DK162519B - Dihydropyridazinonderivater og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt farmaceutisk praeparat indeholdende forbindelserne - Google Patents

Description

DK 162519B

Den foreliggende opfindelse angår dihydropyridazinonderivater og navnlig sådanne forbindelser, som har en substitueret phenyl gruppe i di hydropyridazi nonri ngens 6-sti 11ing. Opfi ndel sen angår endvidere en fremgangsmåde til de omhandlede forbindel-5 sers fremstilling samt farmaceutiske præparater, der indeholder dem. De omhandlede forbindelser er selektive inhibitorer for phosphodiesterase type III, og de kan anvendes til at bekæmpe sådanne tilstande, hvor det menes, at en sådan inhibe-ring er gunstig. De omhandlede forbindelser er således positi-10 ve inotrope midler og vasodi1 atorer og er derfor værdifulde til bekæmpelse af hjertekarsygdomme, især kongestivt hjertesvigt. Desuden inhiberer de omhandlede forbindelser blodplade-sammenhobning, og de har derfor en antitromboti sk virkning. Desuden er de omhandlede forbindelser bronchadilatorer, og de 15 kan derfor anvendes til at bekæmpe kroniske obstruktive lungesygdomme såsom astma og bronkitis. Den vigtigste anvendelse for de omhandlede forbindelser er til behandling af kongestivt hjertesvigt, og til en sådan behandling har forbindelserne en i høj grad ønsket profil for aktiviteten og varigheden.

20

Kongestivt hjertesvigt behandles traditionelt med hjertestyrkende glycosider, f.eks. digoxin og digitoxin, og sympatommi-metiske midler. Glycosiderne har udtalte toxiske virkninger med lav terapeutisk index. De sympatomimetiske midler har i 25 almindelighed ikke den ønskede aktivitetsprofil, og de er ikke effektive ved oral indgift. Amrinon er en interessant i handelen gående forbindelse, der angives at være et inotropisk middel. Denne forbindelse har en uønsket profil med hensyn til bivirkninger, når den indgives oralt og udviklingen er ved at 30 begrænse den til andre indgiftsveje. Der foreligger derfor stadig et behov for oralt inaktive inotrope midler med en god terapeutisk profil.

Den foreliggende opfindelse anviser således hidtil ukendte di-35 hydropyridazi nonder i vater med formlen I: 2

DK 162519 B

NCN

Ί 2 NH-—C—NHk g T (I) I (.a io Ti o og farmaceutisk acceptable salte deraf, hvor Ri er hydrogen eller methyl, og R2 er hydrogen eller Ci_4alkyl.

15 Fra EP offentliggørelsesskrift nr. 84.250 kendes dihydropyri-dazinonderivater, hvoraf nogle har en struktur, der ligner den ovenfor viste almene formel I, hvor Ri og R2 hver kan være hydrogen eller lavere alkyl, men hvor der i stedet for cyano-gruppen kan være en phenylgruppe, substitueret phenylgruppe, 20 pyridylgruppe, alkylgruppe eller benzyl gruppe. Disse kendte forbindelser har blodepladeaggregeringshæmmende virkning og blodtrykssænkende virkning.

Forbindelserne ifølge opfindelsen adskiller sig imidlertid fra 25 disse kendte forbindelser med den i den almene formel I viste cyanogruppe, der som bekendt er en kraftigt elektrontiltrækkende gruppe, hvilket ikke er tilfældet hos de tilsvarende ovennævnte grupper i de kendte forbindelser. De hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen har i forhold til de kendte 30 forbindelser vist sig at være nyttige ved at have inotrop virkning og vasodi1 ator i sk virkning.

R* er hydrogen eller methyl. Ri er fortrinsvis methyl, idet sådanne forbindelser giver forbedret aktivitet og forbedret 35 virkningsgrad.

R2 er hydrogen eller Ci_4alkyl, dvs. methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl og tert-butyl. R2 er 3

DK 162519 B

hensigtsmæssigt hydrogen, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl eller n-butyl. R2 er fortrinsvis hydrogen, methyl eller ethyl, idet sådanne forbindelser giver en forbedret aktivitet. R2 er navnlig methyl eller ethyl og mest gunstigt methyl.

5 Særlige forbindelser ifølge opfindelsen er: 6-[4-(N3-methyl-N2-cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4,5-dihy- dro-3(2H)-pyridazinon, 10 6-[4-(N3-ethyl-N2-cyanguanidi no)phenyl]-5-methyl-4,5-di hydro-3(2H)-pyridazinon, 6 - [4 - (N3 - i sopr opy 1 -N2-cyanguanidi no) phenyl ] -5^-methyl -4,5-di -15 hydro-3(2H)-pyridazinon, 6-[4-(N3-butyl-N2-cyanguanidino)phenyl ]-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon, og 20 6-[4-{N2-cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-py-ridazinon.

Ifølge et gunstigt træk ved den foreliggende opfindelse er de foretrukne forbindelse således dem, der har den almene formel

25 11: NCN

11 3

NH—C—NHRJ

o (II) CH3V^n

N

l^>

35 O

samt farmaceutisk acceptable salte deraf, hvor R3 er methyl eller ethyl.

DK 162519 B

t

Forbindelserne ifølge opfindelsen er afbilledet som dihydropy-ridazin-3(2H)-oner, men naturligvis dækker den foreliggende opfindelse alle tautomere former deraf, f.eks. dihydropyrida-zinolformen og alle de tautomere former af gruppen 5 -NH-C(=NCN)NHR2. Desuden dækker den foreliggende opfindelse alle optiske isomere former af forbindelserne med formel I.

