registreres med computer med intervaller på 10 minutter i 60 minutter.

5

Data

De fra screentesten opnåede data blev udtrykt som procent af mus, der faldt fra gitteret. Data stammende fra locomotorisk aktivitet af lægemiddel-behandlede mus 10 blev sammenlignet med aktiviteten af vehikel-behandlede dyr og udtrykt som procent hæmning af spontan locomotion.

Alle procenter, der blev rapporteret for hæmning af locomotion (LI), er baseret på data opsamlet i én time.

Begge testningsfaser har følgende klassificering: 15 A = 60-100%, C = 31-59% og N = 0-30%. En samlet dosisklassificering er opnået efter følgende kriterier: Hæmning af Screentest-svigt, Dosis- locomotion, med klassifioeri klassifi- klassificering 3 = cenng on

A N eller C = A

A - A = C

C N eller C = C

Alle andre kombinationer = N

25 LAD refererer til den laveste dosis, ved hvilken en A-klassificering opnås. Forbindelser, der udviser en samlet dosis-klassificering på A ved en dosis på 100 mil·· ligram/kilogram eller mindre, betragtes som aktive. Ved 30 anvendelse af denne metode blev en samlet dosis-klassificering på A opnået for den anførte forbindelse ved den anførte dosis. Forbindelserne er identificeret i eksemplerne.

Ί 4

DK 159855 B

. Hæmning af loco- Hæmning af Eksempel , ,, , motorisk aktivi- screentest- img/ g; ^.e^. mus svigt 1 10 92% 11% 5 30 93% 22% 100 94% 44% 2 10 -9% 0% 30 13% 0% 10 100 60% 0% 3 10 56% 0% 30 85% 11% 100 92% 44% 4 10 64% 0% 15 30 87% 11% 100 95% 22%

Repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen 20 (identificeret i eksemplerne) blev også testet for anti-psykotisk aktivitet efter følgende protokol (SIDR). Den anførte forbindelse har de anførte ED^-værdier (mg/kg) og betragtes som aktiv som et antipsykotisk middel ved test-metoden.

25

Metode

Modne Long-Evans hanrotter eller dødningehovedaber blev konditioneret til at trykke på en løftestang for at undgå et smertefuldt elektrisk fodchok. Hvis dy-30 ret undlader at trykke på løftestangen, får det et chok hver 10 sekunder, indtil der trykkes på stangen. Chok kan afsluttes ved at trykke på stangen. Derefter vil der ikke forekomme noget chok, så længe stangen trykkes mindst én gang hver 20 sekunder.

35 Hvert dyr fungerer som sin egen kontrol. En ugent lig session anvendes til at etablere en basislinie-ad-færd, og en anden session senere i ugen anvendes som en

DK 159855 B

15 lægemiddel-session. Når der er etableret undvigemønstre, undersøges indvirkningerne af standardforbindelser og hidtil ukendte forbindelser.

•5 Respons-vurdering

Alle begivenheder blev programmeret elektronisk, og responsen på disse begivenheder blev talt og anvendt som feed-back til programmet.

10 Antihypertensiv vurdering (AHP3)

Anvendeligheden af forbindelserne ifølge opfindelsen som antihypertensive midler er påvist ved deres effektivitet ved farmakologiske standard-testmetoder, for eksempel til bevirkning af en signifikant sænkning af 15 arterielt gennemsnitsblodtryk hos ved bevidsthed værende rotte. Denne testmetode er beskrevet i det følgende.

Fremgangsmåde til direkte overvågning af a'ortisk blodtryk og hjerteha'stfqhed fra ved bevidsthed værende rotter 20 Den kontinuerte overvågning af pulsatilt blodtryk (BP) fra uhæmmede, ved bevidsthed værende rotter, der kirurgisk var udstyret med polyethylen-kanyler, foregik ved hjælp af et computer-assisteret data-opsamlingsskema (CADCS). Grundelementerne ved metodikken er kanylerings-25 metoden og CADCS.

Metode

Kanylerings-metode

Rotter blev bedøvet med Telazol (1:1 tiletamin-HCl 30 og zolazepam-HCl) 20-40 mg/kg IM, og den nedadgående aorta blev lagt blot ved et midtliniesnit. Kanyler fremstillet af polyethylenrør blev indført i aorta via et underdimensioneret punkturhul under nyre-arterierne. Punkturhullet blev lavet med en efter brug bortkastelig 35 23 G-nål, idet en sektion af aorta var strammet væk over og under punkturstedet. Kanylerne, bestående af et PE100-legeme (0,86 mm ID) og en PE50-spids (0,58 mm ID), blev

DK 159855 B

16 forbundet til et trocar, indført gennem psoas-musklen, og ledt subcutant langs midtlinien af ryggen og bragt ud mellem ørerne. Kanylerne blev forankret til psoas-musklen og mellem scalulae (3-0 grønflettet sutur). Midtlinie-5 snittet blev lukket i to trin (først muskel, derefter hud) under anvendelse af kontinuerte over- og -oversuturer (4-0 kronisk). Hver rotte fik derefter penicillin 30.000 enheder subcutant (steril suspension af penicillin G-procain).

10 Rotterne blev udstyret med et fjeder-bøjle-system beregnet til at beskytte kanylen og give rotten relativ bevægelsesfrihed. Seletøjet var fabrikeret af hægte-og-øsken-nylonbånd bundet til en metalplade, hvortil fjedertråde (18-8 rustfrit stål) var forbundet ved messingbøj-15 ler. Hver polyethylenkanyle var ledt gennem en fjeder og gennem en bøjle forbundet til en tryk-tranduktor (Model P23Gb, Statham Instruments, Hato Rey, Puerto Rico) og en infusionspumpe (sage-model 234-7, Orion Research, Cambridge, MA) ved hjælp af PE100-rør. Under testning fik 20 hver rotte en kontinuert langsom infusion af heparinise-ret saltopløsning (ca. 400 μΐ eller 40 enheder heparin pr.

24 timers periode) for at hindre blodpropdannelse. Yderligere "skylninger" af kanylen med hepariniseret saltopløsning blev foretaget, når det aortiske pulstryk (systo-25 lisk minus diastolisk) var mindre end 25 mm Hg.

