DK166823B1 - Purinforbindelser, fremgangsmaade til fremstilling heraf, samt anvendelse af forbindelserne som farmaceutika - Google Patents

Purinforbindelser, fremgangsmaade til fremstilling heraf, samt anvendelse af forbindelserne som farmaceutika Download PDF

Info

Publication number
DK166823B1
DK166823B1 DK595886A DK595886A DK166823B1 DK 166823 B1 DK166823 B1 DK 166823B1 DK 595886 A DK595886 A DK 595886A DK 595886 A DK595886 A DK 595886A DK 166823 B1 DK166823 B1 DK 166823B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
oxy
compound
amino
general formula
purine
Prior art date
Application number
DK595886A
Other languages
English (en)
Other versions
DK595886A (da
DK595886D0 (da
Inventor
Paul Graham Wyatt
Michael Raymond Harnden
Original Assignee
Beecham Group Plc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB858530813A external-priority patent/GB8530813D0/en
Priority claimed from GB868603228A external-priority patent/GB8603228D0/en
Priority claimed from GB868620849A external-priority patent/GB8620849D0/en
Priority claimed from GB868626041A external-priority patent/GB8626041D0/en
Application filed by Beecham Group Plc filed Critical Beecham Group Plc
Publication of DK595886D0 publication Critical patent/DK595886D0/da
Publication of DK595886A publication Critical patent/DK595886A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK166823B1 publication Critical patent/DK166823B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/66—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/90—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/50—Three nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/16—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/18—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 one oxygen and one nitrogen atom, e.g. guanine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Sub-Exchange Stations And Push- Button Telephones (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Jib Cranes (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Nonmetallic Welding Materials (AREA)
  • General Factory Administration (AREA)
  • Compositions Of Oxide Ceramics (AREA)

Description

i DK 166823 B1
Den foreliggende opfindelse angår purinforbindelser, der har antiviral aktivitet, fremgangsmåder til fremstilling deraf og deres anvendelse som farmaceutika.
9-[(2-Hydroxyethoxy)methyl]guanin (acyclovir), 5 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanin (DHPG) og 9-(4-hydroxy- 3-hydroxymethylbut-1-y1)guanin (beskrevet i EP-A-141927) er alle guaninderivater, der har antiviral aktivitet.
En hidtil ukendt, strukturelt forskellig klasse forbindelser er nu 10 blevet udviklet, og disse forbindelser har også antiviral aktivitet.
Den foreliggende opfindelse angår i overensstemmelse hermed en purin-forbindelse med den almene formel I
V N 2 I 1 0 CH-R .
i 1 CH-R , I 2
15 RJ
hvor Rj_ betegner et hydrogenatom eller CH2OH; R2 betegner et hydrogenatom eller (når er et hydrogenatom) en hydroxygruppe eller CH2OH; R3 betegner CH2OH eller (når Rj_ og R2 begge er hydrogenatomer) 20 CH(OH)CH2OH,· R4 betegner et hydrogenatom, en hydroxy- eller aminogruppe eller ORg, hvor
Rg betegner en C^.g-alkyl-, phenyl- eller phenyl-C^_2-alkyl-gruppe, hvor hver af phenyldelene kan være substitueret med ét 25 eller to halogenatomer eller én eller to Cj__4-alkyl- eller C*4-alkoxygrupper, og hvor eventuelle OH-grupper i R^, R2 2 DK 166823 B1 og/eller R3 kan være i form af O-acyl-, phosphat-, cyklisk acetal- eller cyklisk carbonatderivater deraf, hvor O-acylderi-vater omfatter de, hvori en eller flere OH-grupper i Rj_, R2 og/eller R3 danner carboxylestergrupper såsom C-^.y-alkanoyl- og 5 benzoylgrupper, der eventuelt er substitueret med en eller to C-l_4 alkyl, C^_4-alkoxy, halogen eller CF3; phosphatderiater omfatter de, hvor en af de acykliske OH-grupper er erstattet med (HO)2'P02, eller hvori to OH-grupper på nabostillede carbonato-mer er erstattet med en forbindelse 0-P(OH)02-gruppe; cykliske 10 acetalderivater omfatter de, hvor to OH-grupper i R^, R2 og R3 er -0-(Ci_3-alkyl)2-0-; og hvori cyklisk carbonat er -0-C0-0, eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
Følgende grupper af forbindelser er inden for den almene formel I:' a) R^ og R2 er begge hydrogenatomer, og R3 er CH2OH, og derivater 15 deraf, som de er defineret; b) R^ er et hydrogenatom, og R2 og R3 er begge CH2OH, og derivater deraf, som de er defineret; c) Rj_ er et hydrogenatom, R2 er en hydroxygruppe, og R3 er CH2OH, og derivater deraf, som de er defineret; 20 d) R^ er CH2OH, R2 er et hydrogenatom, og R3 er CH2OH, og derivater deraf, som de er defineret; e) Rj_ og R2 er begge hydrogenatomer, og R3 er CH(0H)CH20H, og derivater deraf, som de er defineret.
Eksempler på R5 omfatter methyl-, ethyl-, n- og isopropyl-, phenyl-25 og benzylgrupper, der eventuelt er substitueret med én eller to af methyl, ethyl, n- og isopropyl, methoxy, ethoxy, n- og isopropoxy, fluor, chlor, brom eller CF3.
C arboxyle s ter grupperne er fortrinsvis C^_y-alkanoylgrupper, såsom acetyl-, propionyl-, butyryl-, heptanoyl- og hexanoylgrupper, især 30 acetyl- eller propionylgrupper.
3 DK 166823 B1
Det formodes, at de grupper af forbindelser, der er omfattet af den almene formel I, og som er foretrukne, er de, der tidligere heri er angivet som (a) og (b); og at R4 fortrinsvis er en hydroxygruppe eller et hydrogenatom.
5 Eksempler på farmaceutisk acceptable salte af forbindelsen med den almene formel I er syreadditionssalte, der er dannet med en farmaceutisk acceptabel syre såsom saltsyre, orthophosphorsyre og svovlsyre. Farmaceutisk acceptable salte omfatter også de, der er dannet med organiske baser, fortrinsvis med aminer såsom ethanolaminer eller di-10 aminer; og alkalimetaller såsom natrium og kalium.
Når forbindelsen med den almene formel I indeholder en phosphatgrup-pe, omfatter egnede salte metalsalte såsom aluminiumsalte, alkalimetalsalte såsom natrium- eller kaliumsalte, jordalkalimetalsalte såsom calcium- eller magnesiumsalte, og ammonium- eller substituerede 15 ammoniumsalte, fx med lavere alkylaminer såsom triethylamin, hydroxy-lavere alkylaminer såsom 2-hydroxyethylamin, bis-(2-hydroxy-ethyl)amin eller tris-(2-hydroxyethyl)amin.
Det er klart, at nogle af forbindelserne med den almene formel I har mindst ét asymmetrisk centrum og derfor er i stand til at eksistere i 20 mere end én stereoisomer form. Opfindelsen omfatter hver af disse former i sig selv og blandinger deraf, hvilket omfatter racemater. Isomererne kan adskilles på traditionel vis ved brug af chromatogra-fiske metoder eller under anvendelse af et opspaltningsmiddel. De individuelle isomerer kan alternativt fremstilles ved asymmetrisk 25 syntese under anvendelse af chirale mellemprodukter.
Når R4 betegner en hydroxygruppe i den almene formel I, er det yderligere klart, at forbindelsen eksisterer i den foretrukne tautomere form med den almene formel IA
4 DK 166823 B1 <A„, I N 2
0 IA
CH-R , I 1 CH-R ,
I 2 RJ
Forbindelserne med den almene formel I, herunder deres alkalimetal-5 salte, kan danne solvater såsom hydrater, og disse er omfattet i alle de tilfælde, hvor en forbindelse med den almene formel I eller et salt deraf er omtalt heri.
Det er også klart, at forbindelser med den almene formel I, hvori R4 er forskellig fra en hydroxygruppe, er prodrugs for de forbindelser 10 med den almene formel I, hvori R4 betegner en hydroxygruppe.
Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med den almene formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, hvilken fremgangsmåde omfatter, at en forbindelse med den almene formel II 15 CONH-
«X
i1 ^ N=c-NHY
i s CH-R / I 1 11 CH-R I 2 hvor L betegner en fraspaltelig svovlenhed eller NH2, Y betegner en beskyttelsesgruppe, og R]_' , R2' og R3' betegner henholdsvis Rj_, R2 og 5 DK 166823 B1 R3 eller Rj^, R2 og/eller R3, hvor OH-grupperne er beskyttede, cyc-liseres; hvorefter, når R4 i den ønskede forbindelse med den almene formel I er forskellig fra en hydroxy gruppe, en R4 -hydroxygruppe omdannes til chlor, efterfulgt af enten (i) reduktion til R4 som et hy-5 drogen, (ii) udskiftning af chlor med ΝΗ2» hvilket giver R4 som en aminogruppe; eller (iii) omsætning med OR5'-ionen, hvilket giver R4 som OR5; og Y afbeskyttes, og R^' omdannes til Rj_, R2' til R2 og R3' til R3, når dette er ønsket eller nødvendigt, og at der eventuelt dannes et farmaceutisk acceptabelt salt, et O-acyl-, phosphat-, 10 cyklisk acetal- eller cyklisk carbonatderivat deraf.
Når L er en fraspaltelig svovlenhed, kan cycliseringen finde sted i nærværelse af ammoniak i et inert opløsningsmiddel såsom dimethyl-formamid; eller mere foretrukket under basiske betingelser såsom i 7M natriumhydroxid og dimethylsulfoxid; ved forhøjede temperaturer på 15 80-150°C, fortrinsvis 100-120°C.
Hensigtsmæssige betydninger af L omfatter således alkylthiogrupper såsom methylthio-, ethylthio-, n- og isopropylthiogrupper. L betegner fortrinsvis en methylthiogruppe.
Når L betegner en NH2-gruppe finder reaktionen fortrinsvis sted under 20 svagere basiske betingelser såsom i 1M natriumhydroxid, ved forhøjede temperaturer på 80-150°C, fortrinsvis 100-120eC.
Hensigtsmæssige betydninger af Y omfatter hydrolyserbare NH-beskyt-telsesgrupper såsom benzoylgrupper, der eventuelt er substituerede, som det tidligere er beskrevet heri for R5, når R5 betegner en phen-25 ylgruppe. Y betegner fortrinsvis en benzoylgruppe.
Omdannelse af en R4-hydroxygruppe til chlor kan udføres ved chlore-ring under anvendelse af et reagens såsom phosphoroxychlorid, fortrinsvis i nærværelse af tetraethylammoniumchlorid og dimethylanilin (som syreacceptor) i CH3CN ved tilbagesvalingstemperaturer, ifølge 30 den fremgangsmåde, der er beskrevet af M.J. Robins og B. Uzanski,
Can. J. Chem. 59, 2601(1981), 6 DK 166823 B1
Reduktion af en resulterende chlorforbindelse kan fortrinsvis udføres under anvendelse af katalytiske metoder såsom palladium på trækul i et inert opløsningsmiddel såsom methanol eller ethanol ved tilbagesvalingstemperaturer. Hydrogenkilden kan være cyclohexen eller ammo-5 niumformiat. Fremgangsmåden er analog med den, der er beskrevet i eksempel 1 i EP-A-182024, eller med den, der er beskrevet af T.A. Kre-nitsky et al., Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A. 81, 3209 (1984).
Omdannelse til R4, når R4 betegner en aminogruppe, kan udføres på traditionel vis ved behandling med ammoniak i methanol i en autoklav 10 ved 100°C i et tidsrum på omkring 7 timer, eller alternativt med na-triumazid i dimethylformamid til dannelse af et azido-mellemprodukt (hvor R4 betegner N3) , efterfulgt af reduktion af dette mellemprodukt med ammoniumformiat/palladium på trækul i methanol.
Omsætning af den resulterende chlorforbindelse med OR5· kan udføres 15 under anvendelse af fortrinsvis NaOR5 i et egnet opløsningsmiddel såsom methanol eller ethanol, når R5 betegner henholdsvis en methyl-eller ethylgruppe, ved 0-150eC, fortrinsvis omkring 50°C. Fremgangsmåden er analog med den, der er beskrevet i eksempel 15 i EP-A-141927.
20 Afbeskyttelse af Y kan finde sted ved traditionel basisk hydrolyse såsom i vandigt natriumhydroxid ved 100°C.
Når Rj_', K-2' °g/eller betegner beskyttede 0H-grupper, kan den eller de beskyttende grupper ofte hydrogenolyseres, såsom en benzyl-gruppe, der eventuelt er substitueret som ovenfor angivet for R5, når 25 R5 betegner en phenylgruppe, hvilket også omfatter nitro som en eventuel substituent.
Fjernelse af benzylbeskyttelsesgrupper kan udføres på traditionel vis ved katalytisk hydrogenering under anvendelse af palladium på trækul som katalysator (når R4 er forskellig fra et hydrogenatom) .
30 Andre egnede beskyttelsesgrupper omfatter substituerede benzylgrupper såsom p-methoxybenzylgrupper, der kan fjernes ved behandling med DDQ, der er anvendt i eksempel 8 nedenfor.
7 DK 166823 B1
Andre egnede beskyttelsesgrupper er tert.butyldimethylsilylgruppen, der kan fjernes med 80% eddikesyre ved forhøjede temperaturer på omkring 90°C eller ved behandling med tetrabutylammoniumfluorid i et opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran ved omgivelsestemperatur.
5 En anden egnet beskyttelsesgruppe er én, hvori to OH-grupper eller carbonatomer, der sidder a- eller β- i forhold til hinanden, omsættes med 2,2-dimethoxypropan, hvorved der henholdsvis dannes en 1,3-dioxo-lan- eller 1,3-dioxanring. Denne gruppe kan fjernes ved sur hydrolyse .
10 Alternative betydninger af R£' og Rj’, når de er beskyttede OH-grup-per, omfatter de, hvori to OH-grupper på nabostillede carbonatomer erstattes af en binding; fx når R^ betegner et hydrogenatom, R£ betegner en hydroxygruppe, og R3 betegner CH2OH; Rj’CIffi^’CHR^O- betegner GHtø^CH-CS^-O-. Dioldannelsen ("afbeskyttelsen") kan opnås på tra- 15 ditionel vis, fx under anvendelse af osmiumtetraoxid, fortrinsvis katalytisk i nærværelsen af N-methylmorpholin-N-oxid.
Farmaceutisk acceptable salte, O-acylderivater og phosphatderivater kan fremstilles på traditionel vis, fx som det er beskrevet i EP-A-141927 og EP-A-182024.
20 Acylderivater af forbindelser med den almene formel I kan fremstilles ved acylering af en eventuelt beskyttet forbindelse med den almene formel I i overensstemmelse med traditionelle acyleringsfremgangsmåder, der kendes inden for dette område, og, hvor det er nødvendigt, afbeskyttelse af det resulterende produkt.
25 Acyleringsreaktionen kan udføres under anvendelse af et acylerings-middel, der indeholder en egnet carboxylsyreacylgruppe.
Eksempler på acyleringsmidler, der er egnede til den ovenfor angivne fremgangsmåde, er carboxylsyrer, syrehalogenider såsom chlorider eller syreanhydrider, fortrinsvis anhydrider eller syrer.
8 DK 166823 B1
Hvis acyleringsmidlet er en carboxylsyre, bør et kondensationsfremmende middel såsom dicyclohexylcarbodiimid indbefattes, men dette er ikke nødvendigt, når acyleringsmidlet er et syreanhydrid.
Acyleringsreaktionen kan fremstille et enkelt acylderivat af en for-5 bindelse med den almene formel I eller en blanding af derivater, hvilket afhænger af et antal faktorer såsom de relative mængder og den kemiske beskaffenhed af reaktanterne, de fysiske betingelser for reaktionen og opløsningsmiddelsystemet. Enhver blanding, der er fremstillet på denne måde, kan adskilles i sine rene bestanddele under 10 anvendelse af standardchromatografiske teknikker.
Den ovenfor beskrevne acy lerings fremgangsmåde ifølge opfindelsen kan give mono-, di- eller triacylerede derivater af forbindelser med den almene formel I i overensstemmelse med den form for beskyttelse/af-beskyttelse, der er anvendt. Det følgende er eksempler på produkter, 15 der er opnået ved forskellige metoder: a) Acylerede derivater af OH-grupperne i R^/R^/E^, når hver af acylgrupperne er den samme gruppe, kan opnås ved direkte acyler ing af forbindelser med den almene formel I.
b) Mono-acylerede derivater af én OH-gruppe, når Rj_, R2 og R3 til 20 sammen indeholder mere end én OH-gruppe, kan opnås ved acylering af beskyttede mellemprodukter af forbindelser med den almene formel I, i hvilke den eller de andre OH-grupper i R1/R2/R3 begge er beskyttede af fx monomethoxytrityl- eller tritylgrupper, og efterfølgende afbeskyttelse ved behandling med syre. Di- eller tri-25 acylerede derivater, hvori acylgrupperne er forskellige, kan derefter fremstilles som i a).
Acylderivater af forbindelser med den almene formel I kan omdannes til en forbindelse med den almene formel I ved traditionelle deacy-lerings- eller partielle deacy lerings fremgangsmåder. Fx kan omsætning 30 med methanolisk ammoniak anvendes til at bevirke fuldstændig deacy-lering, hvilket giver en forbindelse med den almene formel I, hvor alle OH-grupper er deacylerede. Omsætning med en mild base såsom kaliumcarbonat kan resultere i partiel deacylering af et di- eller 9 DK 166823 B1 tri-acyleret derivat, hvilket fremstiller en forbindelse med den almene formel I, hvori kun én acylgruppe er til stede.
Phosphatderivater dannes ved omsætning med et phosphoryleringsmiddel såsom phosphoroxychlorid i pyridin. NH2'GruPPen °S eventuelle 0H-5 grupper i R|, K.2 og/eller R3 er beskyttede efter ønske eller behov, fortrinsvis under anvendelse af en trityl- eller methoxytrityl-beskyttelsesgruppe, der kan fjernes ved syrehydrolyse under anvendelse af eddikesyre.
Når mere end én OH-gruppe i R|, R2 og R3 er phosphoryleret, fremstil-10 les et cyklisk phosphatderivat med phosphoroxychlorid, når OH-grup-perne sidder a eller β i forhold til hinanden.
Et andet egnet phosphoryleringsmiddel er cyanoethylphosphorsyre, for hvilket det gælder, at produktet normalt behandles med vandig ammoniak, hvilket giver ammoniumsaltet af phosphatesteren som slutprodukt.
15 Et monophosphat kan omdannes til et cyklisk phosphat under anvendelse af et dehydratiseringsmiddel såsom dicyclohexyl-carbodiimid.
Cykliske acetalderivater af forbindelserne med den almene formel I kan fremstilles ud fra forbindelsen med den almene formel I, hvori to OH-grupper er til stede i sidekæden, fortrinsvis placeret β i forhold 20 til hinanden, under anvendelse af en acyklisk acetal såsom -Rj_Q0-C-(Ci-3-alkyl)2'ORio, hvori R^q betegner en C^.^-alkylgruppe såsom en methyl- eller ethylgruppe. Reaktionen udføres fortrinsvis i et inert opløsningsmiddel såsom tetrahydrofuran eller dimethylformamid i nærværelse af en syre såsom p-toluensulfonsyre.
25 Cykliske carbonatderivater af forbindelserne med den almene formel I kan fremstilles ud fra forbindelsen med den almene formel I, hvori -NH2'gruppen fortrinsvis er beskyttet; med phosgen eller 1,1-carbon-yldiimidazol og derefter afbeskyttelse, hvor det er nødvendigt. Egnede beskyttelsesgrupper omfatter trityl- og monomethoxytritylgrup-30 per. Reaktionen udføres fortrinsvis i tør pyridin ved 0-50°C, fortrinsvis ved omgivelsestemperatur.
10 DK 166823 B1
Det er klart, at omdannelser af R^, afbeskyttelse og dannelse af derivater kan finde sted i en hvilken som helst ønsket eller nødvendig rækkefølge.
Forbindelser med den almene formel II kan fremstilles ifølge neden-5 stående reaktionsskema:
Reaktionsskema 1 “rO j.
---> III o "Λ·!2° „ eller o ch3nhnh2 0^2 OCH=N O w V || i)HCl ii) )—\
y NC
, x , I m2 \-- R-jCHR- CHR, O trv \ vrufnru % 3 2 12 3 .2 1 y· eller (CH^) (OCH^) 2 ii) H2NC0CHCNNH2.HC1 ,iv
PhXNCS iii)BF3.(C2H5)20
V O O
” " </ ^r-N3J1 > ΐ HKNHCPh F^liONfflPh P./CHR/CHRf ° s 5 R^CHH/CHRi'0 ^ nh3 (2% i DM50) -1 <x I N=C-iCDPh
R/CHR2'CHRi 0 I H
NH2 11 DK 166823 B1
Alk betegner en alkylgruppe såsom methyl.
Disse fremgangsmåder er detaljeret beskrevet i beskrivelserne 1 og 6, der følger herefter.
Forbindelserne med den almene formel III er kendte eller fremstilles 5 ved fremgangsmåder, der er analoge med dem, der anvendes til fremstillingen af strukturelt lignende kendte forbindelser.
Mellemproduktet med den almene formel II er hidtil ukendt og udgør et aspekt af den foreliggende opfindelse.
Mellemprodukter med den almene formel IV, der er forskellige fra dem, 10 hvori to OH-grupper på nabostillede carbonatomer er erstattet af en binding, formodes at være hidtil ukendte.
Opfindelsen angår en yderligere (foretrukken) fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med den almene formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, hvilken fremgangsmåde omfatter omdannel-15 se af chlorfunktionen i en forbindelse med den almene formel VI
Cl ¢6 I 6 0 VI CH-R / 1 1 CH-R I 2
V
hvor Rg betegner et hydrogenatom eller en N-beskyttelsesgruppe såsom 20 en _7-alkanoylgruppe, og , R2’ og R3' har samme betydning som tidligere defineret heri, ved enten (i) hydrolyse til dannelse af R4 som en hydroxygruppe, (ii) reduktion til dannelse af en forbindelse med den almene formel I, hvori R4 betegner et hydrogenatom, (ii i) udskiftning af chloratomet med NH2 til dannelse af R4, hvor R4 beteg- 12 DK 166823 B1 ner en aminogruppe; eller (iv) omsætning med OR5· til dannelse af en forbindelse med den almene formel I, hvori R4 betegner OR5, og derefter omdannelse af Rj_* til R^, R2’ til R2 og/eller R3' til R3, hvor det er nødvendigt, og/eller eventuelt dannelse af et farmaceutisk 5 acceptabelt salt eller derivat deraf, således som det er defineret.
Hydrolysen (i) kan udføres under anvendelse af en vandig mineralsyre såsom saltsyre, eller mere foretrukket under anvendelse af en organisk syre såsom myresyre ved forhøjet temperatur, hensigtsmæssigt 70-150°C, fortrinsvis 100°C.
10 Reaktionerne (ii) , (iii) og (iv) ovenfor kan udføres, som det tidligere er beskrevet heri for henholdsvis (i), (ii) og (iii) under fremgangsmåden, hvor en forbindelse med den almene formel II anvendes.
Egnede betydninger for beskyttede OH-grupper i R/, R2' og R3' og fremgangsmåder til afbeskyttelse af grupperne i R/, R2’ og R3' og 15 fremgangsmåder til afbeskyttelse og dannelse af salte og derivater er også beskrevet under fremgangsmåden, hvor en forbindelse med den almene formel II anvendes.
Forbindelser med den almene formel VI kan fremstilles ved chlorering af den tilsvarende forbindelse med den almene formel I, hvori R4 20 betegner en hydroxygruppe, eller mere foretrukket ud fra forbindelsen med den almene formel VII
25 hvori Rg betegner en formylgruppe; ved omsætning med forbindelsen med den almene formel IV, som den tidligere er beskrevet heri, efterfulgt af cyclisering af den resulterende forbindelse med den almene formel VIII
13 DK 166823 B1 cl . R^An P A vni
R^CHR^CHR'aH ^ N
hvori Rg betegner en formylgruppe; enten med et egnet cycliserings-5 kondenserende middel såsom diethoxymethylacetat eller triethylortho-formiat eller ved fusion. Egnede betingelser for disse reaktioner omfatter de, der er beskrevet herefter i beskrivelserne 2-5.
Forbindelsen med den almene formel VII, hvori Rg betegner en for-mylgruppe, kan fremstilles ved omsætning af den tilsvarende forbin-10 delse med den almene formel VII, hvori Rg betegner et hydrogenatom, med myresyre og eddikesyreanhydrid.
Forbindelsen med den almene formel VII, hvori Rg betegner et hydrogenatom, 2,5-diamino-4,6-dichlorpyrimidin, er en kendt forbindelse, som er beskrevet af C. Temple, Jr. B.H. Smith og J.A. Montgomery, J.
15 Org. Chem., AO (21), 3141, 1975.
Forbindelser med den almene formel VI er hidtil ukendte.
En forbindelse med den almene formel I, kan også fremstilles ved, at en anden forbindelse med den almene formel I, hvori OH-grupper i Rj_, R-2 og/eller R3 er til stede i beskyttet form, afbeskyttes.
20 Foretrukne fremgangsmåder til afbeskyttelse, således som det er beskrevet tidligere heri, er hydrogenering af benzylbeskyttelsesgrupper (når R4 er forskellig fra et hydrogenatom), DDQ-fjernelse af p-meth-oxybenzylbeskyttelsesgrupper, fjernelse af tert.butyldimethylsilyl-gruppen og (hvor det er passende) oxidation af en forbindelse, hvori 25 OH-grupper på nabostillede carbonatomer er erstattet af en binding.
Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse er nyttige til behandling af infektioner, der skyldes vira, specielt herpesvira såsom 14 DK 166823 B1 herpes simplex type 1, herpes simplex type 2; varicella zoster-vira; og også lentivira såsom visnavirus og human immundefektvirus.
Forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse kan udformes til anvendelse i et farmaceutisk præparat. Et yderligere aspekt af den fo-5 religgende opfindelse angår i overensstemmelse hermed et farmaceutisk præparat, der omfatter en forbindelse med den almene formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer eller excipiens.
Et præparat til indgift ad oral vej til mennesker kan sammensættes i 10 form af en sirup, en tablet eller en kapsel. Når præparatet er i form af en tablet, kan en hvilken som helst farmaceutisk bærer, der er egnet til formulering af sådanne faste præparater, anvendes, fx magnesiums tearat, stivelse, lactose, glucose, ris, mel og kridt. Præparatet kan også være i form af en kapsel, der fx er af gelatine, og som 15 kan siuges, hvilken indeholder forbindelsen, eller i form af en sirup, en opløsning eller en suspension. Egnede flydende farmaceutiske bærere omfatter ethylalkohol, glycerol, salt og vand, til hvilke aroma- eller farvestoffer kan sættes til dannelse af sirupper. Forbindelserne kan også fremstilles med en steril flydende bærer til 20 injektion.
Præparatet kan også udformes til topisk påføring på huden eller i øjnene. Til topisk påføring på huden kan præparatet være i form af en creme, lotion eller salve. Disse formuleringer kan være traditionelle formuleringer, som de kendes inden for området, fx som beskrevet i 25 standardbøger om lægemidler og kosmetika såsom Harry’s Cosmeticology udgivet af Leonard Hill Books og the British Pharmacopoeia.
Præparatet til påføring i øjnene kan være et traditionelt øjendråbe-præparat, som det er kendt inden for området, eller et salvepræparat.
Præparatet ifølge opfindelsen er fortrinsvis i enhedsdosisform eller 30 i en anden form til indgift i en enkelt dosis. En egnet dosisenhed kan indeholde fra 50 mg til 1 g af den aktive bestanddel, fx 100-500 mg.
DK 166823 Bl 15 Sådanne doser kan indgives i-4 gange pr. dag eller mere normalt 2 eller 3 gange pr. dag. Den effektive dosis af forbindelsen vil generelt være i størrelsesordenen 1,0-20 mg/kg legemsvægt pr. dag eller mere normalt 2,0-10 mg/kg pr. dag.
5 Ingen toxikologiske virkninger er påvist ved de ovenfor beskrevne dosisniveauer.
Opfindelsen angår også en forbindelse med den almene formel I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til anvendelse som terapeutisk aktivstof, specielt til behandling af virusinfektioner.
10 Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse udviser også en synergistisk antiviral virkning sammen med interferoner, og kombinationsprodukter, der omfatter disse to komponenter til sekventiel eller samtidig indgift ad de samme eller forskellige veje, ligger derfor inden for den foreliggende opfindelses omfang.
15 De følgende eksempler illustrerer opfindelsen. De følgende beskrivelser illustrerer fremstillingen af mellemprodukter. Mellemprodukterne ifølge beskrivelserne 10(f), 11 og 12 er også eksempler på'aktive forbindelser ifølge opfindelsen.
BESKRIVELSE 1 20 (Mellemprodukter til eksempel 1, fremgangsmåde A) a) N-(3-Benzyloxyprop-l-oxy)phthalimid
Diethylazodicarboxylat (15,6 ml, 99,4 mmol) blev sat til en opløsning af 3-benzyloxy-l-propanol (15 g, 90,4 mmol), N-hydroxyphthalimid (14,7 g, 90,1 mmol) og triphenylphosphin (23,7 g, 90,4 mmol) i tetra-25 hydrofuran (450 ml). Efter 16 timer ved 20°C blev opløsningsmidlet fjernet under nedsat tryk, og remanensen blev chromatograferet på silicagel (elueret med hexan:acetone, 3:1), hvilket gav titelforbindelsen i form af en gul olie (27,8 g, 99%).
16 DK 166823 B1 ^H-NMR-Spektrum (CDCI3): S (ppm) = 2,05 (2H, kvintet, J=6Hz, CH2Cff2CH2), 3,70 (2H, t, J=6Hz, Cff20CH2Ph), 4,35 (2H, t, J=6Hz, CH20K), 4,50 (2H, s, CH2?h), 7,35 (5H, s, CH2Pii), 7,85 (4H, s, phtha-limidprotoner).
5 b) 3-Benzyloxyprop-l-oxyamin-hydrochlorid
En opløsning af N-(3-benzyloxyprop-l-oxy)phthalimid (27 g, 86,8 mmol) og hydrazinhydrat (4,2 ml, 86,8 mmol) i ethanol (200 ml) blev opvarmet til refluxtemperatur i 1 time, afkølet og derefter sat til en 3% natriumcarbonatopløsning (500 ml). Den vandige opløsning blev ekstra-10 heret med ether, de kombinerede ether ekstrakter blev tørret (magnesiumsulfat) og inddampet til dannelse af en sirup. Etherisk hydro-genchlorid blev tilsat, og det hvide faste stof, der blev opnået, blev skilt fra ved filtrering, vasket med ether og tørret, hvilket gav titelforbindelsen (15,2 g, 81%).
15 1H-NMR-Spektrum [(CD3)2S0]: S (ppm) = 1,80 (2H, kvintet, J=6Hz, CH2OT2CH2), 3,50 (2H, t, J=6Hz, CT20CH2Ph), 4,10 (2H, t, J=6Hz, CJi2ON), 4,40 (2H, s, Cff2Ph), 7,30 (5H, s, Ar), 11,20 (3H, bred s, NH3+) .
c) 5 -Amino-1-(3 -benzyloxyprop-1 -oxy) -4-carboxamidoimidazol 20 En blanding af 3-benzyloxyprop-1 -oxyamin-hydrochlorid (11,1 g, 51,0 mmol), ethyl-N-(carbamoylcyano)methylformimidat (8,8 g, 70,3 mmol), ether (300 ml) og methanol (200 ml) blev omrørt ved 20°C i 24 timer. Etheren blev fjernet under nedsat tryk, og den methanoliske opløsning blev kogt under reflux i 16 timer. Remanensen, der blev opnået ved 25 fjernelse af methanolen, blev chromatograferet på silicagel (elueret med chloroform og derefter chloroform/ethanol, 19:1). Omkrystallisation af acetone-petroleumsether (kogepunkt 60-80°C) gav titelforbindelsen (2,2 g, 15%), smeltepunkt 139-141°C.
UV-Spektrum (EtOH): Amav = 264 (e 13.400) nm.
30 IR-Spektrum: i/mgy - 3380, 3330, 3270, 3210, 3100, 1670, 1635, 1555, 1495, 1465 og 1420 cm"1.
17 DK 166823 B1 ^H-NMR-Spektrum [(CD3)2SOJ): 5 (ppm) = 1,98 (2H, kvintet, J=6,3 og 6,6Hz, CH2CT2CH2), 3,59 (2H, t, J=6,3Hz, C#2OCH2Ph), 4,22 (2H, t, J=6,6Hz, CH2ON), 4,49 (2H, s, C#2Ph), 5,81 (2H, bred s, CNH2)> 6.71 (2H, bred s, CONH2), 7,34 (6H, m, Ph, H-2).
5 Analyse:
Beregnet for Cj^H^gN^Oø: C 57,91 H 6,26 N 19,30; m/e 290,1379.
Fundet: C 58,02 H 6,31 N 19,33; m/e 290,1378.
d) 5-(Ν' -Benzoylthiocarbamoyl)amino-1-(3-benzyloxy-prop-l-oxy) -imi daz o1-4-carboxamid 10 Benzoylisothiocyanat (1,0 ml, 7,6 mmol) i acetone (100 ml) blev sat til en opløsning af 5-amino-l-(3-benzyloxyprop-l-oxy)imidazol-4-car-boxamid (2,0 g, 6,9 mmol) i varm acetone (200 ml). Opløsningen blev kogt under tilbagesvaling i 6 timer, afkølet og inddampet under reduceret tryk og remanensen chromatograferet på silicagel (elueret 15 med chloroform og derefter chloroform-ethanol, 30:1), hvilket gav titelforbindelsen (3,0 g, 96%).
IR-Spektrum (KBr): i/max = 3470, 3300, 3130, 1670, 1610, 1535 og 1495 cm" •*-H-NMR-Spektrum [(CDg^SO): δ (ppm) = 1,93 (2H, kvintet, J=6,3Hz, 20 CH2OT2CH2), 3,54 (2H, t, J=6,3Hz, OT2OCH2Ph), 4,39 (4H, m, C#20N, CH2Ph), 7,12 (IH, CON#), 7,25 (6H, m, PhCH2, CON#), 7,54 (2H, t, 2 protoner af PhCO), 7,68 (IH, t, 1 proton af PhCO), 8,10 (3H, m, H-2, 2 protoner af PhCO), 11,95 (2H, bred s, 2 x NH).
e) 5- (Ν' -Benzoyl-S-methylthiocarbamoyl)amino-l- (3-benzyloxyprop-1-25 oxy)imidazol-4-carboxamid
En blanding af 5 - (N' -benzoylthiocarbamoyl) amino-1-(3 -benzyloxyprop -1--oxy)imidazol-4-carboxamid (2,9 g, 6,4 mmol), 0,1N natriumhydroxidopløsning (100 ml) og methyliodid (0,64 ml, 10,3 mmol) blev omrørt ved 20°C i 16 timer, og opløsningen blev derefter indstillet til pH 5 30 med iseddike. Efter flere ekstraktioner med chloroform blev de kombinerede ekstrakter tørret (magnesiumsulfat) og inddampet til en si- DK 166823 B1 18 rup. Søjlechromatografi på silicagel (elueret med chloroform-ethanol, 30:1) gav titelforbindelsen (2,7 g, 88,7%).
IR-Spektrum (KBr): vmax = 3460, 3300, 3200, 3160, 1675, 1650, 1635, 1595, 1540, 1520, 1490 og 1415 cm-1.
5 1H-NMR-Spektrum f(CD3)2SO]: S (ppm) = 2,10 (2H, kvintet, J=6,3Hz, CH2Cff2CH2), 2.50 (3H, s, SCH3), 3,70 (2H, t, J=6,3Hz, Cff2OCH2Ph), 4,40 (2H, t, J=6,3Hz, CH20N), 4,55 (2H, s, rø2Ph), 7,50 (11H, CH2Ph, 3 protoner af COPh, H-2, C0NH2), 8,00 (2H, m, 2 protoner af COPh), 11,75 (IH, bred s, HN-C=N).
10 f) 9-(3-Benzyloxyprop-1-oxy)guanin 5- (Ν’ -Benzoyl-S-methylthiocarbamoyl)amino-l- (3-benzyloxyprop-l-oxy) -imidazol-4-carboxamid (0,76 g, 1,63 mmol) blev behandlet med 2% ammoniak i dimethylformamid (35 ml) ved 120eC i en stålbombe i 6 timer. Opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk, hvilket gav en 15 sirup, som derefter blev opløst i IN natriumhydroxid og opvarmet til 1008C i 3 timer. Den afkølede reaktionsblanding blev gjort sur med koncentreret saltsyre til pH 5. Det bundfald, der blev opnået, blev opsamlet, vasket med flere portioner ether og omkrystalliseret af vandig methanol, hvilket gav 9-(3-benzyloxyprop-l-oxy)guanin som 20 hvide krystaller (120 mg, 25%).
IR-Spektrum (KBr): i/max = 3340, 3180, 2680, 1695, 1640, 1595 og 1475 cm"1.
l-H-NMR-Spektrum [ (CD3)2S0]: S (ppm) - 1,93 (2H, kvintet, J=6,3 og 6,6Hz, CH2OT2CH2), 3,58 (2H, t, J=6,3Hz, Cff2OCH2Ph), 4,33 (2H, t, 25 J=6,6Hz, CH2ON), 4,48 (2H, s, Ctf2Ph), 6,61 (2H, bred s, NH2), 7,33 (5H, m, Ar), 7,91 (IH, s, H-8), 10,67 (IH, bred s, H-l).
Analyse:
Beregnet for C15H17N503: C 57,12 H 5,44 N 22,21.
Fundet: C 57,08 H 5,41 N 22,25.
(Mellemprodukter til eksempel 1, fremgangsmåde B og eksemplerne 2-4) BESKRIVELSE 2 19 DK 166823 B1 a) 4,6-Dichlor-2,5-diformamidopyrimidin
Eddikesyreanhydrid (40 ml) blev i løbet af 10 minutter dråbevis sat 5 til en blanding af 2,5-diamino-4,6-dichlorpyrimidin (8,0 g, 44,7 mmol) og myresyre (100 ml) ved 0eC. Blandingen blev omrørt ved 20°C i 4 timer, inddampet til tørhed og co-inddampet med toluen. Størkning fra acetone-hexan gav titelforbindelsen (6,1 g, 60%).
IR-Spektrum (KBr): vmax = 3230, 1715, 1680, 1575, 1550, 1485 og 1415 10 cm"
Analyse:
Beregnet for C6H4N4O2CI2: 233,9709 m/e.
Fundet: 233,9695 m/e.
b) 6-(3-Benzyloxyprop-l-oxyamino)-4-chlor-2,5-diformamidopyrimidin 15 En blanding af 4,6-dichlor-2,5-diformamidopyrimidin (5,4 g, 23,0 mmol), 3-benzyloxyprop-l-oxyamin (4,14 g, 23,0 mmol), triethylamin (10 ml) og dioxan (50 ml) blev omrørt ved refluxtemperatur i 3 timer, afkølet, filtreret og inddampet til tørhed. Søjlechromatografi på silicagel (elueret med chloroform-ethanol, 25:1) gav titelforbindel-20 sen (4,38 g, 50%).
IR-Spektrum (KBr): t/mav = 3248, 1692, 1589, 1570, 1473 og 1420 cm-*·.
^H-NMR-Spektrum [(¢03)280]: S (ppm) =1,88 (2H, kvintet, J=6,3Hz, CH2CH2CH2)> 3>57 (2H> t, J=6,3Hz, Cff2OCH2ph), 3,95 (2H, t, 6,3Hz, CH20m), 4,47 (2H, s, Cff2Ph), 7,32 (5H, m, Ph), 8,14 (IH, s, CiiONH), 25 9,26 (IH, s, CffONH), 9,42 (IH, bred s, D20 udskiftelig, røOCH2), 10,83 (2H, bred s, 2 x WHCHO).
20 DK 166823 B1 c) 9-(3-Benzyloxyprop-l-oxy)-6-chlor-2-formamidopurin 6-(3-Benzyloxyprop-l-oxyamino) -4-chlor-2,5-diformamidopyrimidin (4,3 g, 11,3 mmol) i diethoxymethylacetat (40 ml) blev opvarmet til 120“C i 2,5 timer. Blandingen blev derefter afkølet og inddampet til 5 en sirup. Remanensen blev opløst i methanol (40 ml) og koncentreret vandig ammoniak (5 ml). Opløsningen blev derefter omrørt i 30 minutter ved 20°G og inddampet under reduceret tryk, og remanensen blev co-inddampet med methanol. Søjlechromatografi på silicagel (elueret med chloroform-methanol, 50:1) gav· titelforbindelsen (3,93 g, 95%).
10 IR-Spektrum (KBr): i/max = 3120, 3080, 1700, 1615, 1580, 1500 og 1435 cm"^.
%-NMR-Spektrum (CDCI3): S (ppm) - 2,15 (2H, kvintet, J=6Hz, CH2(7ff2CH2), 3·75 (2H> t« J=6Hz, Ctf2OCH2Ph), 4,55 (4H, m, CH20N, CT2Ph), 7,40 (5H, m, Ph), 8,10 (IH, s, H-8), 8,40 (IH, d, J-10Hz, D20 15 udskiftelig, OTCHO), 9,60 (IH, d, J=10Hz, NHCffO).
d) 2-Amino-9-(3-benzyloxyprop-l-oxy)-6-ethoxypurin
En opløsning af 9-(3-benzyloxyprop-l-oxy)-6-chlor-2-formamidopurin (500 mg, 1,38 mmol) i 0,4M natriumethoxid i ethanol (10 ml) blev opvarmet til 80“C i 2,5 timer. Blandingen blev derefter afkølet og ind-20 dampet under reduceret tryk. Remanensen blev opløst i vand (20 ml) , og opløsningen blev indstillet til pH 7 med fortyndet saltsyre. Den vandige opløsning blev ekstraheret med chloroform (2 x 20 ml) , og de kombinerede ekstrakter blev vasket med vand (10 ml), tørret (magnesiumsulfat) og inddampet under reduceret tryk. Søjlechromatografi 25 på silicagel (elueret med chloroform-ethanol, 50:1) gav titelforbindelsen (390 mg, 81%).
IR-Spektrum (KBr): t/maY = 3353, 3217, 1652, 1611, 1579, 1506, 1461, 1445 og 1407 cnT^.
^-NMR-Spektrum [(CD3)2SOJ): δ (ppm) = 1,35 (3H, t, J=7,2Hz, 30 OT3CH20), 1,95 (2H, kvintet, J=6,3 og 6,6Hz, 0¾0¾0¾), 3,60 (2H’ z> 6,3Hz), 4,37 (2H, t, J=6,6Hz, CH20N), 4,42 (2H, kvartet, J=7,2Hz, 21 DK 166823 B1 CR2CH2O), 4,48 (2H, s, Cff2Ph), 6,55 (2H, bred s, D2O udskiftelig, NH2), 7,33 (5H, m, Ph), 8,07 (IH, s, H-8).
BESKRIVELSE 3 (Mellemprodukter til eksempel 5) 5 a) 6-(3-Benzyloxy-2-benzyloxymethylprop-l-oxyamino)-4-chlor-2,5-diformamidopyrimidin
En blanding af 4,6-dichlor-2,5-diformamidopyrimidin (fra beskrivelse la) (3,3 g, 14,0 mmol), 3-benzyloxy-2-benzyloxymethylprop-l-oxyamin (4,2 g, 14,0 mmol), triethylamin (5,8 ml, 41,6 mmol) og dioxan (100 10 ml) blev omrørt ved 100“C i 2,5 timer. Den afkølede reaktionsblanding blev filtreret, og bundfaldet blev opsamlet og vasket med dioxan (2 x 25 ml). Filtratet og vaskefaserae blev kombineret og inddampet til en sirup. Søjlechromatografi på silicagel (elueret med chloroform-ethanol, 50:1) gav titelforbindelsen (4,9 g, 70%).
15 IR-Spektrum (KBr): umax = 3240, 2910, 2860, 1690, 1585, 1565, 1475 og 1420 cm"^-.
%-NMR-Spektrum [(CDg^SO]: δ (ppm) = 2,29 (IH, kvintet, J=6,0 og 5,6 Hz, CH), 3,56 (4H, d, J=5,6Hz, 2 x Ctf2OCH2Ph), 3,94 (2H, d, J=6,0Hz, CH20N), 4,46 (4H, s, 2 x OT2Ph), 7,30 (10H, m, 2 x Ph), 9,28 (IH, 20 bred s, NCHO), 9,42 (IH, bred s, NCHO), 10,86 (2H, bred s, D20 udskiftelig, 2 x røCHO).
b) 9-(3-Benzyloxy-2-benzyloxymethylprop-l-oxy)-6-chlor-2-formamido-purin 6-(3-Benzyloxy-2-benzyloxymethylprop-1-oxyamino)-4-chlor-2,5 -diform-25 amidopyrimidin (4,8 g, 9,6 mmol) og diethoxymethylacetat (50 ml) blev omrørt ved 120°C i 1,5 time, afkølet og inddampet under reduceret tryk. Remanensen i methanol (80 ml) og koncentreret ammoniakopløsning (2 ml) blev omrørt ved 20°C i 30 minutter, opløsningsmidlet fjernet under reduceret tryk og remanensen co-inddampet med methanol. Søjle- 22 DK 166823 B1 chromatografi på silicagel (elueret med chloroform og derefter chloroform- ethanol, 50:1) gav titelforbindelsen (4,11 g, 89%).
IR-Spektrum (KBr): = 3110, 2900, 2860, 1700, 1610, 1575, 1500 og 1440 cm” 5 ^H-NMR-Spektrum [(CDj^SO]: δ (ppm) = 2,40 (IH, kvintet, J=6,l og 6,7Hz, CH), 3,64 (4H, J=6,7Hz, 2 x Cff2OCH2Ph), 4,50 (6H, m, CH20N, 2 x Cff2Ph), 7,30 (10H, m, 2 x CH2Ph), 9,36 (IH, s, 0GHNH), 11,31 (IH, s, NHGEO) .
Analyse: 10 Beregnet for C24H24N5O4C1.0,5EtOH:C 59,45 H 5,40 N 13,87.
Fundet: C 59,44 H 5,09 N 13,62.
BESKRIVELSE 4 (Mellemprodukter til eksemplerne 6, 7 og 26)
De følgende mellemprodukter blev fremstillet på en lignende måde som 15 den, der er angivet i beskrivelserne 2 og 3.
Formel R^' R2' R3* Rg Smp. °C
VIII H CHO 170-181 20 VI H rTcåP H 137-139 VI H OH CH20H H 173-175 BESKRIVELSE 5 (Mellemprodukter til eksemplerne 8 og 9) 23 DK 166823 B1 . De følgende mellemprodukter blev fremstillet på en lignende måde som den, der er angivet i beskrivelserne 2 og 3.
5 _
Formel Rj_' R2' R3' Rg IV CH20CH2Ar H CH2OCH2Ar - olie VIII CH2OCH2Ar H CH2OCH2Ar CHO skum 10 VI CH2OCH2Ar H CH2OCH2Ar H klar glas VI CH2OCH2Ar H CH2OCH2Ar CHO klar glas
Ar - -^) 0CH3 BESKRIVELSE 6 15 (Mellemprodukter til eksempel 1, fremgangsmåde A, alternativ fremgangsmåde til beskrivelse 1) a) Ν’-3-Benzyloxyprop-l-oxy-N,N-dimethylmethanimidamid
En opløsning af 3-benzyloxyprop-1-oxyamin (1,83 g, 10 mmol) i N,N-dime thylf ormamid- dime thylacetal (15 ml) blev omrørt ved stuetemperatur 20 i 30 minutter. Opløsningsmidlet blev fjernet under nedsat tryk, og remanensen blev opløst i dichlormethan (30 ml) og vasket med vand (2 x 30 ml). Den organiske fase blev tørret (MgSO^.), og opløsningsmidlet blev fjernet, hvilket gav N-3-benzyloxyprop-l-oxy-N,N-dimethylmethan-imidamid (2,1 g, 93%).
24 DK 166823 B1 IR-Spektrum (film): i/max = 3090, 3060, 3030, 2930, 2860, 1630, 1495, 1480, 1450, 1440, 1410, 1390, 1380, 1365, 1320, 1250, 1205, 1105, 1075, 1065, 1030, 990, 950, 930, 910, 845, 740 og 700 cm-1.
^-NMR-Spektrum (CDC13): δ (ppm) = 1,95 (2H, m, CH2), 2,76 (6H, s, 2 5 x CH3), 3,57 (2H, t, J=6,5Hz, CH2), 3,95 (2H, t, J=6,5Hz, CH2), 4,51 (2H, s, CH2), 7,3 (5H, m, C6H5), 7,61 (IH, s, CH); m/z 236 (M+, 5%), 163 (5), 145 (25), 130 (20), 107 (35), 101 (5), 92 (10), 91 (100), 89 (15), 72 (15), 71 (50), 69 (15), 65 (15), 57 (15).
Massespektrum M+: 10 Beregnet for C^3H2qN202: 236,1524.
Fundet: 236,1527.
b) 2- [N- (3-Benzyloxyprop-l-oxy) iminomethyl ] amino - 2 - cyanoacetamid
En opløsning af 2-amino-2-cyanoacetamid-hydrochlorid (5,38 g, 40 mmol) og N' - 3-benzyloxyprop-1 -oxy-N,N-dimethylmethanimidamid (8,7 g, 15 39 mmol) i methanol (35 ml) blev omrørt ved stuetemperatur i 22 ti mer. Opløsningsmidlet blev fjernet under nedsat tryk, og remanensen blev behandlet med ethylacetat (200 ml) og saltvand (1 ml). Ethyl-ace ta top løsningen blev dekanteret, den olieagtige remanens blev vasket med ethylacetat (50 ml) og de kombinerede organiske faser blev 20 tørret (MgSO^). Opløsningsmidlet blev fjernet under vakuum, og den tilbageværende olie blev vasket med hexan (3 x 50 ml), hexanfasen dekanteret, og remanensen opløst i varm chloroform (40 ml) og behandlet med hexan (150 ml). Blandingen blev kølet til -18°C i 1 time, den organiske fase dekanteret og olieremanensen tørret under nedsat tryk, 25 hvilket gav 2-[N-(3-benzyloxyprop-l-oxy)iminomethyl]amino-2-cyano-acetamid (8 g, 70%).
IR-Spektrum (film): i/max = 3340, 3190, 3090, 3060, 3030, 2930, 2870, 2800, 1700, 1660, 1600, 1495, 1455, 1380, 1370, 1215, 1100, 1075, 1030, 980, 910, 860, 750 og 700 cm'1.
30 1H-NMR-Spektrum [(CD3)2SO]: δ (ppm) = 1,86 (2H, m, CH2), 3,53 (2H, m, CH2), 3,84 (0,28H, t, J=6,5Hz, CH2), 3,94 (1.72H, t, J=6,5Hz, CH2), 4,46 (2H, s, CH2), 5,06 (0.14H, d, J=8Hz, GH), 5,23 (0.86H, d, J=8Hz, 25 DK 166823 B1 CH). 6,76 (IH, d, J=10,5Hz, CH), 6,95 (IH, dd, J-10,5 og 8Hz, D20 udskiftelig NH), 7,2-7,4 (5H, m, Cg^), 7,95 (2H, bred s, D20 udskiftelig NH2); m/z 290 (M+, 10%), 215 (3), 199 (5), 198 (10), 182 (5), 169 (5), 163 (10), 125 (10), 123 (10), 107 (35), 106 (10), 105 (10), 5 92 (15), 91 (100), 79 (10), 71 (10), 65 (10), 44 (15).
Analyse:
Beregnet for C14H17N4O3.1,15H20: C 54,23 H 6,27 N 18,07; M+ 290,1376.
Fundet: C 54,06 H 5,97 N 17,64; 10 M+ 290,1369.
c) 5-Amino-l-(3-benzyloxyprop-l-oxy)-4-carboxamidoimidazol
Bortrifluorid-etherat (0,85 ml, 6,9 mmol) blev sat til en opløsning af 2-[N-(3-benzyloxyprop-l-oxy)iminomethylamino-2-cyanoacetamid (2 g, 6,9 mmol) i tørt dimethoxyethan (150 ml) i en atmosfære af tørt ni-15 trogen. Opløsningen blev opvarmet til 60°C i 1 time og afkølet til stuetemperatur, og opløsningsmidlet blev fjernet under vakuum. Remanensen blev delt mellem chloroform (100 ml) og natriumhydrogencarbo-natopløsning (100 ml). Den vandige fase blev ekstraheret med chloroform (30 ml), de kombinerede organiske faser tørret (MgS04) og op-20 løsningsmidlet fjernet. Remanensen blev chromatograferet på silica, elueret med chloroform-methanol 20:1, hvilket gav 5-amino-l-(3-benzyloxyprop-l-oxy) -4-carboxamidoimidazol (1,25 g, 63%).
(Chirale mellemprodukter til eksempel 14) BESKRIVELSE 7 og 8 26 DK 166823 B1 R-Isomerer 5 Formel R^' R2' R3' IV CH2OBz H CH2OBz [ce]S5 = + 10,1° V CH20Bz H CH2OBz gummi II CH20Bz H CH20Bz glas 10 [L = MeS] Bz = CH2C6H5 [Y = PhC02] blev fremstillet på en lignende måde som den, der er beskrevet i beskrivelserne 1 og 6.
15 Den benzyloxy-beskyttede form af forbindelsen ifølge eksempel 14 blev fremstillet ud fra forbindelsen med den almene formel II; smeltepunkt 214-215“G.
BESKRIVELSE 7 og 9 27 DK 166823 B1 (Mellemprodukter til eksempel 15) S-Isomerer 5 Formel ' R2' R3' Rg IV CH2OBz H CH2OBz - [a]J5 = -13,2° VIII CH2OBz H CH2OBz CHO olie VI CH2OBz H CH2OBz CHO olie 10 _ blev fremstillet på en lignende måde som den, der er angivet i beskrivelserne 2 og 3.
(Mellemprodukter til eksemplerne 16-19) BESKRIVELSE 10 28 DK 166823 B1
Formel Rj_' R2' R3’ &6 5 ______ ch2 ch2
IV H I I
O o
X
ch2 ch2
VIII Η I I
CfK) ch2 ch2
VI H I I
O O CHO
_><_ 10 blev fremstillet på en lignende måde som den, der er angivet i beskrivelserne 2 og 3.
BESKRIVELSE 11 (Mellemprodukt til eksempel 20) 2 - Amino -9-(2,2- dimethyl -1,3 - dioxan- 5 -ylmethoxy- 6 -methoxy) purin blev 15 fremstillet ud fra en forbindelse VI i beskrivelse 10 på en lignende måde som den, der er beskrevet i beskrivelserne 2 og 3.
(Mellemprodukt til eksempel 21) BESKRIVELSE 12 29 DK 166823 B1 2,6 -Diamino -9-(2,2- dimethyl -1,3- dioxan- 5 -yl -methoxy) pur in blev fremstillet ud fra forbindelse VI i beskrivelse 10 ved opvarmning med 5 ammoniak i en autoklav.
BESKRIVELSE 13 (Mellemprodukter til eksemplerne 10 og 22-24)
Formel Rj/ R2' R3' R6 10
Me
VIII Η H CH20 Si fcBu CHO
15 Me
VI HH" CHO
blev fremstillet på en lignende måde som den, der er angivet i beskrivelserne 2 og 3.
20 Den tert .butyldimethylsilyloxy-beskyttede form af forbindelsen ifølge eksempel 10 blev fremstillet ud fra forbindelse VI, der er angivet ovenfor.
BESKRIVELSE 14 (Mellemprodukter til eksempel 27) 30 DK 166823 B1 R-Isomerer 5 Formel Rj/ R2' R3’ Rg CH2 CH2 svagt gul væske IV H’ * ·
O O
X
VIII H " CHO svagt gul væske
10 VI H " CHO
blev fremstillet på en lignende måde som den, der er angivet i beskrivelserne 2 og 3.
BESKRIVELSE 15 (Mellemprodukter til eksemplerne 28-29) 31 DK 166823 B1
Formel R-^’ R21 R3’ Rg 5 _ IV HH CH=CH2 - hvide plader (HCl-salt) VIII Η H CH=CH2 CHO svagt gult fast stof
10 VI Η H CH=CH2 H
VI HH GH(0H)CH20H H
blev fremstillet på en lignende måde som den, der er angivet i beskrivelserne 2 og 3.
32 DK 166823 B1
EKSEMPLER
De følgende forbindelser blev fremstillet i overensstemmelse med fremgangsmåderne, der er beskrevet tidligere heri.
ρΛ, 0 CH-R , I 1 ch-r , i 2
Rj 5
Eksempel nr. Rj_ R2 R3 R4
1 Η H CH2OH OH
2 Η H CH2OCOCH3 OH
3 Η H CH2OCOC6H5 OH
4 Η H CH2°H OC2H5
5 H CH2OH CH2OH OH
6 H OH CH2OH OH
7 H OH CH2OH H
8 CH2OH H CH2OH OH
9 CH2OH H CR2OH H
10 Η H CH2OH H
11 Η H CH2OCOC5Hj^ OH
12 CH2OCOCH3 H CH2OCOCH3 H
13 CH2COC3H7 H CH2COC3H7 H
14 (R)— CH2OH H CH2OH OH
15 (S)- CH2OH H CH2OH OH
16 H CH2OH CH2OH H
17 H CH2OCOCH3 CH2OCOCH3 H
33 DK 166823 B1
Tabel fortsat /
Eksempel nr. R^ R2 R3 K4
18 H CH2OCOC2H5 CH2OCOC2H5 H
19 H CH2OCOC6H5 CH2OCOC6H5 H
20 H CH2OH CH2OH OCH3 21 H CH2OH CH2OH NH2
22 Η H CH2OCOCH3 H
23 H h CH2OCOC5Hh H
24 Η H CH2OCOC6H5 H
25 (S)- CH2OCOCH3 H CH2OCOCH3 OH
26 H OH CH2OH OCH3
27 (R)- H OH CH2OH OH
28 Η H CHOHCH2OH OH
29 Η H CH0HCH20H H
30 (R)- H OH CH2OH H
31 (S)- H OH CH2OH OH 1
Alle strukturer blev bekræftet ved spektroskopiske analyser (IR, UV, •1 LH-NMR og massespektroskopi) og ved analyse.
34 DK 166823 B1 EKSEMPEL 1 9-(3-Hydroxyprop-1-oxy)guanin 0 i « 2 ho(ch2}3o
5 FREMGANGSMÅDE A
En blanding af 9-(3-benzyloxyprop-1-oxy)guanin (140 mg, 0,44 mmol), 10% palladium på trækul (200 mg), vand (20 ml), 5N saltsyre (10 ml) og ethanol (10 ml) blev omrørt ved 20'C i en atmosfære af hydrogen i 45 minutter. Katalysatoren blev filtreret fra, og opløsningen blev 10 indstillet til pH 7 og inddampet til tørhed under reduceret tryk.
Remanensen blev krystalliseret af vand, hvilket gav 42 mg af et hvidt fast stof, som blev omkrystalliseret én gang til af vand, hvilket gav titelforbindelsen (23 mg, 23%).
%-NMR-Spektrum [(CD3)2SO]: δ (ppm) = 1,80 (2H, kvintet, J=6,3 og 15 6,6Hz, CH2Cff2CH2), 3,55 (2H, kvartet, J=5,50 og 5,77Hz, CH20E), 4,32 (2H, t, J=6,6Hz, CH20N), 4,57 (IH, t, J=5,0 og 5,5Hz, D20 udskiftelig, OH), 6,57 (2H, bred s, D20 udskiftelig, NH2), 7,91 (IH, s, H-8), 10,63 (IH, bred s, D20 udskiftelig, H-l).
Analyse: 20 Beregnet for C8HUN503.0,4H20: C 41,33 H 5,13 N 30,14.
Fundet: C 41,33 H 5,20 N 30,24.
FREMGANGSMÅDE B
9-(3-Benzyloxyprop-l-oxy)-6-chlor-2-formamidopurin (3,40 g, 9,41 mmol) i 80% myresyre (100 ml) blev opvarmet til 100eC i 1 time. Reak- 25 tionsblandingen blev derefter afkølet og omrørt med 10% palladium på 35 DK 166823 B1 trækul (2,0 g) i en atmosfære af hydrogen ved 20°C i 45 minutter.
Efter fjernelse af katalysatoren inddampedes opløsningen, og remanensen blev behandlet med vand (50 ml) og koncentreret vandig ammoniak (4 ml) ved 100°C i 15 minutter. Opløsningen blev derefter afkølet og 5 inddampet under reduceret tryk. Omkrystallisation af remanensen af vand gav 9-(3-hydroxyprop-l-oxy)guanin (800 mg, 33%).
^H-NMR-Spektrum [(CDg^SO]: δ (ppm) = 1,80 (2H, kvintet, J=6,3 og 6,6Hz, CH2Cff2CH2), 3,55 (2H, kvartet, J=5,50 og 5,8Hz, CT20H), 4,32 (2H, t, J—6,6Hz, CH20N), 4,57 (IH, t, J=5,5Hz, D20 udskiftelig, OH), 10 6,57 (2H, bred s, D20 udskiftelig, NH2), 7,91 (IH, s, H-8), 10,63 (IH, bred s, D20 udskiftelig, H-l).
EKSEMPEL 5 9 -(3 -Hydroxy-2-hydroxymethylprop-1-oxy)guanin <ώ., I N * 0
S
CH(CH2OR)2 15
En blanding af 9-(3-benzyloxy-2-benzyloxymethylprop-l-oxy)-2-formami-do-6-chlorpurin (2,5 g, 5,2 mmol) og 80% myresyre (100 ml) blev omrørt ved 100°C i 1 time og afkølet, og 10% palladium på trækul (2,0 g) blev tilsat. Blandingen blev derefter omrørt i en atmosfære af 20 hydrogen i 45 minutter. Katalysatoren blev fjernet og opløsningen inddampet under nedsat tryk. Den opnåede remanens blev opvarmet i vand (100 ml) indtil begyndende kogning. Koncentreret vandig ammoniak (4 ml) blev tilsat, og opløsningen blev derefter opvarmet i yderligere 15 minutter, afkølet og inddampet under nedsat tryk. Omkrystal-25 lisation af vand (trækul) gav 9-(3-hydroxy-2-hydroxymethylprop-l--oxy)guanin (430 mg, 32%).
36 DK 166823 B1 IR-Spektrum (KBr): i/max = 3380, 3183, 1679, 1637, 1605, 1541, 1479 og 1395 cm'1.
^I-NMR-Spektrum [(CD3)2SO]: δ (ppm) = 1,94 (IH, m, CH), 3,53 (4H, m, 2 x CH20E), 4,26 (2H, d, J=6,3Hz), 4,57 (2H, t, J=5,2Hz, D20 udskif-5 telig, 2 x OH), 6,58 (2H, bred s, NH2), 7,92 (IH, s, H-8), 10,64 (IH, bred s, D20 udskiftelig, H-l).
Analyse:
Beregnet for C9H13N5O4: C 42,34 H 5,14 N 27,44.
Fundet: C 42,08 H 5,15 N 27,41.
10 Forbindelserne ifølge eksemplerne 6, 8, 15, 27, 28 og 31 blev/er fremstillet på en lignende måde med den, der er angivet i beskrivelse 2 og eksempel 1, fremgangsmåde B.
Forbindelsen ifølge eksempel 14 blev fremstillet på en lignende måde som den, der er angivet i beskrivelse 1 og eksempel 1, fremgangsmåde 15 A.
Forbindelserne ifølge eksemplerne 2, 3, 11, 12, 13, 17, 18, 19, 22, 23, 24 og 25 blev fremstillet ved acylering af den til eksemplet svarende forbindelse, der indeholder frie OH-grupper i R^/R2/R3.
Forbindelserne ifølge eksemplerne 7, 9, 10, 16, 29 og 30 blev frem-20 stillet ved reduktion af den 6-chlor-forbindelse, hvori 2-aminogrup-pen og OH-grupperne i R^, R2 og/eller R3 eventuelt er i beskyttet form (se formel VI), beskrivelserne 5, 10 og 13); og efterfølgende afbeskyttelse af R^/R2/R3 og/eller 2-aminogruppen, hvis det er nødvendigt .
25 Forbindelserne ifølge eksemplerne 4, 20 og 26 blev fremstillet ved reaktion mellem den relevante 0R5_-ion og den relevante 6-chlorfor-bindelse, hvori 2-aminogruppen og OH-grupperne i R2 og/eller R3 eventuelt er i beskyttet form (se beskrivelse 2 c) og d) og beskrivelse 11).
37 DK 166823 B1
Forbindelsen ifølge eksempel 21 blev fremstillet ved syrehydrolyse af den tilsvarende 6-chlorforbindelse fra beskrivelse 12.
ANTIVIRAL AKTIVITET
1. Plaquereduktionstest for herpes simplex vira 1 og 2 5 Celler (vero eller MRC-5) blev dyrket til konfluens i multiplader med 24 brønde (brønddiameter =1,5 cm). De drænede cellemonolag blev hver især inficeret med ca. 50 infektiøse partikler af herpes simplex virus 1 (HSV-1; stamme HFEM) eller herpes simplex virus 2 (HSV-2; stamme MS) i 100 μΐ phosphatpufret saltvand. Viruset blev adsorberet 10 il time ved stuetemperatur. Efter adsorption blev det tilbageværende inokulum fjernet fra hver brønd og erstattet med 0,5 ml Eagle’s MEM, der indeholder 5% serum fra nyfødte kalve og 0,9% agarose (A37). Når agarosen var størknet, blev fortyndinger af forsøgsforbindelsen, som var blevet fremstillet i Eagle's MEM (indeholdende 5% serum fra ny-15 fødte kalve), tilsat, idet hver brønd modtog et væskeoverlag på 0,5 ml. Forsøgsforbindelsen blev fortyndet, hvilket gav følgende koncentrationsserie: 200, 60, 20, 6....0,06 /zg/ml; slutkoncentrationer i analysen udstrakte sig derfor mellem 100 /jg/ml og 0,03 μg/ml. De inficerede kulturer blev inkuberet ved 37°C i en fugtig atmosfære med 20 5% CO2, indtil plaques fremstod klart synlige (2 eller 3 dage for vero-celler, og sædvanligvis 1 dag for MRC-5-celler).
2. Plaquereduktionstest for varicella zoster-virus MRC-5-Celler blev dyrket til konfluens i multiplader med 24 brønde (brønddiameter =1,5 cm). De drænede cellemonolag blev hver især in-25. ficeret med ca. 50 infektiøse partikler .af varicella zoster-virus (VZV; Ellen-stamme) i 100 μΐ phosphatpufret saltvand. Viruset blev adsorberet i 1 time ved stuetemperatur. Efter adsorption blev det resterende inokulum fjernet fra hver brønd og erstattet med 0,5 ml Eagle’s MEM, der indeholder 5% varmeinaktiveret føtalt kalveserum og 30 0,9% agarose (A37). Da agarosen var størknet, blev fortyndinger af forsøgsforbindelsen, som var blevet fremstillet i Eagle’s MEM (indeholdende 5% varmeinaktiveret føtalt kalveserum), tilsat, idet hver 38 DK 166823 B1 brønd modtog 0,5 ml af et væskeoverlag. Forsøgsforbindelsen blev fortyndet, hvilket gav følgende koncentrationsserie: 200, 60, 20, 6....0,06 pg/ml; slutkoncentrationer i analysen udstrakte sig derfor mellem 100 /ig/ml og 0,03 jug/ml. De inficerede kulturer blev inkuberet 5 ved 37°C i en fugtig atmosfære med 5% C02, indtil plaques fremstod klart synlige (5 eller 6 dage).
Kulturer fra 1 og 2 blev fikseret i formalin-saltvand, agaroseoverla-gene blev forsigtigt vasket væk, og derefter blev cellemonolagene farvet med carbolfuksin. Et stereomikroskop blev anvendt til at tælle 10 plaques. IC50 (den koncentration af medikamentet, som irihiberer plaqueantallet med 50% i forhold til det antal plaques, der blev observeret i viruskontrol-monolag) af forsøgsforbindelsen blev beregnet. Monolaget blev yderligere vindersøgt for spor af medikament-induceret cytotoxicitet; den minimale koncentration, ved hvilken cyto-15 toxicitet forekommer, blev registreret.
3. CPE-Irihiberingstest (replikerende celler) for herpes simplex virus 1 MRC-5-Celler (i Eagle's MEM, der indeholder 5% føtalt kalveserum) blev inficeret i suspension med herpes simplex virus 1, stamme SC16 20 (ca. én infektiøs partikel pr. 10 celler). 100 jul af den inficerede cellesuspension (der indeholdt ca. 2 x 10^ celler) blev anbragt i hver brønd i en mikrotiterplade med 96 brønde, der indeholdt et lige stort volumen af forsøgsmedikamentet i medium (Eagle's MEM, der indeholder 5% føtalt kalveserum) i koncentrationer, der gik fra 200 til 25 0,09 jug/ml (3-gange fortyndingstrin); slutkoncentrationer lå derfor mellem 100 og 0,045 jug/ml. Pladerne blev derefter inkuberet ved 37°C i en fugtig atmosfære med 5% CO2 i 3 dage, indtil den virus inducerede cytopatiske effekt (CPE)’ i kontrolbrøndene nåede 100%. Pladerne blev fikseret i formalin-saltvand og farvet med carbolfuksin. Pladerne 30 blev derefter undersøgt for at finde den koncentration af forsøgs- forbindelsen, der reducerede den virus-inducerede CPE med 50% (IC50). Plader med uinficerede celler blev kørt parallelt for at bestemme den mindste koncentration af testforbindelsen, som forårsagede cytotoxicitet.
39 DK 166823 B1 4. CPE-Inhiberingstest (fast monolag) for lentivira 3 x 10^ fårecboroidplexus- (SCP)-celler blev udsået i individuelle brønde i en mikro ti terp lade med 96 brønde i 100 μ! Eagle's MEM med Hanks salte indeholdende 10% varmeinaktiveret føtalt kalveserum 5 (FCS). Når monolagene var blevet faste (efter 1 eller 2 dages vækst), blev de vasket med 200 μΐ af et bevarende medium (Eagle's MEM med Hanks salte indeholdende 0,5% FCS) og inficeret med 100 μΐ visna-virus (stamme K184) i det bevarende medium (30 TCIDgg/ml). Forsøgsprøver blev fortyndet med bevarende medium i yderligere 96 brøndes 10 mikrotiterplader i området 200-0,09 pg/ml ved 3-gange fortyndings-trin. 100 μΐ af de fortyndede prøver blev derefter direkte overført til virusinficerede monolag (slutkoncentrationsområdet var derfor 100-0,045 ^g/ml) og inkuberet ved 37°C med en fugtig, 5% CO2 inkubation, indtil virusinduceret CPE var maksimal i ubehandlede virusinfi-15 cerede kontroller (sædvanligvis 12-14 dage). Pladerne blev fikseret med formalin-saltvand og farvet med krystalviolet. Virusinduceret CPE blev derefter bedømt mikroskopisk, og den mindste koncentration af en prøve, der gav fuldstændig beskyttelse af cellemonolaget (MIC), blev bestemt.
40 DK 166823 B1
RESULTATER
MIC
IC50 (jug/ml)a Og/ml) 5
Eks. tir. Herpes simplex Herpes simplex Varicella Visna- type 1 virus type 2 virus zoster-virus virus HFEM- SC16- MS- MS- Ellen- K184- 10 stamme i stamme i stamme i stamme i stamme i stamme vero- MRC-5- vero- MRC-5- MRC-5- i SCP- celler celler celler celler celler celler 1 0,4 0,2 1,0 0,3 0,3 0,2 0,1 0,8 0,3 3,0 15 0,2 2 4,3 0,4 0,6 1,1 • 3 2,8 1,2 2,1 4 100 67 21 5 1,5 1,8 1,8 1,5 1,5 1,5 2,9 0,1 20 6 8,6 1,9 1,6 0,7 2,3 10 7 100 57 8 11 30 11 0,7 0,1 0,1 14 100 25 15 7,4 a Hver angivelse er værdien, der er opnået i et enkelt forsøg.

Claims (15)

  1. 41 DK 166823 B1 TOXICITET Ved koncentrationer op til 30 /ig/ml var ingen af forbindelserne cyto-toxiske for uinficerede celler, der blev anvendt i et hvilket som helst af forsøgene.
  2. 5 PATENTKRAV
  3. 1. Purinforbindelse med den almene formel I *4 <nyS I N 2 0 CH-R . I 1 I CH-R, I 2 10 hvor Rj_ betegner et hydrogenatom eller CH2OH; R2 betegner et hydrogenatom eller (når er et hydrogenatom) en hydroxygruppe eller CH2OH; R3 betegner CH2OH eller (når R^ og R2 begge er hydrogenatomer)
  4. 15 CH(0H)CH20H; R4 betegner et hydrogenatom, en hydroxy- eller aminogruppe eller OR5, hvor R5 betegner en C^.g-alkyl-, phenyl- eller phenyl-C^_2-alkylgruppe, hvor hver af phenylgrupperne kan være substitueret med ét eller to 20 halogenatomer eller én eller to C^_4-alkyl- eller Cj__4-alkoxygrupper; og hvor eventuelle OH-grupper i R|, R2 og/eller R3 kan være i form af 0-acyl-, phosphat-, cyklisk acetal- eller cyklisk carbonatderiva-ter deraf, hvor O-acylderivater omfatter de, hvori en eller flere 0H-grupper i Rj_, R2 og/eller R3 danner carboxylestergrupper såsom 42 DK 166823 B1 Cj^.y-alkanoyl- og benzoylgrupper, der eventuelt er substitueret med en eller to C^_4 alkyl, C^.^-alkoxy, halogen eller CF3; phosphatderi-vater omfatter de, hvor en af de acykliske OH-grupper er erstattet med (H0)2-P02, eller hvori to OH-grupper på nabostillede carbonatomer 5 er erstattet med en forbindelse 0-P(OH)O2-gruppe; cykliske acetal- derivater omfatter de, hvor to OH-grupper i Rj_, R2 og R3 er -0-(0^.3-alkyl)2"0-; og hvori cyklisk carbonat er -0-C0-0, eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
  5. 2. Forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1, 10 kendetegnet ved, at R^ og R2 begge betegner hydrogenatomer, og R3 betegner CH2OH, og derivater deraf som defineret i krav 1.
  6. 3. Forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R^ betegner et hydrogenatom, og R2 og R3 begge betegner CH2OH, og derivater deraf som defineret i krav 1.
  7. 4. Forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Rj^ betegner et hydrogenatom, R2 betegner en hydroxygruppe, og R3 betegner CH2OH, og derivater deraf som defineret i krav 1.
  8. 5. Forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1, 20 kendetegnet ved, at R^ betegner CH2OH, R2 betegner et hydrogenatom, og R3 betegner CH2OH, og derivater deraf som defineret i krav 1.
  9. 6. Forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R^ og R2 begge betegner hydrogenato- 25 mer, og R3 betegner CH(0H)CH20H, og derivater deraf som defineret i krav 1.
  10. 7. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6, kendetegnet ved, at R4 er en hydroxygruppe. 1 Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6, 30 kendetegnet ved, at R4 er et hydrogenatom. 43 DK 166823 B1
  11. 9. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-8, kendetegnet ved, at OH-grupper i R^, R2 og/eller R3 er i form af et acylderivat deraf, hvori acylderivatet/derivaterne er et acetat, hexanoat eller benzoat. 5 10. 9-(3-Hydroxyprop-l-oxy)guanin, 9-(3-acetoxyprop-1-oxy) guanin, 9 -(3-benzoyloxyprop-1-oxy)guanin, 2-amino-6-ethoxy-9-(3-hydroxyprop-1-oxy)purin, 9-(3 -hydroxy- 2 -hydroxymethylprop -1 -oxy) guanin, 10 9-(2,3-dihydroxyprop-1-oxy)guanin, 2. amino-9-(2,3-dihydroxyprop-1-oxy)purin, 9-(1,4-dihydroxybut-2-oxy)guanin, 2. amino -9-(1,4- dihydroxybut - 2 - oxy) purin, 2-amino-9-(3-hydroxyprop-1-oxy)purin, 15 9-(3-hexanoyloxyprop-1-oxy)guanin, 2-amino-9- (1,4-diacetoxybut-2-oxy)purin, 2. amino-9-(1,4-dibutyryloxybut-2-oxy)purin, (R) - 9 - (1,4 - dihydroxybut - 2 - oxy) guanin, (S) -9- (1,4-dihydroxybut-2-oxy)guanin, 20 2-amino-9- (3-hydroxy-2-hydroxymethylprop-l-oxy)purin, 9 - (3 - acetoxy- 2 - acetoxymethylprop -1 - oxy) - 2 - aminopurin, 2. amino -(3 -propionyloxy- 2 -prop! onyloxymethylprop -1 - oxy) pur in, 2. amino -(3 -benzoyloxy- 2 -benzoyloxymethylprop -1 - oxy )purin, 2. amino - 9 - (3-hydroxy - 2-hydroxyme thylprop -1 - oxy ) - 6 - me thoxypur in, 25 2,6- diamino - 9 - ( 3 -hydroxy - 2 -hydroxymethylprop -1 - oxy ) pur in, 9- (3-acetoxyprop-l-oxy) -2-aminopurin, 2. amino - 9 - (3 -hexanoyloxyprop -1 - oxy)purin, 2. amino -9-(3 -benzoyloxyprop -1 - oxy )purin, (S)-9-(l,4-diacetoxybut -2-oxy)guanin, 30 2 - amino -9-(2,3- dihydroxyprop -1 - oxy) - 6 -methoxypurin, (R) -9-(2,3- dihydroxyprop -1 - oxy) guanin, 9-(3,4-dihydroxybut-1-oxy)guanin, 2. amino -9-(3,4- dihydroxybut -1 - oxy) purin, 2. amino - 9 - [ (R) - 2,3 - dihydroxyprop -1 - oxy ] purin eller 35 (S)-9-(2,3-dihydroxyprop-1-oxy)guanin. 44 DK 166823 B1
  12. 11. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel II 5 CONH- <X ? ^ N=C-NHY l i CH-R / I 1 CH-R y I 2 hvor L betegner en fraspaltelig svovlenhed eller ΝΗ2» ^ betegner en beskyttelsesgruppe, og R]/, R2' og R3' betegner henholdsvis , R2 og 10 R3 eller Rj_, R2 og/eller R3, hvori OH-grupper er beskyttede, cyclise-res; hvorefter, når R4 i den ønskede forbindelse med den almene formel I er forskellig fra en hydroxygruppe, en R4-hydroxygruppe omdannes til chlor efterfulgt af enten i) reduktion til R4, hvor R4 betegner et hydrogenatom, ii) udskiftning af chlor med NH2 til dannelse af 15 R4, hvor R4 betegner en aminogruppe; eller iii) omsætning med OR5* -ionen til dannelse af R4, når R4 er OR5; og Y afbeskyttes, og Rj_' omdannes til Rj_, R2' til R2 og R3* til R3, når det er ønsket eller nødvendigt, og at der eventuelt dannes et farmaceutisk acceptabelt salt, 0-acyl-, phosphat-, cyklisk acetal- eller cyklisk carbonat-20 derivat deraf; eller chlorfunktionen i en forbindelse med den almene formel VI 45 DK 166823 B1 Cl <yS n^n^nhr, 0 CH-R / VI i 1 CH-R y I 2 Rr hvor Rg betegner et hydrogenatom eller en N-beskyttelsesgruppe, og 5 Rj/ , R2' °g R3' har samme betydning som defineret ovenfor, omdannes ved enten i) hydrolyse for at give R4 som en hydroxygruppe, ii) reduktion til dannelse af en forbindelse med den almene formel I, hvori R4 betegner et hydrogenatom, iii) udskiftning af chlor med NH2 til dannelse af R4, hvor R4 betegner en aminogruppe; eller iv) omsætning 10 med OR5' til dannelse af en forbindelse med den almene formel I, hvor R4 betegner OR5, hvorefter ' omdannes til Rj_, R2' til R2 og/eller R3' til R3, når det er nødvendigt, og/eller der eventuelt dannes et farmaceutisk acceptabelt salt eller derivat deraf, som defineret i krav 1; eller en forbindelse med den almene formel I som defineret i 15 krav 1, hvori en eventuel OH-gruppe i R^, R2 og/eller R3 er i beskyttet form, afbeskyttes; hvorefter der eventuelt dannes et farmaceutisk acceptabelt salt eller derivat deraf som defineret i krav 1.
  13. 12. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter en forbindelse ifølge et 20 hvilket som helst af kravene 1-10 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf og en farmaceutisk acceptabel bærer.
  14. 13. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-10 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til anvendelse som terapeutisk aktivstof, fortrinsvis til anvendelse ved behandling af virusinfek- 25 tioner. 46 DK 166823 B1
  15. 14. Anvendelse af en forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-10 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf til fremstilling af et lægemiddel til behandling af virusinfektioner.
DK595886A 1985-12-13 1986-12-11 Purinforbindelser, fremgangsmaade til fremstilling heraf, samt anvendelse af forbindelserne som farmaceutika DK166823B1 (da)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB8530813 1985-12-13
GB858530813A GB8530813D0 (en) 1985-12-13 1985-12-13 Compounds
GB8603228 1986-02-10
GB868603228A GB8603228D0 (en) 1986-02-10 1986-02-10 Compounds
GB868620849A GB8620849D0 (en) 1986-08-28 1986-08-28 Compounds
GB8620849 1986-08-28
GB868626041A GB8626041D0 (en) 1986-10-31 1986-10-31 Compounds
GB8626041 1986-10-31

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK595886D0 DK595886D0 (da) 1986-12-11
DK595886A DK595886A (da) 1987-06-14
DK166823B1 true DK166823B1 (da) 1993-07-19

Family

ID=27449713

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK595886A DK166823B1 (da) 1985-12-13 1986-12-11 Purinforbindelser, fremgangsmaade til fremstilling heraf, samt anvendelse af forbindelserne som farmaceutika

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP0242482B1 (da)
JP (1) JPH085886B2 (da)
KR (1) KR940010033B1 (da)
AT (1) ATE127466T1 (da)
AU (1) AU599066B2 (da)
CA (1) CA1296726C (da)
DE (1) DE3650384T2 (da)
DK (1) DK166823B1 (da)
ES (1) ES2076139T3 (da)
FI (1) FI85143C (da)
GR (1) GR3018105T3 (da)
HU (1) HU200461B (da)
IL (1) IL80947A (da)
MA (1) MA20828A1 (da)
MY (1) MY101126A (da)
NO (1) NO166226C (da)
NZ (1) NZ218598A (da)
PL (3) PL150841B1 (da)
PT (1) PT83911B (da)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8602346D0 (en) * 1986-01-30 1986-03-05 Wellcome Found Antiviral combinations
GB8712744D0 (en) * 1987-05-30 1987-07-01 Beecham Group Plc Active compounds
GB8713695D0 (en) * 1987-06-11 1987-07-15 Beecham Group Plc Process
US4965270A (en) * 1987-05-30 1990-10-23 Beecham Group P.L.C. Purine derivatives
GB8724765D0 (en) * 1987-10-22 1987-11-25 Beecham Group Plc Process
SE8801729D0 (sv) * 1988-05-06 1988-05-06 Astra Ab Purine derivatives for use in therapy
EP0353955A3 (en) * 1988-08-02 1991-08-14 Beecham Group Plc Novel compounds
DK135489D0 (da) * 1989-03-20 1989-03-20 Gea Farmaceutisk Fabrik As Fremgangsmaade til fremstilling af 9-substituerede guaninderivater og mellemprodukter til brug ved fremgangsmaaden
GB8907173D0 (en) * 1989-03-30 1989-05-10 Beecham Group Plc Novel compounds
GB8912043D0 (en) * 1989-05-25 1989-07-12 Beecham Group Plc Novel compounds
GB8918827D0 (en) * 1989-08-17 1989-09-27 Beecham Group Plc Novel compounds
US5252575A (en) * 1989-08-17 1993-10-12 Beecham Group P.L.C. Antiviral purine derivatives with improved gastrointestinal absorption
GB9107896D0 (en) * 1991-04-13 1991-05-29 Smithkline Beecham Plc Pharmaceuticals
JP2720681B2 (ja) * 1992-01-06 1998-03-04 株式会社村田製作所 移動体の移動検出装置
GB9402161D0 (en) * 1994-02-04 1994-03-30 Wellcome Found Chloropyrimidine intermediates

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4347360A (en) * 1980-09-16 1982-08-31 Ens Bio Logicals Inc. Ring open nucleoside analogues
EP0108285B1 (en) * 1982-10-14 1988-04-20 The Wellcome Foundation Limited Antiviral purine derivatives
IL72173A0 (en) * 1983-06-24 1984-10-31 Merck & Co Inc Guanine derivatives,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
KR910000198B1 (ko) * 1984-12-12 1991-01-23 신텍스(유.에스.에이.) 인코포레이티드 글리세롤의 알콕시메틸 에테르 및 알콕시메틸 에스테르의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
FI865075A7 (fi) 1987-06-14
DK595886A (da) 1987-06-14
MA20828A1 (fr) 1987-07-01
KR880005129A (ko) 1988-06-28
EP0242482B1 (en) 1995-09-06
NZ218598A (en) 1990-10-26
PL272031A1 (en) 1989-01-05
NO166226B (no) 1991-03-11
PT83911A (en) 1987-01-01
DE3650384D1 (de) 1995-10-12
ATE127466T1 (de) 1995-09-15
FI85143C (fi) 1992-03-10
HU200461B (en) 1990-06-28
HUT43069A (en) 1987-09-28
JPS62181279A (ja) 1987-08-08
MY101126A (en) 1991-07-31
AU6644386A (en) 1987-06-18
GR3018105T3 (en) 1996-02-29
DK595886D0 (da) 1986-12-11
KR940010033B1 (ko) 1994-10-21
NO865014D0 (no) 1986-12-11
PL150841B1 (en) 1990-07-31
JPH085886B2 (ja) 1996-01-24
DE3650384T2 (de) 1996-06-13
EP0242482A2 (en) 1987-10-28
PL262930A1 (en) 1988-09-01
PL150926B1 (en) 1990-07-31
PL150925B1 (en) 1990-07-31
AU599066B2 (en) 1990-07-12
IL80947A (en) 1990-01-18
NO865014L (no) 1987-06-15
PL272032A1 (en) 1989-01-05
CA1296726C (en) 1992-03-03
EP0242482A3 (en) 1989-02-08
FI85143B (fi) 1991-11-29
FI865075A0 (fi) 1986-12-12
NO166226C (no) 1991-06-19
PT83911B (pt) 1989-05-12
ES2076139T3 (es) 1995-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK167019B1 (da) 2-aminopurinderivater, fremgangsmaade til fremstilling heraf, farmaceutiske praeparater indeholdende disse forbindelser samt anvendelse heraf
DK166823B1 (da) Purinforbindelser, fremgangsmaade til fremstilling heraf, samt anvendelse af forbindelserne som farmaceutika
US6573378B1 (en) Antiviral guanine derivatives
KR0128661B1 (ko) 시클로부탄 유도체 및 그 제조 방법
EP0243670B1 (en) Purine and pyrimidine compounds and their use as anti-viral agents
FI60709C (fi) Analogifoerfarande foer framstaellning av 9-substituerade puriner anvaendbara saosom antivirala medel
US6057305A (en) Antiretroviral enantiomeric nucleotide analogs
FI90422B (fi) Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten purinyyli- ja pyrimidinyylisyklobutaanijohdannaisten valmistamiseksi
CA2032422A1 (en) Analogs of oxetanyl purines and pyrimidines
US5356886A (en) Antiviral phosphono-alken derivatives of purines
US5153352A (en) Process for preparation of intermediates of carbocyclic nucleoside analogs
WO1993019075A1 (en) Antiviral phosphonic acid derivatives of purine analogues
DE3852008T2 (de) Verbindungen.
Lee et al. Antitumor agents. 86. Synthesis and cytotoxicity of. alpha.-methylene-. gamma.-lactone-bearing purines
US5246931A (en) Carbocyclic nucleoside analogs
IE910908A1 (en) Substituted purines, processes for their preparation and¹their use as antiviral agents
JP3072600B2 (ja) 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物
JP2632646B2 (ja) 新規なシクロブタン誘導体及びその製造法
JPH05178746A (ja) 抗ウイルス剤
NL8921278A (nl) Nieuw cyclobutaanderivaat en werkwijze voor het bereiden ervan.
CS199666B2 (cs) Způsob přípravy 9-substituovaných purinů
JPH06206880A (ja) 新規シクロペンテン誘導体
HK136493A (en) Purine and pyrimidine compounds and their use as anti-viral agents
JPH04283545A (ja) 新規なシクロプロパン誘導体
HK1011998B (en) Antiretroviral enantiomeric nucleotide analogs

Legal Events

Date Code Title Description
B1 Patent granted (law 1993)
PBP Patent lapsed