Forbindelserne med formel I kan danne farmaceutisk acceptable salte med metalioner, såsom alkalimetaller, f.eks. natrium og 10 kalium, eller jordalkalimetaller, f.eks. calcium og magnesium.

For at anvende en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til behandling af mennesker eller 15 andre pattedyr, formuleres den normalt i overensstemmelse med almindelig farmaceutisk praksis som et farmaceutisk præparat.

Forbindelser med formel I og farmaceutisk acceptable salte deraf kan indgives på en konventionel måde til behandling af 20 de indicerede sygdomme, f.eks. oralt, parenteralt, transder-malt, rektalt, ved inhalering eller ved bukkal indgift.

Forbindelserne med formel I og deres farmaceutisk acceptable salte, der er aktive, når de indgives oralt eller ved bukkal 25 indgift, kan formuleres i form af sirup, tabletter, kapsler og pastiller. Et siruppræparat vil i almindelighed bestå af en suspension eller opløsning af forbindelsen eller et salt i en flydende bærer, f.eks. ethanol, glycerol eller vand sammen med et smagsstof eller farvestof. Når præparatet foreligger i form 30 af en tablet kan der anvendes et hvilket som helst farmaceutisk bærerstof, der rutinemæssigt anvendes til fremstilling af faste præparater. Eksempler på sådanne bærere indbefatter mag-nesiumstearat, stivelse, laktose og sakkarose. Når præparatet er i form af en kapsel, er en hvilken som helst rutinemæssig 35 indkapsling velegnet, f.eks. anvendelse af de førnævnte bærere i en hård gelatinekapselskal. Når præparatet er i form af en kapsel med blød gelatinskal, kan en hvilken som helst far- 5

DK 162519 B

maceutisk barer, der rutinemæssigt anvendes til fremstilling af dispersioner eller suspensioner tages i betragtning, f.eks. vandige gummier, celluloser, silikater eller olier, og disse inkorporeres i en blød gelatinekapselskal.

5

Typiske parenterale præparater består af en opløsning eller suspension af forbindelsen eller salt deraf i en steril vandig eller ikke-vandig bærer, eventuelt indeholdende en parenteralt acceptabel olie, f.eks. polyethylenglycol, polyvinylpyrroli-10 don, lecithin, arachisolie eller sesamolie.

Et typisk suppositorierpræparat omfatter en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, der er aktiv ved indgift på denne måde, sammen med et bindingsmiddel 15 og/eller smøringsmiddel, f.eks. polymere glykoler, gelatiner, kakaosmør eller lavtsmeltende vegetabilske vokser eller fedtstoffer .

Typiske transdermale præparater omfatter en konventionel van-20 dig eller ikke-vandig vehikel, f.eks. en creme, salve, lotion eller pasta eller foreligger i form af et præpareret plaster, forbinding eller membran.

Typiske præparater til inhalering foreligger i form af en op-25 løsning, suspension eller emulsion, som kan indgives i form af en aerosol under anvendelse af et konventionel drivmiddel, såsom dichlordifluormethan eller trichlorfluormethan.

Præparatet foreligger fortrinsvis i enhedsdosisform, f.eks. en 30 tablet, kapsel eller afmålt aerosoldosis, således at patienten kan indgive en enkelt dosis til sig selv.

Hver dosisenhed til oral indgift indeholder hensigtsmæssigt fra 0,01 mg/kg til 3 mg/kg og fortrinsvis fra 0,05 mg/kg til 35 1,5 mg/kg og hver dosisenhed til parenteral indgift indeholder hensigtsmæssigt fra 0,001 mg/kg til 1 mg/kg af en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf regnet som den frie base.

6

DK 162519 B

Ved en behandlingskur er den daglige dosis til oral indgift hensigtsmæssit ca. 0,01 mg/kg til 12 mg/kg af en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf regnet som den frie base. Den dagelige dosis til parenteral ind-5 gift er hensigtsmæssigt ca. 0,001 mg/kg til 4 mg/kg, f.eks. ca. 0,01 mg/kg til 1 mg/kg, af en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf regnet som den frie base. Den aktive bestanddel kan indgives fra 1 til 4 gange dagligt, hvilket er tilstrækkeligt til at forøge det hjerte-10 styrkende resultat. Præparaterne ifølge opfindelsen har positiv inotrop virkning og vasodilatorisk virkning og anvendes ved behandlingen af hjertekarsygdomme, der kan behandles med forbindelser, der har den ene af eller begge disse virkninger.

En sygdomstilstand af denne type er kongestivt hjertesvigt.

15 Forbindelserne ifølge opfindelsen er også bronchodi1 atorer og kan anvendes til behandling af kroniske obstruktive lungesygdomme, som f.eks. astma og bronkitis. Sådanne tilstande kan behandles ved oral, rektal eller parenteral indgift eller ved inhalering. Til indgift ved inhalering styres doserne ved 20 hjælp af en ventil og doserne ligger hensigtsmæssigt i området fra 0,1 til 5,0 mg af en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives sammen med an-25 dre farmaceutisk aktive forbindelser, f.eks. i kombination dermed, samtidigt med eller efter hinanden.

Hensigtsmæssigt formuleres forbindelserne ifølge opfindelsen og den eller de øvrige aktive forbindelser i et farmaceutisk 30 præparat. Eksempler på forbindelser, der kan indføjes i farmaceutiske præparater sammen med forbindelserne med formel I er vasodilatorer, f.eks. hydralazin, angiotensin-omdannende-en-zym-inhibitorer, f.eks. captopril, anti-angina-midler, f.eks. isosorbidnitrat, glyceryltrinitrat og pentaerythritoltetrani-35 trat, anti-arrytmiske midler, som f.eks. quinidin, procainamid og lignocain, hjertestyrkende glucosider, f.eks. digoxin og digitoxin, calciumantagonister, f.eks. verapamil og nifedipin.

