DK162509B - Vaccine mod sygdomme foraarsaget af mycoplasmaer, dens fremstilling og mycoplasma-membraner som aktivt princip - Google Patents
Vaccine mod sygdomme foraarsaget af mycoplasmaer, dens fremstilling og mycoplasma-membraner som aktivt princip Download PDFInfo
- Publication number
- DK162509B DK162509B DK071686A DK71686A DK162509B DK 162509 B DK162509 B DK 162509B DK 071686 A DK071686 A DK 071686A DK 71686 A DK71686 A DK 71686A DK 162509 B DK162509 B DK 162509B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- membranes
- mycoplasma
- liter
- vaccine
- vaccine according
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 56
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims description 39
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 14
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 36
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 32
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 claims description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 10
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical group [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 10
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 10
- 241000204003 Mycoplasmatales Species 0.000 claims description 9
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 9
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 7
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 2
- 238000009738 saturating Methods 0.000 claims description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 12
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 10
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 9
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 244000144980 herd Species 0.000 description 3
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 241000203024 Acholeplasma Species 0.000 description 2
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000202936 Mycoplasma mycoides Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 2
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 2
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 2
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000006538 friis medium Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 206010003598 Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 241000202955 Mycoplasma bovigenitalium Species 0.000 description 1
- 241001148550 Mycoplasma bovirhinis Species 0.000 description 1
- 241001138504 Mycoplasma bovis Species 0.000 description 1
- 241000204025 Mycoplasma capricolum Species 0.000 description 1
- 241000196742 Mycoplasma equigenitalium Species 0.000 description 1
- 241000317908 Mycoplasma equirhinis Species 0.000 description 1
- 241000204022 Mycoplasma gallisepticum Species 0.000 description 1
- 241000202938 Mycoplasma hyorhinis Species 0.000 description 1
- 241001148555 Mycoplasma meleagridis Species 0.000 description 1
- 241001148556 Mycoplasma ovipneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000202942 Mycoplasma synoviae Species 0.000 description 1
- 241000337007 Oceania Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007123 Pulmonary Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- CJPQIRJHIZUAQP-MRXNPFEDSA-N benalaxyl-M Chemical compound CC=1C=CC=C(C)C=1N([C@H](C)C(=O)OC)C(=O)CC1=CC=CC=C1 CJPQIRJHIZUAQP-MRXNPFEDSA-N 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000000459 effect on growth Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 238000009802 hysterectomy Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- IOQKJDCMPKUNQN-UHFFFAOYSA-L mercury(2+);2-oxidobenzoate Chemical compound C1=CC=C2C(=O)O[Hg]OC2=C1 IOQKJDCMPKUNQN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- HQOJMTATBXYHNR-UHFFFAOYSA-M thallium(I) acetate Chemical compound [Tl+].CC([O-])=O HQOJMTATBXYHNR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 162509 B
Opfindelsen angår en vaccine mod sygdomme forårsaget af mycoplasmaer, dens fremstilling og mycoplasma-membraner som aktivt princip.
5 Sygdomme forårsaget af mikroorganismer, der har en membran som yderste hylster, såsom gramnegative bakterier og mycoplasmaer, er meget udbredte, især inden for husdyravl, hvor de er ansvarlige for et betydeligt indtægtstab. Dette er især tilfældet ved intensiv svineavl, 10 hvor enzootisk lungebetændelse hos svinene, forårsaget af Mycoplasma hyopneumoniae, er meget hyppig.
I en artikel af nyere dato vedrørende moderne svineavl, W. Pond, Pour la Science 66, 60-68 (1983), beskrives den betydning, som denne type af avl i øjeblikket har i verden. Svin giver især ca. 25% af energien og 9% af proteinet af animalsk oprindelse. Ved opdræt giver svin et større udbytte end kødkvæg, får og fjerkræ.
Desuden har svinekød fremragende næringsmæssige kvaliteter og værdsættes af forbrugerne. Det er derfor ikke overraskende, at svineavl har en ikke ubetydelig plads i økonomien i adskillige lande i Nord- og Sydamerika,
Europa, Asien og Oceanien. Dette gælder både højt industrialiserede lande og mindre industrialiserede lande. I Frankrig, især i Bretagne, udgør svineavl en væsentlig
O R
del af landbrugsøkonomien.
Metoderne til opdræt af svin er blevet forbedret meget, både hvad angår de opnåede udbytter og opdrætsbetingelserne, især de hygiejniske betingelser. Forbedringerne har imidlertid ikke gjort det muligt at beskytte dyrene 30 mod et vist antal sygdomme, herunder mycoplasmoser. Blandt sygdomme, som rammer svinenes åndedrætssystem, er lungebetændelse meget almindelig, især ved intensiv avl. Ved en epidemiologisk undersøgelse over tre år, som er gennemført i Bretagne, er Mycoplasma hyopneumoniae blevet påvist i 15 35 til 42% af lungelæsionerne hos grise i alderen 8-12 uger.
