DK163280B - Stabiliseret interferonpraeparat, fremgangsmaade til dets fremstilling og anvendelse af praeparatet - Google Patents
Stabiliseret interferonpraeparat, fremgangsmaade til dets fremstilling og anvendelse af praeparatet Download PDFInfo
- Publication number
- DK163280B DK163280B DK488586A DK488586A DK163280B DK 163280 B DK163280 B DK 163280B DK 488586 A DK488586 A DK 488586A DK 488586 A DK488586 A DK 488586A DK 163280 B DK163280 B DK 163280B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- liter
- ifn
- mmol
- phosphate
- polyphosphate
- Prior art date
Links
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims abstract description 33
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims abstract description 33
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims abstract description 17
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 17
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 claims abstract description 16
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 claims abstract description 16
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 11
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 42
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 41
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 23
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 21
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 21
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 15
- OQZCJRJRGMMSGK-UHFFFAOYSA-M potassium metaphosphate Chemical compound [K+].[O-]P(=O)=O OQZCJRJRGMMSGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 235000019828 potassium polyphosphate Nutrition 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 7
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 6
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 claims description 3
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 abstract description 8
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 abstract description 8
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 17
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 13
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- JIZRUFJGHPIYPS-SRVKXCTJSA-N Cys-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O JIZRUFJGHPIYPS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 pH 2.0-6.0 Chemical compound 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- PCRVDEANNSYGTA-IHRRRGAJSA-N Cys-Tyr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)CC1=CC=C(O)C=C1 PCRVDEANNSYGTA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N Met-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
- A61K38/217—IFN-gamma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
DK 163280 B
Den foreliggende opfindelse angår stabiliserede interferonpræparater der er ejendommelige ved at de indeholder en phosphatpuffer, der sikrer en pH-værdi på 6,0-9,0, især en pH-værdi på ca. 7,5, og som har en phosphatkoncentration på 500-1000 mmol/liter, især 1000 mmol/-5 liter og/eller en koncentration af polyphosphat på 25-100 g/liter, især 50 g/liter,_ en fremgangsmåde til fremstilling deraf samt anvendelse af et sådant præparat til fremstilling af et præparat til terapi eller profylakse af sygdomme, især til terapi eller profylakse af virusinfektioner, immunregulatoriske anomalier eller neoplasier.
10 Til interferoner regnes en gruppe proteiner, som findes i kroppen og har antiviral og immunregulerende virkning. Den antivirale virkning opnås imidlertid ikke ved en direkte indflydelse på selve viraene, men ved indvirkning på disses målceller med henblik på en beskyttelse mod virusinfektionen. Ud over den antivirale aktivitet kan interfero- 15 nerne have iagttagelige virkninger på kræftsvulster, som gør dem egnede til anvendelse inden for kræftterapi, og de påvirker kroppens eget immunsystem, idet de fx aktiverer makrofager og NK-celler og forstærker ekspressionen af forskellige immunologisk betydningsfulde bestanddele i cellemembranen.
20 Interferoner (IFN-α, -β og -γ) kan i dag takket være rekombinant DNA-teknologi fremstilles ad mikrobiel vej i mængder, som tidligere trods de største anstrengelser ikke kunne tilvejebringes ved isolering fra naturligt materiale (leukocyter, fibroblaster, lymfocyter) og oprensning .
25 Først denne nye teknologi har derfor åbnet vej for den intensive kliniske afprøvning og eventuelle brede terapeutiske anvendelse af interferonerne og muliggør en tilstrækkelig forsyning med de aktive stoffer til personer, der skal behandles.
Blandt humaninterferonerne er IFN-y det mest ustabile protein, hvis 30 biologiske aktivitet hurtigt går tabt ved lagring, frysning eller lyofilisering. Denne ustabilitet vanskeliggør i betydeligt omfang fremstillingen, oprensningen, lagringen og den terapeutiske anvendelse af IFN-γ. Stabiliseringen af dets biologiske aktivitet spiller derfor en særlig vigtig rolle. I sammenligning med IFN-y er humanin- 2
DK 163280 B
terferonerne a og β relativt stabile proteiner og kan oprenses, lagres og anvendes til terapi uden noget nævneværdigt tab af biologisk aktivitet.
Til stabilisering af interferoner, især IFN-γ, er der tidligere 5 overvejet forskellige hjælpestoffer. Således beskrives stabilisering af interferoner med propylenglycol i USA patentskrift nr. 4.483.849.
