DK170820B1 - Fremgangsmåde og tripeptid til fremstilling af racematfattige peptider - Google Patents
Fremgangsmåde og tripeptid til fremstilling af racematfattige peptider Download PDFInfo
- Publication number
- DK170820B1 DK170820B1 DK137085A DK137085A DK170820B1 DK 170820 B1 DK170820 B1 DK 170820B1 DK 137085 A DK137085 A DK 137085A DK 137085 A DK137085 A DK 137085A DK 170820 B1 DK170820 B1 DK 170820B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- ser
- trp
- leu
- tyr
- pro
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 19
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 125000006559 (C1-C3) alkylamino group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims abstract description 5
- VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCC[C@H](N)C(O)=O VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 3
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 3
- NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N Trp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)N)C(O)=O)=CNC2=C1 NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000006310 cycloalkyl amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000006317 cyclopropyl amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract 4
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 2
- 125000001439 semicarbazido group Chemical group [H]N([H])C(=O)N([H])N([H])* 0.000 claims abstract 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N propylphosphonic anhydride Substances CCCP1(=O)OP(=O)(CCC)OP(=O)(CCC)O1 PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LLUBVCCZUMPBMI-UHFFFAOYSA-N 1-[[ethyl(methyl)phosphoryl]oxy-methylphosphoryl]ethane Chemical compound CCP(C)(=O)OP(C)(=O)CC LLUBVCCZUMPBMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N D-Ornithine Chemical compound NCCC[C@@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N D-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 claims description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 2
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 2
- OWQPOVKKUWUEKE-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-benzotriazine Chemical compound N1=NN=CC2=CC=CC=C21 OWQPOVKKUWUEKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N Arg-Pro Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N D-Cysteine Chemical compound SC[C@@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N 0.000 claims 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims 1
- UNNKKUDWEASWDN-UHFFFAOYSA-N alkannin Natural products CC(=CCC(O)c1cc(O)c2C(=O)C=CC(=O)c2c1O)C UNNKKUDWEASWDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 claims 1
- 150000003009 phosphonic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 abstract description 7
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical group FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 229910052731 fluorine Chemical group 0.000 abstract 2
- 239000011737 fluorine Chemical group 0.000 abstract 2
- MXWMFBYWXMXRPD-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-azaniumyl-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C[C@H](N)C(O)=O MXWMFBYWXMXRPD-YFKPBYRVSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 56
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 18
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 16
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical group CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 9
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940113088 dimethylacetamide Drugs 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 7
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 5
- -1 e.g. Ό-Ser (Bu ') Chemical class 0.000 description 5
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 4
- JUINSXZKUKVTMD-UHFFFAOYSA-N hydrogen azide Chemical compound N=[N+]=[N-] JUINSXZKUKVTMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 4
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 4
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 102400000932 Gonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 3
- 101500026183 Homo sapiens Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 3
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 3
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001442 gonadorelin Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- IOGXOCVLYRDXLW-UHFFFAOYSA-N tert-butyl nitrite Chemical compound CC(C)(C)ON=O IOGXOCVLYRDXLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NFDXGVFXQUFNQW-UHFFFAOYSA-N 4-[bis(aziridin-1-yl)phosphoryl]morpholine Chemical compound C1CN1P(N1CCOCC1)(=O)N1CC1 NFDXGVFXQUFNQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MALNXHYEPCSPPU-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Tyrosine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MALNXHYEPCSPPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 2
- XNQULTQRGBXLIA-UHFFFAOYSA-O phosphonic anhydride Chemical compound O[P+](O)=O XNQULTQRGBXLIA-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 description 2
- GNIDSOFZAKMQAO-VIFPVBQESA-N (2s)-3-hydroxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 GNIDSOFZAKMQAO-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPNIQGRFZCTBEZ-SPTGULJVSA-N 3-n-[(2s,3r)-4-(cyclopropylamino)-3-hydroxy-1-phenylbutan-2-yl]-5-[methyl(methylsulfonyl)amino]-1-n-[(1r)-1-phenylethyl]benzene-1,3-dicarboxamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)C=1C=C(C=C(C=1)C(=O)N[C@H](C)C=1C=CC=CC=1)N(C)S(C)(=O)=O)[C@H](O)CNC1CC1)C1=CC=CC=C1 VPNIQGRFZCTBEZ-SPTGULJVSA-N 0.000 description 1
- UZEFHQIOSJWWSB-UHFFFAOYSA-N 4-azidobenzenesulfonamide Chemical compound NS(=O)(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 UZEFHQIOSJWWSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N Azide Chemical compound [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000005684 Liebig rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- MALNXHYEPCSPPU-UWVGGRQHSA-N Ser-Tyr Chemical compound OC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MALNXHYEPCSPPU-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfisoxazole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKIUAMUSENSFQQ-UHFFFAOYSA-N dimethylazanide Chemical compound C[N-]C QKIUAMUSENSFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002434 gonadorelin derivative Substances 0.000 description 1
- 230000001456 gonadotroph Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000014666 liquid concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007034 nitrosation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical group OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 238000004886 process control Methods 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- NSETWVJZUWGCKE-UHFFFAOYSA-N propylphosphonic acid Chemical compound CCCP(O)(O)=O NSETWVJZUWGCKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012958 reprocessing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
i DK 170820 B1 o
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af peptider med den almene formel (I) 5 U - A1 - A2 - A3 - A4 - A5 - X (I) hvor U er en urethanbeskyttelsesgruppe, A^" er Trp eller D-Trp, 2 10 A er Ser, Ala eller Thr, 3 A er Tyr eller Phe, 4 A er Gly, en rest af en D-aminosyre eller en rest af et D-aminosyrederivat, 5 t t A er Leu, N-methyl-Leu, N-ethyl-Leu, Ser(Bu ), Cys(Bu ), 15 AspiOBu^, GluiOBu^, Orn(Boc) eller Lys(Boc), og X er OBu*" eller A^-Pro-Y, idet A 6 står for Arg, Orn, Lys eller homoarginin, og Y står for Gly-NH2, NH-NH-C0-NH2, (C1-C3)-alkylamino, cyclopropylamino, med hydroxy eller fluor substitueret 20 (Ci“C3)-alkylamino eller med hydroxy eller fluor substitueret cycloalkylamino, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man omsætter et tripeptid med den almene formel (II) 25 U - a1 - A2 - A3 - OH (II) hvor 12 3 U, A , A og A er som defineret ovenfor, med et peptid med den almene formel (III) 30 H - A4 - A5 - X (III) 4 5 hvor A , A og X er som defineret ovenfor.
35 0 DK 170820 B1 2
Peptider med den almene formel (I) er mellemprodukter ved syntesen af gonadorelin (Biochem. Biophys. Res.
Commun. 43^ (1971) 1334-1339) eller analoge deraf, som 5 f.eks. er kendt fra US-patentskrift nr. 4.024.248.
Gonadorelin (LHRH) er som bekendt et hormon fra hypothalamus med formel (IV)
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 (IV) 10 som i hypofysen udløser de gonadotrope hormoner LH og FSH. I betragtning som gonadorelin (LHRH)-analoge kommer peptider, hvor enkelte eller flere aminosyrer i LHRH er byttet ud^ og/eller hvor peptidkæden er varieret ved 15 forkortning, forlængelse og/eller derivatisering. Af særlig betydning er derved substitutioner af glycin i stilling 6 med D-aminosyrer og i stilling 10 med grupper som alkylamino. Der skal f.eks. nævnes buserelin med formel (V) 20
Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu^·) -Leu-Arg-Pro-NHEt (V)
Fra litteraturen kendes fremgangsmåder til fremstilling af forbindelser med formel (I) (Biochem. Biophys. Res.
25 Commun. 45^ (1971), 767; US-patentskrift nr. 4.024.248), hvor syntesen altid sker ifølge azidmetoden, der er kendt som en fremgangsmåde med ringe racemisering ved sådanne fragmentsynteser (J. Chem. Soc. (London) 1960, 3902; Helv. Chim.
Acta, £4 (1961)^ 1991) .
30 Dog skal der ved anvendelsen af azidsyntesen regnes med talrige sidereaktioner. Således kan 1,2-diacyl--hydraziner opstå, først og fremmest, hvis syreunderskud er fremherskende ynder aziddannelsen.
Ved tyrosin i det foreliggende tilfælde kan fore- 35 komme nitrering i o-stilling til den phenoliske hydroxygruppe, 0 3 DK 170820 B1 og ved tryptophan kan forekomme N-nitrosering. Også omdannelsen af peptidazider til de tilsvarende amider er blevet iagttaget (sammenfattende litteratur: Liebigs 5 Ann., 659 (1962) 168, Synthesis (1974) 549).
En graverende mangel er instabiliteten af peptid-aziderne, som allerede ved en let forhøjet temperatur ved en Curtius-nedbrydning kan omlejres til isocyanater og som følge deraf danne urinstoffer og andre bipro-10 dukter (Helv. Chim. Acta, £4 (1961)^ 1991, side 1997, Synthesis (1974) 549).
Under efterbearbejdningen kan ligeledes iagttages denne sidereaktion under dannelse af isocyanatet og viderereaktion til urinstof (se eksempel 4.1 og 4.2).
15 Biproduktet (urinstofderivat) er meget vanskeligt at skille fra det tilsvarende peptid og kan kun påvises ved hjælp af HPLC. Omfanget af denne sidereaktion kan andrage indtil 15% (se eksempel 4.2).
Udbyttet af azidsyntesen er sjældent højere end 20 70-80% af teorien. Årsag dertil er de nævnte sidereaktioner.
Azidfremgangsmåden er ubrugelig set ud fra et produktionsmålestokssynspunkt. Det under fremgangsmåden optrædende hydrogenazid eller dets salte udgør imidlertid over en bestemt mængde en teknisk svært overvindelig 25 sikkerhedsrisiko. Således optræder f.eks. ved omsætning af ca. 25 kg tripeptidazid i løbet af oparbejdningen f.eks. ved en sur ekstraktion mindst 1 kg hydrogenazid der kan føre til kraftige eksplosioner (Rompps Chemie Lexikon, 7. oplag. Frankh'sche Verlags-30 handlung, Stuttgart 1975, side 3348).
For at beherske dehne risiko skal der udvikles og installeres talrige dyre måletekniske proceskontrolsystemer. Desuden skal modervæsker og vandige ekstraktionsopløsninger før deres bortskaffelse befries for 35 hydrogenazid og dets salte, hvilket ligeledes kræver en større analytisk indsats.
0 DK 170820 B1 4
Hydrogenazidet må desuden med hensyn til aspektet arbejdshygiene betragtes som betænkeligt; dette udtrykkes ved en meget lav MAK-værdi. MAK-værdien 3 3 5 for NH^ andrager 0,-1 ml/m henholdsvis 0,27 mg/m (TRgA 900, 1982) .
Disse kendte grunde forbyder en forøtørrelse af azidfremgangsmåden udover laberatoriemålestokken.
Det har nu vist sig, at man ved at gå ud fra det 10 ved metoden med ringe racemisering fremstillede, beskyttede tripeptid med formel (II) ved hjælp af de fem nedennævnte koblingsfremgangsmåder på overraskende praktisk måde kommer frem til racematfri produkter med formel (I). Den her omhandlede fremgangsmåde f.eks. under an-15 vendelse af PPA-metoden har i modsætning til azidfrem-gangsmåden ingen sikkerhedstekniske begrænsninger. Derudover har fremgangsmåden ud fra det praktisk-kemiske standpunkt ligeledes vist sig at være problemløs. Overgangen til produktionsmålestok fører hverken til tab i 20 udbyttet eller renhed af produkterne i forhold til labo-ratoriemålestokken (se eksempel 6.1).
Omsætningen af tripeptid med formel (II) med det tilhørende peptid med formel (III) med en fri amino-gruppe og en beskyttet carboxylgruppe udføres fortrinsvis 25 i et i peptidkemien gængs opløsningsmiddel eller også i vand/opløsningsmiddelblandinger i nærværelse af et egnet kondensationsmiddel, som f.eks. 1 35
Dicyclohexylcarbodiimid under tilsætning af 1-hydroxy- 30 benzotriazol (DCCI/HOBt-metode, Chem. Ber. 103 (1970)j 788).
2. Dicyclohexylcarbodiimid under tilsætning af 3-hydroxy--4-OXO-3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazin (DCCI/HOOBt--metode, Chem. Ber. 103 (1970)^ 2034) .
0 5 DK 170820 B1 3. Dicyclohexylcarbodiimid under tilsætning af N--hydroxysuccinimid (DCCI/HONSu-metode, Z. Natur-forsch. 21b (1966); 426) .
4. Alkanphosphonsyreanhydrid, såsom n-propylphosphon-
O
syreanhydrid (PPA-metode, Angew. Chemie, Int. Ed.
19 (1980);133).
5. Dialkylphosphinsyreanhydrid, såsom methylethyl-phosphinsyreanhydrid (MEPA-metode, US-patentskrift nr.
1Q 4.426.325).
Hvis aminosyren i stilling 6 i den gonadorelinanalog, der skal syntetiseres, skal være et syrelabilt aminosyre-derivat, såsom f.eks. Ό-Ser (Bu') , D-GluiBu^, L-Lys(Boc), 15 er mellemproduktet med formel (I) , hvor X er lig OBu*· ikke hensigtsmæssigt; syntesevejen må så føre over mellemprodukter med formel (I) , hvor X % OBu*".
Som egnede opløsningsmidler anvender man ved den her omhandlede fremgangsmåde af opløselighedsgrunde 20 for det meste polære opløsningsmidler, som f.eks. dimethyl-acetamid, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, phosphor-syre-tris-(dimethylamid), N-methylpyrrolidon, vand eller blandinger af de nævnte opløsningsmidler med vand. Sidstnævnte gælder først og fremmest for MEPA-fremgangsmåden.
25 Imidlertid kommer også chloroform, methylenchlorid eller ethylacetat til anvendelse. Syntesen kan gennemføres mellem -10°C og stuetemperatur. Fortrinsvis begynder man ved ca. 0°C og forhøj er senere til stuetemperatur.
En foretrukket fremgangsmådevariant er ejendommelig o0 ved, at JU i 2 3 4
A betyder Trp, A betyder Ser, A betyder Tyr, A
betyder Gly, D-Ala, D-Leu, D-Ser(But), D-Trp, D-Phe, D-Gln(cyclohexyl), D-naphthylalanin, D-benzylhistidin, D-Thr(But), D-Cys(But), D-Asp(0But), D-Glu(0But), 5 35 D-Orn(Boc) eller D-Lys(Boc), A betyder Leu, og X betyder 0 DK 170820 B1 6 0But, Arg-Pro-NHC2H^, Arg-Pro-Gly-NH2 eller Arg-Pro-NH- -nh-co-nh2.
Særligt foretrukket er fremgangsmåder til frem-5 stilling af U-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NI^ og U-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu^·)-Leu-Arg-Pro-NHC2H^ , hvor U er som defineret ovenfor.
Foretrukket er sådanne urethanbeskyttelsesgrupper U (se Kontakte Merck 3/79, side 14, 16), der er hydrogenolytisk 10 fraspaltelige, såsom Z (dvs. benzyloxycarbonyl), Z(N02), Pyoc, Z(Haln), Dobz eller Moc, især Z.
Den overraskende lave racemiseringsgrad ved anvendelse af den her omhandlede fremgangsmåde er blevet bevist ved hjælp af højtryksvæskechromatografi (HPLC) på de ube-15 skyttede peptider med formel (I) (U = hydrogen). Fremstilles et tilsvarende hepta- eller octapeptid med formel 3 (I) som beskrevet ovenfor, der i stilling A har indbygget D-Tyr i stedet for Tyr, opnår man det produkt, som i 3 tilfælde af en racemisering af forbindelsen med A lig 20 Tyr, må optræde under koblingen. Da disse to diastereo-mere kan adskilles som ubeskyttede peptider ved hjælp af HPLC, kan man således konstatere udstrækningen af racemiseringen ved de enkelte koblingsmetoder.
25 Tabel I Racemiseringsgrad
Eksempel: Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt
Syntesen af den nævnte forbindelse gennemføres ved hjælp af forskellige metoder, reaktionsproduktet underkastes i hvert tilfælde hydrogenering uden mellemrensning og karak -30 teriseres som H-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu1")-Leu-Arg-Pro-NHEt ved hjælp af HPLC.
HPLC-Metode - Søjle: "Nucleosil'*^ 5SA (4 x 300 mm), elueringsmiddel: 35 40% puffer/60% acetonitril (puffer: 1%'s KH2P04, pH- -værdi 5,8), strømning: 1 ml/minf detektor: UV - 220 nm.
7 DK 170820 B1 0
Syntesemetode_Procentvise andel af D-isomeren+^ DCCI/HOBt 3 - 5 DCCI/HOOBt 1,5 - 2,5 5 DCCI/HONSu 1,5 - 2,5 PPA 1 - 2 ΜΕΡΑ 1,5 - 2,5
Azid 1 - 2 10
Retentionstiden for D-isomeren H-Trp-Ser-D-Tyr-D--Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt bestemmes efter målrettet fremstilling af forbindelsen ved hjælp af PPA-metoden.
15 Det er bemærkelsesværdigt, at udover det ringe omfang af racemisering ved anvendelse af PPA-metoden, er udbyttet og renheden af produkterne særligt høje.
Tabel II Sammenligning: renhed/udbytte 20 Eksempel: Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Buu)-Leu-Arg-Iro-NHEt
Reaktionsproduktet vejes efter isolering, derudfra beregnes det teoretiske udbytte, og ved hjælp af HPLC opstilles et relativt renhedskriterium.
25 HPLC-Metode Søjle: "Nucleosil 5SA (4 x 300 mm), elueringsmiddel: 40% puffer/60% acetonitril (puffer: 1%'s Ki^PO^, pH-værdi 5,8J, strømning 1 ml/min, detektor: UV- 220 nm.
30 35 0 DK 170820 B1 8
Syntesernetode Udbytte (% af teori)_Renhed, flade-%+^ DCCI/HOBt 69 73 DCCI/HOOBt 72 75 5 DCCI/HONSu 75 77 PPA 85-88 80 ΜΕΡΑ 63 76
Azid 70-80 55 10 7)
Relativt renhedskriterium ifølge HPLC; summen af spids-flader af alle UV-absorberende stoffer (ved 220 nm) i reaktionsproduktchromatogrammet sættes lig med 100. x flade-% tilfalder det ønskede stof (100%-metode).
15
Den foreliggende opfindelse angår endvidere tri-peptider med den almene formel (II) 20 U - A1 - A2 - A3 - OH (II) 12 3 hvor U, A , A og A er som defineret ovenfor, især
Z - Trp - Ser - Tyr - OH
do
Disse tripeptider fremstilles ved i peptidkemien gængs fragmentkondensation af peptidbrudstykker ifølge kondensationsskemaet (1-2) + 3 eller 1 + (2-3), hvorved andre 30 funktionelle grupper eventuelt blokeres eventuelt inter-mediært med beskyttelsesgrupper, der er fraspaltelige i alkalisk eller surt medium.
Syntesen af tripeptiderne med formel (II) sker fortrinsvis på en måde med ringe racemisering, dvs. ved at 35 undgå syntesetrin, der indeholder en forsæbningsreaktion, 9 DK 170820 B1 0 som f.eks. den i efterfølgende skema beskrevne syntese af Z-Trp-Ser-Tyr-OH.
Skema 5
Trp· Ser Tyr
I I I
I H-1-OH H-1-OH
I f I
10 -0H z-i—OH H-f-ONb*Tos-OH (VI/1)
I I I PPA I
Z-4- OH Z-1---1— ONb (VI/2) {lDCCI/HONSu I |pd/H2 | Z-|-ONSu H-1-f—OH (VI/3) 15 I (VI/H)I | f * V ί I (II)
z -I--4-4—OH
20 Forbindelserne II, VI/2 og VI/3 er ikke beskrevet i litteraturen. Forbindelse VI/1 fremstilles ifølge Shields, McGregor & Carpenter: J. Org. Chem. , 2_6 (1961), 1941, og forbindelse VI/4 fremstilles ifølge E. Wunsch & K.H. Deimer, Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 353 25 (1972), 1246.
Det har vist sig, at fremstillingsmåden (over VI/1 —£>VI/4) usædvanligt hurtigt og let fører til målet, idet de enkelte mellemtrin fremkommer krystallinske, med godt udbytte og høj renhed. Hydrogeneringstrinnet, der 30 befrier dipeptidet for beskyttelsesgrupperne, er bemær kelsesværdig let at gennemføre (eksempel 5.2).
35 10 DK 170820 B1 o
De anvendte forkortelser betyder:
Boc = tert.-butyloxycarbonyl 5 DCCI = dicyclohexylcarbodiimid DMF = dimethylformamid Et = ethyl HOBt = 1-hydroxybenzotriazol HONSu = N-hydroxysuccinimid 10 HOOBt = 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-l,2 , 3-benzotriazin ΜΕΡΑ = methylethylphosphinsyreanhydrid ONb = p-nitrobenzylester ONSu = N-hydroxysuccinimidester OBu*" = tert.-butylester 15 PPA = n-propylphosphonsyreanhydrid
Bufc = tert.-butylether Tos-OH = p-toluensulfonsyre Z = benzyloxycarbonyl NEM = N-ethylmorpholin.
20
De efterfølgende eksempler skal belyse den her omhandlede fremgangsmåde samt fremstilling af de omhandlede mellemprodukter. En del af eksemplerne, nemlig eksemplerne nr. 1.6, 2.2, 4.1 og 4.2, beskriver sammenligningsforsøg 25 med fremgangsmåder ifølge teknikkens stade.
30 35 11 DK 170820 B1 o
Eksempel 1.1
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro--NHEt * Tos-OH med DCCl/HOBt 5 29,4 g (0,05 mol) S-Trp-Ser-Tyr-OH, 44,7 g (0,05 mol) H-D-Ser (Bu*") -Leu-Arg-Pro-NHEt *2 Tos-OH og 6,75 g 1-hydroxy-benzotriazol opløses i 250 ml DME^ og opløsningen afkøles til +5°C. Til opløsningen sættes 6,4 ml N-ethylmorpholin og 11,3 g DCCI, og efter afsluttet tilsætning forhøjes 10 temperaturen til ca. 20°C. Efter omrøring natten over frasuges fra det udfældede dicyclohexylurinstofj og filtratet inddampes til remanens« Denne optages i 600 ml butanol og ekstraheres 2 gange med en 5%'s sodaopløsning, hver gang med 150 ml, med 150 ml af en 13%'s kogsaltop-15 løsning, 150 ml af 10%'s KHSO^-opløsning og 150 ml af en 5%'s kogsaltopløsning. Den organiske fase koncentreres, filtreres fra det udfældede kogsalt, og 200 ml af den koncentrerede opløsning røres i 1,5 liter diisopropylether. Efter filtrering og vask med 200 ml diisopropylether 20 tørres stoffet over ^2°5 *· vakuum.
Udbytte: 44,8 g (69% af teorien).
[a]22 = -31,6° (c = 1, dimethylacetamid).
Eksempel 1.2 oc f
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu )-Leu-Arg-Pro-NHEt * Tos-OH med DCCI/HOOBt
Der gås frem som beskrevet i eksempel 1.1, i stedet for 1-hydroxybenzotriazol anvendes imidlertid 8,15 g 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazin (HOOBt). Udbytte: 46,7 g (72% af teorien).
[a]22 = -31° (c = 1, dimethylacetamid).
35 DK 170820 B1 12 0
Eksempel 1.3
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu11) -Leu-Arg-Pro-NHEt *Tos-OH med DCCI/HONSu 5 Der gås frem som beskrevet i eksempel 1.1, i stedet for 1-hydroxybenzotriazol anvendes imidlertid 5,75 g N-hydroxysuccinimid (HONSu). Udbytte: 48,7 g (75 af teorien), [a]^ = -32° (c = 1, dimethylace tamid) .
10 Eksempel 1.4
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu^)-Leu-Arg-Pro-NHEt *Tos-OH med PPA
I 65 ml DMF opløses 6,8 g (11,5 mmol) Z-Trp-Ser-Tyr--0H og 10,3 g (11,5 mmol) H-D-Ser(Bufc)-Leu-Arg-Pro-NHEt < 15 2 Tos-OH ved stuetemperatur^ og opløsningen afkøles til +5°C. Fra to dråbetragte tildryppes derefter samtidigt 1 løbet af 20 minutter 11,1 ml N-ethylmorpholin og 11,1 ml n-propylphosphonsyreanhydrid (50 vægt% i methylen-chlorid). Reaktionsopløsningen omrøres natten over (ved 2o stuetemperatur), koncentreres i vakuum til ca. 20 ml og optages i 150 ml n-butanol. Butanolopløsningen vaskes 2 gange med en 5%'s sodaopløsning, hver gang med 30 ml, med 30 ml af en 13%'s kogsaltopløsning, 150 ml af en 10%'s KHSO^-opløsning og 150 ml af en 5%'s kogsaltopløs- 25 ning, koncentreres i vakuum, filtreres fra det udfældede kogsalt, og den koncentrerede opløsning dryppes i ca. 250 ml diisopropylether. Efter filtrering og vask med 30-40 ml diisopropylether tørres stoffet over P2°5 i vakuum. Udbytte: 13,1 g (88% af teorien).
30 [a]^ = “^3,7° (c = 1, dimethylacetamid).
35 0 13 DK 170820 B1
Eksempel 1.5
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt » ToS-OH med ΜΕΡΑ 5 I det væsentlige gås frem som beskrevet i eksempel 1.4 med undtagelse af følgende afvigelser:
De peptider, der skal kobles^ opløses hver især i 30 ml DMF og vand. 2,3 g ΜΕΡΑ fortyndes i 5 ml DMF og tildryppes. Der indstilles en pH-værdi på 7,5 med ca.
10 3 ml N-ethylmorpholin. Udbytte: 9,4 g (63% af teorien).
[α]β = -30,4° (c = 1, dimethylacetamid).
Eksempel 1.6
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu^)-Leu-Arg-Pro-NHEt 15 *HC1 ifølge azidfremgangsmåden
50 g (83 mmol) Z-Trp-Ser-Tyr-^H^ opløses i 350 ml DMF, opløsningen afkøles til -30°C, i løbet af 20 minutter får 45 ml 8 N HC1 i dioxan lov til at løbe til, 12,5 ml t-butylnitrit (opløst i 100 ml dioxan) tildoseres i løbet 20 af 20 minutter ved mindst -20°C, derefter omrøres ved -20°C
1 20 minutter, afkøles til -30°C og blandes med 45,7 ml N-ethylmorpholin. Til den således tilberedte azidopløsning sættes 55 g (61 mmol) H-D-Ser(Bu^)-Leu-Arg-Pro-NHEt * 2 Tos-OH, der er opløst i 150 ml DMF og blandet med 25 15,2 ml N-ethylmorpholin. Reaktionstemperaturen forøges til 5°Cjog blandingen vidererøres i 20 timer.