2 DK 162509 B
O
På den anden side er anti-M. hyopneumoniae-antistoffer blevet påvist ved indirekte hæmagglutination hos 801 af besætningerne (M. Kobisch et al., Journées de Recherche Porcine en France (1977), side 161-164; M. Kobisch et al., 5 Rec. Med. Vét. 154 (1978), side 847-852; og J.P. Tillon,
Journées de Recherche Porcine en France (1980), side 361-380). Den primære etiologiske rolle af M. hyopneumoniae ved enzootisk lungebetændelse hos svin er blevet demonstreret af R.F.W. Goodwin et al., British Vet. TJ_ (1973), side 10 456-464, og gennemgået af W.P. Switzer et al., Diseases of
Swine (1975), 4. udg., Dunne og Lemans Eds., Iowa University Press.
Luftvejssygdomme er ansvarlige for et betydeligt udbyttefald i adskillige svinebesætninger. Det er muligt at 15 bekæmpe bakterier ved hjælp af antibiotika, men mycoplasma-er udgør et særligt problem, der hænger sammen med deres simple struktur. Da de ikke har nogen cellevæg, er disse mikroorganismer helt ufølsomme over for ethvert antibiotikum, hvis mål netop er cellevæggen, som f.eks. penicil-20 lin, cephalosporin og bacitracin. På den anden side vil plasmamembranen hos mycoplasmaer være uigennemtrængelig for et stort antal antibiotika, hvis mål er intracellulært (S. Razin, Microbiol. Rev. (1978), side 414-470).
Det fremgår heraf, at vaccination vil være en ef-25 fektiv og rentabel måde at bekæmpe mycoplasmaer på.
Der findes i øjeblikket ikke en vaccine mod sygdomme forårsaget af mycoplasmaer på markedet. Der er ganske vist blevet foreslået vacciner mod disse sygdomme, såsom levende vacciner med svækkede stammer (US patentskrift 30 nr. 3.534.136) eller vacciner indeholdende komplette my-coplasmaceller, som er d'*æbt med varme, med et middel som formaldehyd, natrium-ithylmercurisalicylat eller β-propio-lacton, eller ved ultralydsbehandling (FR patentansøgning nr. 2.201.878). Af forskellige grunde er ingen af disse 35 vacciner imidlertid tilfredsstillende eller almindeligt anvendte.
3
DK 162509 B
Det har ifølge opfindelsen vist sig, at plasmamem-branen af et mycoplasma, der har en membran som yderste hylster, kan udgøre et særlig effektivt aktivt princip af 5 en vaccine mod sygdomme forårsaget af mycoplasmaet, når plasmamembranen er adskilt fra resten af cellen.
Opfindelsen angår derfor en vaccine til beskyttelse mod sygdomme forårsaget af et mycoplasma, hvilken vaccine er ejendommelig ved, at den som aktivt princip indeholder 10 plasmamembraner af det pågældende mycoplasma, der i det mindste i stort omfang er frigjort fra de andre bestanddele af mycoplasmaet.
Af mycoplasmer kan der nævnes: - inden for fjerkræpatologi: Mycoplasma gallisep-15 ticum, Mycoplasma synoviae og Mycoplasma meleagridis; - inden for kødkvægspatologi: Mycoplasma mycoides. Mycoplasma bovis, Mycoplasma bovirhinis og Mycoplasma bovigenitalium; - inden for fåre- og gedepatologi: Mycoplasma 20 agalacticae, Mycoplasma ovipneumoniae, Mycoplasma capricolum og Mycoplasma mycoides subspecies capri; - inden for hestepatologi: Mycoplasma equigenita-lium, Mycoplasma equirhinis, Acholeplasma heppikon og Acholeplasma equiletale; og 25 - inden for svinepatologi: Mycoplasma hyopneumoniae og Mycoplasma hyorhinis.
Ifølge en foretrukken udførelsesform har vaccinen ifølge opfindelsen form af en suspension af membraner i en såkaldt fysiologisk saltopløsning, dvs. en opløsning af 30 NaCl med 8,5 g/liter, i nærværelse af et adjuvans, der sikrer gradvis frigørelse af immunogenet.
Ifølge en særlig foretrukken udførelsesform udgøres adjuvanset af aluminiumhydroxid, agarose eller anti-membran- -antistoffer af pågældende mycoplasma.
35
O
„ DK 162509 B
4
Andre adjuvanser, især olieformige, kan anvendes, men er ikke foretrukne.
Koncentrationen af proteiner hidrørende fra membraner i vaccinen ligger fortrinsvis i området 2-3 g/liter 5 og er fordelagtigt 2,5 g/liter. Koncentrationen af alumi- ' niumhydroxid er fortrinsvis i området 12-13 g/liter afhængigt af koncentrationen af proteiner. Den er fordelagtigt 12,5 g/liter ved en koncentration af proteiner på 2,5 g/liter.
Agarose anvendes i almindelighed i form af en me-10 get fortyndet gel, fortrinsvis i en koncentration i området 1,5-2 g/liter afhængigt af koncentrationen af proteiner. Den er fordelagtigt 1,7 g/liter ved en koncentration af proteiner på 2,5 g/liter.
Ifølge en særlig foretrukket udførelsesform angår 15 opfindelsen en vaccine til beskyttelse af svin mod enzoo-tisk lungebetændelse, hvilken vaccine er ejendommelig ved, at den i det væsentlige består af en suspension af membraner af Mycoplasma hyopneumoniae, der er befriet - i det mindste i stort omfang - for de andre bestanddele af my-20 coplasmaet, i en mængde svarende til en vægt af proteiner på 2-3 g/liter, i en vandig NaCl-opløsning med 8,5 g/liter, i nærværelse af 12-13 g/liter aluminiumhydroxid som adjuvans.
Ifølge en anden særlig foretrukket udførelsesform angår opfindelsen en vaccine til beskyttelse af svin mod 25 enzootisk lungebetændelse, hvilken vaccine er ejendommelig ved, at den i det væsentlige består af en suspension af membraner af Mycoplasma hyapneumoniae, der - i det mindste i stort omfang - er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, i en mængde svarende til en vægt af proteiner 30 på 2-3 g/liter, i en vandig opløsning af NaCl med 8,5 g/liter, i nærværelse af 1,5-2 g/liter agarose som adjuvans.
Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af den ovenfor beskrevne vaccine, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at den i det væsentlige om-35 fatter følgende trin: 5
DK 162509 B
a) dyrkning af det mycoplasma, som der ønskes fremstillet en vaccine mod, indtil afslutningen af den eksponentielle vækstfase, 5 b) høstning af cellerne ved centrifugering, c) lyse af de høstede celler ved hjælp af ultralyd ved 20-28 kHz, i flere trin, i i alt 2-5 minutter, d) sedimentation af membranerne ved centrifugering, e) vaskning af membransedimentet flere gange med en puffer 10 under anvendelse af centrifugeringer og dispergeringer, og f) formulering af membranerne til en form, der er anvendelig til vaccinering.
Dyrkningen af cellerne gennemføres fordelagtigt ved 37°C på et flydende medium, såsom Friis-medium (N.F. Friis, 15 Nord. Vet. Med. 27, 337-339 (1975)).
Cellerne, der er centrifugeret (ved ca. 10.000 g), vaskes med en puffer med svagt basisk pH-værdi, f.eks.
0,1M natriumphosphatpuffer med en pH-værdi på 7,5 indeholdende 8,5 g NaCl pr. liter.
20 Cellerne dispergeres derefter, f.eks. ved hjælp af en Potter-cylinder, således at der fås en tæt suspension i en svagt basisk puffer, f.eks. tris-HCl-puffer, 0,1M, pH-værdi 8,0. Lyse ved hjælp af ultralyd gennemføres i flere trin, fordelagtigt ved stigende frekvenser inden for 25 det ovenfor anførte område, i nærheden af 0°C.
Efter grundig centrifugering (ved ca. 40.000 g i ca. 1 time) af lysatet vaskes membransedimentet omhyggeligt (flere gange med puffer, f.eks. tris-HCl-puffer, 0,1M, pH-værdi 8,0) og dispergeres og centrifugeres flere gange igen.
30 De således samlede membraner er klare til anvendelse ved fremstilling af vaccinen. De kan opbevares ved -70°C i • form af en koncentreret suspension i en vandig opløsning af NaCl med 8,5 g/liter, f.eks. med 20 mg protein pr. ml, eller i frysetørret form.
35 Opfindelsen angår således endvidere som nye ejendomme lige industrielle produkter: 6
DK 162509 B
- en koncentreret suspension i en vandig NaCl-opløsning med 8,5 g/liter af membraner af et mycoplasma, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestand- 5 dele af mycoplasmaet, til anvendelse som aktivt princip i en vaccine, og - membraner af et mycoplasma, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, i frysetørret form til anvendelse som aktivt princip 10 i en vaccine.
Vaccinen ifølge opfindelsen, der ikke indeholder levende celler, er fri for toksicitet og frembyder derfor ikke den risiko for det behandlede dyr, som levende vacciner med svækkede stammer gør, og den er samtidig mere ef-15 fektiv og lettere at anvende end vacciner, der blot indeholder dræbte celler, uden separation af plasmamembranerne, som f.eks. beskrevet i FR patentansøgning nr. 2.201.878.
Vaccinerne fremstillet ifølge opfindelsen er således i modsætning til, hvad der kunne forventes, også aktive, 20 når de indgives subcutant eller intramuskulært, medens vaccinerne beskrevet i FR patentansøgning nr. 2.201.878 kun har en forebyggende virkning på det behandlede dyr, når de indpodes i trachea ved injektion eller forstøvning. Desuden giver vaccinerne fremstillet ifølge opfindelsen, når de an-25 vendes til drægtige hundyr, også en effektiv beskyttelse af de ufødte kuld, hvilket udgør en meget vigtig fordel for sundheden i industrielle avlsanlæg.
Det er således muligt at beskytte et kuld grise effektivt mod sygdomme forårsaget af Mycoplasma hyopneumoniae 30 ved at give den drægtige so en subcutan eller intramuskulær injektion af en vaccine som ovenfor defineret 7-8 uger før fødetidspunktet og derefter igen 2 uger før sidstnævnte.
Ifølge en særlig foretrukket udførelsesform angår opfindelsen en sådan vaccine som enhedsdosis, der er 35 ejendommelig ved, at den i det væsentlige består af en
DK 162509 B
O
7 suspension af membraner af Mycoplasma hyopneumoniae, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, i en mængde svarende til en vægt af proteiner på 4-6 mg, fortrinsvis 5 mg, i 2 ml af en vandig 5 0,35%'s NaCl-opløsning i nærværelse af 1,20-1,30%, fortrins vis 1,25%, aluminiumhydroxid eller 0,15-0,20%, fortrinsvis 0. 17% agarose, eller også en mættende mængde for membranerne af svine-antistof mod membraner af Mycoplasma hyopneumoniae.
Opfindelsen forklares nærmere i den følgende be-10 skrivelse af et rent illustrativt eksempel på anvendelsen af opfindelsen og af de resultater, der kan opnås derved.
1. ~_Fremstilling_af_vaccine_mod_MycoDlasma_hyopneumoniae.
1) Dyrkning_af_mycoplasrnaet.
15 Mycoplasma hyopneumoniae (stamme BQ 14:M. Kobisch ét al., Rec. Méd. Vét. 152, 817-827 (1976)) dyrkes ved 37°C på det flydende-medium beskrevet af Friis. Cellerne opsamles ved afslutningen af den eksponentielle vækstfase ved centrifugering (10.000 g, 15 minutter ved 4°C) og vaskes to 20 gange med 0,1M natriumphosphatpuffer, pH-værdi 7,5, indeholdende 8,5 g NaCl pr. liter.
2) !§Qi§Ei2S_§f
Cellerne dispergeres ved hjælp af en Potter-cylin-25 der, således at der fås en tæt suspension i tris-HCl-puffer, 0,1M, pH-værdi 8,0). De lyseres derefter ved hjælp af ultralyd: 2x1 minut ved 20 kHz og 1 minut ved 28 kHz. Processen gennemføres ved 0°C, idet materialet får lov at hvile i 1 minut mellem to på hinanden følgende cycler.
30 Celle-lysatet centrifugeres i 1 time ved 40.000 g og 4°C til sedimentation af membranerne. De vaskes 4 gange med 0,1M tris-HCl-puffer, pH-værdi 8,0, ved successiv disper-gering og centrifugering.
Det fremstillede materiale oplagres ved -70°C, enten 35 i form af en koncentreret suspension (20 mg protein pr. ml) eller i frysetørret form.
DK 162509 B
O
s 3) Fremstilling_af_vaccine_.
Vaccinerne består af membraner af M. hyopneumoniae fremstillet som ovenfor beskrevet i suspension i en opløsning af NaCl med 8,5 g/liter. Koncentrationen af proteiner er 5 2,5 mg/ml. De anvendte adjuvanser er: 1,25% aluminiumhydroxid (vaccine I), 0,17% agarose (vaccine II) og svine-antistof mod membraner af M. hyopneumoniae, der udfælder membranerne (vaccine III).
10 II - Anvendelse af vaccinerne.
Vaccinerne, hvis fremstilling er beskrevet ovenfor, anvendes til vaccinering af førstegangsfødende drægtige søer fra de beskyttede svinestalde ved Station de Pathologie Porcine de Ploufragan (Cotes du Nord, Frankrig). Besætningen 15 i disse stalde består af dyr, der er født ved hystrektomi og holdes beskyttet mod kontaminering. Søerne, der anvendes ved forsøget, anbringes i beskyttede båse 10 uger før det forventede fødselstidspunkt.
7 eller 8 uger før fødselstidspunktet vaccineres 20 søerne, og der gives en intramuskulær booster-injektion 2 uger før fødselstidspunktet. Hver vaccineportion indeholder 2 ml membransuspension, dvs. 5 mg proteiner.
Der gennemføres 2 forsøgsserier: 1_. .Forsggsserie: 25 ~ én so (10043) modtager vaccine i, - én so (10044) modtager vaccine II, - to søer (kontrol 071 og 1010) vaccineres ikke.
2. Forsøgsserie: - to søer (20008 og 200012) modtager vaccine II, 30 - én so (20013) modtager vaccine III, - to søer (kontrol 20005 og 20007) vaccineres ikke.
Søerne føder de i den nedenfor anførte tabel angivne antal grise: 35
O
9 DK 162509 B
__§ο_ηΓΛ__ _^}tal_grise___ 10043 9 10044 6 071 11 5 1010 6 20008 11 20012 4 20013 10 10 20005 9 20007 9
Alle grisene modtager, når de er 2, 3, 4 og 5 dage 15 gamle, en dosis på 0,5 ml pr. næsebor af en suspension af
O
M. hyopneumoniae med 10 kolonidannende enheder pr. ml. Den anvendte stamme er den samme som den, der er anvendt til fremstilling af vaccinen.
Grisene undersøges hver dag. Endetarmstemperaturen 20 tages, de kliniske tegn noteres dagligt, og der gennemføres blodpunkturer hver uge hos alle grisene. De vejes og deres foderforbrug bestemmes hver uge.
Grisene aflives trinvist i hver gruppe inden for 5 til 10 uger efter infektion. Efter makroskopisk undersøgelse 25 af lungerne foretages der bakterie- og mycoplasma-kontroller samt histologiske undersøgelser. Serumantistoffer påvises ved passiv hæmagglutination, jf. M. Kobisch et al., Rec. Méd.
Vét. 154, 847-852 (1978) .
30 III - Resultater^ 1)Tilstand_af_2rise_født_af_ikke-behandlede_søer.
Resultaterne af den første forsøgsserie bekræfter de foregående observationer. Den eksperimentelt fremkaldte infektion med M. hyopneumoniae manifesterede sig klinisk ved 35 hyperthermi og hoste, som viste sig dagen efter infektionen og fortsatte under lungelæsionernes induktionsperiode.
10
DK 162509 B
O
M. hyopneumoniae virkede hæmmende på grisenes vækst (i forhold til grise født af vaccinerede søer). Lungelæsionerne viste sig at være meget omfattende på tidspunktet for de første aflivninger (5 uger efter infektion) og indtil forsø-5 gets slutning (10 uger efter infektion). I modsætning til, hvad der er observeret ved de foregående forsøg, bemærkedes der ikke ar-furer svarende til områder med atelektase, som indicerer udvikling mod ardannelse. Ved dette forsøg har fremkomsten af serumantistoffer påvist ved passiv hæmagglu-10 tination ligget forud for tilbagegangen af læsionerne. På det anatomisk-patologiske plan bekræftede tilstedeværelsen af en lungebetændelse karakteriseret ved lymfoide infiltra-ter de makroskopiske observationer.
Resultaterne af den anden forsøgsserie er mindre 15 klare. Patogeniteten af M. hyopneumoniae viste sig mindre tydeligt, især hos grise fra so nr. 20007, som havde helbredsproblemer på fødselstidspunktet og modtog antibiotika på dagene D3 til D6 efter fødslen. M. hyopneumoniae fremkaldte hoste hos alle de inficerede dyr, men havde ringe 20 effekt på vækst og kropstemperatur. Lungelæsionerne var ukonstante hos grise fra so nr. 20007. Det ser ikke ud til, at M. hyopneumoniae formerede sig i lungerne hos grisene i dette kuld inden for 60 dage, selv om den er til stede i trachea ved de første aflivninger. M. hyopneumoniae blev 25 fundet igen i lungerne hos 66% af grisene fra so nr. 20005 (i trachea-slim hos 88%) og i lungerne hos 55% af grisene fra so nr. 20007 (i trachea-slim hos 100%). Disse resultater viser, .at mikrobiologiske bestemmelser af M. hyopneumoniae ikke blot skal gennemføres i lungerne, men også i trachea-30 -slim, der viser sig at være en god indikator for tilstedeværelsen af mycoplasmaet.
Niveauet af serumantistoffer påvist hos grisene nåede ikke signifikans-tærsklen ved slutningen af forsøget.
Med hensyn til grisene fra so nr. 20005 skal det bemærkes, 35 at der blev overført colostrum-antistoffér, hvilket tilsyneladende havde indvirkning på syntesen af aktive antistoffer,
ix DK 162509 B
o der sædvanligvis følger efter en infektion. Den nedsatte formering af M. hyopneumoniae i de første stadier af forsøget forklarer det lave niveau af antistoffer hos grise fra so nr. 20007.
5 2) Vurdering_af_merabranernes_yaccinationsgotentiel.
Ved den anvendte forsøgsmodel er den beskyttende virkning af vaccine I (membraner + aluminiumhydroxid) på grisene 100%. For vaccine II's vedkommende (membraner + agarose) er den 100% i den første forsøgsserie og 87% i den -ίο anden forsøgsserie. Effektiviteten af vaccine III (membraner udfældet med antistoffer) er kun 70% (når der bortses fra den lungehindebetændelse, der ikke svarer til læsionerne beskrevet for infektion med M. hyopneumoniae).
Det bemærkes, at de anvendte vacciner fremkalder 15 serumantistoffer hos søerne. Grisene født af disse søer har efter indtagelse af colostrum antistoffer hidrørende fra moderen, og niveauet af disse falder hurtigt med tiden og når en middelværdi under signifikans-tærskelen i ugerne efter fødslen. Seks uger efter infektionen af grisene har 2o søerne en stigning af niveauet af cirkulerende antistoffer. Endelig findes M. hyopneumoniae kun i ringe omfang hos grise født af vaccinerede søer (13-26%) .
3) Konklusion^.
De gennemførte forsøg viser, at membraner af M.
25 hyopneumoniae injiceret subcutant og intramuskulært i drægtige søer har en signifikant beskyttende virkning på grisene (fraværelse af lungebetændelse og nedsat yækst). Dette gælder især, når der anvendes aluminiumhydroxid eller agarose som adjuvans.
30 Da antistofferne hidrørende fra moderdyret har en levetid af størrelsesordenen 3-4 uger, og dyrene er meget modtagelige for infektion mellem den 8. og den 12. uge, kan det i visse tilfælde være fordelagtigt at foretage en yderligere vaccination af 6 uger gamle grise, dvs. på det tids-35 punkt, hvor de passive antistoffer er forsvundet og ikke forhindrer vaccination, idet der gives en booster-vaccination 3 uger senere, dvs. når grisene er 9 uger gamle.
12
DK 162509 B
O
I øvrigt er der ved et forudgående forsøg foretaget en vaccination af 12 uger gamle grise og en revaccination, når grisene er 14 uger gamle. Det kunne herved konstateres, at'dyrene reagerer på vaccinationen ved at 5 syntetisere serumantistoffer (passiv hæmaglutinationsbe-stemmelse) .
Disse resultater viser, at vaccinen ifølge opfindelsen, med meget nedsatte omkostninger på grund af den simple fremstilling, muliggør en effektiv bekæmpelse 10 af sygdomme forårsaget af mycoplasmaer, og især luftvejssygdomme, der rammer et stort antal svinestalde og nedsætter deres udbytte betydeligt.
Det skal bemærkes, at Friis-medium har følgende sammensætning: 15 ^Hank's saltopløsning 500 ml . destilleret vand 750 ml
A
C"Bacto brain heart infusion" (Difco) 8,2 g "Bacto PPLO Broth" (Difco) 8,7 g 20 igærekstrakt 60 ml 1%'s phenoIrødt 4 ml bacitracin 500 mg (50.000 5% thalliumacetat (Merck) 3 ml en^-i hesteserum 320 ml og at Hank's saltopløsning har følgende sammensætning: 30 35
13 DK 162509 B
0 r /NaCl 80 g KC1 4 g opløsn. a MgS04'7H2° lg / MgCl-2/6H20 1 g 5 / opløsning i 400 ml destilleret vand I CaCl2, vandfrit 1,4 g V destilleret vand, op til 500 ml ^Na2HP04,12H20 1,5 g 10 opløsn B oplØsnin9 i 400 ml destilleret vand I KH2P04 0,6 g l destilleret vand op til 500 ml 15 20 25 30 35
Claims (10)
1. Vaccine til beskyttelse mod sygdomme forårsaget af et mycoplasma, kendetegnet ved, at den som aktivt princip indeholder plasmamembraner af det pågældende 5 mycoplasma, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet.
2. Vaccine ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den har form af en suspension af membranerne i en NaCl-opløsning med 8,5 g/liter, i nærværelse af et adjuvans, 10 som sikrer gradvis frigørelse af immunogenet.
3. Vaccine ifølge krav 2, kendetegnet ved, at adjuvanset udgøres af aluminiumhydroxid, agarose eller anti-membran-antistoffer for det pågældende mycoplasma.
4. Vaccine ifølge et af kravene 1-3, kendeteg-15 net ved, at proteinkoncentrationen ligger i området 2 til 3 mg/ml.
5. Vaccine ifølge krav 1 til beskyttelse af svin mod enzootisk lungebetændelse, kendetegnet ved, at den i det væsentlige består af en suspension af membraner 20 af Mycoplasma hyopneumoniae, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, i en mængde svarende til en proteinvægt på 2 til 3 g/liter i en vandig NaCl-opløsning med 8,5 g/liter i nærværelse af 12 til 13 g/liter af aluminiumhydroxid som adjuvans.
6. Vaccine ifølge krav 1 til beskyttelse af svin mod enzootisk lungebetændelse, kendetegnet ved, at den i det væsentlige består af en suspension af membraner af Mycoplasma hyopneumoniae, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, i en 30 mængde svarende til en proteinvægt på 2 til 3 g/liter i en vandig opløsning af NaCl med 8,5 g/liter i nærværelse af 1,5 til 2 g/liter af agarose som adjuvans.
7. Fremgangsmåde til fremstilling af en vaccine ifølge ethvert af kravene 1-6, kendetegnet ved, at den 35 i det væsentlige omfatter følgende trin: a) dyrkning af det mycoplasma, som der ønskes fremstillet DK 162509B en vaccine mod, indtil afslutningen af den eksponentielle vækstfase, b) høstning af cellerne ved centrifugering, c) lyse af de høstede celler med ultralyd ved 20 til 28 kHz 5 i flere trin i i alt 2 til 5 minutter, d) sedimentation af membranerne ved centrifugering, e) vaskning af membransedimentet flere gange med en puffer under anvendelse af centrifugeringer og dispergeringer, og f) formulering af membranerne i en form, der er anvendelig 10 til vaccinering.
8. Koncentreret suspension i en vandig opløsning af NaCl med 8,5 g/liter af membraner af et mycoplasma, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, til anvendelse som aktivt princip i 15 en vaccine ifølge krav 1.
9. Membraner af et mycoplasma, der i det mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, i frysetørret form til anvendelse som aktivt princip i en vaccine ifølge krav l.
10. Enhedsdosis af en vaccine ifølge krav 1 til be skyttelse af svin og ufødte kuld af drægtige søer mod sygdomme forårsaget af Mycoplasma hyopneumoniae, kendetegnet ved, at den i det væsentlige består af en suspension af membraner af Mycoplasma hyopneumoniae, der i det 25 mindste i stort omfang er befriet for de andre bestanddele af mycoplasmaet, i en mængde svarende til en vægt af proteiner på 4 til 6 mg, fortrinsvis 5 mg, i 2 ml af en vandig 0,85%'s NaCl-opløsning i nærværelse af 1,20 til 1,30%, fortrinsvis 1,25%, aluminiumhydroxid eller 0,15 til 0,20%, 30 fortrinsvis o,17%, agarose eller også en mættende mængde af svine-antistoffer mod membraner af Mycoplasma hyopneumoniae.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8409422A FR2565825B1 (fr) | 1984-06-15 | 1984-06-15 | Vaccin contre les maladies dues a des microorganismes tels que des mycoplasmes, sa preparation et membranes de microorganismes en tant que principe actif |
| FR8409422 | 1984-06-15 | ||
| FR8500152 | 1985-06-14 | ||
| PCT/FR1985/000152 WO1986000019A1 (fr) | 1984-06-15 | 1985-06-14 | Vaccin contre les maladies dues a des microorganismes tels que des mycoplasmes, sa preparation et membranes de microorganismes en tant que principe actif |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK71686A DK71686A (da) | 1986-02-14 |
| DK71686D0 DK71686D0 (da) | 1986-02-14 |
| DK162509B true DK162509B (da) | 1991-11-11 |
| DK162509C DK162509C (da) | 1992-03-30 |
Family
ID=9305083
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK071686A DK162509C (da) | 1984-06-15 | 1986-02-14 | Vaccine mod sygdomme foraarsaget af mycoplasmaer, dens fremstilling og mycoplasma-membraner som aktivt princip |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0185042B1 (da) |
| JP (1) | JPS61502466A (da) |
| DE (1) | DE3574109D1 (da) |
| DK (1) | DK162509C (da) |
| FR (1) | FR2565825B1 (da) |
| WO (1) | WO1986000019A1 (da) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU208550B (en) * | 1986-07-25 | 1993-11-29 | Synergen Inc | Process for producing polypeptides with recombinant dns technic for diagnostizing micoplasmic infections of pigs |
| EP0283840A3 (en) * | 1987-03-26 | 1989-08-09 | Ml Technology Ventures, L.P. | Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor |
| US5225324A (en) * | 1987-04-24 | 1993-07-06 | Bioscience International, Inc. | Diagnostics for mycobacteria in public health, medical, and veterinary practice |
| GB8709803D0 (en) * | 1987-04-24 | 1987-05-28 | Mcfadden J J | Treatment of crohn's disease &c |
| US4985243A (en) * | 1988-01-20 | 1991-01-15 | Ml Technology Ventures, L.P. | Composition and method for protecting against diseases caused by microorganisms |
| US4873937A (en) * | 1988-01-28 | 1989-10-17 | Nordson Corporation | Method and apparatus for spraying powder into a continuous tow |
| DE3809796A1 (de) * | 1988-03-23 | 1989-10-05 | Wolfgang Prof Dr Med Bredt | Verfahren zum reinigen eines 168 kd-proteins von mycoplasma pneumoniae |
| ATE134705T1 (de) * | 1988-06-29 | 1996-03-15 | Ml Technology Ventures | Rekombinantes hyopneumoniae antigen und dessen verwendung |
| DE69027112T2 (de) * | 1989-01-23 | 1997-01-09 | Auspharm International Ltd 4Th | Impfstoffzusammensetzung |
| USRE39494E1 (en) * | 1992-02-27 | 2007-02-27 | Intervet Inc. | Inactivated mycoplasma hyopneumoniae and uses therefor |
| US5338543A (en) * | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| US7943352B2 (en) * | 2006-03-29 | 2011-05-17 | Bacoustics, Llc | Apparatus and methods for vaccine development using ultrasound technology |
| ITFI20060163A1 (it) * | 2006-06-29 | 2006-09-28 | Menarini Internat Operations Luxembourg Sa | Composizione farmaceutica contenente un anticorpo monoclonale anti idiotipico anti-ca-125 ed alluminio |
| US9056909B2 (en) | 2007-11-06 | 2015-06-16 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae avirulent adjuvanted live vaccine |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5540568B2 (da) * | 1972-10-05 | 1980-10-18 |
-
1984
- 1984-06-15 FR FR8409422A patent/FR2565825B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-06-14 WO PCT/FR1985/000152 patent/WO1986000019A1/fr not_active Ceased
- 1985-06-14 DE DE8585902582T patent/DE3574109D1/de not_active Expired
- 1985-06-14 JP JP60502608A patent/JPS61502466A/ja active Pending
- 1985-06-14 EP EP19850902582 patent/EP0185042B1/fr not_active Expired
-
1986
- 1986-02-14 DK DK071686A patent/DK162509C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2565825A1 (fr) | 1985-12-20 |
| JPS61502466A (ja) | 1986-10-30 |
| DK71686A (da) | 1986-02-14 |
| EP0185042A1 (da) | 1986-06-25 |
| FR2565825B1 (fr) | 1990-07-13 |
| WO1986000019A1 (fr) | 1986-01-03 |
| DK71686D0 (da) | 1986-02-14 |
| DE3574109D1 (en) | 1989-12-14 |
| EP0185042B1 (fr) | 1989-11-08 |
| DK162509C (da) | 1992-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5832061B2 (ja) | ローソニア・イントラセルラリスを含む免疫原性組成物 | |
| US3975517A (en) | Enteric disease vaccine | |
| JP5793808B2 (ja) | 弱毒化マイコプラズマ・ボビス株を含むワクチン及び弱毒化の方法 | |
| Young | Human brucellosis | |
| Lewis | Clostridial diseases | |
| KR20040030783A (ko) | 마이코플라즈마 보비스 백신 및 동물에서의 폐렴 감소 방법 | |
| JPS61502466A (ja) | マイコプラズマのような微生物による病気に対するワクチン、その調整および活性因子としての微生物膜 | |
| JP6301945B2 (ja) | 子宮内疾患のためのワクチン | |
| NO159782B (no) | Anordning ved fjaersystem, foerst og fremst paa kjoeretoeyer. | |
| Anderson et al. | Infection with Corynebacterium pseudotuberculosis in five alpacas | |
| US4386065A (en) | Vaccine against EAE | |
| McEwen et al. | An estimate of a suitable infective dose of Br. abortus for immunisation tests on cattle | |
| RU2723022C2 (ru) | Вакцина для применения против субклинической инфекции lawsonia у свиней | |
| JP4714167B2 (ja) | エリシペロスリクス・ルシオパシエ抗原及びワクチン組成物 | |
| JPH0767544A (ja) | 飼料組成物及び飼料 | |
| Ploeger et al. | Production of dairy replacement stock in relation to level of exposure to gastrointestinal nematode infection in the first grazing season: second-year calves and heifers | |
| Smith | Bovine Demodicidosis: 1. Incidence in Ontario | |
| RU2709197C2 (ru) | Вакцина для применения против субклинической инфекции lawsonia у свиней | |
| RU2850427C1 (ru) | Способ повышения эффективности профилактики клостридиоза у крупного рогатого скота | |
| Abdusattarov et al. | Ways to increase the effectiveness of hyperimmune serum against colibacteriosis, salmonellosis and pasteureellosis of lambs | |
| IE47574B1 (en) | Inhibiting growth of mycoplasmas | |
| TW201141516A (en) | Actinobacillus suis antigens | |
| Tacconi et al. | Evaluation of the efficacy of apramycin against Salmonella pullorum infection in chickens | |
| RU2403062C1 (ru) | Вакцина против болезни ауески и рожи свиней | |
| KR101159921B1 (ko) | 돼지 다발성 장막염 예방용 백신 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |