DK160558B - N6-substituerede adenosiner, fremstilling og anvendelse af disse, samt farmaceutiske praeparater indeholdende saadanne forbindelser - Google Patents

Description

DK 160558 B

Opfindelsen angår visse hidtil ukendte ^-substituerede ade-nosiner med neuroleptisk aktivitet og antihypertensive egenskaber.

USA-Patent 3.922.261 beskriver N6-(2-tetra-hydronaphthyl)adenosin til sænkning af serum-lipo-5 protein-, fri fedtsyre- og triglyceridniveauer og til forøgelse af coronar-blodgennemstrømning uden ændring af materielt blodtryk eller hjertefrekvens.

Endvidere beskriver britisk patent nr. 1.529.721 g N -[2-(5-methoxy-3-indolyl)ethyl]adenosin-5-monophos-^ phorsyre, trihydrat som antiproliferativt og coronar-kredsløbsaktivt middel Fransk patent 6650M (Derwent nr.

g 37.912) beskriver N -alkyl-, -aryl-, -aralkyl-, -furfu-ryl- og -thienyl-adenosiner til anvendelse som antiin-flammatoriske midler. Tysk patent nr. 2.139.107 beskriver en række N6-[heterocyclyl, især quinolinyl og isoquinoli-nyl]methyladenosiner med virkning på coronarkredsløbet.

Tysk patent nr. 1.670.116 beskriver N^-naphthylmethyl-adenosiner med kredsløbsaktivitet. Endvidere beskriver g USA-patent nr. 4.501.735 N -indanyladenosiner. Endelig 20 6 beskriver tysk patentskrift nr. 2.402.804 N -tetralmyl- 2-adenosin, der medfører forøget coronargennemstrømning og oxygenindhold samt lavere lipoproteinniveauer i blod, hæmning af thrombocytaggregation og fibrinolytisk aktivitet.

25

Fra Journal of Medicinal Chemistry, 25(1982), nr.

3, s. 197-207 er det kendt, at visse N^-substituerede 6 6 6 adenosiner, f.eks. N -cyclohexyl-, N -phenyl-, N-ben- g zyl- og N -phenylisopropyl-adenosin, har et gunstigt forhold mellem affiniteterne til A.- og A0-receptorer.

30 12

Det har nu overraskende vist sig, at forbindelser- j ne ifølge opfindelsen, der er adenosinanaloger, som har : nogle af de samme aktiviteter som adenosin, men som j har væsentlig længere virkningstid, både har gunstige forhold mellem affiniteter til A1- og A2-receptorer og sam- 35 .

tidig meget ønskelige virkninger pa centralnervesystemet, såsom analgetisk, antipsykotisk, sedativ eller anti-hypertensiv aktivitet. Endvidere har disse adenosinfor-bindelser også immuninflammatorisk aktivitet.

DK 160558 B

2 £

De N -substituerede adenosiner ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har formlen I: h , "'’vi 10 * » 10 R'jO OR'2 hvori har formlen ” foG?· „ bQ"·’·

x eller / / H

/ /λ X* A

X' * n!,h xMH

II III * 20 hvori n er en til tre; Z betegner hydrogen eller lavere alkyl; Y betegner hydrogen eller hydroxy; Ά betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med fra 1 til 4 carbonatomer eller, når har formlen II, og n er 2 2^ eller 3, en binding; X og X' betegner hver især uafhængigt hydrogen, lavere alkyl, lavere alkoxy eller hydroxy; r,3 °9 r,5 betegner hver især uafhængigt hydrogen, alkanoyl med fra 2 til 12 carbonatomer i en ligekædet eller forgrenet alkylkæde, ethoxycarbonyl, ^ benzyl, benzoyl eller benzoyl substitueret med lavere alkanoyloxy, eller R'2 og R'3 betegner sammen en alky-lidengruppe med i alt op til 20 carbonatomer; diastereo-mere heraf; eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt heraf.

DK 160558 B

3

Opfindelsen angår også et farmaceutisk præparat omfattende en terapeutisk effektiv mængde af en forbindelse med den ovennævnte formel I sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer.

5 I forbindelserne med formlen I skal udtrykket "lavere alkyl" omfatte en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 6 carbonatomer, såsom f.eks. methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec-butyl, isobutyl, tert-butyl, amyl, isoamyl, neopentyl, hexyl 10 og lignende.

Halogen omfatter fortrinsvis fluor, chlor eller brom.

Lavere alkoxy skal betegne O-alkyl med fra 1 til 6 carbonatomer som defineret ovenfor for "lavere 15 alkyl".

Lavere alkanoyl er en ligekædet eller forgre- 0 11 net -C-alkylgruppe med fra 1 til 6 carbonatomer i alkylkæden som defineret ovenfor.

20 Forbindelserne med formlen I er anvendelige både i form af frie baser og i form af syreadditionssaltene. Begge former omfattes af opfindelsen. I praksis svarer anvendelse af saltformen til anvendelse af baseformen. Egnede farmaceutisk acceptable salte 25 omfattet af opfindelsen er sådanne, som er afledt af uorganiske syrer, såsom saltsyre og svovlsyre; og organiske syrer, såsom ethansulfonsyre, benzensulfon-syre, p-toluensulfonsyre og lignende, til opnåelse af henholdsvis hydrochloridet, sulfatet, ethansulfo-20 natet, benzensulfonatet, p-toluensulfonatet og lignende.

Syreadditionssaltene af de omhandlede basiske forbindelser fremstilles enten ved opløsning af den frie base i vandig eller vandig alkoholisk opløsning eller andre opløsningsmidler indeholdende den pågældende

DK 160558 B

4 syre og isolering af saltet ved inddampning af opløsningen eller ved omsætning af den frie base og syren i et organisk opløsningsmiddel, i hvilket tilfælde saltet udskilles direkte eller kan opnås ved koncen-5 trering af opløsningen.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indeholde asymmetriske carbonatomer. Opfindelsen omfatter de individuelle diastereomere og blandinger deraf.

De individuelle diastereomere kan fremstilles eller 10 isoleres ved kendte fremgangsmåder.

Opfindelsen angår fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori har formlen II, og Z betegner hydrogen, A betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, og η, Y, 15 X, X', R'j, R'^ °g R'j har de ovenfor angivne betydninger.

Opfindelsen angår også fortrinsvis en forbindelse med formlen I,hvori R^ har formlen II; Z betegner hydrogen, A betegner en ligekædet eller for-20 grenet alkylengruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, X, X' og Y betegner hydrogen, og n, R,2' R,3 °9 R't- har de ovenfor angivne betydninger.

Opfindelsen angår også fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori R^ har formlen II, 25 Z betegner hydrogen, A betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, X, X' og Y betegner hydrogen; n er 1, og R'2' R*3 og R',- har de ovenfor angivne betydninger.

Opfindelsen angår endvidere fortrinsvis en 30 forbindelse med formlen I, hvori R^ har formlen II; X, X1, Z og Y betegner hydrogen, n er 1, A betegner me-thylen, og R'^ og R'^ har de ovenfor angivne be tydninger.

Yderligere angår opfindelsen fortrinsvis 3^ en forbindelse med formlen I, hvori R^ har formlen II; X, X', Z og Y betegner hydrogen, A betegner methylen; og R'2' r,3 °9Γ r,5 betegner hydrogen.

DK 160558 B

5

C

Specielt angår opfindelsen N -[1-indanylme-thyl]adenosin.

Opfindelsen angår også fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori R-^ har formlen III, 5 A betegner ligekædet eller forgrenet alkylen med fra 1 til 4 carbonatomer ogX, X', n, R'2, R'^ og R',-har de ovenfor angivne betydninger.

Opfindelsen angår således også fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori R^ har formlen III; 10 A betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, X og X' betegner hydrogen, n er 1, og R'2, R'3 og R'5 har de ovenfor angivne betydninger.

Endvidere angår opfindelsen fortrinsvis en 15 forbindelse med formlen I, hvori R-^ har formlen III; X og X' betegner hydrogen; n er 1; A betegner methylen;. og R' 2, og R'cj nar de ovenfor angivne betydninger.

Opfindelsen angår yderligere fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori R. har formlen III; 20 X og X' betegner hydrogen; n er 1; A betegner methylen;. og R'2, R'3 og R'^ betegner hydrogen.

Specielt angår opfindelsen, når R. i formlen I 6 har formlen III, N -[lH-inden-3-yl-methyl]adenosin.

25 Opfindelsen angår fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori X, X' og Y betegner hydrogen, R^ har formlen II, hvori A betegner en binding, n er 2, ogZ, R'2, R'3 og R'j. har de ovenfor angivne betydninger.

3Q Opfindelsen angår også fortrinsvis en forbin delse med formlen I, hvori X, X1 og Y betegner hydrogen; R^ har formlen II, hvori A betegner en binding, n er 2, j X betegner hydrogen eller lavere alkyl, og R'^, R'3 og R',. har de ovenfor angivne betydninger.

35 Opfindelsen angår yderligere fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori X, X' og Y betegner hydrogen; R^ har formlen II, hvori A betegner en bin-

DK 160558 B

6 ding, n er 2, en af X og X’ betegner hydrogen eller lavere alkyl; og. Z, R1^, R*3 °9 har de ovenfor angivne betydninger.

Opfindelsen angår også fortrinsvis en forbin-5 delse med formlen I, hvori X og Y betegner hydrogen; har formlen II, hvori A betegner en binding, Z betegner hydrogen eller lavere alkyl; og R'2, £'3 og R'5 betegner hver især uafhængigt hydrogen, acetyl eller benzoyl, eller R'2 og R'^ betegner sammen isopropyliden.

10 Opfindelsen angår endvidere fortrinsvis en forbindelse med formlen I, hvori X og Y betegner hydrogen; R^ har formlen II, hvor A betegner en binding, Z betegner hydrogen eller lavere alkyl, og R'2, R'g og R'^ betegner hydrogen.

15 Specielt omfatter opfindelsen N^-(l-tetra- hydronaphthyl)adenosin eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Det har nu vist sig, at forbindelserne med formlen I, hvori R^ har formlen II, X, X', Z og Y 20 betegner hydrogen, A betegner methylen; **'2' **'3 °9 R' alle betegner hydrogen, og n er 1, har uventet gunstige affiniteter til Al- og A2-receptorer.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formlen I, hvilken frem-25 gangsmåde er ejendommelig ved det i krav 9's kendetegnende del angivne.

Forbindelserne med formlen I kan således hensigtsmæssigt syntetiseres ved omsætning af et 6-halogenpurin- g ribosid med formlen IV (se krav 9) med N -(benzocycloalkyl)- g 30 eller N -(benzocycloalkylen)-alkylaminen eller den pågældende tetrahydronaphthylamin med formlen V eller VI (se krav 9) i et indifferent opløsningsmiddel, såsom alkohol, eller et aprotisk opløsningsmiddel såsom dimethylformamid, mellem ca. 25 og ca. 130°C i fra 1 til 48 timer. Det er hensigtsmæs-35 sigt at tilsætte en base, såsan triethylamin eller calciumcarbonat, til neutralisering af det som biprodukt ved reaktionen dannede hydrogenhalogenid, men dette kan også opnås

DK 160558 B

7 ved anvendelse af et ekstra ækvivalent af aminen. Det er også hensigtsmæssigt, skønt ikke nødvendigt, at beskytte ribofuranose-hydroxylgrupperne som acetat- eller benzoat-estere, hvilke beskyttelsesgrupper kan fjernes 5 med ammoniumhydroxid eller natriummethoxid efter g syntese af den N -substituerede adenosin. Reaktionen er vist i nedenstående skema (se side 49) med formlerne.

IV, V og VI, hvori A, X, Y, z, n, R'2, R'3 og R'5 har de for formlen I angivne betydninger.

10 De pågældende aminudgangsmaterialer eller materialer ud fra hvilke amineme kan fremstilles, er karmercielt tilgængelige eller kan fremstilles ved fra litteraturen kendte fremgangsmåder.

Forbindelserne med formlen I har vist sig at have forskellige affiniteter til adenosinreceptorer 15 (af bekvemmelighedshensyn betegnet A^- og A2-recepto-rer). Disse forbindelser er aktive i dyreforsøg, som kan forudsige neuroleptisk aktivitet til behandling af alvorlige psykoser, såsom schizofreni.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har også 20 sedativ-hypnotiske egenskaber og er således egnede til behandling af søvnforstyrrelser. Disse forbindelser har også analgetiske egenskaber og er således egnede til behandling af smerte.

Endvidere er forbindelserne ifølge opfindel-25 sen egnede som antihypertensive midler til behandling af højt blodtryk.

Farmakologisk vurdering.

Adenosinreceptorbinding - A^-receptoraffinitet (RBA1).

30 Fremstilling af membraner.

Hele hjernen, undtagen lillehjerne og hjerne- ! stamme, fra han-Long Evans rotter (150-200 g) blev homogeniseret i 30 volumener iskold 0,05 M Tris-HCl-

DK 160558 B

8 puffer, pH 7,7, ved anvendelse af en Brinkman Polytron PT-10 (indstilling på 6 i 20 sekunder) og centrifugeret i 10 minutter ved 20.000 x g (Sorvall RC-2), 4°C. Supernatanten blev borthældt, og det sammenpressede 5 bundfald blev gensuspenderet og centrifugeret som ovenfor. Det sammenpressede bundfald blev gensuspenderet i 20 ml Tris-HCl-puffer indeholdende to internationale enheder/ml adenosindeaminase (Sigma type III fra kalve-tarmslimhinde), inkuberet ved 37°C i 30 minutter og 10 derefter ved 0°C i 10 minutter. Homogenisatet blev igen centrifugeret, og det herefter opnåede sammenpressede bundfald blev gensuspenderet i iskold 0,05 M Tris-HCl-puffer, pH 7,7 til en koncentration på 20 mg/ml af oprindeligt fugtigt væv, hvorefter det straks •J5 blev anvendt.

Forsøgsbetingelser.

Vævshomogenisat (10 mg/ml) blev inkuberet i 0,05 M Tris-HCl-puffer, pH 7,7, indeholdende 1,0 nM (½]-N^-cyclohexyladenosin ([^H]-CHA) med eller uden 20 test-forbindelser in triplo i en time ved 25°C. Inku-bationsvolumenet var 2 ml. Ubundet ( H]-CHA blev fraskilt ved hurtig filtrering under reduceret tryk gennem Whatman-glasfiberfiltre (GF/B). Filtrene blev skyllet tre gange med 5 ml iskold 0,05 M Tris-HCl-25 puffer, pH 7,7. På filteret tilbageholdt radioaktivt mærket ligand blev målt ved væskescintillationsspek-trofotometri efter rystning af filtrene i en time eller mere på mekanisk rysteapparat i 10 ml Beckman Ready-Solv HP scintillationscocktail.

30

Beregninger.

Ikke-specifik binding blev defineret som den binding, der forekom i nærværelse af 1 mM theo-phyllin. Koncentrationen af testforbindelse, som 35 hæmmede den specifikke binding med 50% (ICj-q), blev bestemt ved tilpasning af ikke-lineær computerkurve.

DK 160558 B

9

Scatchard-plot blev beregnet ved lineær regression af linien opnået ved afsætning af mængden af bundet radioaktivt mærket ligand (pmol/gram væv) mod .bundet radioaktivt mærket ligand η „ , „ 5 fri radioaktivt mærket ligand- 1 · Da bundet radioaktivt mærket ligand var en lille del af den totale tilsatte mængde, blev fri radioaktivt mærket ligand defineret som koncentrationen (nM) af til inkubationsblandingen tilført radiaktivt mærket ligand.

10 '

Hill-koefficienten blev beregnet ved lineær regression af linien opnået ved afsætning af logaritmen af bundet radioaktivt mærket ligand mod logaritmen af r bundet radioaktivt mærket ligand_] .

* B - bundet radioaktivt mærket ligand 15 max

Det maksimale antal bindingssteder (B ) blev beregnet fra Scatchard-plot.

Adenosinrecpetorbinding - A2~receptoraffinitet (RBA2).

20 Vævspræparat.

Hjerner fra Sprague-Dawley-rotter af blandet køn med en vægt på 200-500 g blev købt hos Pel-Freez (Rogers, Arkansas). Friske hjerner fra han-Long Evans afskærmede rotter (Blue Spruce Farms, Altamont, NY) 25 gav i det væsentlige identiske resultater. Hjerner blev optøet og derefter holdt på is, mens striata blev dissekeret ud. Striata blev splittet i 10 volumener iskold 50 mM Tris-HCl (pH 7,7 ved 25°C, pH 8,26 ved 5°C) (Tris) i 30 sekunder i en Polytron PT-10 (Brink-30 mann) ved indstilling på 5. Suspensionen blev centrifugeret ved 50.000 x g i 10 minutter, supernatanten blev borthældt, og det sammenpressede bundfald blev gensuspenderet i 10 volumener iskold Tris som ovenfor, gencentrifugeret, gensuspenderet til en koncentration 35 på 1 g/5 ml og lagret i plastikflasker ved -70°C i (stabilitet i mindst 6 måneder). Efter behov blev væv optøet til stuetemperatur, splittet i en Polytron og anbragt på is til anvendelsen.

DK 160558 B

10

Inkubationsbetingelser.

Alle inkubationer varede i 60 minutter ved 25°C i 12 x 75 mm glasrør indeholdende 1 ml Tris med 5 mg (oprindelig vævsvægt) rottestriatal-membraner, 5 4 nM [^H]-ethyl-adenosin-5'-carboxamid ([^H]NECA), 50 nM -cyclopentyladenosin (til eliminering af A-^- receptorbinding), 10 mM MgCl„, 0,1 enheder/ml adenosin- ^ 6 deaminase og 1% dimethylsulfoxid. N -Cyclopentyladeno-sin blev opløst til 10 mM i 0,02 N HC1 og fortyndet i g 10 Tris. Stamopløsninger og fortyndinger af N -cyclopen-tyladenosin kunne lagres ved -20°C i flere måneder. Testforbindelser blev opløst til 10 mM i dimethylsulfoxid på forsøgsdagen og fortyndet i dimethylsulfoxid til 100 x den endelige inkubationskoncentration. Til 15 kontrol-inkubationer blev sat det samme volumen (10 mi-kroliter) dimethylsulfoxid; den resulterende koncentration af dimethylsulfoxid havde ingen indvirkning 3 på bindingen. [ H]NECA blev fortyndet til 40 nM i Tris. Membransuspensionen (5 mg/0,79 ml) indeholdt 20 en tilstrækkelig mængde MgCl2 og adenosindeaminase til opnåelse af en slutkoncentration på henholdsvis 10 mM og 0,1 enheder/ml ved inkubationen. For testforbindelser med IC,-Q-værdier mindre end 1 μΜ var rækkefølgen for tilsætninger: test-forbindelse (10 mi- g 25 kroliter), N -cyclopentyladenosin (100 mikroliter), 3 [ H]NECA (100 mikroliter) og membraner (0,79 ml).

For test-forbindelser med IC^Q-værdier større end 1 μΜ og med begrænset vandopløselighed var rækkefølgen for tilsætninger (samme volumener): testforbindelse, 6 3 30 membraner, N -cyclopentyladenosin og [ H]NECA. Efter alle tilsætninger blev stativet med rør vortexbehandlet, og rørene blev derefter inkuberet i 60 minutter ved 25°C i et ryste-vandbad. Stativet med rør blev yortexbehandletigen efter halvdelen af inkubations-35 tiden.

Inkubationerne blev afsluttet med filtrering gennem 2,4 cm GF/B-filtre under reduceret tryk.

11

DK 160558 B

For hvert glas foregik filtreringen på følgende måde: glassets indhold blev udhældt på filteret, der blev sat 4 ml iskold Tris til glasset, og indholdet blev udhældt på filteret, hvorefter filteret blev vasket 5 to gange med 4 ml iskold Tris. Filtreringen var afsluttet i løbet af ca. 12 sekunder. Filtrene blev anbragt i scintillationsflasker, der blev tilsat 8 ml Formula 947 scintillationsvæske, og flaskerne blev henstillet natten over og rystet, hvorefter der blev 10 talt i en væskescintillationstæller ved 40%'s virkningsgrad.

Dataanalyse.

Ikke-specifik binding blev defineret som bin- g 15 ding i nærværelse af 100 μΜ N -cyclopentyladenos in, og specifik binding blev defineret som totalbinding minus ikke-specifik binding. IC,-q blev beregnet ved afstemt ikke-lineær mindste kvadraters kurvetilpasning til massevirkningsligningen.

20 D

Y = T - S---—

D + K

hvori Y er cpm bundet T er cpm totalbinding uden lægemiddel S er cpm specifik-binding uden lægemiddel 2 5 D er koncentration af lægemiddel og K er IC^q af lægemidlet.

AfstemningsEaktorer blev beregnet under antagelse af, at standardafvigelsen var proportional med den beregnede værdi af Y. Ikke-specifik binding blev be-30 handlet som en meget stor (uendelig) koncentration af lægemiddel ved computeranalysen.

IC,-0-Værdier (nM) for adenosin A^- og A2~re-ceptoraffinitet er vist i tabellen.

35

DK 160558B

12

Eksempel nr._RBA-1 (nM)_RbA-2 (nM) 1 59 476 2 44 243 3 403 2030 54 19 524 5 40 918 6 126 4370 7 42 324 8 .21 407 10 9 4550 50500 10 19 217 11 444 2610 12 22400 13 1060 7920 15 14 8220 57100 15 . 500 4440 16 36 260 17 71 238 18 20 366 20 20 * 5840 46700 21 9 99 22 57 65,5 23 108 2850 24 159 76,5 25 25 120 987 26 713 2700 27 445 4010 28 208 1270 30

Antipsykotisk vurdering.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er hidtil ukendte fdrbindelser, der er egnede som farmaceutiske midler til behandling af psykoser. Den antipsykotiske 35 aktivitet af repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen blev bestemt ved "Mouse Activity and Screen Test Procedure (MAST)" beskrevet nedenfor:

DK 160558 B

13

Dyr:

Ni ufastede Swiss-Webster-hanmus med en vægt på 20-30 g opdeles ligeligt i tre grupper til hver lægemiddeldosis, der skal afprøves. Det vil sige, 5 der blev opnået data for hvert dosisniveau ved hjælp af tre adskilte grupper på hver tre mus.

Lægemidler:

Minimalt tre dosisniveauer (10,30 og 100 mg/kg) 10 afprøves for hvert lægemiddel. Lægemidler administreres intraperitonealt en time før afprøvning. Alle doser beregnes som grund-forbindelse og gives i volumener på 10 ml/kg. Forbindelser opløses eller suspenderes i 0,2% Methocel. Kontroldyr injiceres med Metho-15 cel.

Afprøvning:

En afprøvning i to dele begyndes 1 time efter injektion. Først udføres netprøven (se Pharmac.

20 Biochem. Behav. 6, 351-353, 1977). I korte træk består denne afprøvning i anbringelse af mus på individuelle trådnet, som derefter drejes 180° ved begyndelsen af 60 sekunders iagttagelsesperiode. Antallet af mus, som falder fra det drejede net, registreres.