Det har dog vist sig, at propylenglycol ikke kan anvendes effektivt til stabilisering af rekombinant IFN-γ. Også stabilisering af IFN-γ med bovint serumalbumin (Rinderknecht et al., J. Biol. Chem. 259, 10 6790-6797 [1984]) er blevet prøvet og har ikke vist sig at være effektiv. Stabilisering af IFN-γ ved hjælp af 0,1% BSA og 0,5% gelatine (Devos et al., J. Interferon Res. 4, 461-468 [1984]) er ligeledes kendt. For at forhindre et aktivitetstab må sådanne præparater dog til stadighed opbevares ved -70°C.
15 Fra DK 5658/82 og Cryobiology, vol. 16 (1979), 301-304 kendes interferonpræparater, der indeholder et phosphatpuffersystem med en pH-værdi på henholdsvis 6,5-8 og 7. Desuden har phosphatpuf fersys ternet i ovennævnte reference fra Cryobiology, en phosphatkoncentration på 0,1M. Imidlertid er der i ingen af ovennævnte referencer nogen hen-20 visning eller antydning til, at et phosphatpuffersystem med høj phosphatkoncentration på 500-1000 mmol/liter og/eller polyphosphat kan bevirke en interferonstabilisering.
Ifølge opfindelsen har det vist sig, at interferoner i nærværelse af en høj koncentration af phosphat og/eller polyphosphat udviser en 25 fortræffelig stabilitet, således at interferonerne kan opbevares i opløsninger ved 2-8°C uden nævneværdigt tab af biologisk og immunologisk aktivitet.
Den foreliggende opfindelse angår således et stabiliseret interferonpræparat, der er ejendommeligt ved, at det indeholder en phosphat-30 puffer der sikrer en pH-værdi på 6,0-9,0 især en pH-værdi på ca. 7,5, og som har en phosphatkoncentration på 500-1000 mmol/liter, især 1000 mmol/liter og/eller en koncentration af polyphosphat på 25-100 g/li-ter, især 50 g/liter, samt en fremgangsmåde til fremstilling deraf, 3 UK i63280 Β ved hvilken en interferonopløsning tilsættes phosphat og/eller po-lyphosphat i overensstemmelse med ovenstående.
Stabiliseringen af præparatet ifølge opfindelsen kan anvendes på alle interferoner eller polypeptider med interferonlignende biologiske 5 egenskaber samt .på blandinger, der indeholder en interferon eller et sådant polypeptid. Fortrinsvis anvendes den med humaninterferon. Humaninterferonet kan være et naturligt eller rekombinant leukocytin-terferon (IFN-α), fibroblastinterferon (IFN-^) eller immuninterferon (IFN-γ). Også såkaldte hybride interferoner, hvor fragmenter af to 10 eller flere native interferonarter er forbundet, kan stabiliseres ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Et særlig foretrukket humaninterferon i nærværende sammenhæng er IFN-γ, især rekombinant IFN-γ, fortrinsvis IFN-γ DO eller IFN-γ D3. Betegnelserne DO og D3 tjener til skelnen mellem de sidstnævnte interferoner, idet DO betegner et 15 rIFN-γ, hvis N-terminale aminosyresekvens begynder med Cys-Tyr-Cys eller Met-Cys-Tyr-Cys, hvorimod der ved D3 forstås et rIFN-γ, som er forkortet med Cys-Tyr-Cys, og hvis N-terminale aminosyresekvens begynder med Gin eller Met-Gln.
Interferonindholdet i præparaterne ifølge opfindelsen er ikke kri-20 tisk. Koncentrationsområdet strækker sig over flere tierpotenser, og den øverste værdi begrænses i det væsentlige kun af det pågældende interferons opløselighed. Med hensyn til humant IFN-γ kan der fx blive tale om koncentrationer på op til 10® enheder (E)/ml, idet et foretrukket område er 4·10® - ca. 10® E/ml.
25 Præparaterne ifølge opfindelsen kan anvendes til fremstilling af et farmaceutisk præparat til terapi eller profylakse af sygdomme, især til terapi eller profylakse af virusinfektioner og immunregulatoriske anomalier eller neoplasier.
Phosphatpuffersystemet er således indrettet, at det opretholder en pH 30 på 6,0-9,0, fortrinsvis 7,5, og har en phosphatkoncentration på 500-1000 mmol/liter, fortrinsvis 1000 mmol/liter. Som phosphatkilde kan der anvendes kaliumphosphater og natriumphosphater, fortrinsvis dinatriumhydrogenphosphat og mononatriumhydrogenphosphat. Et særlig foretrukket phosphatpuffersystem er således tilpasset, at der sikres 4
DK 163280 B
en pH på ca. 7,5 og har en phosphatkoncentration på 500-1000 mmol/-liter, især 1000 mmol/liter, samt 25-100 g/liter, fortrinsvis 50 g/liter, polyphosphat, især kaliumpolyphosphat.
Polyphosphatopløsningerne med pH 7,5 anvendes i en koncentration på 5 25-100 g/liter, -fortrinsvis 50 g/liter polyphosphat, især kaliumpo- lyphosphat.
Opfindelsen belyses nærmere ved nedenstående eksempler.
De i eksemplerne anvendte kemikalier var til analysebrug eller af højeste renhed.
10 Alle de interferoner, der kan stabiliseres ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, især det i eksemplerne anvendte rekombinante IFN-7 D3 kan fås i ren form ved kendte, i litteraturen beskrevne fremgangsmåder eller ved fremgangsmåder, som er åbenlyse for fagfolk.
Til bestemmelse af den immunologiske aktivitet af det rekombinante 15 IFN-γ D3 blev der anvendt en enzymimmunologisk test (IFN-7-EIA) , der svarer til den enzymimmunologiske test, som er beskrevet af H. Gallati til bestemmelse af humant leukocytinterferon i J. Clin. Chem.
Clin. Biochem. 20, 907-914 (1982).
Til stabilitetsanalyse af IFN-γ blev opløsninger med 4000-10000 E/ml 20 IFN-γ og de tilsætningsstoffer, der skulle undersøges, inkuberet i glasampuller ved 37“C og efter visse tidsrum blev den immunologiske aktivetet af IFN-γ, der var tilbage i den inkuberede IFN-7-opløsning, bestemt ved IFN-γ-ΕΙΑ.
Opfindelsen belyses nærmere under henvisning til tegningen, hvor fig.
25 1 viser stabiliteten af den immunologiske aktivitet af IFN-γ afhængig
af puffersystemet og pH-værdi. 6000 E/ml IFN-γ blev sat til hver af 0,1 mol/liter natriumacetat pH 2,0-6,0 (""), natriumphosphat, pH
5,5-8,0 (ør*), og i TRIS/acetat, pH 7,2-9,0 (£ 1) og inkuberet i lukkede glasampuller ved 37°C i 2 dage. Den immunologiske aktivitet 30 af IFN-γ blev bestemt før inkubationen samt 1 og 2 dage efter inkubationen ved IFN-γ-EIA.
DK 163280B
5
Fig. 2 viser stabiliteten af den immunologiske aktivitet af IFN-γ i 500 mmol/liter natriumphosphat afhængig af pH-værdien. 10000 E/ml IFN-γ blev sat til 500 mmol/liter natriumphosphatpuffer med en pH på 4,5-10 og inkuberet i glasampuller i 7 dage ved 37°C. Efter 3 dages 5 inkubation («-*) og efter 7 dages inkubation (o-o) blev den immunologiske aktivitet bestemt ved IFN-γ-ΕΙΑ,
Fig. 3 viser stabiliteten af den immunologiske aktivitet af IFN-γ ved pH 7,5 afhængig af natriumphosphatkoncentrationen. 6000 E/ml IFN-γ sattes til opløsninger, som var pufret med forskellige natriumphos-10 phatkoncentrationer og indstillet til pH 7,5. IFN-γ-opløsningerne blev inkuberet i glasampuller i 7 dage ved 37°C. Efter denne inkubation blev den immunologiske aktivitet i IFN^-opløsningerne bestemt ved IFN-γ-ΕΙΑ.
Fig. 4 viser stabiliteten af den immunologiske aktivitet af IFN-γ af-15 hængig af polyphosphatkoncentrationen i opløsningen. 4500 E/ml IFN-γ blev sat til opløsninger, som indeholdt forskellige koncentrationer af kaliumpolyphosphat, pH 7,5. Disse IFN^-opløsninger blev inkuberet i glasampuller i 16 dage ved 37°C. Efter 3 dages (·-fc) og 16 dages inkubation (o-o) blev den immunologiske aktivitet af IFN-γ i de på- 20 gældende opløsninger bestemt ved IFN-γ-ΕΙΑ.
Fig. 5 viser stabiliteten af den immunologiske aktivitet af IFN-γ afhængig af polyphosphatkoncentrationen i nærværelse og fraværelse af natriumphosphat. 8000 E/ml IFN-γ blev sat til opløsninger, der indeholdt forskellige koncentrationer af kaliumpolyphosphat, pH 7,5 25 (o-0). Desuden blev nogle af opløsningerne pufret med 1000 mmol/- liter natriumphosphat, pH 7,5 (·-·). De i denne figur viste IFN-γ- aktiviteter blev målt efter 20 dages inkubation ved 37eC ved IFN-γ-ΕΙΑ.
Fig. 6 viser sammenlignende stabilitetstest med IFN-γ i forskellige 30 opløsningsmidler og ved forskellige temperaturer. 4000 E/ml IFN-γ sattes til hver af 6
DK 163280 B
a) 20 mmol/liter natriumphosphat med 9 g/liter NaCl og 0,25 g/liter thimerosal (natrium-ethylmercurithiosalicylat, fra Fluka), pH 7,5 ( o—Π).
b) 20 mmol/liter natriumphosphat med 9 g/liter NaCl, 5 g/liter BSA
5 og 0,25 g/liter Thimerosal, pH 7,5 (— ), og c) 1000 mmol/liter natriumphosphat, 50 g/liter kaliumpolyphosphat og 0,25 g/liter Thimerosal, pH 7,5 (Δ A, o-6, ·-»).
Disse IFN-7-opløsninger blev inkuberet i glasampuller i 8 dage ved 2-8°C, 22eC og 37°C. Den immunologiske aktivitet af IFN-y blev bestemt 10 med bestemte tidsintervaller ved IFN-7-EIA.
EKSEMPEL 1 1 en første forsøgsrække blev IFN-7-stabiliteten undersøgt i forskellige puffersysterner og ved forskellige pH-værdier. 6000 E/ml IFN-7 blev sat til hver af 0,1 mol/liter natriumacetat, pH 2,0-6,0, 15 natriumphosphat, pH 5,5-8,0 og TRIS/acetat, pH 7,2-9,0 og inkuberet i 2 dage i lukkede glasampuller ved 37°C. IFN-7's immunologiske aktivitet blev bestemt før inkubationen samt 1 og 2 dage efter inkubationen ved IFN-7-EIA. De i fig. 1 viste resultater viser generelt en dårlig stabilitet af den immunologiske aktivitet af IFN-7 i 0,1 mol/liter af 20 de undersøgte puffersystemer. De bedste resultater blev opnået med phosphatpuf fersys ternet.
EKSEMPEL 2
I en yderligere forsøgsrække blev IFN-7-stabiliteten i 500 mmol/liter natriumphosphat afhængig af pH-værdi (4,5-10) undersøgt. 10.000 E/ml 25 IFN-7 blev sat til hver af 500 mmol/liter natriumphosphatpuffer, pH
4,5-10, og inkuberet i glasampuller i 7 dage ved 37°C. Efter 3 og 7 dages inkubation blev den immunologiske aktivitet bestemt ved IFN-7-EIA. Det blev fastslået, at der på den ene side generelt kan opnås en væsentligt forbedret stabilitet ved den forhøjede phosphatkoncentra- 7 υκ loozaoΒ tion, og at IFN-γ på den anden side inden for det undersøgte pH-område på 4,5-10 er mest stabilt ved pH 7,5 (fig. 2). Således kunne man efter 7 dages inkubation ved 37°C med en med 500 mmol/liter natriumphosphatpufret opløsning med en pH på 7,5 endnu genfinde 70% 5 af den oprindelige immunologiske aktivitet af det anvendte IFN-γ.
EKSEMPEL 3 På grund af de overraskende resultater i eksempel 2 blev indvirkningen af natriumphosphatkoncentration ved pH 7,5 på IFN-7-stabiliteten ved en inkubationstemperatur på +37°C undersøgt. 6000 E/ml IFN-γ blev 10 sat til opløsninger, der var pufret med forskellige natriumphosphat-koncentrationer og indstillet til pH 7,5. Disse IFN-7-opløsninger blev inkuberet i glasampuller i 7 dage ved 37°C. Efter denne inkubationstid blev den immunologiske aktivitet i IFN-γ-opløsningerne bestemt ved IFN-γ-ΕΙΑ. Resultaterne, der er vist i fig. 3, bekræfter de 15 i fig. 1 og 2 viste undersøgelsesresultater, og viser en betydelig forbedring af IFN-γ-stabiliteten med tiltagende phosphatkoncentra-tion.
EKSEMPEL 4
Da natriumphosphatkoncentrationen af opløselighedsgrunde ikke væ-20 sentligt kan overstige 1000 mmol/liter (udkrystallisation ved 4eC), blev indvirkningen af polyphosphat på IFN^-stabiliteten ved 37°C undersøgt i en yderligere forsøgsrække. 4500 E/ml IFN-γ blev sat til opløsninger, som indeholdt forskellige koncentrationer af kaliumpo-lyphosphat, pH 7,5. Disse IFN^-opløsninger blev inkuberet i glasam-25 puller i 16 dage ved 37°C. Efter 3 og 16 dage blev den immunologiske aktivitet af IFN-γ i de pågældende opløsninger bestemt ved IFN-γ-ΕΙΑ. Resultaterne (fig. 4) viser en lige så god effekt som ved høje natri-umphosphatkoncentrationer.
Claims (7)
1. Stabiliseret interferonpræparat, kendetegnet ved, at det indeholder en phosphatpuffer, der 30 sikrer en pH-værdi på 6,0-9,0 især en pH-værdi på ca. 7,5, og som har en phosphatkoncentration på 500-1000 mmol/liter, især 1000 mmol/- DK 163280 B liter og/eller en koncentration af polyphosphat på 25-100 g/liter, især 50 g/liter.
2. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at phosphatpuffersysternet indeholder 5 dinatriumhydrogenphosphat og mononatriumhydrogenphosphat.
3. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indeholder kaliumpolyphosphat.
4. Præparat ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at interferonet er et humaninterferon, fx 10 et naturligt eller rekombinant IFN-γ såsom rIFN-γ DO eller rIFN-7 D3.
5. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indeholder rekombinant human IFN-7 D3 i 1000 mmol/liter natriumphosphatpuffer, pH 7,5 og 50 g/liter kaliumpolyphosphat.
6. Fremgangsmåde til fremstilling af et præparat ifølge et hvilket som helst af kravene 1-5, kendetegnet ved, at en interferonopløsning tilsættes phos-phat og/eller polyphosphat i overensstemmelse med krav 1.
7. Anvendelse af et præparat ifølge et hvilket som helst af kravene 20 1-5 til fremstilling af et farmaceutisk præparat til terapi eller profylakse af sygdomme, især til terapi eller profylakse af virusinfektioner, immunregulatoriske anomalier eller neoplasier.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH443385 | 1985-10-15 | ||
| CH443385 | 1985-10-15 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK488586D0 DK488586D0 (da) | 1986-10-13 |
| DK488586A DK488586A (da) | 1987-04-16 |
| DK163280B true DK163280B (da) | 1992-02-17 |
| DK163280C DK163280C (da) | 1992-07-06 |
Family
ID=4276045
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK488586A DK163280C (da) | 1985-10-15 | 1986-10-13 | Stabiliseret interferonpraeparat, fremgangsmaade til dets fremstilling og anvendelse af praeparatet |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0219073B1 (da) |
| JP (1) | JPS6293300A (da) |
| AT (1) | ATE50694T1 (da) |
| AU (1) | AU591525B2 (da) |
| DE (1) | DE3669263D1 (da) |
| DK (1) | DK163280C (da) |
| IL (1) | IL80288A0 (da) |
| NZ (1) | NZ217885A (da) |
| PH (1) | PH22805A (da) |
| ZA (1) | ZA867747B (da) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5318685A (en) * | 1987-08-18 | 1994-06-07 | Cardinal Ig Company | Method of making metal oxide films having barrier properties |
| US5151265A (en) * | 1987-11-03 | 1992-09-29 | Genentech, Inc. | Gamma interferon formulation |
| FR2654343B1 (fr) * | 1989-11-10 | 1994-08-05 | Roussel Uclaf | Utilisation d'un polypeptide ayant l'activite de l'interferon gamma pour la preparation de compositions pharmaceutiques destinees au traitement de cancers primitifs de la plevre. |
| JPH0771459B2 (ja) * | 1991-05-15 | 1995-08-02 | 三協食品工業株式会社 | 機能性食品素材とその製造方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA828580B (en) * | 1981-12-23 | 1983-10-26 | Schering Corp | Interferon formulations |
| JPS6034919A (ja) * | 1983-08-04 | 1985-02-22 | Green Cross Corp:The | ガンマ・インタ−フェロン組成物 |
| JPS61221129A (ja) * | 1985-03-25 | 1986-10-01 | シエリング・コーポレーシヨン | 安定なγ‐インターフエロン製剤 |
-
1986
- 1986-10-10 AT AT86114047T patent/ATE50694T1/de active
- 1986-10-10 NZ NZ217885A patent/NZ217885A/xx unknown
- 1986-10-10 DE DE8686114047T patent/DE3669263D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-10 EP EP86114047A patent/EP0219073B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-10 IL IL80288A patent/IL80288A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-10-13 JP JP61241588A patent/JPS6293300A/ja active Pending
- 1986-10-13 PH PH34356A patent/PH22805A/en unknown
- 1986-10-13 DK DK488586A patent/DK163280C/da active
- 1986-10-13 ZA ZA867747A patent/ZA867747B/xx unknown
- 1986-10-14 AU AU63872/86A patent/AU591525B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3669263D1 (de) | 1990-04-12 |
| AU6387286A (en) | 1987-04-16 |
| ZA867747B (en) | 1988-02-24 |
| EP0219073B1 (de) | 1990-03-07 |
| ATE50694T1 (de) | 1990-03-15 |
| NZ217885A (en) | 1989-06-28 |
| DK488586D0 (da) | 1986-10-13 |
| PH22805A (en) | 1988-12-27 |
| AU591525B2 (en) | 1989-12-07 |
| IL80288A0 (en) | 1987-01-30 |
| EP0219073A2 (de) | 1987-04-22 |
| DK488586A (da) | 1987-04-16 |
| DK163280C (da) | 1992-07-06 |
| EP0219073A3 (en) | 1987-09-23 |
| JPS6293300A (ja) | 1987-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4847079A (en) | Biologically stable interferon compositions comprising thimerosal | |
| Wiley et al. | Evidence from studies with a cross-linking reagent that the haemagglutinin of influenza virus is a trimer | |
| US5236707A (en) | Stabilization of human interferon | |
| Stinson et al. | Comparative studies of pure alkaline phosphatases from five human tissues | |
| US4740498A (en) | Fibronectin preparations | |
| Stewart II et al. | Elimination of size and charge heterogeneities of human leukocyte interferons by chemical cleavage | |
| Horton et al. | Inhibition of bone resorption in vitro by a cartilage-derived anticollagenase factor | |
| KR20040004414A (ko) | 에리트로포이에틴 용액 제제 | |
| Jahngen et al. | Aging and cellular maturation cause changes in ubiquitin-eye lens protein conjugates | |
| Sechoy et al. | F protein-F protein interaction within the Sendai virus identified by native bonding or chemical cross-linking. | |
| DK163280B (da) | Stabiliseret interferonpraeparat, fremgangsmaade til dets fremstilling og anvendelse af praeparatet | |
| Hollingshead et al. | The electrophoretic behaviour of some trypanosomes | |
| CA1337688C (en) | Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants | |
| AU636653B2 (en) | Stabilized leukocyte-interferons | |
| Bajwa et al. | A new method for purification of the thrombin-like enzyme from the venom of the eastern diamondback rattlesnake | |
| KR880002037B1 (ko) | 인터페론 조성물 및 이의 제조방법 | |
| Marie et al. | Endogenous, cyclic 3′-2-5′ AMP-dependent phosphorylation of human red cell pyruvate kinase | |
| BR9303903A (pt) | Fator-4 de plaqueta modificado ou clivado e processo para sua preparaçao, formulaçao farmacêutica, composto e vetor de dna recombinante e célula hospedeira | |
| KR100302935B1 (ko) | 사람혈액응고인자xiii과아프로티닌을포함하는약제학적조성물 | |
| Remold et al. | Two migration inhibitory factors differ in density and susceptibility to neuraminidase and proteinases | |
| EP0179075B1 (en) | Virus risk-reduced hemoglobin and method for making same | |
| JP2001000179A (ja) | ウィルスの不活化方法 | |
| Baig et al. | Plasma membrane components of skin fibroblasts from normal individuals and patients with cystic fibrosis | |
| Jegasothy et al. | Immuno-suppressive lymphocyte factors. I. Purification of inhibitor of DNA synthesis to homogeneity. | |
| Einhorn et al. | In vitro and in vivo effects of interferon on the response of human lymphocytes to mitogens |