DK162098B - Benzopyrano(4,3,2-cd)indazolforbindelser, udgangsforbindelser til brug ved fremstilling heraf og farmaceutiske midler indeholdende saadanne forbindelser - Google Patents

Description

DK 162098 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte substituerede benzopyrano[4,3,2-cd]indazoler, udgangsforbindelser til brug ved deres fremstilling og farmaceutiske midler indeholdende sådanne forbindelser. Forbin-5 delserne ifølge opfindelsen har farmakologiske egenskaber og er nyttige antibakterielle midler, antifungale midler og antitumormidler.

Benzopyrano[4,3,2-cdjindazol-ringsysternet gengives ved formlen 10 .

H- :000t 15 7 *

Opfindelsen angår i et aspekt benzopyrano[4,3,2-cd]indazolforbindelser, der i fri baseform har strukturformlen 1: R10 N-N R2 ^7 Ης 25 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel substituenterne R7, Rs# Rg og Ri o betegner hydrogen, hydroxy eller alkoxy med fra 1 til 4 carbonatomer, i det følgende betegnet som lavere alkoxy; R2 betegner ANR'R", hvori A er en lige eller forgrenet 30 alkylenkæde med fra 2 til 5 carbonatomer og eventuelt substitueret med hydroxyl, og R' og R" er hydrogen eller lige eller forgrenet alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer og eventuelt substitueret med hydroxyl, og R5 er nitro, NH2, NHR2 eller NHR"", hvori R"" er 35 Or » -c-b-n \

Ry

, DK 162098B

2 hvori B er lige eller forgrenet alkylen med fra 1 til 4 carbonatomer, og Rx og Ry hver er hydrogen eller lige eller forgrenet alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer og eventuelt substitueret med hydroxy..

5 Forbindelser ifølge opfindelsen danner farmaceu tisk acceptable salte med både organiske og uorganiske syrer. Eksempler på egnede syrer til saltdannelse er saltsyre, svovlsyre, phosphorsyre, eddikesyre, citronsyre, oxalsyre, malonsyre, salicylsyre, æblesyre, fumar-10 syre, ravsyre, ascorbinsyre, maleinsyre, methansulfon-syre, isethionsyre, mælkesyre, gluconsyre, glucuronsyre, sulfaminsyre, benzoesyre, vinsyre, pamoesyre og lignende. Saltene fremstilles ved at bringe den frie baseform i kontakt med en ækvivalent mængde af den ønskede syre 15 på konventionel måde. De frie baseformer kan gendannes ved at behandle saltformen med en base. F.eks. kan der anvendes fortyndede vandige baseopløsninger. Fortyndede vandige natriumhydroxid-, kaliumcarbonat-, ammoniak- og natriumhydrogencarbonatopløsninger er egnede til dette 20 formål. De frie baseformer adskiller sig i nogen grad fra deres respektive saltformer med hensyn til visse fysiske egenskaber, såsom opløselighed i polære opløsningsmidler, men saltene er i øvrigt ækvivalente med deres respektive frie baseformer med hensyn til farmako-25 logisk virkning.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan eksistere i såvel usolvatiserede som solvatiserede former, herunder hydratiserede former. Almindeligvis er de solvatiserede former med farmaceutisk acceptable opløsningsmidler, så-30 som vand, ethanol og lignende, ækvivalente med de usolvatiserede former med hensyn til farmakologisk virkning.

Udtrykket halogen som anvendt heri skal omfatte fluor, chlor, brom og iod.

De omhandlede forbindelser kan være benzopyrano-35 [4,3,2-cd]indazolforbindelser med strukturformlen 2: N-N^R2 3

DK 162098 B

5 8 \ 2 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel R2, R^, Rg og R^ har ovennævnte betydninger.

10 Foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen omfat ter sådanne, hvori R5 er nitro, amino eller -NHR2/ hvor R2 har ovennævnte betydning.

Foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen er angivet i krav 2, 3, 4, 7 og 8.

15 Et noget bredere udvalg af enkeltforbindelser, som er mest foretrukne for deres farmakologiske egenskaber, er forbindelser med følgende navne: N-[ 2-[ 2- (diethylamino) ethyl ]-2H-[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-5-yl]ethandiamin og 20 N-[2 -[2 -(diethylamino)ethyl]-9-hydroxy-2H-[ 1 jbenzopyra-no[4,3,2-cd]indazol-5-yl]ethandiamin.

Yderligere foretrukne forbindelser er: N,N-diethyl-9-methoxy-5-nitro-2H-[l jbenzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin, 25 N,N-diethyl-9-hydroxy-5-nitro-2H-[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin, 9-methoxy-N,N-dimethyl-5-nitro-2H-[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-propanamin, 2-[ 3-(dimethylamino) propyl ]-5-nitro-2H-[l ]benzopyrano-30 [4,3,2-cd]indazol-9-ol, 5-amino-2-[2-(diethylamino)ethyl]-2H-[l jbenzopyrano-[4,3,2-cd]indazol-9-ol, 5-amino-2-[ 2-[ (2-hydroxyethyl) amino jethyl ]-2H- [ 1 ]ben-zopyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, 35 N—[2—[2-(diethylamino)ethyl]-9-hydroxy-2H-[lJbenzopy-rano[4,3,2-cd]indazol-5-yl]-2-[ (2-hydroxyethyl)amino ]-acetamid,

DK 162098 B

4 2—[ 2—[ (2-hydroxyethyl) amino jethyl ]-5-nitro-2H- [l jben-zopyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, 2-[2 - (diethylamino) ethyl ]-5-[ [2- [ (2-hydroxy ethyl) amino ]-ethyl ] amino-2H- [ 1 jbenzopyrano [4,3,2 -cd ] indazol-9-ol, 5 2-[2-[ (2-hydroxyethyl)amino]ethyl]-9-hydroxy-2H-[lj-benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-5-yl]-2-[ (2-hydroxyethyl)-amino]acetamid, 2—[ 2—[ (2-hydroxyethyl) amino jethyl ]-5-[ [2-[ (2-hydroxy-ethyl )amino]ethyl]amino]-2H-[l jbenzopyrano[4,3,2-cdj-10 indazol-9-ol og 5-[ (2-aminoethyl) amino j-2- [2- (diethylamino) ethyl ]-2H-[1]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-8-ol.

Opfindelsen angår som nævnt også hidtil ukendte udgangsforbindelser til anvendelse ved fremstilling af 15 forbindelserne med formlen _1_ og herunder specielt de forbindelser med formlen _1_, hvori betegner N02 eller nh2.

Disse hidtil ukendte udgangsforbindelser har ifølge opfindelsen formlen:

20 fl° ? P

s r7 no2 25 hvori R7, R8/ r9 ©9 R10 hver betegner hydrogen, hydroxy eller lavere alkoxy.

Foretrukne blandt disse udgangsforbindelser er forbindelser med formlen: 30 O Cl ΐίϋΟό

To2 35 hvori R8 og Rg hver især betegner hydrogen, hydroxy eller lavere alkoxy.

DK 162098 B

5

Fremstilling af forbindelser med strukturformlen: R10 N-N^R2

::W

R7 no2 kan ske ved omsætning af en 1-halogen-4-nitro-9H-xanthen-on og 10 R2~substitueret hydrazin med strukturformlen H2NNHR2, hvor R2/ R7, Re* r9 og R10 har de ovennævnte betydninger. Reaktionsbetingelserne kan varieres i vidtgående grad. Omsætningen udføres sædvanligvis i et opløsningsmiddel ved temperaturer mellem ca. 25 og ca. 140°C. Et 15 egnet opløsningsmiddel er acetonitril/ 1,2-dichlorethan, tetrahydrofuran, methanol eller DMF.

De nødvendige hydraziner fremstilles ved omsætning af hydrazin med det tilsvarende alkylhalogenid, XR2, hvori R2 har den ovennævnte betydning [J. Med.

20 Chem., 7_, 403 (1964)], eller andre i teknikken kendte fremgangsmåder som beskrevet nedenfor.

Fremstilling af forbindelser med strukturformlen N-N-^R2 fl° J Γ ΐ;:φφ R7 nh2 3 30 kan ske ved, at man underkaster en forbindelse med strukturformlen: R10 N N”R2

35 8 T T

r7 N02 reduktion, i hvilke formler R2/ R7' R8> R9 °9 R10 har de ovennævnte betydninger. Reduktionen udføres ved

DK 162098 B

6 hjælp af passende midler, fortrinsvis ved hydrogenering ved stuetemperatur under anvendelse af en palladium/ak-tivkul-katalysator i et opløsningsmiddel, såsom methanol eller eddikesyre, idet eddikesyre foretrækkes.

5 Fremstilling af forbindelser med strukturformlen 4: *10 N-n-r2 Ώ^ΐάΐ r7 nhr2 15 1 kan ske ved omsætning af en forbindelse med strukturformlen 3_: R10 N-N-r2 Æå

Rs'^Y^O

r7 nh2 3 25 med en halogenalkylamin med formlen XR2/ i hvilke formler R2, R7, Rq, R9 og Ri g har de ovennævnte betyd ninger, og X er et halogen. Når R2 omfatter en følsom gruppe, beskyttes denne hensigtsmæssigt før omsætningen 30 med en beskyttelsesgruppe. Omsætningen udføres i fraværelse af opløsningsmiddel eller i et passende ikke-reak-tivt opløsningsmiddel, såsom CHCI3 eller DMF. I fraværelse af opløsningsmiddel kan reaktionstemperaturen være ca. 150°C. Med opløsningsmiddel benyttes tilbagesva-35 lingstemperaturen, f.eks. fra ca. 60 til ca. 150°C. Baser, såsom Et3N eller K2CO3, kan benyttes som syrebindere, men er ikke væsentlige.

Fremstilling af forbindelser med strukturformlen 4;

DK 162098 B

7 N-N^R2 ,sÆ0 5 VY^°^r r7 nhr2 4 kan ske ved omsætning af en forbindelse med ovenstående formel 2 10 med det tilsvarende substituerede aldehyd eller acetal, keton eller ketal ved tilbagesvalingstemperatur, f.eks. ved fra ca. 65 til ca. 140°C, og reduktion af den opnåede Schiff-base med et passende reduktionsmiddel, såsom NaBH4 eller NaBH3CN, hvorhos R2# R7/ R8/ R9 °9 R10 har 15 de ovennævnte betydninger.

Ifølge én foretrukken fremgangsmåde fremstilles benzopyrano[4,3,2-cd]indazolforbindelserne med ovenstående strukturformel 2 ved, at man omsætter en eventuelt substitueret 1-chlor-4-nitro-9H-xanthen-9-on og en i^-substi-20 tueret hydrazin til dannelse af de forbindelser med strukturformlen J_, hvori er nitro, og om ønsket omdanner nævnte forbindelser ved reduktion til forbindelser med strukturformlen l, hvori R5 er NH2, og, om ønsket, yderligere omdanner nævnte forbindelser til forbindelser med strukturformlen 1, 25 hvori R5 er NHR2, ved alkylering med en halogenalkyl-amin med formlen XR2/ eventuelt efter at have beskyttet følsomme grupper med beskyttelsesgrupper; eller ved monoacylering med et reaktivt derivat af et acylerings-middel svarende til R"", hvor R"" har den ovennævnte be-30 tydning, og reduktion af det acylerede produkt, eventuelt efter at have beskyttet følsomme grupper med beskyttelsesgrupper; hvorefter man fjerner eventuelle beskyttelsesgrupper ved hydrolyse eller reduktion; og isolerer produktet i fri baseform eller som et syreaddi-35 tionssalt, hvorhos X er chlor eller brom, og R2 har den ovennævnte betydning.

Ifølge en anden fremgangsmåde fremstilles benzo-pyranof4,3,2-cd]indazolforbindelserne, der i fri baseform

DK 162098 B

8 har strukturformlen: N-N^R2 ^10 Ji Jf

'’«JO

R NH(CH2)2NH(CH2)2OH

ved, at man omsætter en forbindelse med strukturformlen: 10 O N-N^R2 ?10 I Γ wø R7 nh0 15 7 2 hvori R7, R8/ R9 og Ri o er hydrogen, hydroxyl, lavere alkoxy eller benzyloxy, eller p-halogen- eller p-meth-oxy-substitueret benzyloxy, med 3-({5-halogenethyl)-2-20 oxazolidinon til opnåelse af en oxazolidinonforbindelse med strukturformlen: > Γ-f R2 25 O I-^

R7 NH(CH2)2nJ^O

O

og underkaster den sidstnævnte 30 forbindelse alkalisk hydrolyse til opnåelse af en forbindelse med strukturformlen: R10 |~f"R2 ήΟΟ

R? NH(CH2)2NH(CH2)2OH

DK 162098B

9 om nødvendigt fjerner eventuelle benzyloxygrupper eller substituerede benzyloxygrupper ved hydrogenolyse og isolerer produktet i fri baseform eller som et syreadditionssalt. Hvis en eller flere af R^, Rg, Rg og R^q 5 er benzyloxy eller alkoxy, kan benzyl- og alkylgrupper-ne fjernes ved hydrolyse eller behandling med bortri-bromid.

Ifølge endnu en fremgangsmåde fremstilles forbindelser med strukturformlen 10 N-N^R2 15 N02 5 ved omsætning af en forbindelse med strukturformlen: O Cl N02 25 med en substitueret hydrazin med strukturformlen H2NNHR2/ hvor R2 har den ovennævnte betydning, og Rq og Rg er alkoxy med fra 1 til 4 carbonatomer og desuden kan være benzyloxy eller halogen- eller methoxy-substitueret benzyloxy.

30 Ifølge endnu en fremgangsmåde fremstilles forbin delser med strukturformlen _6: N-N-"R2 :?θυφ NH- 6

DK 162098 B

10 ved, at man underkaster en forbindelse med strukturformlen _5: N-N^R2 ! "ΟΟυό N02 5 10 reduktion, i hvilke formler R2 har den ovennævnte betydning, og R8 og Rg er alkoxy med fra 1 til 4 carbon-atomer og desuden kan være benzyloxy eller halogeneller methoxy-substitueret benzyloxy. Reduktionen udfø-15 res fortrinsvis i AcOH under anvendelse af Pd/C som katalysator for de methoxy-substituerede forbindelser, og i MeOH under anvendelse af Raney-nikkel som katalysator for de benzyloxy-substituerede forbindelser.

Forbindelser med strukturformlen ]_·.

20 N-N—R, 25 NHR2 7 kan desuden fremstilles ved alkylering af en forbindelse med strukturformlen 6^ N-N^R2 NH- 6 * 35 i hvilke formler R2 har den ovennævnte betydning, og Rs og R9 er alkoxy med fra 1 til 4 carbonatomer og desuden kan være benzyloxy eller p-halogen- eller p-methoxy-sub-stitueret benzyloxy.

11

DK 162098 B

Opfindelsen angår desuden et farmaceutisk middel, der er ejendommeligt ved det i krav 9's kendetegnende del angivne. Det farmaceutiske middel kan således omfatte en forbindelse med strukturformlen j_ og farmaceutisk 5 acceptable salte heraf i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.

Det farmaceutiske middel kan specielt omfatte en forbindelse med strukturformlen 2 og farmaceutisk acceptable salte heraf i kombination med en farmaceutisk ac-10 ceptabel bærer.

Det farmaceutiske middel kan mere specielt omfatte en forbindelse med strukturformlen 1, hvori R_,, Rof Rg og R1q er hydrogen, og farmaceutisk acceptable salte heraf i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.

15 Det farmaceutiske middel kan også specielt omfatte en forbindelse med strukturformlen 6^ og farmaceutisk acceptable salte heraf i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.

20 Fysiske og farmakologiske egenskaber af forbindelserne.

Benzopyrano[4,3,2-cd]indazolforbindelserne ifølge opfindelsen varierer i farve fra beige til gul. De er almindeligvis krystallinske faste stoffer, der er sta-25 bile under normale atmosfæriske betingelser. Forbindelserne bar typisk smeltepunkter i området fra ca. 100 til ca. 250°C.

Forbindelserne er nyttige som farmakologiske midler til behandling af bakterielle og fungale infektioner 30 hos varmblodede dyr og mennesker. Virkningen af repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen blev fastslået ved de nedenfor beskrevne forsøg.

Foruden deres nyttige anvendelse som antibakte-rielle og antifungale midler udviser forbindelserne 35 ifølge opfindelsen antitumorvirkning in vitro og in vivo.

Fra US patentskrifterne nr. 3.505.341 og 3.963.740 kendes med de omhandlede forbindelser nært be-

DK 162098B

12 slægtede forbindelser, der ligeledes har antimikrobiel virkning. De fra US patentskrift nr. 3.505.341 kendte forbindelser er isostere med de omhandlede, idet de indeholder et svovlatom i den midterste ring i 6-stil-5 lingen. I 5-stillingen er de substitueret med CH^, CI^OH eller CHO,og af 6-, 7-, 8- og 9-stillingerne kan kun 8-stillingen være substitueret og kun med et halogenatom. De fra US patentskrift nr. 3.963.740 kendte forbindelser er til dels isostere med de omhandlede, 10 idet de enten kan indeholde et svovlatom eller et oxygenatom i den midterste ring i 6-stillingen. Desuden er N-atomet i 2-sidekæden i form af et N-oxid. I 5-stil-lingen er de substitueret med methyl, hydroxymethyl eller acyloxymethyl. Vedrørende 6-, 7-, 8- og 9-stillin-15 gerne er kun den ene af 7- og 8-stillingerne substitueret, og nærmere angivet med et halogenatom eller en alkoxygruppe. De således kendte forbindelser er imidlertid de her omhandlede forbindelser underlegne med hensyn til antitumorvirkning, som det vil fremgå af 20 den nedenfor angivne sammenlignende forsøgsrapport.

Undersøgelser af farmakologisk virkning

In vitro 25 Én test er cellescreeningstesten med in vitro prolifererende humane colon-adenocarcinoma(HCA)celler.

Ved denne test trypsiniseres HCT-8-celler(HCA-celleli-nie modtaget fra Yale University) under anvendelse af trypsin-EDTA. En enkelt cellesuspension opnås ved at 30 passere cellerne gennem en 26 gauge nål med en 20 cm^ sprøjte. Der fremstilles en cellesuspension under anvendelse af RPMI 1640 + 10% FCS + 50 pg/ml gentamicinsulfat med en cellekoncentration på 30.000 celler/ml. Cellesuspensionen dispenseres i Linbro-plader med 24 brønde, 35 1 ml/brønd. Pladerne inkuberes i ca. 48 timer ved 37°C i en 5% CO2-atmosfære. På dette tidspunkt tilsættes test-

DK 162098B

13 forbindelser i den rette koncentration. 5 μΐ af 200 ug/mlstanuneopløsning sættes til hver brønd ved en primær test. 10 μΐ af den rette fortynding sættes til hver brønd til en titreringstest. Pladerne reinkuberes i 5 yderligere 60 til 65 timer ved 37°C i en 5% C02-atmos-fære. Cellerne lyseres under anvendelse af en blanding af kationisk overfladeaktivt middel, iseddike og natri-umchlorid. 2 ml af den lyserede cellesuspension fra hver brønd sættes til 8 ml fortyndingsmiddel. Antallet af 10 kærner bestemmes under anvendelse af en Coulter-tæller (ZBI-model), og der beregnes en procentisk vækst for hver medikamentkoncentration. Ud fra denne bestemmes en ID50 (den molære koncentration af forbindelsen, der bevirker 50% væksthæmning).

15 Ved en anden test anvendes L1210 celler, en museleukæmicellelinie, dyrket i RPMI 1640 suppleret med 5% fetal okseserum og gentamicin (50 μg/ml). Der fremstilles medikamentfortyndinger i et passende opløsningsmiddel, og 20 μΐ af hver fortynding sættes til 20 Linbro-vævskulturplader med 24 brønde efterfulgt af tilsætning af 2,0 ml cellesuspension indeholdende 3 x 10^ celler pr. ml. Opløsningsmiddel- og mediumkontrol-prøver medtages ved hver test. Efter inkubering ved 37°C i tre dage i 5% CO2 fjernes indholdet af hver brønd, og 25 cellerne tælles i en ZBI Coulter-tæller. Den procentiske vækst beregnes i forhold til kontrolprøverne, og medikamentaktivitetsniveauerne udtrykkes som ID50 i mol pr. liter.

Endnu en test er in-vitro-antibakterie/antifun-30 gus(ABF)testen. Forbindelserne testes for antimikrobiel virkning ved en agarskive-diffusionsprøve, en mikrobiologisk standardmetode til testning af antibiotika. Efter inkubering af hver kultur med en testforbindelse bestemmes der en hæmningszone. Zonediameteren (mm) for 35 aktive forbindelser ligger i området fra et minimum på '14

DK 162098 B

13,5 mm til så meget som 60 mm, idet en større diameter er udtryk for højere aktivitet. At bekvemmelighedsgrunde er der angivet værdier for to gram-negative bakterier (Aerobacter aerogenes 0126 og Escherichia coli 04863), 5 to gram-positive bakterier (Bacillus subtilis 04555 og Streptococcus faecalis 05045, der udnytter AM-09 medium) og én myceliel fungus (Penicillium avellaneum M2988).

Endnu et test er in-vitro-antibakterietesten (ABMF-testen), der er en anerkendt mikrofortyndingsføl-10 somhedsstandardprøve i Mueller-Hinton-broth mod grampositive og gram-negative bakterietestorganismer. Prøven er en modificeret udførelse af en kendt prøve, der er rapporteret i Manual of Clinical Microbiology, Lennette, E.H., ed., af Barry, A.L. og C. Thornsberry på side 463-15 474 og af Gavan, T.L. og A.L. Barry på side 459-462, American Society for Microbiology, Washington, 1980.

Ved testen anvendes der en given bakteriekultur til podning af individuelle testbrønde i mikrofor-tyndingsbakker, der indeholder vækstmedium og testfor-20 bindelse, den sidstnævnte i en mikrofortyndingsrække: 1000, 333, 111, 37, 12, 4, 1,4 og 0,46 mikrogram pr. ml.

De opnåede podede bakker bliver hver lukket tæt til, inkuberes med blindkontrolprøver ved 37°C i 16-24 timer og aflæses derefter for minimal hæmningskoncentration 25 (MIC), den laveste koncentration af testforbindelse, som fuldstændig hæmmer bakterievæksten. MIC-værdier lavere end 333 ug/ml angiver antimikrobiel virkning. Af bekvemmelighedsgrunde er der angivet værdier for Escherichia coli, Corynebacterium Sp. ATCC 21698, Salmonella typhi-30 murium, Streptococcus pneumoniae og Rhodotorula auran-tiaca.

DK 162098 B

15

In vivo

En anden test er in-vivo-lymfocytisk leukæmi-P388-testen. De anvendte dyr er enten han- eller hun-5 CD2Fi-mus. Der er seks eller syv dyr pr. testgruppe. Tumoroverføringen foregår ved intraperitoneal injektion af fortyndet ascitesvæske indeholdende celler af lymfo-cytisk leukæmi P388. Testforbindelserne administreres intraperitonealt én gang dagligt i fem på hinanden føl-10 gende dage i forskellige doser efter tumorindpodningen.

Dyrene vejes, og overlevende dyr registreres på vedtægtsmæssigt basis i 30 dage. En forbindelse betegnes "toksisk", hvis, ved en given dosis, alle dyrene dør før fire dage efter den første injektion af medikament. Der 15 beregnes et overlevelsestidsforhold for behandlede (T)/— kontrol (C) dyr. Et kriterium for effektiv virkning er et forhold T/C x 100 på større end eller lig med 125. Se Cancer Chemotherapy Reports, del 3, 2» 1 (1972)# med hensyn til en omfattende redegørelse for testen.

20 Disse testprocedurer gav de i de nedenstående tabeller 1, 2 og 3 anførte resultater for repræsentative forbindelser ifølge opfindelsen.

DK 162098 B

16 HE- <u a ~ Η < c ” S Ζ

*-*. «I

rH · σ σι ο £ * ^ eU ί " « *« σ ο ·*> •rt tt* w «ν

Q

• · U m Γ* \ο ο W -Η Ή -Η Ρ5 •Sil« ^ Η “ϊ

",3^ s s S

Μ i Η d) J *· r*· ύτ 4j« -» *·«· Μ

(U

• § ιη π -ι ν Vi -Η ·

CN| Q) Ό ω ο ι ι I

,-t ffl υ no c ΟΝ O , Ή II) Nt Ό I Η «1 me f» ν υ +) ·η ca < c ι ι ι

m — d . J

10 % 0) t i—l CN o rd ** α b">n O ή *-tcn«-4 vo*«* 3 ·. ^ Η Π ^ Η Γ"

^ Η M fS Η H CN H

H — > U

id S c " G G « B< G G ,η'’ tn H æ .3 o tn iM “5·“ ooa in rs η S m o o m es ^ O “ -8 g O N " H C es rH <U K □ 55 \ yp^t /5 · r- H O- Γ \0/ >* r- 'a 'o u Si JH '2 '3 :· : Α πί CM Z=< O u, * flj Λ I \ / η* α μ x «r \o

Eh *H ^ \-' 1 / ι M i ·» 55 O " ~ 3

E V

u -rt O

O +) U

EM 2

5¾ >5 t T

•H IQ C or" o co -P η a —r i mi d rd m σ o rfj σ Q M -4 X ~4

M »H

cN en x tn x W r* ·— »J Ή »r m co

CN

x 2

w<N

in U

Λ ΓΊ CN rN x O o iN u

Z Z X X

z z

X

o Γ 4

X

u

CN

ΓΝ x (N fN

AJ U jJ li Π td X X Cd

a: z z z Z

ΓΝ £N fN

3 X X X

u u u u

η η (N iN

X XXX

CJ u u o

DK 162098 B

17 u 1 s E i- o o 3 * - *

Λ « Ϊ 2 2 o O

_ -i ri O O O

• - " 2 O O

ri “ ^ ~ o

•H

2 S

H V 10 vø UJ

4J C » "> , r, S . s 2 S ° <* O m

O

O ° C, " -H · Mi NO vø C £ t- 't t- <* n

§ S ° » s o*· rT

m o V V v ri -C o

rH

ta .

, G r

I W D

CTi H > o o a ^ Q

* J ^ r- r- w 'Ί.

1/1 2 . - - Π 2 - (N M IW-i-i'·. ^

<1> S

Μ Ή CQ _ us >2 ° ^ * T *1 Ί ^ o

•tf υ o O -H

itf Ό v 2 V rH

Jj c , -i

7- . U

ffl *H

% OJ O *e * o U o ΝβΝβ ΝΠ·*· co » «· vøao r*r- [3fN > X >-* Minn X § S oa« tn ·· ** H -η-4 Nhh (\)ΝΗ ri *h 3 n > •H ** S r.

S 9 3¾ “I rtS ΛΝ „g N 2 ag ggg S3 ggS 553"- S ίο >1« _ m S* ' /^Λ\ ir M 3 2: *-<( )>-“ o -4 -I C ΰ Λ ·ΊΛ U/ J, > - 7 ?7 - ® £ Sh^Vv = Ξ 3 ’s '2 ’2

·* i O S X K K K K

λ S \Xv 2 ” 2. 1 2, ®

3 I ζΓ J C" - " rT

CO K

-8 ' o I +J μ Ή

o -M

G <fl

3 Λ <N

+J 2 * •η η Λ *

, i i ιΛ M

+J TI * » CM u < 4J j« p) y n „ p, g Ego = X Z 2 2 2 S" S” ri N 2 2 rj

ri AJ u M ri J

* “ g g X H

sT -m - s* ^ u Dug g

Ji _n _j-4 ΰ uug g σ o c Ο» n ri ri “ u o 5 2 2 I—i 0) pi . B S SS p. ; ^ “ ".i "·ί Ί « t m o-S 2” 3“ s ^ 5 ^ ft* 4^-^' **H pH pH t ^ 41 18

DK 162098 B

H 5 o H u " os o no o o o ~ao n O O O o ^ O A O O o o · Η Η Η H *4 C λ A Λ

G

o •H ·

•P E

(tf s v' o ei n C o o·» o a ίο·· ► * »· *· K η -4 μ r- ο η Q) · η ·μ η ο η Q ui m on « Λ 5 .

(/3 α 0' « C .

c Ο ο ^ η ο ο e U m η -η μ η [> Η Ο η η ^ η η jS U η η

rH

1 <3 r Q an a in Π *J o n(N r- σ o - ·Ηοη~4ΐιοο Μ β ,· a λ o c M I λ * "* 6

OH K

ή o m « N (¾ -i ° <3 » η o

MrS on n a ·ψ~ a -Ϊ-

ΡΌ -H -4 V O IH

(tf β ·<-« on *0·Η « η αία η a « (tf i o thcvj O U O nmu nto o co o o o m ^ n ^ \o tø n η >S.n r·· n ft f- n uha tøovø o*vn nnt- b__ - H nnh nn nnh nnn nnn n n -* (ΚΙ > m * •H Ti« c «*»*. Jj H - * μ y-ι Λ tno tn in tn 'Z *2 y co *hjc in n in m n tn n tf (tf fi O (J)N ·. · t. *. ·* ·. - W (tf n © σ o om n \o o tn« mmø oao in n vo P bip ro λ QE o «η η n mnn nn ^ η vo η n

H O >« ~ -1 . M H

O ftl Ή 01 O 1 /^Λ — h n , /· \\ <n o

h a f—U ))-a S

CN O <U I VwV ^ •Η Λ I / \ > — o\ co m r- \o γ- Η Μ«—« jp_/ _ κι il i i i 0) G)riz“\ ° Cw a o o O o e ^ 4J \ / Ή η nn η —« .* S oi /'“'Λ o in κ « χ μ χ κ

Eh id Μ /' \\ n Q

J3cn \l y/ ri w t- aa in n r- n •Η I V/ -H -·---- 4_) .jj ? / iJ tn « η η η n «01 m m H “

0) X X

s.d ox ox i jj no no λ £2 an X n m *h a a ox 0 4-· η O no ,¾ W ~ Γ* an Η η O — ox x o xu

H g Z X Z X

•ri 01 M2 η Z

+J ·Η in x η X n

r*u « U X U X

.2Π - u — u

O o JM

CJ U n CN U U

X X O X X X

Z Z Z Z Z z

X X X X

O o o o

M n M M

X X X X

U O O U

η η η n η n a a a χ n 4J *i u u U u a &i &i χ a a a z z z z z z Μ η η η η n x xx a a a u u u u u u Γ4 mm η η n

X X Z X X X

u u U U u u c? Ο Ο Ο C Ο o

X X X X X X

H

• 0) 1¼ , cz r* ve n n m o tirti æ ^ aa — r*'— m — vo —·

Mtu nO as *r -* in Λί O'— Owo3 o— o— Q <U η η η π η n

Qh>— — i>H

DK 162098 B

19 6 a w

C n O

IC *"i o U *n o 3 ·* «9 Λ (K t—i x. g c

o *β vO

C I -* * 2 Oi o' o p c v m B w d ty d g o w

B

W D tP -<-« w " ft) « Ά

2 iJ

du ** e « o o

Bov V

1 «d c 00 >

* i—! L

in m o - n R u CM 0) Ή r—1 d

^ O -HE

0 N E 3

<U <0 I J

TD fes ni d ti e *n IS SI S i

ty V

<l) I h rsi ty w m tjvro 3 - m *sp — φ •H ·—> -1 ** T-

-U 0 8 cT

d d v n) id . · J_j u

tn >1 <N

π ° 0 “ >ρΛ „, o m X d KQV« s ty rH ty X^ZV > Λ *> p.

XI ty Λ I Γ\ X I i S JJm * \ ? 5 ~ 3 3 SV p^( Si

*K )\ n“ M fH

(0 CM \V // H ^ * J3 i V^z |4 »M e

Ή 4J V

4J ty ® d d * <0 ty % 3 1 4J U Ή O -d g w 3 X3 •M 3 H W m +J -H «

d M

< 4J

IN IN

o o z z

N N

*4 *4

N U U

* 2 Z

rJ IN

s s u u CN ΓΊ S s u υ o ® r» Λ X Ό V =

H

0) . ^ O ^ ^ SS s 2 = £ ^ m w rsi ^ Q ty N n CU--- —* »**

DK 162098 B

20

Sammenlignende forsøgsrapport

Testprocedure

Antitumorvirkningen bedømtes hos F1 hybridmus afledt fra den indavlede stamme med tumoroprindelsen.

5 Randomiserede mus (CD2F1) inokuleredes med optalte tumorceller (P388 eller L1210 leukæmi) på dag 0, således at tumorbelastningen ved den første behandling var én million celler. Efter celleimplanteringen rerandomeri-seredes musene og fordeltes i behandlingsbure. Hver 10 gruppe af mus behandledes IP med prøvemiddel baseret på den gennemsnitlige burvægt på de dage, der angives i testprotokolplanen. Testforbindelserne opløstes rutinemæssigt i saltopløsning eller 0,05 N natriumlactat-puffer. Antitumorvirkningen bedømtes på basis af % T/C.

15 Middellevetiderne beregnedes ved metoder, der egner sig for gruppeobservationer. % T/C for levetidsbedømmelser beregnedes som 1qq middellevetid for behandlede mus middellevetid for kontrol mus 20 I nedenstående Tabel 4 angiver IPIP Q01Dx09 tumorinokuleringsvejen, medikamentbehandlingsvejen, antallet af medikamentdoser pr. dag, og antallet af behandlingsdage, idet IP betyder intraperitoneal, og IV betyder intravenøs. Betegnelsen IPIP Q07Dx09 for 25 den første forbindelse i Tabel 4 betyder f.eks., at tumoren inokuleredes intraperitonealt, testforbindelsen administreredes intraperitonealt, dyret fik indgivet doser 7 gange pr. dag, og behandlingen udførtes over 9 dage.

30 Testforbindelserne er som angivet i Tabel 4 forbin delser ifølge opfindelsen samt forbindelser kendt fra US patentskrifterne nr. 3.505.341 og 3.963.740, jf. den foreliggende beskrivelse side 11, linie 33 til side 12, linie 20.

DK 162098 B

21 p (ΰ +j >>>> >>>>>>>> CJ ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η *Η ·Η ·Η ·Η ·Η

<D +J4J4J-P -jJ-U-U-U-P-P-U+J

ε χ χ ,¾ ,¾ χ μ χ χ χχ χχ ε ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ο « -Ρ 0 -Ρ HU ΰΊ1 OCO (N^C (Tits O'- '-'ΰ > \ *— i" <>0 ι-« <ό «— ο i-~ m ο ο

• Η £η CN <— »— <— (\J(M fHN tNtN CNtN

-P

X

< ld ιίΐ in cn cn m lo <n ldcn^cn m ld ^ w h. h* ^ v *

cn\ LDCNCMVO N« OW lilN KIM

0 &1 fN >- V— r— t— CN<— OJ*— q ε •vf

ι-i "P "P

ø Tim gin ·ρ m g in 0 "i ro X! go iBo go ft 0 -ho 0 td R3 X .V X fy χ .χ X ρ X x

Eh M Q 3 Ω ,Χ Q 3 Q (ti D Q

C d)r- 3t-0)r->^t<(0'<i'

Ptd 00 jo 00 Jo Oo go ο η j a a pi a a a 0 a

g Λ o o o C

30 COPj i-H coCU'-Oir-'-aifCCLi

Eh+J 00 H CN H COHCNHOHrHH

3 rofc,— (X md, τβ, mft 0ft

Pi PjHJh CUhPIhShSh c 0) 0 I—I (1)

XJ

CfN 33

*i O

•H W (N <N

η, Z X 32

4-1 <N 2 CM U

Qj x <n fi ™ ΪΓ ο x g *

U <N U Z U

S CN CM DC

Λ, u i 1 x » z

0 \ / \ U O <N

w, \ / \ X N x

O' 2-\—Z XU

Η Γ O /=\ " S Y_(/ \ / \ u ^ / \ *~\ -r^ 2-—/ O Y ff 0 l \ I z \ /

0 \—f / \ X

s \J : X5 0 P = 0

pH

DK 162098 B

22 ρ >>>>> >>>> >>>> > > > (d -Η -Η -Η -Η -Η ·Η ·Η ·Η -Η ·Η ·Η -Ή ·Η .,-ι •Ρ -Ρ -Ρ ·Ρ -Ρ-Ρ -Ρ -Ρ -Ρ -Ρ I -Ρ-Ρ -Ρ-Ρ i J-J JJ 4-ϊ c ,χ-χ ,χ μ+ χχ χχ + 5 55 01 (d (d id (did <!<!<;<! <! (d <! (d (¾ (¢(¾

g G G G G G GC GGC

g Η Η Η Η H HH HHH

0 ft -p 01

-P

>U cn ^ cd cm m in > (o ooo mm mm mm mm -H \ ffi O O OCTi t— in CM r^CN ΠΟ lO O o *— •P E"l <— t— c— CM T— *— r- r— <— ί—t—

,X

< m m cm in cm in cm <— m ^ CQtJl *> »*** * k •η X ooo oo mcMio incM ion incM m ^ oin ^oi\ooinoo cm r- cMr- (Mr- cMr-mn- P 0 tn cm <- cm <- ,- (d Q g 01 -P P 0 ip —- -Η ·Η -r-l

HO £ Ο -Η ΟΊ go (dO O -HO grO

^ go fB o go Rjo go 0) o go

ffl X ,Χ X ffi X .XX OX Cr>X $ χ 5 X

Η X a GQ xa GQ CP CP 5q 3Q

0) C G r— 0)r— G r- Ο)»- G«— pr— G»- 01^

,0 P id 01 O G Ο 01Ο GO HO HO 0O GO

(d oh go a hi α a oi a a ^ a a

Eh gfi o o S 01 o G ai oo ft ,- ft 001¾ '-cm ft h cm co cm <- cm

E-lGOOHCMH ooh CMHOH&H oo H CM H

G cn ft r- ft cn ft t- ft *- ft a) > cn ft *- ft

Ρί ft H GH ftH GH PQH GH ft i—i GH

cn • Cl

^ Γ* w CM

o S 2 in ss JB So <d · x” Hm Ρ η U I "cm ip = /=\ g \ •P p. \ _/ \ a) z r~ s \ /\ Oi .

§c z M nr ω £ /—\ Z=V_/ =/^

S» / \ \ / / \ SB

ss \J ^ \J

ts oi \ G -P \ -H (d u

-Q Oi P

O C/1 ft D

23 ^:>>>> ί> 5 ·η·η ·η·η ·η ι

-Ρ η jj jj jJ «Ρ \ *P *P

c £ £ £ £ .¾ + * *

1 11 ss s SS

q Η Μ Η Η -H HH

ί*Η c •r-1

+J

Q)

+3 S

0) u J oo '— noo Dj or-' O tp om cn o h h ™ ^ t-* (ΰ i— *—

•H

+> φ * * < ^

•r-H

0 fp +)

*·“I

> in

^ - C

— co cn .h om om S §£ S" ω o cp ^ -π -μ ρ έ +j ^ * Ο φ

H C

^ M

TP

ι—1 § -hoi η σ> '2 J£? po 9 b ο ε ο εο εο £ fB X g £ ^ * S (§ H X o -MQ -¾° -s “

. ^ r— ΰ P P

Cfljo (1)0 (1)0 (1)0

u* So So< JO JO

2 co Aj OOP 00 p 2Pj

SS ss 2P "S

H (¾ H pH PH PH

4) O

33 O

— ^ n

V ^ o M

ί CM IB · Ϊ ? £

°* P (ifl n CM Z

— W mi in *> 4J <M

z z ^ ^ a u z cm γί a\ z z o

* ® n , M 04 (N

O U -P · 03 33 ® _Γ* ™ ^ υΛΪ t> o /=\

r\ \/-\ sS Λ-f5 *\-f‘ *=M

z==w7 z \=/ h3 ζ=^~Λ /=={ 11 \j \j \! o co ^ *„ P D o w

DK 162098 B

24

Fremstilling af farmaceutiske præparater Når de anvendes som antibiotiske og antifungale midler, kan de omhandlede forbindelser tilberedes og ad-5 ministreres i mange forskellige topiske, orale og par-enterale doseringsformer. Det er klart for fagmanden, at de nedenstående doseringsformer som den aktive komponent kan omfatte én eller flere forbindelser med formlen 1, et tilsvarende farmaceutisk acceptabelt salt af 10 en vilkårlig af nævnte forbindelser, eller en blanding af sådanne forbindelser og/eller salte.

Til tilberedning af farmaceutiske præparater ud fra de omhandlede forbindelser kan indifferente, farmaceutisk acceptable bærere være enten faste eller flyden-15 de. Præparater i fast form indbefatter pulvere, tabletter, dispergerbare granulater, kapsler, cachetter og stikpiller. En fast bærer kan være én eller flere stoffer, der også kan virke som fortyndingsmidler, smagsstoffer, opløseliggørere, smøremidler, suspensionsmid-20 ler, bindemidler eller tabletdesintegreringsmidler, og det kan også være et indkapslende materiale. I pulvere er bæreren et findelt fast stof, som er blandet med den findelte aktive forbindelse. Til opnåelse af tabletter blandes den aktive forbindelse med bærer med de nødven-25 dige bindeegenskaber i passende mængder og komprimeres i den ønskede form og størrelse. Pulverne og tabletterne indeholder fortrinsvis fra 5 eller 10 til ca. 70S af den aktive bestanddel. Egnede faste bærere er magnesiumcar-bonat, magnesiumstearat, talkum, sukker, lactose, pec-30 tin, dextrin, stivelse, gelatine, tragacanth, methyl-cellulose, natriumcarboxymethylcellulose, et lavtsmel-tende voks, kakaosmør og lignende. Udtrykket "tilberedning" skal indbefatte formulering af den aktive forbindelse med indkapslende materiale som bærer til til-35 vejebringelse af en kapsel, hvori den aktive komponent

DK 162098 B

25 (med eller uden andre bærere) er omgivet af bæreren, som således er forenet med den. Tilsvarende er cachetter indbefattet. Tabletter, pulvere, cachetter og kapsler kan anvendes som til oral administrering egnede faste 5 doseringsformer.

Præparater i flydende form indbefatter opløsninger, suspensioner og emulsioner. Som eksempel kan der nævnes vand eller vand-propylenglycol-opløsninger til parenteral injektion. Flydende præparater kan også for-10 muleres i opløsning i vandig polyethylenglycolopløsning.

Til oral anvendelse egnede vandige opløsninger kan fremstilles ved at opløse den aktive komponent i vand og tilsætte passende farvestoffer, smagsstoffer, stabiliseringsmidler og fortykkelsesmidler efter ønske. Til 15 oral anvendelse egnede vandige suspensioner kan fremstilles ved at dispergere den findelte aktive komponent i vand med viskost materiale, dvs. naturlige eller syntetiske gummier, harpikser, methylcellulose, natrium-carboxylmethylcellulose og andre velkendte suspensions-20 midler.

Topiske præparater indbefatter pudringspulvere, cremer, lotioner, geler og sprays. Disse forskellige topiske præparater kan formuleres ved hjælp af velkendte metoder. Se f.eks. Remington's Pharmaceutical Sciences, 25 kapitel 43, 14. udgave, 1970, Mack Publishing Co.,

Easton, Pennsylvania 18042, USA.

Det farmaceutiske præparat er fortrinsvis i enhedsdosisform. I denne form underopdeles præparatet i enhedsdoser, der indeholder passende mængder af den ak-30 tive komponent. Enhedsdosisformen kan være et emballeret præparat, idet emballagen indeholder adskilte mængder præparat, f.eks. emballerede tabletter, kapsler og pulvere i medicinflasker eller ampuller. Enhedsdosisformen kan også være en kapsel, cachet eller tablet 35 selv, eller det kan være et passende antal af enhver af disse emballerede former.

DK 162098B

26 Mængden af aktiv forbindelse i en enhedsdosis af et præparat kan varieres eller reguleres fra 50 mg til 500 mg alt efter den særlige anvendelse og styrken af den aktive bestanddel.

5 Ved terapeutisk anvendelse som antibiotiske og antifungale midler administreres forbindelserne ifølge opfindelsen i en begyndelsesdosis på ca. 0,1 mg til ca. 50 mg pr. kg. Et dosisområde fra ca. 0,5 til ca. 10 mg pr. kg foretrækkes. Doseringerne kan imidlertid varieres afhæn-10 gigt af patientens behov, alvorligheden af den tilstand, der behandles, og den forbindelse, der anvendes. Bestemmelse af den rette dosering til en bestemt situation er et fagmandsspørgsmål. Almindeligvis indledes behandlingen med mindre doser, der er mindre end den optimale 15 dosis af forbindelsen. Derefter forøges dosen i små spring, indtil den optimale virkning under de pågældende omstændigheder opnås. Af nemhedsgrunde kan den totale daglige dosis om ønsket opdeles og administreres i portioner i løbet af dagen.

20 De aktive forbindelser kan også administreres parenteralt eller intraperitonealt. Opløsninger af den aktive forbindelse som en fri base eller et farmaceutisk acceptabelt salt kan tilberedes i vand, der hensigtsmæssigt er blandet med et overfladeaktivt stof, såsom 25 hydroxypropylcellulose. Dispersioner kan også fremstilles i glycerol, flydende polyethylenglycoler og blandinger heraf og i olier. Under sædvanlige oplagrings- og anvendelsesbetingelser indeholder disse præparater et konserveringsmiddel til forhindring af væksten af mikro-30 organismer.

De farmaceutiske former, der er egnede til injektionsanvendelse, indbefatter sterile vandige opløsninger eller dispersioner og sterile pulvere til fremstilling af sterile injektionsopløsninger eller -dispersio-

DK 162098 B

27 ner på bestilling. I alle tilfælde må formen være steril og må være flydende i en sådan grad, at den let kan administreres gennem en sprøjte. Den må være stabil under fremstillings- og oplagringsbetingelserne og må 5 beskyttes mod den kontaminerende virkning af mikroorganismer, såsom bakterier og fungi. Bæreren kan være et opløsningsmiddel eller dispersionsmedium, der f.eks. indeholder vand, ethanol, polyol (f.eks. glycerol, pro-pylenglycol og flydende polyethylenglycol og lignende), 10 Ν,Ν-dimethylacetamid, passende blandinger heraf og vegetabilske olier. Den rette fluditet kan f.eks opretholdes ved anvendelse af et overtræk, såsom lecithin, ved opretholdelse af den krævede partikelstørrelse i tilfælde af en dispersion og ved anvendelse af overfladeaktive 15 stoffer. Forhindringen af virkningen af mikroorganismer kan opnås ved hjælp af forskellige antibakterielle og antifungale midler, f.eks. parabener, chlorbutanol, phenol, sorbinsyre, thimerosal og lignende. I mange tilfælde vil det være hensigtsmæssigt at inkorporere isotoni-20 ske midler, f.eks. sukkerarter eller natriumchlorid. Protraheret absorption af injektionspræparaterne kan opnås ved i præparaterne at anvende absorptionsforsinkende midler, f.eks. aluminiummonostearat og gelatine.

Sterile injektionsopløsninger fremstilles ved at 25 inkorporere den aktive forbindelse i den nødvendige mængde i det pågældende opløsningsmiddel med forskellige af de øvrige ovenfor opremsede bestanddele efter behov, efterfulgt af sterilisering ved filtrering. Almindeligvis fremstilles dispersioner ved at inkorporere de for-30 skellige steriliserede aktive bestanddele i en steril bærer, der indeholder det grundlæggende dispersionsmedium og de øvrige krævede bestanddele blandt de ovenfor opremsede. I tilfælde af sterile pulvere til fremstilling af sterile injektionsopløsninger er de foretrukne 35 fremstillingsmetoder vakuumtørring og frysetørringsmeto-

DK 162098 B

28 den, hvorved der opnås et pulver af den aktive bestanddel plus enhver yderligere ønsket bestanddel ud fra en i forvejen sterilfiltreret opløsning deraf.

Som anvendt heri omfatter "farmaceutisk accepta-5 bel bærer" enhvert og alle opløsningsmidler, dispersionsmedier, overtræksmidler, antibakterielle og anti-fungale midler, isotoniske og absorptionsforsinkende midler og lignende. Anvendelse af sådanne medier og midler til farmaceutisk aktive stoffer er velkendt på om-10 rådet. Bortset fra de tilfælde, hvor konventionelle medier eller midler er uforligelige med den aktive bestanddel, skal deres anvendelse i de terapeutiske præparater tages i betragtning. Supplerende aktive bestanddele kan også inkorporeres i præparaterne.

15 Det er særlig fordelagtigt at formulere parente- rale præparater i enhedsdosisform for at lette administreringen og opnå ensartede doser. Enhedsdosisformer som anvendt heri refererer til fysisk adskilte enheder, der er egnede som enhedsdoser til de mammalia-individer, 20 der skal behandles, idet hver enhed indeholder en forudbestemt mængde aktivt materiale, beregnet til at frembringe den ønskede terapeutiske virkning, sammen med den nødvendige farmaceutiske bærer. Specifikationen for de på opfindelsen baserede nye enhedsdosisformer diktéres 25 af og afhænger direkte af (a) det aktive materiales unikke egenskaber og den særlige terapeutiske virkning, der skal opnås, og (b) den naturlige begrænsning med hensyn til at sammensætte et sådant aktivt materiale til sygdomsbehandling af levende individer med en sygdoms-30 tilstand, ved hvilken sundhedstilstanden svækkes, som nærmere beskrevet heri.

Den væsentlige aktive bestanddel kombineres med henblik på bekvem og effektiv administrering i effektive mængder med en egnet,farmaceutisk acceptabel bærer til 35 en enhedsdosisform som beskrevet ovenfor. En enhedsdo-

DK 162098 B

29 sisform kan f.eks. indeholde den væsentlige aktive forbindelse i mængder i området fra ca. 0,1 til ca. 500 mg, idet fra ca. 0,5 til ca. 250 mg foretrækkes. Udtrykt i mængdeforhold er den aktive forbindelse almindeligvis 5 til stede i fra ca. 0,1 til ca. 500 mg/ml af bærer. I tilfælde af præparater, der indeholder supplerende aktive bestanddele, bestemmes doserne under hensyn til den sædvanlige dose og administreringsmåden for de nævnte bestanddele. De daglige parenterale doser for mammalia-10 individer, der skal behandles, ligger i området fra 0,1 mg/kg til 100 mg/kg. Den foretrukne daglige dosis ligger i området fra 0,3 mg/kg til 10 mg/kg.

Opfindelsen belyses ved hjælp af de efterfølgende eksempler.

15

Eksempel 1 N,N-Diethyl-5-nitro-2H[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin.

20 En opløsning af 0,83 g rå l-chlor-4-nitro-9H- xanthen-9-on og 1,0 g [2-(diethylamino)ethyljhydrazin i 15 ml tetrahydrofuran omrørtes ved stuetemperatur i 4 timer. Blandingen inddampedes til tørhed, og remanensen tritureredes med vand, opsamledes og omkrystalliseredes 25 af ethylacetat til opnåelse af produktet, smp. 158-160°C. Methansulfonsyresaltet, smp. 179-180°C, udkrystalliserede af en opløsning af basen i en blanding af methanol og diethylether indeholdende et ækvivalent methansulfonsyre.

30 l-Chlor-4-nitro-9H-xanthen-9-onet fremstilledes som følger: Råt 2-(51-chlor-2-nitrophenoxy)-benzoesyre (50 g) sattes til 200 g koncentreret svovlsyre. Blandingen holdtes ved 75°C i 4,5 timer og sattes til en omrørt

DK 162098 B

30 blanding af 1,5 liter chloroform og vand indeholdende den nødvendige mængde is til at holde temperaturen under 35°C. Chloroformlaget fraskiltes, vaskedes med 5% na-triumhydrogencarbonat og inddampedes til tørhed, og re-5 manensen omkrystalliseredes af 200 ml toluen og 30 ml cyclohexan til opnåelse af produktet, smp. 175-186°C.

2-(5'-Chlor-2-nitrophenoxy)benzoesyre fremstilledes som følger:Råt 2-(5-chlor-2-nitrophenoxy)benzaldehyd opvarmedes under tilbagesvaling med 200 ml diethylether, 10 120 ml vand, 41,1 g Na2Cr20y.H2O og 6,0 g af en 40% te-tra-n-butylammoniumhydroxidopløsning, og dertil sattes der 63 ml 9M H2SO4 i løbet af 3 timer. Opvarmningen fortsattes i yderligere 2 timer, og det vandige lag eks-traheredes med ether og inddampedes til tørhed til op-15 nåelse af produktet.

2-(5-Chlor-2-nitrophenoxy)benzaldehyd fremstilledes som følger: Til 16,2 g 2,4-dichlornitrobenzen, omrørt ved 170°C, sattes der portionsvis 7,1 g af kaliumsaltet af salicylaldehyd, monohydrat i løbet af 1,5 ti-20 mer. Blandingen omrørtes ved 170°C i 2 timer, triturere-des med 150 ml CH2CI2 og filtreredes. Filtratet inddampedes til en rød olie, og overskuddet af dichlornitro-benzen fjernedes ved vanddampdestillation til opnåelse af produktet.

25

Eksempel 2 2—[ [2— (5-Nitro-2H-[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-y1) ethyl]amino]ethanol, monohydrochlorid.

30

En suspension af 2,76 g l-chlor-4-nitro-9H-xan-then-9-on, 30 ml THF, 15 ml methanol og 1,40 g 2-[(hy-drazinoethyl)amino]-ethanol omrørtes ved stuetemperatur i 3 dage. Bundfaldet opsamledes, vaskedes med THF og 35 tørredes til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 262-264°C (dekomp.).

DK 162098 B

31

Eksempel 3 5-Amino-N, N-diethyl-2H-[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin.

5

En opløsning af 8,9 g (0,026 mol) N,N-diethyl-5-nitro-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin i 100 ml tetrahydrofuran hydrogeneredes over 1 g 10% palladium på carbon ved stuetemperatur og et hydrogentryk 10 på 46,3-52,3 psi (3,25 til 3,68 at). Blandingen filtreredes, og opløsningsmidlet fjernedes i vakuum. Den olie-agtige remanens tritureredes med petroleumsether og omkrystalliseredes af n-hexan til opnåelse af produktet, smp. 78-80°C.

15

Eksempel 4 N-[2-[2-(Diethylamino)ethyl]-2H-[l ]benzopyrano[4, 3,2-cd]indazol-5-yl]ethandiamin, trihydrobromid, dihydrat.

20

En opløsning af 2,47 g N,N-diethyl-5-nitro-2H-[ 1 ]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin i 45 ml THF hydrogeneredes i nærværelse af 10% palladium-på-carbon-hydrogeneringskatalysator til opnåelse af 5-amino-N,N-25 diethyl-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin. Katalysatoren fjernedes, opløsningsmidlet erstattedes med 35 ml absolut ethanol, og der tilsattes 4,4 g 2-bromethylamin-hydrobromid, og blandingen opvarmedes i 3 dage under tilbagesvaling. Blandingen filtreredes og 30 inddampedes til tørhed, og remanensen omkrystalliseredes af ethanol til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 235-248°C (dekomp.).

DK 162098 B

32

Eksempel 5 N,N-Diethyl-9-methoxy-5-nitro-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin, methansulfonat (1:1).

5

En blanding af 25 g l-chlor-7-methoxy-4-nit.ro-9H-xanthen-9-on og 21,48 g [2-(diethylamino)ethyl]-hydrazin i 500 ml DMF omrørtes ved stuetemperatur i 45 minutter. Blandingen inddampedes til tørhed, og remanen-10 sen tritureredes med i s opr opy la lk ohol, og de gule krystaller opsamledes som den i overskriften anførte forbindelse i fri baseform, smp. 162-165°C.

Det i overskriften anførte salt, smp. 227-229°C, udkrystalliserede af en methanolopløsning af basen og et 15 ækvivalent methansulfonsyre.

Eksempel 6 l-[2-[2-( Diethylamino) ethyl ]-9-methoxy-2H- [l jbenzopyra-20 no[4,3,2-cd]indazol-5-yl]-l,2-ethandiamin, trihydrobro-mid.

En blanding af 5 g N,N-diethyl-9-methoxy-5-nitro-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin og 0,940 25 g 10% palladium-på-carbon i 250 ml tetrahydrofuran om-rørtes under en hydrogenatmosfære i 18 timer og filtreredes, og filtratet koncentreredes til opnåelse af 5-amino-N, N-diethyl-9-methoxy-2H-[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]-indazol-2-ethanamin.

30 En blanding af 4,9 g 5-amino-N,N-diethyl-9-meth- oxy-2H-[ l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin og 8,7 g bromethylamin-hydrobromid i 150 ml ethylalkohol opvarmedes under tilbagesvaling i 100 timer, afkøledes til stuetemperatur og filtreredes til opnåelse af den i 35 overskriften anførte forbindelse, smp. 272-275°C.

DK 162098 B

5 33

Eksempel 7 9-Methoxy-N,N-dimethyl-5-nitro-2H-[l ]benzopyrano[4; 3,2-cd] indazol-2-propanamin, methansulfonat (1:1/17).

En blanding af 2 g l-chlor-7-methoxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on og 1,53 g [3-(dimethyIamino)propyl]hydrazin i 40 ml DMF omrørtes ved stuetemperatur i 16 timer og inddampedes derefter til tørhed. Remanensen tritureredes 10 med isopropylalkohol, og det gule faste stof opsamledes som den i overskriften anførte forbindelse i fri baseform.

Det i overskriften anførte salt, smp. 119-121°C, udkrystalliserede af en methanolopløsning af basen og 15 1,25 ækvivalenter methansulfonsyre.

Eksempel 8 9-Hydroxy-N,N-dimethyl-5-nitro-2H- [l ]benzopyrano[4,3,2-20 cd]indazol-2-propanamin, methansulfonat (1:1).

En blanding af 2 g l-chlor-7-hydroxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on og 1,61 g [3-(dimethylamino)propyl]hydra-zin i 40 ml DMF omrørtes i 10 minutter ved stuetempera-25 tur og inddampedes derefter til tørhed. Den faste remanens tritureredes med isopropylalkohol, og de gule krystaller opsamledes til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse som den frie base.

Det i overskriften anførte salt, smp. 269-272°C 30 (dekomp.), udkrystalliserede af en methanolopløsning af basen og et ækvivalent methansulfonsyre.

Eksempel 9 35 5-Amino-N,N-diethyl-9-hydroxy-2H“[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2“ethanamin, dihydrochlorid.

En blanding af 1,25 g l-chlor-7-hydroxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on og 1,12 g [2-(diethylamino)ethyl]hydra-

DK 162098 B

34 zin i 25 ml DMF omrørtes ved stuetemperatur i 45 minutter og inddampedes derefter til tørhed. Remanensen tri-tureredes med isopropylalKohol til opnåelse af gule Krystaller af N,N-diethyl-9-hydroxy-5-nitro-2H-[l]benzopy-5 rano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin·

En blanding af N,N-diethyl-9-hydroxy-5-nitro-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-2-ethanamin og 450 mg 20% palladium på carbon i 250 ml tetrahydrofuran omrør-tes under en hydrogenatmosfære i 18 timer og filtrere-10 des, og filtratet Koncentreredes i vaKuum til opnåelse af den i oversKriften anførte forbindelse som den frie base.

Det i oversKriften anførte salt udkrystalliserede af en 2-propanolopløsning af basen og to æKvivalenter 15 saltsyre, smp. >300°C.

Eksempel 10 N- [ 2 - [ 2 - (D iethy lamino) ethyl ] -9-hydr oxy-2H- [ 1 ]benzopyr a-20 no[4,3,2-cd]indazol-5-yl]-2-[(2-hydroxyethyl)amino]-acetamid, hydrochlorid.

Til en opløsning af 0,46 g 2-[2-(diethylamino)-ethyl]-5-amino-2H-[l]benzopyrano[4, 3,2-cd]indazol-9-ol i 25 25 ml Ν,Ν-dimethylformamid sattes 0,31 g N‘-(ethyl-car-bonimidoyl)-N,N-dimethyl-1,3-propandiamin-monohydro-chlorid og 1,03 g N-[2-(phenylmethoxy)ethyl]-N-(phenyl-methy1)glycin.

Efter 1,5 timers forløb hældtes reaktionsblandin-30 gen ud i 20 ml vandig mættet natriumhydrogencarbonat-opløsning og eKstraheredes med dichlormethan. EKstraK-terne tørredes og Koncentreredes i vaKuum. Det opnåede faste stof chromatograferedes på silicagel med en opløsning af 5% methanol i dichlormethan som elueringsmiddel 35 til opnåelse af N-[2-[2-(diethylamino)ethyl]-9-hydroxy-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-5-yl]-2-[[2-(phenyl-methoxy) ethyl ] (phenylmethy 1) amino ]acetamid, smp. 165- 168°C.

DK 162098 B

35

En blanding af 1,3 g af det ovennævnte acetamid og 0,10 g 20% palladiumhydroxid på carbon i 50 ml iseddike omrørtes under hydrogen ved atmosfæretryk, indtil hydrogenoptagelsen udgjorde 100 ml. Reaktionsblan-5 dingen filtreredes og inddampedes flere gange sammen med methanol. Remanensen opløstes i methanol og syrnedes med en opløsning af hydrogenchlorid i 2-propanol. Ved yderligere fortynding med 2-propanol og afkøling fremkaldtes udfældning af et krystallinsk fast stof. Det faste stof 10 isoleredes og tørredes til opnåelse af 0,976 g af produktet som et gult krystallinsk stof med 2,5 ækvivalenter hydrogenchlorid og 1,5 ækvivalenter vand, smp. 285°C under dekomponering.

15 Eksempel 11 2-[ 2- (Diethylamino) ethyl ]-5- [ [2- [ (2-hydroxyethy 1) amino ] -ethyl ] amino-2H- [ 1 ]benzopyrano[4,3,2-cd ] indazol-9-ol, hydrochlorid (1:3:5).

20

Til en blanding af 2,45 g N-[2-[2-(diethylamino)-etyl]-9-hydroxy-2H-[l]benzopyrano[4, 3,2-cd]indazol-5-y 1 ] - 2- [ [ 2 - (pheny lmethoxy) ethyl ] (phenylmethyl) amino ]-acetamid i 80 ml tør tetrahydrofuran under argon sattes 25 40 ml af en 1 M opløsning af boran-tetrahydrofuran-kompleks i tetrahydrofuran. Efter 24 timer ved 50°C tilsattes der yderligere 3 ml boran-tetrahydrofuran-kompleks, og reaktionen fortsattes i endnu 3 timer ved 50°C. Blandingen hældtes ud i 150 ml methanol, opvarmedes under 30 tilbagesvaling natten over og inddampedes til tørhed, og remanensen omkrystalliseredes af diethylether til opnåelse af 1,36 g 2-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[ [2-[ [2-(phe-nylmethoxy)ethyl] (phenylmethyl)amino]amino]-2H-[l ]ben-zopyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol.

35 En blanding af 1,3 g af det ovennævnte materiale debenzyleredes i 50 ml iseddike i en hydrogenatmosfære ved atmosfærisk tryk i nærværelse af 0,2 g 20% palladium på carbon over et tidsrum på 48 timer. Blandingen fil-

DK 162098 B

36 treredes, koncentreredes under formindsket tryk og gen-inddampedes adskillige gange fra methanol. Remanensen i 2-propanol syrnedes med hydrogenchlorid i 2-propanol, hvorved der opnåedes den i overskriften anførte forbin-5 delse.

Eksempel 12 2-[2-[-(2-Hydroxyethyl)amino]ethyl]-5-nitro-2H-[l]benzo-10 pyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, hydrochlorid.

En blanding af 3 g l-chlor-7-hydroxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on, 2,7 g 2-[(hydrazinoethyl)amino]ethanol og 2 ml diisopropylethylamin i 60 ml Ν,Ν-dimethylformamid 15 omrørtes under en argonatmosfære i 1 time. Opløsningen koncentreredes i vakuum, og remanensen tritureredes med 2-propanol til opnåelse af et gult krystallinsk fast stof. Det faste stof opløstes i den mindst mulige mængde varmt Ν,Ν-dimethylformamid og syrnedes derefter med en 20 opløsning af hydrogenchlorid i 2-propanol til opnåelse af 3,28 g af produktet som et salt med 0,98 ækvivalenter hydrogenchlorid, smp. > 300°C.

Eksempel 13 25 5-Amino-2-[2-[ (2-hydroxyethyl) amino ]ethyl]-2H-[l ]benzo-pyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, hydrochlorid.

En blanding af 3,7 g 2-[2-[ (2-hydroxyethyl )ami-50 no]ethyl]-5-nitro-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol- 9-ol, hydrochlorid og 0,25 g 20% palladium på carbon i 300 ml vandfrit methanol omrørtes under hydrogen ved atmosfæretryk, indtil hydrogenoptagelsen udgjorde 650 ml. Blandingen filtreredes, og filtratet koncentreredes 55 i vakuum til tørhed. Remanensen opløstes i 100 ml kogende methanol, og opløsningen syrnedes med hydrogenchlorid i 2-propanol. Det faste stof opsamledes, vaskedes med 2-propanol og tørredes i vakuum ved 60°C til opnåelse af

DK 162098 B

37 2,1 g af produktet som et salt med 1,8 ækvivalenter hy-drogenchlorid og 0,88 ækvivalenter vand, smp. 315°C under dekomponering.

5 Eksempel 14 2-[2-[ (2-Hydroxyethyl) amino jethyl ]-9-hydroxy--2H-[ 1 jben-zopyrano[4,3,2-cd]indazol-5-yl]-2-[ (2-hydroxyethyl)amino ]acetamid, hydrochlorid.

10

En blanding af 10 g l-chlor-7-hydroxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on, 20,1 g N-(2-hydrazinoethyl)-N-[2-(phe-nylmethoxy)ethyl]benzenmethanamin og 6,0 ml diisopropyl-amin i 200 ml Ν,Ν-dimetby 1 formamid omrørtes under en 15 argonatmosfære i 2 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes i vakuum til en olie, der krystalliserede ved henstand. Ved triturering af det faste stof med 2-propanol, filtrering og tørring ved 60°C opnåedes 15,4 g produkt.

Ved omkrystallisation af methanol opnåedes 5-nitro-2-20 [ 2-[ [2 - (phenylmethoxy) ethyl ] (phenylmethyl) amino ]ethyl ]-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, smp. 155-156°C efter omkrystallisation af acetone.

En blanding af 10 g 5-nitro-2-[2-[ [2-(phenylmethoxy ) ethyl ] (phenylmethyl) amino jethyl ]-2H- [l jbenzopyrano-25 [4,3,2-cd]indazol-9-ol og 5 g Raney-nikkel i 150 ml Ν,Ν-dimethylformamid omrørtes ved atmosfæretryk under hydrogen natten over. Blandingen filtreredes, og filtratet koncentreredes i vakuum til en tyk olie. Det således opnåede 5-amino-2-[2-[ [2-(phenylmethoxy )ethyl] (phenyl- 30 methyl)amino]ethyl]-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol- 9-ol anvendtes uden yderligere behandling.

Til en opløsning af 9,44 g af den ovennævnte olie i 220 ml tørt tetrahydrofuran sattes 14,2 g N-[2-(phe-nylmethoxy)ethyl]-N-(phenylmethyl)glycin og 4,3 g N'-35 (ethylcarbonimidoyl)-N,N-dimethyl-l,3-propandiamin, mo-

DK 162098 B

38 nohydrochlorid. Blandingen omrørtes under argon ved 25°C i 3 timer. Reaktionsblandingen hældtes ud på 200 ml vandig mættet natriumhydrogencarbonatopløsning og ekstrahe-redes derefter med dichlormethan. Ekstrakterne koncen-5 treredes i vakuum, og remanensen tritureredes med acetone. Det opnåede faste stof omkrystalliseredes af acetone til opnåelse af N-[9-hydroxy-2-[2-[[2-(phenylmeth-oxy) ethyl] (phenylmethy 1) amino ]ethyl ]-2H- [ 1 ]benzopyrano-[4,3,2-cd]indazol-5-yl]-2-[[2-(phenylmethoxy)ethyl] (phe-10 nylmethyl)amino]acetamid, smp. 106-110°C.

En blanding af 2,5 g af det ovennævnte acetamid og 0,20 g 20% palladiumhydroxid på carbon i 50 ml iseddike omrørtes under en hydrogenatmosfære ved atmosfærisk tryk i 24 timer. Blandingen filtreredes gennem en pude 15 af CeliteCi) , og filtratet inddampedes til en olieagtig remanens. Remanensen opløstes i den mindst mulige mængde methanol og syrnedes derefter med en opløsning af hydro-genchlorid i 2-propanol. Bundfaldet opsamledes og tørredes i vakuum til opnåelse af 2-[2-[ (2-hydroxyethyl)ami-20 no]ethyl]-9-hydroxy-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-5yl]-2-[ (2-hydroxyethyl)amino]acetamid,hydrochlorid, der indeholder 2,44 ækvivalenter hydrogenchlorid og 2,61 ækvivalenter vand, smp. 223°C under dekomponering.

25 Eksempel 15 2—[2—[ (2-Hydroxyethyl)amino]ethyl]-5-[[2-[ (2-hydroxy-ethyl) amino] ethyl ]amino-2H-[l ]benzopyrano[4,3,2-cd]-indazol-9-ol, hydrochlorid.

30

En opløsning af 3,0 g N-[9-hydroxy-2-[2-[[2-phe-ny lmethoxy) ethyl ] (pheny lmethy 1) amino ]e thyl ] -2H- [ 1 ]ben-zopyrano[4,3,2-cd]indazol-5-yl ]-2- [ [2- (pheny lmethoxy) -ethyl] (phenylmethy 1)amino]acetamid i 25 ml tetrahydro-35 furan behandledes med 15 ml af en 1 M opløsning af li-

DK 162098 B

39 thiumtetrahydroaluminat i tetrahydrofuran. Reaktionsblandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 5 timer og afkøledes derefter til 5°C. Der tilsattes forsigtigt mættet vandigt ammoniumchlorid (20 ml), og blandingen 5 omrørtes ved 25°C natten over. Blandingen filtreredes og ekstraheredes med ethylacetat, og ekstrakten passeredes gennem en kort kolonne af silicagel med dichlormethan, hvorpå der efter afdampning opnåedes en klar olie. Olien krystalliserede fra kold ether til opnåelse af 2-[2-10 [[2-(phenylmethoxy) ethyl](phenylmethy1) amino]ethyl]-5-[[2-[[2-(phenylmethoxy)ethyl](phenylmethyl)amino]-ethyl] amino]-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, smp. 94-96°C.

En blanding af 2,0 g af det ovennævnte produkt og 15 0,3 g 20% palladiumhydroxid på carbon i 50 ml iseddike omrørtes under hydrogen ved atmosfærisk tryk i 24 timer. Blandingen filtreredes, og filtratet koncentreredes i vakuum til en olie. Olien opløstes i 2-propanol og syr-nedes med en opløsning af hydrogenchlorid i 2-propanol.

20 Det opnåede bundfald opsamledes og tørredes i vakuum ved 56°C til opnåelse af det i overskriften anførte salt, der indeholdt 2,94 ækvivalenter hydrogenchlorid, 0,35 ækvivalenter vand og 0,79 ækvivalenter 2-propanol, smp.

335°C under dekomponering.

25

Eksempel 16 5-Nitro-2-[2-(diethylamino)ethyl]-8-methoxy-2H-[l]ben-zopyrano[4,3,2-cd]indazol, hydrochlorid.

30

En blanding af 5,0 g l-chlor-6-methoxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on, 2,58 g [2-(diethylamino)ethyl]hydra-zin og 3,43 ml diisopropylethylamin i 100 ml N,N-dime-thylformamid omrørtes i 2 timer. Blandingen inddampedes 35 til tørhed, og remanensen tritureredes med 2-propanol.

DK 162098 B

40

Det faste stof opsamledes, vaskedes med diethylether og tørredes ved 60°C i vakuum til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, et salt med 1,0 ækvivalent hydrogenchlorid, smp. 285-288°C.

5

Eksempel 17 5-Nitro-2-[ 2- (diethylamino) ethyl ]-2H- [l jbenzopyrano-[4,3,2-cd]indazol-8-ol, hydrochlorid.

10

En blanding af 6,0 g l-chlor-6-hydroxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on og 5,4 g [2-(diethylamino)ethyl]hydra-zin og 3,9 ml diisopropylethylamin i 100 ml N,N-dime-thylformamid omrørtes ved 25°C i 3 timer. Blandingen 15 inddampedes, og remanensen onikrystalliseredes af 2-pro-panol til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, et salt med 1 ækvivalent hydrogenchlorid, smp.

285°C (dekomponering).

20 Eksempel 18 5-Amino-2-[2- (diethylamino) ethyl ]-2H- [l ]benzopyrano-[4,3,2-cd]indazol-8-ol.

25 En opløsning af 5,0 g 5-nitro-2-[2-(diethylami- no)ethyl]-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-8-ol i 200 ml DMF med 0,2 g 20% palladiumhydroxid på carbon omrørtes under en hydrogenatmosfære i 24 timer. Blandingen filtreredes, og filtratet inddampedes i vakuum til op-30 nåelse af produktet 5-amino-2-[2-(diethylamino)ethyl]-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-8-ol som et olieag-tigt fast stof.

DK 162098 B

41

Fremstilling af udgangsmaterialer

Eksempel A

5 1- Chlor-7-methoxy-4-nitro-9H-xanthen-9--on.

2-(5-Chlor-2-nitrophenoxy)-5-methoxybenzoesyre, 50 g, sattes til 400 g polyphosphorsyre, og blandingen 10 omrørtes ved 110°C i 24 timer. Blandingen hældtes ud i 2 liter vand, og det fremkomne bundfald frafiltreredes til opnåelse af et lysegrønt fast stof. Ved omkrystallisation af DMF opnåedes den i overskriften anførte forbindelse som grønne nåle, smp. 249-251°C.

15

Eksempel B

2- (5-Chlor-2-nitrophenoxy)-5-methoxybenzoesyre.

20 Til en omrørt suspension af 65 g 2-(5-chlor-2- nitrophenoxy)-5-methoxybenzoesyre, methylester i 600 ml methanol sattes 97,5 ml 6N KOH-opløsning. Denne suspension omrørtes i 18 timer, og den herved opnåede opløsning neutraliseredes med 200 ml 10% HCl-opløsning. Det 25 fremkomne bundfald frafiltreredes og vaskedes med 400 ml H2O. Ved omkrystallisation af acetonitril opnåedes den i overskriften anførte forbindelse som et hvidt fast stof, smp. 232-234°C.

DK 162098B

42

Eksempel C

2-(5-Chlor-2-nitrophenoxy)-5-methoxybenzoesyre, methyl-ester .

5

Til en opløsning af 61,8 g 2-hydroxy-5-methoxybenzoesyre, methylester i 700 ml DMF sattes 14,96 g af en 60% suspension af natriumhydrid i mineralolie. Herefter tilsattes 50,88 g natriumiodid, 64,64 g kobber(l)-10 iodid og 2,16 g finpulveriseret kobbermetal. Blandingen opvarmedes til 85°C i 15 minutter, hvorefter der tilsattes 71,7 g 2,4-dichlornitrobenzen, og reaktionsblandingen omrørtes ved 85°C i 16 timer. Blandingen filtreredes, og filtratet koncentreredes til en olieagtig rema-15 nens. Der tilsattes natriumthiosulfat, 400 ml af en 20% opløsning, hvorefter der ekstraheredes med ethylacetat (3 x 400 ml). De samlede ethylacetatekstrakter vaskedes med vand (2 x 325 ml), tørredes over vandfrit natriumsulfat og inddampedes derefter til opnåelse af et bleg-20 gult fast stof, som tritureredes med cyclohexan og fra-filtreredes til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 114-116°C.

Eksempel D

25 2-Hydroxy-5-methoxybenzoesyre, methylester.

En blanding af 73 g 5-methoxysalicylsyre og 95 ml koncentreret saltsyre i 700 ml methanol opvarmedes under 30 tilbagesvaling i 48 timer. Der tilsattes kaliumcarbonat (10 g), og blandingen koncentreredes til en olieagtig remanens, som opløstes i 250 ml ethylacetat. Denne opløsning vaskedes med to 100 ml portioner af 10% natrium-hydrogencarbonatopløsning og tørredes derefter over

DK 162098 B

43 vandfrit natriumsulfat. Ved afdampning af opløsningsmidlet opnåedes den i overskriften anførte forbindelse som en ravgul olie.

5 Eksempel E

1- Chlor-7-hydroxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on.

En blanding af 10 g l-chlor-7-methoxy-4-nitro-10 9H-xanthen-9-on og 84 ml af 1 M opløsning af bortribro-mid i dichlormethan i 280 ml dichlormethan omrørtes ved stuetemperatur under en argonatmosfære i 16 timer, "hvorefter den behandledes med 100 ml methanol og omrørtes i 3 timer. Blandingen filtreredes til opnåelse af et lyse-15 grønt fast stof. Ved omkrystallisation af chloro-metha-nol opnåedes den i overskriften anførte forbindelse, smp. 290-292°C.

Eksempel F

20 2- (5-Chlor-2-nitrophenoxy)-4-methoxybenzoesyre, methyl-ester .

Til en omrørt opløsning af 15 g methyl-2-hydroxy-25 4-methoxy~benzoat i 185 ml dimethyl formamid under en argonatmosfære sattes 3,63 g af en 60% dispersion af natriumhydrid i olie. Til denne opslemning sattes 12,35 g natriumiodid, 15,69 g kobber(I)iodid og 0,525 g kobberpulver. Blandingen opvarmedes i 15 minutter til 85°C, 30 og der tilsattes 17,4 g 2,4-dichlornitrobenzen. Efter 48 timer ved 85°C afkøledes reaktionsblandingen til 25°C, og der tilsattes methanol. Reaktionsblandingen filtreredes, og filtratet koncentreredes i vakuum til ca. 50 ml og fortyndedes derefter med 150 ml ethylacetat. Opløs-35 ningen vaskedes med en 20% vandig opløsning af natrium-

DK 162098 B

44 thiosulfat, og den organiske del fraskiltes og tørredes over natriumsulfat. Opløsningsmidlet afdampedes til opnåelse af et brungult fast stof. Ved omkrystallisation af ethylacetat opnåedes den i overskriften anførte for-5 bindelse, smp. 121-123°C.

Eksempel 6 l-Chlor-6-methoxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on.

10

Til 500 g polyphosphorsyre, omrørt ved 110°C, sattes 62,9 g 2-(5-chlor-2-nitrophenoxy)-4-methoxyben-zoesyre, methylester. Efter 18 timer hældtes den varme opløsning ud i vand, og det opnåede bundfald opsamledes.

15 Det faste stof vaskedes med vand og isopropylalkohol til opnåelse af 57,9 g af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 211-213°C efter omkrystallisation af DMF.

Eksempel H

20 l-Chlor-6-hydroxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on.

En blanding af 20,0 g l-chlor-6-methoxy-4-nitro-9H-xanthen-9-on og 27,04 g vandfrit pulveriseret alu-25 miniumchlorid opvarmedes under tilbagesvaling i 400 ml 1,2-dichlorethan under en argonatmosfære i 3 timer. Den væskeformige del af reaktionsblandingen fradekanteredes og inddampedes til en mørk remanens. Begge remanenser hældtes sammen og behandledes med 200 ml koncentreret 30 saltsyre i 1 time. Det faste stof opsamledes og vaskedes med vand og 2-propanol. Det grå faste stof tørredes i vakuum ved stuetemperatur til opnåelse af den i overskriften anførte forbindelse, smp. 179-182°C.

DK 162098 B

45

Eksempel J

N-[ 2- (Phenylmethoxy) ethyl ]-N- (phenylmethy 1) glycin,hydro-5 bromid.

En blanding af 13,8 g bromeddikesyre, 200 ml ace-tonitril, 19,0 ml Ν,Ν-diisopropylethylamin og 26,3 g N,O-dibenzylethanolamin opvarmedes i 24 timer under til-10 bagesvaling. Der tilsattes en yderligere portion bromeddikesyre (3,5 g), og opvarmningen fortsattes i 24 timer. Henstilling af den opnåede blanding i køleskab fremkaldte udfældning af den i overskriften anførte forbindelse som hvide nåle med smp. 115-117°C efter omkry-15 stallisation af ethylacetat.

Eksempel K

N-(2-Hydrazinoethyl)-N-[2-phenylmethoxy)ethyljbenzen-20 methanamin.

En opløsning af 10,0 g (0,033 mol) N-(2-chlor-ethy 1) -N-[ 2- (phenylmethoxy) ethyl ]benzenmethanamin [No- dor, et al., Acta Chim. Acad. Sci. Hung., 2:152 (1952)], 25 52,7 g (1,65 mol) vandfrit hydrazin og 210 ml absolut ethanol omrørtes ved 25°C i 18 timer. Blandingen hældtes ud i koldt vand, og opløsningen ekstraheredes tre gange med 500-ml portioner af ether. De samlede ether-ekstrakter tørredes over vandfrit magnesiumsulfat og 30 koncentreredes ved en temperatur på under 35°C til opnåelse af 7,2 g af produktet som en ustabil olie.

Claims (11)

1. Benzopyrano[4,3,2-cd]indazolforbindelser, der i fri baseform har formlen , N-N^H2 ?10 II I R7 R5 og farmaceutisk acceptable salte heraf, 10. hvilken formel substituenterne R7, Re# Rg og Rio betegner hydrogen, hydroxy eller alkoxy med fra 1 til 4 carbonatomer, R2 betegner ANR'R", hvori A er en lige eller forgrenet alkylenkæde med fra 2 til 5 carbonatomer og eventuelt substitueret med hydroxyl, og R' og R" er 15 hydrogen eller lige eller forgrenet alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer og eventuelt substitueret med hydroxyl, og R,_ er nitro, NI^/ ΝΕ®2 eller NHR"", hvori R"" er ίϊ -C-B-h

20 -Ry hvori B er lige eller forgrenet alkylen med fra 1 til 4 carbonatomer, og Rx og Ry hver er hydrogen eller lige eller forgrenet alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer og 25 eventuelt substitueret med hydroxyl.

2. Benzopyrano[4,3,2-cd]-indazolforbindelser ifølge krav 1, hvilke forbindelser i fri baseform har formlen N—Ν"λ2 ,-ΛΛ no2 DK 162098 B og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel Rg, Rg og R2 har de i krav 1 angivne betydninger.

3. Benzopyrano[4,3,2-cd]indazolforbindelser ifølge krav 1, hvilke forbindelser i fri baseform har form- 5 len κ8Αα°α^

10 NH2 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel Rg, Rg og R2 har de i krav 1 anførte betydninger.

4. Benzopyrano[4,3,2-cd]indazolforbindelser iføl-15 ge krav 1, hvilke forbindelser i fri baseform har formlen N-N“ R-, il I 2

2. RO nhr2 og farmaceutisk acceptable salte heraf, i hvilken formel Rg, Rg og R2 har de i krav 1 anførte betydninger. 5. udgangsforbindelse til anvendelse ved fremstil ling af forbindelserne ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den har formlen R- „ O Cl 30 r9-000 R- NO-, / 2 hvori R^, Rg, Rg og R^g har de i krav 1 anførte betyd-15 ninger. DK 162098 B

6. Forbindelse ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den har formlen no2 hvori Rg har den i krav 1 anførte betydning.

7. Forbindelse ifølge krav 1, kendeteg-Ί0 net ved, at R2 er diethylaminoethyl, og R5 er NHCH2CH2NH2.

8. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er valgt blandt N-[ 2-[ 2- (diethylamino) ethyl j-2H- [l jbenzopyrano[4,3,2-15 cd]indazol-5-yl]ethandiamin, 5-amino-2-[ 2-[ (2-hydroxyethyl) amino jethyl j-2H-[l jbenzo- pyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, N-[ 2-[ 2-(diethylamino) ethyl j-9-hydroxy-2H-[ljbenzopyra-no[4,3,2-cd] indazol-5-yl ]-2- [ (2-hydroxyethyl) amino jacet-20 amid, 2—[2—[ (2-hydroxyethyl) amino jethyl j-5-nitro-2H-[l jbenzo-pyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol, 2-[ 2-(diethylamino)ethyl ]-5-[ [2-[ (2-hydroxyethyl) amino ]-ethyl]amino-2H-[l]benzopyrano[4,3,2-cd]indazol-9-ol og 25 2-[2-[ (2-hydroxyethyl) amino jethyl ]-5-[ [2-[(2-hydroxy ethyl )amino]ethyl]amino]-2H-[l jbenzopyrano[4,3,2-cdj-indazol-9-ol.

9. Farmaceutisk middel, kendetegnet ved, at det omfatter en forbindelse ifølge et vilkår- 30 ligt af kravene 1, 2 og 3 i kombination med en farmaceutisk acceptabel bærer.