Derefter fordeles reaktionsopløsningen mellem 400 ml n-butanol og 4 liter af en 25%'s kogsaltopløsning. Den vandige fase ekstraheres endnu tre gange med hver især 30 200 ml n-butanol, og de kombinerede organiske faser ekstraheres tre gange med hver især 200 ml af en 6,7%'s KHSO^/3,3%'s ^SO^-opløsning. Efter ekstraktion med 200 ml af en 25%'s kogsaltopløsning sker ekstraktionen med 200 ml af en 5%'s bicarbonatopløsning. Butanolfasen 35 inddampes i vakuum^ og det endnu flydende koncentrat DK 170820 B1 14 0 indføres i 1 liter ethylacetat under kraftig omrøring.
Det udfældede bundfald frafiltreres, vaskes med 200 ml ethylacetat og tørres i vakuum. Udbytte: 51,7 g (73% 5 af teorien). [a)j^ = -31,8° (c = 1 i methanol).
Eksempel 2.1
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp Tos-OH med PPA
10 29,4 g (0,05 mol) Z-Trp-Ser-Tyr-OH og 42,08 g (0,05 mol) H-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NI^ 2 Tos-OH opløses i 200 ml DMF, opløsningen afkøles til ca. +5°Cj og 48,6 ml NEM tilsættes. Derefter tildryppes i løbet af 20-30 minutter 47,3 ml PPA (50%'s i methylenchlorid), temperaturen af -i5 reaktionsblandingen bringes på stuetemperatur og omrøres natten over. Omsætningsovervågningen sker ved hjælp af DC-kontrol i løbemidlet butanol:iseddike:vand (3:1:1).
Efter koncentration af opløsningen til ca. 100 ml optages den i 600 ml butanol og ekstraheres 2 gange med hver især 20 150 ml af en 5%'s sodaopløsning, med 150 ml af en 13%'s kcg- saltopløsning, 150 ml af en 10%'s KHSO^-opløsning og 150 ml af en 5%'s kogsaltopløsning. Den organiske fase koncentreres, filtreres fra det udfældede kogsalt, og den koncentrerede opløsning (200 ml) røres ind i 1,5 liter 25 diisopropylether. Efter filtrering og vask med 200 ml diisopropylether tørres stoffet over P2°5 1 vakuum.
Udbytte: 55,2 g (89% af teorien).
[a]^ = -30,1° (c = 1, methanol).
30 35 15 DK 170820 B1 0
Eksempel 2.2
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH^ •fr Tos-OH ifølge azldfremgangsmåden 5 57,7 g (95,8 mmol) Z-Trp-Ser-Tyr-^H^ opløses i 400 ml DMF, opløsningen afkøles til -30°C, i løbet af 20 minutter tilsættes 43,5 ml 8N HC1 i dioxan, 13,9 ml t-butylnitrit (opløst i 125 ml dioxan) tildoseres i løbet af 20 minutter ved mindst -20°C, derefter omrøres 1Q ved -20°C i 20 minutter, der afkøles til -30°C og blandes med 50 ml N-ethylmorpholin. Til azidopløsningen sættes 70 g (83 mmol) H-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NI^ i* 2 Tos-OH, der er opløst i 400 ml DMF og blandet med 30 ml N-ethylmorpholin. Reaktionstemperaturen forhøjes til +5°C^og blandingen omrøres videre i 20 timer.
I O
Derefter fordeles reaktionsopløsningen mellem 400 ml n-butanol og 5 liter af en 25%'s kogsaltopløsning.
Den vandige fase ekstraheres endnu to gange med hver gang 200 ml η-butanol^ og de kombinerede organiske faser ekstra-20 heres to gange .ned hver gang 250 ml af en 8%'s bicarbonatopløsning_ og fire gange med hver gang 150 ml af en 13%'s kogsaltopløsning. Butanolfasen tørres over natriumsulfat og filtreres. Derefter røres butanolopløsningen ind i 6 liter ethylacetat, det udfældede bundfald frafiltreres, vaskes 25 med 500 ml ethylacetat og tørres i vakuum.
Udbytte: 73 g (71% af teorien), [a]^ = -31,8° ( c = 1, methanol).
30 35 16 0 DK 170820 B1
Eksempel 3
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-OBut med PPA
58,9 g (0,1 mol) Z-Trp-Ser-Tyr-OH og 41,7 g (0,1 mol) 5 H-Gly-Leu-OBut.* Tos-OH opløses i 400 ml °9 opløs ningen afkøles til 0 til 5°C. Fra to dråbetragte tildryppes samtidigt 96,5 ml N-ethylmorpholin og 96,5 ml n-propyl-phosphonsyreanhydridopløsning (50 vægt% i methylenchlorid) under afkøling i løbet af 20-30 minutter. Derefter op-10 varmes til stuetemperatur, og reaktionsopløsningen ekstraheres efter 3-20 timer 2 gange med hver gang 150 ml af en 5%'s sodaopløsning, med 150 ml af en 13%'s kogsaltopløsning, 150 ml af en 10%'s KHSO -opløsning og en 4 5%'s kogsaltopløsning. Methylenchloridfasen inddampes i 15 vakuum^og den forblivende remanens krystalliseres fra ethylacetat/ligroin. Efter filtrering og vask med 100 ml ligroin tørres stoffet i vakuum. Udbytte: 70 g (86% af teorien). [a]^ = -25,8° (c = 1, methanol).
20 Eksempel 4.1
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-N
6 g (10 mmol) Z-Trp-Ser-Tyr-N^.^ opløses i 40 ml DMF, opløsningen afkøles til -30°C, 52,5 ml (42 mmol) 8 N HCl/dioxan tilsættes i løbet af 20 minutter, 1,4 ml 25 t-butylnitrit (opløst i 12 ml dioxan) tildoseres i løbet af 20 minutter ved -20°C, der omrøres ved -20°C i 20 minutter, afkøles til -30°C og blandes med 5,3 ml N-ethylmorpholin. Den kolde opløsning indføres i 650 ml kold diethylether, og bundfaldet befries ved dekantering for 30 ovenstående væske, crnrøres på ny med kold ether og dekanteres. Remanensen optages i 40 ml methylenchlorid, ekstraheres 3 gange med ca. 25 g isvand^ og opløsningen tørres over natriumsulfat. Indtil optagelse af IR-spektrerne opbevares den således opnåede opløsning i køleskab. Den friske op-35 løsning viser i IR et skarpt bånd ved 4,7 yum, efter ca.
0 17 DK 170820 B1 1 time opstår ved 4,5 ^um et fornyet signal, som efter 24 timer er større end signalet ved 4,7 /um. Ifølge
Schwyzer et al., Helv. chim. Acta, 44^ (1961)^ 1991^ skal denne iagttagelse tydes som en omlejring ifølge Curtius 5 af et syreazid til det tilsvarende isocyanat.
Eksempel 4.2
Omsætning af en ældet azidopløsning med H-D-Ser (Bu11) --Leu-Arg-Pro-NHEt * 2 Tos-OH
10 -Λ-
En ifølge eksempel 4.1 fremstillet opløsning oplagres 1 dag ved køleskabstemperatur og blandes med en opløsning
af 5 g (5,6 mmol) H-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt*2 Tos-OH
i 15 ml DMF sammen med 1 ml N-ethylmorpholin og opbevares pi ny ved +5°C natten over. Produktet isoleres ifølge 15 oparbejdningsfremgangsmåden ifølge eksempel 1.6 og underkastes hydrogenering i en methanolisk opløsning i nærværelse af palladium på aktivt kul. Det efter hydrogenering opnåede reaktionsprodukt undersøges ved hjælp af HPLC (system: søjle: "Nucleosil'^ 5SA (4 x 300 mm); elueringsmiddel: 40% puffer/60% acetonitril (puffer: 1%'s pH-værdi 5,8), strømning: 1 ml/minut; detektor: UV - 220 nra). Derved viser der sig udover hovedproduktet H-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bufc)-Leu-Arg-Pro-NHEt med en retentionstid på ca. 25 minutter en yderligere intensiv biprodukttop med en retentionstid på ca. 30 minutter.
En sammenlignende undersøgelse af de tilsvarende produkter, der er fremstillet ifølge eksempel 1.1-1.6, viser^at kun produktet ifølge eksempel 1.6 indeholder biprodukt-toppen med en retentionstid på ca. 30 minutter på ca.
15 flade%, medens produkterne ifølge den her omhandlede, hidtil ukendte fremgangsmåde ikke indeholder denne bikomponent .
Åbenbart drejer det sig ved biproduktet med en retentionstid på ca. 30 minutter i HPLC om et urinstofderivat,
OD
der skal ses som følgeprodukt af den ifølge eksempel 4.1 iagttagede omlejring ifølge Curtius af azidet til isocyanatet.
DK 170820 B1 0 18
Eksempel 5.1
Fremstilling af Z-Ser-Tyr-ONb I en 4-halset kolbe på 4 liter opløses ved stuetemperatur i 1,8 liter dimethylformamid 244,0 g tyrosin-p-5 -nitrobenzylester-toluensulfonat og 119,6 g benzyloxy-carbonyl-serin^ og opløsningen afkøles til 0-5°C. Ved ca. 5°C tildryppes 300,0 ml N-ethylmorpholin og i løbet af 20 minutter 275,0 ml af en propanphosphonsyreanhydrid/-methylenchloridopløsning.
Derefter forøges temperaturen i løbet af 1/2 time til stuetemperatur.
Efter ca. 4 timer påbegyndes destillering af DMF under vakuum (på en rotationsfordamper). Så snart destil-leringen er afsluttet, opløses remanensen i ethylacetat og der udrøres med vand til en klar opløsning. pH-Værdien af den vandige fase skal andrage ca. 6. Ethylacetatfasen fraskilles i en skilletragt, den vandige fase omrøres pa ny med ethylacetat, de to organiske faser kom-20 bineres, og den resterende vandige fase kastes bort efter DC-kontrol. Den organiske fase omrøres separat med en KHS04~opløsning og NaHCO^-opløsning og vand og adskilles. Ethylacetatopløsningen inddampes i vakuum til tørhed, den olieagtige remanens omrøres med 25 diethylether, hvorved olien gennemkrystalliserer. Produktet frasuges og tørres i vakuum. Udbytte: 17,48 g (65% af teorien). Smp. 202-208°C (sønderdeling), [a]^2 = -13,2 (c = 1, dimethylacetamid).
30 35 0 19 DK 170820 B1
Eksempel 5.2
Fremstilling af seryl-tyrosin (H-Ser-Tyr-OH) I en 4-halset kolbe på 4 liter opløses ved stuetemperatur 177,0 g benzyloxycarbonyl-seryl-tyrosin-p-nitro-
O
benzylester (Z-Ser-Tyr-ONb) i 2,0 liter methanol og 1,0 liter dimethylformamid. Opløsningen blandes med 10,0 g af en katalysator (Pd/aktivt kul) fugtet med vand og hydrogeneres under omrøring ved stuetemperatur i 2 timer.
1Q Derefter filtreres og eftervaskes to gange med methanol/DMF (2:1). Filtratet inddampes i vakuum til tørhed. Remanensen indrøres i diisopropylether, hvorved produktet udfælder som et fnugget bundfald, der hurtigt sedimenterer^ og som kan frasuges. Produktet tørres i vakuum. Udbytte: 100,3 g (87% af teorien).
1 5 [a]22 = +33,2° (c = 1, methanol).
Eksempel 5.3
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-OH
20 100,3 g seryl-tyrosin (indhold: 77%) suspenderes i 500 ml DMF. Til suspensionen sættes 249 g af en 50%'s opløsning af Z-Trp-ONSu i DMF og 35 ml N-ethylmorpholin.
Efter ca. 2 timer er suspensionen opløst under omrøring ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og 25 remanensen optages i 500 ml ethylacetat. Ethylacetatfasen udrøres med 1 liter af en 85%'s natriumbicarbonatopløs-ning, den organiske fase kastes bort efter DC-kontrol, oc der blandes på ny med 1 liter ethylacetat og gøres forsigtigt surt med 1,4 liter af en 10%'s KHSO.-opløsning. Den or- 30 ** ganiske fase fraskilles, vaskes med 1 liter vand og koncentreres i vakuum til ca. 300 ml, hvorved produktet allerede begynder at udkrystallisere. Krystallisationen fuldstændiggøres ved tilsætning af 1,5 liter diisopropylether. Bundfaldet frafiltreres og tørres ved 40°C i vakuum. 35
Udbytte: 126,7 g (75% af teorien), smp. 165-172°C.
[a]22 = +6,2° (c = 1, methanol).
20 0 DK 170820 B1
Eksempel 6.1
Fremstilling af Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu^)-Leu-Arg-Pro-NHEt ^Tos-OH
5 I en omrøringsbeholder på 100 liter fyldes 60 kg (63 liter) DMF, derefter opløses successivt 10,34 kg (11,5 mol) H-D-Ser (Bu1") -Leu-Arg-Pro-NHEt X 2 Tos-OH og 6,77 kg (11,5 mol) Z-Trp-Ser-Tyr-OH deri, og opløsningen afkøles til 5°C. I tilløbsbeholderen fyldes 10,13 kg 10 (11,12 liter) N-ethylmorpholin, og 1,5 liter deraf får til at begynde med lov til at flyde ind i reaktionsopløsningen .
I løbet af ca. 1 time indpumpes ved mellem ca. 5 og 10°C
15,3 kg (11,1 liter) n-propylphosphonsyreanhydrid (50%'s 15 i methylenchlorid) sammen med den restende mængde N-ethylmorpholin. Efter afsluttet tilsætning, forøges reaktionstemperaturen til ca. 25°CjOg blandingen omrøres i 5 timer. Reaktionsopløsningen koncentreres til et restvolumen på ca. 25 liter ved vakuumdestillation. Den koncentrerede 20 remanens overføres med 150 liter n-butanol i en omrøringsbeholder på 250 liter med en lige så stor fraskillelses-beholder, derefter ekstraheres butanolfasen successivt med følgende vandige opløsninger: 1) sodaopløsning, 2) kogsaltopløsning, 3) sodaopløsning, 4) vand, 5) KHSO^-25 -opløsning og 5) kogsaltopløsning.
Den organiske fase koncentreres til ca. 50 liter, koncentratet overføres til omrøringsbeholderens tilløbsbeholder, omrøringsbeholderen fyldes med 165 kg (230 liter) diisopropylether, og i denne omrørte væske 30 inddoseres i løbet af 1 time 25 liter af butanolkoncen- tratet. Det opståede bundfald efteromrøres i endnu 1 time og fracentrifugeres slutteligt. Der gås frem på samme måde med den anden halvdel af butanolkoncentratet. Tørringen af produktet sker i vakuum ved 35-40°C. Udbytte: 13,5 kg 35 (90% af teorien), [a]^ = -33,7°C (c = 1, dimethylacetamid) .
Claims (10)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af peptider med den almene formel (I)
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at U betyder benzyloxycarbonyl (Z).
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at 5 1 A betyder Trp, 2 A betyder Ser, 3 A betyder Tyr, A 4 betyder Gly, D-Alaf D-L'eu, D-SeriBu*"), D-Trp, D-Phe, D-Gln(cyclohexyl), D-naphthylalanin, D-benzylhistidin, 10 + 4- +- 4 D-Thr(Bu ), D-Cys(Bu ), D-Asp(0Bu ), D-Glu(0Bu ), D-Orn(Boc) 5 eller D-Lys(Boc), A betyder Leu, og X betyder OBi^, Arg-Pro-NHC2H5, Arg-Pro-Gly-NH2 eller Arg-Pro-NH-NH-CO-NH2.
4. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1-3 til f rem-15 stilling af U-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 eller
20 U-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu^)-Leu-Arg-Pro-NHC2H5.
5 U - A1 - A2 - A3 - OH (II) hvor 12 3 U, A , A og A er som defineret i krav 1.
5. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1 til 4, kendetegnet ved, at den gennemføres i nærværelse af dicyclohexylcarbodiimid under tilsætning af 25 1-hydroxybenzotriazol eller 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro- -1,2,3-benzotriazin eller N-hydroxysuccinimid.
5 U - A1 - A2 - A3 - A4 - A5 - X (I) hvor U er en urethanbeskyttelsesgruppe, A^ er Trp eller D-Trp,
10 A2 er Ser, Ala eller Thr, 3 A er Tyr eller Phe, 4 A er Gly, en rest af en D-aminosyre eller en rest af et D-aminosyrederivat, 5. t A er Leu, N-methyl-Leu, N-ethyl-Leu, Ser(Bu ), Cys(Bu ),
15 AspiOBu^, GlufOBu^, Orn(Boc) eller Lys(Boc), og t 6 X er OBu eller A -Pro-Y, idet A^ står for Arg, Orn, Lys eller homoarginin, og Y står for Gly-NH2, NH-NH-C0-NH2, (C1“C3)-alkylamino, cyclopropylamino, med hydroxy eller fluor substitueret 20 (C1-C3)-alkylamino eller med hydroxy eller fluor substitueret cycloalkylamino, kendetegnet ved, at man omsætter et tripeptid med den almene formel (II)
25 U - A1 - A2 - A3 - OH (II) hvor 12 3 U, A , A og A er som defineret ovenfor, med et peptid med den almene formel (III) 30 H - A4 - A5 - X (III) hvor 4 5 A , A og X er som defineret ovenfor. 35 22 DK 170820 B1 o
6. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1 til 4 , kendetegnet ved, at den gennemføres i nærværelse af anhydrider af alJcanphosphonsyrer eller dialkylphosphin-30 syrer.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendetegnet ved, at den gennemføres i nærværelse af n-propylphosphon-syreanhydrid eller methylethylphosphinsyreanhydrid. 35 23 DK 170820 B1 o
8. Tripeptid, kendetegnet ved, at det har den almene formel (II)
9. Tripeptidet Z - Trp - Ser - Tyr - OH.
10 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843411224 DE3411224A1 (de) | 1984-03-27 | 1984-03-27 | Verfahren zur racematarmen herstellung von peptidzwischenprodukten der gonadorelin- und gonadorelinanaloga-synthese und neue zwischenprodukte bei diesem verfahren |
| DE3411224 | 1984-03-27 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK137085D0 DK137085D0 (da) | 1985-03-26 |
| DK137085A DK137085A (da) | 1985-09-28 |
| DK170820B1 true DK170820B1 (da) | 1996-01-29 |
Family
ID=6231739
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK137085A DK170820B1 (da) | 1984-03-27 | 1985-03-26 | Fremgangsmåde og tripeptid til fremstilling af racematfattige peptider |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4691008A (da) |
| EP (1) | EP0156280B1 (da) |
| JP (1) | JPH0686478B2 (da) |
| AT (1) | ATE50267T1 (da) |
| CA (1) | CA1278650C (da) |
| DE (2) | DE3411224A1 (da) |
| DK (1) | DK170820B1 (da) |
| ES (1) | ES8607342A1 (da) |
| HU (1) | HU197928B (da) |
| IL (1) | IL74703A (da) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4608251A (en) * | 1984-11-09 | 1986-08-26 | Pitman-Moore, Inc. | LHRH analogues useful in stimulating anti-LHRH antibodies and vaccines containing such analogues |
| US5191065A (en) * | 1988-11-22 | 1993-03-02 | Hoechst Aktiengesellschaft | Process for the preparation of tripeptides |
| DE3839379A1 (de) * | 1988-11-22 | 1990-05-23 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von tripeptiden |
| DE19527574A1 (de) * | 1995-07-28 | 1997-01-30 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung vona-(N,N-Dialkyl)-aminocaarbonsäureamiden |
| AUPO776897A0 (en) * | 1997-07-09 | 1997-07-31 | Csl Limited | A method of achieving production gains in livestock and agents useful for same |
| AUPP807399A0 (en) | 1999-01-08 | 1999-02-04 | Csl Limited | Improved immunogenic lhrh composition and methods relating thereto |
| DE10333042B4 (de) * | 2003-07-21 | 2005-09-29 | Clariant Gmbh | Verfahren zur Herstellung von cyclischen Phosphonsäureanhydriden und deren Verwendung |
| CN112500455A (zh) * | 2020-10-12 | 2021-03-16 | 湖南津安生物科技有限公司 | 一种多肽固液组合合成戈那瑞林的方法 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3953416A (en) * | 1971-12-20 | 1976-04-27 | Karl Folkers | Synthetic decapeptide having the activity of the luteinizing hormone releasing hormone and method for manufacturing the same |
| FR2238700B1 (da) * | 1973-07-24 | 1977-10-14 | Takeda Chemical Industries Ltd | |
| CS180644B2 (en) * | 1973-09-29 | 1978-01-31 | Takeda Chemical Industries Ltd | Process for preparing nonapeptides |
| US3915947A (en) * | 1974-07-11 | 1975-10-28 | Lilly Co Eli | Des-{8 His{hu 2{b ,Gly{hu 10{b {9 -D-Ala{hu 6 {b LHRH ethylamide as an inhibitor of LHRH |
| DE2438350C3 (de) * | 1974-08-09 | 1979-06-13 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Peptide mit starker LH-RH/FSH-RH-Wirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen |
| US3963691A (en) * | 1974-10-07 | 1976-06-15 | Merck & Co., Inc. | Synthetic antigens of luteinizing hormone releasing hormone |
| US4272432A (en) * | 1974-11-13 | 1981-06-09 | American Home Products Corporation | Claudogenic-interceptive nonapeptide |
| DE2649146A1 (de) * | 1975-10-29 | 1977-05-12 | Parke Davis & Co | Nonapeptide |
| GB1524747A (en) * | 1976-05-11 | 1978-09-13 | Ici Ltd | Polypeptide |
| US4101537A (en) * | 1977-04-07 | 1978-07-18 | Parke, Davis & Company | Octapeptides and methods for their production |
| DE3020941A1 (de) * | 1980-06-03 | 1981-12-17 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Nonapeptid, verfahren zu seiner herstellung, dieses enthaltendes mittel und seine verwendung |
| JPS57118563A (en) * | 1981-01-14 | 1982-07-23 | Takeda Chem Ind Ltd | Indole derivative and preparation of peptide |
| US4481190A (en) * | 1982-12-21 | 1984-11-06 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH useful as LHRH antagonists |
-
1984
- 1984-03-27 DE DE19843411224 patent/DE3411224A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-03-18 AT AT85103106T patent/ATE50267T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-03-18 DE DE8585103106T patent/DE3575931D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-18 EP EP85103106A patent/EP0156280B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-20 HU HU851032A patent/HU197928B/hu unknown
- 1985-03-25 IL IL74703A patent/IL74703A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-03-25 ES ES541535A patent/ES8607342A1/es not_active Expired
- 1985-03-25 US US06/715,418 patent/US4691008A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-26 CA CA000477529A patent/CA1278650C/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-26 DK DK137085A patent/DK170820B1/da not_active IP Right Cessation
- 1985-03-26 JP JP60059701A patent/JPH0686478B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3575931D1 (de) | 1990-03-15 |
| ES541535A0 (es) | 1986-05-16 |
| EP0156280A3 (en) | 1987-10-21 |
| HUT37445A (en) | 1985-12-28 |
| EP0156280A2 (de) | 1985-10-02 |
| IL74703A0 (en) | 1985-06-30 |
| CA1278650C (en) | 1991-01-02 |
| HU197928B (en) | 1989-06-28 |
| JPS60218399A (ja) | 1985-11-01 |
| US4691008A (en) | 1987-09-01 |
| DK137085D0 (da) | 1985-03-26 |
| JPH0686478B2 (ja) | 1994-11-02 |
| EP0156280B1 (de) | 1990-02-07 |
| ES8607342A1 (es) | 1986-05-16 |
| ATE50267T1 (de) | 1990-02-15 |
| IL74703A (en) | 1988-11-30 |
| DE3411224A1 (de) | 1985-10-10 |
| DK137085A (da) | 1985-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rodriguez et al. | Synthesis and biological activity of partially modified retro-inverso pseudopeptide derivatives of the C-terminal tetrapeptide of gastrin | |
| FI60553C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat | |
| US6255285B1 (en) | Phenethylamine derivatives | |
| NO139560B (no) | Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme nonapeptidamid-derivater | |
| DK148905B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af lh-rh-analoge nonapeptidderivater | |
| US6235876B1 (en) | Liquid phase process for the preparation of GNRH peptides | |
| CN106188231B (zh) | 帕西瑞肽五肽中间体的合成与应用 | |
| EP0282891B1 (en) | New thymopentin retro-inverso analogs and fragments thereof, a process of preparation of the new compounds and the intermediates obtained therein | |
| US4691008A (en) | Process for the low-racemization preparation of peptide intermediates of the synthesis of gonadorelin and gonadorelin analogs, and new intermediates for this process | |
| EP0598034B1 (en) | Production of peptide amides | |
| RU2276156C2 (ru) | Способ синтеза пептида, содержащего остаток триптофана | |
| WO1998018815A1 (en) | Convergent process for the preparation of a growth hormone secretagogue | |
| EP0227410A2 (en) | Peptide derivatives, their production and use | |
| HU181402B (en) | Process for preparing new peptides with psychopharmacological activity | |
| RU2043769C1 (ru) | Способ получения пептида | |
| US3780015A (en) | Process for preparing lysine containing peptides | |
| CA1131217A (en) | Psycho-pharmacological peptides | |
| Boon et al. | Semisynthesis of the native sequence of horse heart cytochrome c‐(66–104)‐nonatriacontapeptide | |
| UCHIYAMA et al. | Studies on Secretin. I. Synthesis of Completely Protected Secretin | |
| CA1336738C (en) | Intermediates produced during the preparation of new thymopentin retroinverso analogs | |
| Van Nispen et al. | SYNTHESIS AND BIOLOGICAL ACTIVITIES OF TWO ACTH‐ANALOGUES CONTAINING L‐NORARGININE IN POSITION 8 | |
| MAsIUKIEwicz et al. | Methionine-Enkephalin | |
| YAJIMA et al. | Studies on Peptides. XLII. Synthesis of the Protected Nonapeptide Corresponding to Positions 29 to 37 of the Basic Trypsin Inhibitor from Bovine Pancreas (Kunitz and Northrop) | |
| Eritja Casadellà et al. | Solid-phase peptide synthesis using N-alpha-trityl-amino acids | |
| Thern et al. | Triphosgene as Peptide Coupling Reagent: Highly Efficient Total Synthesis of Cyclosporin O |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PUP | Patent expired |