25 Umiddelbart efter netprøven påbegyndes sidste fase af afprøvningen ved at anbringe hver gruppe på tre mus i et actofotometer (Life Sciences, 22^, 1067-1076, 1978). Actofotometeret består af et cylindrisk kammer, i hvis center er anbragt en anden cylinder, som inde-30 holder belysningen til seks fotoceller anbragt på det omkransende kammer. Seks lysstråleafbrydelser svarer til en tælling. Bevægelsesaktivitet registreres ved j hjælp af computer med intervaller på 10 minutter i 60 minutter.

35

Data:

De fra net-afprøvningen opnåede data udtrykkes som procent mus, der falder fra nettet. Data vedrørende • 14

DK 160558 B

bevægelsesaktivitet af lægemiddelbehandlede mus sammenlignes med aktiviteten af med bæremiddel behandlede dyr og udtrykkes som procentvis hæmning af spontan bevægelse. Alle procenter angivet for hæmning af be-5 vægelse (LI) er baseret på data opsamlet over en time.

Begge faser af afprøvning klassificeres: A = 60-100%; C = 31-59%; og N = 0-30%. En samlet dosisvurdering opnås ved følgende kriterier:

Vurdering af sammenholdt Vurdering af Dosisbevægelseshæmning med fald ved net- = vurde- 10 _prøve_ring

A - N eller C = A

A - A = C

C - N eller C = C

_alle andre kombinationer_= N

15 LAD betegner den laveste dosis, ved hvilken der opnås en vurdering A. Forbindelser, som udviser en samlet dosis-vurdering på A ved en dosis på 100 mg/kg eller mindre, anses for aktive. Ved anvendelse af denne fremgangsmåde opnåedes en samlet dosisvurdering for 20 A for de i tabellen angivne forbindelser ved de angivne doser. Forbindelserne er omtalt i eksemplerne.

DK 160558 B

15

Eksempel Dosis (mg/kg) Hæmning af Fald ved net- bevægelses- prøve aktivitet hos _mus_ 1 1 86% 0% 3 93% 0% 10 98% 22% 30 97% ' 22% _100_99%_99% 2 0,1 25% 0% 0,3 45% 0% 1.0 79% 11% 3.0 95% 22% 9.0 97% 33% _30,0_99%_66% 3 0,1 40% 11% 0,3 34% 0% 1.0 . 30% 22% 3.0 69% 0% 10 95% 0% _30_96%_11% 4 0,03 3% 0% 0,1 1% 0% 0,3 70% 11% 10 97% 77% 30 99% 88% _100_99%_77% 5 1 39% 0% . 3 82% 11% _10_91%_11% 6 1 22% 0% 3 3% 0% 10 62% 0% 30 94% 44% _100_99%_44% 7 0,3 7% 0% 1.0 22% 0% 3.0 91% 11% 10 97% 22% 30 99% .66% 8 0,3 25% 11% 1.0 83% 11% 3.0 88% 11% 10,0 93% 22% _30,0_94%_65% 9 3 -35% 11% 10 -11% 0% _30_^3%_11%

DK 160558 B

16

Eksempel Dosis (mg/kg) Hæmning af Fald ved net- bevægelses- prøve aktivitet hos _mus_ 10 0,3 -19% 11% 1.0 65% 22% 3.0 88% 22% 10.0 95% 44% _30,0_97%_66% 12 3 3% 0% . 10 -1% 0% _30_-16%_0% 14 1 54% 0% 3 69% 0% 10 94% 0% ____30_ . 94%_22% 15 0,3 46% 11% 1.0 87% 22% 3.0 .96% 22% 10.0 98% 55% _30,0_99%_55% 16 3 -13% 0% 10 23% 0% 30 89% O% 17 3 44% 0% 10 88% 0% _30_91%_22% 18 1 44% 11% 3 73% 11% 10 91% 0% •_30_96%_0% 19 1 42% 11% 3 57% 0% 10 91% 0% _30_95%_11% 21 0,3 -19 0 1.0 23 0 3.0 61 0 10.0 82 22 _30,0_99_55 22 0,1 30 0 0,3 38 11 1.0 76 0 3.0 76 22 10.0 96 11 _30,0_97_55_ 23 3,0 19 0 10.0 16 0 _30,0_77_22_ 17

DK 160558 B

Eksempel Dosis (mg/kg) Hæmning af Fald ved net- bevægelses- prøve aktivitet hos _ mus_ 24 0,3 9 0 5 1,0 34 0 3,0 67 22 10.0 94 22 30.0 95 11 25 3,0 -14 11 10.0 89 22 10 _30,0_88_66_ 26 3,0 50 0 10.0 31 22 _30,0_64 22_ 27 3,0 1 0 10.0 33 11

_30,0_33_Q

15 28 3,0 35 0 10.0 19 11 30.0 59 0

Antihypertensiv vurdering (AHP3).

20 Egnetheden af forbindelserne ifølge opfindelsen som antihypertensive midler kan påvises ved deres effektivitet i standardfarmakologiske afprøvninger, f.eks. til at bevirke en væsentlig formindskelse af det gennemsnitlige arterielle blodtryk hos vågne rotter.

25 Denne test er beskrevet nedenfor.

Fremgangsmåde til direkte måling af aorta-blodtryk og hjertefrekvens hos vågne rotter.

Den kontinuerlige måling af blodtryk, som 30 hidrører fra pulsen (BP), hos ikke-fikserede vågne ' rotter, som ved kirurgisk ingreb var forsynet med poly-ethylenkanyler, blev foretaget ved hjælp af et compu-ter-dataoptagelsessystem (CADCS). Grundelementerne ved metoden er anbringelse af kanyler og CADCS.

35

DK 160558 B

18

Fremgangsmåde.

Anbringelse af kanyler:

Rotter blev bedøvet med Telazol (1:1 tiletamin-HC1 og zolazepam, HC1); 20-40 mg/kg intramuskulært, 5 og den nedadforløbende aorta blev blotlagt ved et centralt snit. Kanyler fremstillet af polyethylenslange blev indsat i aorta via et punkturhul af mindre størrelse under renal-arterierne. Punkturhullet blev lavet med en 23 G engangsnål, mens en del af aorta 10 var aflukket med klemmer over og under punkturstedet. Kanylerne, som bestod af en PE100 (0,86 mm ID) krop og en PE50 (0,58 mm ID) spids, blev fastgjort til en trocar indført gennem psoasmusklen og subkutant ført op langs ryggens midtlinie og ført ud mellem ørene.

15 Kanylerne blev fastgjort til psoasmusklen og mellem scalulae (3-0 suturer). Det centrale snit blev lukket i to trin (musklen først og derpå skindet) ved anvendelse af fortløbende suturer (4-0). Hver rotte blev derefter indgivet 30.000 enheder penicillin subkutant 20 (penicillin G-procain steril suspension).

Rotterne blev forsynet med fjeder-seletøj med svirvel beregnet til at beskytte kanylerne og at give rotten forholdsvis bevægelsesfrihed. Seletøjet var fremstillet af nylon fasthægtet til en metalplade, 25 til hvilken der var knyttet fjedertråde (18-8 rustfrit stål) til messingsvirvler. Hver polyethylenkanyle var ført gennem en fjeder og gennem en svirvel forbundet med en tryktransducer (Model P23Gb; Statham Instruments; Hato Rey, Puerto Rico) og en infusionspumpe 30 (Sage model 234-7; Orion Research, Cambridge, MA) ved hjælp af PE100-slange. Under afprøvningen modtog hver rotte en kontinuerlig langsom infusion af hepari-niseret saltvandsopløsning (ca. 400 ml eller 40 enheder heparin pr. 24 timer) til modvirkning af klumpdannel-35 se. Yderligere "udskylninger'af kanylerne med heparini-seret saltvand blev udført, når det af pulsen fremkaldte aorta-tryk (systolisk minus diastolisk) var mindre end 25 mm Hg.

DK 160558 B j 19 CADCS:

Det af pulsen fremkaldte blodtryk og hjertefrekvensen hos hver af 32 rotter blev målt hvert minut ved hjælp af to mikrocomputere i laboratoriet, som 5 kommunikerede direkte med en dataopsamlings-computer.

De opsamlede data blev først lagret på dataopsamlingsdisken og derefter overført til et magnetbånd til analyse og rapport-udvikling på hoved-computeren. Hele systemet omfattede modulering af det primære signal 10 fra tryktransduceren, frembringelse af det primære datasæt af 1-minuts-værdier for systolisk, diastolisk og gennemsnitligt blodtryk og hjertefrekvens ved hjælp af mikrocomputeren i laboratoriet og lagring, analyse og rapportfrembringelse ved hjælp af hoved-computeren.

15 Transducerne var forbundet med analog-signal- tilpassende moduler. Modulerne tilvejebragte en indstillet frembringelsesspænding til transducerne, nødvendig forstærkning til at passe til mikroprocessorerne og et aktivt filter med ringe passage til at kompensere for 20 forvrængningen i form af trykbølge frembragt af den fleksible, væskefyldte snævre kanyle. Forvrængningen var 22-26 Hz, og dette gav et pålideligt skøn med hensyn til både systolisk og diastolisk blodtryk.

Mikrocomputerne (en for hver af to grupper 25 på 16 rotter) var forbundet til "inputkomponenterne" gennem modul-interface-enhederne, en analog-til-digital-omdanner for signalet i form af trykbølge og digitalindgangene for dosis- og eventmarkør-kontakterne. Mikrocomputeren regulerede den sekventielle tilvejebringelse 30 af data fra modul-interface-enhederne ved hjælp af en indre synkron klokkeslæt/tid-baseret generator. Ved anvendelse af den tidsbaserede generator som reference | blev blodtryksværdier og markør-kontakt-status for hver af de 32 stationer optaget hvert tiende msekund. j 35 Mikrocomputeren behandlede hver af blodtryksværdierne, efterhånden som de blev modtaget, til frembringelse af "løbende gennemsnits"-værdier for hjertefrekvens og det gennemsnitlige systoliske og diastoliske blodtryk.

DK 160558 B

20

Ved testning efter ovenfor beskrevne metode gav forbindelser fra de anførte eksempler nedenstående ændringer i MAP (gennemsnitligt arterielt tryk) og hjertefrekvens. LAD betegner den lavest afprøvede dosis, 5 ved hvilken der opnås >10% reduktion i blodtryk fire timer i træk.

21

DK 160558 B

Antihypertensiv vurdering MAP = gennemsnitligt arterielt tryk HR = hjertefrekvens 5 Eksempel /k ' ,, ., _ 3 nr._^ *_1_3_5_7_9__ 1 1,0 MAP +18% +13% +14% +14% +3% HR +12% +11% +10% +7% +15% 10 10 MAP +51% +41% +36% +25% +22% HR +24% +14% +2% +6% 0% 2 3 MAP +46% +32% +32% +32% +30% HR +9% +1% +2% +5% +5% 15 3 10 MAP +28% +23% +18% +16% +13% HR +3% +4% 0% +3% +3% 4 10 MAP +50% +32% +21% +22% +21% 20 HR +45% +28% +3% +10% +11% 5 3 MAP +28% +18% +15% +10% +5% HR 0% +4% +8% +3% +17% 25 10 MAP +55% +42% +32% +26% +17% HR +40% +31% +17% +3% +3% 6 10 MAP +30% +5% +4% +9% +11% HR +3% +3% +6% +9% +12% 30 7 3 MAP +52% +46% +44% +35% +36% HR +24 +25% +28% +8% +11% 35

DK 160558 B

22

Eksempel .

nr. »9 Ag ! 3 T 7 -5- 5 8 10 MAP +44% +16% +12% +2% +5% HR +8% +13% +12% +21% +26% i 9 3 MAP +9% +8% .9% +12% +8% HR +12% +5% +2% +4% +5% 10 10 3 MAP +37% +29% +28% +27% +24% HR +7% +5% +3% +4% +6% 13 10 MAP +48% +42% +44% +48% +44% 15 HR +34% +34% +33% +28% +22% 14 10 MAP +38% +11% +12% +9% +12% HR +6% +17% +15% +9% +9% 2o 15 1 MAP +19% +5% +8% +2% +13% HR +8% +20% +16% +28% +20% 16 3 MAP +2% +2% +1% +1% +2% HR +2% +7% +1% +3% 0% 25 17 3 MAP +8% +14% +14% +10% +12% HR , +3% +10% +2% +1% +8% 19 10 MAP +35% +28% +25% +22% +15% HR +7% +10% +4% +1% +5% 30 20 10 MAP +51% +38% +38% +33% +29% HR +30% +29% +21% +14% +15% 21 3 MAP +27% +17% +17% +6% +4% 35 HR ' +3% +14% +10% +16% +12% 10 MAP +40% +32% +27%· +25% +22% HR +15% +4% +1% +3% +2%

DK 160558 B

23

Eksempel__Time _ nr Mg/k9_1---1-'· 5 7 "Τ' 5 23 10 MAP +5% +10% +9% +1% +12% HR +1% +2% +7% +27% +3% 24 10 MAP +39% +39% +37% +37% +30% HR +13% +11% +16% +16% +14%

Analgetisk vurdering.

Antivridningstesten (AW) giver en foreløbig vurdering af forbindelser med mulig analgetisk aktivi-15 tet. Testen udføres på han-Swiss-Webster mus. Forbindelser administreres subkutant i vandig 0,2% methyl-cellulose eller andre egnede bæremidler i volumener på 10 ml/kg. Doser betegner aktive bestanddele.

Eddikesyre (0,6%, 10 ml/kg) injiceres intra-20 peritonealt 20 minutter efter administrering af adeno-sinagonisten. Vridninger tælles i 5 minutter, idet der startes 7 minutter efter eddikesyreinjektionen.

Vridning defineres som abdominal sammentrækning og udstrækning af krop og bagben med konkav krumning af 25 ryggen. Data er udtrykt som ED^Q-værdier, hvor EDj-q er den dosis, der kræves til at undertrykke vridning med 50% i forhold til kontroller, som er indgivet bæremiddel. ED5Q-Værdier beregnes ved ikke-lineær regressionsanalyse.

30

Immun inflammatorisk afprøvning.

Bestemmelse af potentiel antiinflammatorisk i eller immuninflammatorisk aktivitet foretages ved forsøg med carrageenan-lungehindebetændelse. Carragee- 1 35 nan-lungehindebetændelse fremkaldes som tidligere beskrevet af Carter, G. W., et al., in J. Pharm, Pharmacol. 34;66-67, 1982. Carrageenan (310 yg/rotte) injiceres intrapleuralt i 0,25 ml pyrogenfrit saltvand.

DK 160558 B

24

Fire timer senere aflives rotterne, og der sættes 2 ml opløsning af phenolrødt (325 mg phenolrødt i 1 liter 0,05 M phosphatpufret saltvand) til hver pleuralkavi- tet. Indholdene i kavdteterne blandes og overføres til 5 reagensglas. En portion på 50 μΐ fjernes fra hvert reagensglas, og exudatceller tælles efter lysering af røde blodceller (med Zapoglobin; Coulter Electronics,

Hialeah FL) ved anvendelse af en Coulter model ZBI

tæller. Den tilbageværende blanding af exudat og phe- 10 nolrødt centrifugeres ved 750 x g i 15 minutter. 100 μΐ af supernatantvæsken fortyndes med 3,9 ml phosphatpuf- fer (0,.072 M tribasisk natriumphosphat, Na3P04,12H20 i vand) og absorbansen måles ved 560 nm.

Exudatvolumen beregnes som følger: 15 V. = V2 *A2 " A3* (A3 - Ax) hvor = ukendt volumen af exudat, V2 = volumen af farvestof sat til kavitet (2 ml), A^ = absorbans af exudat (antaget at være nul), A2 = absorbans af 20 phenolrødt-opløsning, A^ = absorbans af exudat og phenolrødt-opløsning.

Hæmning af exudat eller dannelse heraf beregnes ved følgende ligninger: % hæmning (exudat) = 25 Exuda tvolumen (bærestof) - exuda tvolumen (inhibitor)

Exudatvolumen (bærestof) % hæmning (celletælling) =

Antal celler (bærestof) - antal celler (inhibitor) x 100 Antal celler (bærestof) 30 ID^Q-Værdier beregnes ved probit-analyse.

Eksempel Dosis % Hæmning

nr. mg/kg_Exudat WBC

21 1 20,6 26,9 3 38,3 49,7 35 24 10 24,7 38,3 70 65,6 79,8

DK 160558 B

25

Opfindelsen angår således også et farmaceutisk præparat til behandling af psykoser, smerte, søvnforstyrrelser, inflammation eller hypertension omfattende en tilsvarende antipsykotisk, analgetisk, søvnfrem-5 kaldende, antiinflammatorisk eller antihypertensiv effektiv mængde af en forbindelse med formlen I som defineret ovenfor sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer, samt anvendelse af en forbindelse med formel I til fremstilling af sådanne præparater.

1 0 Til fremstilling af farmaceutiske præparater ud fra forbindelserne ifølge opfindelsen kan indifferente farmaceutisk acceptable bærere være enten faste eller væskeformige. Faste præparater omfatter pulvere, tabletter, dispergerbare granulater, kapsler, cachet-15 ter og suppositorier. En fast bærer kan være et eller flere stoffer, som også kan virke som fortyndingsmidler, smagsstoffer, opløselighedsfremmende midler, smøremidler, suspenderingsmidler, bindemidler eller sprængmidler; den kan også være et ind-20 kapslingsmateriale. I pulvere er bæreren et findelt fast stof, der er blandet med findelt aktiv forbindelse. I tabletten er den aktive forbindelse blandet med bærer, som har de nødvendige sammenbindende egenskaber, i egnede forhold og presset til den ønskede 25 form og størrelse. Pulvere og tabletter indeholder fortrinsvis fra 5 eller 10 til ca. 70% aktiv bestanddel. Egnede faste bærere er magnesiumcarbonat, magnesium-stearat, talkum, sukker, lactose, pectin, dextrin, stivelse, gelatine, tragant, methylcellulose, na-30 triumcarboxymethylcellulose, en lavtsmeltende voks, kakaosmør og lignende. Udtrykket "præparat" skal omfatte formuleringen af aktiv forbindelse med indkaps-

DK 160558 B

26 lingsmateriale som bærer til opnåelse af en kapsel, i hvilken den aktive bestanddel (med eller uden andre bærere) er omgivet af bærer·, som således er i forbindelse med den. Ligeledes omfattes cachetter. Tabletter, 5 pulvere, cachetter og kapsler kan anvendes som faste doseringsformer egnede til oral administrering.

Til fremstilling af suppositorier smeltes først en lavtsmeltende voks, såsom en blanding af fedt-syreglycerider eller kakaosmør, og den aktive bestand-10 del dispergeres homogent deri, f.eks. ved omrøring.

Den smeltede homogene blanding udhældes derefter i forme af egnet størrelse og henstilles til afkøling, hvorved den størkner.

Væskeformige præparater omfatter opløsninger, 15 suspensioner og emulsioner. Som eksempler kan nævnes vand- eller vand-propylenglycol-opløsninger til parenteral injektion. Væskeformige præparater kan også formuleres i opløsning i vandig polyethylenglycolop-løsning. Vandige opløsninger egnet til oral anvendelse 20 kan fremstilles ved opløsning af den aktive bestanddel i vand og tilsætning af egnede farvestoffer, smagsstoffer, stabiliseringsmidler og fortykningsmidler efter ønske. Vandige suspensioner egnet til oral anvendelse kan fremstilles ved dispergering af findelt aktiv be-25 standdel i vand med viskost materiale, dvs. naturlige eller syntetiske gummier, harpikser, methylcellulose, natriumcarboxymethylcellulose og andre velkendte suspenderingsmidler .

Opfindelsen omfatter også faste præparater, 30 der er beregnet til kort før anvendelse at omdannes til væskeformige præparater til enten oral eller parenteral administrering. Sådanne væskeformer omfatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Disse specielle faste præparater foreligger mest hensigtsmæs-35 sigt i enhedsdosisform og anvendes som sådanne til opnåelse af en enkelt væskeformig dosisenhed. Alternativt kan foreligge en så stor mængde fast stof, at der efter omdannelse til væskeform kan opnås flere 27

DK 160558 B

individuelle væskedoser ved afmåling af forudbestemte voluminer af det væskeformige præparat, f.eks. med en sprøjte, teske eller anden volumetrisk beholder. Når der på denne måde fremstilles flere væskeformige doser, 5 er det foretrukkent at opbevare den ubrugte del af væskedoserne ved lav temperatur (dvs. under køling) for at forsinke en mulig nedbrydning. De faste præparater, der er beregnet til omdannelse til væskeform, kan foruden aktivt stof indeholde smagsstoffer, farve-10 stoffer, stabiliseringsmidler, puffere, kunstige og naturlige sødestoffer, dispergeringsmidler, fortykningsmidler, opløselighedsfremmende midler og lignende.

Den væske, som anvendes til fremstilling af det væskeformige præparat, kan være vand, isotonisk vand, etha-15 nol, glycerol, propylenglycol og lignende samt blandinger deraf. Naturligvis vælges den væske, som anvendes, under hensyn til administreringsvejen, f.eks. er væskeformige præparater indeholdende store mængder ethanol ikke egnede til parenteral anvendelse.

20 Det farmaceutiske præparat forekommer for trinsvis i enhedsdosisform. I en sådan form er præparatet opdelt i enhedsdoser indeholdende passende mængder aktiv bestanddel. Enhedsdosisformen kan være et indpakket præparat, hvor indpakningen indeholder ad-25 skilte mængder præparat, f.eks. indpakkede tabletter, kapsler og pulvere i flasker eller ampuller. Enhedsdosisformen kan også være en kapsel, cachet eller tablet i sig selv, eller den kan være et passende antal af en hvilken som helst af disse i indpakket form.

30 Mængden af aktiv forbindelse i et enhedsdosis præparat kan varieres eller indstilles fra 1 mg til 500 mg, fortrinsvis fra 5 til 100 mg, afhængigt af den specielle anvendelse og styrken af den aktive bestanddel . Præparaterne kan om ønsket også indeholde andre 35 hermed forenelige terapeutiske midler.

Ved terapeutisk anvendelse som beskrevet ovenfor er dosisområdet for et pattedyr med en vægt på 70 kg fra 0,1 til 150 mg pr. kg legemsvægt pr. dag, for-

DK 160558 B

28 * trinsvis fra 1 til 50 mg pr. kg legemsvægt pr. dag.

Doserne kan imidlertid varieres afhængigt af patientens krav, alvoren af den tilstand, som behandles, og den forbindelse som anvendes.

5 Bestemmelse af den passende.dosis til en spe ciel situation foretages af' en fagmand. Sædvanligvis startes behandlingen med doser, der er mindre end den optimale dosis af forbindelsen. Derefter forøges dosis langsomt, indtil den optimale effekt under om-10 stændighederne opnås. Af bekvemmelighedsgrunde kan den totale daglige dosis om ønsket opdeles og administreres i portioner i løbet af dagen.

Opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de følgende eksempler.

15

Eksempel 1 (R,S)-N -[1-Tetrahydronaphthyl]-adenosin.

14,3 g (50 mmol) 6-chlorpurin-ribosid blev på en gang sat til en omrørt opløsning af 9,2 g (50 20 romol) tetrahydronaphthyl-l-amin, HCl og 11,1 g (110 mmol) triethylamin i 300 ml ethanol. Opløsningen blev omrørt ved tilbagesvaling i 18 timer. Opløsningen blev afkølet til stuetemperatur og der blev tilsat 300 ml vand til udfældning af forbindelsen. Bundfaldet 25 blev frafiltreret og tørret i vakuum ved 45°C natten over. Det faste stof blev renset ved højtryksvæske-chromatografi, én søjle, eluering med 5% MeOHiCHCl^, 150 ml/min. En komponent blev isoleret ved en afdampning af chromatografisolventet. Den blev tørret i 30 vakuum ved stuetemperatur natten over: udbytte 7,2 g (36%); smp. = 95,5-100°C, 115-120°C.

Analyse (C20H23N5°1^ beregnet: C = 60,44, H = 5,83, N = 17,62 fundet : C = 59,95, H = 5,63, N = 15,73; 35 HPLC (1'ml/min., C - 18 analytisk, 1:1 vand:methanol) retentionstider 72,18, 76,06; 49,8%, 50,2%.

DK 160558 B

29 H*NMR (DMSO-dg, 60 MHz): δ 1,95 (m, 4H) , δ 2,8 (m, 2H), δ 3,65 (m, 2H), δ 3,95 (m, IH), δ 4,15 (m, IH), δ 4,65 (m, IH), δ 5,15 (d, IH), δ 5,35 (br/t, IH), δ 5,4 (d, IH), δ 5,7 (br, 5 IH), δ 5,9 (d, IH), δ 7,15 (s, 4H), 6 8,0 (d, IH), δ 8,25 (s, IH), δ 8,35 (s, IH).

Eksempel 2 g (R) -N -[1-Tetrahydronaphthy1]-adenosin.

10 2,0 g (7 mmol) 6-chlorpurin-ribosid blev på en gang sat til en opløsning af 1,3 g (7 mmol) (R)-l-amino-tetralin, HC1 [V. Ghisland? D. Vercesi; II.

Farmaco.-Ed Ec,; 26(S), 474-486 (1971)] og 2,0 g (20 mmol) triethylamin i 100 ml ethanol. Opløsningen blev 15 omrørt under tilbagesvaling i 13 timer. Opløsningen blev derefter afkølet til stuetemperatur, og opløsningsmidlet blev fjernet i vakuum. Resten blev oparbejdet med 3 x 100 ml vand og derefter inddampet til tørhed sammen med 5 x 100 ml methanol. Det resulterende 20 skum blev tørret under højvakuum ved stuetemperatur natten over; udbytte 1,9 g (68%): smp.: = 113-115°C.

HPLC (1 ml/min., C-18 analytisk, 1:1 vand:methanol): retentionstid 72,26, 100%.

Analyse (C2oH23N5°4^ 25 beregnet: C = 60,44, H = 5,83, N = 17,62 fundet : C = 59,50, H = 6,13, N = 17,60.

HlNMR (DMSO-dg, 200 MHz): δ 1,73-2,0 (m, 4H), δ 2,74 (br/s, 2H), δ 3,47-3,71 (m, 2H), δ 3,95 (m, IH), δ 4,13 (m, IH), δ 4,62 (q, IH), δ 5,18 (d, 30 IH), δ 5,38-5,46 (m, 2H), δ 5,62 (br, IH), δ 5,88 (d, IH), δ 7,09 (s, 4H), δ 8,09 (d, IH), δ 8,24 (s, IH), δ 8,35 (s, IH).

35 Eksempel 3 g (S) -N -[1-Tetrahydronaphthyl]-adenosin.

0,6 g (2,1 mmol) 6-chlorpurin-ribosid blev på en gang sat til en omrørt opløsning af 0,4 g (2,18 mmol) 30

DK 160558 B

(S)-1-amino-tetralin, HC1 [V. Ghisland; D. Vercesi; II. Farmaco.-Ed Sc.; 2(5 (S) , 474-486 (1971)] og 0,4 g (4 mmol) triethylamin i 60 ml ethanol. Opløsningen blev opvarmet under tilbagesvaling i 18 timer. Op-5 løsningen blev derefter afkølet til stuetemperatur, og en lille mængde bundfald blev frafiltreret og bortkastet. Opløsningsmidlerne blev fjernet i vakuum, og resten blev renset ved højtrykschromatografi på silica-gel (1 kolonne, eluering med 5% MeOH:CH2Cl2, 150 ml/min.).

10 En komponent blev isoleret ved afdampning af chromato-grafisolventet; udbytte 0,45 g (54%): smp. = 117-125°C; HPLC (1 ml/min., C-18 analytisk, 1:1 vand:methanol): retentionstider 72,4, 76,6; 7,6%, 92,4%.

Analyse (c2oH23N5°4^ 15 beregnet: C = 60,44, H = 5,83, N = 17,62 fundet : C = 59,46, H = 6,07, N = 17,52.

H^-NMR (DMSO-dg, 200 MHz) : δ 1,7-2,0 (m, 4H) , δ 2,75 (br.s, 2H), δ 3,'47-3,72 (m, 4H), δ 3,95 (m, IH), 6 4,13 (m, IH), δ 4,61 (q, IH), δ 5,18 (d, 20 IH), δ 5,43 (m, 2H), δ 5,63 (br, IH), δ 5,88 (d, IH), δ 7,09 (s, 4H), δ 8,09 (d, IH), δ 8,24 (s, IH), δ 8,35 (d, IH).

25 Eksempel 4 g N-[1-(2-Methyl)-tetrahydronaphthyl]-adenosin.

En opløsning af 2,76 g (14 mmol) l-amino-2-methyltetralin, 3,0 g (30 mmol) triethylamin og 4,0 g (14 mmol) 6-chlorpurin-ribosid i 250 ml ethanol blev 30 omrørt under tilbagesvaling natten over. Opløsningen blev derefter afkølet til stuetemperatur, og ethanolen blev fjernet i vakuum. Resten blev vasket to gange med 250 ml vand. Resten blev inddampet til tørhed sammen med 2 x 100 ml ethanol til opnåelse af et skum. Skummet 35 blev opløst i 10% MeOH: CH2C12 (minimal mængde) og renset ved chromatografi på silicagel; udbytte 3,9 g (68%); smp. = 126-134°C.

DK 160558 B

31

Analyse (C2iH25N5°4^ beregnet: C = 61,30, H = 6,12, N = 17,02 fundet : C = 61,31, H = 6,22, N = 16,84.

5 Eksempel 5 g N -[1-(7-Methoxy)-tetrahydronaphthyl]-adenosin.

En opløsning af 6,1 g (34,4 mmol) l-amino-7-methoxy-tetralin, 8,1 g (80 mmol) triethylamin og 4,3 g (15 mmol) 6-chlorpurin-ribosid i 100 ml ethanol 10 blev opvarmet til tilbagesvaling og omrørt i 48 timer. Opløsningen blev afkølet til stuetemperatur, og opløsningsmidlet blev fjernet i vakuum. Resten blev vasket to gange med vand, og resten blev inddampet til tørhed sammen med 4 x 100 ml methanol til opnåelse 15 af et lysebrunt skum. Skummet blev renset ved chroma-tografi på silicagel ved eluering med 10% MeOHiCI^C^. Hovedkomponenten blev isoleret ved afdampning af chro-matografisolventet og tørret under højvakuum ved stuetemperatur; udbytte 3,9 g (61%); smp. = 95-110°C.

20 Analyse (C2lH25N5°5^ beregnet: C = 59,01, H = 5,90, N = 16,38 fundet : C = 58,70, H = 6,11, N = 16,32.

Udgangsmaterialerne blev fremstillet på følgende måde: 25 En opløsning af 5 g (28,4 mmol) 6-methoxy-te- tralon i 50 ml ethanol blev behandlet med en opløsning af 6,3 g (90 mmol) hydroxylamin,HCl og 7,4 g (90 mmol) natriumacetat i 50 ml vand. Den opnåede opløsning blev opvarmet til tilbagesvaling i 4 timer og afkølet 30 til stuetemperatur. Ethanolen blev fjernet i vakuum, og resten blev omrørt i vand. Bundfaldet blev opsamlet og tørret i vakuum; udbytte 5,2 g (96%). 5,2 g (27,2 mmol) af oximen blev derefter reduceret til aminen med 10% Rh/C i MeOH til opnåelse af den rå amin efter 35 afdampning af opløsningsmidlet; udbytte 6,1 g (125%).

DK 160558B

32

Eksempel 6 g N -[1-(6-Methoxy)-tetrahydronaphthyl]-adenosin.

Titelforbindelsen fremstilles i det væsentlige som beskrevet i eksempel 2, idet 1-aminotetralin er-5 stattes med 6-methoxy-l-aminotetralin; smp. 117-120°C.

Analyse ^21H25N5°5^: beregnet: C = 59, 0, H = 5,89, N = 16,38 fundet : C = 58,49, H = 6,04, N = 16,21.

H^-NMR (DMSO-dø, 200 MHz): i 1,6-2,0 (br.m, 4H), 10 δ 2,7 (br.s, 2H) , δ 3,5-3,8 (br.m.+s, 5H), δ 3,95 (d of d, IH), δ 4.15 -(d of d, IH), δ 4,6 (d of d, IH), δ 5,2 (d, IH), δ 5,4 (m, 2H), δ 5,6 (m, IH), δ 5,85 (d, IH), δ 6,7 (m, 2H), δ 7,05 (m, IH), δ 7,95 (d, IH), δ 8,2 (br.s, IH), 15 δ 8,3 (s, IH).

Udgangsmaterialet blev fremstillet på følgende måde: 20 6-Methoxy-l-tetralinoxim.

En blanding af 11,28 g hydroxylamin-hydrochlo-rid og 13,3 g natriumacetat i 91 ml vand sættes til en opløsning af 10 g 6-methoxy-l-tetralon (Aldrich) i 82 ml absolut ethanol. Blandingen omrøres under til-25 bagesvaling i en time. Reaktionsblandingen afkøles til stuetemperatur, og det faste fundfald frafiltreres, vaskes med kold ethanol og tørres til opnåelse af 9,05 g (83%) af den ønskede oxim med et smeltepunkt på 122-124°C.

30 6-Methoxy-l-aminotetralin.

9,05 g af oximen reduceres katalytisk med 1,0 g 10% Rh/C i 50 ml methanol og 50 ml THF til opnåelse af 7,8 g (93%) af den ønskede amin.

DK 160558 B

33

Eksempel 7 N^-[5-Methoxy-l-tetralinyl]-adenosin.

Titelforbindelsen fremstilles i det væsentlige som beskrevet i eksempel 2, idet 1-amino-tetralin 5 erstattes med 5-methoxy-l-aminotetralin; smp. 87-90°C. Analyse forC^H^N^, V2 C3H8°) beregnet: C = 59,07, H = 6,38, N = 15,31; fundet : C = 59,51, H = 6,10, N = 15,00.

H*NMR (DMSO-dg, 200 MHz); δ 1,6-2,05 (m, 4H), 10 δ 2,6 (br.s, 2H), δ 3,5-3,8 (br.m.+s, 5H), ' δ 3,95 (m, IH), δ 4,15 (m, IH), δ 4,6 (d of d, IH), δ 5,2 (m, IH), δ 5,4 (m, 2H), δ 5,9 (d, IH), δ 6,8 (t, 2H), δ 7,05 (t, IH), δ 8,05 (m, IH), δ 8,2 (br.s, IH), δ 8,3 (s, IH).

15

Udgangsmaterialet blev fremstillet på følgende måde: 4,11 g (23,32 mmol) 5-methoxytetralon blev opløst i 100 ml ethanol. 5,84 g (70,94 mmol) methoxy-20 amin-hydrochlorid og 5,82 g (70,94 mol) natriumacetat blev opløst i 500 ml vand og sat til ketonopløsningen.

Efter tilbagesvaling i 4 timer blev ethanolen fjernet, og den vandige opløsning blev ekstraheret med chloroform. Ved koncentration af det organiske lag opnåedes 25 oximetheren med smp. 33-34°, kogepunkt 193°.

4,64 g (2,26 mmol) 5-methoxy-l-methyloximether-tetralin blev sat til 50 ml vandfri THF og afkølet til 0° under nitrogenatmosfære. Der blev dråbevis tilsat 113 ml (5 ækvivalenter) 1 N diboran (THF-opløsning).

30 Efter omrøring i 1 time blev reaktionen afsluttet med methanol. Opløsningsmidlerne blev fjernet,hvorefter der blev tilsat 50 ml 6 N HCl. Efter omrøring i 1/2 time blev opløsningen gjort basisk med kaliumcarbonat og ekstraheret med ether. Efter tørring blev flygtige 35 stoffer fjernet til opnåelse af 5-methoxy-1-amino-tetralin med smp. 22-25°C. Dette materiale anvendes som sådant til fremstilling af titelforbindelsen.

DK 160558 B

34

Eksempel 8 g (R)-N -(7-Methoxy-l-tetralinyl)-adenosin.

5,8 g (17,7 mmol) af saltet A fremstillet som beskrevet nedenfor blev hydrolyseret i 100 ml 5 1 N NaOH og isoleret ved ekstraktion med CHCl^ (3 x 75 ml) og inddampning af opløsningen til opnåelse af 3,1 g fri base. Den frie amin blev opløst i 15,0 ml ethanol, og der blev tilsat 4,0 g (40 mmol) triethyl-amin og 3,6 g (12,5 mmol) 6-chlorpurin-ribosid. Opløs-10 ningen blev opvarmet til tilbagesvaling i 24 timer.

Ethanolen blev fjernet i vakuum, og resten blev opløst i 5%. MeOH/CI^C^ og renset ved præparativ 500A chroma-tografi (silicagel, 1 søjle, 200 ml/min.) til opnåelse af en enkelt fraktion, som kunne iagttages ved måling 15 af brydningsindeks. Opløsningsmidlet blev afdampet i vakuum, og resten blev tørret under højvakuum ved stuetemperatur i 1 time til opnåelse af 3,6 g (68%) af et hvidt fast stof; smp. = 128-130°C.

Analyse for (C2iH25N5°5'0/ 2MeOH) 20 beregnet: C = 58,69, H = 6,00, N = 16,14; fundet : C = 58,32, H = 5,68, N = 16,38.

[alD = -45,7 (c = 0,87, DMF)

Eksempel 9 g 25 (S)-N -(7-Methoxy-l-tetralinyl)-adenosin.

5,2 g (17,0 mmol) af saltet B fremstillet som beskrevet nedenfor blev hydrolyseret i 100 ml IN NaOH og isoleret ved ekstraktion med chloroform og afdampning af opløsningsmidlet til opnåelse af 2,6 g af fri 30 base. 2,6 g (15 mmol) af den frie amin, 2,0 g (20 mmol) triethylamin og 3,4 g (12 mmol) 6-chlorpurin-ribosid blev opvarmet til tilbagesvaling i 150 ml ethanol natten over. Opløsningen blev inddampet, indtil den fra fri for ethanol, resten blev behandlet med 2 x 35 300 ml vand, og vandet fjernet ved dekantering. Resten blev inddampet til tørhed med 4 x 100 ml MeOH. Det resulterende skum blev tørret under højvakuum ved 65°C natten over til opnåelse af 4,6 g (90%) af et hvidt

DK 160558 B

35 fast stof med smp. 171,5-174°C.

Analyse for (^23^25^0^, 0,7MeOH) beregnet: C = 57,93, H = 6,23, N = 15,57* fundet : C = 58,13, H = 6,05, N = 15,54.

5 [a]D = -67,5 (c = 1,13, DMF)

Udgangssaltene A og B for de i eksempel 8 og 9 beskrevne fremgangsmåder fremstilles som følger:

Spaltning af 7-methoxy-l-tetralinylamin.

10 56 g (316 mmol) 7-methoxy-l-aminotetralin og 47,4 g (316 mmol) L-(d)-(+)-vinsyre opvarmes til tilbagesvaling i 800 ml vand, reduceres i vakuum til ca. 250 ml og afkøles til 0°C til udfældning natten over. Bundfaldet opsamles ved filtrering og tørres ved 15 65°C i vakuum i 6 timer til opnåelse af 63 g af et hvidt fast stof. 62 g af det faste stof genopløses i 300 ml vand i 100°C og afkøles til 0°C til udfældning natten over. Det nye bundfald opsamles ved filtrering og tørres ved 65°C i vakuum i 6 timer til opnåelse 20 af 33 g af et hvidt fast stof. 32,5 g af det faste stof blev igen omkrystalliseret fra 250 ml vand som ovenfor til opnåelse af 15,7 g. Omkrystallisationen blev gentaget yderligere tre gange, se følgende tabel 1, til opnåelse af 6,5 g rent hvidt fast stof, salt A.

25 26 g (0,146 mol) af aminen og 22 g (0,146 mol) D-(i)-(-)-vinsyre blev opvarmet til tilbagesvaling i 100 ml vand og afkølet til 0°C til udfældning natten over. Aminsaltet blev omkrystalliseret som beskrevet ovenfor ifølge tabel 2 til opnåelse af 6,0 g af et 3C rent hvidt fast stof, salt B.

36

DK 160558 B

O

in o r- æ r- 03 c_> Τί ™ U co o o o o o o 7 £ £ o ι—I CM CM CM CM CM . 177 * I I I I I I O, , Λ 1 gj oooor^ior^ g 1 „Λ ® ^ S co σι o o o o ω w *”< i—I CM CM CM CM ?.Μ04

• <N

e s: x o c o c © © © er ΣΣΣΕΧΕ -9,,.

0 0 0 O £ O

VO VO Cl Σ £ £ © ©

O O r-t *· * 3E

Q _T -T 'H -H -H Q I Ή » -h Μ M B' tr> bi —> Cn O g1 b O O O .H -H -H S ·Η ·Η "—1 w ^ Η H rH 1—' Η ο ^ — - ^ωωω © —. © C^OP'ojyjuj m to ® _Τ -θ- -a -θ. «. ττ "©· rT S d H Η Η ηΤ,Η + + + ooo ·ο ο •ρ ο σ> σι σ> σ« μ-> ο σι σι σ ©ρω σι ο c νο m m ©ρω σ^σ»ο %Ά» ; S ί " s » §η4. « « β* «τ ίοω « η ^ η π μ βοω ,η Η β) ω ιϋ ίΰ ω to S-HP Η £ ·Η Ή .Η © © £t Λ π3 rt Εη Εη Ό nd S *“1 ιΗ »H pH ιΗ _i _i _j ? ...... S Ills I § s s ip m o o -Ρ ·ρ σι σι σι mjmj οι "ό © ω Ό © ω CO Ο Λ ν η o grø nif'-P*· © gi-P ·— * ·» © Οι-Ρ ·> ·* > c ω ι cm cm m m ο >ΰω ι μ > ιβ ΰ||ΰ νο η ^ ^ ^ θίΰ<0 «-μ <3 S *w C g <ρ η α •2 .2 9 -Ρ ω * “ ω !ΐ ^ Π γΡ Ή · Η · (OP r-HCMm^invo nj ^ cm ο τρ

ω β +> S

>. 5, Η ρ -¾ χ ° 8

DK 160558 B

37

Eksemplerne 10 og 11 (R,S)-5-Methoxy-l-aminotetralin blev spaltet ved behandling af den frie base med et molækvivalent R-N-acetyl-3,4-dimethoxyphenylalanin efterfulgt af 5 gentagne omkrystallisationer af saltene i ethanol.

(S) -5-Methoxy-l-aminotetralin-N-acetyl-3,4-dimethoxyphenylalaninsalt har smp. 214-215°C.

(R)-5-Methoxy-l-aminotetralin-N-acetyl-3,4-dimethoxyphenylalaninsalt har smp. 199-201°C.

10 De individuelle salte blev omdannet til den frie base og omsat med 6-chlorpurin-ribosid som beskrevet i eksempel 2.

Eksempel 10 g 15 (S)-N -[5-Methoxy-l-tetralinyl]-adenosin, smp. 100-101°C.

Eksempel 11 g (R)-N - 5-Methoxy-l-tetralinyl]-adenosin, 20 smp. 227-228°C.

Eksempel 12 g N -(1-Tetralinyl)-21,3'-O-isopropyliden-adenosin.

15,0 g (37,7 mmol) N^-(1-tetralinyl)-adenosin, 25 14,1 g (41 mmol) bis-p-nitrophenyl-phosphat-hydrat og 42 ml dimethoxypropan blev omrørt ved stuetemperatur i 300 ml acetone under ^ natten over. Reaktionen blev afbrudt med 100 ml mættet natriumbicarbonat, og opløsningen blev omrørt i 2 timer. Acetonen blev fjer-30 net i vakuum, og den vandige opløsning blev ekstraheret med 3 x 200 ml methylenchlorid. Den organiske opløsning blev tørret over MgSO^, og opløsningsmidlet blev fjernet i vakuum. Resten blev opløst i methanol og filtreret gennem en Dowex-kolonne (1 x 8.400 mesh) (natriumbi-35 carbonatskum) og elueret med ialt 1 liter methanol.

Methanolen blev afdampet i vakuum til opnåelse af et hvidt skumagtigt fast stof, som blev inddampet sammen med 2 x 50 ml acetone og tørret under højvakuum ved

DK 160558 B

38 stuetemperatur i 3 timer til opnåelse af 14,9 g (90%) af et hvidt skum med smp. 95-98°C.

Analyse for (C23H27N5°4,0/^ acetone); beregnet: C - 63,11, H = 6,36, N = 15,50; 5 fundet : C = 63,47, H = 6,48, N = 15,45.

Eksempel 13 g N -(1-Tetralinyl)-51-benzoyladenosin.

4,3 g (10 mmol) af isopropylidenanalogen frem-10 stillet som beskrevet i eksempel 12 blev opløst i 20 ml pyridin og behandlet med 2,0 g (15 mmol) benzoyl-chlorid, og opløsningen blev omrørt ved stuetemperatur natten over. Pyridinen blev fjernet i vakuum, og resten blev opløst i 100 ml methylenchlorid. Den organiske 15 opløsning blev vasket efter hinanden med 100 ml IN

HC1, 100 ml vand og 100 ml af en mættet saltopløsning og tørret over MgSC>4. Opløsningsmidlet blev fjernet i vakuum, og resten blev renset ved præp. 500Δ chroma-tografi (1 søjle, 100 ml/min., EtOAc, silicagel) til 20 opnåelse af en hovedfraktion (ved brydningsindeks). Opløsningsmidlet blev afdampet i vakuum til opnåelse af 3,8 g af et hvidt skum. 2,8 g (5,2 mmol) af skummet blev derefter hydrolyseret i 100 ml 50% myresyre ved 50-60°C i seks timer. Syrerne blev fjernet i vakuum, 25 og resten blev inddampet til tørhed med 3 x 50 ml methanol. Det resulterende skum blev renset ved præp.

500A chromatografi (1 søjle, silicagel, 150 ml/min.) til opnåelse af en hovedfraktion (ved brydningsindeks).

Denne fraktion blev isoleret ved afdampning af acetone 30 og opløst i 100 ml methylenchlorid. Den organiske opløsning blev vasket med 100 ml vand og tørret over MgSC>4 og inddampet i vakuum til opnåelse af et hvidt skum, som blev tørret under højvakuum i 1 time til opnåelse af 1,2 g (33%) af et hvidt fast stof med smp.

35 107-112°C.

Analyse for (C27H27N^O,-,0,15CH2C12) ; beregnet: C=63,40, H = 5,35, N = 13,62; fundet : C = 63,69, H = 5,19, N = 13,61.

39

Eksempel 14

DK 160558 B

g N - (1-Tetralinyl)-51-O-(O-acetylsalicoyl)adenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet på i det væsentlige samme måde som 5'-benzoyl-forbindelsen ud 5 fra 4,3 g (10 mmol) isopropylidenanalog og 2,6 g (13 mmol) O-acetylsalicoylchlorid til opnåelse efter hydrolyse med myresyre af 0,9 g (17%) af et hvidt fast stof med smp. 93-98°C.

Analyse for (C29H29N5°7,0,6H20) ; 10 beregnet: C = 61,07, H = 5,34, N = 12,28; fundet : C = 61,27, H = 5,21, N = 12,19.

Eksempel 15 N^-(1-Tetralinyl)-5'-acetyl-adenosin.

15 Titelforbindelsen blev i det væsentlige frem stillet på samme måde som 5'-benzoylforbindelsen ud fra 2,5 g (5 mmol) af isopropyliden-analogen og 0,6 g (6 mmol) eddikesyreanhydrid. Herved opnåedes efter hydrolyse med myresyre 0,55 g af et hvidt fast stof 20 med smp. 87-97°C.

Analyse for (C22H25N5°5'°'35MeOH^' beregnet: C = 59,56, H = 5,90, N = 15,54 fundet : C = 59,75, H = 5,95, N = 15,53.

25 Eksempel 16 g N -[1-(5-Hydroxy)-tetrahydronaphthyl]-adenosin.

Titelforbindelsen fremstillet i det væsentlige som beskrevet i eksempel 2, idet 1-aminotetralin erstattes med 5-hydroxy-l-aminotetralin; smp. 136-138°C.

30 Analyse for (C20H23N5°5'0'9H2°^f beregnet: C = 55,91, H = 5,60, N = 16,30; fundet : C = 55,90, H = 5,62, N = 15,94.

Eksempel 17 g 35 N -[1-(7-Hydroxy)-tetrahydronaphthyl]-adenosin.

Titelforbindelsen fremstilles i det væsentlige som beskrevet i eksempel 2, idet 1-aminotetralin erstattes med 7-hydroxy-l-aminotetralin; smp. 145-147°C.

40

Analyse for (C20H23N5°5^; beregnet:C =51,11, H = 5,60, N = 16,93; fundet : C = 58,11, H = 6,11, N = 16,35.

5 Eksempel 18 g N -[1-(5,7-Dimethyl)-tetrahydronaphthyl]-adenosin.

Titelforbindelsen fremstilles som beskrevet i eksempel 2, idet 1-aminotetralin erstattes med 5,7-dimethyl-l-aminotetralin; smp. 130-132°C.

10 Analyse for (C22H27N5°4'0'5C2H5OH)' beregnet: C = 61,59, H = 6,74, N = 15,61; fundet : C = 61,89, H = 6,70, N = 15,45.

Eksempel 19 g 15 N -l-Tetralinyl-2' ,3',51-trietho’xycarbonyl-adenosin.

g 3,9 g (10 mmol) N -1-tetralinyladenosin blev anbragt i 25 ml pyridin og langsomt ved stuetemperatur behandlet med 6,5 g (60 mmol) ethylchlorformiåt. Opløsningen blev omrørt ved stuetemperatur natten over.

20 Pyridinen blev fjernet i vakuum, og resten blev opløst i 100 ml methylenchlorid og vasket efter hinanden med 100 ml IN HC1, 100 ml vand og 100 ml mættet saltopløsning. Den organiske opløsning blev tørret over MgS04, og filtreret, og opløsningsmidlet blev fjernet 25 i vakuum til opnåelse af et farvet skum. Skummet blev opløst i 25 ml EtOAc/CH2Cl2 (7:3) og renset ved præp. 500A chromatografi (silicagel, 1 søjle, 150 ml/min.). Den hurtigt løbende fraktion blev isoleret ved afdampning af opløsningsmidler, og resten blev inddampet en 30 gang med 30 ml acetone til opnåelse af 1,6 g (26%) af et hvidt skum; smp. 60-63°C.

Analyse for (Ο^Η^Ν,-Ο^, 0,75 acetone); beregnet: C = 57,11, H - 6,06, N = 10,66 fundet : C = 57,90, H = 5,87, N = 10,94.

35 'HNMR: δ 1,1-1,25 (m, 9H); δ 1,6-2,1 (m, 4H); δ 2,7-2,8 (m, 2H); δ 4,02-4,3 (m, 63); S 4,4-4,5 (m, 3H); δ 5,60-5,7 (m, 2H);

DK 160558 B

41 δ 5,.99 (t, J=5,5 Hz, IH); δ 6,26 (d, J=5,3 Hz, lH); 5 7,15 (br.s, 4H), δ 8,15 (d, J=9 Hz, IH), 6 8,25 (s, IH), δ 8,31 (s, IH).

5 Eksempel 20 N^-1-Tetralinyl-5'-benzylether-adenosin.

g

Trin 1. N -1-Tetralinyl-0-2',3 *-isopropyliden-adenosin.

100 ml dimethoxypropan, 35,2 g (89 λπίοΙ) N6-1-te- tralinyl-adenosin og 32,6 g (96 mmol) bis-p-nitrophe-1 Ω nyl-phosphat-hydrat blev omrørt under ^-atmosfære ved stuetemperatur natten over. Reaktionen blev afbrudt med 100 ml mættet natriumbicarbonatopløsning, og acetonen blev fjernet i vakuum. Den vandige opløsning blev fortyndet med 300 ml vand og ekstraheret 1 s med 400 ml methylenchlorid. Den organiske opløsning blev vasket med 400 ml vand og tørret over MgSO^. Opløsningsmidlerne blev fjernet i vakuum, og resten blev opløst i 50 ml methanol. Den methanoliske opløsning blev ledt gennem en prop af Dowex (1x8, ammo- 20 niumbicarbonatform), og der blev vasket med 400 ml methanol. Methanolfiltraterne blev kombineret og inddampet til tørhed i vakuum til opnåelse af 30 g (78%) af et lyserødt skum.

Analyse for ^23^27^04); ^ beregnet: C = 63,14, H = 6,22, N = 16,01; fundet : C = 63,44, H = 6,26, N = 16,00.

g

Trin 2. N -1-Tetralinyl-51-benzyloxy-2*,3'-0-isopropy- liden-adenosin.

30 7,7 g (17,6 mmol) af isopropylidenforbindelsen

som fremstillet i Trin 1 ovenfor blev opløst i 80 ml THF

og 20 ml DMF, og opløsningen blev behandlet med 0,63 g (26,4 mmol) natriumhydrid. Opløsningen blev omrørt i en time og derefter behandlet med 4,5 g (26,4 mmol) benzyl-35 bromid, hvorefter den opnåede opløsning blev omrørt ved

DK 160558 B

42 stuetemperatur natten over. Reaktionen blev standset ved tilsætning af 100 ml vand, hvorefter THF fjernedes under vakuum. Den vandige remanens blev vasket med 2 x 100 ml methylenchlorid, hvorefter den organiske fase 5 i rækkefølge blev vasket med 100 ml 1 N HC1, 100 ml vand og 180 ml af en mættet saltopløsning, tørret over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev bortfordampet under vakuum til opnåelse af et olieagtigt skum, som i skilletragt blev behandlet med 25 ml ethylacetat og renset ved 10 præp 500A chromatografi (silicagel, 2 kolonner, 200 ml/ minut). Den vigtigste, langsomtløbende, fraktion isolere-des, og opløsningsmidler fjernedes under vakuum til opnåelse af 5,9 g af et hvidt skum (63%).

Analyse for (C3qH33N504^: 15 beregnet: C = 68,29, H = 6,30, N = 13,28; fundet : C= 68,47, H= 6,01, N = 12,90.

g

Trin 3. N -1-Tetralinyl-51-benzylether-adenosin.

5,4 g (10,2 mmol) af isopropylidenanalogen 20 fremstillet som beskrevet ovenfor under Trin 2, blev anbragt i 150 ml 50% myresyre og omrørt ved 50°C i 6 timer. Syre/vand blev fjernet i vakuum, og resten blev opløst i 30 ml acetone. Opløsningen blev renset ved præp. 500A chromatografi (silicagel, 1 søjle, 25 150 ml/min.). Den hurtigt løbende fraktion blev isoleret og inddampet i vakuum til opnåelse af et olieagtigt halvfast stof. Det halvfaste stof blev opløst i methylenchlorid og vasket med mættet saltopløsning, hvorefter det blev tørret over MgSO.. Opløsningsmidler- 30 4 ne blev afdampet i vakuum, og der blev inddampet en gang med 30 ml tør acetone. Resten blev tørret under højvakuum i 1 time til opnåelse af 2,1 g (42%) af et hvidt fast stof med smp. 78-84°C.

Analyse for (^27Η29Ν504'^'^ acetone); ^ beregnet: C = 66,15, H = 6,36, N = 13,19; fundet : C = 65,79, H = 5,89, N = 13,48.

43

Eksempel 21

DK 160558 B

g N -[Indan-1-yl]methyl-aaenosin.

En blanding af 3,0 g 6-chlorpurin-ribosid, 2,0 g 1-indanylmethylamin fremstillet som beskrevet 5 i eksempel A nedenfor og 3,18 g triethylamin blev til-bagesvalet i 75 ml absolut ethanol under nitrogen i 24 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur, udfældet nucleotid blev frafiltreret, vasket med ethanol og tørret til opnåelse af 2,78 g g 10 (67%) N -[indan-1-yl]methyl-adenosin med smp. 137-139°C.

Analyse for C20H23N5°4 beregnet: C = 60,44, H = 5,83, N = 17,62; fundet : C = 60,81, H = 5,70, N = 17,35.

15

Eksempel 22 g N -[lH-inden-3-yl]methyl-adenosin.

En reaktionsblanding bestående af 1,4 g 6-chlorpurin-ribosid, 1,6 g [lH-inden-3-yl]methylamin frem-20 stillet som beskrevet i eksempel E nedenfor og 1,5 g triethylamin i 150 ml ethanol blev tilbagesvalet i 24 timer. Flygtige stoffer blev afdampet under reduceret tryk, og resten blev renset på Præp. 500A ved anvendelse af en forudpakket silicagelsøjle og 10% methanol-25 dichlormethan som eluent med en strømningshastighed på 150 ml/min. Ved afdampning af opløsningsmiddel g fra rene fraktioner opnåedes 0,43 g (22%) N -[lH-inden- 3-yl]methyl-adenosin med smp. 200-202°C.

DK 160558 B

44

Analyse for C20H21N5°4'0,3 CH^OH beregnet: C 60,20, H = 5,53, N = 17,29; fundet : C 60,49, H = 5,44, N = 17,25.

5 Eksempel 23 g N -[1,2,3,4-Tetrahydro-l-hydroxy-l-naphthalenyl]methyl-adenosin.

En reaktionsblanding bestående af 1,7 g 6-chlor-purin-ribosid, 1,7 g (1,2,3,4-tetrahydro-l-hydroxy-10 naphthyl)methylamin, fremstillet som beskrevet i eksempel B nedenfor, og 2,0 g triethylamin blev tilbage-svalet i.150 ml ethanol i 24 timer. Flygtige stoffer blev afdampet til tørhed, og resten blev behandlet med 150 ml koldt vand. Den klare vandige opløsning blev 15 fradekanteret. Behandlingen med vand blev gentaget to gange efterfulgt af opløsning af resten i methanol og inddampning til tørhed. Ved inddampning flere gange med methanol opnåedes et fast stof. Det blev tørret under reduceret tryk til opnåelse af 2,2 g (85%) g 20 N -[1,2,3,4-tetrahydro-l-hydroxy-l-naphthalenyl]methyl-adenosin med et smp. på 110-115°C.

Analyse for C2H^OH

beregnet: C = 58,65, E - 6,26, N = 15,55; fundet : C = 59,27, H = 6,34, N = 15,53.

25

Eksempel 24 g N -[3,4-Dihydro-l-naphthalenyl]methyladenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsenlige som beskrevet i eksempel 21, idet 1-indanyl-30 methylamin blev erstattet med [3,4-dihydro-l-naphthyl]-methylamin fremstillet som beskrevet i eksempel F nedenfor; smp. 131-134°C.

Analyse for ^21H23H5^4 beregnet: C = 61,60, H = 5,66, N = 17,11 35 fundet : C = 61,33, H = 5,62, N = 16,86.

45

Eksempel 25 6

DK 160558 B

N -[1-hydroxyinaan-1-yLJmethyladenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i eksempel 23, idet (1,2,3,4-5 tetrahydro-l-hydroxynaphthyl)methylamin blev erstattet med 1-(l-hydroxyindanyl)methylamin fremstillet som beskrevet i eksempel C nedenfor. Udbytte 55%, smp.

125-127°C.

Analyse for C2oH23N5°5'®'^ C2H^OH 10 beregnet: C=57,67, H = 6,15, N = 15,71 fundet : C=58,04, H = 5,94, N = 15,45.

Eksempel 26 N^-[1-Benzocycloheptenyl)methyladenosin.

15 Titelforbindelsen blev fremstillet i det væ sentlige som beskrevet i eksempel 21, idet 1-indanyl-ethylamin blev erstattet med (1-benzocycloheptenyl)-methylamin fremstillet som beskrevet i eksempel G nedenfor. Udbytte 63%, smp. 165-168°C.

20 Analyse for C22H23N^O^,0,6 H20 beregnet: C = 60,84, H = 6,08, N = 16,13 fundet : C = 60,61, H = 5,97, N = 16,21.

Eksempel 27 g 25 N -[1-Hydroxy-l-benzocyclohepty1)methyladenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væsentlige som beskrevet i eksempel 23, idet (1,2,3,4-tetrahydro-l-hydroxynaphthyl)methylamin blev erstattet med (1-hydroxy-l-benzocycloheptyl)methylamin fremstil-30 let som beskrevet i eksempel D nedenfor. Udbytte 95%, smp. 177-180°C.

Analyse for C^H^N^O,- ,C2H^OH beregnet: C = 59,12, H = 6,82, N = 14,36 fundet : C =59,29, H = 6,81, N = 14,33.

35

Eksempel 28 g N -[1-Benzocycloheptyl)methyladenosin.

Titelforbindelsen blev fremstillet i det væ-

DK 160558B

46 sentlige som beskrevet i eksempel 21, idet 1-indanyl-methylamin blev erstattet med (1-benzocycloheptyl)-methylamin fremstillet som beskrevet i eksempel H nedenfor. Udbytte 77%, smp. 120-125°C.

5 Analyse for C22H27N5°4'0'6 H2° beregnet: C = 60,56, H = 6,52, N = 16,05 fundet : C = 60,74, H = 6,72, N = 15,82

Fremstilling af de respektive sidekæde-aminer er beskrevet nedenfor.

10

Eksempel A

1-Indanylmethylamin.

Til en suspension af 32 g 1-indancarboxylsyre i 50 ml tør toluen sættes 94 g (58 ml) thionylchlorid, 15 og blandingen opvarmet til 90°C i 4 timer. Reaktionsblandingen afkøles til stuetemperatur, og overskud af thionylchlorid fjernes under reduceret tryk. Den tilbageværende væske udhældes langsomt i 150 ml kold vandig ammoniumhydroxid. Udfældet fast stof frafiltre-20 res, vaskes med vand og tørres under reduceret tryk til opnåelse af 31,3 g (98%) 1-indancarboxamid med smp. 151-154°C.

Til en opløsning af 150 ml diboran (1M i THF) i 250 ml tør THF sættes langsomt 10 g 1-indancarbox-25 amid. Reaktionsblandingen omrøres under tilbagesvaling i 3 timer, afkøles til stuetemperatur og oparbejdes ved langsom tilsætning af 150 ml IN HC1. THF aides til leres under reduceret tryk, og den vandige opløsning indstilles til pH ca. 13 ved tilsætning af NaOH.

30 Den ekstraheres med 2 x 300 ml ethylacetat. Den organiske ekstrakt vaskes med 1 x 100 ml vand, tørres over MgS04, filtreres og inddampes til tørhed til opnåelse af 6,5 g (71%) 1-indanylmethylamin. Denne blev anvendt i den efterfølgende reaktion.

35

Eksempel B

(1-Hydroxy-l,2,3,4-tetrahydronaphthyl)methylamin.

5 1/2 g trimethylsilylcyanid sættes til en

DK 160558 B

47 blanding af 7,3 g 1-tetralon og 10 mg zinkiodid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. Den opløses i 25 ml tør THF og sættes langsomt til en suspension af 2,3 g lithiumaluminiumhydrid i 40 ml 5 THF. Reaktionsblandingen tilbagesvales i 3 timer, og efter afkøling afbrydes reaktionen omhyggeligt med vand. Bundfaldet frafiltreres, og den vandige opløsning fortyndes med 100 ml IN NaOH. Den ekstra-heres med 3 x 100 ml ether, tørres over vandfrit MgSO^ 10 og filtreres, og etheren afdampes til opnåelse af en olie, der størkner ved henstand til 6,4 g (73%) (1-hy- droxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthyl)methylamin.

Eksempel C

15 1-(1-Hydroxy-indanyl)methylamin.

Titelforbindelsen fremstilles i det væsentlige som beskrevet i eksempel B, idet 1-tetralon erstattes med 1-indanon. Udbytte 60%.

2 0 Eksempel D

(1-Hydroxy-l-benzocycloheptyl)methylamin.

Titelforbindelsen fremstilles i det væsentlige som beskrevet i eksempel B, idet 1-tetralon erstattes med 1-benzosuberon. Udbytte 92%. Aminen anvendes som 25 sådan ved den følgende reaktion.

Eksempel E

(IH-Inden-3-yl)methylamin,hydrochlorid.

2,3 g 1-hydroxyindanylmethylamin opløses i 100 30 ml ethanol mættet med HC1. Reaktionsblandingen tilbagesvales natten over. Den afkøles til stuetemperatur, og flygtige stoffer afdampes under reduceret tryk.

Resten omrøres med 300 ml vandfri ether. Udfældet fast stof frafiltreres og tørres til opnåelse af 2,2 g (85%) 35 (lH-inden-3-yl)methylamin-hydrochloridet med et smeltepunkt på 245°C (sønderdeling).

DK 160558 B

. 48

Eksempel F

[3,4-Dihydro-l-naphthy1]methylamin,HCl.

Titelforbindelsen fremstilles i det væsentlige som beskrevet i eksempel E, idet 1-hydroxyindanylme-5 thylamin erstattes med 1-hydroxytetrahydronaphthyl-methylamin. Udbytte 78%, smp. 189-191°C.

Eksempel G

(1-Benzocycloheptenyl)methylamin,HCl.

10 Titelforbindelsen fremstilles i det væsentlige som beskrevet i eksempel E, idet 1-hydroxyindanyl-methylamin erstattes med 1-hydroxybenzocycloheptyl-methylamin. Udbytte 74%, smp. 197-200°C.

15 Eksempel H

(1-Benzocyclohepty1)methylamin,HCl.

1 g af amin-hydrochloridet fremstillet som beskrevet i eksempel G hydrogeneres over 5% Pd/C i 100 ml methanol ved stuetemperatur og 50 psi i 21 20 timer. Katalysatoren frafiltreres og vaskes med methanol. Flygtige stoffer fjernes under reduceret tryk fra filtratet. Resten behandles med 200 ml ether. Udfældet fast stof frafiltreres og tørres til opnåelse af 0,95 g (95%) af amin-hydrochloridet, smp.

25 183-185°C.

49

DK 160558 B

Skema

Cl

Cu . r3‘0 or2·

IV

x - \ ^ (i| 2' a Π eller

X1' Y X* *X\H

Λ 'Nh NH2

V 2 VI

Å3 R‘30 OR-,·

Claims (10)

10 Vf R'jO OR'2 hvori R^ har formlen / /*» / / χ. V Nnh XI III * 20 hvori n er en til tre; Z betegner hydrogen eller lavere alkyl; Y betegner hydrogen eller hydroxy; A betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med fra 1 til 4 carbonatomer eller, når R1 har formlen II, og n er 2 25 1 eller 3, en binding; X og X' betegner hver især uafhængigt hydrogen, lavere alkyl, lavere alkoxy eller hydroxy; R'2' r*3 °9 r,5 betegner hver især uafhængigt hydrogen, alkanoyl med fra 2 til 12 carbonatomer i en ligekædet eller forgrenet alkylkæde, ethoxycarbonyl, 30 benzyl, benzoyl eller benzoyl substitueret med lavere alkanoyloxy, eller R'2 og R'^ betegner sammen en alky-lidengruppe med i alt op til 20 carbonatomer; diastereo-mere heraf; eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt heraf. 35 DK 160558 B 51

2. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter en terapeutisk effektiv mængde af en forbindelse ifølge krav 1 sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer.

3. Farmaceutisk præparat til behandling af psykoser hos et pattedyr, kendetegnet ved, at det er et præparat ifølge krav 2 på enhedsdosisform.

4. Farmaceutisk præparat til behandling af søvnforstyrrelser hos et pattedyr, kendetegnet 10 ved, at det er et præparat ifølge krav 2 på enhedsdosisform.

5. Farmaceutisk præparat til behandling af hypertension hos et pattedyr, kendetegnet ved, at det er et præparat ifølge krav 2 på enhedsdosisform.

6. Farmaceutisk præparat til behandling af smerte hos et pattedyr, kendetegnet ved, at det er et præparat ifølge krav 2 på enhedsdosisform.

7. Farmaceutisk præparat til behandling af immuninflammation hos et pattedyr, kendetegnet ved, 20 at det er et præparat ifølge krav 2 på enhedsdosisform.

8. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1 til fremstilling af et farmaceutisk præparat med indikation som angivet i et hvilket som helst af kravene 3-7.

9. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbin- 25 delse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at et 6-halogenpurin-ribosid med formlen Hal 00

30 IV R'jO 0R'2 DK 160558 B 52 hvori Hal betegner halogen og de øvrige variable er som defineret i krav 1, omsættes med en amin med formlen X* · Y A v« s xnh2 λ ^NH2 V VI 10 hvori de variable er som defineret i krav 1, i et indifferent opløsningsmiddel mellem 25 og ca. 130°C i fra 1 til 48 timer, og at den resulterende frie base om ønsket ved kendte fremgangsmåder omdannes til et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt.