DK169885B1

DK169885B1 - Fremgangsmåde til rensning af proteiner fra mælk og mælkederivater

Info

Publication number: DK169885B1
Application number: DK057286A
Authority: DK
Inventors: Robert Peiffer; Jean-Paul Prieels
Original assignee: Oleofina Sa
Priority date: 1985-02-07
Filing date: 1986-02-06
Publication date: 1995-03-27
Also published as: PT81986B; BE901672A; IT1204290B; FI86362C; DK57286A; JPS61246198A; AU5248086A; AT400281B; CH666692A5; DK57286D0; FI86362B; SE468537B; GB2171102A; CA1238633A; ATA29786A; US4667018A; ES8704972A1; GB2171102B; AU598186B2; NO860407L

Description

DK 169885 B1

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til rensning af proteiner, som befinder sig i mælk eller I derivater deraf såsom valle. Navnlig angår opfindelsen en fremgangsmåde til rensning eller ekstraktion af proteiner, idet man behandler dem under passende betingelser i nærvær af et surt gelerbart poiysaccharid med metalioner. Nærmere angivet angår opfindelsen ekstraktion 5 eller rensning ved denne fremgangsmåde af proteiner, som befinder sig i mælk eller derivater deraf, hvis isoelektriske punkt er over 7,5, især lactoferrin, lactoperoxidase og andre analoge produkter.

Det er velkendt, at proteiner såsom lactoferrin og lactoperoxidase har talrige anvendelser i 10 terapien.

På grund af det stadig voksende behov er det ønskværdigt at råde over en enhedsfremgangsmåde, som kan anvendes i forskellige miljøer og til forskellige proteiner, hvilket normalt ikke er tilfældet i øjeblikket.

15 Således har man allerede i fransk patentskrift nr. 2.505.615 foreslået en fremgangsmåde til ekstraktion af to bestemte proteiner fra mælk, men denne fremgangsmåde nødvendiggør især, at man ændrer mælkens pH-værdi. Desuden gøres der ved denne fremgangsmåde brug af pulvere af mineralske absorberende stoffer såsom silicagel i form af makroporøse eller 20 mikroskopiske kugler, som gør det nødvendigt, at man arbejder i et miljø, som er frit for casein og lipider, til undgåelse af hurtig tilstopning af harpiksen.

Man har ligeledes foreslået fremgangsmåder, som gør brug af ionbytterharpikser, hvis partikler er mindre fine end kuglerne eller perlerne i mineralpulver, men som på grund af deres 25 makroporøse struktur ligeledes har den ulempe hurtigt at tilstoppes.

Man har ligeledes foreslået, at man som absorberende materiale benytter kugler eller perler af titanoxid, hvis diameter kan variere mellem 50 micron og nogle centimeter. Imidlertid kræver denne materialetype en forbehandling af mælken og/eller vallen med henblik på reduktion af 30 ionkoncentrationen, hvilket således udgør yderligere operationer samt en modifikation af miljøet.

Det ville være ønskværdigt at disponere over en fremgangsmåde, som tillader let ekstraktion af proteiner fra et så komplekst miljø som helmælk, som navnlig omfatter fedtstoffer, lipidkugler og 35 caseinmiceller, hvilken fremgangsmåde ikke har de ovennævnte ulemper i henseende til tilstopning, og som heller ikke kræver forbehandling af miljøet.

Formålet med den foreliggende opfindelse er at realisere en sådan fremgangsmåde.

5 DK 169885 Bl 2 fe

Det har vist sig, at anvendelsen af sure gelerbare polysaccharider under passende betingelser muliggør en adskillelse og rensning af forskellige mælkeproteiner, uden at der sker nogen * væsentlig ændring af miljøet, fra hvilket man ekstraherer proteinerne.

Gennem den foreliggende opfindelse bliver det muligt at udføre en ekstraktion af proteiner, hvor man skiller proteinerne meget hurtigere end ved andre fremgangsmåder, idet man undgår tilstopning af harpikserne samt enhver forbehandling af miljøet.

10 Gennem opfindelsen bliver det muligt at behandle mælkeproteiner med et isoelektrisk punkt over 7,5.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til rensning af proteiner fra mælk, hvis isoelektriske punkt er over 7,5, er ejendommelig ved, at man (1) lader det miljø, som indeholder det ønskede 15 protein, passere hen over partikler af et surt gelerbart polysaccharid i form af en gel, hvor partiklerne ikke er mindre end 0,5 mm i deres mindste dimension, idet indholdet af surt polysaccharid i gelen ligger mellem 1 og 8 vægtprocent, hvilken gel benyttes i en mængde på 1-20 vægtprocent i en opløsning, hvori den er uopløselig, og (2) at man udvinder proteinerne af en saltopløsning, hvis ionkoncentration er over 0,05% (vægt/rumfang).

20

Det har nu vist sig, at man på uventet måde kan rense og skille de ovennævnte proteiner, når blot partiklerne af det sure gelerbare polysaccharid ikke måler mindre end 0,5 mm i deres mindste dimension.

25 Dette er så meget mere uventet, som de hidtil benyttede harpikser burde have en så stor specifik absorptionsoverflade som muligt på indtil 700 m2/g til gennemførelse af ekstraktionen af proteinerne.

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er de geler, som dannes ud fra de sure gelerbare 30 polysaccharider, imidlertid kun lidet permeable for proteinerne, og af denne grund er absorptionen begrænset til overfladen, hvilket i høj grad reducerer gelens specifikke overflade, som kan være fra 2 x 10'3 til 0,2 m2/g.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen benyttede sure gelerbare polysaccharider vælges 35 blandt alginater og carrageenaner.

Disse sure polysaccharider gelerer, når man bringer dem i kontakt med en opløsning, som indeholder kationer såsom navnlig kationer af alkalimetaller og jordalkalimetaller samt ioner af i.

3 DK 169885 B1 jernrækken og ligeledes ammoniumioner, idet det ligeledes overraskende har vist sig, at man kan adsorbere de ønskede proteiner på den sure polysaccharidgel. Man har desuden konstateret, at fremstillingsmåden for gelen af det sure polysaccharid også er meget vigtig til vellykket gennemførelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

5 Når man vælger alginat som surt polysaccharid, fremstiller man normalt gelen, idet man tager et opløseligt salt af alginat i vandig opløsning, normalt natriumsaltet, som man bringer i kontakt med en kontraion til opnåelse af dannelsen af gelen. Normalt benytter man en opløsning af CaCtø.

10

Man har imidlertid bemærket, at det til opnåelse af en gel, som er anvendelig ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er nødvendigt, at koncentrationen af alginat i gelen ligger mellem veldefinerede grænser, nemlig mellem 1 og 8 vægtprocent, idet resten udgøres af vand.

15 Når koncentrationen af alginat i gelen er mindre end ca. 1%, er gelens stabilitet væsentlig reduceret som følge af overskuddet af vand, hvilket gør den uanvendelig til rensning af proteinerne. Ved en koncentration over 8% iagttager man derimod en forøgelse af viskositeten, som ikke længere gør det muligt at manipulere miljøet bekvemt, så at fremstillingen af gelen bliver praktisk taget umulig.

20

Man kan benytte den opnåede gel under gode betingelser i form af kugler, perler, lameller, tråde, fibre eller endog sammenhængende væv.

Ved en fremgangsmåde ifølge opfindelsen benytter man natriumalginat i vandig opløsning, og 25 man fælder med CaCtø.

Den gel, som fås i den ønskede form, bringes derpå i en opløsning af CaCl2 på en sådan måde, at den altid findes i nærværelse af den ion, som er ansvarlig for geleringen.

30 I en udførelsesform ifølge opfindelsen har mælken eller vallen en tilstrækkelig calciumkoncentration til sikring af alginatgelens stabilitet.

Når man vælger carrageenan som surt polysaccharid, fremstiller man normalt gelen, idet man går ud fra et opløseligt salt af carrageenan i vandig opløsning. Normalt benytter man 35 natriumsaltet, som man bringer i kontakt med en kontraion til opnåelse af gelens dannelse. Normalt benytter man en opløsning af KCI, NH4CI eller RbCI.

4 DK 169885 B1 «·

Man har bemærket, at til opnåelse af en gel, som er anvendelig ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, må koncentrationen af carrageenat i gelen ligge inden for veldefinerede grænser, nemlig mellem 1 og 8% , idet resten udgøres af vand. * 5 Når koncentrationen af carrageenat i gelen er under ca. 1%, er stabiliteten af gelen væsentlig reduceret som følge af overskuddet af vand, hvilket gør den uanvendelig til rensning af proteinerne. Ved en koncentration over 8% iagttager man derimod ligeledes en forøgelse af viskositeten, hvilket ikke mere tillader bekvem håndtering af miljøet, så at fremstillingen af gelen bliver praktisk taget umulig.

10

Ifølge en udførelsesform for opfindelsen benytter man natriumcarrageenat i vandig opløsning, 15 og man gelerer med KCI.

Den opnåede gel anbringes derpå att efter den ønskede form i en opløsning af KCI, så at den altid befinder sig i nærværelse af den ion, som er ansvarlig for geleringen.

20 Uanset det sure polysaccharid, som benyttes til dannelse af gelen, kan man ligeledes deri inkorporere et metaloxid, som er uopløseligt under brugsbetingelserne. Eksempler på oxider, som kan benyttes, er især titanoxid, zirconoxid, siliciumoxid, aluminiumoxid, sepiolith og analoge stoffer. Den inkorporerede oxidmængde overstiger normalt ikke 3 vægtprocent.

Imidlertid kan større mængder være nyttige uden dog at medføre en afgørende virkning.

25

Efter fremgangsmåden ifølge opfindelsen benytter man den således opnåede gel i en mængde mellem 1 og 20 rumfangsprocent i forhold til proteinopløsningen. Denne mængde afhænger ligeledes af koncentrationen af de proteiner, som skal adsorberes.

30 Hvad angår de proteiner, som kan fraskilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, bør de have et isoelektrisk punkt på mindst 7,5. Eksempler på proteiner fra mælk, som kan skilles og renses ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er især lactoferrin, lactoperoxidase, visse immunoglobuliner og andre analoge proteiner. I det tilfælde, hvor man benytter en alginatgel, « kan man benytte CaCl2 eller en blanding af ioner, som indeholder CaCl2 i tilstrækkelig 35 mængde, til eluering af de proteiner, som således er adsorberet til gelen.

ψ

Koncentrationen af den saltopløsning, som benyttes til eluering af proteinerne fra alginatgelen, er ikke kritisk, Den afhænger af det benyttede salt, af proteinet og af opløsningens pH-værdi.

5 DK 169885 B1 Når man benytter CaCtø , arbejder man således ved en koncentration på mindst 0,1% (vægt/rumfang).

Det salt, som benyttes til eluering af proteinet fra gelen, kan være, men behøver ikke at være 5 det samme, som benyttes ti! dens adsorption. Når man benytter to forskellige salte, må de naturligvis være forligelige, hvilket vil sige, at de ikke reagerer på den måde, at de selv danner en udfældning.

Før man påbegynder en ny eluering, vasker man normalt beholderen og alginatgelen med en 10 opløsning af salt, hvis koncentration er tilstrækkelig til ikke at gøre gelen ustabil. Som oftest benytter man en opløsning af CaCl2 med en koncentration på 0,1% (vægt/rumfang).

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til adskillelse og rensning af proteinerne kan udføres kontinuerligt eller diskontinuerligt.

15

Efter en diskontinuerlig udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen går man frem på den måde, at man fremstiller calciumalginatgelen, man indfører den i en vilkårlig beholder sammen med proteinopløsningen, man omrører det hele i en periode fra 10 minutter til 24 timer, alt efter den ønskede ekstraktionsprocent og i afhængighed af koncentrationen af det protein, 20 som skal ekstraheres af opløsningen, og koncentrationen og karakteren af forurenende elementer; man vasker gelen med en opløsning af CaCl2 med en koncentration på mindst 0,1% (vægt/rumfang), man eluerer derefter alginatgelen med en opløsning af CaCl2 , hvis koncentration er over 0,1% (vægt/rumfang), og man udvinder således proteinet af opløsningen.

25 Efter en kontinuerlig udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstiller man calciumalginatgel, og man indfører den fortrinsvis i en søjle med fast lag eller med fiuidiseret lag, og man lader chargen passere en LHSV mellem 0,1 og 3. (LHSV står for Liquid Hourly Space Velocity. Udtrykket, som i parentes bemærket er velkendt af fagfolk, bruges, når en væske ledes gennem et fast stof (katalysator, harpiks etc.). Det angiver den væskemængde, 30 der på 1 time passerer volumenet af fast stof. Angivelsen er uden enheder, da udtrykket er dimensionsløst).

Man vasker gelen med en opløsning af CaCl2 med en koncentration på mindst 0,1% (vægt/rumfang). Derpå eluerer man alginatgelen med en opløsning af CaCl2 , hvis koncen- 35 tration er over 0,1% (vægt/rumfang), og man udvinder således proteinet af opløsningen.

I tilfælde af brugen af en carrageenan-gel til eluering af de på denne gel således adsorberede proteiner kan man benytte en vandig opløsning af et vilkårligt vandopløseligt organisk eller 6 DK 169885 B1 uorganisk salt. Imidlertid foretrækker man at bruge KCI eller NH4CI, når man som gel benytter * et K- eller NH^carrageenat eller en blanding af ioner indeholdende KCI eller NH4CI i tilstrækkelige mængder. r 5 Koncentrationen af den benyttede saltopløsning til eluering af proteinerne af carrageenan-gelen er ikke afgørende. Den afhænger af det benyttede salt, proteinet og opløsningens pH-værdi.

Når man benytter KCI, arbejder man således ved en koncentration på mindst 0,1%.

Det salt, som benyttes til eluering af proteinet af gelen, kan være, men behøver ikke at være 10 det samme som til absorptionen. Når man benytter to forskellige salte, vil det forstås, at de skal være forenelige, altså ikke reagere i sig selv under dannelse af en udfældning.

Før påbegyndelsen af en ny eluering vasker man normalt beholderen og carrageenan-gelen med en saltopløsning, hvis koncentration er tilstrækkelig til ikke at gøre gelen ustabil. Som 15 oftest benytter man en opløsning af KCI med en koncentration på 0,1% (vægt/rumfang).

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til adskillelse og rensning af proteiner kan udføres kontinuerligt eller diskontinuerligt. Efter en diskontinuerlig udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstiller man kaliumcarrageenat-gelen, hvorpå man hælder den i en 20 vilkårlig beholder, som indeholder proteinopløsningen, og man omrører det hele i et tidsrum fra 10 minutter til 24 timer, alt efter den ønskede ekstraktionsprocent og i afhængighed af koncentrationen af det protein, som skal ekstraheres fra opløsningen, og koncentrationen og karakteren af forurenende elementer. Man vasker gelen med en opløsning af KCI ved en koncentration på mindst 0,1% (vægt/rumfang), og man eluerer derpå carrageenangelen med en 25 opløsning af KCI, hvis koncentration er over 0,1% (vægt/rumfang), og man udvinder således proteinet af opløsningen.

Efter en kontinuerlig udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstiller man K-carrageenat-gelen, og man indfører den fortrinsvis i en søjle med fast lag eller med fluidiseret 30 lag, og man lader chargen passere en LHSV mellem 0,1 og 3. Man vasker gelen med en opløsning af KCI eller NH4CI i en koncentration på mindst 0,1% (vægt/rumfang). Derpå eluerer man carrageenat-gelen med en opløsning af KCI, hvis koncentration er over 0,1 % (vægt/rumfang), og man udvinder således proteinet af opløsningen.

35 Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Ψ 7 DK 169885 B1

Eksempel 1

Man fremstiller en alginatgel i form af tråde med en længde på ca. 5 cm og en diameter på ca. 1 mm som den mindste dimension ved ekstrudering af en homogen vandig opløsning 5 indeholdende 30 g/l af natriumalginat og 20 g/l af titanoxid i en vandig opløsning indeholdende 30 g/l af CaCtø

Desuden fremstiller man upasteuriseret valle ved langsom koagulering af frisk mælk ved 32 °C i nærvær af 0,03 rumfangsprocent osteløbe med en styrke på 7000. Denne valle har en pH-10 værdi på 6,6 ved 20 °C og et indhold på 4% lactose, 0,35% lipider og 0,7% proteiner (indbefattet 0,001% lactoperoxidase og 0,003% lactoferrin).

Efter tilsætning af 200 g alginatgel til 51 valle omrører man blandingen ved 4°C i 18 timer.

Gelen fraskilles ved filtrering på metalsi og vaskes derefter tre gange med 51 vandig opløsning 15 afCaCl2 med en koncentration på 3 g/l.

Man udvinder de materialer, som er fikseret ved hjælp af gelen, ved hjælp af to vaskninger af gelen med 1 I af en vandig opløsning af CaCl2 med en koncentration på 50 g/l under omrøring ved 4 °C i to timer.

20

De således opnåede 21 opløsning indeholder ca. 250 mg proteiner, heraf 130 mg lactoferrin og 20 mg lactoperoxidase.

Eksempel 2 25

Man fremstiller en vandig opløsning indeholdende 30 g/l alginat.

Man forstøver 3 I af denne opløsning i en opløsning af CaCl2 på 30 g/l og får således perler af et calciumalginat-gel med en gennemsnitsdiameter på ca. 1,2 mm. Den specifikke overflade af 30 dette absorberende materiale er 2 x 10"^ m^/g.

Man anbringer 200 ml perler i en søjle med 5 cm diameter til dannelse af et lag gel med en højde på 11 cm.

35 Man behandler 13 rumfang mælk eller 2,575 I helmælk indeholdende ca. 5% lactose, 4% lipid, 0,9% salt og 3,3% proteiner, hvoraf ca. 0,008% lactoferrin og 0,003% lactoperoxidase.

DK 169885 B1 s

Det LHSV, som man lader mælken passere på gelsøjlen, er 1,5.

Efter mælkens passage overfører man gelen til en beholder, hvor man vasker 5 på hinanden følgende gange med et rumfang på 300 ml af en vandig opløsning af CaCl2 på 3 g/l. Hver gang 5 fraskilles gelen ved dekantering og filtrering på nylonfilter.

Man udvinder de på gelen adsorberede proteiner ved 2 vaskninger af gelen med 300 ml af en vandig 3%'s opløsning af CaCl2 under omrøring ved 4 °C i 2 timer.

10 De på denne måde opnåede 600 ml opløsning indeholder ca. 260 mg proteiner, hvoraf 31 mg lactoperoxidase og 125 mg lactoferrin. Ekstraktionsudbyttet er på 72%.

Til sammenligning fylder man samme søjle med harpiks af agar, som har indgået netdannelse med polyacrylamid, idet denne harpiks normalt benyttes til adskillelse af proteiner.

15

Man lader helmælken med den ovenfor beskrevne sammensætning passere denne harpiks under de samme operationsbetingelser, og efter mindre end én times drift er søjlen helt tilstoppet.

20 Eksempel 3

Man fremstiller en alginatgel i form af tråde med en længde på ca. 10 cm og en diameter på ca. 1,5 mm som mindste dimension ved ekstrudering af en homogen vandig opløsning indeholdende 30 g/l natriumalginat pr. I og 5 g titanoxid pr. i i en vandig opløsning indehol-25 dende 30 g CaCl2 pr. I.

Man behandler helmælk med den i eksempel 2 angivne sammensætning og navnlig indeholdende 3,3% proteiner, hvoraf 0,008% lactoferrin og 0,003% lactoperoxydase.

30 Efter tilsætning af 100 g alginet til 201 helmælk omrører man blandingen ved 10 °C i 8 timer.

Gelen fraskilles ved filtrering på metalsi og vaskes derefter 3 gange med 100 ml opløsning af CaCl2 på 1 g/l.

Man udvinder de på gelen fixerede stoffer ved vaskning to gange af gelen med 300 ml vandig 35 opløsning af 10 g/l af CaCl2 og 40 g/l af NaCI under omrøring ved 10 °C i 30 minutter. , 9 DK 169885 B1

De således opnåede 600 ml opløsning indeholder ca. 3 g protein, hvoraf 1 g lactoferrin og 125 mg lactoperoxydase samt ca. 0,5 g fedtstof.

Claims

1. Fremgangsmåde til rensning af proteiner fra mælk, hvis isoelektriske punkt er over 7,5, til anvendelse i terapeutiske produkter, kendetegnet ved, at 5 1) man lader det miljø, som indeholder det ønskede protein, passere partikler af et surt gelerbart polysaccharid i form af gel, idet disse partikler ikke er mindre end 0,5 mm i deres mindste dimension, hvor koncentrationen af surt polysaccharid i gelen ligger mellem 1 og 8 vægtprocent, hvilken gel benyttes i en mængde på 1-20 vægtprocent i en opløsning, hvori den er uopløselig, og 10 2) at man udvinder proteinerne af en saltopløsning, hvis ionkoncentration er større end 0,05% (vægt/rumfang).

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man benytter et surt gelerbart polysaccharid, som vælges blandt alginater og carrageenaner. 15

3. Fremgangsmåde ifølge krav2, kendetegnet ved, at man gelerer det sure gelerbare polysaccharid, idet man bringer det i kontakt med en opløsning, som indeholder kationer, som vælges blandt alkalimetal-, jordalkallmetal-, jern- og ammoniumkationer, idet alkalimetalionerne især er K, Rb og Cs. 20

4. Fremgangsmåde ifølge krav 2-3, kendetegnet ved, at man gelerer alginatet med en opløsning af CaCl2.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 2-3, kendetegnet ved, at man gelerer 25 carrageenanet med en opløsning af KCI eller af NH4CI eller af RbCI.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1-5, kendetegnet ved, at man benytter en sur polysaccharidgel med en specifik overflade mellem 2 x 10*3 og 0,2 m2/g.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 1-6, kendetegnet ved, at man benytter en sur polysaccharidgel i form af perler, kugler, lameller, fibre, tråde eller væv.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 1-7, kendetegnet ved, at man i den sure polysaccharidgel inkorporerer en mængde på ikke over 3% på basis af gelens vægt af et me- 35 taloxid, som er uopløseligt under brugsbetingelserne. 1 Fremgangsmåde ifølge krav 1-8, kendetegnet ved, at metaloxidet vælges blandt titanoxid, zirkoniumoxid, siliciumoxid, aluminiumoxid, sepiolith og analoge stoffer. DK 169885 B1

10. Fremgangsmåde ifølge krav 1-9, kendetegnet ved, at man behandler proteiner fra mælk, som især vælges blandt lactoferrin, lactoperoxidase, immunoglobuliner og andre analoge stoffer. 5

11. Fremgangsmåde ifølge krav 1-10, kendetegnet ved, at man hælder en algi-natgel i en passende beholder indeholdende opløsningen af proteiner, at man omrører det hele i et tidsrum fra 10 minutter til 24 timer, at man vasker gelen med en opløsning af CaCtø , at man eluerer alginatgelen med en opløsning af CaCl2 , og at man udvinder proteinerne af 10 opløsningen.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 1-10, kendetegnet ved, at man hælder en carra-geenan-gel i en passende beholder indeholdende en opløsning af proteiner, at man omrører det hele i et tidsrum fra 10 minutter til 24 timer, at man vasker gelen med en opløsning af et 15 salt, som er KCI, NH4CI eller RbCI, at man eluerer carrageenan-gelen med en opløsning af samme salt, og at man udvinder proteinerne af opløsningen.

13. Fremgangsmåde ifølge krav 1-10, kendetegnet ved, at man hælder en algi-natgel på en søjle med fast eller fluidiseret lag, at man lader chargen indeholdende proteinerne 20 på alginatgelen passere en LHSV mellem 0,1 og 3, at man vasker gelen med en opløsning af CaCtø , at man derpå eluerer alginatgelen med en opløsning af CaCtø , og at man udvinder proteinerne af opløsningen.

14. Fremgangsmåde ifølge krav 1-10, kendetegnet ved, at man hælder en carra-25 geenan-gel på en søjle med fast eller flydende lag, at man lader chargen indeholdende proteinopløsningen på carrageenan-gelen passere en LHSV på mellem 0,1 og 3, at man vasker gelen med en saltopløsning, som er KCI, NH4CI eller RbCI, at man derpå eluerer carrageenan-gelen med en opløsning af samme salt, og at man udvinder proteinerne af opløsningen.

15. Proteiner fra mælk med et isoelektrisk punkt over 7,5, til anvendelse i terapeutiske produkter, kendetegnet ved at være isoleret og renset ved fremgangsmåden ifølge krav 1-14.