CADCS

Det pulsatile blodtryk og hjertehastighed hos hver af 32 rotter blev overvåget hvert minut ved hjælp af to 30 laboratorie-mikrocomputere, der kommunikerede direkte med en datakoncentratorcomputer. Data blev først lagret på datakoncentratorpladen og derefter overført til et magnetbånd til analyse og rapportfrembringelse ved hjælp af research-hovedcomputeren. Det samlede skema indebar modu-35 lering af det primære signal fra tryktransduktoren, frembringelse af det primære datasæt af ét-minuts-værdierne for systolisk, diastolisk og middelblodtryk og hjerte-

DK 159855 B

17 hastighed ved hjælp af laboratorie-mikrocomputeren og lagring, analyse og rapportfrembringelse ved hjælp af research-hovedcomputeren.

Transduktorerne var forbundet til analogsignal-5 konditioneringsmoduler. Modulerne tilvejebragte en reguleret excitationsspænding for transduktorerne, forstærkning som ønsket for grænsefladedannelse hos mikroprocessorerne og et aktivt lavpassagefilter for at kompensere for den af den fleksible, væskefyldte, snævre kanyle 1Q frembragte forvrængning af trykbølgeformen. Forvrængningen var 22-26 Hz, og dette gav en pålidelig vurdering af både systolisk og diastolisk blodtryk.

Mikrocomputerne (én til hver af to grupper på 16 rotter) var forbundet til input-komponenterne gennem mo-15 dulgrænsefladeenhederne, en analog-til-digital-omformer for trykbølgeformsignalet og digital-input'ene for dosis-og begivenhedsmarkør-kontakterne. Mikrocomputeren styrede den sekventielle modtagelse af data fra modulgrænse-fladeenhederne gennem en intern synkronftid-på-dagenrur/ 20 tidsbasisgenerator. Ved at anvende tidsbasisgeneratoren som reference blev der taget prøver af blodtrykværdierne og markørafbrydningsstatus for hver af de 32 stationer hver ti msek. Mikrocomputeren bearbejdede hver blodtryksprøve, når den blev modtaget, for at frembringe "stadige 25 gennemsnits"-værdier for hjertehastighed og middel-, systoliske og diastoliske blodtryk.

Ved testning ved ovennævnte metode frembragte forbindelserne ifølge eksemplerne 1 og 3 de følgende ændringer i MAP og hjertehastighed.

30 ____;..................................

Eksempel 1 mg/kg My.c.-l· HR+ 1 16% <20% 3 20% <20% 10 20% < 20% 35 3Q 35% <20%

Eksempel 3 10 15% < 20%

DK 159855 B

18 LAD refererer til den laveste testede dosis, ved hvilken der blev opnået en reduktion >10% i blodtryk for fire på hinanden følgende timer.

5 Coronar blodstrømning (PCS2A)

Metode

Hanrotter (400-600 g) blev forbehandlet med Na-he-parin 2000 enheder og bedøvet med Na-pentobarbital (50 mg /kg) indgivet intraperitonealt. Efter at være bedøvet 10 blev rottens hjerte hurtigt fjernet, den opadstigende aorta tilpasset til den aortiske perfusionskanyle og sikret med en ligatur. Coronar-arterierne blev indledningsvis perfuseret ved en hastighed på ca. 15 ml/min. i to til tre minutter, hvorefter de blev perfuseret ved 15 konstant tryk på 70 mm Hg og en temperatur på 37°C.

Elektrocardiogrammet (ECG) blev registreret under anvendelse af to platinelektroder anbragt ved bund og top af venstre ventrikel. Et andet hjerte blev fjernet, kanyleret og perfuseret på samme måde som ovenfor beskrevet.

20 Begge hjerter blev testet parallelt. Den fysiologiske standardsaltopløsning (PSS) var en modificeret Krebs-Hanseleit-bicarbonatpuffer med følgende sammensætning i mM koncentration: NaCl: 127, NaHCC^: 25, dextrose: 5,5, Na-pyruvat: 2,0, KDl: 4,7, MgSO^: 1,1, ΚΗ2ΡΟ^: 1,2, 25 CaCl2,2H20: 2,5, CaNa2EDTA: 0,05.

En 30 minutters stabiliseringsperiode hlev observeret forud for start af testprotokollen.

Mikroprocessor-styret corongct perfusions- og lasgemiddel-30 tilførsels-system

Mikroprocessor-overvågningssystemet er en servo-mekanisme, der tillader, at coronart perfusionstryk (CPP) og lægemiddelkoncentration holdes konstante, uafhængige af ændringer i coronar strømning. Det niveau, ved hvilket 35 CPP og lægemiddelkoncentration holdes, kan ændres ved ordrer kommunikeret gennem mikroprocessor-tastaturet. Dosis-respons-kurver frembringes ved at perfusere kon-

DK 159855 B

19 centreret lægemiddelopløsning (DC) ved hastigheder proportionale med total coronar strømning (CFT). Lægemiddelkoncentrationer forøges ved afpassede forøgelser af hastigheden af DC-infusion over CF^ via mikroprocessor-ta-5 staturet. De forholdsmæssige strømningshastigheder for DC:CFT er ca. 0,0002:1 ved den lave ende og 0,02:1 ved den høje ende af dosis-respons-kurven. Dosis-respons-kurver omfattende mindst to log-doser gennemføres ved at fremstille to DC'er med en koncentrationsforskel på 1:100.

1Q Efter det første dosisområde med to log-doser afbrydes DC, proportional pumpehastighed indstilles, og dosis-respons-kurven fortsættes for yderligere to log-doser. Dosis-respons-standardkurven frembringes med dosisstigninger på en halv log startende ved en subtærskeldosis 15 og afsluttende ved en dosis, der frembringer næsten maksimal respons i aktivitet. Reference-standardforbindel- . -9 -6 ser testes over omradet fra 10 til 10 M.

