DK161200B

DK161200B - 11-substituerede 5,11-dihydro-6h-pyridooe2,3-baaoe1,4aa-benzodiazepin-6-oner, fremgangsmaade til fremstilling heraf, laegemiddel indeholdende en saadan forbindelse samt anvendelse af en saadan forbindelse tilfremstilling af laegemidler

Info

Publication number: DK161200B
Application number: DK302486A
Authority: DK
Inventors: Wolfgang Eberlein; Guenter Trummlitz; Wolfhard Engel; Gerhard Mihm; Rudolf Hammer; Norbert Mayer; Antonio Giachetti; Adriaan De Jonge; Helmut Ballhause
Original assignee: Thomae Gmbh Dr K
Priority date: 1985-06-27
Filing date: 1986-06-26
Publication date: 1991-06-10
Also published as: EP0213293A2; GR861637B; NO862584L; FI862694A0; EP0213293A3; NZ216670A; EP0213293B1; CA1269374A; PT82848B; US4724236A; FI862694L; DK302486A; DK161200C; DK302486D0; NO163099B; ES2000170A6; AU582249B2; HUT42090A; ATE71097T1; DE3683217D1

Description

DK 161200 B

Opfindelsen angår hidtil ukendte 11-substituerede 5,11-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-oner, deres isomere og farmakologisk acceptable salte med uorganiske eller organiske syrer, fremgangsmåder til deres 5 fremstilling, lægemidler indeholdende disse forbindelser samt anvendelse af disse forbindelser til fremstilling af lægemidler.

Fra EP-A-0 039 519 og 0 057 428 såvel som fra US-A 3.660.380; 3.691.159; 4.213.984; 4.213.985; 4.210.648; 10 4.410.527; 4.424.225; 4.424.222 og 4.424.226 kendes alle rede kondenserede diazepinoner med mavesårshæmmende og mavesaftssekretionshæmmende egenskaber.

Man har nu fundet, at diazepinonerne ifølge opfindelsen med nye substituenter i 11-stillingen i for- 15 hold til forbindelserne nævnt i ovennævnte publikationer på overraskende måde udviser fuldstændigt andre og værdifulde farmakologiske egenskaber, nemlig en gunstig virkning på hjertefrekvensen uden en samtidig salivati-onshæmmende og pupiludvidende virkning, i visse tilfælde 2o også spasmolytiske egenskaber over for perifere organer og i visse tilfælde antithrombotiske egenskaber.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har den almene formel I

H 0 OR I 11 25 ^/*5 · C6 2 I I o '(I1

30 0=C-X-CH2-C=C-CH2-A

hvori X betegner grupperne H-C-R, -NH- eller -0- og

DK 161200 B

2 Δ betegner grupperne /“\ ΓΛ 4 -N (CH,)„ eller -N N-R* w 2n w hvori r3 5 R betegner et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer, n er 1 eller 2,

O

R betegner et hydrogenatom eller en gruppe med formlen s*5 10 -<CH2>n-\ £ ’ NR6 hvori C £ n er som defineret ovenfor, og R og R betegner en alkylgruppe med 1-3· carbonatomer, og 15 4- R betegner en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-3 carbonatomer, deres isomere samt deres farmaceutisk acceptable salte med uorganiske eller organiske syrer.

Forbindelserne med den almene formel I kan efter reaktion med uorganiske eller organiske syrer også fore- 20 ligge på form af deres fysiologisk acceptable salte.

Som syrer har fx saltsyre, - brombrintesyre., svovlsyre, methylsvovlsyre, phosphorsyre, vinsyre, fumarsyre, citronsyre, maleinsyre, ravsyre, æblesyre, p-toluensulfon- syre, methansulfonsyre eller amidosulfonsyre vist sig 25 , egnede.

Foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen opregnes i krav 2-4.

Opfindelsen angår endvidere lægemidler, der er ejendommelige ved at indeholde en forbindelse med oven-^ nævnte formel (I) foruden sædvanlige bærer- og/eller hjælpestoffer, anvendelse af forbindelser ifølge opfindelsen til fremstilling af et lægemiddel til behandling af bradykardi og bradyarrhytmier samt anvendelse af forbindelser ifølge opfindelsen defineret i krav 2 til 35 fremstilling af et lægemiddel med antithrombotiske egenskaber til behandling af thromboemboliske sygelige tilstande. Opfindelsen angår desuden en fremgangsmåde til fremstilling åf forbindelserne med formel (I) i krav 1, 3

DK 161200 B

» hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav 9's kendetegnende del angivne.

Ifølge opfindelsen tilvejebringer man forbindelserne med den almene formel I efter følgende fremgangs-5 måder:

a) Ved reaktion af en forbindelse med den almene formel II

H O N C

I i ,<n)

N N

o = c- x-ch2-c = c- h 15 hvori X er som defineret ovenfor,og en amin med en af formlerne / \ / \ 4 H-N (CH,> , H-N N-R* 20 / (Hib) (IIIc) 25 hvori R3 og R4 er som defineret ovenfor, eller med et salt af en sådan amin under tilstedeværelse af formaldehyd eller paraformaldehyd og, eventuelt, under tilstedeværelse af katalytiske mængder af salte som kobber- 30 (I)chlorid, jern(II)chlorid. Som salte af aminerne med formlerne Illb og IIIc anvender man fortrinsvis halogeniderne, fx hydrochloriderne eller acetaterne.

Reaktionen finder sted i et organisk opløsningsmiddel ved temperaturer op til reaktionsblandingens ko- 35 gepunkt. Som opløsningsmiddel egner sig cykliske ethere som dioxan og alkoholer som ethylalkohol. Det anbefales ved anvendelse af dioxan at tilsætte eddikesyre. Reak- 4

DK 161200 B

tionen kan fremmes ved tilsætning af salte som kobber(I)-chlorid eller jern(II)chlorid. I almindelighed opløser man først formaldehyd eller paraformaldehyd og en amin af formlerne Hib eller IIIc, henholdsvis et salt 5 deraf, fx hydrochlorid eller et acetat, i opløsningsmidlet og tilsætter først derefter forbindelsen med den almene formel II. Efter ophedning til tilbagesvalingstemperatur filtrerer man uopløselige andele fra og isolerer slutproduktet på sædvanlig vis. I øvrigt gælder sæd-10 vanlige forskrifter for Mannich-reaktionen (sammenlign Weygand und Hilgetag, Organisch-Chemische Experimentier-kunst, S. 990 f.f.).

b) Forbindelser med den almene formel I, hvori X

betegner gruppen 15 *

H-C-R

med R som defineret ovenfor kan også fremstilles ved reaktion af dilithiumsaltet af en forbindelse med formel IV

20 H O

I II

X) ,<IV)

H

25

med en ester med den almene formel V

A-CH2-C=C-CH2-CHR-COOR7 ,(V) hvori 7 30 A og R er defineret ovenfor, og R betegner en alkyl-gruppe med 1-10 carbonatomer, en phenylalkylgruppe med i alt 7-10 carbonatomer eller phenylgruppen.

Omdannelsen af 5,il-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][l,4]-benzodiazepin-6-onen med formel IV til sit dilithiumsalt 35 foregår ved hjælp af lithiumalkylforbindelser, især med n-butyllithium under tilstedeværelse af tetramethyl- 9

DK 161200 B

5 ethylendiamin, tert.-butyllithium, lithiumdiisopropyl-amid eller lithiumdicyclohexylamid eller med lithiumaryl-forbindelser, fx med phenylllthium. Omdannelsen til li-thiumsaltet og den videre reaktion til slutproduktet 5 foregår i et organisk opløsningsmiddel ved temperaturer mellem -60-+20°C, fortrinsvis ved -10°C. Som organiske opløsningsmidler kan sådanne anvendes, der normalt anvendes i forbindelse med lithiumreagenser; særlig fordelagtig er anvendelse af tetrahydrofuran eller andre 10 ethere som diethylether, af aliphatiske carbonhydrider som hexan eller af blandinger deraf, eventuelt under tilstedeværelse af hexamethylphosphorsyretriamid som yderligere opløsningsmiddel. Kort tid efter at tilførslen af metalreagenset er afsluttet, tilsætter man en 15 støkiometrisk mængde eller et lille overskud af esteren med formel V og lader reaktionsblandingen langsomt, fx i løbet af to timer, opvarme sig til stuetemperatur, så reaktionen kan forløbe færdig. Den dannede forbindelse med formel I isoleres på sædvanlig måde fra reaktions-20 blandingen, og man tilvejebringer den frie forbindelse, der eventuelt derefter kan overføres til et af sine salte.

De ved denne fremgangsmåde tilvejebragte forbindelser med formel I kan derefter overføres til syreaddi-25 tionssalte,eller tilvejebragte syreadditionssalte kan overføres til frie baser eller andre farmakologiske acceptable syreadditionssalte ved kendte fremgangsmåder.

Hvis man ved den ovenfor anførte fremgangsmåde har tilvejebragt forbindelser med den almene formel X,

30 hvor X betegner gruppen^CHR med de for R ovenfor anførte betydninger bortset fra hydrogenatom eller hvor A

3 betegner en gruppe, der indeholder gruppen R , hvori 3 R er som defineret ovenfor med undtagelse af hydrogenatom, så kan disse forbindelser foreligge i diastereo-35 mere former eller som enantiomere (+)- og (-)-former.

Opfindelsen omfatter de enkelte isomere såvel som deres blandinger. Adskillelse af diastereomere kan foregå

DK 161200 B

6 ved hjælp af deres forskellige kemiske og fysiske egenskaber, fx ved hjælp af fraktioneret omkrystallisering fra egnede opløsningsmidler, ved højtryksvæskechromatograf i, søjlechromatografi eller ved gaschromatografiske 5 fremgangsmåder.

Spaltning af eventuelle racemiske forbindelser med den almene formel I kan foregå efter kendte fremgangsmåder fx under anvendelse af en optisk, aktiv syre som (+)- eller (-)-vinsyre, eller et derivat deraf som 10 (+)- eller (-)-diacetylvinsyre, (+).- eller (-)-monome- thyltartrat eller (+)-kamfersulfonsyre.

Efter en almindelig anvendt fremgangsmåde til adskillelse af isomere omsætter man en racemisk blanding af forbindelser med den almene formel I med en af de 15 ovenfor angivne optisk aktive syrer i ækvimolekylære mængder i et opløsningsmiddel, der skiller de tilvejebragte udkrystalliserede optisk aktive salte under udnyttelse af deres forskellige opløselighed. Denne omsætning kan udføres i enhver slags opløsningsmiddel, så-20 Isenge dette besidder en tilstrækkelig forskel i opløselighed af saltene. Man anvender fortrinsvis methanol, ethanol eller blandinger deraf, fx i volumenforholdet 50:50. Derefter opløses de optisk aktive salte hver for sig i vand, neutraliseres med en base som natriumcarbo-25 nat eller kaliumcarbonat, hvorved man tilvejebringer den tilsvarende frie forbindelse i (+)- eller (-)-formen.

Man kan opnå den ene enantiomere eller en blanding af to optisk aktive diastereomere forbindelser med den almene formel I ved at udføre den ovenfor beskrevne 30 syntese med udgangsforbindelser med veldefineret konstitution.

Fremstillingen af udgangsforbindelser med den almene formel II, hvori X betegner gruppen i

H-C-R

35 I

DK 161200 B

7 hvor R er som defineret ovenfor, foregår ved reaktion af dilithiumsaltet af 5,ll-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][1,4]-benzodiazepin-6-on med et pentynsyrehalogenid med den almene formel VI 5

R

I O

H-C=C-CH2-CH-C , (VI)

Hal 1 o hvori R er som defineret ovenfor, og Hal betegner et halogenatom, fortrinsvis et chlor- eller bromatom. Omdannelsen af 5,ll-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on til dilithiumsaltet foregår ved hjælp af lithiumalkyl-15 forbindelser, især ved hjælp af n-butyllithium, n-butyl-lithium under tilstedeværelse af tetramethylethylendia-min, tert.-butyllithium, lithiumdiisopropylamid eller lithiumdicyclohexylamid eller med lithiumarylforbindelser fx med lithiumphenyl. Omdannelsen til lithiumsaltet og 20 den videre reaktion til opnåelse af slutproduktet foregår i et organisk opløsningsmiddel ved temperaturer mellem -60-+20°C, fortrinsvis ved -10°C. Som organisk opløsningsmiddel kan sådanne anvendes, der normalt anvendes til reaktion med lithiumreagenser; især fordelagtigt er 25 anvendelsen af tetrahydrofuran eller andre ethere som diethylether, af aliphatiske carbonhydrider som hexan eller af blandinger deraf, eventuelt under tilstedeværelse af hexamethylphosphorsyretriamid som yderligere opløsningsmiddel. Kort tid efter at tilsætningen af metal-30 reagenset er afsluttet, tilsætter man den støkiometriske mængde eller et lille overskud af syrehalogenidet med den almene formel VI og lader reaktionsblandingen opvarme sig langsomt, fx i løbet af to timer til stuetemperatur, så reaktionen kan løbe til ende. Man isolerer den dan-35 nede forbindelse med formel II efter sædvanlige metoder fra reaktionsblandingen og kan eventuelt derefter overføre den til et salt.

DK 161200 B

8

Et syrehalogenid med den almene formel VI kan fremstilles ud fra den tilsvarende 4-pentynsyre ved reaktion med et thionylhalogenid. Fremstillingen af 4-pen tynsyre foregår efter kendte fremgangsmåder. For eksem- j 5 pel kan man tilvejebringe 2-methyl-4-pentynsyre ifølge en fremgangsmåde Beskrevet i Bull. Soc. Chim. France, 1954, side 797 og 798, idet man udgår fra methylmalon-syrediethylester.

Fremstillingen af udgangsforbindelser med den al-10 mene formel II, hvori X betegner gruppen -NH-,

foregår ved reaktion af pyridobenzodiazepinoner med den almene formel VII

H O i n 15 I r(VII) Y - C - o hvori

20 Y betegner et halogenatom, fortrinsvis et chlor- eller bromatom tmed en amin med formel VIII

h-c=c-ch2-nh2 f(VIII) 25 Reaktionen foregår med for del under tilstedeværelse af opløsningsmidler, fx vand, toluen, alkoholer som methanol, ethanol, propanol, især med fordel under tilstedeværelse af aprote polære opløsningsmidler som tetrahydrofuran, 1,4-dioxan, acetonitril, 30 Ν,Ν-dimethylformamid, dimethylsufoxid, hexamethylphos-phorsyretriamid eller blandinger deraf og ved temperaturer mellem 0°C og reaktionsblandingens kogepunkt, med fordel mellem 40-100°C. Det er fordelagtigt at tilsætte en uorganisk eller organisk base som natriumhydroxyd, tri-35 ethylamin eller pyridin eller et overskud af basen med den almene formel VIII.

*

DK 161200 B

9

Fremstilling af udgangsforbindelser med den almene formel II, hvori X betegner et oxygenatora, foregår ved reaktion af en pyridobenzodiazepinon med den almene formel VII med en forbindelse med formlen IX

5 H-C=C-CH2-OLi ,(IX).

Reaktionen udføres fortrinsvis i vand eller ethanol, propanol, n-hexan eller i aprote polære opløsningsmidler som tetrahydrofuran, ved temperaturer op til re-10 aktionsblandingens kogepunkt. Forbindelsen med formel IX fremstilles med fordel in situ ved reaktion af propynol med den støkiometriske mængde n-butyllithium eller phe-nyllithium, hvorefter reaktion med pyridobenzodiazepinon med den almene formel VII foregår umiddelbart derefter.

15 Forbindelserne med de almene formler mb, IIIc og VIII er kendt i litteraturen eller kan fremstilles i analogi med metoder nævnt i litteraturen.

De nødvendige mellemprodukter med den almene formel VII fremstilles ved reaktion af 5,ll-dihydro-6H-py-20 rido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on med formel IV med et halogenkulsyrederivat med den almene formel X

Hal - C - Y , (X) li 25 0 hvori

Hal og Y, der ikke må være identiske, betyder et chlor-eller bromatom. Reaktionen foregår i inerte opløsningsmidler, fx i aromatiske carbonhydrider som toluen, chlor-30 benzen, xylen, lige eller cykliske ethere som diisopro-pylether, tetrahydrofuran eller dioxan, i ketoner som 3-pentanon eller i andre opløsningsmidler som acetoni-tril eller dimethylformamidfmed fordel under tilstedeværelse af tertiære organiske baser som pyridin, ved tem-35 peraturer op til reaktionsblandingens kogepunkt, fortrinsvis mellem 30-80°C.

10

DK 161200 B

Fremstillingen af 5,ll-dihydro-6H-pyrido[2,3-b]~ [l,4]benzodiazepin-6-on med formel IV beskrives i US-patentskrift nr. 3.406.168.

Opfindelsen angår son nævnt også lægemidler, der indeholder 5 én eller flere forbindelser med den almene formel I eller deres fysiologisk acceptable salte.

Forbindelserne med den almene formel I kan med dette formål på bekendt måde indarbejdes i sædvanlige farmaceutiske tilberedninger, fx i opløsninger, stikpil-10 ler, tabletter, dragéer, kapsler eller theer. En daglig dosis ligger almindeligvis mellem 0,02-5 mg/kg, fortrinsvis 0,2-1,0 mg/kg kropsvægt og kan eventuelt indgives i form af flere, fortrinsvis 1-3 doser til opnåelse af den ønskede effekt.

15 De basisk substituerede kondenserede diazepinoner med den almene formel I og deres syreadditionssalte besidder værdifulde egenskaber; især har de gunstig virkning på hjertefrekvensen og er, da de ikke besidder sa-livationshæmmende og pupiludvidende virkning, egnet som 20 vagale hjerteregulatorer ved behandling af bradykardi og bradyarrhytmier i human- og veterinærmedicinen; en del af forbindelserne udviser også spasmolytiske egenskaber over for perifere organer, især tyktarmen og blæren.

25 Derudover udviser en del af forbindelserne over for mus og rotter ved et forsøg ifølge W.W. Duke, J.Amer. Med.Ass. 15, 1185 (1910) i dosisområdet 0,1-10 mg/kg efter i.v. henholdsvis p.o. indgivelse forlængelse af blødningstid og over for rotter med et forsøg ifølge Po-30 liwoda et al., (sammenlign side 15) antithrombotiske egenskaber.

Et gunstigt forhold mellem på den ene side tachy-karde virkninger og på den anden side de ved lægemidler med anticholinerge aktive midler optrædende uønskede bi-virkninger på pupilstørrelsen og udskillelse af tåre-, •

DK 161200 B

11 spyt- og mavesyre er af særlig vigtighed i forbindelse med den terapeutiske anvendelse af forbindelserne. De følgende forsøg viser, at forbindelserne ifølge opfindelsen udviser overraskende gode forhold i denne forbin-5 delse.

A. Undersøgelse af den antimuscarine virknings funktionelle selektivitet.

Forbindelser med antimuscarine egenskaber hæmmer virkningen af exogen tilførte agonister eller af acetyl-cholin, der bliver frigjort fra de cholinerge nerveender.

I det følgende beskrives metoder, der er egnede til undersøgelse af kardioselektive antimuscarinica.

De anvendte fremgangsmåder har til. formål at be-15 stemme selektiviteten af den antimuscarine virkning. Forbindelserne:

5,11-dihydro-ll-[ 1 -oxo-6-(1-piperidinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on = A

og 2Q 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-(hexahydro-lH-azepin-l-yl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on = B undersøges for: 1. Den tachykarde virkning på en vågen hund, 2. hæmning af ved oxotremorin stimuleret spytudskillel-25 se hos rotter, og 3. pupiludvidende virkning hos rotter.

1. Hjertefrekvensforøgelse hos en vågen hund

Forbindelserne indsprøjtes intravenøst, og man 30 måler hjertefrekvensen ved hjælp af en tachygraf. Efter en kontrolperiode indgiver man stigende doser af forbindelsen for at forøge hjertefrekvensen. Man indsprøjter først næste dosis, når effekten af den foregående ikke mere kan spores. Man bestemmer dosis for en forbindel-35 se, der fører til en forhøjelse på 50 slag/minut (ED^q), grafisk. Hver forbindelse afprøves på 3-5 hunde.

12

DK 161200 B

2. Hæmning af spytudskillelse hos rotter

Der anvendes 10 albino-rotter af hunkøn (stamme Crl:COBSCD (SD) BR) for hver behandlingsgruppe med en vægt på 120-150 g, der før forsøget i 24 timer ingen næ-5 ring fik, men havde fri adgang til drikkevand.

For i forforsøg at finde den muscarine virkning af oxotremorin på hver af de symptomer, der skal undersøges, fremstillede man en dosisvirkningskurve ved hjælp af i hvert tilfælde i det mindste tre doser for hvert 10 symptom.

Ved afprøvning af antimuscarine forbindelser valgte man en oxotremorin-dosis, der i forforsøgene havde udløst det pågældende symptom hos 90-100% af dyrene.

Spytsekretion: 0,083 mg/kg i.v.

15 Den pågældende antimuscarine forbindelse blev indgivet i doser med regelmæssige mellemrum 15 minutter før man indgav oxotremorin, i begge tilfælde intravenøst. Kontrolgrupperne fik i stedet for den forbindelse, der skulle undersøges, opløsnings- eller suspensionsmidlet 20 i tilsvarende mængde.

Umiddelbart efter indgivelse af oxotremorin iagttog man dyrene i 15 minutter i et glasbur.

Undersøgelsen for indflydelsen på den oxotremorin-inducerede spytsekretion blev gennemført blindt, dvs. at 25 den, der udførte forsøget, ikke vidste, hvordan dyrene var behandlet på forhånd.

Resultaterne udtrykkes som procentisk hæmning af oxotremorin-effekten (procent af dyr uden det tilsvarende symptom). ED^Q-værdier blev beregnet ifølge Litch-30 field og Wilcoxon (J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, 99,1949).

3. Pupiludvidende virkning hos rotter

Man målte væksten i pupilbredden efter intravenøs indsprøjtning af forbindelser, der skulle undersøges.

35 Hertil benyttedes et mikroskop. Målingerne blev udført før og ved forskellige tidspunkter (15, 45 og 75 minutter) efter injektionen af forskellige doser af forbin-«

DK 161200 B

13 delsen. Resultaterne blev udtrykt som ED2qq. Hermed menes den dosis, der medfører en fordobling af pupildiame-teren i forhold til normalværdien. Man iagttog normalt den største effekt mellem 15-45 minutter efter den in-5 travenøse indgivelse.

B. Studier over binding til muscarine receptorer:

Bestemmelse af IC^Q-værdi

Ved denne forsøgsrække anvendtes som prøveforbindelser ud over de ovenfor nævnte forbindelser Δ og B: 10 5.11- dihydro-11—[C[4—(1-piperidinyl]-2-butynyl]amino]-

carbonyl-6H-pyrido[2,3—b][1,4]benzodiazepin-6-on = D

og 5.11- dihydro-11 — Γ Γ Γ 4—(1-piperidinyl)-2-butynyl]oxy]-

15 carbonyl-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on = E

Organerne stammede fra Sprague-Dawley-rotter af hankøn med 180-220 g kropsvægt. Man fjernede hjerte, mave og storhjernebark og arbejdede derefter i iskold hepes-HCl-puffer (pH 7,4; 100 m molær NaCl, 10 m molær 20 MgCl2). Hjertet med omgivelser blev klippet i stykker med en saks. Derefter blev alle organer homogeniseret i en homogenisator.

Til brug for bindingsforsøget fortyndede man de homogeniserede organer på følgende måde: 25 Hjerte med omgivelser 1: 250

Storhjernebark 1:3000

Inkubationen af de homogeniserede organer foregik ved en bestemt koncentration af radioligand og en række 30 koncentrationer af ikke-radioaktive prøvestoffer i små

Eppendorf-centrifugerør ved 30°C. Inkubationstiden var 3 45 minutter. Som radioligand anvendte man 0,3 pmol H- 3 N-methylscopolamin ( H-NMS). Man afsluttede inkubationen ved centrifugering ved 14000 g og bestemte radio-35 aktiviteten i centrifugeringsbundfaldet. Den repræsente- 3 rer summen af specifik og ikke-specifik binding af H- 14

DK 161200 B

NMS. Andelen af ikke-specifik binding blev defineret som den radioaktivitet, der blev bundet under tilstedeværelse af 1 Timol chinuclidinylbenzilat. Alle forsøg blev udført firedobbelt. IC^q-værdierne for de ikke-5 mærkede forbindelser til afprøvning blev bestemt grafisk.

De svarer til en koncentration af prøvestof, hvor den 3 specifikke binding af H-NMS til de muscarine receptorer i de forskellige organer bliver hæmmet med 50%.

RESULTATER

10 ---

Tabel I

Tachycard virkning på en vågen hund, hæmning af spyt-udskillelse stimuleret med oxotremorin hos rotter og pupiludvidende virkning hos rotter.

15 ___

For- Tachykardi Spytudskillelses- Pupiludvidelse k±n~ (Hund) hæmning (Rotte) (Rotte)

Hal ep ED50 ED50 ED200 [μg/kg] i.v. tøg/kg] i.v. tøg/kg] i.v.

20--: A 44 2048 ~ 3000 B 28 1136 2189 * 15

DK 161200 B

»

Tabel II

Studier over binding til muscarine receptorer, bestemmelse af IC50-værdier: ^ Forbindelse Receptor-Bindings-prøve IC50 [nM]

Cortex Hjerte A 1200 120 Ί0--- B 220 30 ___ D 2400 310 Ξ 700 60 15 ---

Fra de farmakologiske data i ovennævnte tabel I

ser man, at hjertefrekvensen ved de afprøvede forbindelser allerede er steget ved doser, hvor man endnu ikke iagttager en formindsket spytudskillelse og en pupiludvi-20 delse.

Fra data i tabel II ser man, at de hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I kan skelne mellem muscarine receptorer fra forskellige typer væv. Dette følger af den betydelig højere IC5Q-værdi ved undersø-25 gelser på præparater fra storhjernebarken sammenlignet med præparater fra hjerte

Under anvendelse af den ovenfor anførte fremgangsmåde til bestemmelse af binding til muscarine receptorer, i dette tilfælde t-^-receptorer fra hjerte og 30 M3~receptorer fra submandibularis, sammenlignede man forbindelsen fra nedenstående Eksempel 4, nemlig

DK 161200 B

16 5.11- dihydro-11-[1-oxo-6-(4-methyl-1-pipera-

zinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiaze-pin-6-on = F

med forbindelsen fra Eksempel 6 i EP 125 607, nemlig 5 11 — [2—(4-methyl-1-piperazinyl)acetyl3 - 5,11-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-

6-thion = G

og med forbindelsen fra Eksempel 7 i EP 85 893, nemlig 5.11- dihydro-11-[[(4-methyl-1-piperazinyl)- 1 g amino]carbonyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-

6-on,hydrochlorid,hydrat = H

Endvidere sammenlignede man forbindelsen fra nedenstående Eksempel 8, nemlig 5.11- dihydro-11-[1-oxo-6-[[2-(diethylamino)-15 methyl]-1-piperidinyl]-4-hexynyl]-6H-pyrido-

[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on = J

med forbindelsen fra Eksempel 6 i EP 156 191, nemlig 11 — [3—[2—[(diethylamino)methyl]-1-piperidinyl ]-1-oxopropyl]-5,11-dihydro-6H-pyrido[2,3—b]—

20 [1,4]benzodiazepin-6-on = K

idet man til bedømmelse af forbindelsernes selektivitet udregnede forholdet M^/^.

Resultaterne ses i omstående Tabel III:

DK 161200 B

17

TABEL III

Forbindelse IC-,, nM Forhold

DU

M2 M3 m3/m2 5 F 1000 16000 16 G 1260 1588 ca. 1 H 400 200 0,5 10 J 800 25178 31 K 200 630 3

Resultarerne i Tabel III viser klart, at forbin-delserne F og J ifølge opfindelsen er højselektive mus-carinantagonister. IC^-værdien for M—receptorer giver bindingsaffiniteten over for cardiale M-receptorer; en blokering af sådanne receptorer med antagonister fører til en forhøjelse af hjertefrekvensen. IC^Q-værdien for 20 M3-recePt°rer er et mål for bindingsaffiniteten over for de tilsvarende M-receptorer, f.eks. i mundspytkirtlerne.

En blokade af sådanne receptorer med antagonister fører til indskrænkninger, i dette tilfælde af spytmængden. En høj værdi af forholdet M3/M2 er fordelagtigt, idet man 23 således kan opnå en forhøjet hjertefrekvens uden en samtidig uønsket påvirkning af spytmængden og af andre organer kontrolleret af M-receptorer (øjet:mydriasis, tarmkanalen:forstoppelse og lammelser).

Forbindelserne F og J ifølge opfindelsen er på 3q grund af deres selektivitet de kendte forbindelser G, H og K tydeligt overlegne.

18

DK 161200 B

Visse forbindelser med formel I og deres syreadditionssalte besidder som ovenfor nævnt på overraskende måde også en kraftig antithrombotisk virkning. Dette vises tydeligt over for blodpladethromber hos rotter, ek-5 sempelvis ved hjælp af forbindelsen 5,11-dihydro-ll-[1-oxo-2-methyl-6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on = C

der ved undersøgelserne benyttes i form af dihydrochlo-ridet. Undersøgelserne beskrives i det følgende.

10

Indflydelse på blodpladethromber hos rotter

Man arbejdede i det væsentlige ifølge Poliwoda,

Lilli, Hagemann, Schyma, i Z. ges. exp. Med. 145, 252, (1968) .

15

Metode: SPF-rotter af hånkøn (Chbb: THOM) med vægt på 70-90 g, der før forsøget havde haft fri adgang til foder (Altromin) og vand, fik en intraperitonal nembu-20 tal-narkose (50-60 mg/kg pentobarbital-Na). Til forhindring af hypothermi lagde man dem på et ophedet forsøgsbord (37°C).

Man foretog et transversalt snit i bugen, trak en slynge af tyndtarmen frem, fikserede den og indstillede 25 en mesenterialvene med en bredde på 300 ym under et bi-nokulært operationsmikroskop med 40 gange forstørrelse.

Op mod venen anbragte man en glasindfattet monopolær V4A-stålelektrode med 100 ym diameter af spidsen som irritationskatode, Anoden var anbragt ved samme vene over 30 for katoden. Irritationen foregik ved hjælp af 150 volt

DK 161200 B

19 jævnstrøm i 100 ysekunder. Efter irritationen spulede man konstant det område, der skulle iagttages, med varm (37°C) fysiologisk kogsaltopløsning.

Ved hjælp af mikroskopet iagttog man dannelsen 5 og vækst af en thrombe i 20 minutter. I løbet af iagttagelsestiden målte man i begyndelsen hvert tiende sekund, senere hvert minut, den procentiske forsnævring af blodkarret på grund af thromben og noterede værdien.

Værdierne blev afbildet mod tiden i et koordinat-10 system. Arealet under den dannede kurve ("area under curve") er et mål for thrombestørrelsen i løbet af tiden.

En gruppe på 5 dyr fik 5 minutter før iagttagelserne begyndte en intravenøs indsprøjtning på 1 mg/kg 15 af forbindelse C som dihydrochlorid (0,1 ml pr. 100 g kropsvægt, opløsningsmiddel aqua dest.). En kontrolgruppe også på 5 dyr fik med samme behandling opløsningsmidlet alene intravenøst indgivet.

"Area under curve" for dyr, der var behandlet med 20 forbindelsen, blev sammenlignet med arealet optegnet for kontroldyrene. Reduktionen af thrombestørrelsen på grund af forbindelsen angives som procentisk formindskelse af middelværdien af "area under curve" for dyrene behandlet med forbindelsen over hele iagttagelsestiden i 25 forhold til middelværdien for kontrolgruppen.

Signifikansen af formindskelsen blev kontrolleret ved hjælp af t-test for uafhængige stikprøver ifølge STUDENT (Cavalli-Sforza: Biometrie, G. Fischer-Verlag, Stuttgart 1969, side 72).

( 20

DK 161200 B

RESULTATER

Forbindelse C TABEL IV

"area under curve" Procentisk 5 Dosis Arealenheder formindskelse

Behandling mg/kg i.v. n MW + SD i forhold til kontrol

Kontrol - 5 1736,0 _+ 124,2

Forbindelse C

10 som Dihydro-

Chlorid 1 5 1230,0 + 188,0X 29,2 x signifikant reduktion, t-prøve, p < 0,02.

15

Dihydrochloridet af forbindelse C formindsker ved dosering på 1 mg/kg i.v. størrelsen af de elektrisk inducerede mesenterialthromber hos rotter i høj grad signifikant med 29,2%. Det er altså overraskende blevet 20 fundet, at denne forbindelse besidder en udpræget anti-thrombotisk virkning.

Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen viste sig acceptable, idet man selv ved de højest anvendte doser ved de farmakologiske undersøgelser ikke 25 kunne iagttage toksiske bivirkninger.

De efterfølgende eksempler belyser opfindelsen nærmere.

DK 161200 B

21

Fremstilling af udgangsmateriale

Eksempel A

5,11-dihydro-ll-[l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b]-5 [l,4]benzodiazepin-6-on

Til en suspension af 3,7 g (0,017 mol) 5,11-dihy-dro-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on i 150 ml vandfri tetrahydrofuran tildrypper man under omrøring ved 0°C 22,4 ml af en 1,6 molær opløsning af n-butyl-10 lithium i n-hexan. Derefter holder man blandingen under omrøring i yderligere 30 minutter og lader den så reagere med en opløsning af 2,04 g (0,0175 mol) 4-pentynsyre-chlorid i 20 ml tetrahydrofuran. Man opvarmer blandingen til 30°C og fortsætter omrøringen en time. Derefter 15 udhældes reaktionsblandingen i en mættet kogsaltopløsning. Den organiske fase fortyndes med eddikesyreester, fraskilles og vaskes to gange med kogsaltopløsning, filtreres over kul og inddampes under vakuum til tørhed.

Det rå produkt renses ved hjælp af søjlechromatografi 20 på kiselgel med chloroform som elueringsmiddel. Man tilvejebringer 2,2 g (43% teoretisk) farveløse krystaller med smp. 179-180°C.

Eksempel B

25 5,11-dihydro-ll-[2-methyl-l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido- [2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on

Analog til eksempel A fremstiller man under anvendelse af 63 g (0,3 mol) 5,ll-dihydro~6H-pyrido[2,3-b]- [l,4]benzodiazepin-6-on og 46,8 g (0,36 mol) 4-(2-me-30 thyl)-pentynsyrechlorid 88 g (96% teoretisk) af den ønskede forbindelse med smp. 202-204°c.

DK 161200 B

22

Eksempel C

5.11- dihydro-ll-[[2-propynyl)amino]carbonyl]-6H-pyrido-[2,3-b] [l,4]benzodiazepin-6-on

Til en suspension af 27,3 g (0,1 mol) 11-chlor-5 carbonyl-5,ll-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiaze-pin-6-on og 10,0 g (0,1 mol) triethylamin i 500 ml chloroform tildrypper man under omrøring ved stuetemperatur 5,5 g (0,1 mol) propargylamin, hvorved temperaturen stiger til 35°C. Man rører yderligere 30 minutter ved 40°C 10 filtrerer dernæst over aktivt kul og inddamper reaktionsblandingen til tørhed under vakuum. Den olieagtige rananens koges med eddikesyreester, hvorefter man tilvejebringer det ønskede produkt som farveløse krystaller med et udbytte på 20,7 g (71% teoretisk).

15

Eksempel D

5.11- dihydro-ll-[[N-methyl(2-propynyl)amino]carbonyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on

Analog til eksempel C tilvejebringer man under 20 anvendelse af 27,3 g (0,1 mol) ll-chlorcarbonyl-5,11-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on og 7,0 g (0,1 mol) N-methyl-propargylamin 27 g af den ønskede forbindelse (88% teoretisk).

25 Eksempel E

5.11- dihydro-ll-[[(2-propynyl)oxy]carbonyl]-6H-pyrido-[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on

Til en opløsning af 2,24 g (0,04 mol) propargyl-alkohol i 120 ml tetrahydrofuran tildrypper man ved 30 15-20°C 3,08 g (0,048 mol), n-butyllithium i 30 ml n- hexan. Derefter holder man blandingen 30 minutter under omrøring ved stuetemperatur og lader den derefter reagere med en suspension af 10,9 g (0,04 mol) 11-chlorcarbo-nyl-5,ll-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on 35 i 250 ml tetrahydrofuran. Man rører yderligere i en time, så reaktionen kan løbe til ende. Der inddampes

DK 161200 B

23 under vakuum til tørhed, og remanensen udkrystalliserer ved udrøring med vand. Efter omkrystallisering fra eddikesyreester tilvejebringer man 7,5 g (64% teoretisk) af det ønskede produkt, smp. 213°C.

5

Eksempel F

5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-4-pentynyl]-6H-pyrido-[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on a. ) 2-methyl-2-propargyl-malonsyrediethylester 10 I en alkoholatopløsning (fremstillet ud fra 23 g natrium og 800 ml absolut ethanol) drypper man ved 35-40°C under omrøring 174 g (1,0 mol) methylmalonsyre-diethylester, holder endnu en time under omrøring og til-drypper derefter ved 45°C 130,8 g (1,1 mol) propargyl- 15 bromid. Man holder blandingen yderligere to timer under tilbagesvaling og omrøring. Efter afkøling suger man blandingen fra det udfældede natriumbromid og inddamper filtratet kraftigt under vakuum. Remanensen udrøres med isvand, og man ekstraherer den vandige opløsning flere 20 gange med ether. De samlede organiske faser tørres og inddampes under vakuum til tørhed. Den tilvejebragte olie benytter man uden yderligere rensning i næste reaktionstrin. Udbytte 187 g (88% teoretisk).

b. ) 2-methyl-2-propargyl-malonsyre 25 Til en opløsning af 101 g (1,8 mol) kaliumhydro- xyd i en blanding af 560 ml vand/ethanol (1:) sætter man 187 g (0,88 mol) 2-methyl-2-propargyl-malonsyrediethyl-ester og opheder blandingen til tilbagesvaling i to timer under omrøring. Efter afsluttet reaktion (DC-kon-30 trol) inddamper man under vakuum til tørhed og opløser remanensen i vand. Den vandige opløsning gøres sur med 50% svovlsyre og ekstraheres flere gange med methylen-chlorid. Man tørrer de forenede ekstrakter, inddamper under vakuum til tørhed og tilvejebringer et farveløst 35 produkt med smp. 135°C.

Udbytte: 135 g (98% teoretisk).

DK 161200 B

24 c. ) 2-methyl-4-pentynsyre 62,4 g (0,4 mol) 2-methyl-2-propargyl-malonsyre ophedes i et oliebad til 180°C til CC^-udviklingen ophører (ca. 30 minutter). Man tilvejebringer en gullig 5 olie, som indgår direkte i det næste reaktionstrin.

Udbytte: 41 g (91,5% teoretisk).

d. ) 2-methyl-4-pentynsyrechlorid 40 g (0,36 mol) 2-methyl-4-pentynsyre opløses i 85 g thionylchlorid og holder under omrøring i 24 timer 10 ved stuetemperatur. Derefter destillerer man fra thio-nylchloridet og lader det tilvejebragte syrechlorid indgå i næste reaktionstrin uden yderligere rensning.

Udbytte: 46,8 g (100% teoretisk).

e. ) 5,11-dihydro-ll-tl-oxo-2-methyl-4-pentynyl]-6H- 15 pyrido[2,3-b][l,43benzodiazepin-6-on_

Til en suspension af 63 g (0,3 mol) 5,11-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on i 1500 ml vandfri tetrahydrofuran tildrypper man under omrøring ved 0-10°C 416 ml (0,65 mol) af en opløsning af n-butyl- 20 lithium i n-hexan. Man fortsætter omrøringen ved stuetemperatur i en time, afkøler derefter til 5-10°C og tildrypper ved denne temperatur 46,8 g (0,36 mol) 2-me-thyl-4-pentynsyrechlorid (ikke renset), opløst i 100 ml vandfri tetrahydrofuran,til reaktionsblandingen. Blan-25 dingen holdes endnu 3 timer under omrøring ved stuetemperatur og udhældes derefter i 2000 ml mættet kogsaltopløsning og fortyndes med ca. 2000 ml eddikesyreester.

Man fraskiller den organiske fase, ekstraherer den to gange, hver gang med 500 ml mættet kogsaltopløsning, tør-30 rer over magnesiumsulfat og inddamper under vakuum til tørhed. Den ønskede forbindelse tilvejebringes som et gulbrunt produkt, der anvendes uden yderligere rensning i næste reaktionstrin.

Råudbytte: 88 g (96% teoretisk).

35 En lille prøve blev renset søjlechromatografisk, smp. 202-204°c (ether).

DK 161200 B

25

Fremstilling af slutprodukter

Eksempel 1 5.11- dihydro-ll- [l-oxo-6- (1-piperidinyl) -4-hexynyl] -6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on 5 En blanding af 9,6 g (0,03 mol) 5,11-dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on, 1,08 g (0,036 mol) paraformaldehyd, 3,06 g (0,036 mol) piperidin, 0,2 g kobber(I)chlorid og 150 ml dioxan opvarmes en time under tilbagesvaling. Efter afsluttet 10 reaktion frafiltrerer man fra uopløselige andele og inddamper filtratet til tørhed under vakuum. Råproduktet renses søjlechromatografisk på kiselgel (mobil fase: eddikesyreester, eddikesyreester +10% methanol). Efter omkrystallisering fra eddikesyreester opnår man 2,7 g 15 (21% teoretisk) af den ønskede forbindelse, smp. 197°C.

Eksempel 2 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(1-pyrrolidinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on 20 Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11- dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepine-on og pyrrolidin i et udbytte på 41% af det teoretiske, smp. 185-186°C (eddikesyreester).

2 5 Eksempel 3 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(hexahydro-lH-azepin-l-yl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]ben-30 zodiazepin-6-on og hexamethylenimin med et udbytte på 24% af det teoretiske, smp. 169-170°C (eddikesyreester).

DK 161200 B

26

Eksempel 4 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-5 dihydro-11-[l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]ben-zodiazepin-6-on og 4-methyl-piperazin i et udbytte på 25% af det teoretiske? smp. 182-183°C.

Eksempel 5 10 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-[(methyl)(cyclohexyl)amino]-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]ben-zodiazepin-6-on og N-cyclohexyl-methylamin i et udbytte 15 på 20% af det teoretiske? smp. 162-163°C (eddikesyreester) .

Eksempel 6 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(diethylamino)-4-hexynyl]-6H-20 pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepine-on og diethylamin i et udbytte på 16% af det teoretiske; smp. 173-174°c (eddikesyreester).

25

Eksempel 7 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(4-trans-hydroxy-l-piperidinyl)- 4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-30 dihydro-11-[l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]ben-zodiazepin-6-on og 4-hydroxy-piperidin med et udbytte på 30% af det teoretiske; smp. 175-176°C.

DK 161200 B

27

Eksempel 8 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-[[2-(diethylamino)methyl]-1-pi-peridinyl]-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiaze-pin-6-on 5 Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11- dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]ben-zodiazepin-6-on og 2-[(diethylamino)methyl]piperidin med et udbytte på 14% af det teoretiske? smp. 157-158°C (eddikesyreester).

10

Eksempel 9 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-[(methyl)(4-trans-hydroxy-cyclo-hexyl)amino]-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiaze-pin-6-on 15 Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11- dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]ben-zodiazepin-6-on og N-(4-trans-hydroxy)-cyclohexyl-methyl-amin med et udbytte på 27% af det teoretiske? smp. 176-178°c (eddikesyreester).

20

Eksempel 10 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(4-trans-hydroxy-hexahydro-lH-azepin-l-yl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiaze-pin-6-on 25 Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11- dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl] -6H-pyrido[2,3-b][1,4]ben-zodiazepin-6-on og 4-hydroxy-hexamethylenimin med et udbytte på 16% af det teoretiske? smp. 140-141°C.

30 Eksempel 11 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-[(methyl)(benzyl)amino]-4-hexynyl] -6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-dihydro-ll- [l-oxo-4-pentynyl] -6H-pyrido[2,3-b][1,4]ben-35 zodiazepin-6-on og N-benzyl-methylamln med et udbytte på 11% af det teoretiske? smp. 204-206°C (eddikesyreester).

DK 161200 B

28

Eksempel 12 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(4-isopropyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-5 dihydro-ll-[l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]ben-zodiazepin-6-on og 4-isopropyl-piperazin med et udbytte på 10% af det teoretiske; smp. 124-126°C (diisopropyl-ether/eddikesyreester).

10 Eksempel 13 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-6-(4-benzyl-l-piperazinyl)-4-he-xyny1]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiaz epin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-dihydro-ll- [l-oxo-4-pentyny1]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]ben-15 zodiazepin-6-on og 4-benzyl-piperazin med et udbytte på 21% af det teoretiske; smp. 157-158°C (eddikesyreester) .

Eksempel 14 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(1-pyrrolidinyl)-4-20 hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-dihydro-ll- [2-methyl-l-oxo-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b]- [l,4]benzodiazepin-6-on og pyrrolidin med et udbytte på 52% af det teoretiske; smp. 158°C (eddikesyreester).

25

Eksempel 15 5.11- dihydro-ll-[[[4-(1-piperidinyl)-2-butynyl]amino]-carbonyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11-30 dihydro-11-[[(2-propynyl)amino]carbonyl]-6H-pyrido- [2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on og piperidin med et udbytte på 44% af det teoretiske; 199-200°C (eddikesyrees ter/ethanol) .

29

DK 161200 B

Eksempel 16 5.11- dihydro-ll-[ [ [4-(hexahydro-lH-azepin-l-yl)-2-buty-nyl] (methyl) amino]carbonyl] -6H-pyrido [2,3-b] [l,4]benzo-diazepin-6-on 5 Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5,11- dihydro-11-[[N-methyl(2-propynyl)amino]carbonyl]-6H-py-rido[2/3-b][l/4]benzodiazepin-6-on og hexamethylenimin med et udbytte på 26% af det teoretiske; smp. 145-146°C (ether) .

10 Eksempel 17 5/11-dihydro-ll-[[[4-(1-piperidinyl)-2-butynyl]oxy]carbonyl ]-6H-pyrido[2,3-b][1/4]benzodiazepin-6-on

Fremstilles analog til eksempel 1 ud fra 5/11-dihydro-ll- [[2-propynyl)oxy]carbonyl]-6H-pyrido[2/3-b]-15 [l,4]benzodiazepin-6-on og piperidin med et udbytte på 22% af det teoretiske; smp. 207-208°C (sønderdeling).

Eksempel 18 5.11- dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(4-methyl-l-piperazi-20 nyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2/3-b][l/4]benzodiazepin-6-on

En reaktionsblanding/ der består af 36,6 g (0,12 mol) 5/11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-4-pentynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on, 4 g (0,13 mol) pa-raformaldehyd, 13,2 g (0,13 mol) N-methylpiperazin, 25 0,2 g kobber(I)chlorid og 600 ml dioxan opvarmes to ti mer under tilbagesvaling. Efter afsluttet reaktion filtrerer man over aktivt kul til fjernelse af uopløselige bestanddele og inddamper filtratet under vakuum til tørhed. Med henblik på rensning opslæmmes råproduktet i en 30 opløsning af 15,4 g (0,13 mol) maleinsyre i 600 ml vand, og der røres en time ved stuetemperatur. Man filtrerer uopløselige bestanddele fra, tilsætter kaliumcarbonat til alkalisk reaktion af filtratet og opløser den udfældede harpiks i 600 ml methylenchlorid. Efter tørring 35 over magnesiumsulfat inddamper man opløsningen under vakuum til tørhed. Den krystallinske remanens koges op . 4

DK 161200 S

30 med 150 ml eddikesyreester og frasuges efter afkøling.

Ved behandling med en smule mere eddikesyreester tilvejebringer man et krystallinsk produkt, der efter vask med ether smelter ved 212-214°C.

5 Udbytte: 30,5 g (60,9% af det teoretiske).

Eksempel 19 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(4-methyl-l-piperazi-nyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on-10 dihydrochlorid 28 g (0,067 mol) 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl- 6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido(2,3-b]- [1,4]benzodiazepin-6-on opslæmmes i 350 ml absolut ethanol og bringes under kogning og omrøring til reaktion 15 med 45 ml etherisk saltsyre. Der opstår foreløbig en klar opløsning, der efter nogen tids forløb igen bliver uklar. Der udskilles en fin krystalgrød, som man frasuger efter afkøling og vasker med 50 ml absolut ethanol og 150 ml acetone.

20 Smp.: 220-221°C. Udbytte: 32,5 g (98,9% af det teoretiske) .

I det følgende beskrives fremstillingen af farmaceutiske anvendelsesformer ved hjælp af eksempler: 25

Eksempel I

Tabletter med 5 mg 5,ll-dihydro-ll-[l-oxo-6-(l-piperidi-nyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on Sammensætning: 30 1 tablet indeholder:

Aktivt middel 50,0 mg Mælkesukker 148,0 mg

Kartoffelstivelse 65,0 mg

Magnesiumstearat 2,0 mg 35 265,0 mg

DK 161200 B

31

Fremstilling:

Der fremstilles en 10%'s slim ved opvarmning af kartoffelstivelse. Man blander det aktive middel, mælkesukkeret og resten af kartoffelstivelsen og granulerer 5 med den ovennævnte slim gennem en sigte med maskestørrelse 1,5 mm. Granulatet tørres ved 45°C, rives endnu engang gennem den ovennævnte si, blandes med magnesium-stearat og presses til tabletter.

Tabletvægt: 220 mg 10 Stempel: 9 mm

Eksempel II

Dragéer med 5 mg 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-(1-piperidi-nyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on 15 De ifølge eksempel I fremstillede tabletter over trækkes ved en kendt fremgangsmåde med et overtræk, der i det væsentlige består af sukker og talkum. De færdige dragéer poleres ved hjælp af bivoks.

Dragévægt: 300 mg 20

Eksempel III

Ampuller med 1 mg 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-(1-piperidi-nyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on Sammensætning: 25 1 ampul indeholder:

Aktivt middel 10,0 mg

Natriumchlorid 8,0 mg

Dest. vand ad 1 ml 30 Fremstilling:

Man opløser det aktive middel og natriumchloridet i det destillerede vand og fylder op til det ønskede volumen. Opløsningen sterilfiltreres og fyldes på 1 ml-ampuller.

35 Sterilisering: 20 minutter ved 120°C.

DK 161200 B

32

Eksempel IV

Stikpiller med 5 mg 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-(1-piperi-dinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzodiazepin-6-on Sammensætning: 5 1 stikpille indeholder:

Aktivt middel 50,0 mg

Stikpillemasse (fx Witep- sol W 45) 1.695,0 mg 1.745,0 mg 10 Fremstilling:

Det finpulveriserede aktive middel udsuspenderes i den smeltede stikpillemasse, der afkøles til 40°C. Derefter udhælder man massen i let forudkølede stikpilleforme ved 37°C.

15 Stikpillevægt: 1,7 g

Eksempel V

Dråber med 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-(1-piperidinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on 20 Sammensætning: 100 ml dråbeopløsning indeholder: p-hydroxybenzoesyremethylester 0,035 g p-hydroxybenzoesyrepropylester 0,015 g

Anisolie 0,05 g 25 Menthol » 0,06 g

Ren ethanol 10,0 g

Aktivt middel 5,0 g

Natriumcyclamat 1,0 g

Glycerol 15,0 g 30 Dest. vand ad 100,0 ml

Fremstilling:

Man opløser det aktive middel og natriumcyclamat i ca. 70 ml vand og tilsætter glycerol. Man opløser p-hydroxybenzoesyreesterene, anisolien og menthol i ethanol 35 og blander denne opløsning under omrøring med den vandige opløsning. Derefter fyldes med vand til 100 ml og man filtrerer til befrielse for svævende partikler.

DK 161200 B

33

Eksempel VI

Tabletter med 50 mg 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b]- [l,4]benzodiazepin-6-on 5 Sammensætning: 1 tablet indeholder:

Aktivt middel 50,0 mg Mælkesukker 148,0 mg

Kartoffelstivelse 65,0 mg 10 Magnesiumstearat 2,0 mg 265,0 mg

Fremstilling:

Der fremstilles ved hjælp af opvarmning en 10%'s slim af kartoffelstivelse. Man blander det aktive mid-15 del, mælkesukker og resten af kartoffelstivelsen og granulerer med den ovennævnte slim gennem en sigte med maskestørrelse 1,5 mm. Granulatet tørres ved 45°C, rives endnu engang gennem den ovennævnte si, blandes med magnesiumstearat og presses til tabletter.

20 Tabletvægt: 220 mg

Stempel: 9 mm

Eksempel VII

Dragéer med 50 mg 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(4-25 methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]-benzodiazepin-6-on

De ifølge eksempel VI fremstillede tabletter beklædes ved bekendt fremgangsmåde med et overtræk, der i det væsentlige består af sukker og talkum. De færdige 30 dragéer poleres ved hjælp af bivoks.

Dragévægt: 300 mg

DK 161200 B

34

Eksempel VIII

Ampuller med 10 mg 5,ll-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]-benzodiazepin-6-on-dihydrochlorid 5 Sammensætning: 1 ampul indeholder:

Aktivt middel 10,0 mg

Natriumchlorid 8,0 mg

Dest. vand ad 1 ml 10

Fremstilling:

Det aktive middel og natriumchlorid opløses i destilleret vand, og man fylder til det ønskede rumfang. Opløsningen sterilfiltreres og fyldes på 1 ml ampuller.

15 Sterilisering: 20 minutter ved 120°C.

Eksempel IX

Stikpiller med 50 mg 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b]-20 [l,4]benzodiazepin-6-on Sammensætning: 1 stikpille indeholder:

Aktivt middel 50,0 mg

Stikpillemasse (fx Witep-25 sol W 45) 1.695,0 mg 1.745,0 mg

Fremstilling:

Det finpulveriserede aktive middel udsuspenderes i den smeltede stikpillemasse, der er afkølet til 40°C.

30 Derefter udhælder man massen ved 37°C i let forkølede stikpilleforme.

Stikpillevægt: 1,745 g.

DK 161200 B

35

Eksempel X

Dråber med 5,ll-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6'-(4-methyl- 1-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]benzo-diazepin-6-on-dihydrochlorid 5 Sammensætning: 100 ml dråbeopløsning indeholder: p-hydroxybenzoesyremethylester 0,035 g p-hydroxybenzoesyrepropylester 0,015 g

Anisolie 0,05 g 10 Menthol 0,06 g

Ren ethanol 10,0 g

Aktivt middel 5,0 g

Natriumcyclamat 1,0 g

Glycerol 15,0 g 15 Dest. vand ad 100,0 ml

Fremstilling:

Det aktive middel og natriumcyclamat opløses i ca. 70 ml vand, og man tilsætter glycerol. p-Hydroxy-20 benzoesyreestrene, anisolien og menthol opløses i.ethanol, og denne opløsning blandes under omrøringen med den vandige opløsning. Derefter fylder man efter med vand til 100 ml og frafiltrerer svævende partikler.

Claims

10 N o=c-x-ch2-c=c-ch2-a hvori i X betegner grupperne H-C-R ,-NH- eller -O- ; og ^ A betegner grupperne / \ 4 -N (CH-) eller- -N N-R w'2n W

20 L3 hvori R betegner et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer, 25. er 1 eller 2; 3 R betegner et hydrogenatom eller en gruppe med formlen R5 -<CH2>n-NC c '

30 R6 c c hvori n er som defineret ovenfor, og R og R betegner en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer; R4 betegner en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 35 1-3 carbonatomer; . DK 161200B deres isomere samt deres farmakologisk acceptable salte med uorganiske eller organiske syrer.

2. Forbindelsen 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl- 6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2, 3-b] 5 [l,4]benzodiazepin-6-on samt dens farmakologisk acceptable syreadditionssalte med uorganiske eller organiske syrer.

3. Forbindelsen 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-(1-pi-peridinyl) -4-hexynyl] -6H-pyrido[2,3-b] [l,4]benzodiaze- 10 pin-6-on samt dens farmakologisk acceptable salte med uorganiske eller organiske syrer.

4. Forbindelsen 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-6-(hexa-hydro-lH-azepin-l-yl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b][1,4] -benzodiazepin-6-on samt dens farmakologisk acceptable 15 salte med uorganiske eller organiske syrer.

5. Lægemiddel, kendetegnet ved, at det indeholder en forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1 foruden sædvanlige bærer- og/eller hjælpestoffer. 20

6. Lægemiddel, kendetegnet ved, at det indeholder 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl-6-(4-me-thy1-1-piperaz iny1)-4-hexyny1]-6H-pyrido[2,3-b][1,4]ben-zodiazepin-6-on og/eller dets farmakologisk acceptable syreadditionssalte med uorganiske eller organiske syrer 25 foruden sædvanlige hjælpe- og tilsætningsstoffer.

7. Anvendelse af 5,11-dihydro-ll-[l-oxo-2-methyl- 6-(4-methyl-l-piperazinyl)-4-hexynyl]-6H-pyrido[2,3-b]- [l,4]benzodiazepin-6-on og/eller dens farmakologisk acceptable syreadditionssalte med uorganiske eller organi- 30 ske syrer til fremstilling af et lægemiddel med anti-thrombotiske egenskaber til behandling af thrombo-emboliske sygelige tilstande. \ 1 DK 161200 B

8. Anvendelse af forbindelser ifølge krav 1,3 og 4 til fremstilling af et lægemiddel til behandling af bradykardi og bradyarrhytmier.

9. Fremgangsmåde til fremstilling af 11-substi-5 tuerede 5/ll-dihydro-6H-pyrido[2,3-b][l,4]benzodiazepin- 6-oner beskrevet med den almene formel I: H O I Ji 10 2 Å I . -Ί» 0=C-X-CH2-C=C-CH2-A 15 hvori i X betegner grupperne H-C-R , -NB- eller -O- ; og i A betegner grupperne r~\ . 20 -*j (CH-) eller" -N N-R w v_y k3 hvori 25. betegner et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer, n er 1 eller 2; 3 R betegner et hydrogenatom eller en gruppe med formlen 30 r5 -(CH2)n-N^ , R1 2 6 hvori n er som defineret ovenfor, og R og R betegner 35 en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer; 2 R^ betegner en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe mec 1-3 carbonatomer; DK 161200 B deres isomere samt deres farmakologisk acceptable salte med uorganiske eller organiske syrer, kendetegnet ved, at man a) lader en forbindelse med den almene formel II; 5 H 0 I II X I J ,(ii) ---- -— 10 o = c- x-ch2-c = c- h hvori X er som defineret ovenfor, omsætte sig med en amin med én af formlerne: 15 / \ / \ 4 H-N (CH-) , H-N N-R w v_y r1. (Hib) (IIIO 20 4 hvori R og R er som defineret ovenfor, eller med et salt af en sådan amin under tilstedeværelse af formaldehyd eller paraformaldehyd og eventuelt under tilstedeværelse af katalytiske mængder af salte, i organiske opløsningsmidler ved temperaturer op til reaktionsblandingens kogepunkt; eller b) til fremstilling af forbindelser med den almene formel I, hvori X betegner gruppen , H-c-R , 30 1 hvor R er defineret ovenfor, lader dilithiumsaltet af en \ DK 161200 B forbindelse med den almene formel IV: H O I H jT-kS n c'v^ 5 l ί j J <IV) H reagere med en ester med den almene formel V: 10 7 a-ch2-c=c-ch2-chr-coor V , 7 hvori A og R er som defineret ovenfor, og R betegner en alkylgruppe med 1-10 carbonatomer, en phenylalkyl-gruppe med i alt 7-10 carbonatomer eller phenylgruppen, 15. et organisk opløsningsmiddel ved temperaturer på t60o-+20°C/ og om ønsket derefter adskiller en på denne måde tilvejebragt forbindelse med formel I i sine isomere og/eller overfører den til sine salte med uorganiske eller organiske syrer.