7

DK 162519 B

diuretika, såsom triazider og beslægtede forbindelser, f.eks. bendrofluazid, chlorthiazid, chlorthalidon, hydrochlorthiazid og andre diuretika, f.eks. frusemid og triamteren og sedativer, f.eks. nitrazepam, flurazepam og diazepam.

5

Ifølge et yderligere træk ved den foreliggende opfindelse anvises en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, hvilken fremgangsmåde består i: 10 a) omsætning af en forbindelse med formlen III: NH- ό λ (XII)

R

NH

V

20 O

hvor Ri har den ovenfor angivne betydning, med en forbindelse med formlen IV:

NCN

25 "

Ll-C-R (IV) hvor L* er en afgående gruppe og R er en gruppe -NHR2, hvor R2 har den ovenfor angivne betydning eller R er en afgående grup-30 pe L2; hvorefter, hvis R er en afgående gruppe L2, der omsættes med en amin NI^R2» hvor R2 har den ovenfor angivne betydning, eller b) omsætning af en forbindelse med formlen V: 35 8

DK 162519 B

NCN

II 2

NH—C—L

δ

Rv^> iV) k>

10 T

O

med en amin NI^R^, hvor L2, Ri og R2 har den ovenfor angivne betydning, eller c) omsætning af en forbindelse med formlen VIj 15

NCN

II 2

NH—C—NHR

u 1 (VI) Ύ \o I .0 25

X

hvor R* og R2 har de ovenfor angivne betydninger og X er en gruppe, der kan fjernes, med hydrazin eller en kemisk ækviva-30 lent dertil, eller d) omsætning af en forbindelse med formlen VII: 35 9

DK 162519 B

A

I 2

NH—CeNR

ό , (VII) rV^ li·.

10 g hvor Ri og R2 har de ovenfor angivne betydninger og A er en gruppe, der kan fjernes, med cyanamid eller et tungmetalsalt deraf, eller 15 e) til fremstilling af en forbindelse med formlen I, hvori R2 er hydrogen, omsætning af en forbindelse med formel III som defineret ovenfor med et dicyanamidsalt; hvorefter den vundne forbindelse om ønsket omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt.

20

Ved omsætningen mellem forbindelserne med formlerne III og IV, kan R være en gruppe -NHR2, således at der direkte dannes en forbindelse med formel I. I et foretrukket alternativ er R en afgående gruppe L2, der kan være den samme som eller forskel-25 lig fra den afgående gruppe Li. Hensigtsmæssigt er Li og L2 begge benzylthio eller Ci-ealkylthio, f.eks. er de fortrinsvis begge methylthio. En sådan reaktion gennemføres hensigtsmæssigt i et opløsningsmiddel, såsom pyridin, ved en forhøjet temperatur, f.eks. tilbagesvalingstemperaturen. Li og L2 kan 30 også hensigtsmæssigt begge være valgt blandt Cj.galkoxy, phe-noxy eller benzyloxy, fortrinsvis er både Li og L2 phenoxy. En sådan reaktion gennemføres hensigtsmæssigt i et aprotisk, organisk opløsningsmiddel, såsom dimethyl formamid, eller en Cj-jalkanol, f.eks. ethanol, ved en forhøjet temperatur, 35 f.eks. mellem 50*C og 150eC, fortrinsvis mellem 100 og 130eC.

Når L1 og L2 er afgående grupper giver reaktionen mellem forbindelserne med formlerne III og IV forbindelsen med formel V.

10

DK 162519 B

Denne kan isoleres og omsættes eller omsættes in situ med en amin med formlen R2NH2· En sådan reaktion kan hensigtsmæssigt udføres i en Ci_4alkanol, f.eks. ethanol, ved en forhøjet temperatur, f.eks. mellem 50°C og tilbagesvalingstemperaturen, 5 dvs. ca. 79°C for ethanol. Velegnede og foretrukne afgående grupper L2 i formel V er de samme som i formel IV. Fjernelsen af en afgående gruppe L2 kan om ønsket gennemføres i nærværelse af et salt af et tungmetal, navnlig når L2 er alkylthio. Velegnede salte af tungmetaller indbefatter sølvsalte, kvik-10 sølvsalte, cadmiumsalte eller blysalte, fortrinsvis sølvni trat eller mercurichlorid. I sådanne tilfælde udføres reaktionen fortrinsvis i nærværelse af en base, f.eks. kaliumcarbo-nat.

15 Reaktionen mellem en forbindelse med formel VI og hydrazin eller en kemisk ækvivalent deraf gennemføres hensigtsmæssigt ved stuetemperatur eller ved forhøjet temperatur, f.eks. 15-120°C, fortrinsvis ca. 30eC til 80°C, eller ved et passende opløsningsmiddels tilbagesvalingstemperatur. Reaktionen udføres 20 hensigtsmæssigt i et opløsningsmiddel, såsom Ci-4alkanol, f.eks. methanol, ethanol eller n-propanol, eller vandig eddikesyre eller iseddikesyre. I forbindelserne med formel VI er X hensigtsmæssigt hydroxy, Ci-6alkoxy, amino eller Ci_6alkylami-no.

25

Ved omsætningen af en forbindelse med formel VII og cyanamid eller et tungmetalsalt deraf er A hensigtsmæssigt mercapto (-SH), dvs. tautomer med et thiourinstof, og der kan omsættes med et tungmetalsalt af cyanamid, f.eks. et bly-, kviksølv-30 eller cadmiumsalt. Hensigtsmæssigt kan sådanne omsætninger gennemføres i acetonitril eller dimethylformamid. Ifølge et alternativ kan A i forbindelserne med formel VII være Cj-4al-kylthio, Ci-4alkoxy, phenoxy eller benzyloxy. Sådanne forbindelser kan omsættes med cyanamid i nærværelse af en kraftig 35 base, f.eks. sådanne der har anioner med lav nukleofil karakter, såsom natriumhydrid eller kalium-t-butoxid. Omsætningen gennemføres hensigtsmæssigt i et opløsningsmiddel under vand- 11

DK 162519 B

frie betingelser og fortrinsvis ved en forhøjet temperatur, f.eks. 60eC til 120°C, hensigtsmæssigt ved tilbagesvalingstemperaturen for en Cj^alkano!. Når kal ium-t-butoxid er den kraftige base, er det hensigtsmæssigt at anvende t-butanol som 5 opløsningsmiddel. A er fortrinsvis Cj-ialkylthio.

Omsætningen mellem en forbindelse med formel III og et dicyan-amidsalt gennemføres hensigtsmæssigt under vandigt sure betingelser, f.eks. i en blanding af eddikesyre og en uorganisk 10 syre, såsom saltsyre. Reaktionen gennemføres hensigtsmæssigt ved stuetemperatur. Fortrinsvis er dicyanamidet i form af natri umsaltet.

Forbindelserne med formel III er kendte fra jCurran et al., J.

15 Medicinal Chemistry, 17, side 273 (1974).

Forbindelserne med formel VI kan fremstilles ved at omsætte en forbindelse med formlen VIII: NH- 6

Ri I o 25

V

, x hvor Ri og X har de ovenfor angivne betydninger, med en for-30 bindelse med formlen IV, som defineret ovenfor på en måde, der er analog med den, der er beskrevet for omsætningen mellem forbindelserne med formlerne III og IV. Forbindelserne med formlen VIII er kendte eller kan fremstilles på konventionel måde, som beskrevet i den ovennævnte reference fra J. Medici-35 nal Chemistry.

Forbindelserne med formlen VII er kendte fra EP-A-84250 eller kan fremstilles på konventionel måde.

12

DK 162519 B

Fremstillingen af forbindelsen med formel I i almindelighed er opsummeret i følgende skema.

Skema NH0 NH0 ' Cj y ^ o i ^ n

l L

T II

X O

NCN * NCN

II 2 H 2

NHCIT NHCIT

ό 6

I X0 ^N

LJ® I li X o

NCN NCN A

M o il 2 I o

NHCNHR NHCNHR NH-C=NR

_ό ό J ό

O ^N

w^° L^NH

l· li <- Π X o o R1, R2, L2, A og X er defineret i teksten.

13

DK 162519 B

Forbindelserne med formel V er af primær interesse som mellemprodukter til anvendelse ved fremstillingen af forbindelser med formel X. De er imidlertid også aktive forbindelser i sig selv, idet de er inhibitorer for phosphodiesterase, og idet de 5 især udviser positiv inotrop og vasodilatorisk virkning.

I forbindelserne med formel V er Ri fortrinsvis methyl.

I forbindelserne med formel V er L2 hensigtsmæssigt Cj.galkyl-10 thio, f.eks. methylthio, Cj-galkoxy, f.eks. methoxy eller ethoxy, phenoxy eller benzyloxy. Fortrinsvis er L2 methylthio eller Cj^alkoxy, f.eks. methoxy, ethoxy eller propoxy. L2 er især ethoxy.

15 Forbindelserne med formel V og farmaceutisk acceptable salte deraf kan formuleres, anvendes og afprøves som defineret i nærværende beskrivelse for forbindelserne med formel I.

Følgende biologiske prøvemetoder, data og eksempler tjener til 20 at illustrere opfindelsen.

Hiertestimulerende virkning - in vitro

Forbindelserne med formel I og farmaceutisk acceptable salte 25 deraf afprøves for hjertestimulerende virkning ved at følge en metode baseret på den, der er beskrevet af S.C. Verma og J.H. McNeill (J. Pharm & Exp. Therapeutics, 200, 352-362 (1977)). Marsvin (500-700 g) af begge køn aflives og hjerterne udtages hurtigt og overføres til en dissektionsskål indeholdende en 30 oxygeneret badvæske. Mens hjertet er i badmediet, skæres det højre hjertekammer i to strimler. Strimlerne udspændes begge i 50 ml bad indeholdende Krebs Henseleits opløsning ved 37ec og der bobles 95¾ oxygen og 5% carbondioxid gennem badet.

35 Hjertekammerstrimlerne stimuleres elektrisk ved en frekvens på 1,0 Hz ved det dobbelt af tærskelspændingen. Til strimlerne påføres en hviletension på 1,0 g og tensionen holdes konstant 14

DK 162519 B

ved genindstilling i løbet af en ækvi1ibreringsperiode på 60 min. Badvæsken udskiftes hyppigt under denne periode. Når der er opnået en konstant grundlinie sættes en under afprøvning værende forbindelse til badvæsken og en kumulativ koncentra-5 tion-respons-kurve aftegnes. De til anvendelse i forbindelse med den foreliggende opfindelse afprøvede forbindelser gav en 50% stigning af hjertekammerstrimlernes sammentrækningskraft ved koncentrationer i badvæsken der var mindre end 10”4 molære, hvilket viser, at de har en virkning, som positive inotro-10 pe midler.

Ved den ovennævnte prøvemetode gav forbindelserne ifølge opfindelsen følgende resultater: 15 Forbindelse ifølge Ε<^50 x eksempel nr.

_ — i,4 3 1.4 20 4 0/8 5 8,5 6 1/4 8 40% ved 31,6

Amrinon 15 • 25__—--1—---- H iertesti mulerende virkning - in vivo (bedøvede katte) I bedøvede katte, der i forvejen var behandlet med et ganglie-30 blokerende middel (mecamylamin eller pempidin) og propranolol, fremkaldte forbindelserne ifølge eksemplerne langvarige stigninger i dp/dt max for venstre hjertekammer (dette er et index for venstre hjertekammers kontrakti1itet), når de blev indgivet intravenøst. Den dosis, der forøger dp/dt max for venstre 35 hjertekammer med 50%, er angivet som ED50.

15

DK 162519 B

Forbindelse ifølge ED5q Relativ eksempel nr. (mikromol/kg) varighed 1 0/2 xxx 5 3 0/2 xxx 4 0/2 xx 5 0,31 xx 6 0/7 xxx 8 1/6 xx

Amrinon 5,6 x +) Relativ varighed bedømt på de bedøvede katte efter intravenøs indgift: 15 xxx lang; xx medium; x kort.

Der blev iagttaget minimale ændringer i blodtryk og hjerterytme.

20 H iertesti mulerende virkning - in vivo (bevidste hunde)

Forbindelserne ifølge eksempel 1 forøgede dp/dt max for venstre hjertekammer på bevidste hunde efter intravenøs indgift i doser på under 0,1 mg/kg, oral indgift fremkaldte positiv ino-25 trop respons i doser på 0,25 mg/kg og derunder. Disse tilfælde af positiv inotrop respons varede ved i op til 9 - 12 timer uden ændringer i blodtryk eller hjerterytme. Denne forbindelse er derfor særlig gunstig med hensyn til "kraft-rytme"-selekti-vitet. I modsætning hertil er amrinon mindre aktiv og har kor-30 tere varighed.

Vasodi1 atorv i rkni nq

Forbindelsen ifølge eksempel 1 fremkaldte en dosisafhængig va-35 sodilatation i bagfjerdingen af bedøvet rotte (autoperfunderet ved konstant blodtryk) i et dosisområde på 1-10 μιηοΐ/kg (i.v.). Den dosis, der forøger bagfjerdingens blodstrømning 16

DK 162519 B

med 50%, var 4,6 μπιοΐ/kg. Der blev iagttaa»+ .

59 "»'’«get en signifikant varighed af aktiviteten.

Forbindelserne ifølge eksemplerne 3, 4, 5 9 ' °9 8 blev afprøvet 5 på autoperfunderet bedøvet katte-bagfjerdinn , , .

r r a J "9 (autoperfunderet ved konstant blodstrømning). De doser, der* „ , . ,.

9 ’ sænker bagfjerdingsperf usionstrykket (vasodilation) med i c«. .

er angivet nedenfor: 10 Forbindelse ifølge eksempel nr.

3 44 ug/kg 4 32 ug/kg 15 5 130 ug/kg 8 1 mg/kg

Bronchodilatation - in vivo 20

Hanmarsvin af stammen Dunkin Hartley (530 g + 6 g) bedøvedes med sagatal (pentobarbital natrium) (90 mg/kg i.p.). Luftvejsmodstanden måltes under anvendelse af en modifikation af den klassiske Konzett-Rossler teknik (Versuhsanordnung zu Unter-25 suchungen an der Bronchialmuskulatur. Naunyn-Schmiedebergs

Arch. Exp. Path. Pharmak., 30, side 121-145, (1940)). En dosis 2-pyridylmethylamin, der gav ca. 100% forøgelse af luftvejs-modstanden valgtes til intravenøs indgift. Bolusdoser af forbindelsen ifølge eksempel 1 blev indgivet (i.v.) et minut før 30 dyrene blev udsat for 2-pyridylethylamin.

Forbindelsen ifølge eksempel 1 reducerede den 2-pyridylethyl-amin-fremkaldte bronchokonstriktion. Tærskelværdi-dosen for denne forbindelse var 3,16 x 10“8 mol/kg. Den dosis af forbin-35 delsen ifølge eksempel 1, der reducerede 2-pyridylethylamin- bronchokonstriktionen med 50% (ED50), var 3,9 x 10”? mol/kg, hvilket viser en anti-bronchokonstriktor-virkning in vivo.

_17

DK 162519 B

Inhiberina af blodpladesammenhobnina - in vitro

Plasma præpareredes på følgende måde. Blod fra 6 normalt sunde frivillige blandedes med 3,8% (vægt/rumfang) trinatriumcitrat 5 (9 dele blod : 1 del citrat). Prøverne centrifugeredes ved 150 g i 10 minutter og det ovenstående blodpladerige plasma (PRP) fjernedes. Blodpladekoncentrationen i PRP indstilledes til 300 i SO x 109/liter blodplader med autolog blodpladefattig plasma.

10 25 μΐ alikvoter af en 40 pg/ml opløsning af forbindelsen ifølge eksempel 1 inkuberedes med 225 μΐ alikvoter af PRP i et Payton Aggregometer i 3 minutter. Kontrolopløsninger, hvoraf den ene svarede til prøveopløsningen med hensyn til opløsnin-15 gens pH og tonicitet og en anden på 0,9% (vægt/rumfang) NaCl blev også undersøgt. Efter 3 minutter sattes der til hver opløsning 25 μΐ alikvoter adenosindiphosphatopløsning i en koncentration på 20 pm. Sammenhobningsresponsen registreredes indtil den var fuldstændig med et maksimum på 3 minutter. Pro-20 ceduren blev gentaget under anvendelse af forskellige aggregeringsmidler: 100 pg collagen; 100 pm adrenalin eller 5 mg/ml arachidonsyre i stedet for adenosindiphosphat.

Sammenhob!ingsresponserne fremkaldt ved hjælp af de forskelli-25 ge aggregeringsmidler måltes for blodpladerne fra hver donor. Resultaterne bedømtes ved visuel undersøgelse af spor af sammenhobning fremkaldt af Payton aggregometeret og bedømtes se-mikvantitativt ved måling af lystransmissionen 3 minutter efter tilsætningen af det sammenhobningsinducerende middel.

30

Forbindelsen ifølge eksempel 1 i slutkoncentrationer på 5 pg/ ml inhiberede blodpladesammenhobning fremkaldt af opløsninger af adenosindiphosphat, arachidonsyre, collagen eller adrenalin. Seriefortyndinger af denne forbindelse fremstilledes og 35 afprøvedes til en inhibering af adenosindiphosphat-fremkaldt bl odpi adesammenhobn i ng. Den anden bølge af sammenhobning i nhi -beredes fuldstændigt med forbindelsen ifølge eksempel 1 ved 0,5 pg/ml og derover.

18

DK 162519 B

Forbindelserne ifølge opfindelsen udviser ingen åbenbare tegn på toxic i tet i doser op til ca. 100 gange en beregnet terapeutisk dosis, når de indgives oralt til bevidste hunde.

5 Opfindelsen belyses nærmere i det følgende ved hjælp af nogle eksempler.

Eksempel 1 10 6-r4-(N3-methvl-N2-cvaguanidi no) phenyl 1-5-methvl-4,5-dihvdro-3(2H)-pvridazinon i) En opløsning af 6-(4-aminophenyl)-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon (2,0 g, 0,0098 mol) og diph«nylcyaniminocar- 15 bonat (2,4 g, 0,01 mol) i vandfrit dimethyl formamid (15 ml) omrørtes ved 115-120°C i 6 timer. Derpå tilsattes yderligere diphenylcyaniminocarbonat (0,6 g, 0,0025 mol) og opløsningen opvarmedes i yderligere 2 timer.

20 Afdampning af opløsningsmidlet under nedsat tryk gav en brun remanens, der vaskedes med kogende ethanol og derpå omkrystalliseredes fra vandigt dimethylformamid, hvorved der vandtes 6-C 4-[(N2-cyan)phenoxyforami di no]phenyl]-5-methy1-4,5-dihydro-3{2H)-pyridazinon, 1,5 g, smeltepunkt 164-165°C. Forbindelsen 25 kan også omkrystalliseres fra acetonitril.

ii) En blanding af det ovenfor vundne formamidin (1,5 g, 0,0043 mol) og en opløsning af methylamin (33% i ethanol; 50 ml) omrørtes og opvarmedes under tilbagesvaling i 3,5 timer.

30 Opløsningen inddampedes til et lille rumfang under nedsat tryk og remanensen opløstes i varm ethanol. Efter behandling med trækul behandledes opløsningen med vand og fik lov til at køle, hvilket gav den i overskriften angivne forbindelse (l,o g) smeltepunkt 264-265°C.

35 19

DK 162519 B

Eksempel 2.

o 2 6- [4- (N -methyl-N -cyanguanidino) phenyl] ^5-meth.yl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon.

i) Til 6-(4-aminophenyl)-5-methyl~4,5-dihydro-3(2H)-pyri-5 dazinon (4 g) i vandfri pyridin (25 ml) sattes dimethylcyan- dithioiminocarbonat (5,75 g) og blandingen omrørtes under tilbagesvalingskogning i 3 timer. Reaktionsblandingen inddampedes under nedsat tryk til ca. det halve af rumfang, fortyndedes med ethanol og fik lov at stå, hvorved der vandtes et fast stof 10 (3,85 g). Filtratet gav ved henstand og triturering et udbytte af yderligere fast stof (1,42 g). De faste stoffer kombineredes og opløstes i kogende pyridin (60 ml) indeholdende en lille mængde vand. Opløsningen filtreredes og rumfanget reduceredes til dannelse af en opslæmning, der fortyndedes med acetone og 15 henstilledes. Derved vandtes krystaller af 6^(4^-rcyan-S-rmethyl-isothioureido] phenyll^5^methyl-4, 5Tdihydro-K3 (2H) -pyridazinon (4,02 g) rsmeltepunkt 231t>232°C (sønderdeling).

±i) 6-(4-(N-^cyan-rS~Methylisothioureido) phenyl)-?5-methylr-4,5-dihydro-r3 (2H)Tpyridazinon (48 g) sattes til en opløsning af 20 methylamln (33% i ethanol* 600 ml), under omrøring og blandingen opvarmedes under tilbagesvalingskogning i 2 timer. Derpå fik reaktionshlandingen lov til at køle og filtreredes til opnåelse af den i overskriften angivne forbindelse (32 g), son ved aro^ krystallisation fra vandigt dimethylformamid gav den i overskrift 25 ten angivne forbindelse med smeltepunkt 270-272°C. Ved tyndlagskromatografi og kernemagnetisk resonansspektroskopi var denne forbindelse identisk med produktet ifølge eksempel 1.

Eksempel 3.

3 2 6-[4-(N -ethyl-N -cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4,5-dihydro-30 3(2H)-pyridazinon.

20

DK 162519 B

6- [4- [~{Ν -cyan) phenoxyformaxnidino] phenyl] -5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon (2,0 g) og en ethylaminopløsning (33% i ethanol; 75 ml) omrørtes og opvarmedes under tilbagesvalingskogning i 3 timer. Der tilsattes yderligere ethylamin 5 (33% i ethanol; 75 ml) og blandingen omrørtes under tilbagesva lingskogning i yderligere 3 timer. Blandingen inddampedes under nedsat tryk, hvorved der vandtes en brun olie. Denne triturere-des under chloroform, hvorved der vandtes et flødefarvet fast stof (1,15 g), som underkastedes søjlekromotagrafi på silica 10 (chloroform som elueringsmiddel), hvorved den i overskriften angivne forbindelse vandtes i en mængde på 0,40g med smeltepunkt 208-209°C.

Eksempel 4.

3 2 6-[4-(N -isopropyl-N -cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4,5-15 dihydro-3 (2H)-pyridazinon.

2

Isopropylamin (7,4 ml) sattes til 6-(4-(N -cyan)-phenoxyform-amidino]phenyl)-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon (1,5 g) i ethanol (100 ml) og blandingen omrørtes under tilbagesvalingskogning i 4 timer (yderligere 3 ml isopropylamin tilsattes efter 20 2 timer). Blandingen inddampedes under nedsat tryk til dannelse af et lysegrønt fast stof. Triturering under ethanol gav et flødefarvet fast stof (0,94 g), som underkastedes flash-søjlekromatografi på silica (chloroform, der gradvis går over til chlo-roform/methanol 40:1), hvorved den i overskriften angivne for-25 bindelse vandtes i form af et hvidt fast stof (0,65 g), smeltepunkt 255°C.

Eksempel 5, 3 2 6-[4-(N -butyl-N -cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon.

2 30 En blanding af n-butylamin (0,7 g) og 6-(4-(N -cyanphenoxyform-amidino)phenyl)-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon (2,0 g) 21

DK 162519 B

i ethanol (100 ml) omrørtes og kogtes under tilbagesvaling i 4 timer. Blandingen inddampedes under nedsat tryk, hvorved der vandtes en lysegul olie, som ved triturering med diethyl-æter gav et smudsighvidt fast stof. Dette underkastedes flash-5 søjlekromatografi på silica (eluering med chloroform, der grad vist går over i chloroform/methanol 40:1), hvorved den i overskriften angivne forbindelse vandtes i form af et hvidt fast stof (0,75 g), smeltepunkt 184-186°C.

Eksempel 6.

10 6-[4-(N^-cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)- pyridazinon.

6- (4-N -cyanphenoxyformamidino) phenyl) -5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon (2,0 g) i ethanol (100 ml) omrørtes under tilbagesvalingskogning i 3 timer,mens der boblede ammoniak-15 gas gennem opløsningen. Reaktionsblandingen henstod natten over og inddampedes derpå under nedsat tryk, hvorved der vandtes et klæbrigt fast stof, som behandledes med kogende ethanol, hvorved der vandtes et hvidt fast stof (1,1 g) . Omkrystallisa-tionfra methanol gav den i overskriften angivne forbindelse 20 (0,8 g), smeltepunkt 258-260°C (sønderdeling).

Eksempel 7.

Λ 6-[4-fø -cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon.

En opløsning af natriumdicyanamid (0,5 g) i vand (20 ml) sat-25 tes til en opløsning af 6-(4-aminophenyl)-5-methyl-4,5-dihy- dro-3(2H)-pyridazinon (1,0 g) i en blanding af vandig eddikesyre (20 ml) og 10 M saltsyre (0,5 ml). Den resulterende opløsning omrørtes ved stuetemperatur i 3 dage. Der dannedes et bundfald, som opsamledes, vaskedes med vand og derpå med etha-30 nol og tørredes, hvilket gav den i overskriften angivne for bindelse (0,33 g). Tyndlagskromatografi og kernemagnetisk re- 22

DK 162519 B

sonansspektroskopi viste, at forbindelsen er i overensstemmelse med produktet ifølge eksempel 6, smeltepunkt 257-260°C (sønderdeling).

Eksempel 8.

5 6-[4-(N^-methyl-N^-cyanguanidino)phenyl]-4,5-dihydro-3(2H)- pyridazinon.

i) 6-(4-aminophenyl)-4,5-dihydro-3 (2H)-pyridazinon (5,0 g) og diphenylcyanoiminocarbonat (0,9 g) omrørtes i vandfrit dimethylformamid (20 ml) i 4 timer ved 120°C. Reaktionsblandin- 10 gen afkøledes, filtreredes og inddampedes under nedsat tryk til dannelse af en olie. Denne olie ekstraheredes over i kogende ethanol (1 liter)rumfanget reduceredes (til ca. 30 ml) og der o filtreredes til opnåelse af 6-[4-[N -cyan)phenoxyformamidino] phenyl]-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon (3,5 g). Yderligere 15 ekstraktion af olien med kogende ethanol gav yderligere pro dukt (2,2 g).

ii) En blanding af den ovenfor vundne formaminin (3,2 g) og en methylarainopløsning (33% i ethanol; 100 ml) omrørtes og opvarmedes under tilbagesvalingskogning i 3 timer. Blandingen 20 filtreredes mens den var varm og det faste stof vaskedes med ethanol og diethylæter. Urenheder ekstraheredes fra dette faste stof ved omrøring i kogende ethanol. Derpå opløstes det faste stof i varm dimethylformamid, behandledes med trækul, filtreredes gennem diatomejord og filtratet inddampedes til et 25 lille rumfang (ca. 5 ml) . Derpå tri tureredes dermed varm etha nol (100 ml) og filtreredes til dannelse af den i overskriften angivne forbindelse (1,1 g), smeltepunkt 267°C (sønderdeling) .

Eksempel 9.

3 2 6-[4-(N -methyl-N -cyanguanidino)phenyl]-4,5-dihydro-3(2H)-30 pyridazinon.

23

DK 162519 B

i) Diphenylcyanoimincarbonat (2,5 g) i vandfrit dimethylform-amid (10 ml) og ethyl-4-aminobenzoylpropionat (2,3 g) i dime-thylformamid (10 ml) blandedes, omrørtes ved 120°C i 4 timer og henstilledes ved stuetemperatur i 16 timer. Reaktionsblan-5 dingen inddampedes under nedsat tryk til et lille rumfang til aflejring af et fast stof. Dette faste stof omkrystalliseredes fra ethanol, hvilket gav N^-[4(3-ethoxycarbonylpropionyl)ptenyl]-(N -cyan)phenoxyformamidin (1,4 g), smeltepunkt 163-165°C (sønderdeling) .

10 ii) Denne forbindelse omsattes med et overskud af en methylamin- opløsning (33% i ethanol) under omrøring og.opvarmning, hvilket 1 3 2 gav N - [4- (3-ethoxycarbonylpropionyl) phenyl"] -N -methyl-N - cyanguanidin, som omsattes med hydrazinhydrat ved forhøjet tem- 3 2 peratur, hvorved der vandtes 6-[4-(N -methyl-N -cyanguanidino)-15 phenyl]-4,5-dihydro-3(2H9-pyridazinon.

Eksempel 10. o 6-[4-((N -cyan)ethoxyformamidino)phenyl]-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon.

6- (4-aminophenyl)-5-methyl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon og 20 diethylcyaniminocarbonat i dimethylformamid opvarmes til dan nelse af den i overskriften angivne forbindelse.

Denne forbindelse omsættes med methylamin til dannelse af forbindelsen ifølge eksempel 1.

Eksempel 11.

25 Et farmaceutisk præparat til parenteral indgift fremstilledes ved at opløse den i overskriften angivne forbindelse ifølge eksempel 1 (0,02 g) i polyethylenglycol 300 (25 ml) under opvarmning. Derpå fortyndedes denne opløsning med vand til injektioner E.P. (til 100 ml). Opløsningen steriliseredes derpå ved 30 filtrering gennem et 0,22 micronmembranfilter og forsegledes i sterile beholdere.

24

DK 162519 B

Der fremstilledes på analog måde præparater indeholdende 0,04 g af forbindelsen ifølge eksempel 1 i polyethylenglycol 300.

Eksempel 12.

5 Farmaceutiske præparater til oral indgift fremstilledes ved at kombinere følgende: vægt % 6-[4-(N^-methyl-N^-cyan-guanidino)phenyl]-4,5-dihydro- 10 5-methyl-3(2H)-pyridazinon 0,5 3,0 7,14 2 vægt% soyalecithin i soya- olie 90,45 88,2 84,41

Hydrogeneret vegetabilsk forkortningsmiddel og bivoks 9,05 8,8 8,45 15 Formuleringerne fyldtes derpå i individuelle bløde gelatine^ kapsler.

Claims (11)

1. Dihydropyridazinonderivater, kendetegnet ved den almene formel: NCN II 2 NH—C—NHR A I <D *yWN V" o i eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, hvor R er hy- 2 5 drogen eller methyl og R er hydrogen eller C-^alkyl.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R^ er methyl.

3. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet 2 ved, at R er C^_^alkyl.

4. Forbindelse ifølge krav 3, kendete gnet ved, at 2 R er methyl eller ethyl.

5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 3 2 det er 6-[4-(N -methyl-N -cyanguanidino)phenyl]-5-methyl- 4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon, 3 2 15 6-[4-N -ethyl-N -cyanguanidino)phenyl]-5-methy1^4,5-dihydro- 3(2H)-pyridazinon, 3 2 6-[4-N -isopropy1-N -cyanguanidino)phenyl]-5-methy1-4,5-dihy-dro-3(2H)-pyridazinon, DK 162519 B 3 2 6-[4-(N -butyl-N -cyanguanidino)phenyl]-5-methy 1-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon, 5 2 6-[4-(N -cyanguanidino)phenyl]-5-methyl-4 ,5-dihydro-3(2H)-pyridazinon, eller 6- [4- (N3-methyl-N2-cyanguanidino) phenyl] -4,5-dihydro-3 (2H) -pyridazinon. 10

6. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder en forbindelse ifølge et hvilket som helst af de foregående krav og et farmaceutisk acceptabelt bærerstof. 15

7· Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, som defineret i krav 1, kendetegnet ved, at man a) omsætter en forbindelse med formlen III: 20 ΝΗ~ 0 vk, v* O -30 i hvor R har den i krav 1 angivne betydning, med en forbindelse med formlen IV: NCN , II (iv)

35 L~C-R 1 2 2 hvor L er en afgående gruppe og R er en gruppe -NHR , hvor R DK 162519 B har den i krav 1 angivne betydning/ eller R er en afgående

2. L , hvorefter man, hvis R er en afgående gruppe L , omsætter 2 2 med en amin NE^R , hvor R har den ovenfor angivne betydning eller 5 b) omsætter en forbindelse med formlen V: NCN II 2 NH—C—L- R* Jv IV)-- l iiH 0 med en amin NE^R , hvor L , R^" og R^ har de ovenfor angivne betydninger,eller c) omsætter en forbindelse med formlen VI: NCN II 2 NH-—C—NHR* Φ *A, i X 1 2 10 hvor R og R har de ovenfor angivne betydninger og X er en gruppe, der kan fjernes, med hydrazin eller en kemisk ekvivalent dertil, eller d) omsætter en forbindelse med formlen VII: DK 162519 B A

1. NH—C=NR ό «ν^ tvII)

10 I ^ N V ό 1 2 hvor R og R har de ovenfor angivne betydninger og A er en gruppe, der kan fjernes, med cyanamid eller et tungmetalsalt deraf, eller 2 e) til fremstilling af en forbindelse med formel I, hvor R er hydrogen, omsætter en forbindelse med formlen III, som defineret ovenfor, med et salt af dicyanamid, 20 og derefter om ønsket omdanner den vundne forbindelse til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf. 25 30 35