Målinger 20 Målinger gælder hjertehastighed (HR) og coronar strømning (CF). Enheder er: HR: slag/minut (bpm) og CF: milliliter/minut (ml/min.). HR beregnes ud fra ECG-strim-meldiagram-registrering, og CF beregnes ved at registrere analog-output fra pumper 1 og 2. Output fra pumpe Nr.l = 25 CFT og output fra pumpe Nr.2 = CF for hjerte B (CFg). CF for hjerte A (CF^) beregnes (CF^-CFg = CF^)·

Ved anvendelse af ovennævnte teknik var virkningerne af forbindelsen ifølge eksemplerne 1 og 2 følgende: 30 Eksempel 1 Eksempel 2

Dosis (Molær) CF HR CF HR

1 x 10"9 7% 1% 3 x 10“9 15% 3% 1 x 10”8 32% -1% 26% -2% 1 x 10”7 43% -13% 42% -5% 1x10 ° 50% -47% 47% -19% 3 x 10"6 4.8% -34% •20

DK 159855 B

Analgetisk vurdering

Antivridnings(AW)-testen giver præliminær vurdering af forbindelser med potentiel analgetisk aktivitet. Testen gennemføres på Swiss-Webster hanmus. Forbindelser 5 indgives subcutant i vandig 0,2% methylcellulose eller andre egnede vehikler i voluminer på 10 ml/kg. Doser repræsenterer aktiv del.

Eddikesyre (0,6%, 10 ml/kg) injiceres intraperito-nealt 20 minutter efter indgift af adenosin-agonisten.

10 Vridningsbevægelser tælles i fem minutter startende syv minutter efter eddikesyreinjektionen. Vridning defineres som abdominal konstriktion og strækning af kroppen og bagbenene med konkav krumning af ryggen. Data udtrykkes som ED5Q-værdier, hvor ED^q er den dosis, der er nødven-15 dig for at undertrykke vridning med 50% i forhold til vehikel-kontroldyr. ED-værdier beregnes ved ikke-line-ær regressionsanalyse.

De biologiske data er samlet i tabellen.

Den foreliggende opfindelse omfatter følgelig også 20 en farmaceutisk komposition til behandling af psykoser, søvnforstyrrelser, smerte, hypertension eller angina indeholdende en tilsvarende antipsykotisk, sedativ, analgetisk, antihypertensiv eller antianginal, effektiv mængde af en forbindelse med formlen I som ovenfor defi-25 neret sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer.

21

DK 159855 B

Λ , bC Λ 4ί oo . in

» “1 0) SC

< '-s 'C © 4J

e *P

A QJ

q Π3 w in --+j

_ M

< I ' sr 0 cm a — — a <n η t OT6b— o — Ο O © ^-1 U ϋ k k ·« ·« v—^ cu c — n©*-omo © © © © ir n A V -*

U A

W

__οε x < a PS *— — «* (/3 OC - t, ·* OSCpsooo«— <n<n —i m o ri

0- IT f*l A A A — A

O A A

W

*>*« « ( . m w Η Ο-α,Β — Ο©©©©© OOOO OG C 7 m sew — — —« — — — 30

r\ < ^ A A a A

+>5 5 _J______

r—I

n $

H QJ

φ k fl in sc eo «e <6 p-* Λ, t O w ·* k s ·* «V s

-F h- fN © O A CC <M

ιί w ” ° -

Eh 0) o +j _“__οε Q) λ: « > in <

. i HMOOOOOOOOOOOOOOO

Si <&·£ °°OCIC,002OOOOOOC

q Χ^ΑΑΛΑΛΑΑ ΑΑΛΑΑΛΑ o _*_ H — Μ o 41 51

H Wr-iO.OOOOOOinOOA — OO

co μ β © — — © © -* .^ «nm — O

< *J w -- — v| — x © 5 Έ ps — *^O^A©© — r*. — ©ΡΛ-d· © —! s^9\<^r^pS9\«^ — r«.— Ο© (i> ·— eo © r"> — ps a pn ps (*> ρλ □2 a σχ (n

O

_-__01

X

c — — oxp^.oxoor-.vOA-^tyx^vO r-. pn

< — rn^QO— <· nD — — 'CO'— CS PS

£0 O — A — CS

OS A ©

rH

<D

ft

£ S

Φ — PS m ^iAsOr--OOONa^CsJt^<tu^ ^ r- r- <r- T- s-

.H

« « , l 22

DK 159855 B

^•N

be λ: be.

3 e ιΛ o u

^ X

«μ a. m

Hk- Ο Λ O U ·» -s euc«n © © © -* <n <n — , W Λ - A A Λ Ο Λ P3

X

< 3

cm m fS

co os s ·* U5C <n r> *n © © — «η es

a« * A Λ Λ — I

U /\

M

/"v be ji •N*.

tn be a. a. e oooooo ο ο o S D V .»to — to· *rf ·· *« - to» < Λ Λ Λ Λ

C

<

toJ

bC

.* te oc S «η Q w ·*

W O M

U*> © u i tt J* ' *- wooooooooooooo C0HeOmnOOOOmOOO<n© < Wv — /\ Ϊ ^ A A A Λ AAA Λ.

Ο «<

J

tt "-to.

Η ttOOoOO — <no«noOfn, ο co >-* Ε Ο «η «— ο «η m —» «η ν| m < «J ν - λ — * Ω < m3

X

c-j ·— fnQ*cø\©-Tcno%eooQø» < -MCMmU"ir-»9iOtO<£<4’CMCM<^ cd ο r·«. — νη <r cs >ο co C0 ? σ* oc iη cg «τ cn © Ο torf *χ c _ «sitn-rf 9itrtesjo\ov«noo cm < — evirgiMco — *ΰΓ^ιΛ«ηο ·»

βΟιΛ^ν tM CM CM σ' CM

tf Λ - — O

υ η

I—I

(D

&

S

0) θΓ^αοσΝθί-£ΜΓΛ<ΐ·ΐΛνθΓ^α3 W ϊ-ί-τ- t-NNNN Ν Ν Ν Ν Ν Η

DK 159855 B

23

Til fremstilling af farmaceutiske kompositioner ud fra de omhandlede forbindelser kan indifferente farmaceutisk acceptable bærere enten være faste eller flydende. Præparater i fast form omfatter pulvere, tabletter, dis-5 pergerbare granuler, kapsler, oblatkapsler og suppositorier. En fast bærer kan bestå af ét eller flere stoffer, der også kan fungere som fortyndingsmidler, smagsstoffer, opløselighedsfremmende midler, smøremidler, suspenderingsmidler, bindemidler eller tabletdisintegrationsmid-10 ler. Den kan også være et indkapslende materiale. I pulvere er bæreren et findelt fast stof, der foreligger i blanding med findelt aktiv forbindelse. I tabletter er den aktive forbindelse blandet med en bærer med de nødvendige bindemiddelegenskaber i passende blandingsfor-15 hold og komprimeret i ønsket form og størrelse. Pulvere og tabletter indeholder fortrinsvis fra 5 eller 10 til ca. 70% af den aktive bestanddel. Egnede faste bærere er magnesiumcarbonat, magnesiumstearat, talkum, sukker, lactose, pectin, dextrin, stivelse, gelatine, tragacanth, 20 methylcellulose, natriumcarboxymethylcellulose, en lavt-smeltende voksart eller kakaosmør. Angivelsen "præparat" skal omfatte kompositioner af den aktive forbindelse med indkapslende materiale som bærer under tilvejebringelse af en kapsel, hvori den aktive komponent 25 (med eller uden bærere) er omgivet af bærer, der på denne måde er kombineret med den. Tilsvarende er omfattet oblatkapsler. Tabletter, pulvere, oblatkapsler og kapsler kan anvendes som faste dosisformer egnede til oral anvendelse.

24

DK 1598S5B

Til fremstilling af suppositorier bliver en lavt-smeltende voksart, såsom en blanding af fedtsyreglyceri-der eller kakaosmør, først smeltet, og den aktive bestanddel dispergeres homogent deri ved omrøring. Den 5 smeltede homogene blanding hældes derefter i forme af passende størrelse, henstilles til afkøling og dermed størkning.

Flydende præparatformer omfatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Som eksempel kan nævnes vand 10 eller vand/propylenglycol-opløsninger til parenteral injektion. Flydende præparater kan også tilvirkes som opløsning i vandig polyethylenglycolopløsning. Vandige opløsninger egnede til oral anvendelse kan fremstilles ved at opløse den aktive komponent i vand og tilsætte egnede 15 farvningsmidler, smagsstoffer, stabiliseringsmidler og fortykningsmidler, som Ønsket. Vandige suspensioner egnede til oral anvendelse kan fremstilles ved at disper-gere den findelte aktive komponent i vand med viskost materiale, dvs. naturlige eller syntetiske gummiarter, har-20 pikser, methylcellulose, natriumcarboxymethylcellulose og andre velkendte suspenderingsmidler.

Også omfattet er præparater i fast form, der er beregnet til kort før brug at blive omdannet til præparater i flydende form til enten oral eller parenteral anvendel-25 se. Sådanne flydende former omfatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Disse særlige præparater i fast form foreligger hensigtsmæssigt i enhedsdosisform og anvendes som sådanne til at tilvejebringe en enkelt flydende dosisenhed. Alternativt kan der leveres tilstrækkeligt 30 fast stof til efter omdannelse til flydende form at få mange individuelle flydende doser ved opmåling af forud fastlagte voluminer af det væskeformige præparat, såsom med en sprøjte, en teske eller en anden målebeholder.

Hvis der på denne måde fremstilles flere flydende doser, 35 foretrækkes det at holde den ikke benyttede del af de flydende doser ved lav temperatur (dvs. under afkøling) for at forhale eventuel dekomponering. De faste præparat-

DK 159855 B

25 former beregnet til at blive omdannet til flydende form kan foruden det aktive materiale indeholde f.eks. smagsstoffer, farvningsmidler, stabiliseringsmidler, puffere, syntetiske eller naturlige sødemidler, dispergeringsmidler, for-5 tykningsmidler eller opløsningsfremmende midler.

Den til fremstilling af det væskeformige præparat anvendte væske kan f.eks. være vand, isotonisk vand, ethanol, glycerol eller propylenglycol samt blandinger deraf.

Den anvendte væske vil blive valgt under hensyn til an-1Q vendelsesmåden, idet for eksempel flydende præparater indeholdende store mængder ethanol ikke er egnede til parenteral anvendelse.

Det farmaceutiske præparat foreligger fortrinsvis i enhedsdosisform. I sådan form bliver præparatet underop-15 delt i enhedsdoser indeholdende passende mængder af den aktive komponent. Enhedsdosisformen kan være et emballeret præparat, idet emballagen indeholder separate præparatmængder, for eksempel emballerede tabletter, kapsler, og pulvere i medicinflasker eller ampuller. Enhedsdosis-20 formen kan også være en kapsel, oblatkapsel eller tablet i sig selv, eller den kan være det passende antal af enhver af disse i emballeret form.

Mængden af aktiv forbindelse i en enhedsdosis af præparatet kan varieres eller indstilles fra 1 mg til 25 500 mg, fortrinsvis 5-100 mg alt efter den foreliggende anvendelse og styrken af den aktive bestanddel. Kompositionerne kan, om ønsket, også indeholde andre kompatible terapeutiske midler.

Ved terapeutisk anvendelse som ovenfor beskrevet 30 ligger dosisområdet til et pattedyr på 70 kg på fra 0,1 til 150 mg/kg legemsvægt pr.dag eller fortrinsvis 1 til 5Q mg/kg legemsvægt pr.dag. Doserne kan imidlertid varieres alt efter patientens krav, den behandlede tilstands alvor og den anvendte forbindelse.

35 Bestemmelse af den rette dosis for en bestemt situ ation ligger inden for fagmandens viden. I almindelighed indledes behandling med mindre doser, der er mindre end 26

DK 159855 B

den optimale dosis af forbindelsen. Derefter forøges dosen med små stigninger, indtil den optimale effekt under de foreliggende omstændigheder er nået. Det kan være hensigtsmæssigt at opdele den totale daglige dosis og indgi-5 ve den i portioner i dagens løb.

Opfindelsen beskrives nærmere gennem følgende eksempler .

Eksempel 1 6 10 N -(2,2-Diphenylethyl)adenosin.

En opløsning af 6-chlor-9-p-D-ribofuranosylpurin (11,47 g, 0,04 mol) og 2,2-diphenylethylamin (19,73 g, 0,10 mol, 250 mol%) i absolut ethanol (300 ml) blev opvarmet ved tilbagesvaling under nitrogen med magnetisk 15 omrøring i tre dage, i løbet af hvilket tidsrum udgangsmaterialet ifølge TLC-analyse (5/1 CHCl^/MeOH) blev forbrugt. Den afkølede reaktionsblanding blev inddampet i vakuum til et gummiagtigt skum, der blev opløst i ethyl-acetat. To portioner af krystaller vandtes og blev bort-20 kastet. Filtratet blev fortyndet med hexan, den resulterende olie blev fraskilt, og det tilbageværende blev ind^ dampet i vakuum til et hvidt skum. Hverken olien eller skummet krystalliserede godt af ethylacetat/hexan, ethyl-acetat alene eller ethanol/vand, men krystallisation af 25 kombinationen af olie og skum to gange af methanol gav g N -(2,2-diphenylethyl)adenosin som et hvidt fast stof, smp. 106,5-115°C (efter omkrystallisation af methanol). Analyse:

Beregnet for C24H25N5°4'0 ' 3H20: 30 C: 63,64, H; 5,71, N; 15,47, Cl: 0,00, H20: 1,19

Fundet: C: 63,97, H: 5,48, N; 15,48, halogen (ialt): 0,00, H20 (Karl Fisher): 1,44.

35

DK 159855B

27

Eksempel 2 N^-(3,3-Diphenylpropyl)adenosin.

En opløsning af 6-chlor-9-3~D-ribofuranosylpurin (2,87 g, 0,010 mol) og 3,3-diphenylpropylamin (5,28 g, 5 0,025 mol, 250 moll) 1 absolut ethanol (75 ml) blev opvarmet ved tilbagesvaling i 6 dage, i løbet af hvilket tidsrum udgangsmaterialet for størstedelen blev forbrugt ifølge TLC-analyse (5/1 CHCl^/MeOH). Opløsningen blev afkølet til 5°C, og den resulterende første og anden por-10 tion af hvide krystaller blev samlet, hvorved vandtes N^-(3,3-diphenylpropyl)adenosin, smp. 103-118°C (af absolut ethanol).

Eksempel 3 15 N6-(2,2-Diphenylethyl)-2-chloradenosin.

En blanding af 2,75 g triacetyl^2,6-dichlor-9-(β-D-ribofuranosyl)purin (M.J.Robins og B.Uznanski, Can.J.

Chem., 5S_, 2601 (1981), J.F.Gerster og R.K.Robins, J.Org.

Chem., 31, 3258 (1966)), 1,34 g 2,2-diphenylethylamin og 20 0,748.g triethylamin blev omrørt ved stuetemperatur under en nitrogenatmosfære i fire timer i 50 ml 1,2-dimethoxy- 4- ethan (destilleret over NaH). Bundfaldet af Et^N HC1 blev frafiltreret, og opløsningsmidlet blev fordampet fra filtratet ved inddampning til tørhed. Inddampningsresten 25 blev opløst i 50 ml methanol mættet med ammoniak og om-rørt ved stuetemperatur i tre timer. Blandingen blev inddampet til tørhed, og inddampningsresten blev renset ved mediumtryk-væskechromatografi på silicagel under anvendelse af 5% methanol i chloroform som elueringsmiddel. For-30 dampning af opløsningsmidlet fra de rene fraktioner gav et fast materiale, der blev krystalliseret af en blanding af chloroform/2-propanol (10:1) og· hexan, hvorved vandtes N^-(2,2-diphenylethyl)-2-chloradenosin, smp. 120-123°C.

Analyse: 35 Beregnet for C24H24N5°4C1: C: 59,81, H: 5,01, N: 14,53, Cl: 7,35 Fundet: C: 59,52, H: 5,20, N: 14,27, Cl: 7,05.

DK 159855B

28

Eksempel 4

C

N -(2,2-Diphenylethyl)-2-aminoadenosin.

En blanding af 1,25 g 6-chlor-2-amino-9-(β-D-ribo-furanosyl)purin, 0,899 g 2,2-diphenylethylamin og 0,503 g 5 triethylamin blev opvarmet ved tilbagesvaling i 30 ml absolut ethanol under en nitrogenatmosfære i 18 timer. Opløsningsmidlet blev fordampet ved inddampning til tørhed, og inddampningsresten blev behandlet med 50 ml koldt vand.

Det uopløselige organiske materiale blev frafiltreret, 10 tørret og renset ved mediumtryk-væskechromatografi på silicagel. Produktet blev elueret med 10% methanol/chlo-roform. Fordampning af opløsningsmidlet fra de rene fraktioner gav et farveløst fast materiale. Krystallisation af en blanding af CHCl-/2-propanol (10:1) og hexan gav 6 ^ o 15 N-(2,2-diphenylethyl)-2-aminoadenosin, smp. 134-137 C.

Analyse:

Beregnet for C24H26N6°4i C; 62,32, H: 5,66, N: 18,17 Fundet; C: 62,18, H: 5,53, N: 17,88.

20

Eksempel 5 N -(4,4-Diphenylbutyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 1, idet 4,4-diphenylbutylamin-25 hydrobromid anvendtes i stedet for 2,2’-diphenylethylamin, smp. 102-108°C.

DK 159855 B

2S

Analyse:

Beregnet for C26H29N5°4'0'6Η2^'03 C2HgO (ethanol); C: 63,88, H: 6,45, N; 14,00 Fundet: C: 63,92, H: 6,44, N: 13,99.

5

Eksempel 6 g N -(5,5-Diphenylpentyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som i Eksempel 1, idet 5,5-diphenylpentylamin-hydrosulfat 10 anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, og idet der som base anvendtes triethylamin, smp. 78-82°C.

Analyse:

Beregnet for C^H^NgO^^O: C: 63,43, H: 6,53, N: 13,70 15 Fundet: C: 63,43, H: 6,59, N: 13,75.

Eksempel 7

C

N -(2,2-Diphenylpropyl)adenosin.

En blanding af 6-chlor-9H3-D-ribofuranosylpurin 20 (2,32 g, 8,09 mmol), 2,2-diphenylpropylamin-hydrochlorid (2,01 g, 100 mol%) og triethylamin (2,3 ml, 204 mol%) i Ν,Ν-dimethylformamid (30 ml) blev omrørt under nitrogen ved stuetemperatur i 19 dage, filtreret, det faste stof blev vasket med ether, og filtratet blev inddampet til en 25 olie. Olien blev renset ved søjlechromatografi over sili- cagel, idet der blev elueret med 5/1 chloroform/methanol, og de rette fraktioner blev inddampet, hvorved vandtes 6 N-(2,2-diphenylpropyl)adenosin som et skum, der indeholdt et halvt mol N,N^dimethylformamid.

30 Analyse:

Beregnet for Ο^Η^Ν^Ο^,Ο, δΟ^Η^ΝΟ; C: 63,90, H; 6,18, N: 15,47 Fundet: C: 63,90, H; 6,07, N: 15,45.

35 6 30

DK 159855 B

Eksempel 8 N -(2-(3-Methylphenyl)-2-phenylethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 1, idet 2-(3-methylphenyl)-2-5 phenylethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethyl-amin, smp. 92-105°C.

Analyse:

Beregnet for : C: 65,06, H: 5,90, N: 15,17 10 Fundet: C: 65,49, H: 5,94, N: 14,38.

Eksempel 9 g N -(2-(4-Fluorphenyl)-2-phenylethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet som et brungult 15 skum i det væsentlige ved fremgangsmåden beskrevet i Eksempel 7, idet 2-(4-fluorphenyl)-2-phenylethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylpropylamin-hydrochlorid.

Analyse:

Beregnet for C24H24N5°4P'°'2H20! 20 C: 61,45, H: 5,25, N: 14,93

Fundet: C: 61,43, H: 5,41, N: 14,98.

Eksempel 10 g N -(2-(4-Fluorphenyl)-2-phenylethyl)-2-chloradenosin.

25 Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 3, idet 2-(4-fluorphenyl)-2-phe-nylethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, smp. 120-123°C.

Analyse: 30 Beregnet for C: 57,66, H: 4,63, N: 14,00, Cl: 7,09, F: 3,80

Fundet: C: 57,63, H: 4,92, N: 13,76, Cl: 6,95 F: 3,99.

35 g

Eksempel 11 31

DK 159855 B

N -(2-(4-Fluorphenyl)-2-phenylethyl)-2-aminoadenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 4, idet 2-(4-fluorphenyl)-2-5 phenylethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethyl-amin, smp. 127-130°C.

Analyse:

Beregnet for C24H25N6°4F'^'^H2®: C: 58,56, H: 5,38, N: 17,07, F: 3,86 10 Fundet: C: 58,95, H: 5,73, N: 16,62, F: 3,95.

Eksempel 12 g N -(2,2-Di-(4-fluorphenyl)ethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige 15 som beskrevet i Eksempel 1, idet 2,2-di-(4-fluorphenyl)-ethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, og der som base anvendtes triethylamin, smp. 75-80°C.

Eksempel 13 20 N^-(2-(3-Chlorphenyl)-2-phenylethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 1, idet 2-(3-chlorphenyl)-2-phenylethylamin-hydrochlorid anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, og idet triethylamin anvendtes som 25 base, smp. 107-110°C.

Eksempel 14 g N -(2-(4-Chlorphenyl)-2-phenylethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige 30 som beskrevet i Eksempel 1, idet 2-(4-chlorphenyl)-2- phenylethylamin-hydrochlorid anvendtes i stedet for 2,2^ diphenylethylamin, og idet triethylamin anvendtes som base, smp. 89-95°C.

35

. ' DK 159855 B

32

Eksempel 15 g N -(2-(4-Chlorphenyl)-2-phenylethyl)-2-aminoadenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 4, idet 2-(4-chlorphenyl)-2-phe-5 nylethylamin-hydrochlorid anveridtes i stedet for 2,2-di-phenylethylamin, smp. 134-137°C.

Analyse:

Beregnet for C^I^NgO^Cl, 0,6^0: C: 56,77, Es 5,20, N: 16,55 10 Fundet: C: 56,42, H: 4,99, N: 16,30.

Eksempel 16 g N -(2,2-Di-(4-chlorphenyl)ethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige 15 som beskrevet i Eksempel 1, idet 2,2-di-(4-chlorphenyl)-ethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, og idet triethylamin anvendtes som base, smp. 95-120°C.

Eksempel 17 g 20 N -(2,2-Di-(4-chlorphenyl)ethyl)-2-aminoadenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 4, idet 2,2-di-(4-chlorphenyl)-ethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, smp. 128-130°C.

25 Analyse:

Beregnet for C2å^L2A^6°4:C^2i C: 54,24, H: 4,55, N: 15,81, Cl: 13,34 Fundet: C: 54,21, H: 4,70, N: 15,55, Cl: 13,10.

30 Eksempel 18 g N -(2-(4-Methoxyphenyl)-2-phenylethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 1, idet 2-(4-methoxyphenyl)-2-phenylethylamin-hydrochlorid anvendtes i stedet for 2,2-35 diphenylethylamin, og idet triethylamin anvendtes som base, smp. 87-92°C.

g

Eksempel 19 33

DK 159855 B

N -(2,2-Di-(4-nitrophenyl)ethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 1, idet 2,2-di-(4-nitrophenyl)-5 ethylamin-hydrochlorid anvendtes i stedet for 2,2-diphe-nylethylamin, og idet triethylamin anvendtes som base, smp, 121-124°C.

Analyse:

Beregnet for C24H23N7°8: 10 C: 52,62, H: 4,40, N: 17,94

Fundet: C: 52,74, H: 4,42, N: 17,94.

Eksempel 20 g N -(2,2-Diphenylpropyl)-2-aminoadenosin.

15 Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 4, idet 2,2-diphenylpropylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, smp. 129-132°C.

20 Eksempel 21 N^-(2,2-Diphenyl-2-hydroxyethyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet som et bleggult skum, der indeholdt 0,3 mol dimethylformamid, i det væsentlige ved anvendelse af fremgangsmåden beskrevet i 25 Eksempel 7, idet 1,l-diphenyl-2-hydroxyethylamin-hydro-chlorid anvendtes i stedet for 2,2-diphenylpropylamin-hydrochlorid.

Analyse:

Beregnet for C24H24Ng05,0,3CgH^NO: 30 C: 61,60, H; 5,64, N: 15,30

Fundet: C: 61,30, H: 5,63, N; 15,09.

Eksempel 22 < g 34

DK 159855 B

N -(2,2-Diphenyl-2-hydroxyethyl)-2-aminoadenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 4, idet 2,2-diphenyl-2-hydroxy-5 ethylamin anvendtes i stedet for 2,2-diphenylethylamin, smp. 138-140°C.

Eksempel 23 g N -(2-Carbomethoxy-2,2-diphenylethyl)adenosin.

10 Titelforbindelsen blev fremstillet som en gul olie i det væsentlige ved fremgangsmåden beskrevet i Eksempel 7, idet 2-carbomethoxy-2,2-diphenylethylamin-hydrochlorid anvendtes i stedet for 2,2-diphenylpropylamin-hydrochlo-rid.

15

Eksempel 24 g 2', 31,5!-Tri-O-acetyl-N (2,2-diphenylethyl) adenosin.

g N -(2,2-Diphenylethy1)adenosin (4,6 g, 0,01 mol) og eddikesyreanhydrid (2,6 ml, 306 mol%) blev blandet med 20 pyridin ved stuetemperatur under nitrogen i 20 timer, og reaktionsblandingen blev inddampet i vakuum. Inddamp-ningsresten blev opløst i chloroform, vasket to gange med Vandig iskold 5% natriumcarbonat, og det organiske lag blev tørret (MgSO^) og inddampet i vakuum. Chromatografi 25 over silicagel, idet der blev elueret med 5/1 chloroform/ methanol, gav titelforbindelsen efter inddampning af de rette fraktioner i vakuum, smp. 75-80°C.

Analyse:

Beregnet for C3qH31N5°7: 30 C; 62,82, H: 5,45, N: 12,21

Fundet: C: 62,97, H: 5,57, N; 12,59.

Eksempel 25 g 2',3r,5'-Tri-O-benzoyl-N -(2,2-diphenylethyl)adenosin.

35 Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i Eksempel 24, idet benzoylchlorid anvendtes i stedet for eddikesyreanhydrid, smp. 60-75°C.

35

DK 159855 B

Eksempel 26 2^3^51 -Tri-O-acetyl-N^- (2,2-diphenylethyl) -2-chlor-adenosin.

En blanding af 2',31,51-tri-O-acetyl-2,6-dichlor-5 9-p-D-ribofuranosylpurin (5,25 g, 0,011 mol), 2,2-diphe-nylethylamin (2,55 g, 0,013 mol) og triethylamin (1,42 g, 0,014 mol) blev omrørt ved stuetemperatur i tør 1,2-di-methoxyethan (100 ml) i fire timer. Blandingen blev filtreret, og filtratet blev inddampet. Inddampningsresten 10 blev renset ved silicagel-chromatografi, idet der blev elueret med ethylacetat, og inddampning af de rette fraktioner gav titelforbindelsen, smp. 68-7l°C.

Analyse:

Beregnet for C30H30N5°7C1: 15 C: 59,26, H: 4,97, N: 11,51, Cl: 5,83

Fundet: C: 59,23, H: 5,09, N: 11,29, Cl: 5,88.

Eksempel 27 g N -(2,2-Diphenylethyl)adenosin-51-phosphat.

20 En blanding af trimethylphosphat (60 ml) og phos- phprylchlorid (1,8 ml) blev omrørt i flere minutter og derefter afkølet til 0°C. Hertil blev der sat N^-(2,2-diphenylethyl) adenosin (4 g). Efter seks timer ved 0°C blev blandingen sat til isvand (0,4 liter) og omrørt i 30 mi-25 nutter. Bundfaldet blev frafiltreret, og filtratet blev indstillet på pH 2 med vandig 1M natriumhydroxid. Sidstnævnte overførtes til en trækul-Celite-søjle (30 g hver) fremstillet som en vandig grød, og elueret først med vand (1 liter) og derefter med 50/2/48 ethanol/ammoniak/vand 30 (1 liter). Yderligere rensning over en Biobeads-søjle, idet der blev elueret med 4/1 methanol/vand, gav titelforbindelsen som natrium-ammoniumsalt (smp. 140-145°C dek.). Rensning af det indledende bundfald over Biobeads, som ovenfor beskrevet, gav titelforbindelsen som den frie sy-35 re (smp. 157-160°C).

DK 159855 B

36

Natrium-ammoniumsalt;

Analyse:

Beregnet for 0f51^0: C: 50,00, H: 5,21, N: 14,58 5 Fundet: C: 49,86, H: 5,56, N; 14,33,

Fri syre:

Analyse:

Beregnet for C24H26N5®7P,^H2®: C: 51,15, H: 5,33, N: 12,43 10 Fundet: C: 51,01, H: 4,85, N; 12,03.

Eksempel 28

C

2', 3' -O-Isopropyliden-N- (2,2-diphenylethylladenosin.

C.

En blanding af N -(2,2-d±phenylethyl)adenosin (2,13 15 g, 0,005 mol), 2,2-dimethoxypropan (8 ml) og bis-(4-ni-trophenyljphosphat (1,9 g, 120 mol%) i acetone (0,2 liter) blev omrørt ved stuetemperatur i 16 timer, fortyndet med vandig 5% natriumbicarbonat, og blandingen blev inddampet i vakuum. Inddampningsresten blev opløst i vand, 20 ekstraheret fem gange med methylenchlorid, og de samlede organiske lag blev tørret (MgSO^) og inddampet i vakuum til et skum. En opløsning af skummet i 1/1 methanol/vand blev behandlet portionsvis med Bio-Rex AG1X8, og filtrering og inddampning af filtratet gav titelforbindelsen, 25 smp. 86-91°C.

Bortset fra de nedenfor nærmere beskrevne aminside-kæder kan alle vindes kommercielt eller kendes fra litteraturen.

30 Se: C. Kaiser, et al., J.Med.Pharm.Chem. 1962, 5^, 1243, K.P. Bogeso, J.Med.Chem. 1983, 26 935, B. Blank, et al., J.Med.Chem. 1969, 12, 271, W.A. Zuccarello, et al., J.Med.Chem. 1969, 12, 9.

Se også: S. Takemura, et al., Chem.Pharm.Bull. 1983, 35 31, 2632.

Endvidere blev 2-(4-fluorphenyl)-2-phenylethylamin og 2,2-di-(4-fluorphenyl)ethylamin-hydrochlorid fremstillet ved anvendelse af fremgangsmåderne ifølge ovennævnte litteratur.

37

DK 159855 B

Eksempel A

2—Carbomethoxy-2,2-diphenylethylamin-hydrochlorid.

3-Brompyrodruesyre (170 g) blev suspenderet i kold svovlsyre (0,85 liter) og holdt ved 0°C, mens benzen 5 (0,255 liter) blev tilsat i løbet af 1,5 time. Tempera turen fik lov at stige til 35-36°C og holdtes derefter ved 25°C i tre timer. Udhældning over knust is (4 liter) efterfulgt af triturering i koldt vand og omkrystallisation af 95% ethanol gav 76 g 3-brom-2,2-diphenylpropion-10 syre (smp. 201-202°C). Denne syre (75 g) blev suspenderet i benzen, og thiohylchlorid (55 ml) blev tilsat. Efter tilbagesvaling blev blandingen filtreret, og filtratet gav 40 g af syrechloridet (smp. 98-100°C). Syrechloridet blev portionsvis sat til vandig ammoniumhydroxid under 15 omrøring og henstillet natten over, og filtrering gav 3-brom-2,2-diphenylpropionamid. Amidet (10 g) blev portionsvis under omrøring sat til en opløsning af natrium (1,5 g), i absolut ethanol (0,2 liter) , og den resulterende opløsning blev opvarmet i 1 time på dampbad. Fortyn-20 ding med vand gav et fast stof (smp. >310°C), 2,2-diphe-nylazetidin-2-on. Azetidinonen (2 g) blev opvarmet ved tilbagesvaling i methanol mættet med HCl (50 ml), hvorved vandtes titelforbindelsen efter krystallisation af metha-nol/ether (smp. 207-208°^.

25 Se også: J. Wegmann og H. Dahn, Helv,Chim.Acta 1946, 29, 415.

Eksempel B

2,2-Diphenyl-2-hydroxyethylamin-hydrochlorid.

30 Behandling af ethylglycinat-hydrochlorid (4,5 g) med phenylmagnesiumbromid (ud fra 0,39 mol af hver af brombenzen og magnesium), som omtalt af A. KcKenzie og G.O. Wills, J.Chem.Soc. 1925, 127, 283 (og deri anførte referencer) gav titelforbindelsen (smp. 191-193°C).

35

DK 159855 B

38

Eksempel C

4.4- Diphenylbutylamin.

Til natriumamid (4,0 mol) i flydende ammoniak (3 liter) blev der sat diphenylmethan (680 g) under omrø-5 ring. Efter 45 minutter blev der tilsat en opløsning af 3-chlorpropionitril (368,6 g) som en opløsning i ether. Ammoniumchlorid (300 g) blev tilsat efterfulgt af fordampning af ammoniakken,, filtrering og destillation af filtratet. 4,4-Diphenylbutyronitril (187 g) destillerer 10 ved 155-165°C ved 0,9 mm.

Til en suspension af lithiumaluminiumhydrid (23 g) i ether (1 liter) blev der dråbevis sat en opløsning af 4.4- diphenylbutyronitril i dioxan (6,25 liter) ved en hastighed, der bevirkede svag tilbagesvaling. Reaktions- 15 blandingen holdtes ved tilbagesvaling i 1 time, og derefter blev der dråbevis under omrøring tilsat en opløsning af kaliumcarbonat (200 g) i vand (300 ml). Blandingen blev filtreret med 1/1 dioxan/ether-vask, og inddamp-ning i vakuum af filtratet efterfulgt af destillation gav 20 titelforbindelsen (76 g), kp. 145-150°C ved 0,6 mm. Den frie amin omdannes almindeligvis til hydrobromidsaltet forud for anvendelse.

Eksempel D

25 2,2-Di-(4-nitrophenyl)ethylamin-hydrochlorid.

Til en opløsning af 2,2-diphenylethylamin (30 g) og triethylamin (18,21 g) i toluen (300 ml) blev der sat en opløsning af acetylchlorid (14,13 g) i toluen (60 ml).

Efter 20 minutter blev toluenen fjernet i vakuum, og ind-30 dampningsresten blev renset ved silicagel-chromatografi, idet der blev elueret med ethylacetat. Inddampning af de rette fraktioner efterfulgt af krystallisation af chloro-form/methanol/hexan gav acetamidet, smp. 75-80°C. Til kold koncentreret svovlsyre (60 ml) blev der sat acetami-35 det (8 g), og opløsningen holdtes ved -5°C. En opløsning af koncentreret salpetersyre (8 ml) i kold koncentreret

Claims (7)

25 Se også: Chem.Abstr. 1971, 7f>, 88289h. g

1. N -Substituerede adenosiner, kendetegnet ved, at de har den almene formel I ; DK 159855 B Λ Ar HN. C ί x\x n^N_ v°tI

0 R3O <or2' eller er farmaceutisk acceptable additionssalte deraf, hvor Ar og Ar hver uafhængigt er phenyl, som eventuelt er 15 substitueret med halogen, lavere alkoxy, lavere alkyl eller nitro, A er ligekædet alkylen med 1-8 C-atomer, X er hydrogen, hydroxy, lavere alkyl eller lavere car-balkoxy, 20. er hydrogen, halogen eller amino, og R2', R3' og R5' hver uafhængigt er hydrogen, alkanoyl med 2-12 C-atomer i lige eller forgrenet alkylkæde eller benzoyl, hvorhos R2' og R3' også kan være indbyrdes forbundet til dannelse af en fem-leddet ring 25 med ialt op til 20 C-atomer, og R^' også kan være (P04 N/3*

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at X er hydrogen eller methyl, R2' og R3' er hydrogen, acetyl, benzoyl eller danner tilsammen isopro- 30 pyliden, og R,-1 er hydrogen eller (P04 >1/3·

3. Forbindelse ifølge krav 2, kendetegnet ved, at R2', R3r, R^' og X er hydrogen.

4. Forbindelse ifølge krav 3, kendetegnet ved, at A er ligekædet alkylen med 1-4 C-atomer.

5. Forbindelse ifølge krav 4, kendeteg- net ved, at A er methylen, og Ar og Ar er phenyl. DK 159855 B

6. Forbindelse ifølge krav 4, kendetegnet ved, at den er valgt blandt: g N -(2,2-diphenylethyl)adenosin, N6-(3,3-diphenylpropyl)adenosin, C g D N -(2,2-diphenylethyl)-2-chloradenosin, N6-(2,2-diphenylethyl)-2-aminoadenosin og N^-(2,2-diphenylpropyl)adenosin.

7. Farmaceutisk prpparat, kendetegnet ved, at det indeholder en terapeutisk effektiv mængde af en forbindelse ifølge krav 1 sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer.