DK169382B1

DK169382B1 - Analogifremgangsmåde til fremstilling af alanylderivater af isoquinolinderivater

Info

Publication number: DK169382B1
Application number: DK383581A
Authority: DK
Inventors: Rolf Geiger; Volker Teetz; Hansjoerg Urbach; Bernward Schoelkens; Rainer Henning
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1980-08-30
Filing date: 1981-08-28
Publication date: 1994-10-17
Also published as: AU7928487A; JPH01125398A; JPH04217994A; JPH0678355B2; DK383581A; IE67438B1; ES505605A0; ES504955A0; CS409491A3; EP0278530A3; PT73584B; HU189531B; KR850002742A; ES8301214A1; AU7471881A; EP0046953A3; AR240949A1; JPH07121955B2; KR850001269B1; GR75331B

Description

i DK 169382 B1

Den foreliggende opfindelse angår en analogifrem-gangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte alanylderivater af isoquinolinderivater, der har blodtrykssænkende virkning.

Fra EP-A-0.012.845 kendes tetrahydroisoquinolin-3-5 carboxylsyrederivater, der i 2-stilling bærer en mercap-toalkanoylgruppe, og deres anvendelse som blodtrykssænkende midler.

Endvidere beskrives der i DK patentansøgning nr. 3482/80, 1482/81 og 4343/81 hhv. l-acyl-2,3-dihydro-lH-indol-10 2-carboxylsyrer og derivater deraf, substituerede acylderi- vater af octahydro-lH-indol-2-carboxylsyrer og 2-carboxy-perhydroindolderivater, der har blodtrykssænkende virkning.

Der er nu ifølge opfindelsen tilvejebragt hidtil ukendte alanylderivater af isoquinolinderivater, der i for-15 hold til de kendte forbindelser sænker blodtrykket på høj-virksom måde.

Opfindelsen angår således en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte alanylderivater af isoquinol inderi vater med den almene formel I

car .

CO-CH-NH-CH-COOR

il i2 25 hvori R1 og R2 er ens eller forskellige og betyder alkyl eller alkenyl med op til 6 carbonatomer, der hver især eventuelt er substitueret med én eller flere ens eller forskellige substituenter valgt blandt 30 fluor, mercapto, hydroxy, amino, carboxy, 35 phenyl, naphthyl, dihydronaphthyl eller tetrahydronaphthyl, der hver især eventuelt er mono- eller disubstitueret med 2 DK 169382 B1 halogen, hydroxy, acetoxy, carboxy, 5 carbamoyl, sulfamoyl, nitro, methyl, ethyl, 10 methoxy og/eller ethoxy; en 5- til 7-leddet monocyclisk eller 9- til 10-leddet bicy-clisk heterocyclisk gruppe, som eventuelt indeholder 1-2 S-eller O-atomer og/eller op til 4 N-atomer pr. ring, og som 15 eventuelt er substitueret med halogen, oxygen, hydroxy, carboxy, 20 carbamoyl, sulfamoyl, nitro, alkyl med op til 9 carbonatomer, aralkyl med op til 9 carbonatomer, 25 methoxy og/eller ethoxy; R3 betyder hydrogen, alkyl med 1-6 carbonatomer, alkenyl med 2-6 carbonatomer, aralkyl med 7-14 carbonatomer inklusive p-nitrophenyl, 30 eller farmaceutisk acceptable salte deraf.

Som foretrukne eksempler på R1 og R2 skal især nævnes methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert.-butyl samt de ligekædede og forgrenede pentyler og hexyler, phenyl, naphthyl, di- og tetrahydronaphthyl, benzyl, phen-35 ethyl, p-fluorphenethyl, o-methylphenethyl, p-methoxyphen-ethyl og 2,4-dichlorphenethyl.

3 DK 169382 B1

De 5- til 7-leddede mono- eller 9-10-leddede bicyc-liske heterocycliske ringe kan være usubstituerede eller bære én eller flere ens eller forskellige substituenter. I tilfælde af substitution foretrækkes mono- eller disubsti-5 tution.

Som eksempler på foretrukne betydninger af R3 skal nævnes hydrogen, ethyl, butyl, t-butyl, benzyl, p-nitroben-zyl.

Aralkyl omfatter fortrinsvis benzyl og phenethyl.

10 Forbindelser med den almene formel I, hvor R1 udgør sidekæden i en naturligt forekommende L-aminosyre, f.eks. methyl, isobutyl, carboxymethyl, carboxyethyl, amino-n-butyl, imidazol-4-ethyl, benzyl, 4-hydroxybenzyl eller 3-indol-methyl, er særligt foretrukne.

15 Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formlen (I), hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at

a) en forbindelse med formlen II omsættes med en forbindelse med formlen III

20 ^ (CH?) .COOR4 (II)

. i N

>co-ch-q z 11 RX

25 Q-CH-C00R3 ^111^ ' 2 hvori R1, R2 og R3 har den ovenfor angivne betydning, det ene Q betyder en nucleofug gruppe, og det andet Q betyder 30 -NH2, og R4 betyder hydrogen, methyl, ethyl, benzyl eller tert.butyl, og en fremstillet ester eventuelt omdannes til carboxylsyren (R3 og/eller R4 = hydrogen) eller

b) en forbindelse med formlen IV

35 POOC-CH-NH-CH-COOP(IV) (IV) R1 R2 4 DK 169382 B1

hvori R1 og R2 har den ovenfor angivne betydning, og P betyder hydrogen, idet et af de to P imidlertid også kan have de andre betydninger R3 ovenfor eller betyde tert.butyl, omsættes med en forbindelse V

i I I <v> 10 hvori R4 har den ovenfor angivne betydning, i nærværelse af et kondensationsmiddel, og den ene eller begge estergrupper eventuelt omdannes til carboxylsyre, eller

c) en forbindelse med formlen VI omsættes med en forbindelse med formlen VII

15 4 yCE^. .cooir I I (VI) R1 20 t=^coor3 (VII) hvori R1, R2, R3 og R4 har den ovenfor angivne betydning, det ene T betyder hydrogenatom eller en NH2-gruppe, og det 25 andet T betyder et oxygenatom, og den fremkomne Schiff'ske base reduceres, og svovlfunktioner i den ifølge a) til c) fremstillede forbindelser eventuelt oxideres til sulfoxid eller til sulfon, og den fremstillede forbindelse med formlen I eventuelt omdannes 30 til et salt deraf.

Til fremstilling af forbindelserne med formlen (I) kan der eksempelvis gås ud fra 2-halogencarboxylsyrederivater (II) eller (III), som reagerer med nucleophiler. Denne reaktion gennemføres fortrinsvis i med vand blandbare organiske 35 opløsningsmidler, eventuelt i nærværelse af vand, idet der tilsættes en uorganisk eller tertiær eller kvaternær organisk 5 DK 169382 B1 base. Såfremt reaktanterne er opløselige i aprotiske organiske opløsningsmidler, foretrækkes et sådant opløsningsmiddel, idet der som base fordelagtigt tilsættes en tri-alkylamin, tetraalkylammoniumhydroxid eller tetramethyl-5 guanidin eller en suspension af et alkalimetal- eller jord-alkalimetalcarbonat.

Udgangsproduktet med formlen

>COOH

(IX)

10 L

er kendt fra litteraturen, men dets specifikke farmakologiske virkning som bestanddel af de her omhandlede forbindelser med formlen (I) har imidlertid ikke hidtil være beskrevet.

15 Forbindelsen med formlen (IX) kan fremstilles ifølge J.

Amer. Chem. Soc. 70 (1948), side 182.

Ud fra denne fås estrene med på kendt måde, og disse kondenseres med halogencarboxylsyre til forbindelserne (II) (Q = halogen), enten over syrechloriderne, 20 blandede anhydrider, aktivestre eller ved andre metoder, således som det er beskrevet udførligt i Houben-Weyl,

Methoden der Organischen Chemie, bind 15. I tilfælde, hvor R = CH^,' kan der f.eks. gås ud fra den fra L-mælke-syre let tilgængelige D-2-chlorpropionsyre.

25 Mellemprodukterne med formlen (II) (Q = NH2) fremstilles ud fra carboxylsyreestrene med den almene formel (V) ved kondensation med en N-beskyttet 2-amino-carboxylsyre. Beskyttelsesgruppen fraspaltes igen efter endt kondensation. Som beskyttelsesgruppe kan f.eks.

30 anvendes benzyloxycarbonyl.

Kondensationen kan ikke blot gennemføres med DCC/HOBt (dicyclohexylcarbodiimid/l-hydroxybenzotriazol), men også med et andet, egnet kondensationsmiddel, f.eks. det i Houben-Weyl, bind 15, beskrevne.

35 Ved fremgangsmåde (b) gås ud fra forbindelser med formlen (IV).

6 DK 169382 B1 o 12 Såfremt R og R er identiske, kan P betyde hydrogen. Der kondenseres da f.eks. i nærværelse af dicyclo-hexylcarbodiimid, med ét ækvivalent af en forbindelse med 4 formlen (V), hvorefter R fraspaltes på kendt måde. Reak-5 tionen forløber muligvis over det isolerbare anhydrid med formlen (XII), som derpå åbnes med en forbindelse med formlen (V) som vist i nedenstående reaktionsskema:

H

i λ N R4OOC CH0 -

R-HC CH-R

II i |

0=C C=0 + HN 1 J

^(ch2)^ (XII) (V) 15 ^CHo XOOR4 OC O a1 a2

(CH~)^ ^ CO-CH-N-CH-COOH

20 z i

H

o 12 Såfremt grupperne R og R i forbindelsen med formlen (IV) er forskellige, betyder fortrinsvis kun én af grupperne P hydrogen, den anden skal fortrinsvis have

O

25 samme betydning som R eller betyde tert.-butyl. Der kondenseres derpå på den beskrevne måde med forbindelserne med formlen (V), hvorpå den ene af eller begge estergrupperne eventuelt overføres i carboxylsyren.

Den for T = NH2 og hydrogen i formel VI eller VII

30 betydningsfulde kondensation med 2-ketocarboxylsyrer eller estere deraf ifølge fremgangsmåde c) fører på i og for sig kendt måde over Schiff-baser f.eks. efter reduktion med natriumborhydrid eller natriumcyanoborhydrid, ved katalytisk 35 7 DK 169382 B1 hydrogenering eller elektrolytisk reduktion til de tilsvarende forbindelser med formlen (I) i høj renhed.

De her omhandlede forbindelser har bl.a. tre chirale centre ved α-carbonatomer. Anordningen af liganderne svarer 5 fortrinsvis til L-konfigurationen. Almindeligvis kan der ved krystallisation fremstilles sterisk vidtgående ensartede forbindelser med formlen (I). Modstrømsfordeling eller præparativ HPLC foretrækkes til koncentrering af sterisk ensartede former.

10 De her omhandlede forbindelser med formlen (I) har langvarig, intensiv blodtrykssænkende virkning.

De kan anvendes til bekæmpelse af blodtryksforøgelse opstået af forskellige årsager og kan anvendes alene eller i kombination med andre blodtryksænkende, 15 karudvidende eller diuretisk aktive forbindelser. Typiske repræsentanter for disse klasser af aktive forbindelser er f.eks. beskrevet i Erhart-Ruschig, Arzneimittel, 2. oplag, Weinheim 1972. Anvendelsen kan ske intravenøst, sub-cutant eller peroralt.

20 Doseringen ved peroral indgift ligger på 20-200 mg pr. enkeltdosis. Den kan i svære tilfælde også forhøjes, da der ikke hidtil har været iagttaget toksiske egenskaber.

En nedsættelse af dosis er ligeledes mulig og først og fremmest hensigtsmæssig, når der samtidig indgives diure-25 tika. Ved intravenøs eller subcutan indgift skal enkeltdosis ligge mellem 0,01 og 10 mg.

Forbindelserne med formlen (I) foreligger i form af indre salte. Såfremt begge carboxylgrupperne er frie, kan der yderligere dannes alkalimetal- og jordalkalimetal-30 salte og sådanne med fysiologisk acceptable aminer. Endvidere kan en tilstedeværende fri aminogruppe omsættes med en mineralsyre eller en organisk syre til et salt. Også de andre forbindelser med formlen (I) kan anvendes i fri form eller som sådanne salte.

35 Fremgangsmåderne ifølge opfindelsen belyses nærmere i de efterfølgende, ikke-begrænsende eksempler, hvori der 8 DK 169382 B1 anvendes følgende forkortelser: 1,2,3,4-Tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre Tic

Indolin-2-carboxylsyre Ide

Octahydroindol-2-carboxylsyre Oid

5 Benzyloxycarbonyl Z

Tert.-butyloxycarbonyl Boc

Tert. -butyl tBu, Bu'*' tert. C4H9 4-Nitrobenzyl Nb

10 Dicyclohexylcarbodiimid °CC

Dimethyl formamid DME

Dimethylacetamid DMA

N-ethylmorpholin NEM

Cyclohexylamin CA

15 Dicyclohexylamin ^CA

Såfremt der ikke er angivet nogen anden fremgangsmåde, underkastes de i de efterfølgende eksempler beskrevne forbindelser en HPLC-rensning til analyse og biologisk 20 bestemmelse.

Eksempel 1 N-(l-carboxy-3-phenylpropyl)-L-alanyl-1,2,3,4-tetrahydro-isoquinolin-3-carboxylsyre._ a) 2-Carbobenzoxy-3-carboxy-l,2,3,4· tetrahydroiso-25 quinolin (Z-Tic)_ 188 g (1,05 mol) 3-carboxy-l,2,3,4-tetrahydroiso-quinolin sættes ved 0°C til 1050 ml 1 N NaOH, og ved denne temperatur tildryppes samtidig og under omrøring 160 ml chlorcarbonsyrebenzylester og yderligere 1050 ml 1 N 30 NaOH. Derefter omrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Der ekstraheres tre gange med ether, og den alkalisk-vandige fase syrnes med koncentreret HCl til pH-værdi 1. Den ud fældende olie ekstraheres i ethylacetat. Ethylacetatopløs-ningen vaskes med vand, indtil vandfasen udviser en pH-35 værdi på 3,0. Efter tørring over natriumsulfat udkrystalliserer produktet af ethylacetatopløsningen efter inddampning 9

O

DK 169382 B1 og udrivning. Der sættes 1,5 1 diisopropylether til krystalsuspensionen, og der omrøres i 1 time ved stuetemperatur, skilles fra ved sugning, og produktet tørres i højvakuum over phosphorpentoxid.

5 Udbytte: 256,7 g. Smp. 138-139°C.

b) 2-Carbobenzoxy-3~carboxy-l,2,3,4-tetrahydroiso- guinolin-tert.-butylester._

Til en opløsning af 248,8 g (0,8 mol) 2-carbobenz-oxy-3-carboxy-l,2,3,4-tetrahydroisoquinolin i 1600 ml 10 methylenchlorid sættes 312 ml tert.-butanol og 8 g 4-di-methylaminopyridin. Der afkøles til -5°C og tilsættes derpå portionsvis en opløsning af 176 g dicyclohexylcarbo-diimid i 350 ml methylenchlorid. Der omrøres i 5 timer ved 0°C, hvorefter blandingen henstilles i 16 timer ved stue-15 temperatur. Efter frasugning af dicyclohexylurinstof eks-traheres reaktionsopløsningen tre gange med mættet natri-umhydrogencarbonatopløsning. Der tørres over magnesiumsulfat, inddampes i vakuum ved stuetemperatur til en olieagtig konsistens. Som remanens fås 286 g produkt i form 20 af en gullig olie (97% af det teoretiske).

NMR: 7,30s (5H), 7,20s (4H), 5,l-4,3m (3H), 5,Os (2H), 1,46s (9H).

c) 3-Carboxy-l,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-tert.- -butylester-hydrochlorid._ 25 284 g (0,775 mol) 2-carbobenzoxy~3~carboxy-l,2,3,4- -tetrahydroisoquinolin-tert.-butylester opløses i 3 1 methanol, der tilsættes 15 g 10%'s Pd-bariumsulfatkatalysa-tor og hydrogeneres med hydrogen ved normaltryk. Opløsningens pH-værdi holdes på 4,0 ved tildrypning af 1 N metha-30 nolisk HC1 (glaselektrode). Katalysatoren frasuges, og opløsningen inddampes til tørhed i vakuum ved stuetemperatur. Det krystalliserede produkt udrives med vandfri ether, suges fra og tørres i vakuum over phosphorpentoxid.

Udbytte: 156 g. Smp. 180°C (sønderdeling).

35 Tosylatet kan enten fremstilles ved tilsætning af methanolisk toluensulfonsyre i stedet for methanolisk saltsyre under hydrogeneringen, eller hydrochloridet opløses 10 DK 169382 B1 i vand, tilsættes den beregnede mængde natriumtosylat og afkøles under podning og omrøring til ca. 4°C. Derved udfælder tosylatet i krystallinsk form. Krystallerne frafil-treres, vaskes med vand og tørres.

5 Smp. 139-140°C (sønderdeling).

d) Carbobenzoxy-L-alanyl-3-carboxyl-l,2,3,4-tetra- hydroisoquinolin-tert.-butylester._ 27 g (0,15 mol) 3-carboxy-l,2,3,4-tetrahydroiso-quinolin-tert.-butylesterhydrochlorid suspenderes i 200 ml -*-0 dimethylformamid. Der afkøles under omrøring og udelukkelse af fugtighed til -5°C og tilsættes 19 ml (0,15 mol) N-ethyl-morpholin samt en opløsning af 33,4 g carbobenzoxyalanin, 20 g N-hyroxybenzotriazol og 33 g dicyclohexylcarbodiimid i 100 ml dimethylformamid. Der omrøres i 1 time ved 0°C, blandingen henstilles natten over ved 4°C og oparbejdes derpå efter 1 time's omrøring ved stuetemperatur. Udskilt dicyclohexylurinstof fraskilles ved sugning, og reaktionsopløsningen tørres i højvakuum ved stuetemperatur. Remanensolien optages i 1 liter ethylacetat og vaskes tre gange 20 med portioner på hver 150 ml mættet natriumcarbonatopløsning, 5% kaliumhydrogensulfatopløsning og én gang med vand. Efter tørring over vandfrit natriumsulfat afdestilleres opløsningsmidlet i vakuum ved stuetemperatur.

Udbytte: 59 g olie.

25 e) L-alanyl-3-carboxy-l,2,3,4-tetrahydroisoquino- lin-tert.-butylester-hydrochlorid (Ala-Tic-0-But)_ 15 g Carbobenzoxy-alanyl-3-carboxy-l,2,3,4-tetra-. hydro-isoquinolin-tert.-butylester hydrogeneres i 400 ml methanol med 8 g 10%'s Pd/bariumsulfatkatalysator. Opløs-30 ningens tilsyneladende pH-værdi (glaselektrode) holdes ved 4,0 ved tilsætning af 1 N methanolisk saltsyre. Efter 8 timer fraskilles katalysatoren ved sugning, og opløsningen inddampes til tørhed i vakuum ved stuetemperatur. Den faste remanens digereres med diisopropylether og tørres 35 i vakuum.

Smp. 110°C (sønderdeling) 11 DK 169382 B1 o coo-t-c4H9 nedenstående forbindelser har ft T T følgende signaler fælles: ?,2S (4H); 5,1“4,3m (3H15 3'9“3'0m o R (4H); 1,4s (9K) 5 for R : H 7,2s (4H)j 3,9~3,0m (5H) N-13,1s (1H); 7,Ss (IH) ; 6,8s (IH); 10 U 2,8m (2H)

H

CB

3^CH-CH,- 1,5a (3H),; 0,9d (6H) 15 CK2F- 5,1-4,3b (5H) CH3-CH2-CK- 1,5-1,0a (9H) 20 * CH3 (3-CK2- 7,IS (5H); 2,7d (2H) 25 .. C82

Cl· ]l 7,8-6,4n (9H)

H

HO-CH2- 3,7d (2H) 30 35

O

12 DK 169382 B1 f) N-(l-carboxy-3-phenylpropyl)-L-alanyl-1,2,3,4--tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre-tert.-butylester.

305 mg Alanyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3-carb-oxylsyrebutylester (Ala-Tic-OBut) og 445 mg 4-phenyl-2-5 -oxo-smørsyre opløses i 4 ml methanol og indstilles på pH-værdi 7,5 med vandig 1 N NaOH. Der tilsættes 200 mg natri-umcyanoborhydrid, og blandingen reagerer i 36 timer. Der inddampes til tørhed, og stoffet udvindes ved søjlechroma-tografi på silicagel (løbemiddelsystem: chloroform/methanol/-10 vand/iseddike 20+15+2+1).

Udbytte: 382 mg. Smp. fra 120°C (sønderdeling) g) N-(l-carboxy-3-phenylpropyl)-L-alanyl-1,2,3,4- -tetrahydroisoguinolin-3-carboxylsyre_ 350 mg N-(l-carboxy-3-Phenylpropyl)-Ala-Tic-OBut 15 opløses i 3 ml vandfri trifluoreddikesyre og henstilles i 30 minutter ved stuetemperatur. Der inddampes i vakuum, og remanensolien udrives med kold diisopropylether og pe-troleumsether.

Udbytte: 276 mg amorft stof.

20 NMR: 7,20 og 7,10 (s), 4,3 (s, bred), 3,0-3,9 (m, bred), 1,23 og 1,15 (d).

Eksempel 2 N-(l-carbethoxy-3-phenyl-propyl)-L-alanyl-1,2,3,4-tetra- hydroisoquinolin-3-carboxylsyre._ 25 4,8 g H-Ala-Tic-0 Bu · Tos-0H opløses i 40 ml ab solut ethanol, pH-værdien indstilles på 7 med KOH i ethanol, der tilsættes 6,2 g 2-oxo-4-phenylsmørsyre-ethylester, og omrøres i nærværelse af 9 g pulveriseret molekularsigte 4 Å under langsom tilsætning af en opløsning af 2 g natri-30 umcyanoborhydrid i 15 ml absolut ethanol. Efter ca. 20 timer filtreres blandingen, og opløsningsmidlet bortdestilleres i vakuum. Remanensen fordeles mellem ethylacetat og vand, ethylacetatfasen skilles fra og tørres i vakuum. Remanensen chromatograferes på silicagel med ethylacetat/-35 cyclohexan (1:2 - 1:4) som løbemiddel.

13

O

DK 169382 B1

Produktet opløses i 20 ml trifluoreddikesyre og omrøres i 30 minutter ved stuetemperatur. Trifluoreddike-syren bortdestilleres i vakuum, der efterdestilleres med toluen og chromatograferes over silicagel i methylenchlo-5 rid/methanol (10:1).

Udbytte: 2,2 g.

Eksempel 3 N-(l-carboxy-5-aminopentyl)-L-alanyl-1,2,3,4- -tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre. _ 10 1,2 g N-(l-carboxy-5-Boc-aminopentyl)-L-alanyl- -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre overhældes med 10 ml iskold trifluoreddikesyre, og der omrøres i 1 time ved stuetemperatur. Derefter inddampes der i vakuum. Remanensen opløses i vand og frysetørres.

15 Udbytte: 0,95 g.

Eksempel 4 N-(1-carboxy-3-phenyl-propyl)-L-alanyl-1,2,3,4--tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre._ 880 mg N-(l-carbethoxy-3-phenyl-propyl)-L-alanyl-20 -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre opløses i 20 ml dioxan/vand (9:1) og forsæbes ved stuetemperatur med 4,5 ml 1 N natriumhydroxidopløsning. Efter 1 time syrnes opløsningen med den ækvivalente mængde 1 N saltsyre, og dioxanen afdampes i vid udstrækning. Remanensen ekstrahe-25 res flere gange med ethylacetat, og efter fjernelse af opløsningsmidlet chromatograferes den organiske fase over en kationbytter (D0WEX 50).

Udbytte: 630 mg.

Eksempel 5 30 N-(l-carbethoxy-3-amino-propyl)-L-alanyl-1,2,3,4- -tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre._ 1,1 g N-(l-carbethoxy-3-benzoxycarbonylamino-pro-pyl)-L-alanyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3-carboxyl-syre opløses i 150 ml methanol og hydrogeneres i nærværel-35 se af 100 mg 10%'s palladium-aktivt kul ved 40°C under 14 DK 169382 B1 o normaltryk. Efter endt omsætning frafiltreres katalysatoren, og opløsningsmidlet fjernes i vakuum.

Udbytte: 0,79 g.

Eksempel 6 5 N-(l-carboxy-3-phenyl-3-thiapropyl)-alanyl-1,2,3,4-te- trahydroisoquinolin-3-carboxylsyre._ a) 2-(2-oxo-propionyl)-1,2,3,4-tetrahydroiso- quinolin-3-carboxylsyre-tert.-butylester._ I en til -50°C afkølet opløsning af 700 mg 10 Tic-OBut og 630 mg dicyclohexylcarbodiimid i 15 ml vandfri chloroform indrøres hurtigt en afkølet og frisk destilleret opløsning af 270 mg pyrodruesyre i 5 ml chloroform. Blandingen henstilles i 16 timer i en dybfryser (-20°C), og det udfældede DC-urinstof frafiltre-15 res. Opløsningen vaskes med KHS04~ og derpå med KHC03~ -opløsning, der tørres over Na3S04 og inddampes i vakuum.

Den i form af en olie fremkomne forbindelse indeholder noget dicyclohexylurinstof. Den chromatograferes til analyse over silicagel i et system af CHC13/CH30H (15:1).

20 Analogt med kondensationen af pyrodruesyre med

Tic-OBut fremstilles nedenstående kondensationsprodukter af Tic, Ide og den tilsvarende a-ketocarboxylsyre.

Ved de efterfølgende forbindelser ρς ^COO-t-c/ή iagttages følgende ensartede sig- o 49 naler for grundskelettet 7,2s (4H), 5,l-4,3m (3H), I 3,9-3,0 m (2H), 1,4s (9H) 30 -CH 13,1s (1H)? 7-*5s 6'8s (1H)i I_NH 3,9-3,Om (4h) -CH--CH(CH,) _ 2,4-1,0 m+d (9H) ^ o 2 35 15

O

DK 169382 B1

- CH-F

2 4,4s (2H) 5 2 \-_/ 7,15s (5H); 2,Os (2H) «-ΓΗ 2 I 2 c‘*3 2,4-1,9ra (3H) ; 1,5-1,Om (3h) CH3 10 - CH-,η- 2 \\I I I 7,8-6,4m (9H); 3,9-2,9m (4H)

H

15 b) N- (l-carboxy-3-phenyl-3-thiapropyl)-alanyl- -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre-tert.-butyl-ester._ 1,52 g Pyruvyl-Tic-OBut og 394 mg S-phenyl-cystein 20 opløses i 5 ml methanol, og opløsningen indstilles på pH-værdi 7,0 med 1 N vandig NaOH. Der tilsættes 400 mg natriumcyanoborhydrid, og blandingen henstilles i 24 timer ved stuetemperatur. Der inddampes i vakuum, optages i chloroform, tørres over natriumsulfat og inddampes. Produktet 25 fås i ren form ved silicaqel-chromatoqrafi (system: CHCl3/CH3OH/CH3COOH/H^O 50/20/5/1).

NMR: 7,3-7,Om (9H), 5,l-4,3m (3H), 3,9-3,Om (4H), 2,5m (2H) .

c) N-(l-carboxy-3-phenyl-3-thiapropyl)-alanyl- -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre._ 30 1 g Butylester fra eksempel 6 b) opløses i 5 ml trifluoreddikesyre. Der inddampes efter 30 minutter i vakuum, remanensen digereres med diisopropylether oq tørres over kaliumhydroxid.

Udbytte: 0,95 g trifluoracetat (hygroskopisk).

35 NMR: 7,4-7,lm (9H) , 5,2-4,4m (3H) , 3,9-3,Om (4H) , 2,5m (2H), 1,25m (3H).

16 DK 169382 B1

Eksempel 7 N-(2-amino-l-carboxypropyl)-L-alanyl-1,2,3,4-tetrahydro- isoquinolin-3-carboxylsyre._ 2,2 g N^-Boc-cc,3-diaminosmørsyre, fremstillet 5 ifølge Coll. czech. chem. Commun. 31, 2955 (1966) ana-

V

logt med N'-Boc-forbindelsen, omsættes med 2,4 g pyruvyl--Tic-OBut, fremstillet ifølge eksempel 6a), på den i eksempel 6b) beskrevne måde. Boc-beskyttelsesgruppen fraspaltes derefter på den i eksempel 3 beskrevne måde.

Udbytte: 2,6 g.

De i de følgende eksempler anførte forbindelser er fremstillet efter én af nedenstående metoder A-H.

Disse metoder karakteriseres på følgende måde:

Metode A: Reduktiv aminering af et kondensationsprodukt 15 af Tic eller Dic-OtC^H^-ester eller benzylester eller Oic-OtC4H9-ester eller benzylester og en tilsvarende a-ketocarboxylsyre, fremstillet ifølge eksempel 6 a), med et tilsvarende aminosyrederivat ifølge eksempel 6b), fra-spaltning af beskyttelsesgrupperne ifølge eksempel 6c) og 20 eventuelt forsæbning.

Metode B: Reduktiv aminering af en dipeptid-t-butylester, fremstillet ifølge eksempel 1 e), med et tilsvarende a-ke-tocarboxylsyrederivat ifølge eksempel 1 f) og eventuelt fraspaltning af beskyttelsesgrupperne.

25 Metode C: Reduktiv aminering ifølge metode A og med en ω-beskyttet bifunktionel aminosyre, fraspaltning af en beskyttelsesgruppe fra det anvendte aminosyrederivat ifølge eksempel.

Såfremt intet andet er angivet gælder for de efter-30 følgende forbindelser følgende NMR-data (6-værdier i ppm., TMS som standard): A = benzenring: for n = 1 7,3s (4H), 5,l-4,3m (3H) 3,9-3,Om (4H) 35 17 DK 169382 B1 Når der er tale om en ethylester optræder yderligere følgende signaler: 4.2 q 7 Hz (2H) 1.2 t 7 Hz (3H).

5 10 15 20 18 DK 169382 B1 ffi oo -d

Γ0 s—' M

S-«»

TS H

•ΰ K ca Μ ro >· ·“ *. ^ H ^

H W

'd ·* *' ^ c? w tri H r^g 00 w M* s É M ·& - Ό - M *

Η H

1 g co m j-j.

Ρί Η Η M tC

S rH VD

ST « g g Ό m o ro

SX N—* K

- - co o* ε ε i i jo*

"ί ro σι 10 EC

·· - * - to Μ M CO M -—·

J

o % ^ < u c ^ P s 0-¾ n ff £ £· „ *~ϊ _ & X & & S 9-¾ ><T o c ·

δ S « f V Γ I

\—/ Ϋ ? ί ί /Λ i £ £ ^ ^ é1 é1 é1 ί

C Η Η Η H

^ 4-> -P

•PH) 0)

Qi *2L 'T· °SL

•ns d> -p σ> .S» Ώ S Ώ >d p .ro p ø U1 T5 sr in id p t" in i i i t"* σι m

HioincoOO H t" 19 DK 169382 B1 x co s»/

s I

-

^ CM

K r3 S3 H

S Η co

<- .« -* · V

g g £“ Ό S? S3 ft ft ro cm co cm ^ ^ ^ ^ 'w' HH H _,

I I Ό Ό S

VD VO CM ·« CM tn .» «. ·. .—. s «> QJ Η Η H S3 *“1 ^ g vg g g g e g i i i i l a a kV S S » »

CM CM CM CO CM CM

J

M Huu<ccc<! 8 i $-¾ <& i Æ £ «—f S3 S3 C? cS° S3 u g é-H« V<7° .

I ! ”« f f « * l \ / * g ? 8 ?

\ / (M CM I CM I I

/~\ s s ir ? <? f \=/ ►g* H ro U jp co jo cp

05 S T 5 O ϋ S

S5 a?

B H

0) -cd »ro “(d •cd S' j? J? -at* cm cn h cn o

Ο Η H CM

HI II

I CO VO Bf

>cMOini>cocnq IT) VOt''OHr-'HOiHH

[*» [ '— H H v—' H CM

20 DK 169382 B1

B

·*· CM

,,--- V--'

·*· W

.—. .—. co S

B B

cm in r- ^ w - - « h ε ε *- t*« r- cm Η H - S' ^ »3· ·». ··. g -— C? g» cm b b w j-j. ε cm cm K in — ε n «-

_ _ UD CM

ε g ^ i

VO 10 CM Ό CO

- - CM

CM CM ·- ^ CM

g .. ·' ffi

2 g- B B

σ> B <Ti te od "-^n — o cm ^

iS Ό jS ^ ε JS

CM CM CM 'S1 f- CM

fe. fe. fe. fe. fe» fe» f·' h r' t-' h C'» <u M fim m m m i s "« £ £ £

te as ” CM „ CM CM

** T υ te u u HJ * q q. q q, \ / ¥ δ € f ¥

/ \ δ S δ S

\ —~ / rj h S1 te te1 ό K S S o 8

C -ti Η Η Η H

** (U

S

s 0 lf)

CM

H

HH CM Π cm in in in in

'—' CM CM CM CM

21 DK 169382 B1

• W

aa cg £

/•S

W H

·*» <ς}* ^ v-^ ·«.

•'I' g <o> W

w n ¢3 pg * pg ^ g Φ w;=· c

co I W S

- oo g ro t" pg · t" ^ *· i pg cm co pg Ό

v »*. CN

(S *^s<% *· r~>

K E SK ~H X

g «-CO CO vo W K) g ΛXi- >_^W CO ·' ^ S g g g 'Tw g S' '--ro η co σι pg oi co %* «. ». *» ·>· ^ tø H P'H Ό VO _

Ål II I g I TS

pjco og co in p io pg •kV ^ S *. *. «V ^ 00 Η Γ*" r-i Γ^Η j

n R CQ PQ PQ PQ

^ *

?-"* "K S

a ? XX tf S3 s ?-H« ><, d b b i i % V v A.

\ / v ? v /~Λ δ β" b" W > PI ^ H U JC5 JP Jp k r β δ s

53 X

tS1 x1

("3 rg H iH H

10 VO Ρ» 00

10 LO IO LO

pg pg pg pg 22 DK 169382 B1 ·«» s ffi

CM

»W* g C*» ·- ·*·

H X X

·- 'i' X w x w x g 3 g cm n w n >-<· k. ·.

^ m g cm

g I ro I

o* æ » r» - «-CM *»

CM CM I CM

f- •k *k V , *k Éx «2 N o S* 2“ co 2-w ·' h_ £-2.

ea gg *ε gg h m in co ^ οα <h ro

[- _ CO rt CO H > H

I Ό II Λ I II

CO CM CM C" CM coco S Sk ^ ^ K V ^ «,

Γ- H p·** Η p·- Η C-'- tH

a>

<& | « Λ m X

?-* "« s—s tu 4« ^ X S X ffi § ?-« § O f \— . /-\ O O pj rt ,¾ ^ 9 ^ •as “ > V >

W ? i t V

is’s \ — / CM in S1 3» 3 α n ose ® k k k X X £

C Η Η ιΗ H

ijj s 3 o CTl CD H CM n

10 CM Ό Φ CD

CM '— CM CM CM

23 DK 169382 B1 ém 5Γ w w ^ oo cm^ cm ^ g g β ». O' C* vo H * *> '

H CO CO

• V

<—» ·' ·» ·» * X w v,' oo vo n ot g ras ras - [ζ σ\ n co n ro *. ·.·— * ^ i oo η . n o Ό Φ ^ ·< (N CN] & ^ £* ffi η" ίΰ h g ·*· S ^ § g a ss sk w co cn n cn ^ oj m vo vo ^ vo Λ ΙΌ I β I β oo cm co ro o- n O' a» ^ ^ ^ «» **

θ' Γ^· H O' H O H

& % I « ffl « « % i ag1 « I h « 3* 3* i* 8 o=o h g« g« II * H ^ ^ s·^" tt l f. i S~ ^ f i? i tS*

^ H HH H

-rr in vo c* vo vo VO vo

OO CM OO CO

24 DK 169382 B1 • *» · h, a a a a

M^ Γ4 03 CM

g 5 S e t'· t-~ Γ' ·' f-

^ **. ». ,*-V ' »S

H HH B H

*K 9¼ W li.

X ffi K g B

CS co cg ^ ^ og «*» s. v *. ·» og cg cg og og ··«► 4¾ (¼ 1¼ g a a a aa a S r* > t" co co 2 ' V—* S—' v»/ 'w' Vw* s a g aT g a g g g a co ro o co G\ co co n h co - s— s s— V ''—" s «, V ''—' VO CO KO CO Η Γ·~

I Ό I Ό I Ό II I tJ

M* CO CO M CO M M* CO COM

*- V. <*. «. *. .* * h.

t" H ί*» H C" H f^H CO ri <u η> -S a a a a a

p S

—^ ^ 2P 2P JP in «a a a a

W X, M MM M

ain uouacy 8 ψ—a

,Hj ° . Q-s Q- Q D· O

if “ Ji- V V V L

\ / i uuu *

)-{ *· « « m V

Λ \ u 5 5 3 g \—/ ^ H« i § $ ? § a a1

C Η Η Η Η H

f

•(O

S' 3 σι

CO CO Ο Η M CO

co m t" r~ > t^-

M w Μ Μ Μ M

25 DK 169382 B1

- E

^ _ n

JtJ S w »- 03 <53 >-* w ^*«3 s 03 03 03 ·* 2 ** N—^

> ·' H E

·. ^ g CM

H ffi ·» w

Fjj o -

•»k JTJ *. S

~ CN 03 CM_ J g *' ^ (i t ^ '—'S* e e *. σι Η η m n c\) - tø ^ n ·* cm _ __, ·. ^ T3 tø Ό

- E CM CM CM CM

E CO * » * "

Qi O Ew CO H COH

g H LO

n «w' '·«-»' tø ·*» ·*» **» ·«*

g a g °- E E E E

inn o cm h cm H cm k. Sw^ < V-/N-" V-' ^ ko o- ··*

I Τί I C' to fi Ih G

CO 03 03 r- HO- k. M, *»(N ** *k *t k*

> Η Γ~ —' li) ri CO H

Φ n He e e e g å ?-"« ”K £ £ £ £

X f U O U U

S Y & ™ CM CM CM

8 ί—o Vs 5 5 \ ^ 'cm 'cm 'cm

/ xe 5 g S SS

i i ^ V\ * V\ x"cr_/=^ j )=( x"

H o r' 5K M

W s h, J? £> 4? 4? te g 0 0 ø

g H H rH pH

ΙΩ VD Γ- Γ- f' C- C''

CM CM CM CM

DK 169382 B1 26

K

K K ™ CM CM _ ^ w ~ C? fi «

^ „ K C" CM

jg ε μ *· ""

CO ^ H

*· - g

Η H Jjj ·* CO

^ ΪΧί H

κ κ H - cm cm ··> _ λ w w —^ g κ _, κ <§ ft

£ g CM

H o ^ cm η" cn jj ·- ' — fxj n g S* K ™ ™ 5? Ό \ΰ ^

g w* w Ο ω W

” —W ^ CM -—s VD

e aa g aa hk k —k in n ^ η ^ n «tf m n

·.'— «.w '—· «. W

n· . ra. c- _ oj i Ό i Ό o Ό i Ό Ό

in CM CO CM "CM (Ti CM CM CM

^ ^ ^ CO * ^ ^ k

CO H CO H HH Is» H CO H

J

η B a m (Q m m g i 0-¾ n tf ff ff ff ff “—ΐ i1 c? t? (? t? δ ?rH« \ / ° =~ g" a_s af* V-

>~*\ ? V ^ I ? 3 S

i £ % <T5 °~0 Η ε\ g- H

\7 O ri f n u, / \ ^ ^ δ" Μ, I V, w H“ i € § i i

C Η H HH H

•ro

S

3

CM

co o\ o H co n

Γ' Γ" CO CO CM CO

CM CM CM CM CM

27 DK 169382 B1 å *k

H

·* CO

a H' ? (Ti ·«· s s h s M at* in

v w ·- S

M g g ·» η n o j-s - - cn ·~ S cm o n ms i m - i '-'η r· σι Η σι W *. «* s g cm n ··> n r* Ό -«-s s. O ·*«. ·*“ W ·** (NJ ·* s CO •'’—s S H s s^ s g ··* co co _, co g ^ ·*. ·— —Ό —

C* S* g g j- SS

0 η Η σι cm s w w ^ w r- ^ vø ·* _ Λ Ti IS I I g CM CM <4*0 nffi Ί1 h * *· «. H ''S* ^

t^H fk W f- W l> CM

M

n 5 η n n n jjj å ?-t& % £ sif ®-f 6* s (? a S $3¾ 3

X- ri 0 A

li t c β ζΐ \ / F"i s =~ I» h W 5 £ H* g r g s C Η Η Η H 4-) ” Φ

•cO

4-) Ό 1 3 •to

Di O

« σι 3 cm t" d af Ifl V0 00 00 00

CO CO CO CM CO CM

CM CM CM ^ pq w 28 DK 169392 B1 K c3 S' n S'

n ^ oo ^ CM

w --- g tj ts ε oo g oo S - t- ' v ^ ¢-I --

H O] ro CM

·* ·* ^ m

ffi K * KK

oo_ co^ n g ^ o\ ® g ω ω '"f I m Ό co σι co O σι σι · -- *· CTl OO - - ου η η - no ο **> ·** lk ^ I«, Ik ry « S' ST^ S æffi

§j CO F F W H VOLD

S ’'>»'* >—' '«-ΜΓ) V NW’W' ε ε S' gw g g g 0 nn 'j* in in oo n ·* v k, w «k k. k.

0* vo 10 H CO ID H

1 I Ό II I II

co oo ru ru o co oo σι ' V ' ' ' — *.*.

Γ" r^H n-ru η» γή

S

„ H CQ CQ CQ CQ m ^ * * I~“ « i w 5f w S5 u u a 5 $-¾ aTa” n

O 0=0 ^ u r—, o o S

V*7 -« - -- ~fY O W

j ^ i s ? r=\ LJ

o o * r il D =7 = Ή 0 V » f ϊ O s v f f „ ss

•fc S 5" -S s” -S

5 6 'sy* *w

£ Η Η Η Η H

ί ·& 3 oo η σι n «3· in co σι ου σι σι σι σι oo —-ru oo oo oo 29 DK 169382 B1

ίΤί -—t K

m c- K K CO

w »u co r> w

rv*\ '---- W

-o *> _ _ n <n _ Ό rt cm - Ό ca cg »·

H ci * *· H

·« ρί rH

• v H ·-

hi ·*. »—v *-—. K

cj o K W cg w 35 cg cg ^ ^ w w

* i t · Ί cT

cg - cj cj cg ·. ·*. ··. ^

S k o SK O

fel f- S CO H

Λ [s* 'W' W 'W'

I σ> $ ϋ I

V μ ^ ^ *· VO VO VO Γ» vo

II II I

co ro ^ vo co ·»* "*. **· "w r~ c* r*· oo c-

Jj

^ ^ CQ CQ CQ ¢0 CQ

^ ¾ pr* pr « i. H * w kw w S 0—& 8 6=o V-7 _ _ € J ^ ^,= Λ, Γ\ »" V_ i i "“hf /-^ H *-/ l)=

H f f f@Q

ro n JO cp jp g g δ δ δ

^ Η H ri Η H

CO CT> O H

σ> σ> σ> o o

CM CJ CM CO CO

30 DK 169382 B1 ··

S w K

c*2__ n - e ό rs k S' CT “ cm cm co co

E* rt H

w i Ό m CO *w *·» i Η K K Η co

o CM CM

» ·* —· '— ..

Sg a i f as n ,n CO CO _ _ ..o g ω T3

·*· O ·κ ^ S ·ή* CS

fs/ W* ♦'“N .—fe «*. fe V

S S M æ K CM VØH

S LO VO Φ (M ***** * * 'W' N^> t fe tfe tfe all å i S af

* fe. fe N—* 'W W

jj g ^ ^ w ω g

^w° in co o H<S

«Λ-ίΐ· “ - - - -

r'CMc-l CO CO oo CO CM

Jj % 1 W ® « « « ^ n« tif S—S3 oa

jr* ϊΐί «π ° ætCKK

g y—* « 0 0=0 -Τ' vs7 E\ , > L-

/ XC p=\ JO 2 N Jt Λ—λ C U

1 f * p-c O* *0 )=, o=H

V/ f O O Yiy ) \ " Γ 5> W f -" ·° δ "οι ^ S1 S1 ^ S1 2> S G o δ δ

® Η rH Η Η H

J? 3

CO

cm o 'i m vo o co o o o o

CO '-'CO CO CO CO

31 DK 169382 B1 5? 5Γ w æ S æ CO CM CO VO —' vo • *h N—' «W W w _ Ό 53¾ E 'O tf oc Td n o > cm σι * cn w < ·. < *» o »*

Η Η H O O

Ifl f>. ··* ·*» ». ·*. N ··* ·* .»-"S <-·* *-N, «*·"* S <"> n 53 53 53 53 H 53

LO CM CM CO H F

• b, S*-" 'W' N—*» %-✓ 'W' 'w*

5? g S E tf E E

H co σι σι cm η n

'-' ^ ^ I» V

H CM CM Η Η H

tfl I I I

«3* cb ·- ·« ·- σ> σι . ·* ** *~*s ***+ *· *

g VOH 53 53 53 Η H

S Ό to t" J2J *b* #«b 'S·*' Si#' W ·* »k

5f? flf i M n M

S^K^O s s—' b, b. S—^ S—^

Γ"«· fs pH

ω g i tf i i E g hcS c- cm r- <n •tf ^ K >». *. S ** ^ ^ ^

CO CM p«. H C'· H CM CM

0) ro, -P« 53 CQ ri! Λ 53

^ S

?CM

— K co in in lo tfi ic)

Pi 53 53 53 53 53 _ “_i ri a c? c? c? £ c? 8 ? \_J~° 8" - tf 9 i i * e=0 ( f I s, %

H s. h* H< f I

// \ o N 1=/ U a " W v é1 ~ " ti ^ „ S δ £ 5 S δ k i δ £ £

C pH γΗ γΗ -P rH rH rH

8

®CD

S' 3

CM

CO

H

CO σι O H LO VD t"·

O O H CO CM CM CM

CO CO CO CO CO CO

32 DK 169382 B1 ·* ··» S' S' S' S' co cg cg ro g in Ό B g Ό » ro σϊ σι cm γΗ *» >» *» ·* Η (Ν CN Η * ·"* ·*>. «*» ·*.

ίχί cg W W W χ ^ oj η η cg ^W '_' V_' g c-* g in in g » co m co σϊ eg - * - eg co eo eg »h. ,—_ ·* ·· ·V *w I x x xx g £, £. £. £- g °r ,g g S' g S' g OH in η ^ η o W * *. %. «, ·* vo vo vo r-*

1-7 I I Ό I Ό I

cotd eo co eg vo eg to »k OJ *» *. ·» *.

t^'-' Is- C^H Is» H

J

^ |j < CQ CQ CQ CQ

^ <fc jp to in

W—X x XX

I eg eg eg x i_HK u w w α o \ /U=0 =* /-\ V „ cn a* / tg == u ^ J? S O cj Or,

ff * V K V A K

K § R

W W β B B" 0 16 €§§§§

C S' Η Η Η Η H

<9 •ro <n eg co co eg ο H eg co ^ co co co co co co '-'to co eo co co 33 DK 169382 B1

Λ ^ X W

w x w B G.

CO ro CO H

w w >*’ *» CM ro tj Ό ω i °i cm oa co in _7 ·. ·. ·. *. π

Η H CM CM

·' ·> ·' ·' g* 1111“ i i i s ( •k *. *» ^ m

03 03 03 CO Y

·«. ·». ··* c\ K ^

Éy—kk Λ ^ CO

« « S co ^ n F co co .

w w' >—· ·* Ό i s sg g3 1 O* O* O* ·* tn I I I Ό g CT m CO CO ^ CM Ifl Cd - - ' >- »M1 in p- CO O« Η ΙΠ “*

J

cr +j cq cq « C *d s s $-¾ % ff cc—s ^ _

EiriH cdwucdw 8 5-¾ 8 u=o / K H f gn ' O ' ^ b h o o / V s* b" b X——-/ w ° 'PL ro cp cp rp cp “ s g g s s

C Η Η H -U Η H

S

•ro tJi Λ ϋ -p 3 Φ •co σ> &i co *3 ro 3 co , cm

in io o» co O H

ro co co ro Ί1 ro co co ro w ro ro —* 34 DK 169382 B1

X X

CO CO

g S

tn in V «.

Η H

•k. «V

«·—N «"—S

æ x ro ro i å %► «.

ro ro I« ··* i x x g co co

U3 VO

I I

in in r~

J

co I

^ g <3 < 5-¾ « Ϊ Pi Jp X 'f “ro § 5-¾ ϋ * 8 α—o , , \ ,/ * >—fc o o / \- n i /c * ^T1

ff ff ** A I

y; o s o o

C Η H

CO ^ O' -O*

CO CO

DK 169382 B1 35

FORSØGSRAPPORT

1. Metode ACE-Bestemmelse 5 ACE er primært ansvarlig for hdyrolysen af angioten sin I til vasopressor-octapeptidet angiotensin II. Dets aktivitet kan bestemmes ved anvendelse af hippuryl-l-his-tidyl-l-leucin (HHL) eller hippuryl-glycidyl-glycin som substrat.

10 1.1 Enzym 10 g kaninlungepulver ekstraheres med 100 ml af en kaliumphosphatpuffer (50 mM, pH-værdi 8,3) i 10 min. og centrifugeres ved 40.000 g i 40 min. Den ovenstående væske 15 opbevares ved 5°C.

1.2

Enzym-bestemmelsen er en modifikation af fremgangsmåden, der er kendt fra Biochem. Pharmacol. 20, 1673 (1971).

20 Den inhiberende virkning af forbindelser undersøges ved, at 10 μΐ af inhibitoren i destilleret vand eller DMSO sættes til 40 μΐ puffer (750 nM NaCl, 115 m/i kaliumphosphat, pH-værdi 8,3) og 40 μΐ 3-H-HHL (500 μιηοΐ) i 115 mM kaliumphosphatpuffer med en pH-værdi på 8,3. DMSO-indholdet holdes 25 under 1% ved bestemmelserne. Reaktionen startes ved tilsætning af 20 μΐ af den ovennævnte enzymopløsning. Efter in-kubering i 60 min. ved 37°C stoppes reaktionen ved tilsætning af 1 ml 0,1 N saltsyre. (3-H)-Hippursyre ekstraheres derefter med l ml ethylacetat. Efter 10 minutters centrifugering 30 udtages 150-200 μΐ af den ovenstående ethylacetatekstrakt og sættes til 10 ml af en scintillationsopløsning. Ved hjælp af en scintillationstæller måles reaktiviteten, og derudfra beregnes IC50-værdierne.

35 DK 169382 B1 36 2. Resultater

Undersøgte forbindelser_IC50 fmol/literl 5 9j2.10.9 (S) (H,S) /—n CO-CH-NH-CH-CH2-CH2^ j CH3 cooh

10 · CFjCOOH

II

r Y 8,7*io y VV\ CS) (R,S) yr-n „e CO-CH-NH-CH-CH.-CHoKi 15 I I 2 2 s ' ch3 cooh s

III

20 /-v^n^C0°H

kJ^N\ (S) (S) Q

U0-CH-NH-CH-CH2-CH2X^ 5,3*10"^

CH3 COOH

25 (s) COOH EP-A-12 845, {I) fYY eksempel 1 1.5Ί0'8 30 CO-CH-CH,-SH I z CH3 35

Claims

37 DK 169382 B1
1. Analogif remgangsmåde til fremstilling af alanyl-derivater af isoquinolinderivater med formlen I 5 ^^v^COOH (I> (XX ^ CO-CH-HH-CH-COOR l· i’ 10 hvori R^· og R^ er ens eller forskellige og betyder alkyl eller alkenyl med op til 6 carbonatomer, der hver især eventuelt er substitueret med én eller flere ens eller forskellige substituenter valgt blandt 15 fluor, mercapto, hydroxy, amino, carboxy, 20 phenyl, naphthyl, dihydronaphthyl eller tetrahydronaphthyl, der hver især eventuelt er mono- eller disubstitueret med halogen, hydroxy, acetoxy, 25 carboxy, carbamoyl, sulfamoyl, nitro, methyl, 30 ethyl, methoxy og/eller ethoxy; en 5- til 7-leddet monocyclisk eller 9- til 10-leddet bicy-clisk heterocyclisk gruppe, som eventuelt indeholder 1-2 S-35 eller O-atomer og/eller op til 4 N-atomer pr. ring, og som eventuelt er substitueret med 38 DK 169382 B1 halogen, oxygen, hydroxy, carboxy, 5 carbamoyl, sulfamoyl, nitro, alkyl med op til 9 carbonatomer, aralkyl med op til 9 carbonatomer, 10 methoxy og/eller ethoxy; R3 betyder hydrogen, alkyl med 1-6 carbonatomer, alkenyl med 2-6 carbonatomer, aralkyl med 7-14 carbonatomer inklusive p-nitrophenyl, 15 eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at a) en forbindelse med formlen II omsættes med en forbindelse med formlen III {CH2} Γ i i (ii) ^ L N (au >co-ch-q i ' 1 R Q-CH-C00R3 ^111^ 25 »2 hvori R1, R2 og R3 har den ovenfor angivne betydning, det ene Q betyder en nucleofug gruppe, og det andet Q betyder -NH2/ og R4 betyder hydrogen, methyl, ethyl, benzyl eller 30 tert.butyl, og en fremstillet ester eventuelt omdannes til carboxylsyren (R3 og/eller R4 = hydrogen) eller b) en forbindelse med formlen IV P00C-CH-NH-CH-C00P (IV)
35. I R1 R2 39 DK 169382 B1 hvori R1 og R2 har den ovenfor angivne betydning, og P betyder hydrogen, idet et af de to P imidlertid også kan have de andre betydninger af R3 ovenfor eller betyde tert.butyl, omsættes med en forbindelse V Cx,„A " 10 hvori R4 har den ovenfor angivne betydning, i nærværelse af et kondensationsmiddel, og den ene eller begge estergrupper eventuelt omdannes til carboxylsyre, eller c) en forbindelse med formlen VI omsættes med en forbindelse med formlen VII 15 yCH~ AOOR4 Jj I (VI> NcHj/^CO-C^ k1
20 T=C-CO0R3 (VII) hvori R1, R2, R3 og R4 har den ovenfor angivne betydning, det ene T betyder hydrogenatom eller en NH2-gruppe, og det andet T betyder et oxygenatom, og den fremkomne Schiff'ske 25 base reduceres, og svovlfunktioner i den ifølge a) til c) fremstillede forbindelser eventuelt oxideres til sulfoxid eller til sulfon, og den fremstillede forbindelse med formlen I eventuelt omdannes til et salt deraf.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at der fremstilles en forbindelse med formlen I, hvori R1 betyder methyl, og R2 betyder phenethyl eller phenethyl, som er substitueret med halogen, methyl eller methoxy.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kende tegnet ved, at der fremstilles en forbindelse med 40 DK 169382 B1 formlen I, hvori R3 betyder hydrogen, ethyl, butyl, tert.butyl, benzyl eller p-nitrobenzyl.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der fremstilles en forbindelse med formlen
5 I, som er l-[N-(l-carboxy-3-phenylpropyl)-(S)-alanyl]-l,2,- 3.4- tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre eller et fysiologisk acceptabelt salt deraf.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der fremstilles en forbindelse med formlen
10 I, som er l-[N-(l-ethoxycarbonyl-3-phenylpropyl)-(S)-alanyl]- 1.2.3.4- tetrahydroisoquinolin-3-carboxylsyre eller et fysiologisk acceptabelt salt deraf.